Фармакокоррекция им м унного статуса коров и телят при специфической профилактике хламидиоза
На правах рукописи
МИЛЬШТЕЙН ИГОРЬ МАРКОВИЧ
фармакокоррекция иммунного статуса коров и телят при специфической профилактике хламидиоза
06.02.03 – ветеринарная фармакология с токсикологией
06.02.02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология,
микология с микотоксикологией и иммунология
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени
кандидата ветеринарных наук
Воронеж -2013
Работа выполнена на кафедре инфекционной и незаразной патологии ФГБОУ ВПО «Уральский государственный аграрный университет»
| Научный руководитель | доктор ветеринарных наук Петрова Ольга Григорьевна |
| Официальные оппоненты: | Востроилова Галина Анатольевна доктор биологических наук, ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт патологии, фармакологии и терапии Российской академии сельскохозяйственных наук, заведующая лабораторией экспериментальной фармакологии Скогорева Анна Михайловна кандидат ветеринарных наук, ФГБОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный университет им. Императора Петра I», доцент кафедры паразитологии и эпизоотологии |
Ведущая организация: Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии (ВНИИВСГЭ)
Защита состоится «26» декабря 2013 года в 13-00 часов на заседании диссертационного совета Д.006.004.01 при Всероссийском научно-исследовательском ветеринарном институте патологии, фармакологии и терапии Россельхозакадемии (ГНУ ВНИВИПФиТ РАСХН) (394087, г. Воронеж, ул. Ломоносова, 114-б)
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии Россельхозакадемии.
Автореферат размещен на официальном сайте (ГНУ ВНИВИПФиТ Россельхозакадемии – http:// www.nivipat.ru и официальном сайте ВАК РФ –http://vak2.gov.ru
Автореферат разослан «26»ноября 2013 г.
Учёный секретарь диссертационного совета,
кандидат биологических наук, доцент Ермакова Т.И.
1. Общая характеристика работы
Актуальность темы. Актуальность исследования по изучению хламидиозов неоднократно доказана во многих странах мира как по данным сероэпизоотологического анализа (С. В. Шабунин, 2009, 2012; М.И. Рецкий, 2009; И.М.Донник,2013; О.Г.Петрова,2013), так и по результатам выделения возбудителя при различных патологических процессах у разных млекопитающих (С.В. Шабунин, 2012; О.Г.Петрова, 2013; E. Madsen, 1994; R. Sting, 1997). Сложность изучения эпизоотологических особенностей данного заболевания усугубляется возможностью межвидовой передачи возбудителя хламидиоза (А.И. Заика, М.В. Малахов, 1995;О.Г.Петрова,2010; И.М.Донник,2013).
По данным Р.Х. Хамадеева, А.З. Равилова (1996), J. Schacter et.all. (1998) А.И. Золотарева (2012), Петровой О.Г.(2013) хламидии вызывают заболевание дыхательной, пищеварительной, опорно-двигательной, нервной и урогенитальной систем.
Хламидийные инфекции крупного рогатого скота имеют особое значение - они наносят значительный экономический ущерб скотоводству, а их возбудители патогенны и для человека. (В.А. Бортничук, А.И. Ятишин, М.С. Павленко, 1994; Р.Х. Хамадеев, А.З. Равилов, 1997; E.F. Kaleta, 1997; H.M. Hafez, R. Sting, 1997).
В 1972 году изучение хламидиозов было включено в программу исследований Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ). Эта программа включает: изучение вопросов этиологии, диагностики, распространения и лечения, профилактики хламидиозов животных и людей. Исследованиями, проведенными в нашей стране и за рубежом, изучены некоторые вопросы этиологии, эпизоотологических особенностей, патогенеза, клинического проявления, патологоанатомических изменений, диагностики, общей и специфической профилактики. (В.Л. Ковалёв, 1987; В.А. Атамась с соавтр., 1989; В.В. Евстифеев, 1998; П.А. Красочко с соавтр., 1999; С.В.Шабунин, 2011, C.J. Hueck, 1998;K. Bachmaier et all., 1999). Вместе с тем, многие вопросы этой проблемы требуют дополнительного изучения.
Степень разработанности. В нашей стране диапазон колебаний заболеваемости хламидиозом у животных является очень высоким, что, скорее всего, свидетельствует не об истинных различиях в распространенности заболевания, а об уровне его диагностики в разных регионах страны (В.В. Макаров, А.Г.Шахов,2003; Е.О.Чугунова,2012; О.Г.Петрова, 2012)
Трудность интерпретации этих показателей связана в значительной степени с недостаточным проведением в России современных многоцентровых стандартизованных эпизоотологических исследований (С.В.Шабунин,2008; А.Г.Шахов, 2012; И.М.Донник, 2013).
В новых экологических условиях значительно снизилась эффективность проводимых мероприятий по оздоровлению от хламидиоза крупного рогатого скота и возникла необходимость существенной корректировки системы противохламидиозных мероприятий с учетом изменения течения эпизоотического процесса. До настоящего времени отсутствуют сведения об интенсивности эпизоотического процесса при хламидиозе крупного рогатого скота на территории Уральского региона. Совершенно не изучены клинические признаки и патологоанатомические изменения при урогенитальном хламидиозе и хламидиозном артрите у крупного рогатого скота. (Н.А.Татарникова,2012; И.М.Донник, О.Г.Петрова,2013).
Важное место в комплексе профилактических мероприятий при хламидиозе крупного рогатого скота отводится применению специфической профилактики. Однако, применение вакцин не всегда дает желаемый результат и недостаточно эффективно для управления эпизоотическими процессами. Это обусловливается рядом факторов, среди которых ведущее значение имеет полиэтиологичность возбудителей, вызывающих урогенитальную патологию и артриты.
Часто вакцинация, проводимая на фоне глубоких нарушений обменных и иммунных процессов, не достигает эффекта и приводит к угнетению иммунной системы (А.Г.Шахов, Ю.Н. Масьянов, Л.Ю.Сашнина, А.И.Золотарев.2010, О.Г. Петрова, 2013,Н.А.Кольберг,2013).
