«Российский онкологический
научный центр им. Н.Н. Блохина Российской академии
медицинских наук 50 лет в строю ...»

Ряд работ лаборатории посвящен проблеме взаимоотношения опухоли и организма, в частности механизм губительного системного воздействия злокачественной опухоли на организм. Согласно созданной В.С. Шапотом концепции, в основе этого воздействия лежит, в частности, успешная конкуренция опухоли с тканями организма за жизненно важные метаболиты. Показана способность опухоли эффективно утилизировать глюкозу крови. В результате опухоль оказывает на организм нарастающее гипогликемическое давление, действуя как «ловушка» глюкозы и как хронический стрессорный фактор. Перенапряжение компенсаторных механизмов индуцирует, опосредованно через систему гипоталамус — гипофиз — надпочечники, каскад патологических явлений.

С 1988 г. по настоящее время лабораторией руководит доктор биологических наук А.В. Лихтенштейн. В лаборатории разрабатываются темы, имеющие отношение как к фундаментальным, так и прикладным аспектам опухолевого роста: экстрахромосомные ДНК нормальных и опухолевых клеток: распад клеточной ДНК в процессе апоптоза и судьба образовавшихся фрагментов; состав экскретируемой из организма ДНК с целью диагностики злокачественных новообразований; особенности гормональной регуляции опухолевых клеток и механизмы возникновения у них гормонорезистентности; образование аддуктов ДНК при воздействии на организм человека экзогенных канцерогенов. Объект исследований — экспериментальные животные, клеточные культуры, клинический материал.

Так, в нормальных и опухолевых клетках обнаружено присутствие необычных (обособленных от хромосом) фракций ДНК. Установлен ряд свойств этой «свободной» ДНК: универсальное присутствие во всех исследованных типах клеток, однотипное электрофоретическое распределение, розеткообразная структура (по данным электронной микроскопии), присутствие уникальных последовательностей (по данным ПЦР и РДА — репрезентативного дифференциального анализа). Из «свободной» ДНК клеток Namalwa выделено, клонировано и секвенировано несколько клонов. Свойства «свободной» ДНК позволяют предположить её присутствие в клетках in vivo, а универсальное распространение — осуществление ею неких важных внутриклеточных функций.

Впервые подвергнут экспериментальному анализу вопрос о судьбе ДНК гибнущих в организме клеток и о том, проницаем ли почечный барьер животных и человека для ДНК, циркулирующих в кровеносном русле. Цель работы — выяснение возможности выявления в экскретируемой с мочой ДНК мутантных последовательностей, присущих опухолевым клеткам, и, в случае положительного ответа, разработка на этой основе неинвазивного метода диагностики и мониторинга опухолевого роста. В экспериментах на животных с применением радиоактивной метки установлено проникновение молекул ДНК размером 150 пар оснований и выше через почечный барьер и сохранение ими способности служить матрицей в ПЦР. В экспериментах на человеке (беременные женщины, вынашивающие мужской плод, и женщины после переливания им по медицинским показаниям крови донора-мужчины) также показана способность циркулирующей в крови ДНК (в данном случае последовательностей «мужской» Y хромосомы) преодолевать почечный барьер и служить матрицей в ПЦР. В ДНК, выделенной из мочи ряда онкологических больных, обнаружен мутантный K-ras. Тем самым впервые показано, что анализ экскретируемой из организма ДНК может быть средством диагностики онкологических заболеваний.

В исследованиях, проведенных на клиническом материале (ДНК, полученная из ткани рака желудка и окружающей нормальной слизистой), выявлен параллелизм между уровнем ароматических аддуктов ДНК (O6-medG) и генетической нестабильностью опухолевых клеток, о которой судили по возникновению мутаций p53 и изменчивости микросателитных локусов.

Исследована роль реакций пролиферативного цикла, таких как гидролиз фосфолипидов, активация фосфотидилинозитолкиназы и некоторых тирозинкиназ, в реализации рост-регулирующих эффектов стероидных гормонов. Установлено, что одним из начальных проявлений действия стероидных гормонов на опухолевые клетки является изменение цикла оборота фосфолипидов, что приводит в конечном итоге к изменению скорости роста опухоли. Показано, что воздействие стероидных гормонов на опухолевые клетки вызывает резкие и быстро возникающие изменения скорости обращения фосфолипидов. В экспериментах на клетках аденокарциномы матки и опухолей молочной железы женщин продемонстрирован противоположный эффект гормонов с различной ростовой активностью на скорость обращения внутриклеточных фосфолипидов: стимуляторы пролиферации (эстрогены) активируют цикл обращения фосфолипидов, в то время как гормоны-цитостатики (прогестины) тормозят этот процесс. Обнаруженная у стероидных гормонов способность изменять скорость обращения внутриклеточных фосфолипидов может быть использована для определения эффективности действия этих препаратов на опухоль.

ЛАБОРАТОРИЯ МЕХАНИЗМОВ КАНЦЕРОГЕНЕЗА

Руководитель — доктор медицинских наук, профессор член-корр. РАН
Юрий Маркович ВАСИЛЬЕВ

Тел.: (095) 323-58-77; (095) 323-53-11

Факс: (095) 324-12-05

E-mail: [email protected]

Лаборатория была создана в 1962 г. и в течение ряда лет входила в состав отдела по изучению канцерогенных воздействий, которым руководил академик Л.М. Шабад. Позже лаборатория стала отдельной,не связанной ни с каким отделом.. Впрочем, и тогда, когда лаборатория входила в отдел, Л.М. Шабад всегда был сверхтактичным и мудрым: он всегда был готов помочь советом, активно участвовал в обсуждении научных проблем, но никогда не навязывал своей точки зрения. За все годы пребывания в отделе у лаборатории не было ни одного конфликта с Львом Манусовичем.

Отличительная особенность работы лаборатории в течение почти всей её истории — это теснейшая связь с Московским государственным университетом им. М.В. Ломоносова и в особенности с группой И.М. Гельфанда, ныне входящей в Институт физико-химической биологии им. А.Н. Белозерского. Мы все годы работаем вместе как единый коллектив. Связь с Университетом позволяет всё время отбирать из студентов пополнение для лаборатории. Большинство нынешних и бывших сотрудников лаборатории — из выросших в ней студентов.

Научную историю лаборатории можно разделить на три этапа. Конечно, это разделение условно: один этап сменялся другим не в одночасье, конец одного этапа перекрывался началом следующего.

Первый этап работы (примерно, 60-е годы) был посвящен механизмам реакций клеток на химические канцерогены. Наиболее важным результатом этого периода было открытие нового феномена — резкого снижения чувствительности клеток, возникающих в процессе канцерогенеза, к токсическому действию химических канцерогенов. Несколькими годами позже мы вместе с сотрудниками соседней лаборатории — академика Л.М. Шабада (Л. Андриановым, А. Хесиной, Г. Белицким и другими) показали, что чувствительные клетки метаболизируют попавший в них канцероген, тогда как резистентные опухолевые клетки к такому метаболизму не способны. Иначе говоря, оказалось, что токсическим действием обладает не сам введенный канцероген, а какой-то его метаболит. Позже этот вывод, казавшийся в то время парадоксальным, был подтвержден и развит в очень многих работах других лабораторий: были идентифицированы метаболиты разных канцерогенов, связывающиеся с макромолекулами и потому ответственные за токсические и мутагенные эффекты этих веществ.

Менее ясной остаётся спустя несколько десятилетий роль открытой в 60-х годах резистентности опухолевых клеток к токсическому действию канцерогенов. Представляется вероятным, что отбор таких резистентных клеток в ткани, подвергающихся действию канцерогена, может быть важным фактором в образовании опухолевого узла, однако, это надо ещё доказать. Здесь стоит сказать и об изучении механизмов особого типа канцерогенеза — развития опухолей вокруг имплантированных инородных тел. Эту интригующую экспериментальную модель Т.Г. Мойжесс в нашей лаборатории изучает уже более двух десятков лет. Она добилась здесь ряда очень важных успехов, в частности, выявила разные стадии такого канцерогенеза. Однако коренного прорыва мы, как и никто в мире, не добились: до сих пор неясно, как имплантированная химически инертная полимерная пластинка может вызвать саркомы у 70% животных. За последние 20 лет не опубликовано ни одной работы по анализу этой формы канцерогенеза. Интереснейшая проблема ждёт своего времени.

Уже на этом первом этапе работы сформировалось основное ядро сотрудников нашего коллектива, большинство этих сотрудников (В.И. Гельштейн, Т.А. Чипышева, О.Ю. Иванова, Ю.А. Ровенский, Т.Г. Мойжесс и другие) работают и теперь. В эти годы в лаборатории было много аспирантов, в том числе из Казахстана (Р. Адильгереева, М.Сарсембаев), из Китая (Оу Бао Сян, Пан Чжи Лин). Трагедией для лаборатории была гибель очень талантливого аспиранта А. Ясковца из Белоруссии (он попал под поезд в самом конце аспирантуры).

На втором этапе, начавшемся где-то в конце 60-х годов и продлившемся почти 20 лет, направление работы нашей лаборатории резко изменилось: мы стали пытаться разбираться в механизмах поведения нормальных и опухолевых клеток в клеточной культуре, в особенности в механизмах их движений и адгезии, ответственных за инвазию опухолевых клеток. Постепенно важнейшей частью этих работ стало исследование цитоскелета — структур, определяющих движения и форму клеток.

Среди результатов, полученных в 70-х годах, самой важной оказалась работа, впервые показавшая, что цитоскелетная система микротрубочек необходима для напряженных движений. Эта работа стала началом целого направления исследований в нашей и во многих других лабораториях, которые продолжаются и поныне. Тем не менее мы ещё не знаем точно механизмов «рулевого» действия микротрубочек, вероятно, эта система каким-то образом контролирует распределение мест полимеризации актина в клетке.

