Морфологические изменения лимфоидных образований желудка при экспериментальном геморрагическом инсульте (экспериментально-морфологическое исследование)

На правах рукописи

УДК 611.33.611.428.615.838

Аль-Раяши Салим Нассир

Морфологические изменения лимфоидных образований желудка при экспериментальном геморрагическом инсульте

(экспериментально-морфологическое исследование)

специальность 14.00.02- анатомия человека

АВТОРЕФЕРАТ

Диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Москва-2006

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Московской медицинской академии имени И.М. Сеченова

научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Швецов Эдуард Владимирович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Лысов Павел Константинович

доктор медицинских наук, профессор Овченков Виктор Степанович

ведущая организация – Российский университет дружба народов

Защита состоится ‹ › 2006 г. в час. На заседании диссертационного совета Д. 208.040.01 при Московской медицинской академии имени И.М. Сеченова по адресу: 119992, Москва, ул. Трубецкая, д.8 стр.2.

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке Московской медицинской академии имени И.М. Сеченова (117998, Москва, Нахимовский проспект, д.49)

Автореферат разослан ‹ › 2006

Ученый секретарь диссертационного

совета, доктор медицинских наук,

профессор Варшавский Владимир Анатольевич

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы.

Желудок является одним из органов пищеварительной системы, который вступает в непосредственный контакт с многообразными чужеродными агентами, подвергаясь их антигенным воздействиям (микроорганизмы, продукты их жизнедеятельности, пищевые антигены и др.), (Петров Р. В., 1976; Bozsch J., 1984; Bienenstock I., Befus A. D., 1984; Сапин М. Р., 1987; Jhee M., Detzbaum M., 1992; Cebra J., 1994; Cooke J., 1994; David В. А., 1995; Гусейнов Т. С., 2001). Для защиты организма от воздействий этих агентов желудок фактически имеет двойную иммунную защиту - общую (тимус, селезенка, печень и др.) и местную (лимфоидные образования и их иммунокомпетентные клетки) (Сапин М. Р., 1987). Благодаря рециркуляции лимфоцитов (Hopkins J. et al., 1984) и нейрогормональной регуляции лимфоидные образования и иммунокомпетентные клетки желудка участвуют как в местных, так и в общих иммунных ответах. (Bienestock I., 1980, 1984; Логинов А. С., Царегородцева Т. М., Зотина М. М., 1986; Butcher F., 1986, 1993; Brandtzaeg P., 1992, 1995; Аяшенко В. А., 1995, 1997; Beagled. K., 1995; Хаитов Р. М., Пинегин Б. В., 1997; Судзиловский Ф. В., Вихрук Т. И., 2001). Лимфоидные образования желудка реагируют различными морфо-функциональными изменениями на воздействие внешних чужеродных агентов, а также на воздействие внутренних патологических нарушений.

В настоящее время остается не выясненным вопрос о реакции лимфоидных образований органов иммунной системы в целом и лимфоидных образований желудка, в частности, на геморрагический инсульт.

По данным Скворцовой В.П., Крыловой В.В. (2005), в настоящее время в мире около 9 миллионов человек страдают цереброваскулярными заболеваниями. Основное место среди них занимают инсульты, которые каждый год поражают от 5,6 до 6,6 миллионов человек и уносят 4,6 миллионов жизней. По сведениям вышеперечисленных авторов. Смертность от цереброваскулярных заболеваний находится на третьем месте после заболеваний сердца и опухолей и достигает в развитых странах 11-12 % (Bonita R., Beaglehole R., Asplund K., 1994). Многие миллионы людей становятся инвалидами. В России анализ данных показал, что заболеваемость инсультом среди лиц старше 25 лет составлял 3,48 (на 1000 человек). При этом в последние годы отмечается тенденция роста числа цереброваскулярных заболеваний, что позволяет рассматривать инсульты не только как медицинскую, но и как социальную проблему (Трушин В. Д., Густов А. В., 2000; Верещагин П. В., Варакин Ю. Я., 2001; Макарова А. Ю., 2001).

Геморрагический инсульт является наиболее тяжелым осложнением различных заболеваний сосудов головного мозга, гипертонической болезни, атеросклероза, артериальных и артериовенозных аневризм, васкулитов, заболеваний крови и др. Геморрагический инсульт может возникать в любом возрасте (Трушин В. Д., Густов Ф. В., 2000).

Многочисленные исследования показали, что в организме после инсульта выявлялись множественные морфологические, функциональные и нейрогормональные осложнения, а также нарушения в различных органах и системах организма. В частности, у желудка на фоне инсульта возникают гастро-пищеводные эрозии, геморрагический гастрит и желудочно-кишечные кровотечения ( Wijdicks E. F., Fulgham J. R., Batts k. P., 1994).

Однако, механизм реагирования лимфоидных образований желудка и их иммунокмопетентных клеток, на фоне геморрагического инсульта, а также их роль в развитии этих осложнений на морфологическом уровне не изучены.

Цель исследования

Целью исследования явилось морфометрические и гистотопографические исследование лимфоидных образований желудка при экспериментальном геморрагическом инсульте.

Задачи исследования:

1. Изучить гистотапографию лимфоидных образований желудка крыс при экспериментальном геморрагическом инсульте.
2. Изучить последовательности морфологических изменений лимфоидных образований в стенках желудка крыс при экспериментальном геморрагическом инсульте.
3. Изучить динамику изменения лимфоидных образований в стенках желудка крыс при экспериментальном геморрагическом инсульте.
4. Изучить цитоархитектонику и морфологические особенности лимфоидных образований желудка у крыс в условиях нормы.
5. Провести сравнительный анализ изменений, происходящих в лимфоидных образований желудка.

Научная новизна:

Впервые получены данные о влиянии геморрагического инсульта на

стенки желудка и на его лимфоидные образования.

Получены новые данные о динамике морфологических изменений

лимфоидных образований желудка при геморрагическом инсульте.

Обнаружена, что наибольше скопление клеток лимфоидного ряда расположены по малой кривизне, а также у кардиального и пилорического отделов желудка.

Выявлено, что наиболее выраженное изменение структуры слизистой оболочки желудка наблюдается у кардиального и пилорического его отделов.

Обнаружена различная степень выраженности клеток лимфоидного ряда в слизистой оболочки желудка, где в большей степени подвержены складки слизистой оболочки органа.

Выявлено возникновение разных клеточных реакций, при которых выделяются 2-е подгруппы животных, по-разному реагирующих на экспериментальное воздействие. 1-я подгруппа животных характеризуется накоплением в слизистой оболочке и подслизистой основе эозинофилов, вторая – нейтрофилов. Установлено усиление функциональной активности лимфоидных образований желудка при геморрагическом инсульте.

Научно-практическая значимость:

Результаты исследования микротопографии, цитоархитектоники, а также реагирования лимфоидных образований желудка при моделировании геморрагического инсульта дополняют знания по анатомии, морфологии, патанатомии, иммунологии, гастроэнтерологии, неврологии и могут быть использованы в последующих экспериментальных исследованиях.

Материалы работы позволяют рассмотреть представления о действии геморрагического инсульта на организмы, показывают о взаимосвязи морфологических изменений лимфоидных структур, в зависимости от сроков воздействия что важно для практической медицины.

Основные положения, выносимые на защиту:

Влияние геморрагического инсульта на лимфоидные образования

желудка.

Закономерности реакции лимфоидных образований желудка при

экспериментальном геморрагическом инсульте.

Динамика лимфоидных образований желудка при экспериментальном

геморрагическом инсульте.

Апробация материалов диссертации

Результаты работы доложены на совместных заседаниях кафедры нормальной анатомии человека Московской медицинской академии им. И.М. Сеченова и лаборатории функциональной анатомии ГУНИИ морфологии человека РАМН. По материалам диссертации опубликовано двух научные работы. Одна работа в центральной печати.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 247 страницах машинописного текста и включает: введение, обзор литературы, материал и методы исследования, результаты собственных исследований, обсуждение результатов собственных исследований, выводы, список литературы, включающего 185 источника, в том числе 102 отечественных и 80 иностранных.

Работа иллюстрирована 26 таблицами, 37 микрофотографиями, 28 диаграммами.

Настоящая работа является самостоятельной частью комплексного исследования о воздействие геморрагического инсульта на органы иммунной системы и лимфоидные образования организма.

Материалы и методы исследования

Материалом для исследования послужил желудок от 72 крыс самцов- линии Wistar весом 250 - 300 г (в возрасте 4-6 мес). Перед опытом крысы содержались 10 дней в клетках, по 10 особей в каждой, при свободном доступе к воде и пище. Исследования проводились в весеннее время года, чтобы исключить влияние сезонных колебаний гормонального статуса (Добровольский Г. А., 1982, 1984; Коимшиди О. А., 1983; Сапин М.Р. с соавт, 1986).

Выбор животных обусловлен устойчивостью крыс к стрессу. Индивидуально-типологические особенности и прогностическую оценку устойчивости крыс к стрессу определяли по их поведению в тесте (открытое поле) с помощью специальной компьютерной программы (Коплик Е. В., 2002). На основании полученных результатов крысы были разделены на три группы: 1- устойчивые к стрессу (поведенчески активные), 2- предрасположенные к стрессу (пассивные) и 3- средние (промежуточные). В работе использовались прогностически устойчивые животные. Эти крысы были разделены на интактные, контрольные и экспериментальные. Экспериментальные крысы были разделены на три группы в зависимости от срока проведении эксперимента (это - первые, третьи и седьмые сутки).

Через трое суток, после тестирования по поведенческим реакциям в открытом поле и реакции избегания освещенного пространства, на крысах экспериментальной группы был смоделирован геморрагической инсульт.

Наркоз осуществлялся путем внутрибрюшинного введения хлоралгидрата (400 мг/ кг), и затем животные помещались в стереотаксический аппарат. Температура тела (37С) поддерживалась с использованием управляемой обратной связью электрогрелки. Разрез кожи и подкожных тканей черепа проводился по средней линии. По стереотаксическим координатам: А-0,7 мм, L- 3 мм и Н- 6 мм (в области левого хвостатого ядра) делали отверстие в черепе (диаметром 0,5 мм) и вводили иглу 22-го размера с закруглённым концом, через которую вводили кровь в объеме 60 мкл для формирования гематомы. Забор этой крови производился из бедренной вены непосредственно перед ее введением в головной мозг. Особенность дальнейшего проведения операции заключалась в том, что перед введением крови в мозг на иглу было надето плотно прилегающее латексное кольцо, которое выполняло роль «пробки», препятствующей вытеканию крови по каналу вдоль иглы. Введение крови в области левого хвостатого ядра проводили в два этапа: в течение 7 минут вводили 20 мкл крови, затем через 10 минут еще - 40 мкл (в течение 10 минут). Через 5 минут медленно извлекалась канюля. Отверстие в черепе заделывали стоматологическим цементом, а кожу ушивали. Такой подход позволил создать приблизительно одинаковые размеры гематом у всех подопытных животных и ограничить выход крови по каналу вдоль иглы. Летальные исходы отсутствовали. Общий объем гематомы в перерасчете на человека составлял приблизительно 50-60 мкл, и по локализации они соответствовали кровоизлияниям, которые возникают в клинических условиях при разрыве лентикулостриарных артерий. В качестве контроля были использованы крысы, у которых проводилась ложная операция. Они проходили все стадии создания геморрагического инсульта без введения крови через иглу.

После этого животные забивались методом декапитации на первые, третьи и седьмые сутки. Животных вскрывали, желудок целиком извлекался, а затем выделялись его отделы. Материал фиксировался в 10% растворе формалина с последующей стандартной спиртовой проводкой и заливкой в парафин (Меркулов Г. А., 1961) Из парафиновых блоков готовились срезы толщиной 4-6 мкм, которые окрашивались гематоксилин-эозином и пикрофуксином по ван- Гизон для изучения изменений структуры органа. Для дифференцировки клеток использовали окраску срезов азур-2-эозином и метиловым зеленым пиронином по Браше. Подсчет клеток проводили на срезах, окрашенных азур-2- эозином. Метод окрашивания клеток метиловым зеленым пиронином по Браше использовался для выявления клеточных форм богатых нуклеиновыми кислотами, поэтому он использовался нами для более точной дифференцировки бластов, а также выявления степени зрелости и функциональной активности плазматических клеток.
Общие изучения картины стенок желудка проводили при помощи бинокулярной лупы МБИ—I методом точечного подсчета (Глаголев А. А., 1941) в модификации (Стефанова С. Б., 1974). Клеточный состав изучался с помощью микроскопа МБИ—3 при увеличении объектива (90) под масляной иммерсией по методу (Стефанова С.Б., 1974) с использованием двадцати пяти узловой морфометрической сетки (с шагом 10мкм ) вмонтированной в окуляр (10х) микроскопа. Клеточный состав исследовался в складках слизистой оболочки, а также в зонах расположенных между складками слизистой оболочки и подслизистой основы в кардиальном и пилорическом отделах желудка. Подсчет клеток проводили в стандартной площади среза (880 мкм) в 10 полях зрения. Подсчитывались следующие виды клеток:
ретикулярные клетки, бласты, большие лимфоциты, средние лимфоциты, малые лимфоциты, плазмобласты, плазмоциты, нейтрофилы (палочкаядерные и сегментоядерные), эозинофилы, макрофаги, клетки с фигурами митоза и деструктивно измененные клетки. Полученный цифровой материал подвергали статистической обработке включающей в себя подсчет среднеарифметических значений абсолютных и относительных величин (Х) и их ошибки (Sx) по формуле:

1. X= X1+….+Xn

X-математическое ожидание; n - Количество наблюдений;

X1+….+Xn – сумма результатов наблюдений.

2. Sx = n

Sx– шибка средней арифметической; б- среднеквадратичное отклонение; n – Количество наблюдений.

3) б = c/ n-1

с – дисперсия; n - Количество наблюдений.

Достоверность отличий средних величин оценивалась с помощью t- критерия Стьюдента (Лакин Г.Ф., 1990).

По этим данным были построены сводные таблицы и диаграммы.
Таким образом, выполненная нами статистическая обработка позволила провести анализ полученных экспериментальных данных.

Результаты исследования и их обсуждение.

Наши данные о локальных особенностях лимфоидных образований в стенках желудка крыс сходны с наблюдениями Колтонюк В.М., Болтрукевич С.И. (1968) и Степанова С.П. (1990), изучавшие лимфоидные скопления в стенках желудка у человека и собак. В частности у крыс, согласно нашим данным, выявлено, что наибольшее скопления лимфоидных образований располагаются в кардиальном и пилорическом отделах желудка.

выявленное нами наличие лимфоцитов в толще покровного эпителия, между железами и собственной пластинкой слизистой оболочки, согласуется с наблюдениям Аруина Л. И., Шаталовой О.Л. (1981); Успенской В.М. (1986); Степанова С.П. (1990); Гусейновой С.Т. (2005).

Результаты наших исследований показали наличие значительной перестройки клеточного состава в слое клеток лимфоидного ряда слизистой оболочки желудка, которая прослеживается на фоне глубоких микроциркуляторных расстройств в сосудистом русле при экспериментальном геморрагическом инсульте. Нарушения гемодинамики в наиболее важном звене кровеносной системы выражаются в склеивании эритроцитов, образовании «монетных» столбиков и конгломератов, прилипании эритроцитов к стенками сосудов, сепарации плазмы, приводящих к застойным явлениям в венулярном и артериолярном руслах. Аналогичные картины были описаны при воздействии гипокинезии на лимфатические узлы у обезьян (Григоренко Д. Е., 2005; Ерофеевой Л. М., 2005,2006). Нарушенное питание желудочной стенки приводит к изменениям структуры слизистой оболочки органа и цитоархитектоники лимфоидных структур. Наши экспериментальные данные показали, что реакция микроциркуляторного русла и слизистой оболочки в разных отделах желудка не одинакова. Тем не менее, в кардиальном и пилорическом отделах желудка отмечается некроз эпителиоцитов, приводящий к образованию микрокист. Так как гибель железистых клеток происходит в разных участках железы, возможно, что она обусловлена не только расстройствами микроциркуляции и нарушением гомеостаза, но и усилением цитотоксичности ряда лимфоцитов, которые, согласно литературным данным (Brown T. et al., 1983; Schorter T., Bahn R., 1984) приводят к деструкции тканей желудочно-кишечного тракта при его поражениях.

Сравнительный анализ слизистой оболочки отделов желудка интактных крыс, находившихся в эксперименте показал, что у контрольной группы животных структурные изменения сводятся к некоторому ускорению процессов десквамации клеток поверхностного эпителия. В процессе эксперимента с геморрагическим инсультом эти явления усиливаются, возникают небольшие очаги деструкции клеток, приводящие к обнажению подлежащих участков ткани на поверхности слизистой оболочки. Подобные изменения наблюдали Wijdicks E. F., Fulgham J. R., Batts K. P. (1994) у больных после инсульта, Колобов С.В. (2006) - при поражении органов пищеварении у больных инфарктом миокарда и Косько Е. В.(1982) при изучении воздействия стресса на слизистую оболочку желудка у крыс. Однако, эти авторы не касались вопросов изменений лимфоидных структур в слизистой оболочке желудка. Согласно нашим данным, эти процессы более выражены в области складок слизистой оболочки, по сравнению с участками расположенными между ними.

Мы обнаружили, что наиболее выраженные изменения по сравнению с контролем, происходят с клеточным составом слоя клеток лимфоидного ряда, находящихся в собственной пластинке слизистой оболочки, где уже на 1-е сутки после инсульта отмечается увеличение количества клеток лимфоидного ряда. Эти данные сходны с данными Гусейновой С.Т. (2005) при изучении воздействия бальнеологических факторов на лимфоидные образования желудка у крыс. На 3-и и 7-е сутки после геморрагического инсульта в подопытной группе крыс мы выделили 2-е подгруппы животных, у которых реактивные изменения в лимфоидном слое слизистой оболочки стали развиваться по разным направлениям: в 1-й подгруппе преобладают эозинофилы, а во
2-й подгруппе нейтрофилы.

Как показали наши исследования, в области складки у контрольных крыс слой клеток лимфоидного ряда характеризуется тем, что в кардиальном и пилорическом отделах желудка содержится на стандартную площадь среза 880 мкм (17,6 ± 0,71 и 21,9±0,52 клеток соответственно). При этом количество лимфоцитов в кардиальном отделе, по сравнению с пилорическим отделом, содержится меньше (соответственно - 5,4 и 6,7 клеток на стандартной площади среза 880 мкм). В процентном выражении это составляет в кардиальном отделе практически 23,9±1,96%, а в пилорическом - 29,6±3,94%. В 1-е сутки экспериментального воздействия отмечается увеличение количества лимфоцитов в кардиальном и пилорическом отделах до – 7,1 и 9,0 клеток соответственно. На 3-и сутки опыта количество лимфоцитов на стандартной площади среза 880 мкм лимфоидного слоя собственной пластинки зависит от особенностей ответной реакции животных на геморрагический инсульт. В 1-й подгруппе описанная выше закономерность продолжает сохраняться ( 7 клеток в кардиальном отделе и 14,6 клетки – в пилорическом, или соответственно - 27,00±3,92% и 49,8±9,68%). Во 2-й подгруппе животных содержание лимфоцитов в пилорической части желудка уменьшается, по сравнению с кардиальным отделом (9 клеток – в кардиальном и 6 клеток в - пилорическом отделах, или соответственно - 38,7±5,91% и 32,1±6,05%), что сохраняется и на 7-е сутки эксперимента. В 1-й подгруппе животных количество клеток в обоих отделах желудка на 7-е сутки опыта выравнивается (3 клетки - в кардиальном и 3,2 клетки – в пилорическом отделах). В процентном выражении разница между пилорическим и кардиальным отделом составляет 3,46%.

Плазматические клетки (плазмоциты и плазмобласты) в изучаемых отделах желудка также встречаются с разной регулярностью. У интактных животных в кардиальном отделе они практически не обнаруживаются, тогда как в пилорическом отделе они присутствуют в количестве 1,6 клетки на стандартной площади среза. После трепанации черепа количество плазматических клеток увеличивается - по 2 клетки в каждом отделе, сохраняя, таким образом, существующую пропорцию. В 1-е сутки геморрагического инсульта плазматические клетки в кардиальном отделе накапливаются в большем количестве и несколько превышают показатели пилорического отдела. Такая же картина сохраняется и на 3-и сутки опыта в 1-й подгруппе животных. Во 2-й подгруппе животных на 3-и сутки эксперимента количество плазматических клеток оказывается выше в пилорическом отделе (2,4 клетки в кардиальном отделе и 4 клетки – в пилорическом или 10,3±2,92% и 22,2±6,63%). Эта закономерность отмечается и на 7-е сутки эксперимента: в 1-й подгруппе плазматических клеток больше в кардиальном отделе, а во 2-й подгруппе – в пилорическом.

Эозинофилы постоянно встречаются в обоих отделах желудка крыс. У интактных животных они чаще встречаются в кардиальном отделе (0,6 клетки - в кардиальном отделе и 0,8 – в пилорическом, или соответственно - 4,07±0,92% и 2,91±1,06%). У контрольных крыс, а также в 1-е и 3-и сутки опыта у всех животных эта разница сглаживается. Только на 7-е сутки число эозинофилов начинает преобладать в пилорическом отделе желудка. Так, в 1-й подгруппе животных обнаруживается 4,8 клетки в кардиальном отделе и 5,8 клеток - в пилорическом, что составляет соответственно - 25,00±6,07% и 34,00±3,79%.

Нейтрофильные лейкоциты в стенке желудка интактных животных встречаются редко. В группе контрольных животных они в равных количествах увеличиваются в стенках кардиального и пилорического отделов желудка. В 1-е сутки геморрагического инсульта отмечается преобладание этих клеток в кардиальном отделе. Преобладают нейтрофилы в кардиальном отделе в обеих подгруппах и на 3 сутки эксперимента. Особенно это четко выражено во 2-й подгруппе, где в кардиальном отделе насчитывается 4,4 клетки, а в пилорическом – 1,6 (соответственно - 18,9±3,2% и 8,48±3,38%). На 7-е сутки опыта число плазматических клеток в обоих отделах уменьшается, но в кардиальном отделе они преобладают по-прежнему.

Между складками, как и в области складок, количественное содержание тех или иных клеток в кардиальном и пилорическом отделах желудка не одинаково. У интактных животных количество лимфоцитов выше в кардиальном отделе (5,4 клетки в кардиальном отделе и 3,6 клетки – в пилорическом). Однако число этих клеток среди присутствующих в лимфоидном слое клеток практически не различается и составляет около 25,5±4,1%. Контрольные исследования сопровождаются уменьшением содержания лимфоцитов в кардиальном отделе и повышением их количества в пилорической части желудка. При геморрагическом инсульте в 1-е сутки наблюдается противоположная реакция изучаемых отделов желудка: число лимфоцитов увеличивается в кардиальной его части (в 1,7 раза), а в пилорическом отделе остается на уровне нормы (9,3 клетки в кардиальном отделе и 3,6 клетки – в пилорическом). В то же время процентное содержание лимфоцитов оказывается выше в пилорической части (в кардиальном отделе – 37,5±5,87%, в пилорическом – 40,43±2,98%). На 3 сутки эксперимента в 1-й подгруппе животных происходит перераспределение лимфоцитов в стенках желудка крысы. В кардиальном отделе их число резко сокращается (в 2,3 раза), а в пилорическом – увеличивается вдвое. Однако в процентном выражении разница в содержании лимфоцитов не столь велика (соответственно - 23,72±3,49% и 26,42±3,87%). Во 2 подгруппе животных наблюдается иная динамика. По сравнению с интактными животными и контрольной группой у 2-й подгруппы животных в лимфоидном слое, расположенном между складками, происходит увеличение числа лимфоцитов, но их количество несколько превалирует в кардиальном отделе (11,6 клетки в кардиальном отделе и 9 клеток в пилорическом). На 7-е сутки эксперимента общее количество лимфоцитов в обеих подгруппах животных снижается. Но при этом в кардиальном отделе обе подгруппы содержат больше лимфоцитов как в абсолютном, так и в процентном выражении (в 1-й подгруппе: в кардиальном отделе – 8,8 клеток, в пилорическом – 4 клетки; во 2-й подгруппе: в кардиальном отделе – 6,4 клетки, в пилорическом – 4,8 клетки).

Плазматические клетки постоянно присутствуют в слизистой оболочке желудка, расположенной между складками. У интактных животных их количество выше в кардиальной части желудка (1,4 клетки в кардиальном отделе и 0,6 – в пилорическом). Разница в процентном их содержании невелика (соответственно - 6,73±1,11% и 4,81±%). В контроле их количество несколько увеличивается, а показатели в обоих отделах желудка становятся примерно одинаковым В 1-е сутки эксперимента число лимфоцитов лимфоидного слоя в кардиальном отделе желудка увеличивается в 2 раза, а в пилорической части - в 7 раз (в кардиальном отделе – 2,8 клетки, в пилорическом – 4,4 клетки). Несмотря на различные абсолютные показатели, процентное содержание клеток в кардиальном и пилорическом отделе оказывается одинаковым (в кардиальном отделе – 12,1±3,02%, в пилорическом – 12,1±2,9%). На 3-и сутки эксперимента реакция плазматических клеток на эксперимент с геморрагическом инсультом в 1-й и во 2-й подгруппах животных оказывается не одинаковой. В 1-й подгруппе количество этих клеток, по сравнению с 1-ми сутками опыта, не меняется, но их доли среди остальных клеток становится иным. Особенно это касается кардиального отдела желудка, где доля лимфоцитов увеличивается от 11,10±3,32% в 1-е сутки до 16,7±2,71% на 3-и сутки. В пилорическом отделе наблюдается тенденция к снижению этих клеток (от 16,0±2,77% до 14,9±3,16%). На 7-е сутки эксперимента в 1-й подгруппе животных отмечается значительное снижение числа плазматических клеток в кардиальном отделе желудка (2,8 клетки на 3-и сутки и 1,6 клетки на 7-е сутки). В пилорическом отделе в 1-й подгруппе животных количество этих клеток также снижается (от 4 на 3-и сутки до 2,8 на 7-е сутки). В процентном выражении доля плазматических клеток в кардиальном отделе уменьшается от 16,7±2,71% до 7,08±3,05%, а в пилорическом отделе остается на прежнем уровне (14,9±3,16% на 3-и сутки и 16,00±3,98% - на 7-е сутки). Во 2-й подгруппе животных на 3 сутки эксперимента количество плазматических клеток в кардиальном отделе желудка составляет 1,8 клетки на стандартной площади среза (или 7,65±2,49%), что значительно выше показателей пилорического отдела (0,8 клетки или 3,92±1,53%). На 7-е сутки опыта в кардиальном отделе количество плазматических клеток изменяется незначительно. В пилорическом отделе число этих клеток значительно увеличивается и превышает показатели кардиального отдела (3 клетки на стандартной площади среза или 14,52±3,79%).

Эозинофилы всегда присутствуют в слизистой оболочке желудка. При этом в кардиальной части они встречаются значительно реже и составляют 1,0 ± 0,49 клетки на стандартной площади среза (или 4,87 ± 2,45%). В пилорическом отделе доля этих клеток равна 6,61±1,3% (0,8±0,18 клетки на стандартной площади среза). У контрольных животных кличество этих клеток уменьшается в кардиальном отделе. В первые сутки эксперимента в кардиальном отделе отмечается тенденция к сокращению числа эозинофилов, а в пилорическом отделе к их увеличению. На 3-и сутки эксперимента разница в содержании эозинофилов в разных подгруппах животных становится особенно заметной. В 1-й подгруппе в кардиальном и пилорическом отделе число клеток выравнивается (по 4,4 клетки на стандартной площади среза). Однако их доля среди общего числа клеток существенным образом отличается. В кардиальном отделе она равна 26,41±6,85%, т.е. составляет четвертую часть клеток. В пилорическом отделе их доля равна 17,57±4,74%. Во 2-й подгруппе животных на 3-и сутки эксперимента, по сравнению с 1-ми сутками, в рассматриваемых участках желудка количество клеток практически не меняется. В процентном выражении во 2-й подгруппе животных содержание эозинофилов увеличивается от 7,73±1,37% до 13,5±3,98%. На 7-е сутки эксперимента в 1-й подгруппе животных количество эозинофилов в кардиальной части желудка изменяется незначительно в сторону уменьшения, а в пилорической – в сторону увеличения. Но в кардиальном отделе их доля среди общего количество клеток оказывается существенно сниженной (до 16,1±1,99%). В пилорическом отделе, наоборот доля эозинофилов значительно увеличивается и достигает 27,3±3,97%, т.е. составляет четвертую часть всех встречающихся в лимфоидном слое клеток. Во 2-й подгруппе в кардиальном отделе желудка число клеток несколько увеличивается, а в пилорическом отделе уменьшается. Это отражается и на процентном содержании этих клеток. В кардиальном отделе их доля составляет 9,71±3,91%, а в пилорическом – 2,22±1,22%.

Нейтрофилы в небольшом количестве присутствуют в слизистой оболочке обеих отделов желудка. В 1-е сутки эксперимента, а также в 1-й подгруппе животных на 3-и сутки эксперимента их количество существенно не меняется. Во 2-й подгруппе, начиная с 3-х суток, отмечается значительный рост числа этих клеток. В кардиальном отделе они составляют 9,28±2,52%, а в пилорическом – 3,18±2,09%. На 7-е сутки эксперимента в 1-й подгруппе животных количество нейтрофильных лейкоцитов увеличивается только в кардиальном отделе желудка (до 6,29±2,79% или 1,4 клетки на стандартной площади среза). Во 2-й подгруппе животных на 7-е сутки опыта число нейтрофилов в кардиальном отделе составляет 12,12±4,52% (2,6 клетки на стандартной площади среза), а в пилорическом – 14,7±2,97% (3 клетки).

Подслизистая основа также реагирует на экспериментально вызванный геморрагический инсульт. У интактных животных на стандартной площади среза в подслизистой основе в кардиальной части желудка насчитывается больше клеток, чем в пилорическом отделе (соответственно - 16,4 ± 0,61 и 9,2 ± 0,18 клетки). В процессе эксперимента число клеток меняется. В 1-е сутки эксперимента в кардиальном отделе их количество остается прежним, а в пилорическом отделе увеличивается почти до уровня кардиального отдела (15,2 ± 0,89 клетки на стандартной площади среза.). На 3-и сутки опыта в 1-е подгруппе животных в обоих отделах желудка число клеток возрастает почти в равных количествах (26,2 ± 1,0 клетки в кардиальном отделе и 23,2 ± 1,43 клетки – в пилорическом). Во 2-й подгруппе животных в кардиальном отделе количество клеток имеет тенденцию к увеличению, а в пилорическом отделе их количество снижается до 18,2 ± 0,91 клеток на стандартной площади среза. На 7-е сутки эксперимента у животных 1-й подгруппы в кардиальном отделе количество клеток незначительно увеличивается (28,6 ± 0,83), а в пилорическом отделе остается неизменным. Во 2-й подгруппе в кардиальном отделе сохраняется прежнее количество клеток (28,4 ± 2,01 клетки на стандартной площади среза). В пилорической части желудка увеличивается с 18,2 ± 0,91 клеток, насчитываемых на 3-и сутки, до 24,6 ± 1,0 клеток, приходящихся на 7-е сутки опыта. У интактных животных подслизистая основа обеих отделов желудка не содержит нейтрофилов. В ней изредка встречаются лимфоциты, которые чаще обнаруживаются в кардиальном отделе (2,2 клетки на стандартной площади среза или 12,7±4,4% от общего числа клеток). В пилорической части лимфоциты составляют 8,67±5,53% (или 1,2 клетки на стандартной площади среза). В процессе эксперимента количество лимфоцитов увеличивается. При этом кардиальная часть желудка всегда содержит большее количество лимфоцитов, чем пилорический отдел. Так, на 7-е сутки эксперимента в кардиальном отделе у животных 1-й подгруппы содержится 12,6 клеток на стандартной площади среза (43,72±4,72%), а у животных 2-й подгруппы – 11 клеток (38,64±3,43%).

В пилорическом отделе у животных 1-й подгруппы насчитывается 4,4 клетки (17,5±4,88%), а у животных 2-й подгруппы – 5,2 клетки (20,74±5,13%). Плазматические клетки в подслизистой основе у интактных животных встречаются редко. Они были обнаружены только в кардиальном отделе. В 1-е сутки эксперимента их количество увеличивается до 2 клеток на стандартной площади среза в кардиальном отделе желудка и 1,4 клетки в пилорическом отделе. Это составляет, соответственно - 11,9±2,13% и 9,09±3,52%. На 3-и сутки эксперимента число этих клеток в 1-й подгруппе животных в кардиальном отделе несколько увеличивается, но их доля среди общего числа клеток не меняется. В пилорической части желудка количество плазматических клеток значительно возрастает и превышает показатели кардиальной части (4,8 клетки на стандартной площади среза или 21,28±4,33%). В подслизистой основе животных 2-й подгруппы в обоих отделах желудка крысы содержание плазматических клеток менее выражено, по сравнению с животными 1-й подгруппы. На 3-и сутки эксперимента в лимфоидном слое кардиального отдела желудка насчитывается 2,4 клетки на стандартной площади среза (8,72±2,55%), а в пилорическом отделе - насчитываются 3 клетки (15,61±5,79%). На 7-е сутки в лимфоидных скоплениях подслизистой основы у животных 1-е подгруппы в кардиальном отделе отмечается прежнее количество клеток, как и на 3-и сутки опыта. В пилорическом отделе количество плазматических клеток уменьшается и практически сравнивается с показателями кардиального отдела (3,6 клетки на стандартной площади среза или 15,00±3,09%). У животных 2-й подгруппы количество плазматических клеток уменьшается в кардиальном отделе до 1,4 клетки на стандартной площади среза (11,51±2,84%), а в пилорической части желудка до 1,8 клетки (7,83±2,65%). Эозинофилы также в небольшом количестве встречаются в подслизистой основе интактных животных: в кардиальном отделе 0,2 ± 0,18 клетки на стандартной площади среза (1,05 ± 0,94%), в пилорическом отделе – 0,6 ± 0,36 клетки (6,22 ± 3,63%). В 1-е сутки эксперимента количество эозинофилов увеличивается, в результате чего количество этих клеток в обоих отделах сравнивается (1,2 ± 0,24 клетки или 7,22 ± 1,41% в кардиальном отделе и 1,1 ± 0,46 клетки или 8,95 ± 4,21% в пилорическом отделе). В большей степени увеличение числа этих клеток происходит на 3-и сутки опыта. В кардиальном отделе желудка у животных 1-й подгруппы их число составляет 3,4 ± 0,92 клетки на стандартной площади среза равной 880мкм (или 13,65 ± 3,94%), а в пилорическом отделе – 1,4 ± 0,46 клетки или 5,99 ± 1,96%. Во 2-й подгруппе животных эозинофилы встречаются реже, по сравнению с 1-й подгруппой: в кардиальном отделе 1,2 ± 0,18 клетки на стандартной площади среза (4,39 ± 0,89%), в пилорическом – 2 ± 0,75 клетки (10,61 ± 3,88%). На 7-е сутки эксперимента в кардиальном отделе у 1-й подгруппы животных количество эозинофилов на стандартной площади среза 880 мкм несколько снижается (2,8 ± 0,52 клетки или 9,8 ± 1,89%). В пилорическом отделе их количество, напротив, увеличивается (5,0 ± 0,75 клеток или 10,61±3,88%).

Нейтрофилы в подслизистой основе у интактных животных не встречаются. Они появляются в 1-е сутки эксперимента в кардиальной части желудка (0,7 клетки или 4,1± 1,4%). На 3-и сутки эксперимента в 1-й подгруппе животных их количество в кардиальном отделе не меняется, а в пилорической части они по-прежнему отсутствуют. Во 2-й подгруппе животных число нейтрофилов увеличивается в значительных размерах: в кардиальной части их количество равно 3,8 клеткам на стандартной площади среза, а в пилорическом отделе желудка – 0,8 клетки на стандартной площади среза (4,89±2,51%). На 7-е сутки опыта в кардиальном отделе 1-й подгруппы животных число нейтрофилов не меняется, по сравнению с 3-ми сутками эксперимента, а в пилорическом отделе они появляются в небольшом количестве (0,2 клетки на стандартной площади среза или 0,69±0,62%). Во 2-й подгруппе животных количество нейтрофилов в кардиальном отделе несколько снижается (2,4 клетки или 8,21±3,12%). В пилорическом отделе число этих клеток интенсивно нарастает и достигает максимальной величины, составляя 4,8 клетки на стандартной площади среза 880 мкм (19,2±3,11%).

Таким образом, как показали наши исследования, экспериментальный геморрагический инсульт вызывает серьезные нарушения в системе микроциркуляции в изучаемых отделах желудка крыс, а также изменения реологических свойств крови. Это приводит к развитию деструктивных процессов в стенках желудка. Они выражаются не только в нарушении целостности поверхности слизистой оболочки, но и в изменениях цитологического профиля защитной прослойки, представленной слоем лимфоидных элементов в собственной пластинке слизистой оболочки органа. Анализ полученных данных показал, что деструктивные процессы наиболее выражены и достигают своего максимума на 7-е сутки эксперимента во всех отделах желудка. В кардиальном и пилорическом отделах желудка крыс отмечается неодинаковая реакция слоя клеток лимфоидного ряда на экспериментальное воздействие. В слизистой оболочке кардиальной части желудка быстрее накапливаются такие клетки как лимфоциты и нейтрофилы. В пилорическом отделе несколько быстрее происходит образование плазматических клеток, здесь наблюдается небольшое преобладание числа эозинофилов. Отмечается неодинаковая реакция разных участков слизистой оболочки в обоих отделах органа. Область складок наиболее подвержена деструктивным изменениям, а между складками лучше выражены адаптивные процессы. Результаты исследования показали, что реакция у разных животных на экспериментальный геморрагический инсульт не одинакова. У одних животных в стенках желудка происходит накопление эозинофилов, у других – нейтрофильных лейкоцитов.

Выводы.

1. Экспериментально вызванный геморрагический инсульт у белых крыс приводит к структурным изменениям в слизистой оболочке желудка особенно в кардиальном и в пилорическом его отделах.
2. У желудка в большей степени подвержены изменениям складки слизистой оболочки органа у кардиального и у пилорического отделов. В слизистой оболочке, расположенной между складками, выявляется увеличенное число малодифференцированных и плазматических клеток, большое содержание макрофагов и малое количество нейтрофильных лейкоцитов.
3. При геморрагическом инсульте в собственной пластинке слизистой оболочки желудка определяется перестройка цитоархитектоники лимфоидных образований желудка. Животные по разному реагируют на экспериментальное воздействие. По характеру изменений в стенках желудка на 3-и сутки после геморрагического инсульта выделились две подгруппы животных, у которых, наряду с особенностями количества и расположения клеток лимфоидного ряда обнаруживаются, преимущественно, или эозинофильные лейкоциты (1-я подгруппа), или нейтрофильные лейкоциты (2-я подгруппа).
4. Изменения цитоархитектоники клеток лимфоидного ряда в слизистой оболочке кардиального и пилорического отделов желудка крыс зависят от сроков эксперимента и особенностей индивидуальной реакции животных. После 1-ых суток эксперимента отмечается увеличение количества лимфоцитов и плазматических клеток (у кардиального- в среднем от 5,4 до 7,1 лимфоцитов и от 2,2 до 3,0 плазматических клеток; у пилорического – от 6,7 до 9,0 лимфоцитов и от 1,6 до 2,3 плазматических клеток). Изменения содержания эозинофилов и нейтрофилов незначительны.
5. После 3-их суток эксперимента в стенках слизистой оболочки обоих отделов желудка количество лимфоцитов и плазматических клеток, по сравнению с их числом у животных после 1-ых суток, практически не изменяется. Количественные изменения эозинофилов и нейтрофилов в слизистой оболочке у кардиального отдела желудка увеличиваются - от 0,6 до 3,6 и от 0,5 до 4,4 (соответственно).
6. После 7-ых суток эксперимента в слизистой оболочке кардиального и пилорического отделов желудка, по сравнению с 3-ми сутками, количество лимфоцитов уменьшается в 2 раза, плазматических клеток в 1,5 раза. Количество нейтрофилов у пилорического отдела желудка уменьшается - от 0,4 до 0,1, а у кардиального - от 4,4 до 2,8. Количество эозинофилов увеличивается в 1,5 раза только лишь в области складок слизистой оболочки желудка у животных 1-й подгруппы.
7. Локальные изменения лимфоидных образований в слизистой оболочке разных отделов желудка выявляются уже после 1-ых суток эксперимента. В складках слизистой оболочки кардиального отдела желудка увеличивается абсолютное и относительное содержание малых лимфоцитов от 22,3% до 27,3 %, а также плазматических клеток и нейтрофилов. В пилорическом отделе желудка увеличивается число малых лимфоцитов от 19,6% до 29,72%, а количество эозинофилов и нейтрофилов увеличивается незначительно.
8. В слизистой оболочке расположенной между складками в кардиальном и пилорическом отделах желудка после 1-ых суток эксперимента количество малых лимфоцитов увеличивается от 18,5% до 26,2 % - у кардиального отдела и от 19,6% до 30,3 % - у пилорического. Количество плазматических клеток в слизистой оболочке обоих отделов желудка увеличивается после 1-ых суток эксперимента, а эозинофилов - после 3-их суток.
9. после 1-ых суток эксперимента отмечается увеличение числа лимфоцитов в подслизистой основе в обоих отделах желудка (в кардиальном отделе от 2,2 до 5,2; в пилорическом от 1,2 до 4,2). На 3-и сутки эксперимента в подслизистой основе кардиального отдела число лимфоцитов в 1-й и 2-й подгруппах экспериментальных животных увеличивается в 5 раз. В пилорическом отделе в 1-й подгруппе содержание лимфоцитов увеличивается в 8 раз, а во 2-й подгруппе – в 4,8 раза. В кардиальном отделе число плазматических клеток возрастает у животных 1-й и 2-й подгруппы в течении 7-и суток эксперимента, а в пилорическом – до 3-х суток, после чего их количество снижается. На 7-е сутки эксперимента в 1-й подгруппе животных в подслизистой основе кардиального отдела желудка плазматических клеток содержится в 1,5 раза больше, чем в пилорическом.
10. Геморрагический инсульт приводит к ускорению десквамации эпителиоцитов, появлению локальных очагов деструкции поверхностного эпителия желудка, сопровождающейся эрозией в слизистой оболочке и образованию кист в стенках желудка.

Список опубликованных работы по материалам диссертации:

1. Аль-Раяши Салим, Швецов Э.В., Коплик Е. В. Структурные изменения стенки желудка крыс при геморрагическом инсульте в первые сутки эксперимента.// Морфология. Санкт-петербург. (ЭСКУЛАП). 2006. Т.129. №. 4. С. 8.
2. Аль-Раяши Салим., Аминова Г.Г. Стенка пилорической части желудка и ее реакции на геморрагический инсульт в эксперименте. // РАМН. НИИ морфологии человека. Актуальные вопросы морфогенеза в норме и патологии. Сборник научных трудов. Москва. 2006. С. 118-119.