Неотложного решения требуют вопросы общих и специфических мер борьбы с этой болезнью. В связи с этим, изучение эпизоотической ситуации при хламидиозе крупного рогатого скота в Уральском регионе, клинических признаков и патологоанатомических изменений при урогенитальном хламидиозе и хламидиозном артрите, определение эффективности вакцины, на фоне иммуномодуляторов, а также разработка инструкции по предупреждению и ликвидации хламидиоза сельскохозяйственных животных является актуальной задачей и позволит практическим ветеринарным врачам вести успешную борьбу с данной болезнью.
Цель и задачи исследований
Основной целью данной работы является совершенствование профилактики хламидиоза крупного рогатого скота с применением вакцины в сочетании с иммуномодулятором «Бурсанатал».
Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:
1. Выяснить эпизоотическую ситуацию по хламидиозу крупного рогатого скота в Уральском регионе.
2. Изучить клинические симптомы и патологоанатомические изменения при урогенитальном хламидиозе и хламидиозном артрите у крупного рогатого скота.
3.Разработать комплексный препарат иммуномодулирующего действия и дать экспериментальное обоснование к его применению при специфической профилактике хламидиоза.
4.Изучить формирование иммунного статуса у коров и телят и иммунологическую эффективность вакцинации в сочетании с иммуномодулятором «Бурсанатал».
5.Разработать научно-обоснованную систему мероприятий при урогенитальном хламидиозе крупного рогатого скота.
Научная новизна. Изучены эпизоотические особенности по хламидиозу крупного рогатого скота в сельскохозяйственных предприятиях Свердловской, Челябинской областей и Удмуртской Республики. Установлены особенности клинического проявления и патологоанатомических изменений при хламидиозном артрите и урогенитальном хламидиозе крупного рогатого скота. Разработан новый комплексный препарат иммуномодулирующего действия «Бурсанатал» для профилактики хламидиоза крупного рогатого скота в экспериментальных условиях. Усовершенствована система профилактики хламидиоза крупного рогатого скота (хламидиозный артрит и урогенитальный хламидиоз)
Теоретическая и практическая значимость работы. Материалы диссертационной работы расширяют и дополняют имеющиеся научные данные об особенностях краевой эпизоотологии, основных клинико-патоморфо-логических изменениях при урогенитальном хламидиозе и хламидиозном артрите крупного рогатого скота. Полученные результаты позволяют усовершенствовать профилактические и лечебные мероприятия на основе применения комплексной диагностики указанных болезней. Использование иммуномодулирующего препарата «Бурсанатал» при хламидиозе крупного рогатого скота повышает эффективность оздоровительных мероприятий и продуктивные качества животных.
Разработанные и внедренные в хозяйствах Свердловской, Челябинской областей и Удмуртской Республики научно-обоснованные рекомендации по профилактике хламидиоза с использованием иммуномодулирующего препарата «Бурсанатал» позволяют повысить продуктивность коров, сохранность телят, при этом экономический эффект составил в Свердловской, Челябинской областях и Удмуртской Республике 15,34; 16,04; 20,39 руб. соответственно.
Методология и методы исследования. Исследования выполнены на базе кафедры инфекционных и незаразных болезней ФГБОУ ВПО «Уральский государственный аграрный университет», Свердловской и Челябинской областных ветеринарных лабораториях, диагностическом центре г. Ижевска, ФБУН "Государственный Научный Центр прикладной микробиологии и биотехнологии" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Российской Федерации. Для изучения эпизоотической ситуации по хламидиозу животных использовали статистический метод - изучали отчетные документы областных ветеринарных лабораторий, диагностического центра.
Объектом исследования был крупный рогатый скот сельскохозяйственных предприятий Свердловской, Челябинской областей, Республики Удмуртия. Предметом исследований служили: документация ветеринарного учета и отчетности, данные эпизоотологического и клинического проявления заболевания, результаты патологоанатомического вскрытия, кровь и сыворотка крови животных.
Проводили клинические, патологоанатомические, гематологические, микроскопические, серологические исследования, ПЦР - диагностику.
Определяли сравнительную эффективность вакцины против хламидиоза крупного и мелкого рогатого скота культуральную инактивированную ООО «Блиц», применяемую для специфической профилактики хламидиоза крупного рогатого скота в Уральском регионе и препарата «Бурсанатал» - тканевый иммуномодулятор (ООО «Инномед», г. Екатеринбург).
Оценку безопасности и специфической эффективности тканевого иммуномоулятора «Бурсанатал» проводили в соответствии с «Методическими рекомендациями по изучению общетоксического действия фармакологических средств», «Правилами доклинических исследований безопасности и эффективности фармакологических веществ», «Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ», методическими указаниями по определению безопасности и эффективности биологических активных добавок к пище.
Материалом для серологических исследований служили пробы сывороток крови от животных, имеющих клинические признаки хламидиоза, а также от животных, участвующих в процессе воспроизводства стада. Материалом для морфологических исследований служили абортированные плоды, паренхиматозные органы, смывы из влагалища.
Диагностику хламидийной инфекции у сельскохозяйственных животных проводили реакцией связывания комплемента (РСК), с использованием набора производства Всероссийского научно - исследовательского института технологической и биологической промышленности. Диагностические исследования осуществляли в соответствии с «Методическими указаниями по лабораторной диагностике хламидийных инфекций у животных», утвержденных Департаментом ветеринарии Минсельхоза России. Животных, у которых при исследовании сывороток крови были получены сомнительные результаты, подвергали повторному обследованию через 15 дней. В качестве дополнительного метода исследования использовали микроскопический - окраску по Стемпу мазков с паренхиматозных органов, смывов с влагалищ.
Эпизоотологический мониторинг осуществлялся в соответствии с «Методикой эпизоотологического исследования» (Бакулов И.А. и др.,1975), «Проявление эпизоотического процесса и оценка его интенсивности» (И.А. Бакулов и др.,1979), «Методы эпизоотологического исследования и теория эпизоотического процесса» (Джупина С.И.,1991).