Другой работой этого периода, которую хотелось бы вспомнить, является уточненное количественное определение природы изменений формы клетки при опухолевой трансформации в культуре. Мы показали, что таким изменением является уменьшение ламеллы — тонкой пластинки цитоплазмы, образующейся на периферии клетки. Теперь это определение, по-видимому, всё ещё верно для самых разнообразных линий клеток в культуре, но природа молекулярных изменений, приводящих к изменению ламеллы, всё ещё не вполне ясна.

В 70–80 годы в практику лаборатории вошёл ряд новых методов анализа поведения клетки, и некоторые из сотрудников лаборатории стали лучшими экспертами страны по применению этих методов: Ю.А. Ровенский — сканирующей электронной микроскопии, О.Ю. Иванова — в микрокинематографии (позднее — в видеомикроскопии), Т.М. Свиткина — в электронной микроскопии реплик цитоскелета, А.П. Черный — в трансмиссивной электронной микроскопии, Л.Б. Марголис — в получении и применении липидных плёнок и липосом. Важнейшее значение для лаборатории приобрели с конца 70-х годов методы иммуноморфологии. В лаборатории был получен ряд оригинальных моноклональных антител к белкам цитоскелета и внеклеточного матрикса. Использование этих антител в исследованиях, совместных с отделом патоморфологии РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, позволило улучшить методы дифференциальной диагностики опухолей молочной железы и других новообразований человека (В.И. Гельштейн и Т.А. Чипышева).

В период 70–80 годов в лабораторию пришла и в ней выросла большая группа талантливых молодых исследователей: А.Д. Бершадский, Г.А. Банников, С.М. Трояновский, А.В. Любимов, И. Каверина и другие, упомянутые выше. Все они подготовили и успешно защитили кандидатские, а затем докторские диссертации.

Переход лаборатории в конце 80-х годов к третьему этапу своей истории не был определён коренной сменой научной тематики; направление наших работ, в общем, развивалось эволюционно. Революционным было изменение общества, в котором мы живём и, в особенности, появление возможности свободного выезда за границу. За несколько лет свыше 10 членов нашего коллектива, большая часть которых защитила докторские диссертации, уехали на постоянные, в основном, профессорские должности в США и в Израиле. Мы были рады, что наши молодые коллеги получили самостоятельность и максимальные возможности для работы. Мы тесно контактируем с нашими «зарубежными сотрудниками» и теперь.

Но что делать в Москве? Кому и как работать? Помогли выжить два обстоятельства. Прежде всего сохранилось «ядро» старых и средних (по возрасту) сотрудников, которые соединились с молодой группой воспитанниц (по каким-то мистическим причинам все молодые сотрудники, приходившие в это время в лабораторию, принадлежали к лучшей половине человечества — прекрасному полу).

Другим важнейшим фактором выживания стала резко возросшая возможность контактов с зарубежными учёными. Это создало возможность получения зарубежных грантов, пусть небольших, но совершенно необходимых для минимальных закупок реактивов. Ещё важнее стала для нас возможность проведения совместных работ с зарубежными лабораториями, обладающими самым современным оборудованием, которого нет нигде в России, например, конфокальными микроскопами. Именно к таким совместным исследованиям принадлежат несколько циклов работ, посвященным адгезивным структурам клетки.

Два цикла таких работ были посвящены динамике фокальных контактов клетки с внеклеточным матриксом и межклеточных контактных структур. В этих работах,в частности, впервые выявлено определяющее значение механохимического натяжения актин-миозинового цитоскелета в образовании и эволюции этих структур. Таковы работы О.Ю. Плетюшкиной, совместные с сотрудниками Университета Чепел Хилл (США), работа В. Дугиной, совместная с сотрудниками Женевского Университета (Швейцария) и большая серия работ Н.А. Глушанковой, проведенная совместно с сотрудниками Университета Ратгерс (США). На основе этих работ мы начали разработку новой теории механизмов опухолевой инвазии.

Некоторые работы в тот же период были выполнены целиком в Москве.Такова, например, серия работ Ю.А.Ровенского, создавшего высоко оригинальные искусственные субстраты и изучившего поведение нормальных и опухолевых клеток на таких субстратах. Весьма интересна и перспективна работа А.Ю. Александровой, совместная с сотрудниками лаборатории Б.П. Копнина в нашем институте, в которой впервые было показано, что знаменитый антионкоген р53 контролирует не только размножение и гибель клеток, но и состояние цитоскелета и адгезионных структур.

Я не буду обсуждать детальные планы дальнейших работ лаборатории. Несмотря на значительный прогресс, никто в мире ещё не понимает точный молекулярный механизм изменений поведения клетки при опухолевой трансформации, не знает точно путей проведения «ложных» сигналов от генома к цитоскелету. Будем пытаться в этом разобраться.

ЛАБОРАТОРИЯ ЦИТОГЕНЕТИКИ
С ГРУППОЙ МОЛЕКУЛЯРНОЙ ГЕНЕТИКИ

Руководитель — доктор биологических наук, профессор
Борис Павлович КОПНИН

Тел.: (095) 324-17-39; 323-57-22

Факс: (095) 324-12-05

E-mail: [email protected]

Лаборатория была организована в 1952 г. профессором Еленой Ервандовной Погосянц, первоначально как лаборатория опухолевых штаммов. Сотрудники лаборатории решали актуальные в то время проблемы экспериментальной онкологии: разведение инбредных животных, получение и поддержание разнообразных перевиваемых опухолей (Е.Л. Пригожина, О.И. Сокова, Г.М. Платонова, А.А. Ставровская), создание модельной системы опухолей человека на хомяках (Ю.М. Васильев) разработка методов глубокого замораживания и создание банка замороженных опухолевых материалов (Н.С. Киселёва).

В начале 60-х годов по инициативе Е.Е. Погосянц большая часть прежних и группа новых сотрудников лаборатории (А.Ф. Захаров, А.П. Чудина, Н.А. Егодина, Е.С. Какпакова) приступили к решению новой научной проблемы, а именно, к изучению роли хромосомных нарушений в процессах канцерогенеза. В 1963 г. коллектив стал называться лабораторией цитогенетики.

В 60-е годы наиболее интересные, получившие известность за рубежом,результаты были получены группой А.Ф.Захарова в работах по клонированию клеток и исследованию процессов кариотипической изменчивости, изучению функциональной морфологии хромосом, гибридизации нормальных и опухолевых клеток; Е.Л. Пригожиной и А.А. Ставровской при исследовании лейкозов мышей; А.П. Чудиной в работах по изучению радиочувствительности хромосом в лимфоцитах здоровых и предрасположенных к лейкозам людей; О.И. Соковой при разработке новой модельной системы для цитогенетических исследований. В 70-е годы штат сотрудников лаборатории значительно вырос за счёт аспирантов и молодых специалистов, сформировались самостоятельные научные группы, руководимые Е.Е. Погосянц, А.А. Ставровской, О.И. Соковой, Е.Л. Пригожиной и Е.В. Флейшман.

Исследования лаборатории велись в нескольких направлениях: цитогенетическое изучение злокачественных новообразований человека с целью выявления неслучайных (специфических) аномалий кариотипа (группы Е.Е. Погосянц, Е.Л. Пригожиной и Е.В. Флейшман), определение мутагенных свойств химических канцерогенных веществ и отечественных противоопухолевых препаратов (группа О.И. Соковой) и изучение роли геномных мутаций в развитии устойчивости клеток к противоопухолевым препаратам (группа А.А. Ставровской). В 1981 г. коллектив, руководимый А.А. Ставровской, выделился в отдельную лабораторию генетики опухолевых клеток.

Результатом этих исследований явилось обнаружение целого ряда новых специфических изменений кариотипа при острых лейкозах, злокачественных лимфомах и некоторых солидных опухолях (ретинобластома, рак толстой кишки) человека; выяснение связи таких хромосомных изменений с клинико-морфологическими особенностями новообразований и оценка их возможной диагностической и прогностической ценности; выявление географических различий в частоте распространения специфических аномалий кариотипа при лейкозах, лимфомах и раке толстой кишки.

С 1985 г., после того как лабораторию возглавил Б.П. Копнин, начали также активно разрабатываться вопросы контроля стабильности генома и их нарушений в канцерогенезе, механизмы амплификации генов в опухолевых клетках. Эти исследования, проводившиеся в сотрудничестве с А.В. Гудковым и П.М. Чумаковым, позволили выявить закономерный характер эволюции кариотипа и ампликонов в ходе развития амплификации генов (mdr, dhfr, cad), детерминирующих устойчивость к различным цитостатикам, а также описать роль нарушений функции опухолевого супрессора р53 в возникновении генетической нестабильности опухолевых клеток и развитии генной амплификации. В 1987 г. в лабораторию влилась группа сотрудников большой лаборатории А.В. Гудкова и она была переименована в лабораторию цитогенетики с группой молекулярной генетики.

В настоящее время исследования проводятся по двум основным направлениям:

1) нормальные физиологические функции опухолевого супрессора р53 и роль их нарушений в канцерогенезе (рук. — зав. лаб. Б.П. Копнин);

2) поиск неслучайных хромосомных перестроек в новообразованиях человека и анализ их клинического значения (рук. — главн. научн. сотр. Е.В. Флейшман).

