WWW.DISUS.RU

БЕСПЛАТНАЯ НАУЧНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

 

Pages:     || 2 | 3 | 4 |
-- [ Страница 1 ] --

ГОСУДАРСТВЕННОЕОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ

ВЫСШЕГОПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ

СИБИРСКИЙГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙУНИВЕРСИТЕТ

ФЕДЕРАЛЬНОГО АГЕНтСТВА ПОЗДРАВООХРАНЕНИЮ

И СОЦИАЛЬНОМУРАЗВИТИЮ

На правах рукописи

Григорьева ЕкатеринаСергеевна

Механизмы нарушенияцитокинопосредованной регуляции апоптозаэозинофилов при больших эозинофилияхкрови

14.00.16 – патологическая физиология

03.00.25 – гистология,цитология, клеточная биология

Диссертация насоискание ученой степени

кандидата медицинскихнаук

Научныеруководители:

доктор медицинских наук,

профессор РязанцеваН.В.

доктор медицинских наук,

академик РАМН,профессор,

Заслуженный деятельнауки РФ

Новицкий В.В.

Томск – 2007

Оглавление

Оглавление 2

Список использованныхсокращений 4

Введение 5

Глава 1. Обзорлитературы. 10

Роль нарушения апоптозаэозинофилов в механизмах развития большихэозинофилий крови 10

1.1. Причины развития«больших эозинофилий крови». Общиепредставления о структуре, свойствах ифункциях эозинофильных лейкоцитов 10

1.2. Роль дизрегуляцииапоптоза эозинофильных гранулоцитов впатогенезе эозинофилии 22

1.2.1. Молекулярные основыреализации апоптотической гибеликлеток 25

1.2.2 Общие представленияо цитокинопосредованной регуляцииапоптоза клеток 35

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ ИМЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 48

2.1. Характеристикаобъекта исследования 48

2.1.1. Клиническаяхарактеристика пациентов слимфопролиферативными заболеваниямисистемы крови 49

2.1.2. Клиническаяхарактеристика больныхописторхозом 50

2.2. Методыисследования 53

2.2.1. Определениесодержания общего количества лейкоцитов,эозинофилов и лимфоцитов в крови 53

2.2.2. Выделениеэозинофилов крови 53

2.2.3. Культивированиеэозинофилов крови 55

2.2.4. Оценкаапоптотической реакции эозинофилов кровиметодом проточной лазернойцитометрии 55

2.2.4.1. Регистрацияапоптоза эозинофилов крови 55

2.2.4.2. Оценка апоптозаэозинофилов крови при лишении ростовых факторов 56

2.2.4.3. Оценка влияниярекомбинантных форм цитокинов (IL-5, IL-3 иeotaxin) на апоптотическую гибельэозинофильных гранулоцитов 56

2.2.5. Выделениемононуклеарных лейкоцитов крови 57

2.2.6. Культивированиемононуклеарных лейкоцитов 57

2.2.7. Определениесодержания эозинофилтропных цитокинов всупернатантах культур мононуклеарныхлейкоцитов и eotaxin в сыворотке крови 58

2.2.8. Статистическийанализ результатов исследования 59

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫСОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 61

3.1. Количественныепоказатели лейкоцитарного звена крови упациентов с заболеваниями,ассоциированными с эозинофилиейкрови 61

3.2. Особенностиреализации апоптоза эозинофилов у больныхс эозинофилиями 64

3.3. Особенностиреализации цитокинопосредованногоапоптоза эозинофилов у пациентов сзаболеваниями, ассоциированными сэозинофилией крови 66

3.3.1. Уровеньапоптотически измененных эозинофилов,полученных у больных с эозинофилией, вусловиях инкубации invitro с r-IL-5 67

3.3.2. Уровеньапоптотически измененных эозинофилов,полученных у больных с эозинофилией, вусловиях инкубации invitro в среде с добавлениемr-IL-3 72

3.3.3. Уровеньапоптотически измененных эозинофилов,полученных у больных с эозинофилией, вусловиях их инкубации invitro в среде с добавлениемr-eotaxin 77

3.3.4. Уровеньапоптотически измененных эозинофилов,полученных у больных с эозинофилией, вусловиях их инкубации invitro в бессывороточнойсреде 82

Глава 4. Обсуждениерезультатов исследований 85

Выводы 110

СПИСОКЛИТЕРАТУРЫ 111

Список использованныхсокращений

АТФ –аденозинтрифосфат

АФК – активные формыкислорода

ДНК –дезоксирибонуклеиновая кислота

мРНК - матричнаярибонуклеиновая кислота

РНК - рибонуклеиноваякислота

ФГА -фитогемагглютинин

CD – поверхностный кластердифференцировки

CSF -колониестимулирующий фактор

FasL - Fas-лиганд

FasR - Fas-рецептор

FcR,FсR– рецепторы кFc-фрагменту IgE, IgG

FITC -флюоресцеинизотиоцианат

GM-CSF -гранулоцитарно-макрофагальныйколониестимулирующий фактор

IFN - интерферон

Ig - иммуноглобулин

IL – интерлейкин

LTC4 –лейкотриен С4

MCP-протеин-хемоаттрактант длямоноцитов

M-CSF - макрофагальныйколониестимулирующий фактор

NK – натуральные киллеры

PAF - фактор активациитромбоцитов

Pg - простагландин

Th – Т-хелпер

TNF - фактор некрозаопухоли

Введение

Актуальностьпроблемы. К числу частовстречаемых в клинической практикегематологических синдромов относитсябольшая эозинофилия крови. Широкий кругнозологий, сопровождаемыхгиперэозинофилией [Анаев Э.Х., 2002; КоровинаН.А. и соавт., 2002; Чучалин А.Г., 2003; Абдулкадыров К.М., 2006],а также формирование серьезных осложнений[Джальчинова В.Б., Чистяков Г.М., 1999;Озерецковская Н.Н., 2000; Чучалин А.Г., 2003;Семенкова Е.Н. и соавт., 2004; Куропатенко М.В.,Желенина Л.А., 2005] определяют необходимостьизучения патогенеза эозинофилий.



В настоящее времяизвестны лишь некоторые механизмыразвития гиперэозинофилии припатологических процессах разного генеза:антителозависимый хемотаксис,развивающийся при паразитозах (IgE- илиIgG-антитела); иммунный, опосредованныйчерез IgE (наблюдается при аллергии); ответна эозинофильный хемотаксический фактор,выделяемый некоторыми опухолями;собственно опухолевая эозинофилия - лейкоз[Адаскевич В.П., Зыкова О.С., 1998]. К числуобщих для разных нозологий механизмовразвития больших эозинофилий кровиотносятся подавление или дефекты системыапоптотической гибели эозинофилов [Druilhe A.еt al., 1996; Воробьев А.И., 2002].

В последние годырасшифрованы молекулярные механизмыреализации программированной гибеликлетки, опосредованные системамивнутриклеточной и межклеточнойсигнализации [Невзорова В.А. и соавт., 2001;Мойбенко А.А. и соавт., 2005; Тяжелова В.Г., 2005;Москалева Е.Ю., Северин С.Е., 2006; ОрловскаяИ.А. и соавт., 2006]. При этом цитокинысчитаются наиболее многочисленной группойбиологически активных веществ, влияниекоторых на апоптоз интенсивно изучается.Так, ряд цитокинов (IFN-, TNF, IL-1, IL-10) являютсяиндукторами апоптоза как здоровых, так излокачественно-трансформированных клеток[Meagher L.C. et al., 1996; Потапнев М.П., 2002; БережнаяН.М., 2005]. Вместе с тем выявлена большаягруппа медиаторов (IL-2, IL-3, IL-4, IL-10, IFN-), действие которыхспособствует запуску эндогенной программызащиты клеток от апоптотической гибели[Невзорова В.А. и соавт., 2001; Потапнев М.П.,2002]. При этом эффект некоторых цитокиновможет быть разнонаправленным и зависетькак от типа клеток, так и от особенностей ихфункционального состояния [Потапнев М.П.,2002].

По данным ряда авторов,иммунорегуляторные молекулы,секретируемые преимущественноTh2-лимфоцитами, такие как IL-5, IL-3, а такжегранулоцитарно-макрофагальныйколониестимулирующий фактор (GM-CSF),активируют эозинофильные гранулоциты иувеличивают их выживаемость in vitro, задерживаяиндукцию апоптоза [Tai P.C. et al., 1991; Yamaguchi Y. et al.,1991; Simon H. et al., 1997; Simon H., Alam R., 1999]. Кроме того, влитературе существуют сведения, согласнокоторым повышенный уровень eotaxin – хемокинаСС-семейства, обладающегохемоаттракционным эффектом в отношенииэозинофильных лейкоцитов, может вноситьсущественный вклад в формированиегемической и тканевой эозинофилии припатологических процессах разногогенеза [RothenbergM.E., 1999].

В этой связипредставляет особый интерес выявлениеобщих закономерностей и особенностейцитокинопосредованной дизрегуляцииапоптоза эозинофилов при заболеваниях,сопровождающихся большими эозинофилиямикрови. Выявление ключевыхзвеньев патогенеза этого синдромапозволит разработать патогенетическиобоснованные подходы управленияреактивностью эффекторных клеток крови– эозинофилов.

Цельисследования:установить роль нарушенияцитокинопосредованной регуляции апоптозаэозинофильных лейкоцитов в механизмахразвития больших эозинофилияхкрови.