Определение биохимических показателей крови телят проводили общепринятыми методами с использованием полуавтоматического биохимического анализатора. Использовали стандартные диагностические наборы «Hospitex Diagnostics» (Италия). Определение общего белка в сыворотке крови проводили биуретовым методом (И.П. Кондрахин, 1985). Для определения концентрации кальция, глюкозы, активности щелочной фосфотазы, фосфора использовали колориметрический метод.
Серологические исследования сыворотки крови на хламидиоз, бактериологические исследования биоматериала были проведены в областных и республиканских ветеринарных лабораториях Уральского региона.
Цифровые данные эпизоотологических и лабораторных исследований обработаны методами математической статистики, принятыми в биологии и медицине с использованием компьютерной программы Microsoft Excel 2007.
Экономический ущерб рассчитывали согласно методике определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий, утвержденной МСХ и Продовольствия РФ (Ю.Е. Шатохин, И.Н. Никитин, П.А. Чулков, В.Ф. Воскобойник, 1997).
Основные положения, выносимые на защиту:
1.Хламидиоз крупного рогатого скота в скотоводческих хозяйствах различных природно-климатических зон Свердловской, Челябинской областей, Удмуртской Республики имеет широкое распространение и характеризуется относительно высоким показателем заболеваемости, несколько меньшей летальностью и смертностью, а также выраженным сезонным проявлением.
2.Препарат «Бурсанатал» стимулирует гуморальный и клеточный иммунитет крупного рогатого скота, а также положительно влияет на продуктивность животных при проведении специфической иммунопрофилактики крупного рогатого скота, позволяет повысить сохранность телят, при этом экономический эффект при использовании препаратов составляет от 15,34 до 20,39 руб. на рубль затрат.
Степень достоверности и апробация полученных результатов. Полученные результаты исследований по комплексной диагностике хламидиоза крупного рогатого скота, специфической иммунопрофилактике в сочетании с иммуномодулятором «Бурсанатал» используются в ряде хозяйств Свердловской, Челябинской областей и Удмуртской Республике. Отдельные положения диссертации используются при чтении лекций и проведения лабораторно-практических занятий по курсу фармакология, ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология на факультетах ветеринарной медицины Уральского аграрного университета, Государственном аграрном университете Северного Зауралья, Уральской государственной академии ветеринарной медицины, ГНУ Уральского НИВИ Россельхозакадемии, Ижевской государственной сельскохозяйственной академии, Пермской государственной сельскохозяйственной академии им. Прянишникова.
Апробация работы. Основные положения и результаты исследования представлены и доложены на Международной научно-практической конференции студентов, аспирантов и молодых учёных «Молодёжь и наука 2010, 2011, 2012, 2013» Екатеринбург; Всероссийском совете молодых учёных аграрных образовательных и научных учреждений Москва-Троицк 2010; «Научно-техническое творчество молодёжи – путь к обществу, основанному на знаниях» Москва 2011; III Международной научно – практической конференции – «Молодежь и наука», Москва 2011; Методической конференции преподавателей УрГСХА, Екатеринбург 2011; Международной научно-практической конференции «Экономическая безопасность субъектов хозяйствования и проблемы и механизмы обеспечения», Екатеринбург,2013.
Публикации результатов исследования. По материалам диссертации опубликовано 9 научных работ, в том числе 5 статей - в журналах, рекомендованных ВАК Минобразования и науки Российской Федерации («Аграрный вестник Урала », «Вестник Красноярского государственного аграрного университета», «Агропродовольственная политика России»), 1 рекомендации.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 155 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов исследований, выводов, практических предложений, библиографического списка и приложения. Работа иллюстрирована 18 таблицами и 27 рисунками. Библиографический указатель включает 180 источников из них 112 отечественных и 68 иностранных авторов.
2. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1. Эпизоотологические особенности хламидиоза крупного рогатого скота в сельскохозяйственных предприятиях Уральского региона.
По данным Россельхознадзора хламидиоз среди крупного рогатого скота составляет 12,5% неблагополучных субъектов РФ при заболеваемости 25%. Проведенный эпизоотологический мониторинг хламидийных инфекций на территории Свердловской и Челябинской областей, Удмуртской Республики за период с 2002 по 2012 год позволил установить удельный вес неблагополучных сельскохозяйственных предприятий Свердловской области 41,2%, Челябинской области 45,8%, Удмуртской Республики 47%. Средний процент положительных проб биоматериала на хламидиоз от числа исследованных по Свердловской области составил 1,43%, по Челябинской области 4,9%, по Удмуртской республике 26,4%.С 2002 года процент положительных проб на хламидиоз по Свердловской области уменьшается, что возможно связано с разработкой и внедрением программы по оздоровлению сельскохозяйственных предприятий от острых респираторных заболеваний крупного рогатого скота. Хламидиоз крупного рогатого скота протекает в ассоциации с возбудителем вирусной диареей (26,9%), инфекционного ринотрахеита (31,2%), парагриппа - 3 (24,6%).
2.2. Клинические проявления урогенитальных заболеваний при хламидиозе крупного рогатого скота в сельскохозяйственных предприятиях Уральского региона
При обследовании неблагополучных по хламидиозу крупного рогатого скота животноводческих хозяйств на территории Свердловской, Челябинской областей, Удмуртской Республике установлено, что на каждые 100 коров за период с 2002 по 2012 год получено от 75 до 88 телят.
В неблагополучных сельскохозяйственных предприятиях по хламидиозу у крупного рогатого скота регистрировались желудочно-кишечные заболевания 35%, острые респираторные заболевания 29,8%, урогенитальные заболевания 26,6%, артриты 33,2%, кератоконъюнкивиты 10%.
Урогенитальные заболевания хламидиозного характера в виде эндометритов регистрировали у 28,9 % животных, задержание последа у 25,6%, субинволюция матки наблюдалась у 20,1%, персистентное желтое тело яичников у 5,1%, кисты яичников - у 1,1% отелившихся коров. Другие акушерско-гинекологические заболевания составили 5,4%.