Исследования по первому направлению включают изучение участка р53 в регуляции клеточного цикла, апоптоза, дифференцировки, адгезии и миграции клеток; анализ взаимодействия р53-зависимых и Ras-регулируемых сигнальных путей в регуляции этих процессов; выяснение роли вновь приобретенных активностей мутантного р53 в возникновении характерных свойств неопластической клетки. В рамках второго направления осуществляется поиск новых специфических хромосомных нарушений, характерных для различных гемобластозов; выясняется диагностическое и прогностическое значение обнаруженных аномалий и роль хромосомного анализа при разработке новых терапевтических протоколов, предназначенных для лечения гемобластозов.

ЛАБОРАТОРИЯ ГЕНЕТИКИ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК

Руководитель — доктор медицинских наук, профессор
Алла Александровна СТАВРОВСКАЯ

Тел.: (095) 323-50-33; 324-17-69

Факс (095) 324-12-05

E-mail: [email protected]

Лаборатория генетики опухолевых клеток была создана в 1981 г. по инициативе известного русского генетика, профессора Елены Ервандовны Погосянц. Один из ведущих русских генетиков, основатель российской цитогенетики опухолей, Елена Ервандовна считала своим долгом способствовать восстановлению генетики в нашей стране, она приложила немало усилий к тому, чтобы в онкологии развивались различные направления генетических исследований. С помощью Н.Н. Блохина ей удалось сначала создать лабораторию цитогенетики, а затем лабораторию генетики опухолевых клеток и группу клинической генетики, которая в настоящее время входит в состав Научно-исследовательского института детской онкологии и гематологии РОНЦ им. Н.Н. Блохина. Оба эти направления развивались ранее в недрах лаборатории цитогенетики. В лабораторию генетики опухолевых клеток вошли две группы сотрудников, направленных, по сути дела, Еленой Ервандовной и её сотрудниками — Еленой Львовной Пригожиной и Александром Фёдоровичем Захаровым.

Направлением исследований лаборатории генетики опухолевых клеток является изучение механизмов опухолевой прогрессии. В рамках этого направления в настоящее время развивается два напрвления исследований: (1) Изучение множественной лекарственной устойчивости опухолевых клеток (МЛУ). (2) Исследование роли сигнальной системы VEGFc/VEGFR4 в развитии опухолей.

1. Изучение множественной лекарственной устойчивости опухолевых клеток было начато А.А. Ставровской ещё в лаборатории цитогенетики в начале 70-х годов (МЛУ-устойчивость) клеток одновременно к большому количеству веществ. В этой области сотрудниками сначала группы А.А. Ставровской, а затем сотрудниками лаборатории генетики опухолевых клеток получена серия фактов, внесших существенный вклад в изучение МЛУ, опосредованной Р-гликопротеином (Рgр). Была получена большая коллекция опухолевых клеток, характеризующихся разными уровнями Pgp-опосредованной МЛУ. Этот материал лег в основу дальнейших исследований данной проблемы. В сотрудничестве с лабораторией Ю.М. Васильева были получены факты, свидетельствующие о том, что исследуемая МЛУ связана с изменениями мембраны клеток, а не с влиянием лекарственного препарата колхицина на его внутриклеточную мишень и высказана гипотеза о том, что в резистентных клетках изменяется выведение из клеток лекарственных препаратов. Серия исследований Б.П.Копнина и А.А. Ставровской показала, что устойчивые клетки появляются в популяции независимо от влияния лекарства, но затем отбираются. Эта селекция носит ступенчатый характер и может привести к возникновению клеток с весьма высокими уровнями МЛУ. Феномен резистентности оказался нестабильным — без воздействия препарата, клетки постепенно утрачивали лекарственную устойчивость. Б.П. Копнин, тогда старший научный сотрудник лаборатории генетики опухолевых клеток, обнаружил, что резистентность клеток к колхицину связана с феноменом амплификации (умножения) генов и в сотрудничестве с А.В. Гудковым показал, что в резистентных клетках амплифицируется участок генома, содержащий несколько генов. Эти исследования были продолжены Б.П. Копниным уже в лаборатории цитогенетики, руководителем которой он стал в 1985 г. Группой Е.С. Какпаковой исследовался феномен реверсии фенотипа опухолевых клеток с высокими уровнями Pgp-опосредованной МЛУ и было показано, что эти клетки практически утрачивают свою способность вызывать опухоли при прививке животным. Было установлено, что нормализуется актиновый цитоскелет резистентных клеток. Сотрудники групп Т.П. Стромской и А.А. Ставровской нашли, что опухолевые клетки с МЛУ часто становятся более дифференцированными, чем соответствующие чувствительные клетки. Это наблюдалось даже на низких уровнях лекарственной устойчивости, сравнимых с обнаруживаемыми в клинике. Эти данные свидетельствовали о том, что нормализация фенотипа опухолевых клеток с Pgp-опосредованной МЛУ носит комплексный характер, и ставили вопрос о причинах этого явления. В связи с этим в лаборатории были начаты исследования путей сигнальной трансдукции, участвующих в регуляции гена MDR1, кодирующих Pgp. Эти исследования продолжаются и в настоящее время. В рамках этих работ было впервые показано, что в координированную регуляцию дифференцировки клеток и активности Pgp вовлечен путь передачи сигнала, контролируемый ретиноидами (группа Т.П. Стромской), что в регуляции Pgp принимают участие сфинголипиды клеточной мембраны (группа Е.С. Какпаковой). Впервые обнаружено, что активность Pgp может регулироваться фактором, выделяемым клетками в среду. Очевидно,обнаруженный феномен имеет достаточно общий характер и может иметь отношение к регуляции Pgp в популяциях опухолевых клеток in vivo. В комплексе с лабораторией экспериментальной диагностики и биотерапии опухолей (рук. А.Ю. Барышников) и Гематологическим научным центром РАМН было проведено исследование роли Pgp-опосредованной МЛУ в эволюции хронического миелолейкоза (ХМЛ). Обследование более 100 больных в разных стадиях ХМЛ позволило получить результаты, показавшие, что обнаружение функционально активного Pgp при постановке диагноза бластного криза ХМЛ является прогностическим признаком, предсказывающим более короткое течение бластного криза.

2. Исследование роли сигнальной системы VEGFc/VEGFR4 в развитии опухолей проводится в лаборатории с 1994 г. группой А.Ф. Карамышевой, которая ранее совместно с французскими исследователями из Института Паоли Кальметт в Марселе проклонировал ген VEGFR4 (он же FLT4). Ген VEGFR4 кодирует рецептор фактора роста эндотелия VEGFc. Известно, что фактор роста эндотелия VEGFa играет важную роль в росте сосудов в опухоли. Роль в опухолевом росте VEGFc, принадлежащего к тому же семейству ростовых факторов, что и VEGFa, к началу работ лаборатории оставалась неизвестной. В работах, проведенных совместно с Эндокринологическим научным центром РАМН, а также Институтом клинической онкологии РОНЦ им.Н.Н.Блохина РАМН было показано, что при злокачественных опухолях щитовидной железы, опухолях молочной железы, опухолях шейки матки характер экспрессии генов VEGFc/VEGFR4 по сравнению с нормальными тканями отличается от характера экспрессии гена VEGFa и его рецепторов.Эти данные приоритетны. Они свидетельствуют о том, что роль исследуемой системы сигнальной трансдукции в развитии злокачественных новообразований отличается от роли известного фактора роста эндотелия VEGFa. Получены модели культивируемых клеток, позволившие исследовать влияние системы VEGFc/VEGFR4 на размножение клеток.

ЛАБОРАТОРИЯ ЭНДОГЕННЫХ МОДИФИЦИРУЮЩИХ
ФАКТОРОВ

Руководитель — доктор медицинских наук, профессор
Нина Владимировна МЯСИЩЕВА

Тел.: (095) 324-29-24; 323-53-10

Факс (095) 324-12-05

Лаборатория эндогенных модифицирующих факторов канцерогенеза как структурное подразделение НИИ канцерогенеза Всесоюзного онкологического научного центра АМН СССР организована в 1981 г. Это новое научное направление сформировано на основе клинико — экспериментальных исследований докт. мед. наук Н.В. Мясищевой в лаборатории эндогенных канцерогенов, руководимой профессором М.О. Раушенбахом. Основное направление исследований лаборатории — изучение модулирующей роли эндогенных веществ разного класса в процессах роста и метастазирования опухолевых клеток.

В лаборатории впервые исследованы механизмы действия кобаламиновых коферментов в процессах пролиферации и дифференцировки клеток, модулирующего влияние кобаламиновых и фолиевых коферментов в трансплацентарном канцерогенезе, индуцированном нитрозосоединениями. Изучение in vivo кинетики пролиферации нормальных и опухолевых клеток разного гистогенеза под влиянием метилкобаламина (кофермента метионинсинтетазы) обнаружило его стимулирующее влияние на число клеток, вступающих в цикл деления из фазы покоя и синтезирующих ДНК. Анализ биосинтеза кобаламиновых коферментов из эндогенного прдшественника [57Co]-цианокобаламина показал, что снижение их синтеза в кроветворных клетках является одной из главных причин миелосупрессии и иммунодепрессии при интенсивной химиотерапии. Установлено, что активность кобаламинзависимой метионинсинтетазы является одной из важнейших показателей детерминант чувствительности опухолевых клеток к метотрексату, а биохимический механизм цитотоксичности антиметаболита зависит от его ингибирующего влияния на биосинтез кобаламиновых коферментов в кроветворной ткани. Эти результаты обосновали принципиально новые альтернативные подходы для повышения эффективности S-фазовозависимых антиметаболитов при использовании дополнительной мишени в химиотерапии опухолей — кобаламинзависимой метионинсинтетазы.

