Разработка неинъекционных лекарственных форм препарата тимодепрессин
На правах рукописи
Гудков Тимофей Александрович
Разработка неинъекционных лекарственных форм препарата тимодепрессин
15.00.01. - Технология лекарств и организация фармацевтического дела.
автореферат
диссертации на соискание учёной степени
кандидата фармацевтических наук
Москва - 2008
Работа выполнена в ГОУ ВПО Московская медицинская академия
имени И. М. Сеченова
Научный руководитель:
| доктор фармацевтических наук, профессор | Краснюк Иван Иванович |
Официальные оппоненты:
| доктор фармацевтических наук, профессор кандидат фармацевтических наук | Истранов Леонид Прокофьевич Каширин Дмитрий Михайлович |
Ведущая организация: Г У Российский Онкологический Научный Центр имени Н.Н.Блохина РАМН
Защита состоится: « » 2008 г. в 14-00 часов на заседании Диссертационного совета Д 208.040.09 при ГОУ ВПО Московская медицинская академия имени И.М. Сеченова (119019, Москва, Никитский бульвар, 13)
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Московской медицинской академии имени И.М. Сеченова (117998, г. Москва, Нахимовский пр. д. 49)
Автореферат разослан «____»___________2008 г.
Ученый секретарь
Диссертационного Совета Д.208.040.09,
доктор фармацевтических наук,
профессор Наталья Петровна Садчикова
Актуальность темы.
На сегодняшний день известен целый ряд лекарственных средств, относящихся к препаратам пептидной природы. Подавляющее число этих препаратов - это органопрепараты, источниками которых являются железы убойного скота (гонадотропин, инсулин, кортикотропин, тималин и пр.).
Однако, в последнее десятилетние на мировой фармацевтический рынок в массовом порядке выходят лекарственные средства, содержащие в качестве активных субстанций продукты биотехнологии и пептидного синтеза. Широкое использование большинства подобных препаратов ограничивается не только их высокой стоимостью, но и отсутствием для многих из них удобных для длительного применения вне стационара лекарственных форм. На отечественном фармацевтическом рынке находят отражение общемировые тенденции.
Предложенный в работе комплексный подход к решению задачи создания неинъекционных лекарственных форм оригинального иммуносупрессора тимодепрессина – ответ на потребность рынка в удобных лекарственных формах для данного препарата. Разработка спрея с тимодепрессином – частное решение задачи создания неинъекционной формы препарата, пригодной для использования как при стационарном, так и при амбулаторном лечении.
Впервые синтезированный в 1995 году, тимодепрессин (гамма-D-глутамил-D-триптофан) обладает выраженным иммуносупрессорным действием при минимальном для препаратов, подавляющих иммунный ответ, наборе противопоказаний и практически полном отсутствии побочных эффектов в терапевтическом интервале доз. В настоящее время тимодепрессин выпускается в ампулах по 1 мл 0,1% раствора для внутримышечного введения и во флаконах по 5 мл 0,1% раствора для интраназального введения. Показания к применению тимодепрессина включают в себя системные заболевания, имеющие хроническое течение (псориаз и др). Длительное использование инъекционных препаратов связано не только с явлениями дискомфорта, но и сопряжено с потенциальной опасностью инфицирования пациента в процессе инъекции. Для иммуносупрессоров риск инфицирования пациента критичен, т.к. применение препаратов данной группы само по себе повышает опасность развития инфекционных процессов у пациентов. Неинъекционные лекарственные формы тимодепрессина разрабатывались с учетом набора показаний к его применению и наличия схем, подразумевающих значительные колебания доз препарата в процессе лечения. Кроме того, в некоторых случаях, появляется возможность замены инъекций на энтеральные формы на ранних стадиях лечения.
Всё вышеизложенное определило цель и задачи настоящего исследования.
Цель исследования.
Целью данного исследования являлась разработка научно-обоснованных составов и технологии получения эффективных и стабильных неинъекционных лекарственных форм тимодепрессина с последующим созданием нормативных документов, регламентирующих их качество.
Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
Задачи исследования.
- Разработка составов и технологии новых, неинъекционных лекарственных форм препарата тимодепрессина.
- Проведение комплексного изучения и определения физико-химических и структурно-механических свойств разработанных лекарственных форм.
- Проведение биофармацевтических исследований с целью выбора оптимальной композиции.
- Изучение стабильности исследуемых лекарственных форм тимодепрессина, с целью определения условий и сроков хранения.
- Разработка и апробация методик анализа подлинности и количественного содержания тимодепрессина в различных лекарственных формах.
- Разработка методик анализа подлинности и количественного содержания вспомогательных веществ, используемых при изготовлении исследуемых форм.
- Внедрение полученных результатов в виде отдельных методик анализа, нормативных документов (регламентов, проектов ФСП) на исследуемые лекарственные формы.
Научная новизна.
- Впервые предложены энтеральные неинъекционные лекарственные формы: таблетки и суппозитории, содержащие лабильное лекарственное средство пептидной природы тимодепрессин.
- Изучены технологические аспекты получения указанных лекарственных форм, их стабильность при хранении. Сформулированы требования к показателям качества.
- Разработан состав спрея, содержащего тимодепрессин.