Наиболее восприимчивы к хламидиозу телята в трехнедельном возрасте (37,2%) и коровы на 7-9 месяце стельности - (29,6%). Заболевание протекает преимущественно в виде энзоотий, регистрируется чаще в зимне-весенний период, обладает стационарностью.
2.3. Артриты, вызванные хламидиями Cl.abortus крупного рогатого скота в сельскохозяйственных предприятиях Уральского региона
Хламидиозный артрит у телят 12-60 дней в сельскохозяйственных предприятиях проявляется, как следствие урогенитальной формы хламидиоза коров.
При артритной форме хламидиоза у телят исследовали 1085 проб сыворотки крови, в неблагополучных по хламидиозу сельскохозяйственных предприятиях. Положительно реагирующих выявлено 468(43,1%). Сыворотку крови от крупного рогатого скота при урогенитальной форме хламидиоза исследовали в количестве 3566 проб, из них реагировали положительно 1809(50,7%).
В обследуемых хозяйствах у 220 (29%) телят 12-60 дневного возраста наблюдали хламидиозный артрит, сопровождающийся угнетением, диареей, адинамией, ослаблением тактильной и болевой чувствительности. При внутриутробном заражении их, запястные и скакательные суставы были увеличены в размере, болезненны, околосуставная ткань напряжена. Синовиальная жидкость мутная с розоватым оттенком. У телят с постнатальным механизмом развития артрита клинико-морфологическая картина болезни несколько отличается; характеризуется единичными поражениями центральной нервной системы 3% и запястных суставов в 17% случаев.
2.4. Патологоанатомические изменения при урогенитальном хламидиозе и артритах
Плоды от коров, абортированные до 6-месячного возраста, не имели ярко выраженных поражений, отмечали увеличенное количество красноватой жидкости в плевральной и брюшной полостях, а также отёк подкожной клетчатки. При осмотре плодов коров, абортированных на 7-9-м месяце беременности, обнаруживали ряд патологических изменений, имеющих диагностическое значение.
Бледность слизистых оболочек, отечность кожи и подкожной клетчатки, особенно в области головы, очень часто отчетливо видны кровоизлияния на коже, на слизистой оболочке ротовой полости и языка. Лимфатические узлы у плода увеличены и отечны. Печень увеличена, зернистая, рыхлой консистенции, от светло-желтого до красно-оранжевого цвета. Специфичны также очаги воспаления размером 5 х 10 мм в миокарде и в корковом слое почек. В плаценте обнаруживали изменения, степень выраженности которых также зависела от срока беременности и длительности заражения к моменту аборта.
При патологоанатомическом вскрытии вынужденно убитых животных наблюдали гипофункцию яичников, а у трупов телят отмечали признаки катарального гастроэнтероколита, слизистая оболочка сычуга набухшая, усеяна множественными кровоизлияниями, наблюдали перикардит, плеврит, пневмонию. В печени отчетливо видны дистрофические, некротические изменения паренхимы. В суставах содержалась серовато-желтая жидкость, суставная капсула усеяна кровоизлияниями, некроз хряща и отслоение его от костной ткани.
2.5. Разработка и обоснование применения комплексного иммунометаболического препарата «Бурсанатал».
С учетом имеющихся в данном направлении разработок, в качестве прототипа исследуемого препарата использовали препарат Видор. Препарат Видор обладает выраженными антиоксидантными свойствами. Механизм действия Видора заключается в его способности связывать свободные радикалы, оказывающие повреждающее действие на белки, липиды и биомембраны клеток, что является базисным механизмом в патогенезе многих заболеваний, а также в процессе старения клеток и тканей организма. В настоящее время разработан состав Видора, предназначенный для применения peros и для инъекций (0,025 мл/кг живой массы). Нами проведены исследования по усилению его фармакологического эффекта за счет включения в состав дополнительных компонентов, хорошо сочетающихся и усиливающих его метаболическую активность.
По нашему предположению, включение в состав комплексного препарата «Видор» бурсы позволило бы улучшить метаболические процессы, а также усилить защитные силы организма.
В процессе экспериментальных опытов был определен наиболее оптимальный состав компонентов комплексного препарата, обеспечивающий выраженную стимуляцию обменных процессов и усиление защитных факторов организма животных. Созданная нами композиция была названа «Бурсанатал».
2.6. Оценка безопасности и специфической эффективности тканевого иммунномоулятора «Бурсанатал»
«Бурсанатал» является биологически активным тканевым препаратом, обладающим иммуннокоректирующим, профилактическим и терапевтическим действием для лечения и профилактики заболеваний различной этиологии сельскохозяйственных животных.
Острая токсичность. Острое токсическое действие «Бурсанатала» оценивали в экспериментах по определению средней летальной дозы (ЛД50) на модели белых беспородных мышей (самцы, самки 7-8 недель, 21,1 ± 1,8 г.) и крысах Вистар (самцы, самки 7-8 недель, 212 ± 16 г.) при различных путях введения – внутрижелудочном и внутрибрюшинном. Испытуемый препарат вводили различным группам мышей и крыс однократно внутрибрюшинно в дозах 0,5, 5, 50, 500 и 5000 мг/кг, или однократно внутрижелудочно (с помощью металлического зонда) в дозе 6, 60, 600 и 6000 мг/кг. Животным в контрольных группах назначали плацебо (воду и физиологический раствор). Срок наблюдения за животными составлял 21 день. Каждая экспериментальная группа состояла из 6 животных.