Приоритетный раздел многолетних исследований лаборатории составило изучение важной стороны нормального гемопоэза — системы транспорта кобаламинов в кроветворные клетки у детей с острым лейкозом. Выявлены причины сниженного содержания кобаламинов в кроветворных клетках в результате изучения функциональной активности транскобаламинов плазмы крови и их рецепторов на плазматической мембране лейкозных клеток. На бласттрансформационных лимфоцитах крови человека и лейкозных кле-тках животных и детей с острым лейкозом обнаружено, что экспрессия рецепторов к транскобаламину II (ТCII) является маркером пролиферирующих клеток. Охарактеризован новый тип TCII-независимых кобаламиновых рецепторов на клетках, вступающих в митотический цикл из фазы покоя. Выявление разных типов рецепторов лейкозных клеток крови и костного мозга у детей с острым лейкозом позволяет оценивать соотношение в популяции пролиферирующих и активированных к делению клеток в разные фазы заболевания.

Важный раздел исследований лаборатории состоит в изучении медиаторной роли гликозамингликанов (ГАГ) лейкозных клеток крови человека в межклеточных взаимодействиях с эелементами микроокружения костного мозга, их модулирующего действия на функциональную активность гемопоэтических факторов роста и цитокинов, контролирующих процессы гемо- и иммунопоэза. Предварительное взаимодействие ГАГ с мультифункциональным основным фактором роста фибробластов (ФРФ-2) необходимо для его связывания с сигнальным рецептором и реализации митогенного эффекта. В лаборатории обнаружено ингибирующее влияние ГАГ лейкозных клеток на клональную пролиферацию клеток — предшественников стромы костного мозга крысы и митогенную активность основного фактора роста фибробластов (ФРФ-2) в зависимости от степени их сульфатирования и содержания гепарансульфата (ГС). Наибольшее торможение роста фибробастов и митогенной активности ФРФ-2 оказывали ГС и сульфатированные фракции ГАГ лейкозных клеток человека. Полученные результаты раскрывают важную сторону механизма действия ГАГ в регуляции гемопоэтической функции костного мозга.

Большой раздел исследований лаборатории посвящен изучению роли метаболизма полиненасыщенных жирных кислот (ПНЖК) в процессах роста и метастазирования опухолей, что обусловлено активной ролью метаболитов ПНЖК — эйкозаноидов во всех этапах канцерогенеза. Предпосылкой для такой работы послужили также данные лаборатории о различном ростмодифицирующем эффекте ПНЖК, простагландинов и ингибиторов их синтеза в зависимости от гистогенеза перевиваемых опухолей мышей. Изучение метаболизма [14С]-арахидоновой кислоты, ключевого звена биосинтеза эйкозаноидов, в органах и опухолях животных и человека позволило выявить значительное разнообразие профиля её циклооксигеназных и липоксигеназных метаболитов в различных нормальных и опухолевых тканях и его основную зависимость от органно-тканевого происхождения клеток. Обнаружено, что рост многих эпителиальных опухолей животных и эффективность ингибиторов циклооксигеназы в его подавлении в значительной степени зависят от относительного содержания простагландина Е2 (ПГЕ2) в профиле метаболитов. Установлено, что важной характеристикой метастазирующих опухолей легких человека, а также спонтанных и перевиваемых опухолей мышей с выраженными метастатическими свойствами является низкая способность к биосинтезу основных липоксигеназных метаболитов арахидоновой кислоты — 12- и 15-гидро­ксиэйкозатетраеновых кислот (12-, 15- НЕТЕ).

В настоящее время в лаборатории исследуются механизмы взаимодействия ГАГ, эйкозаноидов и факторов роста, которые являются индукторами метаболизма арахидоновой кислоты, в нормальных и опухолевых клетках. При сравнительном анализе влияния различных ГАГ на митогенный эффект ФРФ-2 и метаболизм арахидоновой кислоты в клетках разного типа получены доказательства взаимосвязи митогенного эффекта ФРФ-2 и антипролиферативного действия гепарансульфата в нормальных фибробластах с изменением биосинтеза основного циклооксигеназного метаболита арахидоновой кислоты — ПГЕ2. В то же время обнаружена активная роль НЕТЕ в реализации ростингибирующего эффекта в опухолевых клетках с преобладанием синтеза липоксигеназных метаболитов арахидоновой кислоты. Задачей дальнейших исследований является изучение роли различных путей метаболизма арахидоновой кислоты в реализации митогенного и антипролиферативного действия эндогенных ростмодулирующих фак­торов, их вовлеченность в процессы пролиферации и метастазирования опухолевых клеток.

В лаборатории используются различные системы исследований in vitro — органное культивирование эмбриональных тканей, клонирование нормальных и опухолевых клеток, а также современные биохимические методы — ПАГ — электрофорез, высокоэффективная жидкостная и тонкослойная хроматография в сочетании с авторадиографией, денситометрией, УФ-спектрометрией и радиометрией. В лаборатории разработан оригинальный радиоизотопный ферментативный метод количественной оценки рецепторов поверхностной мембраны клеток к транскобаламину II, создана тест-система ex vivo обнаружения активных модуляторов биосинтеза эйкозаноидов.

ЛАБОРАТОРИЯ КАНЦЕРОГЕННЫХ ВЕЩЕСТВ

Руководитель — доктор медицинских наук, профессор
Владимир Станиславович ТУРУСОВ

Тел.: (095) 323-55-00; 323-50-00

Факс (095) 324-12-05

Лаборатория как самостоятельное подразделение выделилось из отдела по изучению канцерогенных воздействий академика Л.М. Шабада в 1974 году.

Основными направлениями работы лаборатории являются: 1)изучение механизмов действия канцерогенов на созданных в лаборатории экспериментальных моделях in vivo и in vitro; 2) иммуногистохимическое изучение гистогенеза экспериментальных опухолей; изучение эффектов перинатального воздействия половых гормонов (трансплацентарный и трансгенерационный канцерогенез); 4) изучение канцерогенного действия пестицидов; 5) изучение регуляции экспрессии ферментов метаболизма ксенобиотиков.

1. В лаборатории созданы новые модели опухолей и опухолевидных образований, вызываемых 1,2-диметилгидразином (ДМГ), саркомы матки, геморрагические кисты и сосудистые опухоли яичников, опухоли клиторальных желез, ангиосаркомы почечной капсулы у самцов. Особенностями этих моделей является высокая частота индукции опухолей, легкая воспроизводимость и чувствительность к половым гормонам — эстрогены стимулируют рост сарком матки и тормозят индукцию кист яичников.Саркомы почечной капсулы являются андроген-зависимыми опухолями и у самок вызываются лишь комбинацией канцерогена (ДМГ) с предварительной кастрацией и введением тестостерона. Выявлены линии мышей, чувствительные к индукции ДМГ указанных опухолей (СВА, СЗН) и линии мышей, резистентные к индукции этих опухолей ДМГ (С57В1, СЗНА).Установлено, что имеются различия в уровне рецепторов эстрогенов между чувствительными (высокий уровень) и резистентными (низкий уровень) линиями мышей, с чем возможно связаны и их различная чувствительность к индукции ДМГ указанных выше опухолей.

В лаборатории создана новая экспериментальная модель длительных культур эпителиально-мезенхимных рекомбинантов, полученных из диссоциированных эмбриональных легких мышей линий Аsп и С57В1. На этой модели изучалась роль эпителиально-мезенхимных взаимодействий при трансплацентарном легочном бластомогенезе. Было показано,что трансплацентарный легочный канцерогенез во многом определяется состоянием мезенхимы (интактная или подвергшаяся трансплацентарному канцерогенному воздействию), её относительным количеством и принадлежностью к линии мышей.

На созданной в лаборатории модели органных культур эмбриональных легких мышей,крыс и человека изучалась чувствительность различных типов клеток эмбрионального легкого к непосредственному воздействию канцерогенов. На органных культурах эмбриональных легких мышей показана четкая корреляция между повышением пролиферативной активности мезенхимы после канцерогенного воздействия и возникновением гиперпластических изменений в бронхиальном эпителии.

Создана экспериментальная модель первичного рака печени у хомяков, инвазированных описторхами и получавшими канцероген. Предварительные данные, полученные на этой модели, показали, что канцерогенное воздействие на инвазированных описторхами животных приводит к возникновению очаговых овальноклеточных пролифератов, а в ряде случаев к метаплазии желчных протоков по кишечному типу. Кроме того в этой группе животных существенно уменьшалась экспрессия общего цитохрома Р-450.

2. Гистохимическими методами исследовались опухоли почек у мышей, вызванных ДМГ. Использованы антитела против двух антигенов: 1) гамма-глютанилтранспептидазы (ГГТ), положительной в нормальных проксимальных канальцах и 2) антитела А6, положительного в дистальных канальцах и собирательных трубочках. Полученные результаты позволили сделать заключение,что большинство аденом почек у мышей возникают из дистальных канальцев или собирательных трубочек, а не из проксимальных канальцев.

На материале, полученном в Международном агентстве по изучению рака,с помощью антител против белка S-100, изучены опухоли мягких тканей и сердца крыс. Подтверждено нейрогенное происхождение субэндокардиальных образований.

3. Полученные в лаборатории модели гормонального канцерогенеза in vitro были использованы для изучения пренатального действия половых гормонов.В результате исследований, проведенных в лаборатории, было показано, что пренатальное воздействие диэтилстильбестрола (ДЭС) изменяет чувствительность взрослых потомков к действию канцерогенов. Так, введение ДЭС беременным самкам двух линий СВА и СЗНА, различающихся чувствительностью к канцерогену ДМГ, резко меняло чувствительность к канцерогену их взрослых потомков. При этом у потомков-самок мышей линии СВА наблюдалось учащение развития сарком матки, а у потомков-самок мышей линии СЗНА резкое торможение индукции геморрагических кист яичников; у потомков-самцов мышей линии СВА отмечалось значительное учащение индукции опухолей почек.