Задачиисследования:

  1. Выявить рольнарушений апоптотической гибелиэозинофильных лейкоцитов при формированиигиперэозинофилии крови, осложняющейтечение лимфопролиферативныхгематологических заболеваний иописторхоза.
  2. Оценить уровеньпродукции ключевых регуляторовпрограммированной гибели эозинофилов - IL-3,IL-5 мононуклеарными клетками иконцентрации eotaxin в сыворотке крови упациентов с лимфопролиферативнымизаболеваниями системы крови(лимфогранулематоз, множественная миелома,неходжкинские лимфомы) и описторхозом(острая и хроническая формы),ассоциированных сгиперэозинофилией.
  3. Установить общиезакономерности и особенности реализацииIL-3-, IL-5-, eotaxin-опосредованного апоптозаэозинофилов у пациентов с большимиэозинофилиями крови.

Научная новизна. Впервые с привлечением широкогокомплекса современных гематологических,культуральных и молекулярно-биологическихметодов исследования представлены данныефундаментального характера о механизмахнарушения цитокинопосредованной гибелиэозинофильных клеток в патогенезе большихэозинофилий крови прилимфопролиферативных гематологическихзаболеваниях и описторхозе.Продемонстрирован факт угнетения апоптозаэозинофилов при развитии гиперэозинофилииу пациентов со злокачественнымизаболеваниями системы крови и больныхописторхозом. Представлены приоритетныеданные, касающиеся ключевой ролиэозинофилтропных цитокинов (IL-3, IL-5 и eotaxin) вреализации гиперэозинофильной реакциикрови при лимфопролиферативныхзаболеваниях и описторхозе. Впервыеполучены результаты экспериментальныхисследований in vitro, свидетельствующие о различнойчувствительности эозинофильныхгранулоцитов при больших эозинофилияхкрови, осложняющих течениелимфопролиферативных гематологическихзаболеваний и описторхоза, к действиюцитокинов с антиапоптотическойактивностью.

Теоретическая ипрактическая значимость.Полученные данные фундаментальногохарактера о нарушениицитокинопосредованного апоптозаэозинофилов у больныхлимфопролиферативными заболеваниямисистемы крови и описторхозом раскрываютновые молекулярно-клеточные аспектыпатогенеза больших эозинофилий крови.Результаты настоящего исследования могутбыть положены в основу разработки новойпатогенетически обоснованной тактикикоррекции гиперэозинофилии пригемобластозах и описторхозе.

Положения, выносимые назащиту:

  1. Большиеэозинофилии крови прилимфопролиферативных заболеваниях иописторхозе сопряжены с ингибированиемапоптотической гибели эозинофилов.
  2. Механизмыформирования гиперэозинофилииассоциированы с увеличением продукции IL-3,IL-5 и eotaxin - цитокинов, обладающихантиапоптотическими свойствами.
  3. Выраженностьпрограммированной гибели эозинофилов,полученных у пациентов слимфопролиферативными заболеваниямисистемы крови и описторхозом, придополнительной стимуляции invitro рекомбинантными формамицитокинов (IL-3, IL-5 и eotaxin) различна, чтосвидетельствует о различнойчувствительности эозинофильныхгранулоцитов к действию цитокинов,блокирующих апоптоз клеток.

Апробация и реализацияработы. Результатыпроведенных исследований докладывались иобсуждались на VIII Конгрессе «Паллиативнаямедицина и реабилитация вздравоохранении» (Москва, 2006), Российскоммедицинском форуме-2006 «Фундаментальнаянаука и практика» (Москва, 2006).

В работе приводятсярезультаты исследований, поддержанныхСоветом по грантам Президента РФ дляподдержки ведущих научных школ РФ,«Молекулярные основы нарушения гомеостазаклеток крови при актуальных заболеванияхинфекционной и неинфекционной природы»(НШ-4153.2006.7), а также результатынаучно-исследовательских работ «Рольнарушений межклеточной кооперации вмеханизмах формирования большихэозинофилий крови» 2005-РИ-19.0/002/010(государственный контракт № 02.442.11.7056 от26.10.2005), «Молекулярные и клеточные основыуправления реактивностью системы кровипри актуальных заболеваниях инфекционнойприроды» 2006-РИ-112.0/001/384 (государственныйконтракт № 02.445.11.7419 от 09.06.2006 г.),выполненных в рамках Федеральной целевойнаучно-технической программы«Исследования и разработки поприоритетным направлениям развития наукии техники РФ на 2002-2006 годы».

Публикации. По теме диссертации опубликовано 8работ, из которых 6 – в центральных рецензируемыхжурналах, рекомендованных ВАК РФ.

Структура и объемдиссертации. Диссертацияизложена на 139 страницах машинописноготекста и состоит из введения, четырёх глав,выводов и списка использованнойлитературы. Работа иллюстрирована 10рисунками и 19 таблицами. Библиографическийуказатель включает 272 источника (86 -отечественных и 186 - иностранных).

Глава 1. Обзорлитературы.

Роль нарушенияапоптоза эозинофилов в механизмахразвития больших эозинофилий крови

1.1. Причины развития«больших эозинофилий крови». Общиепредставления о структуре, свойствах ифункциях эозинофильныхлейкоцитов

Одним из частовстречаемых в клинике внутренних болезнейгематологических синдромов являетсяэозинофилия. По данным Л.Д. Гриншпун [1983],эозинофилия –это состояние, при которомуровень эозинофилов в кровидостигает 5% и выше. Те состояния, прикоторых содержание эозинофилов в кровиувеличивается более 15%, И.А. Кассирским иА.И. Воробьевым были названы «большимиэозинофилиями крови» [Гриншпун Л.Д.,Виноградова Ю.Е., 1983; Коровина Н.А. и соавт.,2002; Чучалин А.Г., 2003; Егоров И.В., Котина Л.Н.,2004; Семенкова Е.Н. и соавт., 2004; Абдулкадыров К.М., 2006].

В литературе описаныэозинофилии аллергического,инфекционного, аутоиммунного, опухолевогогенеза, а также идиопатические иятрогенные, в том числе лекарственные[Анаев Э.Х., 2002; Коровина Н.А. и соавт., 2002;Чучалин А.Г., 2003]. Наиболее частымипричинами эозинофилий аллергическогогенеза являются бронхиальная астма,атопический дерматит, поллиноз,крапивница, ангионевротический отекКвинке и др. [Фассахов Р. С. и соавт., 1992;Адаскевич В.П., Зыкова О.С., 1998; ДжальчиноваВ.Б., Чистяков Г.М., 1999]. Эозинофилиисопровождают паразитарные инвазии:описторхоз, токсокароз, эхинококкоз,аскаридоз, трихинеллез, анкилостомоз,шистосомоз [Адаскевич В.П., Зыкова О.С., 1998].Этот феномен часто бывает первым признакоммиграционной фазы развития гельминтов,свидетельствующим о наличии заболевания.Кроме того, эозинофилия встречается притаких инфекционных заболеваниях, какскарлатина, инфекционный мононуклеоз,стафилококковая инфекция и др. [КоровинаН.А. и соавт., 2002; Чучалин А.Г., 2003; Абдулкадыров К.М., 2006].

Синдром эозинофилиизачастую выявляется у больных сзаболеваниями сердца и сосудов, чтовызывает трудности дифференциальнойдиагностики достаточно сложной группызаболеваний эндомиокарда и сосудов(системные васкулиты) [Чучалин А.Г., 2003].Более редкими на сегодняшний деньсчитаются эозинофилии аутоиммунногогенеза (эозинофильный фасциит и миозит,эозинофильный гастроэнтерит,эозинофильный цистит, эндокардит Леффлераи др.) [Коровина Н.А. и соавт., 2002].

Эозинофилии, патогенезкоторых сопряжен с опухолевойпролиферацией эозинофилов, относятся кзлокачественным. Так, эозинофильныймиелолейкоз характеризуется бурнымтечением, лихорадкой,гепатоспленомегалией, лимфоаденопатией,геморрагическим синдромом; в кровивыявляются эозинофильные миелобласты,промиелоциты и миелоциты. Такжеэозинофилия может сопровождать рядонкологических заболеваний: острые ихронические лейкозы, рак кожи, легких,носоглотки, аденокарцинома желудка,болезнь Ходжкина, лимфома и др. [КоровинаН.А. и соавт., 2002]. Кроме того, вгематологической практике встречаетсягруппа эозинофилий «неясного генеза» -идиопатические эозинофилии, которыехарактеризуются повышением количестваэозинофилов в крови свыше 1500 в 1 мм3; продолжительностьюболее 6 месяцев, отсутствием известныхпричин, вызывающих эозинофилию(аллергические заболевания, паразитарныеинвазии и др.), а также доминированиемсимптомов полиорганного поражения[Хорошко Н.Д. и соавт., 1997; Чучалин А.Г., 2003;Егоров И.В., Котина Л.Н., 2004; Семенкова Е.Н. исоавт., 2004; Абдулкадыров К.М.,2006].

Выраженное увеличениеколичества эозинофилов в крови можетвозникнуть при приеме некоторыхлекарственных препаратов: наиболее частогиперэозинофилию вызывают антибиотики,цитостатики, нестероидныепротивовоспалительные, а такжепсихотропные препараты. При этомэозинофилия протекает бессимптомно истановится единственным проявлениемгиперчувствительности к препарату [АнаевЭ. Х., 2002].

Таблица 1

Заболевания,ассоциированные с эозинофилией крови

[по данным Г.Д. Гриншпун,Ю.Е. Виноградовой, 1983; Э.Х. Анаева, 2002; А.Г.Чучалина, 2003; Н.М. Бережной и соавт., 2005;К.М.Абдулкадырова, 2006].

№ п/п Причины формированияэозинофилий
1. Аллергические заболевания(бронхиальная астма, атопический дерматит,аллергический ринит, крапивница,ангионевротический отек Квинке, поллиноз идр.).
2. Инфекционные заболевания(инфекционный мононуклеоз, инфекционныйлимфоцитоз, туберкулез, сифилис,скарлатина), в том числе паразитарныеинвазии (описторхоз, трихинеллез,шистосомоз, эхинококкоз, аскаридоз идр.).
4. Коллагенозы, системные васкулиты(ревматоидный артрит, системная краснаяволчанка, узелковый периартериит,саркоидоз, эозинофильный фасциит и миозити др.).
5. Легочная эозинофилия (простаяэозинофильная пневмония (синдромЛеффлера), острая и хроническаяэозинофильная пневмония, тропическаялегочная эозинофилия).
6. Злокачественные новообразования(рак желудка, гипернефроидный рак почки,рак легких, поджелудочной железы, толстогокишечника, шейки матки, яичников, лимфо- имиелопролиферативные заболевания системыкрови).
7. Заболевания кожи и подкожнойклетчатки (эксфолиативный дерматит,экзема, псориаз, пузырчатка и др.).
8. Иммунные нарушения (реакция«трансплантат против хозяина», синдромврожденного иммунодефицита).
9. Применение лекарственныхпрепаратов (антибиотики, сульфаниламидные,противотуберкулезные, нестероидныепротивовоспалительные препараты,антидепрессанты и др.).
10. Идиопатический гиперэозинофильныйсиндром
11. Прочиезаболевания (гипофизарная кахексия,гипофункция надпочечников, цирроз печени,семейная эозинофилия).




Как видно, спектрзаболеваний, сопровождающихся развитиемэозинофилий, весьма значителен (табл. 1).Важно отметить, что длительнаягиперэозинофилия крови сопряжена сформированием тяжелых осложнений,обусловленных тем, что эозинофильныйгранулоцит обладает высокимцитотоксическим потенциалом, реализуемымне только в отношении инородныхсубстанций, но и собственных тканейорганизма. К числу состояний, вызванныхгиперэозинофилией, относятся васкулиты,эндо- и миокардит, фиброзирующий альвеолит,гепатит, поражение нервной системы,эрозивный гастродуоденит,тромбоэмболические осложнения [АбрамычевА.Н. и соавт., 1984; Джальчинова В.Б., ЧистяковГ.М., 1999; Мокеева Р.А., 2000; Озерецковская Н.Н.,2000; Чучалин А.Г., 2003; Семенкова Е.Н. и соавт.,2004; Куропатенко М.В., Желенина Л.А., 2005].Говоря о возможных негативныхпоследствиях больших эозинофилий крови,прежде всего необходимо остановиться нарассмотрении структурно-функциональныхособенностей эозинофилов.

Известно, чтоэозинофилы, как и другие полиморфноядерныелейкоциты, происходят изединой стволовой клетки костного мозгапри регулирующей роли интерлейкина (IL)-2, IL-3, IL-5 и гранулоцитарно-макрофагальногоколониестимулирующего фактора (GM-CSF).Былоустановлено, что основным фактором,вызывающим дифференцировку эозинофильныхгранулоцитов, является IL-5, продуцируемый Тh-2 лимфоцитами исамими эозинофилами [АнаевЭ.Х. и соавт., 1994; Беклемишев Н.Д., 1998; Palframan R.T.et al., 1998; ZangrilliJ.G., 2002].

По данным литературы,продолжительность жизни эозинофиловсоставляет 10-12 дней. Покинувкостный мозг, где они образуются исозревают в течение 3-4 дней,эозинофилы несколько часов циркулируют вкрови (период их полужизнисоставляет 3-8 часов). Вдальнейшем клетки покидают кровяное русло имигрируют в ткани (кожа, слизистые оболочкидыхательного ижелудочно-кишечного тракта, мочеполовыхпутей), являясь прежде всего, по даннымряда исследователей, тканевыми клетками:на одинциркулирующий эозинофил приходитсяпримерно 300 аналогичных клеток в костном мозге и от100 до 300 - в других тканях [McEwen B.J., 1992;Giembycz М.А., Lindsay М.А., 1999; Коровина Н.А. и соавт., 2002;Абдулкадыров К.М., 2006].

Очевидно, чтоколичество эозинофилов в крови зависит отинтенсивности и скорости костно-мозговогоэозинофилопоэза, скорости поступлениязрелых эозинофилов из костного мозга впериферическую кровь, степенивыраженности миграции эозинофильныхгранулоцитов в ткани, длительности жизни иинтенсивности разрушения эозинофиловкрови. В настоящее время известно, чтоколичество циркулирующих эозинофиловрегулируется эндокринной и вегетативнойнервной системами, которые обеспечиваютколебания их суточного ритма. Так,симпатический отдел вегетативной нервнойсистемы, гормоны щитовидной железы,инсулин, адренокортикотропный гормон,глюкокортикоиды снижают численностьэозинофилов в крови. В свою очередьдействие парасимпатического отделавегетативной нервной системы повышаетчисло эозинофилов [Giembycz М.А., Lindsay М.А., 1999;Воробьев А.И., 2002; Коровина Н.А. и соавт.,2002].

Морфологическиэозинофилы представляют собой зернистыелейкоциты, содержащие в протоплазмекрупные гранулы, окрашивающиеся кислымикрасками (эозином) в оранжево-розовый цвет.В нефиксированных неокрашенных препаратахэозинофилы выглядят округлыми клеткамидиаметром до 9 нм, в протоплазме которыхвизуализируются крупные гранулы; вфиксированных окрашенных мазках ихдиаметр приближается к 12 нм. Ядроэозинофильных лейкоцитов расположеноэксцентрично, имеет кристаллоиднуюструктуру и состоит из малого количествасегментов (иногда их число достигает 3-5).Вокруг ядра обнаруживается слегкабазофильная цитоплазма, особенностьюкоторой является наличие двух типовспецифических гранул (больших и малых),имеющих красный или оранжевый цвет.Встречаются и неокрашенные L-гранулы,содержащие белки, фосфолипиды, гистамин,ферменты (оксидаза, пероксидаза,антигиалуронидаза) и микроэлементы [АнаевЭ.Х. и соавт., 1994; Dvorak A.M., Weller P.F., 2000; КоровинаН.А. и соавт., 2002].

Современная наукарассматривает эозинофил как одну изключевых клеток воспаления в связи сналичием кислороднезависимого,обусловленного действием белков больших ималых гранул, и кислородзависимогомеханизмов микробицидности. Последнийопосредован активацией НАДФН-оксидазы ипродукцией активных метаболитовкислорода. Следует подчеркнуть, что данныепродукты не имеют специфичности вотношении чужеродных агентов и обладаютспособностью повреждать собственныеклетки организма, особенно эпителийкишечника, легких и кожу. АктивностьНАДФН-оксидазы в эозинофилах существенновыше, чем в других фагоцитах. Это,по-видимому, обусловливает вкладэозинофильных гранулоцитов в механизмыповреждения собственных тканей организмапри таких заболеваниях, как атопическийдерматит, болезнь Крона, бронхиальнаяастма и ряд других [Фассахов Р.С. и соавт.,1992; Yagisawa M. et al., 1996]

Известно, что большиегранулы содержат протеины, которыеявляются уникальными для эозинофилов (рис.1). К ним относятся: большой основнойпротеин, эозинофильный катионный протеин,эозинофильная пероксидаза, эозинофильныйнейротоксин, ранее называемыйэозинофильным протеином Х. Было показано,что в активированных эозинофилах числогранул значительно уменьшается и клеткичасто вакуолизируются, становясь менееплотными, чем неактивированные эозинофилы[Hamann K.J. et al., 1991; Dvorak A.M., Weller P.F., 2000; Анаев Э.Х.,2002].

Среди компонентовгранул эозинофилов следует выделитьбольшой основной протеин, составляющий до55% от содержания белковых молекул изанимающий сердцевину кристаллоидовбольших гранул. Большой основной протеинобладает сродством к анилиновымкрасителям, а также свойствомполимеризации и агрегации, чтообуславливает его цитотоксичность кразличным типам животных клеток.Установлено, что этот белок обладаетспособностью нейтрализовать гепарин,повреждать личинки ряда паразитов, а такженекоторые клетки организма [Ackerman S.J.,1983; Анаев Э.Х. исоавт., 1994; Адаскевич В.П., Зыкова О.С., 1998;Семенкова Е.Н. и соавт., 2004]. Другим важным компонентом большихгранул является эозинофильный катионныйпротеин, содержащий большоеколичест­воаргинина и цинка. Эозинофильныйкатионный белок известенсвоими токсическими свойствами в отношениипаразитарных агентов (в 8-10раз более активен, чем большой основ­ной белок). Установлено, что онпри­нимает активное участие ввоспалительных ре­акциях, способен оказывать влияниена плазменный ге­мостаз через XII фактор свертывания иобладает повреж­дающим действием на эндотелийсосудов [Hamann K.J. et al., 1991;Воробьев А.И., 2002; Бережная Н.М. и соавт.,2005]. Не менееважным компонентом больших гранулявляется эозинофильная пероксидаза,представляющая собой высокоосновной белок(рН>11), встречающийся в видемономеров с молекулярной массой 75 кДаи димеров с массой 150 кДа. Известно, что вприсутствии Н2О2 игалогенов пероксидазаэозинофилов формирует сними потенциальнуюцитотоксическую систему, эффективнуюпротив вирусов, бактерий,паразитов, грибков, опухолевых клеток, действиекоторой,вероятно, опосредовано через образованиегипогалогеновой кислоты [Thomas E.L.et al., 1995]. Следует отметить, что эозинофильная пероксидаза может индуцировать дегрануляциютучных клеток, инактивировать лейкотриены[Henderson W.R. et al., 1982]. Пероксидаза способна привлекатьмакро­фагидля более эффективного уничтожения микроорганизмов исвязываться с поверхностьюнеопластических клеток, делая их восприимчивыми к опосредованномумакрофагами цитолизу [ФассаховР.С. и соавт., 1992; АнаевЭ.Х. и соавт.,1994]. Содержащийся в эозинофилах нейротоксин способен вызыватьневрологические нарушения с поражением мозжечка, моста испинного мозга при инъекции в ликвор илиголовной мозг кроликов или морских свинок[Ackerman S.J., 1983;Анаев Э.Х., 1994]. Еготоксическое действие в отношениимакроорганизма в наибольшей степенипроявляется при гиперэозинофилиях [Воробьев А.И., 2002].

Как уже упоминалосьранее, в эозинофилах присутствуют малыегранулы, содержащие кислую фосфатазу иарилсульфатазу В, инактивирующие субстанции анафилаксии и уменьшающиевыраженность реакции немедленной гиперчувствительности;фосфолипазу D, нейтрализующуюлитическийфактор актива­ции тромбоцитов и снижающуюспособность тром­боцитов к дегрануляции; лизофосфолипазу,определяющуюся в тканях и жидкостях вместах воспаления, в том числе в большихколичествах в кристаллахШарко-Лейдена; коллагеназу, разрушающе воздействующую наI и III типы кол­лагена, которыхособенно много в легочной тка­ни[Фассахов Р.С. и соавт., 1992; Адаскевич В.П.,Зыкова О.С., 1998; Воробьев А.И., 2002;Бережная Н.М. и соавт., 2005].

 Рис 1. Медиаторыэозинофильных гранулоцитов [по данным-0

Рис 1. Медиаторыэозинофильных гранулоцитов [по данным М.А.Giembycz, М.А. Lindsay; 1999, А.И. Воробьева, 2002; Н.М.Бережной, 2005].

Было показано, что рядмедиаторов синтезируются эозинофилами измембранных фосфолипидов при активацииклетки. Наиболее значимыми из них являютсялейкотриен (LT)С4 и факторактивации тромбоцитов (PAF). Известно, чтоLTС4 и PAF являютсясильнейшими бронхоконстрикторами, апоследний, помимо этого, обладаетвыраженной хемотаксической активностью по отношению кэозинофильным лейкоцитам [Agrawal D.K. et al., 1992; Анаев Э.Х.. исоавт., 1994; Беклемишев Н.Д., 1998; Семенкова Е.Н. исоавт., 2004].

Как уже было сказановыше, цитотоксическая активностькомпонентов эозинофильных гранул можетбыть реализована не только в отношенииразличных чужеродных агентов, но исобственных структур организма.Установлено, что эозинофильные белкиобладают некоторой избирательностьювоздействия на те или иные клетки и ткани.Так, большой основной протеин реализуетцитолитическую активность в отношенииэпителия трахей, почек, слизистыхжелудочно-кишечного тракта, нейротоксин иэозинофильный катионный протеин поражаютструктуры нервной системы, а эозинофильнаяпероксидаза –бронхолегочной системы [Джальчинова В.Б.,Чистяков Г.М., 1999].

Установлено, чтомембрана эозинофилов несет различные антигенныеструктуры: СD13, СD33, свойственныегранулоцитарному ро­стку;молекулы, опреде­ляющие способность к адгезии ивзаимодействие с другими клетками, в частностиСD11b,СD44, СD69; различныеинтегрины; рецепторы для активированныхкомпонентов комплемента(СЗb, СЗd, С4);ряд молекул, обеспечивающих активациюэозинофильных гранулоцитов (CD28L, CD69); рецепторы длягистамина (Н1и Н2),простагландинов, хемокинов семейства СС [Гриншпун Л.Д., Виноградова Ю.Е., 1983;Ember J.A., Hugli T.E., 1997; ВоробьевА.И., 2002]. Спомощью проточной цитофлуорометрии на эозинофилах определенаэкспрессияре­цепторовдля IL-3, IL-5и GМ-СSF,обнаружена молекула СD95 (FasR) [GiembyczМ.А., Lindsay М.А., 1999].

Особое внимание средивышеперечисленных структур привлекает СD69- маркер активации, определяемый не только на эозинофилах, но и на гранулоцитах, атакже лимфоцитах.Количество СD69 на эозинофилах увеличивается приаллергической патологии, бактериальномвоспалении и др. [Nishikawa K. et al.,1992]. ЭкспресияСD11b/СD18 (- и -цепейинтегрина Мас-1) и СD66b, согласно имеющимсяданным, увеличивается при воспали­тельных процессах.Установлено,что экспрессия на эозинофилахкостимуляторной молекулыСD28-лиганд(СD28L) необходима вкачестве второгоконтрольного сигнала для оп­тимальнойактивации эозинофила при взаимо­действии с СD4+-лимфоцитами.Благодаря этому сигналуувеличивается секрецияэозинофиламимедиаторов IL-2 и IFN[Воробьев А.И., 2002].

Неизменный интересвызывают рецепторы для им­муноглобулинов ииммунных комплексов, а точнее - рецепторы к Fc-фрагменту IgG и IgE. Следует отметить, чтоэозинофильные лейкоциты презентируют нетолько низкоаффинный FcRII, но ивысокоаффинный FcRI [Abdelilah S.G. et al.,1998]. Вдальнейшем выяснилось, чточисло FcRI намембране эозинофилов незначительно (он в основном представлен внутриклеточно). При активацииэтого рецептора резко увеличиваетсяцитотоксичность эозинофилов, их дегрануляция, повышаетсяпродукция супероксидных анионов исекреция IL-10[Бережная Н.М. и соавт.,2005]. Оказалось, что на эозинофилахимеется высо­кийуровень низкоаффинного IgG-рецептора (FсRII, СD32). FсRIпоявляется после сенсиби­лизации на очень малом количествеэозинофи­лов(на 0,5 %) [Фассахов Р.С. и соавт.,1992; Анаев Э.Х. и соавт., 1994;Воробьев А.И., 2002; БережнаяН.М. и соавт., 2005].

Если говорить орецепторах для ряда компо­нентов комплемента(СЗ, С4 и С5), очевидно, ихконцентрация увеличивает­ся в период участия эозинофилов в иммунныхреакциях, поскольку С3апредставляет собой специфическийхемоаттрактант эозинофилов, активирующийНАДФН и способствующий выбросу эозинофильного катионного протеина, пероксидазыи нейротоксина. С5а, в свою очередь, также являетсяхемоаттрактантом, потенцирует образованиерадикалов кислорода, некоторых цитокинов ипроизводных арахидоновой кислоты, стимулируетдегрануляцию, модулирует экспрессию рядарецепторов и адгезивных молекул [Giembycz М.А., Lindsay М.А., 1999; Бережная Н.М. исоавт., 2005].

Эозинофилыэкспрессируют рецепторы для рядацитокинов, в том числе IL-3,IL-5 и GM-CSF[Zangrilli J.G., 2002;Barnes P.J.,2003]. Роль этих медиаторов как ключевыхрегуляторов гомеостаза эозинофильныхклеток будет рассмотрена ниже. Наряду с этим на поверхности этихлейкоцитов презентируются рецепторыхемокинов семейства СС, ккоторому относят eotaxin, eotaxin-2,RANTES, MCP-2, MCP-3 иMCP-4.Вышеперечисленные медиаторы обладаютспособностью активировать НАДФН-оксидазув эозинофильных гранулоцитах, опосредуютусиление адгезии к фибронектину и VCAM1 (vascular cell adhesion molecule), повышаютэкспрессию CD11b,стимулируют высвобождение IL-8 из эозинофилов[Heath H. et al., 1997;Giembycz М.А., Lindsay М.А., 1999]. Известно также, что презентациярецепторов к eotaxin обычноассоциируется с развитиемвоспалительного процесса; у здоровых людей существует некийбазальный уровень экспрессии цитокина,который опосредует распределениеэозинофилов в ткани. В аллергических реакцияхперечисленные хемокины в синергизме сIL-5способствуют мобилизации эозинофилов впатологический очаг [Humbles A.A. et al., 1997]. Eotaxin иeotaxin-2 in vivo избирательноинициируют кожные эозинофилии у человека[Forssmann U., 1997].Местную эозинофилию провоцирует RANTES, вводимый подкожу [Meurer R., 1993]. Помимо этого, он обусловливаетдегрануляцию эозинофилов свысвобождением эозинофильногокатионного протеина инейротоксина [Kapp A. et al.,1994].

Простагландин D2,связываясь со специфическимDP-рецептором на поверхности эозинофилов,потенцирует их хемотаксис [Boie Y. et al., 1995]. Вэксперименте in vivo PgD2 вызывал эозинопению иизбирательное накопление эозинофилов вдыхательных путях [Emery D.L., 1989].

Учитывая кинетикуэозинофилов, нельзя не упомянуть об ихмиграции в патологический очаг. В процессевоспаления и реализации аллергическихреакций эозинофилы проникают изкровеносного русла в ткани. Следуетподчеркнуть, что процесс миграции клетокосуществляется под влиянием факторовхемотаксиса эозинофилов, освобождаемыхпри аллергических реакциях другимиклетками, а также самими эозинофилами, ужемигрировавшими в ткань. В литературеимеются сведения, что наиболее значимымиявляются PAF, LTD, C5a, IL-2 и RANTES. Наряду с этиместь данные о существовании специфическихэозинофильных хемоаттрактантов – eotaxin и eotaxin-2.Интересно, что их эффект слабее, чем увышеназванных факторов. Существуетгипотеза, что для направленной миграцииэозинофилов в ткани требуются какспецифический хемоаттрактант (eotaxin), так ицитокин, повышающий активностьэозинофилопоэза (IL-5) [Forssmann et al., 1997; RollinsB.J., 1997; Giembycz М.А., Lindsay М.А., 1999; Rothenberg M.E., 1999;Zangrilli J.G., 2002].

Говоря о ролиэозинофилов, нужно отметить, что ихфункция сводится к предупреждениюпроникновения антигена в сосудистое русло, то естьгенерализации иммунногоответа. В частности, область локальнойиммунной реакции,развивающейся при проникновении ан­тигена,эозинофильные гранулоцитыотграничи­вают с помощью нейтрализацииметаболитов, участвующих вуничтожении антигена. При обра­зовании большогоколичества метаболитов ме­сто реакциилокализуется с помощью мест­ного некроза иактивации фиброзирования во­круг этого участка.Известно, что в формировании этогопроцессасвоеобразная рольпринадлежит эозинофилам, которые завершают иммунный ответна уровне подслизистого иподэпителиального слоя, за­щищая, такимобразом, организм от множества нецелесообразных общих иммунных реакций нанебольшие дозы проникающих чужеродныхан­тигенов[Воробьев А.И., 2002].

Следует отметитьзначительную роль эозинофилов в развитииреакций гиперчувствительности не­медленного типа.Так, под влиянием хемотаксических факторов,выделяемых сенсибилизирован­ными Т-лимфоцитами,эозинофилы мигрируют к месту иммунной реакции на самыхпервых ее этапах. В период миграции иинфильтрации про­исходит усиленное созреваниеэозинофилов, увеличениеактивностиферментов и рецеп­торов для иммуноглобулинсодержащихком­плексов иактивированных факторов комплемен­та. Реализацияреакции немедленной гиперчув­ствительностизаключаетсяво взаимодейст­вии IgE-антител с аллергеном наповерхности тучных клеток иприводит к выбросу субстанций анафилаксии и гистамина. Известно,что ответ эозинофилов состоит в выделении инактивирующихсубстан­ций:гистаминазыинактивируют гистамин, арилсульфатаза - медленнодействующиесубстан­циианафилаксии, хемотаксические пептиды.Кроме того, фосфолипаза В и D инактивирует литический фактор тромбоцитов и препятствуетвыходу се­ротонина из тромбоцитов, большойосновной белок эозинофиловинактивирует гепарин, PgЕ1 и РgЕ2[Бережная Н.М.и соавт., 2005].Помимо этого, эозинофилы могутфагоцитировать гранулы, выделяемые тучными клетками,препятствуя освобождению изних гистаминаи протеаз. Благодаря наличиювышеперечисленных факторов, эозинофилампринадлежит модулирующая роль в развитииаллергических реакций. Интересен тот факт,что после всестороннегоподавления реакции гиперчувст­вительностинемедленноготипа эозинофилы способствуют восстановлениютканевых тучных клеток,выполняя при этом репарационную функцию [Гриншпун Л.Д., Виноградова Ю.Е.,1983].

Приведенный переченькак рецепторных структур, так и продуктов,которые выделяют эозинофилы, позволяетсделать заключение о том, что эти клеткиявляются активными участниками многихфизиологических и патологическихпроцессов - фагоцитоза, репарации,воспаления, реализации врожденного иприобретенного иммунитета, а такжепринимают участие в регуляции функцийклеток системы иммунитета, процессовсвертывания крови. Учитывая современныепредставления, эозинофил следуетрассматривать не только в качествеактивного участника патогенезааллергических заболеваний ипротивогельминтного иммунитета, но и какважный фактор поддержанияиммунологического и тканевогогомеостаза.

В свою очередьнарушения эозинофильного гомеостазачреваты дисбалансом процессов, в которыхэти клетки играют доминирующую роль.

1.2. Роль дизрегуляцииапоптоза эозинофильных гранулоцитов впатогенезе эозинофилии

Все известные насегодняшний день механизмы эозинофилии(антителозависимый хемотаксис,развивающийся при участии IgE- или IgG-антителпри паразитозах; иммунный при аллергии,опосредованный через IgE; ответ наэозинофильный хемотаксический фактор,выделяемый некоторыми опухолями;собственно опухолевая эозинофилия) непозволяют всесторонне охватить патогенезэтого феномена при различныхпатологических процессах [Адаскевич В.П.,Зыкова О.С., 1998].

Существует мнение, чтоодним из ключевых механизмов развитияэозинофилии может быть подавление илидефекты апоптоза ацидофильныхгранулоцитов [Druilhe A. еt al., 1996; Воробьев А.И.,2002]. Ингибирование апоптотической гибелиэозинофилов приводит к развитиюэозинофилии крови и тканей и вноситсущественный вклад в патогенез различныхзаболеваний. Наиболее изучен феноменнарушения программированной гибелиэозинофилов при бронхиальной астме, частоосложняющейся развитиемгиперэозинофильного синдрома. В частности,у больных бронхиальной астмой в биоптатахбронхов уровень апоптотически измененныхэозинофильных лейкоцитов ниже, чем уздоровых лиц, и прогрессивно снижается снарастанием тяжести заболевания. Крометого, установлено, что в эозинофилах у этихбольных существенно повышена экспрессиямРНК антиапоптотических белков семействаВcl-2, что коррелирует с тяжестьюзаболевания [Vignola A.M. et al., 1999; Деев И.А., 2004].Наряду с этим у пациентов с бронхиальнойастмой угнетение апоптоза эозинофильныхклеток сочетается с отсутствием активацииFasR и FasL, осуществляющих запуск реализациипрограммированной гибели эозинофилов уздоровых лиц [Druilhe A. et al., 1996]. Этот фактобъясняется обнаруженным у даннойкатегории больных значительнымувеличением содержания растворимогоFas-рецептора в сыворотке крови [Kato M. et al., 1999].Помимо этого, у пациентов с бронхиальнойастмой в эозинофилах крови сниженаэкспрессия гена р53, регулирующего запускпроцесса апоптотической гибели [Деев И.А.,2004].

В исследованиях in vitro установлено, чторяд цитокинов обладает способностьюувеличивать продолжительность жизниэозинофильных гранулоцитов, регулируяпроцесс их программированной гибели. К нимотносятся IL-5, IL-3 и GM-CSF [Tai P.C. et al., 1991; YamaguchiY. et al., 1991]. Согласно данным литературы, убольных бронхиальной астмой содержаниеперечисленных медиаторов в кровиувеличено и, по-видимому, вносит вклад вразвитие эозинофилии [Corrigan C.J. et al., 1993;Мамонтова Т.В., Кайдашев И.П., 2005; Райкис Б.Н.,Гогуева М.Н., 2006]. Также установлено, чтопосле провокации аллергеном экспрессиямРНК IL-5 повышается в эозинофилах,выделяемых из бронхо-альвеолярнойжидкости больных бронхиальной астмой [BroideD.H. et al., 1992] и в коже больных атопическимдерматитом [Tanaka Y. et al., 1994]. Изучаяреализацию апоптоза эозинофильныхлейкоцитов, полученных у пациентов сбронхиальной астмой, И.И. Иванчук и соавт.[2003] пришли к выводу, что IL-5 стимулируетэкспрессию мРНК bcl-2, обладающегоспособностью ингибироватьпрограммированную гибель клетки. Следуеттакже отметить, что исследованиегранулоцитов эозинофильного ряда вмокроте больных бронхиальной астмойвыявило положительные корреляции междуактивностью bcl-2 и уровнем мРНК IL-5 [Деев И.А.и соавт., 2004] и отрицательные междуинтенсивностью экспрессии bcl-2 и объемомфорсированного выдоха в течении первойсекунды [Jang A.S. et al., 2000]. Не менее важноотметить, что добавление IL-5 в культурулейкоцитов эозинофильного ряда,полученных у пациентов с бронхиальнойастмой, не вызывало изменений в активностиапоптотической гибели, что по-видимомусвязано с развитием функциональнойрезистентности клеток к действию этогомедиатора [Иванчук И.И. и соавт., 2004].

Как видно изпредставленных выше фактических данных, внастоящее время доказан факт нарушенияцитокинопосредованного апоптозаэозинофилов при бронхиальной астме. Однакоперед рассмотрением этого механизмаразвития эозинофилий при другихнозологиях (лимфопролиферативныезаболевания системы крови, описторхоз)целесообразно, на наш взгляд,сконцентрироваться на детализациисуществующих представлений о молекулярныхмеханизмах реализации апоптотическойгибели клетки.

1.2.1. Молекулярныеосновы реализации апоптотической гибеликлеток

В настоящее времяизвестно, что процессы роста, развития ижизнедеятельности макроорганизманеразрывно связаны с постояннымобновлением клеточного состава. Апоптозпредставляет собой универсальнуюмногокомпонентную систему, выполняющуючрезвычайно важную функцию – регуляциючисленности клеточной популяции[Белушкина Н.Н. и соавт., 1998; Самуилов В.Д.,2000].

Нарушение реализацииапоптотической гибели клеток (ее усилениеили ослабление) является основой рядазаболеваний, затрагивающих различныесистемы. Так, ингибированиепрограммированной клеточной гибелипризнается в качестве важногопатогенетического звена развитияаутоиммунных заболеваний, онкопатологии идр. Усиление апоптоза лежит в основеинфекционных и нейродегенеративныхзаболеваний, патогенеза пораженияионизирующей радиации, механизма действияхимиотерапевтических средств и др. [ЯрилинА.А., 1998].

Детальное изучениеразличных этапов регуляции процессапрограммированной клеточной гибелисоздает перспективу разработкимолекулярных и клеточных технологий,позволяющих воздействовать наотдельные этапы апоптотической гибеликлеток с целью ее коррекции [Белушкина Н.Н.и соавт., 1998].

Общеизвестно, что вразвитии апоптотической гибели клетоквыделяют три стадии: индукторную,эффекторную и деградации. Эффекторнаястадия и стадия деградации универсальныдля всех видов апоптоза, в то время какпервая стадия определяется разнообразиеминдукторных факторов. При этом процессиндукции апоптоза можно разделить на двавида: первый - ситуации, когда программагибели клетки включается внешнимифакторами; вторая категория – случаи, когдазапуску апоптоза предсуществует каскадвнутриклеточных событий. Так, квнеклеточным сигналам относятся действиеантигенов, гормонов и цитокинов. В своюочередь, внутриклеточными сигналамиявляются нерепарированные поврежденияДНК, а также дефицит стимулирующихсигналов. Эффекторная стадия включаетизменения в клетке, вызванные действиеминдукторных факторов, такие как активациясериновых протеаз и снижениетрансмембранного потенциала митохондрий[Ярилин А.А., 1998].

Следует отметить, чтонаиболее характерным проявлениемапоптотической гибели клетки являетсядеградация хроматина, в основе которойлежит ферментативное расщепление молекулДНК, осуществляющееся в несколько этапов сформированием мелких фрагментов (от 700 до30-50 тыс. пар оснований). В дальнейшемпроисходит межнуклеосомная дезинтеграциямолекул ДНК, находящихся междунуклеосомами, с образованием фрагментов,кратных по величине 180-190 пар оснований.Установлено, что деградация хроматина приапоптозе является активным процессом,зависящим от температуры, источниковэнергии, синтеза РНК и белка de novo. Известнотакже, что различные этапы деградации ДНКкатализируются разными формамиэндонуклеаз, отличающимися субстратнойспецифичностью и условиями проявленияактивности. В частности, среди ферментов,предположительно осуществляющихмежнуклеосомную деградацию ДНК, наиболееизучена Ca2+,Mg2+-зависимая эндонуклеаза -резидентный ядерный фермент смолекулярной массой 18 кДа, который впокоящихся клетках неактивен и входит всостав высокомолекулярного комплекса смолекулярной массой 100 кДа; при действиииндукторов апоптоза происходит еговысвобождение [Уманский С.Р., 1996; Ярилин А.А.,1996, 1998; Маянский А.Н. и соавт., 1997]. В стадиюдеградации хроматина объем клеткиуменьшается, она округляется, теряямикроворсинки, рецепторы и структуры,обеспечивающие межклеточные контакты; вмембране образуются выпячивания,отпочковывающиеся от клетки в видеапоптотических телец, которые поглощаютсямакрофагами или окружающими клетками[Козинец Г.И., 1996; Маянский Н.А., 2004].

Как уже упоминалосьранее, одним из ключевых факторов,индуцирующих апоптоз, является действиегормонов. Классическим примером такоговлияния служит действие кортикостероидов,проникающих в клетку и проявляющих своедействие через рецепторы, локализующиеся вядре. Рецептор, связывая лиганд, регулируеттранскрипцию гормончувствительных генов,продукты которых опосредуют реализациюэтапов клеточного цикла. Кортикостероиды,взаимодействуя с транскрипционнымифакторами AP-1 (activator protein) и NF-kB (nuclear factor),снижают продукцию ряда веществ спровоспалительной активностью (IL-1, IL-2,IL-3, IL-6, IL-8, TNF-,GM-CSF и RANTES) [Jantz M.A., Sahn S.A., 1999]. Известно также,что глюкокортикоиды обладают прямымингибирующим действием на секрециюэозинофилами медиаторов, таких как IL-3, IL-5,GM-CSF, тем самым, ограничиваяпродолжительность жизни этих клеток [LamasA.M., 1989].

Другими важнымифизиологическими регуляторами апоптозаявляются цитокины. Цитокины - это обширнаягруппа белков, обеспечивающихпролиферацию и дифференцировку клеток присвязывании со специфическими рецепторамина клетках-мишенях. В отличие от гормонов,цитокины действуют, в основном, на пара- иаутокринном уровнях [Белушкина Н.Н. исоавт., 1998] (молекулярные механизмыцитокинопосредованной регуляции апоптозабудут рассмотрены ниже).

В настоящее время сталоизвестно о существовании специфическихрецепторов смерти. Являяськлеточно-поверхностными рецепторами, онипередают сигналы апоптоза, инициированныеспецифическими лигандами, с последующейактивацией каскада каспаз. Известно также,что эти рецепторы относятся ксуперсемейству рецепторов TNF, так как всвоей структуре имеют гомологичныеучастки –цитоплазматические домены смерти («deathdomain», DD) [Маянский А.Н. и соавт., 1997]. Наиболеехорошо описаны такие рецепторы, какFas/APO-l/CD-95 и TNFR1.

Так, по даннымлитературы, Fas-рецептор является широкораспространенным трансмембраннымпротеином с молекулярной массой 45кДа, состоящим из 325 аминокислотныхостатков [Itoh N., 1991; Watanabe-Fukunaga R., 1992].Соответственно, в его структуре можновыделить внеклеточный, трансмембранный ицитоплазматический участки. При этомэкстрацеллюлярная часть рецептора состоитиз трех, обогащенных цистеином, доменов[Itoh N., 1991]. Примерно 80 аминокислотныхостатков образуют домен смерти (DD), которыйвовлекается в белок-белковоевзаимодействие с цитоплазматическимибелками, генерируя сигнал смерти. Ген fas учеловека локализован в длинном плечехромосомы 10 и состоит из 9 экзонов[Watanabe-Fukunaga R. et al., 1992; Барышников А.Ю., ШишкинЮ.В., 1996; Уманский С.Р., 1996; Утешев Д.Б. исоавт., 1998].

Известно, что FasLявляется цитокином и относится к семействуцитокинов TNF. FasL существует в двух формах -нерастворимой или мембраносвязанной ирастворимой, отщепляемой от клетки спомощью металлопротеиназы. Подобно другимлигандам рецепторов семейства TNF,гомотример FasL связывается с тремямолекулами FasR [Олейник Е.К. и соавт.,2004].

При связывании лигандас рецептором происходит агрегация молекулFas в тримерные кластеры, в которыхцитоплазматический DD реагирует саналогичным доменом цитозольного белка FADD(Fas-associated death domain protein). В свою очередь FADDвзаимодействует через DED (death effector domain) саналогичным доменом белка FLICE (FADD-like ICE),формируя макромолекулярный комплексбелков DISC (death-inducing signaling complex), которыйобеспечивает передачу сигнала от Fas ккаспазам [Boldin M.P., 1995; Nagata S., 1995; Muzio M., 1996,1998; Владимирская Е.Б., 2002; Фильченков А.А., 2003;Олейник Е.К. и соавт., 2004]. В результате этогопроцесса происходит активацияапоптоз-специфической протеазы каспазы-8 иразвиваются характерные для апоптозапроцессы [Cohen G.M., 1997; Muzio M., 1997; Бойчук С.В.,Мустафин И.Г., 2001]. Так, ряд исследователейпоказали, что активация Fas-рецепторастимулирует апоптоз эозинофилов путемактивации тирозин-киназы, ассоциированнойс цитоплазматической частью рецептора[Matsumoto K., 1995; Tsuyuki S., 1995; Druilhe A., 1996; Hebestreit H., 1996;Simon H.U., 1998].Установлено также, что кроме активациитирозин-киназ и каспаз дляFas-ассоциированного апоптоза существуетдругой сигнальный путь, связанный свовлечением Ras и дальнейшей акативацией JNK[Gulbins E., 1995]. H.U. Simon et al. [1998] обнаружили, что киназа Lynявляется компонентом каскада вFas-опосредованном апоптозе. Не толькосигнальные молекулы, но и рецепторы наповерхности клетки, включая Fas, могутобусловливать как пролиферацию, так и ееапоптоз [Alderson M.R., 1993]. Выявлено, что Lyn можетвлиять как на гибель эозинофила, так и напроцесс его выживания [Simon H.U.,1998]. Механизмы данногоявления остаются неясными, доказан лишьтот факт, что активация Lyn-Ras-Raf-1-MAP-киназявляется облигатной в ингибированиицитокин-опосредованного апоптозаэозинофилов [Simon H.U., 1997].

Известно, что TNFR1содержит цитоплазматические домены,ответственные за проведение сигналагибели и называемые «death domains» (DD) [Boldin M.P., 1995]. Послесвязывания ссоответствующим лигандом рецепторформирует гомотримерный комплекс, врезультате чего DD оказываютсяассоциированными. В последующемпроисходит взаимодействие DD рецептора TNFR1с адаптерным белком TRADD (TNFR1 associated death domain),который содержит собственный DD наС-концевом участке [Hsu H., 1995]. Кроме этого, TRADDможет взаимодействовать с белками TRAF (TNFreceptor-associated factor), FADD/MORT1 и RIP (receptor interacting proteins).Образование комплекса TRADD-TRAF приводит кактивации транскрипционных факторов NF-kB икиназы JNK. В свою очередь комплекс TRADD-FADDнеобходим для запуска апоптоза, авзаимодействие TRADD-RIP необходимо дляпередачи сигналов, активирующих как NF-kB иJNK, так и гибель клеток [Казначеев К.С., 1999;Самуилов В.Д., 2000; Потапнев М.П., 2002;Москалева Е.Ю., Северин С.Е., 2006].

На сегодняшний деньустановлена роль гена р53 в реализациипрограммированной гибели клеток. Р53запускает программу апоптоза при наличиинерепарированных повреждений ДНК. Ген р53находится на коротком плече хромосомы 17 икодирует образование ядерного белка,состоящего из 393 аминокислот, смолекулярной массой 53 кДа. Тетрамерфункционирует как транскрипционныйфактор, связываясь своим карбоксильнымокончанием со специфическими регионамигенов-мишеней [Мойбенко А.А. и соавт., 2005].Белок Р53 находится в цитоплазме внеактивном состоянии и в случае активацииспособен инициировать независимо друг отдруга две программы: временную остановкуклеточного цикла в G1-фазе с помощью белка р21WAF1, ингибирующегоциклинзависимые киназы, и стимуляциюапоптоза путем активации генов bax или bid–проапоптотических генов семьи Bcl-2 и/илиактивации образования свободных формкислорода, способствующих освобождениюцитохрома с измитохондрий [Лукьянова Н.Ю. и соавт., 2000;Владимирская Е.Б., 2002; Антонов В.Г., КозловВ.К., 2004; Москалева Е.Ю., Северин С.Е.,2006].

В настоящее времяустановлено, что существуют несколькосигналпередающих путей в реализацииапоптоза. В первую очередь, этокальций-зависимый путь передачи сигнала,который активируется при действии рядацитокинов и глюкокортикоидов на различныеклетки. В результате индукции в клеткепроисходит активация протеинкиназы С,приводящая к образованию ряда вторичныхмессенджеров. Важное значение придаетсяинозитолтрифосфату, который способствуетвыходу кальция из эндоплазматическогоретикулума в цитозоль, что приводит кактивации Ca2+,Mg2+-зависимойэндонуклеазы, разрушению цитоскелета иобразованию апоптотических телец путемактивации Са2+-зависимой протеазы кальпаина и др.[Белушкина Н.Н., Северин С.Е., 1998; СухановаГ.А., Акбашева О.Е., 2006].

Другой путь – индукциясфингомиелиназы, необходимой дляактивации апоптоза IL-1, TNF и вFas-индуцируемых системах. Этот путьначинается с ферментативного гидролизасфингомиелина до фосфатидилхолина ицерамида [Суханова Г.А., Акбашева О.Е., 2006].Мишенями действия церамида являютсямногие внутриклеточные ферменты и факторытранскрипции – церамидактивируемая протеинкиназа(CAPK), протеинфосфатаза 2А,митогенактивируемая протеинкиназа (ERK/MAPK),стрессактивируемая протеинкиназа (JNK/SAPK),NF-B, AP-1,протеинкиназа С, фосфолипаза D и катепсин D.Так, церамид активирует САРК, которая впоследующем фосфорилируетпроапоптотические белки семейства Вcl-2. Поддействием церамида активируютсяпротеинкиназа С и фосфолипаза А2, которыеспособствуют перераспределениюфосфатидилсерина на поверхность клетки[Мойбенко А.А. и соавт., 2005; Ипатова О.М. исоавт., 2006].

Следующийсигналпередающий путь активации апоптоза– образованиеактивных форм кислорода (АФК). Роль этихвеществ до конца не исследована, известно,что они служат важными внутриклеточнымимессенджерами [Los M., 1995]. АФК представляютсобой высокоактивные метаболиты,генерируемые клеткой в процессенормальной жизнедеятельности. При этомсуществует ряд внутриклеточных систем,направленных на ограничение инейтрализацию повреждающего действия этихмолекул. Многие агенты, провоцирующиеразвитие апоптоза клеток, являютсяоксидантами или стимулируют окислительныепроцессы; в то же время многие ингибиторыапоптотической гибели проявляютантиооксидантную активность [Buttke T.M., 1994].Так, например, в эксперименте тиоловыеантиоксиданты N-ацетилцистеин и глутатионблокировали гибель Т-клеток гибридомы[Sandstrom P.A., 1994], а диметилсульфоксид ио-фенантролин ингибировалиэндотоксин-зависимый апоптозэндотелиальных клеток [Abello P.A., 1994]. Былопоказано, что FasL, являющийся важныммедиатором апоптотической гибели многихтипов клеток, реализует свой эффектпосредством кислород-зависимого пути [UmH.-D., 1996]. Установлено, что вFas-резистентных опухолевых клеточныхлиниях уменьшение внутриклеточнойконцентрации радикалов кислорода повышаетчувствительность FasR, в то время какувеличение количества супероксид-анионовотменяет Fas-ассоциированный апоптоз этихклеток [Clement M.-V., 1996].

При переносеэлектронов по дыхательной цепимитохондрий в комплексах I и III частопроисходит «утечка» электронов накислород, в результате чего образуютсяактивные формы кислорода.Супероксид-анионы в клетке подвергаютсядальнейшим превращениям в перекисьводорода под действием Cu2+/Zn2+-зависимой илиMn2+-зависимойсупероксиддисмутазы. В последующем онаобезвреживается каталазой илиглутатион-пероксидазой [Wedi B. et al., 1999]. АФК,не нейтрализованные антиоксидантнымисистемами, вызывают значительныеизменения клеточных структур: деструкциюДНК, повреждение белковых и липидныхмолекул. Показано, что образование АФКвызывает снижение мембранного потенциаламитохондрий и одновременный выходцитохрома с[Бра М. и соавт., 2005; Москалева Е.Ю., СеверинС.Е., 2006].

На сегодняшний деньизвестно, что в запуске и развитии процессаапоптоза центральная роль принадлежитпротеазам. Осуществляя деструкциюклеточных структур, они расщепляютбелки-мишени в области расположенияаспарагиновых оснований. Эта группапротеаз, названная каспазы (caspases),существует обособленно и функционируеткак медиатор сигнала смерти. Каспазы имеютвысокую степень гомологии по своейаминокислотной последовательности, схожипо структуре и по субстратнойспецифичности и синтезируются в видепроферментов (30-50 кДа), которые содержат 3домена: N-концевой домен, большую (20 кДа) ималую субъединицы (10 кДа). Было установлено,что во время активации каспазыподвергаются протеолитическомуотщеплению N-концевого домена. Большая ималая субъединицы разъединяются иобразуют комплекс, состоящий из двухгетеродимеров субъединиц. В литературеописаны 14 каспаз, нумерация которыхсоответствует хронологическому порядку ихоткрытия. Каспазы также содержат 2модульных участка, которые опосредуют ихвзаимодействие с адаптерными белками:эффекторный домен смерти (DED, death effector domain) идомен мобилизации каспаз (CARD, caspase recruitmentdomain) [Фильченков А.А., 2003; Суханова Г.А.,Акбашева О.Е., 2006].

Один из путей активациикаспаз связан с взаимодействием индуктораапоптоза со специфическими рецепторами(например, активация каспазы-8 привзаимодействии FasL с FasR). В свою очередь,другой путь - активация каспазы-9 врезультате образования гетеродимеровбелками семейства Вс1-2. И, наконец, третийпуть активации каспаз - при помощи гранзимаВ - сериновой протеазы. Такой путьактивации каспаз актуален в случаеиндукции апоптоза клетки цитотоксическимиТ-лимфоцитами, которые и секретируют этиферменты. При этом необходимо присутствиепорообразующих белков перфоринов,продуцируемых также цитотоксическимиТ-лимфоцитами. В качестве мишеней гранзимаВ известны каспазы 1, 3 и 9 [Владимирская Е.Б.,2002; Фильченков А.А., 2003].

Как указывалось ранее,каспазы осуществляют деструкцию клеточныхструктур [Widmann C., 1998]. Это, по-видимому, обеспечиваетсярядом механизмов. Так, каспазы обладаютспособностью инактивировать ингибиторыапоптоза: нуклеаза, расщепляющая ДНК(CAD), находится в неактивном, связанномсостоянии с белком ингибитором (ICAD).Каспазы 3 и 7 расщепляют ICAD, высвобождаянуклеазу CAD. Другим механизмом действиякаспаз можно назвать прямое расщеплениеструктурных белков клетки. Каспаза 6разрушает ядерный ламин, организующийструктуру хроматина, что приводит кконденсации хроматина. Кроме того, каспазывызывают нарушение регуляции белковогосинтеза, что ведет к расщеплению белков,контролирующих структуру цитоскелета.Известно, что, расщепляя гельзолин – белок,регулирующий натяжение нитей актина,каспазы разрушают цитоскелет. И, наконец,каспазы способствуют инактивации идизрегуляции белков, вовлеченных врепарацию ДНК (DNA-PKcs), образование мРНК (U1-70K) ирепликацию ДНК (репликационный фактор С)[Белушкина Н.Н., Северин С.Е., 2001;Владимирская Е.Б., 2002]. Поэтому каспазысоставляют центральный компонентпрограммы апоптоза: их активация приводитк финальной стадии гибели клеток, а именно– кфрагментации ДНК и деградации структурныхбелков цитоскелета и клеточных мембран, атакже к инактивации других белков,обеспечивающих нормальноефункционирование клетки [Олейник Е.К. и соавт., 2004].

По данным литературы,белки, входящие в семейство Вcl-2, являютсямодуляторами апоптотической гибели:некоторые из них (bcl-2, bcl-xL, Mcl-1, bcl-w)препятствуют развитию апоптоза, тогда какдругие (bax, bak, bid, bad, bcl-xS), наоборот, - служатпромоторами этого процесса [Boise L.H.,1993; Kroemer G., 1997].Наиболее хорошо изученным из всех геновданного семейства является ген bcl-2, продукткоторого экспрессируется преимущественнона мембране митохондрий. Исследованияпоказывают, что экспрессия bcl-2 можетблокировать апоптоз, индуцированный рядомсигналов, в том числе ионизирующейрадиацией, химиотерапевтическимипрепаратами, удалением факторов роста,стероидами. Bcl-2 также защищает клетку отапоптоза, регулируемого р53, чтопредполагает супрессию апоптотическогосигнала и имеет место при опухолевойтрансформации. Экспрессия bcl-2 можетспособствовать онкогенезу: он способентрансформировать клетки в кооперации с c-myc.Это наблюдается в некоторых типахопухолей, например, при некоторых видахлимфом и лейкемий, нейробластомах икарциномах предстательной железы. Кромеэтого, ряд исследователей полагают, чтоповышенная экспрессия bcl-2обусловливает резистентность опухолейк воздействию противоопухолевыхпрепаратов и облучению, поскольку гибельопухолевых клеток при этих воздействияхпроисходит по механизму апоптоза икоррелирует с неблагоприятным прогнозом[Campos L., 1993; Уманский С.Р., 1996; Барышников А.Ю.,Шишкин Ю.В., 1996; Karakas T., 1998; Лукьянова Н.Ю.,2000].

Что касается белка bad,то известно, что он участвует в запускеапоптоза за счет образования гетеродимерас белком bcl-2 и высвобождениямитохондриальных факторов [Белушкина Н.Н.,Северин С.Е., 2001]. Известно,что в мембранах митохондрий присутствуюттакие белки, как протеаза AIF (apotosis inductingfactor) и цитохром с. Эти факторы покидают митохондриипосредством крупных мегаканалов,образующихся при взаимодействиимитохондриальной мембраны с bad [Kluck R.M., 1997; Kroemer G., 1997]. Вцитозоле цитохром с связывается с Apaf-1 (апоптотическийпротеазоактивирующий фактор), повышаясродство последнего к АТФ, чтоспособствует конформационному переходу свысвобождением каспаз-связывающего домена(CARD) в Apaf-1 [Маянский Н.А., 2004; Бра М. и соавт.,2005; МойбенкоА.А. и соавт., 2005; Черняк Б.В. и соавт., 2005;Суханова Г.А., Акбашева О.Е., 2006]. Этот домен взаимодействует спрокаспазой-9, вызывая образованиеактивного фермента, который затемактивирует каспазы-3 и -7 [Li P.,1997; Cain K., 1999; Фильченков А.А., 2003]. В образуемый протеолитическийкаскад включаются также прокаспазы -2, -6, -8 и-10, что приводит к разрушению клетки [Суханова Г.А., Акбашева О.Е., 2006].

Таким образом, апоптозпредставляет собой сложныймногокомпонентный процесс, необходимыйдля нормального развития клеток,поддержания тканевого гомеостаза иудаления поврежденных элементов. При этомособого внимания заслуживаетцитокинопосредованный апоптоз в связи сважностью установления механизмовмежклеточных взаимодействий.

1.2.2 Общиепредставления о цитокинопосредованнойрегуляции апоптоза клеток

Цитокины – большая группа веществполипептидной природы, обладающих широкимспектром биологических свойств. Внастоящее время к ним относят более 200веществ, в том числе интерфероны,колониестимулирующие факторы, интерлейкины,хемокины, семейство фактора некрозаопухолей, трансформирующие ростовыефакторы и др., ин­дуцирующие и регулирующие такиефизиологические и патологические процессы, как рост,пролиферация, старениеклеток, апоптоз, гемопоэз, воспаление,иммунный ответ,метаболизм, регенерациятканей и др. Цитокины могут какстимулировать, так и ингибировать указанныепроцессы, действовать как синергисты иантагонисты, вызыватькаскад цепных реакций. Цитокинымного­функциональны, универсальны,плейотропны. Плейотропность заключается в способности одних итех же цитокинов взаимодейство­вать с рецепторами,экспрессированными разными клеткамиорганиз­ма.Цитокины со сходным строением могутоказывать различное био­логическоедействие, а разные в структурном отношениицитокины могут вызыватьблизкий и даже одинаковый эффект [Луговская С.А., 1997; Кашкин К.П., 1998;Хаитов Р.М., 2000; ГольдбергЕ.Д., 2001; Фрейдлин И.С., 2001; Симбирцев А.С., 2004; Ершов Ф.И., 2006].

Взаимодействуя междусобой, цитокины обра­зуют комплексную сетевую систему, врамках которой биологические свойстваотдельных цитокинов могут существенноизменяться.Цитокиновая сеть представляет собойуниверсальную систему, за­пускающую ирегулирующую целый каскад воспалительных,иммун­ных иметаболических процессов, направленных нанейтрализацию и элиминациюпатогенных агентов. Эта биологическаясистема облада­ет свойством взаимозаменяемостибиологического действия, а также сочетанияаутокринной и паракриннойрегуляции. Следуетподчеркнуть,что конкретным цитокинамприсущи определенные свойства,выработанные в процессе эволюции. Однакодействие в отношении клетки-мишени реализуется в видекомбинаций и последовательностей эффектов цитокинов[Фрейдлин И.С., 1995, 2001;Луговская С.А., 1997; Васильева Г.И., 2000; ХаитовР.М., 2000; Царегородцева Т.М., 2003; Ешану В.С.,2004; Иванов А.А. и соавт., 2005]. Взаимодействие цитокиновхарактеризуется синергизмом (например, TNF и IFN) или антагонизмом(IL-4 и IFN). Сбалансированность цитокиновойрегуляции основывается на равновесииальтернативных по биологическим свойствам пуловмолекул, нарушение которого ведет кразвитию патологии [Фрейдлин И.С.,2001].

В настоящее времяопределен ряд цитокинов, обладающихапоптоз-регулирующей функцией. К их числупрежде всего относятся IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, GM-CSF, TNF, IFN (табл. 2).

Известно, чтопровоспалительный цитокин IL-1 обладаетшироким спектром действия. Основнымисточником данного цитокина являютсямононуклеары различной тканевойпринадлежности. Для синтеза IL-1 необходимаактивация последних различнымииндукторами, в частности компонентамиклеточной стенки бактерий [Greenbaum L.A., 1988]. IL-1усиливает пролиферацию CD4+-клеток, рост идифференцировку В-лимфоцитов, индуцируетпродукцию IL-2 и экспрессию его рецептора,способствует активации продукции антител,обладает прямым токсическим действием нараковые клетки и клетки, инфицированныевирусами, стимулирует продукцию IL-1, IL-2,IL-3, IL-4, IL-5, IL-6,IL-8, RANTES, GM-CSF, IFN- и TNF различными клетками. Согласносовременным данным, существуют триизоформы IL-1 –, и [Намазова Л.С. исоавт., 2000; Кадагидзе З.Г., 2003].

При изучении влияния IL-1на программированную гибель клеток, былаустановлена его способность предотвращатьапоптотическую гибель моноцитов [Mangan D. et al.,1991]. В исследовании F. Colotta et al. [1992] былоустановлено, что IL-1 увеличивает выживаниеполиморфноядерных лейкоцитов, угнетая ихапоптоз. В реализации антиапоптотическогоэффекта этого медиатора, по-видимому,участвует ядерный фактор NF-B, активациякоторого наблюдается при связывании IL-1 ссоответствующим рецептором [Ковальчук Л.В.и соавт., 2001]. Активность другого фактора -AP-1 также может быть индуцированаупомянутым цитокином, вероятно,посредством активации протеинкиназы С [MueggeK. et al., 1989].

IL-2, наряду с IL-1,является важным провоспалительнымцитокином, который стимулируетпролиферацию и дифференцировкуактивированных Т-лимфоцитов в эффекторныеклетки. Он продуцируется в основномCD4+-лимфоцитами. Продукция IL-2 являетсяиндуцибельной: покоящиеся

Таблица 2

Спектр цитокинов -регуляторов апоптоза

Цитокин Влияние на апоптоз Молекулярные механизмы Авторы
Интерлейкин-1 апоптоза моноцитов АктивацияNF-B, AP-1 Muegge K. et al., 1989;Mangan D. et al., 1991; Ковальчук Л.В. и соавт.,2001
Интерлейкин-2 апоптоза Т-лимфоцитов Активациягенов c-myc, bcl-X, bcl-2, CIS; белка Stat5a и PI3K Estaquier J., Ameisen C., 1997; Потапнев М.П.,2002; Lotem J., SachsL., 2002; МинеевВ.Н., Сорокина Л.Н., 2005
апоптоза Т-лимфоцитов Увеличениеэкспрессии лигандов и рецепторов Fas иTNF,образования DISC-комплекса; ингибированиесинтеза c-FLIP Потапнев М.П.,2002
Интерлейкин-3 апоптоза эозонофилов Активация PI3K,Ras-MAPK, транскрипционных факторов c-fos, c-jun, фосфорилирование bad,нарушение переноса bax к митохондриям,экспрессия bcl-2 или bcl-xL Dorsch M. et al., 1994;Kinoshita T., 1995; Perkins G.R. et al., 1996; Del Peso L. et al., 1997;Leverrier Y. et al., 1997; Nagata Y., Todokoro K., 1997; Wang J.M. et al.,1999
Интерлейкин-4 апоптоза лимфоцитов, тучных клеток Активация PI3K, JAK- STAT6 Brunetti M.et al., 1995; Yanagida M. et al., 1995; EstaquierJ., Ameisen C., 1997
апоптоза моноцитов

Продолжение таблицы2

Цитокин Влияние на апоптоз Молекулярные механизмы Авторы
Интерлейкин-5 апоптоза эозонофилов Активация PI3K,JAK-STAT, Ras-MAPK, транскрипционных факторовc-fos, c-jun, увеличение экспрессии bcl-2,bcl-xL Yousefi S. et al., 1994,1996; Bates M.E. et al., 1996; Ochiai et al., 1997; Ogata N. et al., 1997;Dibbert B. et al., 1998; Pazdrak K. et al., 1998
TNF апоптоза Запусккаскада каспаз; образование церамида;образование АФК Маянский Н.А.,2002; Потапнев М.П., 2002
апоптоза моноцитов,Т-лимфоцитов АктивацияNF-B Потапнев М.П.,2002; Мойбенко А.А. и соавт., 2005
IFN апоптоза моноцитов JAK-STAT1 Estaquier J., Ameisen C., 1997 Colotta F. et al., 1992; Минеев В.Н.,Сорокина Л.Н., 2005; Ершов Ф.И., 2006
апоптоза гранулоцитов
GM-CSF апоптозаэозонофилов Активация PI3K,Ras-MAPK, транскрипционных факторов c-fos, c-jun, повышение экспрессииbcl-xL Tai P.C. et al., 1991;Corey S. et al., 1993; Dibbert B. et al., 1998


Pages:     || 2 | 3 | 4 |
 





<
 
2013 www.disus.ru - «Бесплатная научная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.