Полученные результаты показали, что в течение срока наблюдения все экспериментальные и контрольные животные остались живы. ЛД50 «Бурсанатала» при введении в желудок животным обоих видов составила >6000 мг/кг, что позволяет отнести исследуемый препарат к 4 классу малоопасных веществ. При внутрибрюшинном введении препарата мышам и крысам показатель ЛД50 составлял более 5000 мг/кг, что характерно для относительно безвредных веществ 6 класса токсичности (по К.К. Сидорову)
Подострая (субхроническая) токсичность. Возможное токсическое действие «Бурсанатала» при длительном (в течение 30 суток) внутрижелудочном введении оценивали в экспериментах на 26 нелинейных мышах (самцы/самки, 6-8 недель) и 26 крысах Вистар (самцы/самки, 7-8 недель), назначая животным одну или 20 терапевтических доз препарата. Объём вводимого жидкого препарата составлял 0,5 мл для мышей и 2,0 мл для крыс. Препарат применяли животным внутрижелудочно в одно и то же время один раз в сутки. За два часа до введения препарата у животных отбирали корм и воду.
Экспериментальные группы состояли из десяти животных, контрольные (не получавшие препарат) - из шести. Животные из первой экспериментальной группы получали одну терапевтическую дозу, из второй – 20 терапевтических доз. Экспериментальные и контрольные группы включали как самцов, так и самок, одного веса. Животные были отобраны случайным образом и прошли соответствующий карантин с ежедневным ветеринарным наблюдением.
Полученные результаты показали, что ежедневное внутрижелудочное введение мышам в течение 30 суток испытуемого препарата как в терапевтической дозе (750 мг/кг), так и в 20-кратной терапевтической дозе, не приводило к гибели животных и не влияло на состояние их здоровья как у самцов, так и у самок. Поведенческие реакции и внешний вид мышей из экспериментальных и контрольной групп не отличались. Кривые динамики веса контрольных (интактных) и получавших «Бурсанатал» животных не имели статистически достоверных различий.
Длительное скармливание «Бурсанатала» крысам и мышам не повлияло на гематологические показатели крови животных. Некоторые различия в формуле крови у контрольных и экспериментальных крыс не являются существенными, т.е. статистически недостоверны. Полученные гематологические показатели не выходят за границы норм, принятых для здоровых крыс.
2.7. Экспериментальное изучение специфической эффективности препарата иммуномодулирующего действия «Бурсанатал».
Объектом для проведения исследований являлись телята в возрасте от 20-25 дней. В подопытные группы включались нормотрофики и гипотрофики. Всего для проведения опытов было отобрано 20 телят нормотрофиков и 15 гипотрофиков. С учетом эпизоотической необходимости проведения вакцинации телят против хламидиоза схема применения препарата «Бурсанатал» включала трехкратный курс его введения нормотрофикам и гипотрофикам. При этом нормотрофикам и гипотрофикам иммуномодулятор вводили за 10 и 5 дней до вакцинации в дозе 0,025 мл/кг живой массы, подкожно. Соответственно, телятам контрольных групп (гипотрофикам и нормотрофикам ) вакцина применялась без иммуномодулятора.
Таблица 1 - Влияние препарата «Бурсанатал» на гематологические и иммунобиохимические показатели телят – нормотрофиков при вакцинации против хламидиоза.
| Показатели | Группы животных | |||
| Фон | Дни исследований | |||
| 7 | 14 | 28 | ||
| Эритроциты, 10/л | 9,58±1,04 9,46±0,88 | 9,32±0,76 10,85±0,92 | 9,18±0,45 11,94±0,56 | 9,21±0,37 11,05±0,68 |
| Гемоглобин, г/л | 99,75±17,54 98,64±6,35 | 98,56±6,95 106,58±7,44 | 98,52±5,94 105,1±6,08 | 99,14±6,02 104,85±5,94 |
| Лейкоциты, 109/л | 7,22±0,34 7,36±0,27 | 7,04±0,26 7,59±0,58 | 7,22±0,44 8,96±0,83 | 7,28±0,94 8,92±0,59 |
| Т-Лимфоциты, % | 22,3±2,9 23,6±3,1 | 25,6±3,2 33,7±3,3 | 27,2±2,9 34,8±3,7 | 28,1±2,5 35,6±4,1 |
| В-лимфоциты, % | 10,4±0,60 10,2±0,24 | 11,10±0,72 12,6±0,48 | 11,55±0,80 13,80±1,10 | 11,84±0,76 14,05±1,14 |
| Железо, ммоль/литр | 18,24±1,07 19,17±0,92 | 18,56±1,02 20,45±1,16 | 18,34±0,98 20,72±1,23 | 18,25±0,83 20,73±1,18 |
| Медь, ммоль/литр | 11,78±0,83 11,46±0,75 | 11,36±0,67 12,04±0,72 | 11,23±0,46 12,11±0,54 | 10,94±0,53 12,14±0,46 |
| Цинк, ммоль/литр | 10,26±0,37 10,73±0,84 | 10,14±0,26 10,86±0,73 | 10,15±0,23 10,82±0,56 | 10,28±0,56 10,86±0,62 |
Примечание: числитель-показатели у телят (n=10)контрольной группы; знаменатель-показатель у телят (n=10) опытной группы; p< 0,05
Полученные результаты исследования свидетельствуют о том, что введение препарата «Бурсанатал» телятам – нормотрофикам способствовало на 14 день повышению у них эритроцитов и составило 11,94±0,56,в сравнении с контрольной группой 9,18±0,45, уровня гемоглобина, в сравнении с контрольными животными на 5,6 %. Содержание лейкоцитов опытной группы составил 8,96±0,83 в сравнении с контрольной группой 7,22±0,44.
Количество Т-и В-лимфоцитов увеличивалось на 28 день наблюдения на 7,6 % и 2,3% соответственно. Отмечается повышение уровня железа, меди и цинка на 1,9 %,1,2%,0,6% соответственно, в сравнении с контрольной группой животных.
Исходя из полученных результатов следует, что применение препарата «Бурсанатал» в сочетании с вакцинацией телят против хламидиоза обеспечивает выраженную стимуляцию иммунобиохимических процессов, что является необходимым фоном для выработки специфических антител против хламидиоза крупного рогатого скота.