На разработанных моделях также изучался так называемый транс-генерационный канцерогенез, то есть передача канцерогенного эффекта через поколения. Беременным мышам-самкам линии СВА вводился ДМГ, их потомки F1 были скрещены или между собой или с контрольными самцами (самками), которые никаким воздействиям больше не подвергались. В конце жизни самок второго поколения (F2) у них была обнаружена повышенная, по сравнению с чистым контролем, частота сарком матки и опухолей некоторых других локализаций (сосудов, кроветворной системы). Передача канцерогенного эффекта продемонстрирована как через самок, так и через самцов, подвергшихся действию ДМГ.

Таким образом, отмечены следующие эффекты перинатального воздействия половых гормонов: 1) канцерогенез в результате прямого действия гормонов; 2) трансгенерационный канцерогенез; 3) модифицирующее действие перинатального введения гормонов на химический канцерогенез.

4. Продемонстрировано утеротропное действие пестицида ДДТ у мышей. ДДТ рассматривается как ксеноэстроген, вызывающий нарушение гормонального статуса у животных.

Совместно с МНИИГ им. Ф.Ф. Эрисмана сотрудниками лаборатории разработана гигиеническая классификация пестицидов по степени их канцерогенной опасности для человека. Использованы 4 класса опасности в соответствии с классификациями, принятыми в токсикологии. Предложенная классификация в течение ряда лет используется при анализе пестицидов, предлагаемых различными фирмами для регистрации в России.

5. В лаборатории изучалось состояние монооксигеназной ферментной системы и главного её компонента цитохрома Р-450 в опухолях на различных стадиях гепатоканцерогенеза. Результатом этого направления исследований была демонстрация того факта, что эта ферментная система очень чувствительна к опухолевому перерождению клетки. Помимо резкого падения общего содержания цитохрома Р-450 и уменьшения ферментативной активности в отношении субстратов,окисление которых неспецифично, наблюдалось увеличение содержания изоформ подсемейства 2А и активностей, характеризующих данное подсемейство. Были получены антитела к различным изоформам цитохрома Р-450 и с их помощью было продемонстрировано, что изоформы цитохрома

Р-450 неравномерно распределены по клеткам печеночной дольки с увеличением содержания в центролобулярной её части. Разработана система перевивки опухоли в различные органы и показано, что скорость пролиферации зависит от органа трансплантации: в отдаленном органе скорость пролиферации выше, чем при росте опухоли в «материнском» органе. Впервые продемонстрирована способность индукторов цитохрома Р-450 стимулировать пролиферацию клеток опухоли в культуре. Показано, что механизм митогенного действия зависит от типа индукторов. Показано существования по меньшей мере двух путей передачи сигналов при действии на клетку соединений типа полициклических ароматических углеводородов. Оба пути связаны с функционированием в клетке Аh-рецептора.

ЛАБОРАТОРИЯ ПРИРОДНЫХ КАНЦЕРОГЕНОВ

Руководитель — доктор медицинских наук, профессор
Лев Николаевич ПЫЛЕВ

Тел.: (095) 323-50-10; 324-16-64

Факс (095) 324-12-05

Лаборатория природных канцерогенов была организована как самостоятельное научное подразделение в 1984 г., в результате «отпочкования» от лаборатории канцерогенных веществ, входившей ранее в отдел по изучению канцерогенных воздействий,руководимый академиком АМН, профессором Л.М. Шабадом. В последнем с 1964 г. существовала на договорных началах научная группа, основной задачей которой вначале было изучение канцерогенной активности продуктов и полупродуктов анилино-красочной промышленности. С 1964 г. по 1984 г. была изучена канцерогенная активность большого числа химических соединений в опытах на крысах, мышах, а также собаках.

Параллельно упомянутым исследованиям, с 1970 года в группе было начато, впервые в СССР, изучение канцерогенности и механизмов действия асбеста. Была исследована бластомогенность асбестов всех отечественных месторождений и показано, что они, как и зарубежные, являются канцерогенными, вызывая у экспериментальных животных опухоли легких и плевры (мезотелиомы). Впервые была подробно описана морфология экспериментальных мезотелиом и предмезотелиомных изменений и дана их классификация. Когда в 1984 г. была организована лаборатория природных канцерогенов, штат её в основном состоял из сотрудников упомянутой группы, и вполне естественно, что в ней были продолжены начатые группой исследования, в частности корреляции мутагенности и канцерогенности химических веществ, с целью использования данных о мутагенности для оценки бластомогенной активности химических соединений.

Одним из направлений исследований лаборатории являлось углубленное изучение морфологии и патогенеза экспериментальных мезотелиальных опухолей с использованием растровой электронной микроскопии, тотальных пленочных препаратов мезотелия и иммуноморфологии. Результаты подтвердили, что развитию мезотелиомы предшествуют стадии диффузного и очагового изменений мезотелия, причем фенотип опухоли определялся морфологией предмезотелиомных изменений. Учение о предраке, разработанное Л.М. Шабадом, было подтверждено и на данной модели. Было также показано, что мезотелий содержит виментин и набор прекератинов. Их соотношение изменяется в процессе трансформации клеток и зависит от фенотипа клеток мезотелиомы.

Другим направлением исследований было изучение механизма канцерогенного действия асбеста. При изучении специально приготовленных синтетических хризотилов и амфиболов с различными размерными характеристиками и заменой элементов молекул на другие (Ni, Co, F, Ge), а также образцов хризотила с измененной поверхностью и зарядом, была показана важная роль в волокнистом канцерогенезе не только длины и диаметра, но и химической структуры и электрических свойств поверхности.

Большим направлением работы было изучение факторов, модифицирующих асбестовый канцерогенез. Аскорбиновая кислота, витамин А и селен ингибировали его, иммуномодулятор полиоксидоний не оказывал действия, а глюкоза его усиливала. Интенсивоность асбестового канцерогенеза зависела также от дозы и ритма введения асбестовой пыли: длительное воздействие малыми дозами более опасно, чем массированное кратковременное. Предварительное или одновременное введение угольной или кремневой пыли тормозило асбестовый канцерогенез.

Было также показано, что для экспериментальных мезотелиом плевры не характерны мутации в кодирующей последовательности гена р53, активирующие протоонкогены Ha-ras и Ki-ras мутации в 12 и 61 кодонах, а также изменения гена-супрессора нейрофиброматоза 2. В мезотелиме крыс, в отличие от нормального мезотелия, где доминирует одна РНК-изоформа, ген-супрессор нейрофиброматоза 2 имеет две РНК-изоформы в пропорциональных количествах. В мезотелиомах крыс гиперметилирован ген-супрессор опухоли Вильмса. В области интрона гена-супрессора wt-1 существует не имеющий истинной мутации, но недоступный для действия рестриктазы Eco R1 сайт. В клетках линии мезотелиомы крыс 1145 причиной защищенности интронного Eco R1 является модификация, также вследствие метилирования дезоксицитозина, входящего в этот сайт.

В последние годы в лаборатории развернуты исследования волокнистого канцерогенеза на клеточных культурах мезотелия. Было установлено, что процесс как спонтанной, так и индуцированной асбестом злокачественной трансформации включает в себя 3 последовательные стадии: изменение пролиферативного ответа на эпидермальный фактор роста (с ингибирования на стимуляцию), изменение клеточной морфологии, появления способности надмонослойного роста и роста в полужидком агаре. Было обнаружено, что кондиционированная макрофагами среда замедляет деление как нормальных, так и трансформированных клеток мезотелия крысы. Способностью секретировать ингибирующий фактор обладали макрофаги крысы и моноциты периферической крови человека, но не обладали первичные фибробласты, клетки 3Т3, гранулоциты периферической крови человека, мезотелиальные клетки и клетки линии Р388D1. Ингибирующее влияние было сильно выражено для клеток мезотелия крысы, очень слабо для эпителиальных клеток IAR2 и первичных фибробластов мыши и отсутствовало для клеток 3Т3 и NRK.

В экспериментах по изучению влияния макрофагов на трансформацию клеток мезотелия in vitro было показано, что в условиях совместного культивирования макрофаги несколько ускоряют процесс спонтанной трансформации мезотелия крысы и резко тормозят трансформацию в условиях инкубации с асбестом. Было установлено, что обнаруженный эффект объясняется значительно большей чувствительностью клеток трансформированного мезотелия и мезотелиом по сравнению с клетками нормального мезотелия к токсическому действию условий культивирования с макрофагами и асбестом.

Кроме упомянутого, в лаборатории изучены образцы цеолитов всех основных месторождений России. Показана их слабая токсичность, мутагенность и канцерогенность, что позволило рекомендовать их использование в различных отраслях хозяйства за исключением фармации и медицины.

Изучен также ряд лекарственных препаратов и даны рекомендации.

Существенное место в исследованиях лаборатории занимала экспериментальная оценка канцерогенной опасности в производстве никеля и меди.

Ряд исследований лаборатории проведен в комплексе с другими учреждениями.

Лаборатория является соавтором дифференцированных ПДК асбест- и никельсодержащих пылей.

Лаборатория является базовой и консультативной для Комиссии по канцерогенным факторам при Минздраве России.