- Предложена технология его получения, получены данные по биологической активности и стабильности, разработан проект НД.
Практическая значимость.
Полученные результаты легли в основу фармакопейной статьи (ФС) на раствор для интраназального применения в форме спрея.
Осуществлен комплексный методологический подход, к созданию и изучению современных неинъекционных лекарственных форм; созданы удобные в применении и стабильные лекарственные формы, разработаны и унифицированы методики анализа при контроле их качества.
Внедрение в практику.
Разработанная ФСП на тимодепрессин спрей назальный дозированный утверждена ФГУ "Научный Центр Экспертизы средств медицинского применения". Препарат вводится в медицинскую практику.
Апробация работы.
Результаты исследований доложены на научно-практической конференции кафедры технологии лекарственных форм фармацевтического факультета ММА им. И.М. Сеченова (1 июня 2006 года); на конкурсе совместных научно-исследовательских работ преподавателей и обучаемых в ММА в номинации "Фармация" в рамках российского медицинского форума 2007.
Публикации по работе.
По результатам проведённых исследований опубликовано 8 печатных работ.
Структура и объем диссертации.
Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, четырех глав экспериментальных исследований, общих выводов, списка использованной литературы и приложений. Содержит 127 страниц машинописного текста, 26 таблиц, 21 рисунок и 5 фотографических снимков. Библиографический указатель включает 130 источников литературы, из которых 23 на иностранных языках. Приложение содержит проект ФСП на тимодепрессин спрей назальный дозированный, пояснительную записку и отчет об исследованиях стабильности препарата в процессе хранения.
Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с комплексной научной темой ГОУ ВПО Московская медицинская академия имени И.М. Сеченова Росздрава "Разработка современных технологий подготовки специалистов с высшим медицинским и фармацевтическим образованием на основе достижений медико-биологических исследований" (номер Государственной регистрации 01.2.00606352).
Положения, выносимые на защиту.
- Результаты комплексных исследований по разработке составов и технологий для спрея назального дозированного, таблеток и суппозиториев препарата тимодепрессин и их научному обоснованию.
- Разработанные показатели качества и методики контроля предложенных лекарственных форм.
- Результаты изучения стабильности при хранении спрея назального дозированного, таблеток и суппозиториев тимодепрессина.
Содержание работы.
Объекты и методы исследования.
Для исследований были использованы серии субстанций тимодепрессина (01022003, 01112003, R0604-015A, R0601006, и A008-209) по показателям качества соответствующие ФСП 42-0011-07.
Для разработки составов неинъекционных лекарственных форм с тимодепрессином и изучения их свойств были использованы вспомогательные вещества, разрешенные к медицинскому применению и отвечающие требованиям действующих нормативных документов. Вспомогательные вещества, использованные при разработке составов спреев: нипагин (ФС 42-1460-89), нипазол (ТУ 18-16-387-75), бензалкония хлорид раствор 50% (USP/NF, Ph.,Eur., BP), натрия ацетат (BP, Ph, Eur.), кислота борная (ФС 42-3683-98), спирт поливиниловый (ГОСТ 10779-79), NaКМЦ (ТУ 2231-066-50664923-2005). Вспомогательные вещества, использованные при разработке составов таблеток: лактоза (USP/NF, BP), pharmatose® DCL 11, 14, 15, 21, 22 (USP/NF, Ph.,Eur.,JP), крахмал (ГОСТ Р 51985–2002), ludipress® (USP/NF, Ph.,Eur.), колликут MAE 100P (USP/NF, Ph.,Eur.). Вспомогательные вещества, использованные при разработке составов суппозиториев: ПЭО 1500 и 400 (ТУ 2483-166-05757587-2000 с изм. 1), масло какао (ГФ Х), твердый жир типа (ФС 42-3466-97), ДМСО (ФС 42-2980-98), твин 80 (Ph Eur., ФС 42-2540-88).
Для достижения поставленной цели и решения задач использовали различные физические, физико-химические методы анализа. Определение посторонних примесей и количественного содержания тимодепрессина проводили методом обращённо-фазовой ВЭЖХ. В качестве хроматографической использовалась система “System Gold” Beckman Instruments Inc. U.S. c УФ детектором "Kratos Spectroflow 783", настроенным на длину волны 220 нм. Обработка данных - System Gold 5 (Beckman). Разделение проводилось на колонке с обращенной фазой Supelco LC-18 250x4.6. Фиксированный объём петлевого устройства ввода составлял 20 мкл. Содержание посторонних примесей в препарате, в процентах, оценивается по методу внутренней нормализации площадей как среднее из полученных хроматограмм испытуемого раствора. Методика количественного определения основана на использовании стандартных образцов.
Количественное и качественное определение тимодепрессина и консервантов (нипагина, нипазола или бензалкония хлорида) в назальном спрее, проводили методом ВЖХ. Методики определения тимодепрессина и бензалкония хлорида в составе спрея включены в проект ФСП.
Испытание на микробиологическую чистоту растворов спреев проводилось по ГФ XI, вып. 2, с. 193 изменение № 3.
При определении показателей качества таблеток, таких как растворение, распадаемость и прочность на истирание, были использованы методики ГФ XI.