Таблица 2 - Влияние препарата «Бурсанатал» на выработку специфических антител при вакцинации телят-нормотрофиков против хламидиоза крупного рогатого скота
| Показатели | Фон, log2 | Дни исследований | ||
| На 7 сутки | На 14 сутки | На 28 сутки | ||
| Титр специфических антител против хламидиоза | 1:452±3,7 | 1:912±6,3 1: 1024±7,3 | 1:1874±7,6 1:1914 ±7,4 | 1:2822±8,7 1:3216±8,4 |
Примечание: числитель – показатели у телят (n=10) контрольной группы;
знаменатель – показатель у телят (n=10) опытной группы * p< 0,01
Серологические исследования показали, что специфические антитела против хламидиоза после иммунизации вакциной против хламидиоза телят-нормотрофиков в сочетании с препаратом «Бурсанатал» выявляются на 14 сутки и достигают максимальных титров к 28 дню.
Таким образом, было доказано, что с целью повышения качества иммунизации вакцину культуральную инактивированную против хламидиоза крупного рогатого скота целесообразно применять в комплексе с иммуностимулирующими средствами.
Установлено, что препарат «Бурсанатал» благоприятно влияет на гематологические и иммунобиохимические показатели телят-гипотрофиков при вакцинации против хламидиоза (табл.3). В опытной группе, по сравнению с контролем, в течение всего периода опыта происходило увеличение содержания эритроцитов, гемоглобина, лейкоцитов на 1,8%, 4,8%, 0,7% соответственно. За период опыта в крови телят экспериментальной группы повысилось содержание Т- и В –лимфоцитов, железа, меди и цинка.
Как видно из таблицы 4 все телята до введения препарата «Бурсанатал» имели низкий уровень гуморальных антител к хламидиозу – 1:396±3,2 log2. После введения указанного средства отмечали сероконверсию к указанному возбудителю. Среднестатистический титр антител на 28 день составил 1:3982±10,1 log2, что выше на 0,15+2,6 log2 соответственно (разница достоверна при р<0,05).
Таблица 3 - Влияние препарата «Бурсанатал» на гематологические и иммунобиохимические показатели телят-гипотрофиков при вакцинации против хламидиоза.
| Показатели | Группы животных | |||
| Фон | Дни исследований | |||
| 7 | 14 | 28 | ||
| Эритроциты, 10/л | 8,36±0,74 8,42±0,83 | 8,27±0,68 8,91±0,75 | 8,09±0,72 9,82±0,85 | 8,16±0,78 10,02±0,56 |
| Гемоглобин, г/л | 92,64±4,78 92,25±5,32 | 91,18±4,76 95,34±5,82 | 92,12±4,37 96,28±4,92 | 92,34±4,58 97,11±4,86 |
| Лейкоциты,109/л | 6,92±0,38 7,14±0,29 | 6,54±0,32 7,35±0,42 | 6,75±0,48 7,46±0,53 | 6,88±0,54 7,51±0,48 |
| Т-лимфоциты, % | 20,8±2,7 21,2±2,6 | 21,4±2,9 24,3±3,1 | 22,3±2,4 27,6±3,2 | 22,8±2,4 28,2±2,6 |
| В-лимфоциты, % | 9,54±0,37 9,46±0,33 | 9,68±0,42 10,38±0,54 | 9,72±0,56 10,65±0,43 | 9,85±0,68 11,02±0,84 |
| Железо, ммоль/литр | 15,42±1,98 15,38±1,79 | 15,27±1,63 15,42±1,56 | 15,45±1,48 15,78±1,62 | 15,39±1,32 15,83±1,27 |
| Медь, ммоль/литр | 9,75±0,64 9,82±0,56 | 9,32±0,46 9,94±0,53 | 9,28±0,36 10,02±0,45 | 9,54±0,38 10,08±0,52 |
| Цинк, ммоль/литр | 8,15±0,65 8,24±0,52 | 8,07±0,33 8,32±,056 | 8,05±0,39 8,43±0,41 | 8,11±026 8,45±0,49 |
Примечание: числитель – показатели у телят (n=10) контрольной группы;
знаменатель – показатель у телят (n=7) опытной группы p < 0,05
Таблица 4 -Влияние препарата «Бурсанатал» на выработку специфических антител при вакцинации телят-гипотрофиков
| Показатели | Фон | Дни исследований | ||
| На 7 сутки | На 14 сутки | На 28 сутки | ||
| Титр специфических антител против хламидиоза, log2 | 1:396±3,2 | 1:987±6,6 1:990±6,4 | 1:1671±6,2 1:2012±6,4 | 1:2455±7,5 1:3982±10,1 |
Примечание: числитель – показатели у телят (n=10)контрольной группы,
Знаменатель-показатель у телят (n=10) опытной группы, р < 0,01.
Исходя из полученных результатов следует, что применение препарата «Бурсанатал» в сочетании с вакцинацией телят против хламидиоза обеспечивает выраженную стимуляцию иммунобиохимических процессов, что является необходимым фоном для выработки специфических антител к хламидиозу. Именно этот аспект и представлялся весьма проблемным в условиях крупных животноводческих ферм и комплексов.
2.8. Эффективность применения «Бурсанатала» при вакцинации глубокостельных коров против хламидиоза
Объектом для проведения опытов служили глубокостельные коровы за 2 месяца до предполагаемого отела. Подопытные группы коров формировались следующим образом - в одну группу отбирались коровы с низким фоном содержания антител к хламидиозу, а в другую группу с высоким. Все отобранные животные подверглись двукратной вакцинации, с интервалом в 14 дней. При этом коровам опытных групп, дополнительно в дни вакцинаций вводился «Бурсанатал» в объеме 0,025 мл /кг, подкожно. Следует отметить, что при проведении биохимического исследования сыворотки крови у коров опытных и контрольных групп были выявлены весьма низкие фоновые показатели резервной щелочности и кальция (табл.5).
Таблица 5 -. Влияние вакцинации и иммуномодулятора «Бурсанатал» на динамику иммунных и обменных процессов у глубокостельных коров при низком фоновом уровне специфических антител к хламидиозу (р<0,05 – 0,01)
| Показатели | Фон | Через 14 дней | Через 28 дней | За 10-14 дней до отела |
| Титр специфических антител против хламидиоза, log2 | 1:142±2,9 | 1:487±8,7 | 1:1325±10,6 | 1:1652±12,3* |
| Т-лимфоциты, % | 38,96±2,32 | 43,60±2,14 | 46,84±2,72 | 45,90±2,78 |
| В-лимфоциты, % | 17,62±2,04 | 18,85±1,25 | 18,94±1,46 | 18,06±1,52 |
| Белок, г/л | 90,42±4,26 | 83,48±3,96 | 81,65±4,57 | 90,54±4,17 |
| Резервная щелочность, мг % | 37,18±3,65 | 42,24±4,85 | 49,68±5,18* | 43,71±4,7 |
| Неорганический фосфор,ммоль/л | 2,21±0,17 | 2,19±0,14 | 2,05±0,18 | 2,07±0,22 |
| Кальций,ммоль/л | 2,04±0,03 | 2,48±0,32 | 2,83±0,14* | 2,39±0,18 |
| Глюкоза,ммоль/л | 2,84±0,32 | 3,06±0,48 | 3,16±0,32* | 3,14±0,15 |
* р<0,05 – 0,01
Как известно, низкие показатели резервной щелочности свидетельствуют не только об ацидозном состоянии, но и являются своеобразным индикатором, указывающим на нарушение всех обменных процессов.
В этой связи вполне можно было предположить, что у коров этих групп развитие иммунодефицитного состояния происходит в результате нарушения всех видов обмена веществ.
Анализируя данные, представленные в таблице 6, установили, что у коров при низком фоновом уровне специфических антител к хламидиозу (1:142±2,9) после введения препарата «Бурсанатал» за 10-14 дней до отела повышался титр специфических антител к хламидиозу на 0,51±9,4 log2..Использование тканевого препарата способствовало увеличению Т- и В - лимфоцитов на 6,9 % и 0,4% соответственно. Содержание общего белка находилось на одном уровне. Резервная щелочность, кальций и глюкоза равномерно повышались на протяжении всего опыта. Содержание неорганического фосфора за 10 -14 дней до отела уменьшилось на 0,2%.
Таблица 6 - Влияние вакцинации на динамику иммунных и обменных процессов у глубокостельных коров с примененим препаратов «Бурсанатал» при высоком фоновом уровне специфических антител к хламидиозу
| Показатели | Фон | Спустя 14 дней | Спустя 28 дней | За 10-14 дней до отела |
| Титр специфических антител против хламидиоза,log2 | 1:513±3,9 | 1:922±4,7 | 1:1692±4,6 | 1:1788±3,9 |
| Т-лимфоциты, % | 38,72±2,14 | 39,68±2,24 | 40,26±3,12 | 40,18±2,96 |
| В-лимфоциты, % | 17,20±1,8 | 18,82±1,94 | 19,14±2,02 | 19,17±2,08 |
| Белок, г/л | 89,84±4,17 | 90,18±9,76 | 89,72±0,26 | 89,14±0,16 |
| Резервная щелочность, мг % | 37,84±3,42 | 38,14±3,96 | 38,88±3,56 | 39,28±3,15 |
| Неорганический фосфор, ммоль/л | 2,28±0,16 | 2,31±0,14 | 2,34±0,22 | 2,36±0,17 |
| Кальций, ммоль/л | 2,07±0,06 | 2,08±0,03 | 2,08±0,02 | 2,09±0,02 |
| Глюкоза, ммоль/л | 2,94±0,27 | 2,96±0,18 | 2,98±0,19 | 2,99±0,17 |
Полученные данные, представленные в таблице 6, показали, что у коров при высоком фоновом уровне специфических антител к хламидиозу (1:513±3,9) после применения препарата «Бурсанатал» за 10-14 дней до отела повышался титр специфических антител к хламидиозу на 0,27 log2. Наблюдалось увеличение Т- и В-лимфоцитов, белок находился на одном уровне, отмечалось увеличение резервной щелочности, неорганического фосфора, кальция и глюкозы.
На основании указанной серии опытов, мы убедились в правомерности высказанной нами концепции о необходимости стимуляции иммунометаболических процессов, как о важной составляющей в системе мероприятий по обеспечению здоровья коров в период прогнозируемого снижения резистентности организма вызванного стельностью и вакцинацией против хламидиоза.
3. ВЫВОДЫ
1. В неблагополучных сельскохозяйственных предприятиях Уральского региона по хламидиозу крупного рогатого скота регистрировались желудочно-кишечные заболевания 35%, острые респираторные заболевания 29,8%, урогенитальные заболевания 26,6%, артриты 33,2%, кератоконъюнкивиты 10%.
2. Наиболее восприимчивы к хламидиозу телята в трехнедельном возрасте (37,2%) и коровы на 7-9 месяце стельности - (29,6%). Заболевание протекает преимущественно в виде энзоотий, регистрируется чаще в зимне-весенний период, обладает стационарностью.
3.Хламидиоз крупного рогатого скота протекает в ассоциации с возбудителем вирусной диареей (26,9%), инфекционного ринотрахеита (31,2%), парагриппа-3 (24,6%).
4. Хламидиозный артрит у телят 12 – 60 дней в сельскохозяйственных предприятиях проявляется, как следствие урогенитальной формы хламидиоза коров.
5.Урогенитальный хламидиоз у коров проявляется в виде катарального воспаления эндометрия, отечностью плодных оболочек, поверхностным некрозом карункулов, катаральным воспалением эндометрия уретры, мочевого пузыря, гиперплазией и кровоизлияниями в регионарных лимфоузлах. Хламидиозному эндометриту(14,8%) у коров предшествуют в 7,9% случаев аборты, в 19,6% - патологические роды, в 29,8% - задержание последа, в 27,9% субинволюция матки.
6.Полученные экспериментальные данные показали, что препарат «Бурсанатал» не обладает острой токсичностью в отношении мышей и крыс, что позволяет отнести его к малотоксичным или относительно безвредным веществам.
7.Применение препарата «Бурсанатал» в дозе 0,025мл /кг живой массы в сочетании с вакцинацией телят –нормотрофиков и гипотрофиков против хламидиоза крупного рогатого скота обеспечивает выраженную стимуляцию иммунобиохимических процессов, что является необходимым фоном для выработки специфических антител против хламидиоза.
8.Серологические исследования сыворотки крови от телят нормотрофиков и гипотрофиков показали, что специфические антитела против хламидиоза после иммунизации вакциной против хламидиоза в сочетании с препаратом «Бурсанатал» выявляются на 14 сутки и достигают максимальных титров к 28 дню.
9.У коров при низком и высоком фоновом уровне специфических антител к хламидиозу после введения препарата «Бурсанатал» за 10-14 дней до отела повышался титр специфических антител к хламидиозу на 0,51 ±9,4 log2. и 0,27 log2., а также способствовало стимуляции иммунобиохимических процессов.
10.Иммунологическая эффективность инактивированной, культуральной вакцины против хламидиоза животных, изготовленной в ООО «Блиц», на фоне препарата «Бурсанатал» составляет 96,4%, без применения препарата - 91%.
11.Экономический эффект от применения вакцины в сочетании с препаратом «Бурсанатала» составил от 15,34 до 20,39 рублей на один рубль затрат.
4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
1.Разработаны рекомендации по комплексу оздоровительных мероприятий при хламидиозе крупного рогатого скота в сельскохозяйственных предприятиях Уральского региона.
2.Разработанные и внедренные в хозяйствах Свердловской, Челябинской областях и Удмуртской Республике научно-обоснованные рекомендации по профилактике хламидиоза с использованием иммуномодулирующего препарата «Бурсанатал» позволяют повысить продуктивность коров, сохранность телят.
3.Материалы диссертационной работы используются в научных целях, при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий со студентами по дисциплине «Эпизоотология» «Фармакология», по специальности «Ветеринария», «Зоотехния» и со слушателями курсов.
4. Экспериментальные данные по изучению иммуностимулирующего действия препарата «Бурсанатал» позволяют рекомендовать применение иммуномодуляторов при неспецифической иммунокоррекции и специфической профилактике против хламидиоза крупного рогатого скота.
5. Список работ, опубликованных по теме диссертации
1. Мильштейн И.М. Эпизоотологический мониторинг хламидиоза животных и птиц по Свердловской области / Мильштейн И.М.// Сборник научных статей» Молодежь и наука» - Екатеринбург,2011.-С.79-82
2.Петрова О.Г. Применение кормовой добавки Гумин-Эко для профилактики болезней легких инфекционной этиологии в Уральском Федеральном Округе /Петрова О.Г., Мильштейн И.М., Молокова А.В. Усевич В.М., Грачкова О.Ю.// Аграрный вестник Урала.- 2011.-№ 4(83).-С.41-43.
3.Петрова О.Г. Респираторные заболевания животных и птиц с учетом экологических особенностей территории /О.Г.Петрова, Н.А.Кольберг, Н.И.Искандерова, Д.А.Травникова, И.М.Мильштейн, А.В.Молокова, Е.А.Петров, С.А. Марковская, О.Ю.Грачкова //Монография.-Екатеринбург.-2012.-228 С.
4.Петрова О.Г. Распространение болезней легких инфекционной этиологии крупногорогатого скота и наносимый экономический ущерб / О.Г.Петрова, С.А.Марковская, И.М.Мильштейн // Агропродовольственная политика России.- 2012.-№ 4.-С.58-61.
5.Петрова О.Г. Эффективность специфической профилактики болезней легких инфекционной этиологии с использованием системы выращивания телят в условиях умеренно низких температур ущерб / О.Г.Петрова, С.А.Марковская, И.М.Мильштейн // Агропродовольственная политика России.- 2012.-№ 4.-С.61-64.
6.Кольберг Н.А. Иммунные стимуляторы в птицеводстве и животноводстве/Н.А.Кольберг,О.Г.Петрова,И.А.Рубинский,С.А.Марковская,И.М.Мильштейн,Е.А.Петров,Д.А.Травникова// Монография.-Екатеринбург.-2012.-228 С.195.
7.Мильштейн И.М. Хламидиоз сельскохозяйственных животных на территории Урала/И.М.Мильштейн, О.Г.Петрова//Агропродовольственная политика России.- 2012.-№ 10.-С.64-66.
8.Мильштейн И.М. Биологическая безопасность при острых респираторных заболеваниях крупного рогатого скота в сельскохозяйственных предприятиях Уральского экономического района в условиях ВТО /И.М.Мильштейн,О.Г.Петрова// Аграрное образование и наука.-2013.- №.1.-С3-5
9.Петрова О.Г.Технология животноводства и комплекс оздоровительных мероприятий при хламидиозе крупного рогатого скота в сельскохозяйственных предприятиях Челябинской области /О.Г.Петрова, И.М.Мильштейн, В.С.Карпов, А.С.Макаримов, Н.А.Кольберг//Методические рекомендации.-г. Екатеринбург.-2013.С.13.
На правах рукописи
МИЛЬШТЕЙН ИГОРЬ МАРКОВИЧ
фармакокоррекция имунного статуса коров и телят при специфической профилактике хламидиоза
06.02.03 – ветеринарная фармакология с токсикологией
06.02.02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени
кандидата ветеринарных наук
Екатеринбург 2013
____________________________________________________________________
Подписано в печать 22.11.2013. Формат 60х84 1/16
Усл. печ. л. 1,0 Бумага для множительных аппаратов. Печать офсетная.
Гарнитура Times New Roman. Объем 1 п.л. Заказ № 495/1 Тираж 101 экз.
____________________________________________________________________
Отпечатано в типографии ООО «Таймер»
620219, Екатеринбург, ул. Луначарского, 136