ЛАБОРАТОРИЯ ВИРУСНОГО КАНЦЕРОГЕНЕЗА

Руководитель — доктор медицинских наук, профессор
Владимир Эдуардович ГУРЦЕВИЧ

Тел.: (095) 324-25-64, 323-57-55

Факс: (095) 324-12-05, 324-13-14

E-mail: [email protected]

В 1954 г. по инициативе академика Л.А. Зильбера в Институте экспериментальной патологии и терапии рака (ИЭПиТР) АМН СССР была создана лаборатория иммунологии опухолей. До 1962 г. официальным руководителем лаборатории являлся академик Л.А. Зильбер — автор знаменитой вирусо-генетической теории возникновения опухолей. С 1962 г. по 1984 г. лабораторией руководил проф. Н.П. Мазуренко, внесший, как и акад. Л.А. Зильбер, большой вклад в изучение роли вирусов в происхождении рака. Н.П. Мазуренко открыл явление вирусно-вирусного канцерогенеза (феномен активации неонкогенными вирусами онкогенных), а также был одним из первых в мире исследователей, выделивших и охарактеризовавших онкогенный вирус млекопитающих. С приходом в лабораторию проф. Н.П. Мазуренко основные исследования были направлены на изучение этиологии и патогенеза лейкозов на модели вирусных лейкозов мышей. Исходя из поставленных задач, лаборатория (уже в составе Института экспериментальной и клинической онкологии АМН СССР) была переименована в лабораторию этиологии лейкозов, затем — вирусологию лейкозов. С расширением целей и задач, стоящих перед лаабораторией, вовлечением в исследования других онкогенных и потенциально онкогенных вирусов (герпесвируса Эпштейна-Барр, вируса лимфомы Марека, эндогенных ретровирусов мышей и др.), а также использованием новых методов и моделей исследования, лаборатория была переименована в лабораторию вирусного канцерогенеза, и это название сохраняется до настоящего времени.

В последнее десятилетие приоритетными для лаборатории стали следующие направления исследований:

1. Вирусологическое,серологическое и молекулярно-биологи­ческое изучение вируса Т-клеточного лейкоза человека (HTLV) в России и странах бывшего СССР. Более чем за 10-летний период этой проблемы впервые был установлен факт циркуляции HTLV-1 на территории бывшего СССР, при этом средний уровень инфицированности населения в различных регионах страны составлял около 0,001–0,003%, что соответствовало уровню инфицированности для неэндемичных зон; выявлены отдельные, том числе и семейные, кластеры инфекции. Впервые в стране выявлен и детально охарактеризован случай Т-клеточного лейкоза, ассоциированный с этим вирусом. Доказано, что в стране персистирует первый (HTLV-1), а не второй (HTLV-II) тип вируса. С помощью филогенетического анализа показано, что все изоляты вируса, выделенные на территории СССР, принадлежат к подтипу А. Космополитического типа и в филогенетическом древе формируют кластеры с изолятами из наиболее близко расположенных эндемичных регионов соседних стран, указывая на возможное происхождение HTLV-1 в России и странах бывшего СССР.

2. Изучение механизмов канцерогенеза, ассоциированного с вирусом Эпштейна-Барр (ВЭБ) при некоторых эпителиальных опухолях человека. ВЭБ, относящийся к группе герпесвирусов,является убиквитарным вирусом. Он персистирует в организме человека в течение всей жизни и при определенных условиях способен индуцировать ряд патологических процессов, включая и опухолевые (африканскую лимфому Беркитта, некоторые гистологические варианты лимфогранулематоза, рак носоглотки, некоторые формы рака желудка и др.). Поскольку в трансформированных клетках вирус находится в латентном состоянии, при котором экспрессируется только часть вирусного генома, то изучение генов латентной инфекции ВЭБ и их продуктов вызывает особый интерес. В настоящее время установлено, что ген LMP-1, кодирующий латентный мембранный белок, обладает выраженным трансформирующим потенциалом и рассматривается в качестве возможного онкогена ВЭБ. Мутационно-делеционные перестройки LMP-1 в значительной мере определяют как изменение его трансформирующего потенциала,так и взаимодействие с клеточными белками-субстратами различных сигнальных путей. Установлено, что потеря Xho1-сайта рестрикции в первом экзоне, и присутствие делеции размером 30 н.п. в третьем экзоне LMP-1, являются типичными для изолятов ВЭБ из опухолевой ткани больных РНГв эндемичных для этого заболевания географических регионах (Китай, Тайвань, Гонконг). Задача данного направления исследований состоит в молекулярном и функциональном анализе LMP-1, при некоторых ВЭБ-ассоциированных новообразованиях человека и, прежде всего, раке носоглотки (РНГ) и раке желудка (РЖ) в неэндемичной зоне (России). Разработка этого направления имеет фундаментальное значение для понимания механизмов ВЭБ-ассоциированного канцерогенеза эпителиальных клеток человека, поскольку белок, кодируемый геном LMP-1, помимо его трансформирующих свойств,является также мишенью для Т-клеточного иммунитета. Мутации, приводящие к изменению активности этого белка, а, следовательно, позволяет такому варианту LMP-1 избежать элиминации из организма с помощью иммунологического надзора и наделить инфицированные клетки ростовым преимуществом. Полученные предварительные данные свидетельствуют об особенностях молекулярно-биологических характеристик LMP1, амплифицированных в опухолевых тканях российских больных РНГ и РЖ, а также клетках периферической крови здоровых лиц, по сравнению с соответствующими характеристиками LMP-1 «эндемичного» происхождения. Выделенные изоляты ВЭБ анализируются на трансформирующий потенциал LMP-1, а также их способность активировать некоторые транскрипционные факторы (NFkB, AP-1) и т.д.

3. Роль суперсемейства эндогенных ретровирусов человека HERV-K в возникновении и прогрессии герминогенных опухолей человека. В настоящее время вопрос о роли эндогенных ретровирусов человека (Human Endogenous Retroviruses — HERVs) в возникновении ряда заболеваний представляет большой интерес и интенсивно изучается. HERVs, на долю которых приходится 0,5–1% ДНК человека,являются потомками экзогенных ретровирусов,интегрированных в геном зародышевой линии предков человека миллионы лет тому назад. Большинство провирусов HERVs из-за многочисленных мутаций являются дефектными. Наибольшей биологической активностью среди HERVs обладают провирусы из семейства HERV-K/HTDV (Human Teratocarcinoma Derived Viruses). Предполагается их участие в аутоиммунных и опухолевых заболеваниях человека.В лаборатории изучается ассоциация HERV-K/HTDV с герминогенными опухолями (ГО) яичка. В частности представляет интерес изучение особенностей гуморального иммунного ответа к белкам HERV-K/HTDV у больных с различными морфологическими формами (ГО) и анализ возможности использования антивирусных антител в качестве маркера ГО. Не менее важным является изучение экспрессии провирусов в опухолевой и нормальной ткани яичка и анализ корреляции между экспрессией провирусов и клиническими проявлениями болезни. Предварительные исследования показали, что более 60% больных ГО имеют антитела к белкам Gag и Env HERV-K/HTDV, титры которых коррелируют со стадиями заболевания. Результаты исследования позволяют с высокой степенью вероятности заключить,что вирусспецифические антитела могут быть использованы в качестве важного маркера ГО, который может быть использован для диагностики и прогноза заболевания, а также для мониторинга этих больных.

4. Изучение молекулярных механизмов канцерогенеза, ассоциированного с герпесвирусом человека 8-го типа (HHV-8) при саркоме Капоши (СК) и некоторых других заболеваниях человека. Исследование направлено на всесторонний анализ ассоциации HHV-8 с тремя существующими в стране клиническим формами СК-идиопатической, СПИД-ассоциированной и иммуносупрессивной. Предварительные молекулярно-биологические исследования показали, что образцы опухолей указанных форм СК, исследуемые с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР), содержат вирусные последовательности в 80–100% случаев. Молекулярный анализ вариантов HHV-8, персистирующих в России позволил выявить существенное их генетическое разнообразие. Изучая инфицированность HHV-8 в различных группах больных злокачественными опухолями, былообнаружено, что процент инфицированных им лиц среди больных раком желудка (РЖ) значительно выше, чем среди доноров крови. Кроме того,процент сывороток,содержащих антитела к одному из латентных белков вируса (LANA) у больных РЖ с ВЭБ-ассоциированными опухолями был в 2,9 раза выше по сравнению с таковым у больных РЖ, но ВЭБ-негативными опухолями.В рамках изучаемой проблемы будет проведено многостороннее изучение дифференциальной экспрессии вирусных белков литического и латентного циклов и их взаимодействие с клеточными белками, программирующими апоптоз при саркоме Капоши.

ОТДЕЛ ТРАНСФОРМИРУЮЩИХ ГЕНОВ ОПУХОЛЕЙ

Руководитель — доктор биологических наук, профессор
Фёдор Львович КИСЕЛЁВ

Тел.: (095) 323-57-33; 323-58-11

Факс: (095) 324-12-05

E-mail: [email protected]

Отдел трансформирующих генов опухолей был создан в 1990 г. на базе лаборатории молекулярной биологии вирусов. В его состав вошли:

1. Лаборатория молекулярной биологии вирусов (руководитель — доктор биологических наук, профессор Ф.Л. Киселёв)

2. Лаборатория регуляции клеточных и вирусных онкогенов, которая также была сформирована на базе лаборатории молекулярной биологии вирусов, одновременно с отделом (руководитель — доктор биологических наук А.Г. Татосян)

Лаборатория молекулярной биологии вирусов

Руководитель — доктор биологических наук, профессор
Фёдор Львович КИСЕЛЁВ

Тел.: (095) 323-57-33; 323-58-11

Факс: (095) 324-12-05

E-mail: [email protected]

Лаборатория молекулярной биологии вирусов была создана в 1978 г. В течение всех прошедших лет исследования лаборатории были направлены на изучение молекулярных механизмов вирусного канцерогенеза.