Оценку качества суппозиториев по показателям: однородность массы, температуру плавления и время растворения для суппозиториев были использованы соответствующие методики ГФ XI.
Оценку стабильности разработанных лекарственных форм проводили согласно временной инструкции по проведению работ с целью определения сроков годности лекарственных средств на основе метода «ускоренного старения» при повышенной температуре (И-42-2-82).
Статистическую обработку результатов исследования и корреляционного анализа проводили с помощью пакета прикладных программ для персонального компьютера Statistica 6 и программ пакета Microsoft Office XP - Excel согласно ФС: «Статистическая обработка результатов химического эксперимента и биологических испытаний» (ГФ XI).
Разработка спрея с тимодепрессином.
Актуальность выпуска спрея тимодепрессина продиктована необходимостью применения поддерживающей терапии при лечении хронических аутоиммунных процессов.
В результате предварительно проведенных работ было получено несколько композиций, пригодных для использования в качестве спрея. Концентрация тимодепрессина в спрее (0,25%) была рассчитана с учетом объема дозы, выходящей из насоса-дозатора при однократном нажатии (100 мкл) и режима дозирования при поддерживающей терапии.
Для поддержания необходимой микробиологической чистоты в процессе хранения и дальнейшего использования после первого вскрытия, были предложены следующие консерванты: бензалкония хлорид, смесь нипазола и нипагина (составы: 1, 2, 3).
| Состав 1. Тимодепрессин 2,5 г Натрия хлорид 9,0 г Вода очищенная до 1000 мл | Состав 2. Тимодепрессин 2,5 г Бензалкония хлорид 0,1г Натрия хлорид 9,0 г Вода очищенная до 1000 мл | |
| Состав 3. Тимодепрессин 2,5г Нипагин и нипазол 1,0 г Натрия хлорид 9,0 г Вода очищенная до 1000 мл | Состав 4. Тимодепрессин 2,5 г Бензалкония хлорид 0,1г Буферного раствора до pH 6,5 Натрия хлорид 9,0 г Вода очищенная до 1000 мл | |
| Состав 5. Тимодепрессин 2,5 г Нипагин и нипазол 1,0 г Буферноый раствор до pH 6,5 Натрия хлорид 9,0 г Вода очищенная до 1000 мл | Состав 6. Тимодепрессин 2,5 г Бензалкония хлорид 0,1г NaКМЦ 10,0 г Натрия хлорид 9,0 г Буферный раствор до pH 6,5 Вода очищенная до 1000 мл | |
| Состав 7. Тимодепрессин 2,5 г Бензалкония хлорид 0,1г Поливиниловый спирта 15,0 г Натрия хлорид 9,0 г Буферный раствор до pH 6,5 Вода очищенная до 1000 мл | Состав буферного раствора (pH=6,5) Раствора натрия ацетата 2% 3 мл Раствор борной кислоты 1% 7 мл |
Поскольку для стабильности тимодепрессина существенное значение имеет показатель pH, то для стабилизации спрея было предложено использовать буферный раствор на основе натрия ацетата и борной кислоты, который готовили отдельно. pH контролировали потенциометрически. Специфика применения спрея при поддерживающей терапии требует пролонгации действия препарата. С этой целью были применены NaКМЦ и поливиниловый спирт (составы: 4, 5,6,7).
Образцы всех составов были проанализированы по следующим показателям: подлинность, посторонние примеси, количественное определение, однородность массы дозы, процент выхода содержимого упаковки, количество доз в упаковке.
В результате анализа всех образцов было установлено, что вспомогательные компоненты в составах спреев не дают побочных пиков на хроматограмме и не влияют на время удерживания тимодепрессина, которое составляет 8,0 ±0,5 мин. (табл. 1)
Результаты анализа образцов спрея по тесту «Однородность массы дозы» и «Процент выхода содержимого упаковки» свидетельствуют о том, что дозирующее устройство флаконов не обеспечивает требуемую однородность массы дозы, для составов, содержащих метилцеллюлозу и поливиниловый спирт. Выход содержимого упаковки этих составов составляет менее 80 %. Кроме того, использование ВМС в составе спреев при анализе методом ВЭЖХ, приводит к негативным воздействиям на хроматографическую систему и увеличивает износ колонки.
Таблица 1
ВЭЖХ анализ спреев с тимодепрессином
| № состава | серия | Время выхода пика TD | Площадь пика (мкВ x сек) | Содержание посторонних примесей % | Метрологические характеристики | ||
| мин. | Тимодепрессин | Сумма всех пиков | (P=95%, n=3) | ||||
| 1 | 11904 | 8,17 | 122,9102 | 123,4527 | 0,439 |  =0,41 S=0,0729 | |
| 12904 | 7,67 | 120,8758 | 121,4458 | 0,469 | Sx=0,0421 | ||
| 13904 | 8,11 | 124,2512 | 124,6636 | 0,331 | ±Dx= ±0,18 e=43,84 | ||
| 2 | 21904 | 7,52 | 120,8035 | 121,1163 | 0,258 |  =0,24 S=0,0256 | |
| 22904 | 7,93 | 122,6966 | 122,9549 | 0,210 | Sx=0,0148 | ||
| 23904 | 8,38 | 121,6954 | 121,9994 | 0,249 | ±Dx= ±0,06 e=26,59 | ||
| 3 | 31904 | 8,48 | 121,9310 | 123,9031 | 1,592 |  =1,64 S=0,0464 | |
| 32904 | 8,23 | 124,4322 | 126,5579 | 1,680 | Sx=0,0268 | ||
| 33904 | 7,61 | 120,7664 | 122,8066 | 1,661 | ±Dx= ±0,12 e=7,01 | ||
| 4 | 41904 | 8,37 | 120,3670 | 122,1443 | 1,455 |  =1,49 S=0,0331 | |
| 42904 | 8,43 | 124,5587 | 126,4374 | 1,486 | Sx=0,0191 | ||
| 43904 | 7,95 | 120,7579 | 122,6233 | 1,521 | ±Dx= ±0,08 e=5,53 | ||
| 5 | 51904 | 7,88 | 120,4789 | 122,5415 | 1,683 |  =1,77 S=0,0850 | |
| 52904 | 7,94 | 123,2922 | 125,6181 | 1,852 | Sx=0,0491 | ||
| 53904 | 7,80 | 123,0312 | 125,2714 | 1,788 | ±Dx= ±0,21 e=11,90 | ||
| 6 | 61904 | 7,69 | 124,2771 | 127,0766 | 2,203 |  =2,21 S=0,0216 | |
| 62904 | 8,10 | 123,7673 | 126,6015 | 2,239 | Sx=0,0125 | ||
| 63904 | 7,83 | 124,5205 | 127,3211 | 2,200 | ±Dx= ±0,05 e=2,42 | ||
| 7 | 71904 | 8,38 | 123,2920 | 125,9657 | 2,123 | `x=2,08 S=0,0494 | |
| 72904 | 8,44 | 120,8274 | 123,4075 | 2,091 | Sx=0,0285 | ||
| 73904 | 7,75 | 121,2800 | 123,7875 | 2,026 | ±Dx= ±0,12 e=5,90 | ||
Изучение стабильности спрея тимодепрессина.
Стабильность исследуемых составов была изучена в процессе хранения в течение двух лет при рекомендованных условиях хранения (сухое темное место, при температуре 4±2°С) и методом ускоренного старения при температуре 24±0,5°С в течение 276 суток, что соответствует 3 годам хранения при рекомендованных условиях.
Контроль показателей качества проводили через каждые 46 суток, что соответствовало 6 мес. хранения при рекомендуемой температуре 4±2°С. В процессе хранения образцы тимодепрессина контролировались по показателям предусмотренным проектами нормативных документов: подлинность, прозрачность, цветность, рН, однородность массы дозы, процент выхода содержимого упаковки, количество доз в упаковке, количественное содержание тимодепрессина и используемых консервантов, содержание посторонних примесей, а также микробиологическая чистота.
Образцы спрея тимодепрессина приобрели в процессе «естественного» и ускоренного хранения незначительное количество примесей (от 0,3% до 1,2%), показав хорошую стабильность (табл. 2). Также было отмечено, незначительное снижение количественного содержания тимодепрессина (в пределах 3,2% от исходного) во всех составах при двух режимах хранения.
Изменение содержания посторонних примесей в течение моделируемого срока годности препарата во всех образцах спрея укладывается в допустимые пределы (не более 3%) согласно ВФС 42-0011-0012-00 на интраназальный раствор тимодепрессина. Результаты представлены в табл. 2.
Таблица 2
Результаты изучения стабильности спреев тимодепрессина методом ВЭЖХ при +24 °C
| Состав № | Содержание тимодепрессина, мг | ||||||
| 0 мес. | 6 мес. | 12 мес. | 18 мес. | 24 мес. | 30 мес. | 36 мес. | |
| 1 | 2,582 | 2,575 | 2,564 | 2,560 | 2,549 | 2,528 | 2,511 |
| 2 | 2,650 | 2,660 | 2,645 | 2,640 | 2,620 | 2,618 | 2,606 |
| 3 | 2,456 | 2,445 | 2,422 | 2,418 | 2,404 | 2,397 | 2,396 |
| 4 | 2,521 | 2,512 | 2,509 | 2,489 | 2,475 | 2,462 | 2,447 |
| 5 | 2,658 | 2,641 | 2,622 | 2,620 | 2,596 | 2,590 | 2,573 |
| 6 | 2,493 | 2,488 | 2,480 | 2,456 | 2,441 | 2,421 | 2,420 |
| 7 | 2,543 | 2,538 | 2,516 | 2,500 | 2,489 | 2,474 | 2,464 |
| Посторонние примеси, % | |||||||
| 1 | 0,413 | 0,502 | 0,602 | 0,702 | 0,901 | 1,100 | 1,206 |
| 2 | 0,239 | 0,300 | 0,405 | 0,504 | 0,601 | 0,810 | 1,002 |
| 3 | 1,644 | 1,802 | 1,910 | 2,001 | 2,206 | 2,402 | 2,506 |
| 4 | 1,487 | 1,606 | 1,708 | 1,801 | 2,010 | 2,203 | 2,401 |
| 5 | 1,774 | 1,904 | 2,002 | 2,108 | 2,308 | 2,509 | 2,708 |
| 6 | 2,214 | 2,310 | 2,405 | 2,508 | 2,703 | 2,808 | 3,005 |
| 7 | 2,080 | 2,205 | 2,306 | 2,410 | 2,506 | 2,707 | 2,905 |
Коэффициент корреляция между содержанием тимодепрессина в образцах спреев при ускоренном хранении и при хранении в рекомендованных условиях составил от 0,9625 (для состава 2) до 0,9015 (для состава 7).
В ходе эксперимента было установлено, что существенного изменения содержания консервантов в препаратах не происходит, что свидетельствует о химической индифирентности их к препарату и хорошей антибактериальной активности.
Следует отметить также, незначительное (не более 0,5 единиц) увеличение значения рH в процессе хранения в составах без буферного раствора, что можно объяснить гидролитическими явлениями стекла. Несмотря на это, данный вид упаковки обеспечивает стабильность раствора в течение всего срока эксперимента. Однако, при использовании флаконов с щелочным стеклом не исключается возможность использования буферных растворов в составах с бензалкония хлоридом.
При определении микробиологической чистоты все образцы, содержащие консерванты, сохранили стерильность к концу срока ускоренного хранения. В образцах спрея без консервантов наблюдался рост КОЕ бактерий и грибов - более 100.
В процессе изучения и разработки технологии изготовления спрея с тимодепрессином (рис. 1) было установлено, что при одинаково высокой бактериостатической активности комбинаций нипагина с нипазолом и бензалкония хлорида лучшие технологические свойства последнего определяют его предпочтительное применение в качестве консерванта для спрея тимодепрессина, возможный срок хранения которого может составлять не менее 3-х лет при комнатной температуре (24 °C).
Рис. 1. Технологическая схема изготовления спрея тимодепрессина с консервантом бензалкония хлоридом (состав 2)
Разработка таблетированных лекарственных форм тимодепрессина.
Необходимость разработки таблетированных лекарственных форм обусловлена их широкой распространенностью и рядом преимуществ, существенных для лекарственных веществ пептидной природы, таких как удобство использования и стабильность.
В ходе исследования были изучены составы и свойства различных наполнителей, подобраны условия таблетирования. Установлено, что наиболее предпочтительным для тимодепрессина является таблетирование методом прямого прессования. В качестве наполнителей были использованы два типа веществ: крахмал (Windmill) и несколько типов гранулированной лактозы (DMV International и BASF Aktiengesellschaft). В качестве скользящего вспомогательного вещества было предложено использовать кальция стеарат. Были получены таблетки следующих составов:
| Состав 1 (г). Тимодепрессин 0,001 Кальция стеарат 0,0025 Крахмал до 0,25 | Состав 2 (г). Тимодепрессин 0,001 Кальция стеарат 0,0025 Лактоза до 0,25 | |
| Составы 3-7 (г). Тимодепрессин 0,001 Кальция стеарат 0,0025 Фарматоза DCL (11, 14, 15, 21, 22) до 0,25 | Состав 8 (г). Тимодепрессин 0,001 Кальция стеарат 0,0025 Лудипресс до 0,25 |
Для изучения свойств наполнителей и выбора оптимального состава прессуемых смесей были определены следующие показатели: угол естественного откоса, пристеночный угол, насыпная плотность и текучесть.
Поскольку наилучшие технологические показатели наблюдались для составов 1,3,4,5 и 8 (табл. 3) именно они были выбраны для таблетирования.
Полученные таблетки имели цельные края, гладкую и однородную поверхность без сколов и трещин.
Таблица 3
Технологические свойства прессуемых смесей
| Состав № | Наполнитель | Угол естественного откоса | Пристеночный угол | Насыпная плотность г/см3 | Текучесть г/мин |
| 1 | Крахмал | 22,35 | 13,02 | 0,634 | 5,728 |
| 2 | Лактоза | 37,12 | 22,41 | 0,675 | 4,132 |
| 3 | DCL-11 | 22,65 | 21,76 | 0,759 | 4,873 |
| 4 | DCL-14 | 19,28 | 25,21 | 0,659 | 4,853 |
| 5 | DCL-15 | 23,511 | 28,25 | 0,625 | 7,643 |
| 6 | DCL-21 | 41,310 | 53,57 | 0,849 | нет |
| 7 | DCL-22 | 28,41 | 27,79 | 0,777 | 10,273 |
| 8 | Лудипресс | 25,24 | 27,45 | 0,793 | 4,647 |
Все образцы таблеток были проанализированы по показателям: средняя масса, отклонения в массе отдельных таблеток, количественное содержание тимодепрессина в таблетке, однородность дозирования, растворение и распадаемость, прочность на истирание. Результаты эксперимента представлены в таблице № 4.
Таблица 4
Результаты определения показателей качества таблеток с тимодепрессин ом*
| Серия | Средняя масса, г | Отклонения в массе отдельных таблеток | Количественное содержание TD в таблетке, мг | Содержание посторонних примесей, % | Однородность дозирования | Растворение (% за 45 мин.) | Распадаемость (мин.) | Прочность на истирание, % |
| 110804 | 0,232 | 3 % | 0,924 | 0,834 | 6 % | 94 | 15 | 97,2 |
| 120804 | 0,231 | 6 % | 0,930 | 1,277 | 7 % | 95 | 15 | 97,1 |
| 130804 | 0,234 | 6 % | 0,934 | 2,634 | 6 % | 94 | 16 | 97,1 |
| 310804 | 0,255 | 2 % | 1,025 | 1,975 | 3 % | 98 | 15 | 99,4 |
| 320804 | 0,251 | 4 % | 1,004 | 0,711 | 5 % | 97 | 15 | 98,6 |
| 330804 | 0,247 | 4 % | 0,998 | 2,833 | 4 % | 99 | 14 | 98,8 |
| 410804 | 0,254 | 3 % | 1,019 | 2,455 | 5 % | 95 | 14 | 98,7 |
| 420804 | 0,242 | 2 % | 0,973 | 0,867 | 7 % | 96 | 13 | 98,5 |
| 430804 | 0,260 | 4 % | 1,049 | 2,661 | 6 % | 96 | 14 | 98,0 |
| 510804 | 0,244 | 2 % | 0,979 | 2,286 | 3 % | 97 | 13 | 97,8 |
| 520804 | 0,241 | 4 % | 0,964 | 2,330 | 3 % | 98 | 14 | 97,5 |
| 530804 | 0,246 | 5 % | 0,998 | 1,758 | 5 % | 95 | 13 | 99,2 |
| 810804 | 0,259 | 4 % | 1,030 | 0,462 | 4 % | 99 | 14 | 98,1 |
| 820804 | 0,250 | 3 % | 1,001 | 2,198 | 3 % | 98 | 14 | 98,5 |
| 830804 | 0,243 | 4 % | 0,979 | 2,242 | 4 % | 98 | 13 | 98,8 |
*Примечание. Первая цифра серии образца указывает номер исследуемого состава
В результате анализа всех образцов было установлено, что вспомогательные компоненты во всех составах не дают побочных пиков на хроматограмме и не влияют на время удерживания тимодепрессина, которое составляет 8,0 ± 0,5 мин; таблетки на основе гранулированной лактозы и с наполнителем лудипресс обладают лучшими физико-химическими показателями по сравнению с таблетками на основе крахмала. Таким образом, использование фарматозы DCL11,14, и 15, а также лудипресса в качестве наполнителя для прямого прессования (без увлажнения гранулята) является наиболее предпочтительным по сравнению с использованием крахмала.
Изучение стабильности таблеток тимодепрессина.
Образцы таблеток составов 3,4,5 и 8 хранили в термостате при tэ=24 ± 0,5°C в течение 184 сут. Расчетный срок годности при этом согласно инструкции составил 2 года при 4 ± 2°С. Периодичность контроля показателей качества составила 46 суток, что соответствовало 6 мес. хранения. В ходе эксперимента контролировались следующие показатели качества: средняя масса, отклонения в массе отдельных таблеток, количественное содержание тимодепрессина и посторонних примесей, однородность дозирования, растворение, распадаемость, прочность на истирание а также микробиологическая чистота. Таблетки всех составов хранили в пластиковых флаконах из полиэтилена высокого давления (Gerresheimer Boleslawiec S.A.). Результаты эксперимента представлены на рис. 2 и 3.
Полученные данные свидетельствуют, что таблетки на основе наполнителей: кукурузного крахмала, фарматозы ® DCL11,14, и 15, а также лудипресса выдержали испытание по ускоренному хранению, показав одинаково хорошую стабильность.
Следует отметить также линейный характер накопления примесей и уменьшения содержания тимодепрессина, а также высокую корреляцию между этими процессами (для состава 3 коэффициент корреляции равен -0,9708). Как и в спрее, эти данные свидетельствуют об адекватности метода ускоренного хранения.
Учитывая данные изучения показателей качества таблеток и результаты изучения стабильности наполнители Фарматозы ® DCL11, и 15, а также Лудипресс могут быть рекомендованы для производства таблеток с тимодепрессином, возможный срок годности которых может составлять не менее 2-х лет.
Суппозитории с тимодепрессином.
Целесообразность разработки ректальных лекарственных форм тимодепрессина продиктована необходимостью локализации всасывания его в прямой кишке, с целью предотвращения контакта с кишечными пептидазами, которые присутствуют в основном в двенадцатиперстной, тонкой и толстой кишке.
Для изучения технологических свойств суппозиториев, а также влияния физико-механических свойств (пластичности и др.) основы на стабильность и время растворения суппозиториев с тимодепрессином, были изготовлены суппозитории на основе полиэтиленоксидов с различными молекулярными массами (состав 1).
| Состав 1 (г). Тимодепрессин 0,001 ПЭО1500 0,948 ПЭО 400 0,237 Общая масса суппозитория 1,186 |
При изготовлении суппозиториев этого состава тимодепрессин растворяли в минимальном количестве воды. В ходе дальнейшего изучения составов, вода была заменена на ДМСО, в котором легко растворяется тимодепрессин. Кроме этого ДМСО в суппозиториях может быть использован в качестве консерванта и фармакологически активного компонента.
Суппозитории составов 1,2,3,4,6,7 были изготовлены на производственной площадке биотехнологической компании «Биокад». Розлив, фасовка суппозиториев осуществлялся на машине SARONG, Италия.
| Состав 2 (г). Тимодепрессин 0,001 ДМСО 0,090 ПЭО1500 1,559 Общая масса суппозитория 1,650 | Состав 3 (г). Тимодепрессин 0,001 ДМСО 0,090 ПЭО1500 1,403 ПЭО 400 0,156 Общая масса суппозитория 1,650 | |
| Состав 4 (г). Тимодепрессин 0,001 ДМСО 0,090 ПЭО1500 1,247 ПЭО 400 0,312 Общая масса суппозитория 1,650 | Состав 5 (г). Тимодепрессин 0,001 Масло какао 1,449 Общая масса суппозитория 1,450 | |
| Состав 6 (г). Тимодепрессин 0,001 Твин 80 0,0015 Тв. жир А 1,4475 Общая масса суппозитория 1,450 | Состав 7 (г). Тимодепрессин 0,001 ДМСО 0,090 Твин 80 0,0015 Тв. жир А 1,359 Общая масса суппозитория 1,450 |
Для изготовления суппозиториев на гидрофобной основе, были использованы масло какао и твердый жир тип А.
Поскольку явление полиморфизма масла какао исключает возможность расплавнение основы, суппозитории данного типа были изготовлены методом прессования (состав 5). Введение тимодепрессина (состав 6), предварительно растворенного в минимальном количестве воды, в твердый жир осуществлялась по типу эмульсии. Для стабилизации расплава был использован твин 80.
Для предотвращения контакта с водой, как и в случае с ПЭО основой было предложено использовать ДМСО, который образует эмульсию с основой. Для стабилизации расплава был использован Твин 80 (состав 7). Суппозитории на основе твердого жира составов 6 и 7 изготавливались методом выливания в формы.
Полученные суппозитории были проанализированы по показателям: время растворении, температура плавления, количественное содержание тимодепрессина и содержание посторонних примесей.
В табл. 5 приведены результатов анализа полученных суппозиториев по некоторым показателям качества.
Таблица 5
Оценка качества суппозиториев с тимодепрессином.
| № состава | Средняя масса | Время растворения. мин. | Температура плавления °C | Содержание TD мг |
| 1 | 1,189 | 25 | — | 1,081 |
| 2 | 1,64 | 27 | — | 1,037 |
| 3 | 1,65 | 25 | — | 1,023 |
| 4 | 1,63 | 21 | — | 0,994 |
| 5 | 1,43 | — | 34 | 1,076 |
| 6 | 1,43 | — | 36 | 0,992 |
| 7 | 1,44 | — | 35 | 1,057 |
Количественное определение суппозиториев проводили методом ВЭЖХ.
На рис. 4 представлена хроматограмма суппозитория с тимодепрессином из ПЭО1500:ПЭО400 (4:1). ПЭО различной молекулярной массы в условиях анализа дают побочный пик на 7,5 ± 0,5 мин, площадью менее 2% от площади всех пиков. На хроматограмме суппозиториев состава 2 (рис.5) ДМСО выходит со свободным объемом (5 мин).
Наличие компонентов основ в пробах суппозиториев с маслом какао не влияет на время удерживания тимодепрессина, которое составляет 8,0 ± 0,5 мин.
На хроматограмме (рис. 6) суппозиториев с тимодепрессином состава 5 видны 2 побочных пика. Первый выходит со свободным объемом (5 мин), второй на 7,0 ± 0,5 мин. Разрешение второго пика с пиком тимодепрессина R=1,2. Таким образом, можно заключить, что компоненты масла какао не мешают количественному определению тимодепрессина в данных суппозиториях, а сумма площадей пиков компонентов основы не превышает 35% от суммы всех детектируемых пиков.
На хроматограмме суппозиториев на основе твердого жира присутствует (рис. 7) пик на 6,0±0,5 мин, площадью не более 5 %. Пик, характеризующий ДМСО выходит со свободным объемом.
 |  |  |
| Рис. 2. Хроматограмма таблеток с TD состава 3, до закладки на хранение | Рис. 3. Хроматограмма таблеток с TD состава 3, эквивалентная хранению 2 года при температуре 4 ± 2°С | Рис. 4. Хроматограмма суппозиториев с TD состава1 |
 |  |  |
| Рис. 5. Хроматограмма суппозиториев с TD состава 2 | Рис. 6. Хроматограмма суппозиториев с TD состава 5 | Рис. 7 Хроматограмма суппозиториев с TD состава 7 |
Изучение стабильности суппозиториев тимодепрессина.
Образцы суппозиториев хранили в термостате при tэ=24 ± 0,5°C в течение 184 сут. Расчетный срок годности при этом согласно инструкции составил 2 года при +2-+6°C.Периодичность контроля показателей качества составила 46 суток, что соответствовало 6 мес. хранения. В ходе эксперимента контролировались следующие показатели качества: средняя масса и отклонения от нее, качественный и количественный состав, время растворения и температура плавления, микробиологическая чистота и внешний вид суппозиториев. Суппозитории составов 1,2,3,4,6 и 7 хранили в упаковках из алюминиевой фольги, суппозитории состава 5 в упаковке из парафинированной бумаги (рис. 8, 9).
 |  |
| Рис. 8. Хроматограмма суппозиториев с TD состава 7 эквивалентная хранению 2 года при температуре 4 ± 2°С | Рис. 9. Хроматограмма суппозиториев с TD состава 3 эквивалентная хранению 6 мес. при при температуре 4 ± 2°С |
Как следует из полученных данных, тимодепрессин в суппозиториях на основе ПЭО почти на 80 % разрушается к 70-м суткам с начала хранения. Подтверждением этого является увеличение пика, выходящего с мертвым объемом. Данное увеличение площади пика вызвано триптофаном или продуктами его деструкции, которые не удерживаются в используемой хроматографической системе. Глютаминовая кислота не дает выраженного пика, т.к. обладает незначительным поглощением по сравнению с триптофаном. Подтверждением вышесказанного является тот факт, что после 70-го дня хранения в образце суппозиториев роста площади пика, выходящего с мертвым объемом не значителен. В то же время, с увеличением длительности хранения на хроматограмме появляются множественные пики с различными (от 8,30 до 20 мин.) временами удерживания.
Суппозитории на гидрофобных основах выдержали испытание по ускоренному хранению. Содержание тимодепрессина и состав побочных продуктов практически не изменились за время эксперимента, что свидетельствует о стабильности данной лекарственной формы.
В ходе эксперимента было установлено, что жировые основы: масло какао и твердый жир тип А, наиболее оптимально подходит для изготовления суппозиториев с тимодепрессином, так как обеспечивает сохранность субстанции в течение как минимум 2-х лет. Однако, учитывая, что с технологической точки зрения метод прессования является более сложным, суппозитории на твердом жире изготовленные методом выливания в формы предпочтительны для промышленного производства.
Общие выводы.
- Разработаны составы и технология изготовления неинъекционных лекарственных форм тимодепрессина: спрей, таблетки и суппозитории.
- Проведен скрининг вспомогательных веществ исследуемых лекарственных форм и научно обоснован выбор вспомогательных веществ наиболее оптимальных с точки зрения технологии производства и стабильности тимодепрессина в различных лекарственных формах.
- Проведено комплексное изучение и определены физико-химические и структурно-механические свойства разработанных лекарственных форм тимодепрессина. Определены показатели качества спрея, таблеток и суппозиториев с тимодепрессином.
- Разработаны и апробированы методики анализа подлинности и количественного содержания тимодепрессина в различных лекарственных формах. Изучены и подобраны условия хроматографического определения тимодепрессина в прессованных таблетках, спрее, суппозиториях, грануляте.
- Разработаны и апробированы методики анализа подлинности и количественного содержания вспомогательных веществ, используемых при изготовлении исследуемых лекарственных форм.
- Изучена стабильность спрея, таблеток и суппозиториев с тимодепрессином, на основании чего предложены условия и сроки их хранения.
- Разработан проект фармакопейной статьи на спрей тимодепрессина 0,5% и 0,25% концентрации. Составлены таблицы стабильности.
По теме диссертации опубликованы следующие работы:
1. Гудков Т.А., Краснюк И.И., Полтавец Ю.И., Дейгин В.И. Разработка новых лекарственных форм препарата тимодепрессин // Тезисы докладов XI Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - Москва. - 2004.- С. 866.
2. Гудков Т.А., Краснюк И.И., Полтавец Ю.И., Дейгин В.И. Работка методик анализа тимодепрессина в лекарственных формах сложного состава // Тезисы докладов XI Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - Москва. - 2004.- С. 866.
3. Гудков Т.А., Краснюк И.И., Полтавец Ю.И., Дейгин В.И. Изучение стабильности тимодепрессина в новых интраназальных лекарственных формах // Тезисы докладов XII Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - Москва. - 2005.- С. 748.
4. Гудков Т.А., Краснюк И.И. Разработка состава суппозиториев с тимодепрессином и изучение их стабильности // Тезисы докладов Пятой международной научно-практической конференции «Здоровье и Образование в XXI веке». - Москва. - 2004.-С. 104.
5. Гудков Т.А., Краснюк И.И., Полтавец Ю.И., Дейгин В.И Разработка методик анализа тимодепрессина в новых лекарственных формах сложного состава.// Тезисы докладов Пятой международной научно-практической конференции «Здоровье и Образование в XXI веке». - Москва. - 2005.- С. 144.
6. Гудков Т.А., Краснюк И.И., Полтавец Ю.И., Дейгин В.И Разработка новой лекарственной формы препарата тимодепрессин: «Раствор для интраназального применения в форме спрея»// Разработка и исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции. – Пятигорск. -2005. - С. 203.
7. Короткий Н.Г., Шарова Н.М., Прокушева Т.В., Гудков Т.А. Применение тимодепрессина при органической склеродермии у детей // Клиническая дерматология и венерология. - М.: 2006; 4: С.81
8. Гудков Т.А., Краснюк И.И., Дейгин В.И. ВЭЖХ анализ лекарственных форм препарата тимодепрессин // Фармация. – 2007. - №2. – С.5-7.
Список сокращений.
TD - тимодепрессин
NaКМЦ – натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы
ВМС – высокомолекулярное соединение
ВЭЖХ – высокоэффективная жидкостная хроматография
ДМСО - диметилсульфоксид
ПЭО - полиэтиленоксид