На начальных этапах своей деятельности основной моделью исследования были клетки млекопитающих,трансформированные вирусом саркомы Рауса (RSV), совместные исследования с д-рами J. Svoboda, M. Popovic и M. Grofova. В результате этих исследований было установлено, что интактность генома RSV определяет биологические характеристики трёх типов этих клеток: а) вирогенные клетки содержали полный вирусный геном, и вирус мог быть активирован слиянием с чувствительными куриными клетками; б) псевдовирогенные клетки содержали дефектный вирусный геном с интактным трансформирующим геном,из которых активация вируса была невозможна; в) криптовирогенные клетки, которые, будучи исходно трансформированы вирусом Рауса, утеряли этот ген в процессе пассирования клеток in vitro.В процессе выполнения этих исследований был клонирован трансформирующий ген src RSV. Клонированный ген этого вируса был использован для получения трансгенных дрозофилл и получено несколько линий трансгенных мух с характерным спектром мутаций. В клетках мутантных особей были выявлены последовательности гена src.

Следующий этап в исследованиях лаборатории был связан с изучением экспрессии онкогенов в опухолях человека. Было установлено, что характер экспрессии онкогенов отличен не только для опухолей различной локализации, но и для опухолей одного и того же органа у разных больных, т.е. каждая опухоль оказалась индивидуальна по типу экспрессии онкогенов.

Начиная с 1978 г. проводилось исследование структуры функции и экспрессии белковых продуктов вирусных и клеточных онкогенов в культурах трансформированных и опухолевых клеток. Для этого были получены поликлональные антитела к синтетическим фрагментам онкобелков и антисыворотки от животных с вирус-индуцированными опухолями. Использование иммуноблотинга, иммунопреципитации и анализа протеинкиназной активности позволило получить новые данные, касающиеся структуры и функций src белков, а также изучить особенности процессинга структурных белков вируса саркомы Рауса в трансформированных клетках млекопитающих. С помощью антител к различным фрагментам молекулы продукта гена c-fos впервые было показано существование fos-родственных антигенов, гомологичных по С-концу, изучена экспрессия продуктов семейства FOS в культурах трансформированных и опухолевых клеток.

С 1987 г. были начаты исследования по выявлению взаимосвязи между экспрессией белковых продуктов онкогенов и гистогенезом и прогрессией опухолей методами иммуноблотинга и иммуногистохимии с помощью полученных в лаборатории поликлональных антител к src, sis, myc, pan-ras, fos, jun, ets-1, ets-2, p53, YB-1 белкам. При скрининге 300 препаратов рака легких, желудка, шейки матки, почек, меланомы показано увеличение синтеза онкобелков в опухоли по сравнению с нормальными тканями. Экспрессия белковых продуктов генов myc, fos, ras наблюдалась в большинстве опухолей различного гистогенеза,тогда как экспрессия src, sis, ets являются тканеспецифичной. Высокая частота экспрессии белка src обнаружена в немелкоклеточном раке легкого, в опухолях шейки и тела матки, тогда как низкая экспрессия наблюдалась в раке желудка и меланомах. Получены данные об изменении экспрессии онкобелков при прогрессии опухоли — имеются достоверные различия в экспрессии белка ras в первичных опухолях и метастазах при меланомах и раке шейки матки. Установлено, что предоперационная терапия рака шейки матки снижает экспрессию гена ras, не влияя на экспрессию myc и fos, что позволяет рассматривать увеличение экспрессии Ras как признак плохого прогноза. Иммуноморфологическими методами подробно изучена экспрессия онкогенов в различных гистологических типах опухолей легких и раке шейки матки (совместно с Коган Е.А., Райхлиным Н.Т. и Петровым С.В.). Полученные данные свидетельствуют об определенных закономерностях в активации онкогенов, коррелирующих с этапами прогрессии опухолей различного гистогенеза и позволяют рассматривать экспрессию онкобелков в качестве молекулярных маркеров прогрессии.

Следующий этап исследований лаборатории был связан с изучением опухолей шейки матки и вирусов папиллом (HPV), ассоциированных с этим типом опухолей. В результате были получены следующие основные результаты:

• До 90% опухолей шейки матки содержат ДНК HPV типов 16 или 18 (или им родственных), при этом вирусные последовательности обнаруживаются также и в прилегающих нормальных тканях.

• Вирусные трансформирующие гены Е6 и Е7 выявляются и экспрессируются во всех опухолях

• Антительный ответ на эти гены наблюдаются только у 36% больных с опухолями шейки матки, причем частота антительного ответа к гену Е6 HPV тип 16 был выше, чем к гену Е7, а для больных с опухолями, несущими HPV тип 18, наблюдается обратный эффект — частота выявления антител к гену Е7 выше,чем к гену Е6.

• Вирусная ДНК в опухолях может присутствовать как в эписомальной, так и в интегрированной форме,соотношение составляет ~ 50:50. Присутствие как интегрированной,так и эписомальной ДНК характерно для опухолей разных стадий опухолевой прогрессии.

• По данным анализа микродиссекционных образцов интеграция носит неспецифический характер и может происходить в различные хромосомы, но в экспрессирующиеся последовательности генома клетки. Это могут быть как последовательности, имеющиеся в банках данных,так и уникальные.

• Экспрессия интегрированных вирусных последовательностей включает механизм сплайсинга, и часть последовательностей интегрированного вирусного генома (в частности гена Е1 HPV) сохраняются в клеточном геноме в «молчащей» форме.

С 1996 г. проводятся исследования, направленные на выявление районов локализации на хромосомах потенциальных генов-супрессоров инактивируемых в ходе прогрессии рака шейки матки. В результате по­дробного анализа потери гетерозиготности полиморфных микросателитных маркеров, расположенных на хромосоме 6 в препаратах ДНК, выделенных из различных участков криостатных срезов опухолей, подвергнутых микродиссекции,обнаружены клональные аллельные делеции в локусах 6р21.3 (район локализации комплекса генов гистосовместимости HLA) и 6q16-21. Нарушения в локусах 6р21.3 появляются на стадии предрака и не зависят от прогрессии, что позволяет рассматривать его как молекулярный маркер моноклональности рака шейки матки. В локусе 6q16-21 частота аллельных делеций коррелирует с увеличением размеров опухоли и появлением метастазов. Определены также локусы аллельных делеций на хромосоме 11(11р15, 11p13 и 11q22-23). Рост аллельных делеций на 11р в основном наблюдается в опухолях без метастазов с сильным инвазивным ростом, а нарушения на 11q коррелируют с появлением метастазов. Значительный рост потери гетерозиготности на стадии предрака отмечен с микросателлитными маркерами на хромосоме 3р. Полученные результаты свидетельствуют о неслучайных нарушениях в специфических хромосомных локусах на 6р, 6q, 11p, 11q, 3p, появление которых на определенных стадиях роста опухоли указывает на клиническую значимость этих нарушений и инактивацию расположенных в этих локусах потенциальных генов-супрессоров.

С 1997 г. начаты исследования по эпигенетическим факторам при канцерогенезе шейки матки с целью обнаружения генов, подвергшихся гиперметилированию в опухолях. В настоящее время идентифицировано 3 гена с измененным статусом метилирования. Исследования в этом направлении продолжаются.

Лаборатория регуляции клеточных и вирусных онкогенов

Руководитель — доктор биологических наук
Александр Георгиевич ТАТОСЯН

Тел.: (095) 324-17-64; 111-83-56

Факс: (095) 324-12-05

E-mail: [email protected]

Лаборатория регуляции клеточных и вирусных онкогенов была создана в 1990 году и входит в состав отдела трансформирующих генов опухолей.

Исследования лаборатории проводились по двум основным направлениям:

• поиск молекулярно-генетических маркеров, ассоциированных с определенными типами неоплазий человека;
• идентификация генов, участвующих в процессе метастазирования трансформированных клеток.

Целью работ по первому направлению является исследование и сопоставление параметров структурной генетической нестабильности, определяемых на уровне генома, отдельных генов, а также их локусов для определения комплекса независимых молекулярно-генетических маркеров, имеющих значение при определении групп риска возникновения различных типов опухолей, а также связанных с прогрессированием опухолевого процесса при наиболее распространенных формах рака.

Рак легкого. В группах больных немелкоклеточным раком легкого (НМКРЛ) различного гистологического строения проведено исследование нормальных полиморфных аллелей генов c-Ha-ras и L-тус, а также миниделеций и потери гетерозиготности полиморфных специфических хромосомальных и генных локусов в зоне локализации данных онкогенов. Наличие каждого исследуемого маркера генетической нестабильности сопоставлялось с клиническими показателями, а именно, с инвазивностью опухоли, степенью её дифференцировки и анаплазии, метастатическим потенциалом, риском раннего рецидивирования и генерализации процесса. В результате проведеного анализа, обнаружена ассоциация наличия общих аЗ и а4 гена c-Ha-ras с риском развития низкодифференцированных и /или активно метастазирующих опухолей. Наличие в геноме «редкой» аллели c-Ha-ras может быть наследуемым фактором риска развития аденокарцином. В группе больных плоскоклеточным РЛ проанализированы результаты одновременной детекции наследуемых и изменяющихся при прогрессии генетических маркеров. Показано, что в связи с уменьшением дифференцировки ткани и увеличением степени её анаплазии вероятность накопления неблагоприятных факторов (миниделеции, потеря гетерозиготности) значительно возрастает. Одновременное присутствие в геноме а4 аллели c-Ha-ras и 8-аллели L-myc сопряжено с развитием низкодифференцированных опухолей и увеличением риска раннего развития метастазов у пациентов, особенно в группе аденокарцином.

С целью определения наследственно недетерминированных генетических изменений проведено исследование в клетках опухоли соматических нарушений участка 1p32-pter короткого плеча 1 хромосомы, которые могут быть связаны с возникновением и/или прогрессией немелкоклеточного рака легкого (НМРЛ) у человека. Препараты ДНК от больных с различными гистологическими типами НМРЛ анализировались на предмет полиморфизма в вышеуказанной области генома с помощью полимеразной цепной реакции. Проведенные исследования показали, что наиболее типичными изменениями в зоне 1p32-pter ДНК опухолевых клетках больных НМРЛ является утрата гетерозиготности (делеция одного из аллельных фрагментов, loss of geterozygosity — LOH). Было выявлено 2 области со специфическими делециями при НМРЛ: SR02A и SR02B. Потеря каждого из этих районов независимо коррелировала с поздними стадиями заболевания. Ген р73 (потенциальный ген-супрессор) лежит внутри области SR02B. Утрата аллеля данного гена регистрируется в 41% информативных случаев. Во всех гетерозиготных пробах нормального эпителия легкого обнаружена моноаллельная экспрессия р73. В то время как биаллельная экспрессия этого гена сохранялась в опухолях, несущих обе аллели данного гена. Повышенная экспрессия р73 выявлена в 87% опухолей, при этом корреляция между этим параметром и потерей аллелей не наблюдалась. Предполагается, что р73 не является классическим геном-супрессором, хотя активность этого гена может иметь значение для развития НМРЛ. Новый потенциальный ген-супрессор может быть локализован в области SR02A.

Рак яичников. Исследована нестабильность микросателлитных локусов ДНК (частота и протяженность делеций, наличие атипичных аллелей) в различных участках опухолей пациентов, имеющих новообразования яичников, различающихся степенью злокачественности, уровнем дифференцировки и гистогенезом.

Малигнизированные опухоли всех исследованных гистологических типов (серозного, эндометриоидного, смешанно эпителиального и карциносаркомы)обнаружили высокий процент потери гетерозиготности в локусе 17q12 (область локализации гена ВРСА1),что безусловно, представляет интерес, т.к. нарушения в данном гене, являются решающими в развитии рака яичников. Делеции в зоне BRCA1 также ассоциированы со степенью злокачественности и стадией заболевания. Эта зависимость была особенно характерна для группы серозных опухолей, менее однозначна среди эндометриоидных и вовсе отсутствовала для муцинозных опухолей. Обнаружено явление внутриопухолевой гетерогенности, проявляющееся в различии спектра делеций в зависимости от степени дифференцировки и анаплазии разных участков одной опухоли. Делеции локуса во всех участках опухоли, свидетельствуют о том, что нарушения данной области генома произошли на ранних этапах злокачественной трансформации.

В работах второго направления лаборатории по анализу генов и белков, вовлеченных в процесс метастазирования трансформированных клеток, использовались линии фибробластов сирийского хомяка, трансформированных вирусом саркомы Рауса (RSV) и отличающихся способностью к спонтанному метастазированию (Deichman et. al., 1989). На этой модели были обнаружены феномены модуляции экспрессии вирусного и клеточного онкогенов src и изменений в ряде биохимических параметров в клетках после введения экзогенного онкогена N-ras, a также были выделены и охарактеризованы две новые изоформы онкогена v-src: vsrcHM (из высокометастазирующих клеток) и v-srcLM (из низкометастазирующих клеток). Данные гены отличаются от всех ранее известных онкогенов этой группы определенными структурными особенностями, в частности наличием дополнительной вставки в 20 аминокислот, что объясняет увеличение мол. веса srcHM и srcLM до 62kD. Открытые гены отличались также и между собой. Показано, что различия в метастатической активности клеток, несущие данные онкогены, коррелируют со структурными изменениями в С-концевом участке онкобелка.

Белки клетки, ассоциированные с продуктами v-src. Для изучения взаимосвязи между структурными изменениями в С-концевой области v-src и метастатическим фенотипом клеток применялась система двойных гибридов при скрининге библиотеки активных генов. Был отобран ряд клонов, продуцирующих белки, способные специфически взаимодействовать с С-концевым участком v-src, которые не были известны ранее в качестве мишеней онкобелков.

Один из обнаруженных генов (vseapl- v-src end associated peptide) относится к семейству GADD — стрессовых генов, которые активируются в клетках под воздействием различных повреждающих факторов. Vseap 1 имеет очень короткую рамку считывания (всего 8 аминокислот). Возможно, данный пептид обладает стабилизирующими свойствами. Выявлено два РНК транскрипта vseap 1 — мажорный 0.8 тн и минорный — 3.1 тн, причем короткий транскрипт экспрессируется во всех видах трансформированных клеток примерно на одном уровне, но существенно ниже в первичных фибробластах. Более же длинный транскрипт экспрессируется существенно слабее в клетках с подавленным v-src, в которых также понижены уровень каталазной активности и устойчивость к H2O2.

Другой обнаруженный при скрининге библиотеки генов методом двойных гибридов ген srPLA2 (src-associated phospholipase Аз) на 75% гомологичен гену фосфолипазы А2. В белковой последовательности, кодируемой геном, сохранены все консервативные аминокислотные остатки цистеина и тирозинов. Однако этот белок отличается от всех известных в настоящее время фосфолипаз наличием 8С-концевых аминокислот, в которых присутствует необычный кластер из 3-х фенилаланинов.С помощью антител к srPLA2 проведен сравнительный анализ синтеза этого белка в различных клетках, выявлен комплекс srPLAs с белком src, исследована его локализация в клетках. Применение системы СЗТ-глютатион-З-трансферазных гибридных белков позволило установить различную степень ассоциации srPLAs с белками src в ряду: srcHM>srcLM>c-src. Обнаружена возможность фосфорилирования srPLAz по тирозину, т.е. имеется основание предполагать, что идентифицированный ген может являться субстратом онкобелка src.

Активность белков системы передачи сигналов в клетках. Были предприняты комплексные исследования по сравнительному анализу ряда ключевых белков системы передачи сигналов в клетках, отличающихся по уровню метастатической активности и экспрессии src. Получены данные о дифференцированной активности фосфолипазы PLC-gamma, компонентов МАР-киназного сигнального пути, ряда адапторных белков (Shc, grb2) и белков, вовлеченных в процессы клеточной адгезии (FАК, паксилин) в трансформированных клетках с различным метастатическим потенциалом.

С помощью метода дифференциального дисплея был идентифицирован ряд кДНК, генов, по-разному транскрибируемых в клетках с различной метастатическим потенциалом. Наибольший интерес представляет ген bet1, который специфично стимулируется в экспериментальных опухолях с высоким метастазированием in vivo. Данный ген кодирует один из ключевых белков, участвующих в процессах передвижения клеточных мембран.

В последнее время в лаборатории предпринимаются активные усилия по исследованию в различных опухолях человека генов, выявленных на экспериментальных моделях.

ЛАБОРАТОРИЯ ИММУНОЛОГИИ ОНКОГЕННЫХ ВИРУСОВ

Руководитель — доктор биологических наук
Владимир Алексеевич МОРОЗОВ

Тел.: (095) 324-78-17; 323-58-66

Факс: (095) 324-12-05

E-mail: [email protected].

Лаборатория была организована в 1973 году как лаборатория саркомно-лейкозных вирусов под руководством д.б.н. И.Н. Крюковой и входила в состав отдела иммунологии и вирусологии опухолей (зав. отделом — академик РАН Г.И. Абелев) Института эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи АМН СССР. Основным направлением работы лаборатории было развитие идеи вирусо-генетической теории возникновения опухолей, заложенной академиком АМН Л.А.Зильбером. Основное внимание было сконцентрировано на изучении иммунологии и вирусологии опухолей. Постепенно от модельных систем (вирус куриной саркомы Рауса и его патогенности для млекопитающих, вирусный канцерогенез у мышей), лаборатория перешла к изучению вирус-ассоциированных опухолей человека. В 1977 г. лаборатория в составе того же отдела была переведена в Онкологический научный центр РАМН и впоследствии переименована в лабораторию иммунологии онкогенных вирусов. С декабря 1988 г. по ноябрь 2000 года лабораторию возглавлял д.м.н. К.В. Ильин.

На протяжении более 20 лет сотрудниками лаборатории проводятся исследования ретровирусов и их связи с опухолевыми и аутоиммунными заболеваниями человека и животных. Основное направление — изучение ассоциации ретровирусов с опухолями человека. Эти исследования проводятся по следующим направлениям:

1. Ретровирусы приматов, ассоциирующиеся с опухолями и аутоиммунными заболеваниями (группа д.б.н. В.А. Морозова).

2. Изучение экспрессии последовательностей, гомологичных генам вируса рака молочных желез мышей у больных раком молочных желез (группа д.б.н. И.Н. Крюковой).

3. Изучение мембранных антигенов нормальных и опухолевых клеток человека (группа к.м.н. Т.С. Бобровой).

1. Ретровирусы приматов, ассоциирующиеся с опухолями и аутоиммунными заболеваниями.

Объектами исследования являются: (А) — вирус Т-клеточного лейкоза человека (НТLV-1), (Б) — вирусы фоами и (В) — ретровирусы типа D.

А. Вирус Т-клеточного лейкоза человека (НТLV-1), открытый в 1980 г, имеет сложный геном и ассоциируется с Т-клеточным лейкозом взрослых, тропическим спастическим парапарезом (ТСП) и рядом аутоиммунных заболеваний. Однако, наличие вируса у человека с неизбежностью не означает развитие одного из указанных выше заболеваний. Лишь у 1–3% носителей вируса наблюдается Т-клеточный лейкоз или ТСП. Очевидно, что для возникновения заболеваний требуются определённые кофакторы, которыми могут являться дефектные провирусы (ДП). Накопление ДП часто наблюдается у вирусоносителей. Нами проводится исследование дефектных HTLV-1 провирусов в клеточных линиях, у вирусоносителей, у больных грибовидным микозом и у больных с аутоиммунными заболеваниями.

Принципиальным результатом последних лет явилось: