Иммунологические и молекулярно-биологические факторы персистирующего течения папилломавирусной инфекции
На правах рукописи
ЗОТОВА
Мария Александровна
ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ И МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ
ФАКТОРЫ ПЕРСИСТИРУЮЩЕГО ТЕЧЕНИЯ
ПАПИЛЛОМАВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ
14.03.09 – клиническая иммунология, аллергология
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени
кандидата биологических наук
Челябинск – 2011
Работа выполнена в Научно-исследовательском институте иммунологии Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».
Научный руководитель:
| доктор медицинских наук, профессор | Телешева Лариса Федоровна |
Официальные оппоненты:
| доктор биологических наук, профессор | Рябинин Вячеслав Евгеньевич |
| доктор биологических наук, профессор | Пряхин Евгений Александрович |
Ведущая организация: НИИ экологии и генетики микроорганизмов
УрО РАН, г.Пермь
Защита состоится «30» июня 2011 года в ______ часов на заседании диссертационного совета Д 208. 117. 03 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» по адресу: 454092, г. Челябинск, ул. Воровского, 64
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».
Автореферат разослан « » ___________ 2011г.
Ученый секретарь
диссертационного совета,
доктор медицинских наук Латюшина Л.С.
Общая характеристика работы
Актуальность исследования.
На сегодняшний день папилломавирусная инфекция (ПВИ) является актуальной социально-значимой проблемой. По данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) число инфицированных за последние десять лет увеличилось более чем в 10 раз, достигнув 23,5% [Белокриницкая Т.Е. и др., 2005; Козаченко В.П. и др., 2009]. Чрезвычайно важной представляется проблема ПВИ в связи с онкогенным потенциалом вируса папилломы человека (ВПЧ) высокого риска, который признан этиологическим агентом рака шейки матки (РШМ) [WHO, 2006]. Несмотря на высокую распространенность и онкогенный потенциал ВПЧ, высокий процент самопроизвольного регресса ПВИ свидетельствуют о том, что инфицирование является необходимым, но недостаточным условием для возникновения РШМ. По данным литературы, главным фактором риска развития неопластической патологии является персистенция онкогенных типов ВПЧ [Кузнецова Ю.Н. и др., 2009; Manavi M. et al., 2008; Castle P.E., 2009; Carcopino X. et al., 2011]. Считается, что канцерогенез является следствием “персистентных инфекций ВПЧ высокого риска” продолжительностью более 6 месяцев [Современные подходы…, 2009; Вакцины для профилактики…, 2011; Woodman C.B. et al., 2007; Koshiol J. et al., 2008; Bhat P. et al., 2011]. Тем не менее, понятие “персистирующая инфекция” – это только условное определение и не включает никакого функционального критерия, который бы опирался на молекулярные события, необходимые для развития канцерогенеза, вызванного ВПЧ. И хотя в настоящее время данный термин широко используется, крайне необходимо дифференцировать клинически значимые фазы течения инфекций ВПЧ высокого риска на основе молекулярных показателей [Doeberitz M. K., 2009].
Большую важность приобретают исследования, направленные на поиск вирусологических маркеров, ответственных за развитие персистирующего течения. В настоящее время, в качестве таких вирусологических факторов рассматриваются инфекция, вызванная онкогенными типами ВПЧ, а также несколькими типами вируса одновременно, высокая вирусная нагрузка, повышенная экспрессия онкобелков Е6 и Е7 ВПЧ, сверхэкспрессия циклин-зависимых киназ p16INK4a и другие [Мынбаев О.А. и др., 2009; Вакцины для профилактики…, 2011].
Клинические наблюдения, а также данные экспериментальных исследований свидетельствуют о ведущей роли иммунной системы в контроле возникновения, течения и исхода ПВИ [Баткаев Э.А., Рюмин Д.В., 2003, Роговская С.И., 2005; Stanley M., 2006]. Поскольку ВПЧ эпителиотропен, особо важное значение имеет состояние факторов местной защиты органов репродуктивного тракта. Несмотря на многочисленные исследования роли местного иммунитета в защите от ВПЧ, недостаточно изучены механизмы действия клеточных и гуморальных компонентов мукозального иммунитета на формирование персистенции данного вируса. Учитывая тот факт, что персистенция ВПЧ высокого риска является ключевым событием в малигнизации клеток, изучение факторов, инициирующих этот процесс, и, следовательно, способствующих реализации онкогенного потенциала ВПЧ определяет актуальность настоящего исследования.
Цель исследования
Установление иммунологических, молекулярно-биологических особенностей транзиторного и персистирующего течения папилломавирусной инфекции и выявление маркеров персистенции вируса папилломы человека высокого риска.
Задачи исследования
- Установить типы вируса папилломы человека высокого риска, ассоциированные с транзиторным и персистирующем течением папилломавирусной инфекции в репродуктивном тракте женщины.
- Определить показатели вирусной нагрузки вируса папилломы человека высокого риска при транзиторном и персистирующем течении папилломавирусной инфекции в репродуктивном тракте женщины.
- Изучить иммунологические показатели цервикальной слизи при транзиторном и персистирующем течении папилломавирусной инфекции в репродуктивном тракте женщины.
- Определить взаимосвязь между молекулярно-биологическими и иммунологическими показателями цервикальной слизи при транзиторном и персистирующем течении папилломавирусной инфекции в репродуктивном тракте женщины.
- Установить маркеры персистирующего течения папилломавирусной инфекции в репродуктивном тракте женщины.
Научная новизна
Впервые установлен широкий спектр генотипов ВПЧ высокого риска при транзиторном и персистирующем течении ПВИ длительностью 6 и 12 месяцев. Показано преобладание ВПЧ 16 типа независимо от течения и длительности ПВИ. Впервые установлено, что транзиторное течение ассоциировано с ВПЧ 52 типа и инфицированием 1 типом вируса. Персистирующее течение ПВИ характеризуется высокой частотой встречаемости микстинфекции ВПЧ высокого риска и моноинфекции ВПЧ 16 типа. Установлено, что при персистирующем течении ПВИ длительностью 12 месяцев в разном проценте случаев определяются 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 типы ВПЧ высокого риска, в то время как при транзиторном течении ПВИ не установлено случаев инфицирования 35 типом ВПЧ, при персистирующем течении ПВИ длительностью 6 месяцев – 39 и 58 типами ВПЧ.
Впервые проведена комплексная оценка иммунологических факторов цервикальной слизи в зависимости от длительности персистенции ВПЧ высокого риска. Выявлены общие закономерности изменений факторов местного иммунитета, сопровождающие наличие ВПЧ высокого риска в цервикальном канале обследованных женщин: снижение активности, интенсивности фагоцитоза и фагоцитарного числа нейтрофилов, увеличение активности лизосомальных ферментов нейтрофильных гранулоцитов и уровня ИЛ-2. Установлено, что персистирующее течение ПВИ длительностью 6 месяцев характеризуется снижением лизосомальной активности нейтрофилов и повышением концентрации IgG на фоне высоких уровней ИФН- и ИФН- в цервикальной слизи относительно транзиторного течения ПВИ. Персистирующее течение ПВИ длительностью 12 месяцев сопровождается снижением интенсивности фагоцитарных реакций нейтрофилов, дефицитом ИНФ- и повышенными концентрациями sIgA, IgA и IgМ в цервикальной слизи.
Впервые получены данные по показателям вирусной нагрузки в зависимости от длительности персистенции ВПЧ высокого риска. Установлено влияние вирусной нагрузки на факторы локального иммунитета репродуктивного тракта женщины, определяющее развитие и длительность персистирующего течения папилломавирусной инфекции в репродуктивном тракте женщины.
Впервые с помощью бинарной логистической регрессии определены маркеры риска развития и длительности персистирующего течения ПВИ.
Теоретическая и практическая и значимость
Полученные данные расширяют представление о роли генотипа, концентрации вируса папилломы человека высокого риска и факторов местного иммунитета цервикальной слизи в развитии и длительности персистирующего течения папилломавирусной инфекции в репродуктивном тракте женщины.
На основании комплексного молекулярно-биологического и иммунологического исследования оперделены основные маркеры, определяющие риск развития и длительность персистенции ВПЧ высокого риска в репродуктивном тракте женщины.
Положения, выносимые на защиту
- Транзиторное течение папилломавирусной инфекции в репродуктивном тракте женщины ассоциировано с вирусом папилломы человека 52 типа и инфицированием 1 генотипом вируса, персистирующее течение папилломавирусной инфекции характеризуется высокой частотой встречаемости микстинфекции вируса папилломы человека высокого риска и моноинфекции вируса папиллома человека 16 типа. Персистирующее течение папилломавирусной инфекции в репродуктивном тракте женщины сопровождается высокими концентрациями вируса папилломы человека высокого риска и преобладанием случаев вирусной нагрузки выше 5 lg на 105 клеток человека.
- Наличие вируса папилломы человека высокого риска в цервикальном эпителии характеризуется угнетением нейтрофильного звена местного иммунитета, в то время как развитие и длительность персистирующего течения папилломавирусной инфекции в репродуктивном тракте женщины определяется состоянием гуморального иммунитета и уровнем интерферонов в цервикальной слизи.
- Развитие персистирующего течения папилломавирусной инфекции в репродуктивном тракте женщины сопровождается изменением не только показателей вирусной нагрузки и местного иммунитета, но и взаимосвязей между ними.
- Выявленные особенности молекулярно-биологических факторов и иммунологических показателей цервикальной слизи позволяют определить маркеры риска развития и длительности персистирующего течения папилломавирусной инфекции в репродуктивном тракте женщины.
Внедрение результатов в практику
Результаты исследований внедрены в клиническую практику женской консультации МУЗ ГКБ № 2 г.Челябинска, в лабораторную диагностику НИИ иммунологии ГОУ ВПО ЧелГМА Росздрава, в педагогическую практику кафедры микробиологии, вирусологии, иммунологии и клинической лабораторной диагностики, кафедры акушерства и гинекологии № 2 ГОУ ВПО ЧелГМА Росздрава.
Апробация работы и публикации
Основные положения диссертации доложены, обсуждены и опубликованы на: VI Всероссийской научно-практической конференции «Генодиагностика инфекционных заболеваний» (Москва, 2007); VII итоговой научно-практической конференции молодых ученых Челябинской государственной медицинской академии (Челябинск, 2009); VII Российской конференции иммунологов Урала (Архангельск, 2009); Российской научной конференции «Персистенция микроорганизмов» (Оренбург, 2009); VIII Всероссийском форуме «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге - 2009» (Санкт-Петербург, 2009); II-ом Ежегодном конгрессе по инфекционным болезням (Москва, 2010); VIII Российской конференции иммунологов Урала (Сыктывкар, 2010); межрегиональном форуме «Актуальные вопросы аллергологии и иммунологии – междисциплинарные проблемы» (Санкт-Петербург, 2010); VII Всероссийской научно-практической конференции c международным участием «Молекулярная диагностика - 2010» (Москва, 2010); 4-ой Всероссийской конференции «Иммунология репродукции» (Пермь, 2010).
Публикации
По теме диссертации опубликовано 24 научные работы, в том числе 9 из перечня изданий, рекомендованных ВАК РФ.
Структура и объем диссертации
Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, 4-х глав собственных исследований, заключения, выводов и списка литературы, включающего работы 155 отечественных и 77 иностранных авторов. Диссертация изложена на 145 страницах компьютерного текста и включает 12 таблиц, 4 рисунка.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
Материалы и методы исследования
Для решения поставленных задач в период с 2008 по 2010 гг. на базе Центральной научно-исследовательской лаборатории и Научно-исследовательского института иммунологии Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия» было проведено обследование 152 женщин с наличием ВПЧ высокого риска в цервикальном канале, являющихся пациентками амбулаторно-поликлинического приема женской консультации МУЗ ГКБ № 2 г.Челябинска. Критериями включения пациенток в данное исследование являлись: папилломавирусная инфекция, подтвержденная методом ПЦР; возраст — от 18 до 45 лет; первая фаза менструального цикла. Критерии исключения: беременность; экcтрагенитальные заболевания в стадии декомпенсации; инфекционные заболевания в стадии обострения; хламидийная, цитомегаловирусная и герпетическая инфекции урогенительного тракта; опухолевая патология.
Для установления факта персистенции ВПЧ высокого риска всем женщинам проводили повторное ВПЧ-тестирование (выявление, дифференциация и количественное определение ВПЧ высокого риска) методом ПЦР через 6 и 12 месяцев после первичного обнаружения вируса. На основании полученных данных ретроспективно все пациентки были разделены на 3 группы: 1 группу составили 68 пациенток с отрицательными результатами ВПЧ-тестирования через 6 и 12 месяцев после первичного выявления ВПЧ высокого риска (транзиторное течение ПВИ), 2 группу – 32 женщины с персистирующим течением ПВИ, у которых вирус выявлялся через 6 месяцев и не выявлялся через 12 месяцев после первичного обследования (персистирующее течение ПВИ длительностью 6 месяцев), в 3 группу вошли 52 женщины с положительным ВПЧ-тестом через 6 и 12 месяцев после первичного обследования (персистирующее течение ПВИ длительностью 12 месяцев).
Контрольную группу составили 32 женщины без ВПЧ высокого риска, клинико-морфологических изменений на шейке матки и иной гинекологической патологии.
В группы с транзиторным и персистирующим течением ПВИ длительностью 6 и 12 месяцев вошли женщины с эктопией шейки матки, хроническим цервицитом и их сочетанием, цервикальной интраэпителиальной неоплазией (ЦИН) I степени и без клинико-морфологических изменений на шейке матки и иной гинекологической патологии. Диагноз выставлен акушерами-гинекологами женской консультаций МУЗ ГКБ № 2 на основании анамнестических, клинических и по показаниям кольпоскопического и морфологического методов исследования. Все пациентки с папилломавирусной инфекцией находились под наблюдением лечащего врача-гинеколога и по показаниям получали лечение в соответствии с установленной патологией. Средний возраст обследованных женщин составил 26,07±0,46 лет. Исследуемые группы были сопоставимы по возрасту и клиническим характеристикам.
Материалом для молекулярно-биологического исследования послужили соскобы эпителиальных клеток цервикального канала. Выявление и дифференциация ВПЧ высокого риска 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 типов проводили с помощью тест-системы «АмплиСенс® ВПЧ ВКР генотип-FL» производства ФГУН «ЦНИИЭ» Роспотребнадзора, г.Москва. Количественное определение ДНК ВПЧ высокого риска проводили с помощью тест-системы «АмплиСенс® ВПЧ ВКР скрин-титр-FL» производства ФГУН «ЦНИИЭ» Роспотребнадзора (г.Москва). Результаты концентрации ДНК ВПЧ выражались в lg (ВПЧ на 100 тыс. клеток человека) и оценивались следующим образом: вирусная нагрузка менее 3 – малозначимая, от 3 до 5 – значимая и более 5 – повышенная. Исследования проводили методом ПЦР в режиме реального времени на приборе «Rotor-Gene» 6000 («Corbett Research», Австралия).
Для оценки иммунологических показателей у женщин исследовались цервикальная слизь, в которой определяли:
- общее количество лейкоцитов, абсолютное и относительное содержание жизнеспособных нейтрофилов, показатели функциональной активности нейтрофилов с оценкой фагоцитарных реакций и содержания лизосом (Фрейдлин И.С., 1986), кислородозависимый метаболизм в НСТ тесте (Маянский А.Н., Виксман М.К., 1979).
- концентрации иммуноглобулинов A, M, G (IgA, IgM, IgG) определяли с помощью тест-систем ООО «Хема» (г.Москва), секреторного IgA (sIgA) - тест-систем ЗАО «Вектор-Бест» (г. Новосибирск) методом ИФА.
- определение уровней ИНФ-, ИНФ-, ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-8, ИЛ-10, РАИЛ-1, ФНО- проводили методом ИФА с использованием тест-систем ООО «Цитокин»(г. Санкт-Петербург).
Результаты оценивали с помощью пакетов «Statistica 6.0» и MedCalc 10.2.0.0 с вычислением средней арифметической и ее стандартной ошибки (М±m). Анализ количественных признаков производился с использованием непараметрического критерия Манна-Уитни. Оценка качественных показателей осуществлялась с помощью критерия 2 и точного критерия Фишера. Связь между исследуемыми показателями оценивали с помощью ранговой корреляции Спирмена. Для оценки диагностической эффективности молекулярно-биологических параметров и иммунологических показателей цервикальной слизи и построения математических моделей использовали бинарную логистическую регрессию. Во всех случаях различия, связи и зависимости считали статистически значимыми при р<0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Анализ частоты встречаемости генотипов ВПЧ высокого риска показал преобладание ВПЧ 16 типа как в группе с транзиторным течением ПВИ, так и в группах с персистирующим течением ПВИ длительностью 6 и 12 месяцев (табл.1). Полученные нами результаты согласуются с данными мировых исследований о высокой распространенности ВПЧ 16 типа в популяции [Евстигнеева Н.П., 2007; Видяева И.Г. и др., 2008; Современные подходы…, 2009; Munoz N. et al., 2004; Bosh F.X. et al., 2008]. При персистирующем течении ПВИ длительностью 6 месяцев наравне с ВПЧ 16 типа выявлялся ВПЧ 52 типа.
Характерной особенностью персистирующего течения ПВИ длительностью 12 месяцев было снижение частоты встречаемости ВПЧ 52 типа относительно как группы с транзиторным течением ПВИ, так и группы с персистирующим течением ПВИ длительностью 6 месяцев. Аналогичные результаты получены Е.А. Золотоверхой и соавт. (2007), в работе которой не было обнаружено ВПЧ 52 типа при персистирующем течении ПВИ. Вероятно, инфицирование 52 типом ВПЧ ассоциировано с элиминацией, либо с краткосрочной персистенцией ВПЧ высокого риска.
У женщин с персистирующим течением ПВИ длительностью 12 месяцев в разном проценте случаев встречались все 12 определяемых типов ВПЧ высокого риска, тогда как при транзиторном течении ПВИ не выявлялся ВПЧ 35 типа, при персистирующем течении ПВИ длительностью 6 месяцев – ВПЧ 39 и 58 типов.
Характеризуя частоту встречаемости количества типов ВПЧ высокого риска в исследуемых группах необходимо отметить, что при персистирующем течении ПВИ длительностью 6 и 12 месяцев достоверно чаще выявлялась микстинфекция ВПЧ высокого риска (инфицирование 2 и более генотипами вируса) по сравнению с транзиторным течением ПВИ (р=0,04 и р<0,001, соответственно). Наши данные согласуются с результатами других исследователей, которые в своих работах пришли к выводу, что инфицирование несколькими типами ВПЧ снижает скорость элиминации и обеспечивает менее благоприятный прогноз течения ПВИ [Евстигнеева Н.П., 2009; Современные подходы…, 2009].
Анализ частоты встречаемости типов ВПЧ высокого риска при моноинфекции (инфицирование 1 генотипом вируса) показал, что персистирующее течение ПВИ длительностью 6 месяцев характеризовалось высокой частотой встречаемости ВПЧ 51 типа по сравнению с транзиторным течением ПВИ (р=0,03). При персистирующем течении ПВИ длительностью 12 месяцев отмечена наиболее высокая частота инфицированности моноинфекцией ВПЧ 16 типа относительно групп с транзиторным и персистирующим течением ПВИ длительностью 6 месяцев (р<0,001 и р=0,004, соответственно).
Таблица 1
Распределение генотипов ВПЧ высокого риска у женщин с транзиторным и персистирующим течением папилломавирусной инфекции
| Тип | Стат. показатели | Группа 1 | Группа 2 | Группа 3 |
| Транзиторное течение ПВИ, n=96 | Персистирующее течение ПВИ, 6 месяцев, n=54 | Персистирующее течение ПВИ, 12 месяцев, n=112 | ||
| 16 | n | 22 | 10 | 28 |
| % | 23,4 | 18,5 | 25 | |
| 18 | n | 4 | 6 | 6 |
| % | 4,3 | 11,2 | 5,4 | |
| 31 | n | 8 | 8 | 14 |
| % | 8,5 | 14,8 | 12,5 | |
| 33 | n | 8 | 4 | 6 |
| % | 8,5 | 7,4 | 5,4 | |
| 35 | n | 0 | 2 | 6 |
| % | 0 | 3,7 | 5,4 | |
| 39 | n | 8 | 0 | 12 |
| % | 8,5 | 0 | 10,7 | |
| 45 | n | 4 | 2 | 10 |
| % | 2,1 | 3,7 | 8,9 | |
| 51 | n | 8 | 8 | 8 |
| % | 8,5 | 14,8 | 7,1 | |
| 52 | n | 16 | 10 | 8 р1-3=0,03 р2-3=0,03 |
| % | 17,0 | 18,5 | 7,1 | |
| 56 | n | 8 | 2 | 6 |
| % | 8,5 | 3,7 | 5,4 | |
| 58 | n | 8 | 0 | 4 |
| % | 8,5 | 0 | 3,6 | |
| 59 | n | 2 | 2 | 4 |
| % | 2,1 | 3,7 | 3,6 |
Примечание:
n - количество типоспецифических сигналов,
р1-3 - достоверные отличия показателей группы с персистирующим течением ПВИ длительностью 12 месяцев от показателей группы с транзиторным течением ПВИ,
р2-3 - достоверные отличия показателей группы с персистирующим течением ПВИ длительностью 12 месяцев от показателей группы с персистирующим течением ПВИ длительностью 6 месяцев.
По данным литературы, моноинфекция ВПЧ, в особенности высокоагрессивного 16 типа, является неблагоприятным прогностическим фактором течения инфекционного процесса [Евстигнеева Л.А., 2008; Yamada T. et al., 1997; Nielsen A. et al., 2010]. Отраженное в некоторых работах предположение о повышенном риске развития персистенции в случае инфицирования ВПЧ 16 типа нашло подтверждение в нашей работе.
Интересно отметить, что при персистирующем течении ПВИ длительностью 12 месяцев в виде моноинфекции выявлялось только 4 генотипа ВПЧ - 16, 31, 33 и 58 типы. Учитывая, что большая часть определяемых нами типов ВПЧ персистировали в кооперации, можно предположить, что способность к персистенции одного типа должна определяться его наиболее мощными функциональными особенностями, позволяющими выработать высокую степень адаптации к иммунной системе организма-хозяина.
Характеризуя типовой состав микстинфекции ВПЧ высокого риска, установлено, что особенностью персистирующего течения ПВИ длительностью 12 месяцев была низкая частота встречаемости ВПЧ 52 типа по сравнению транзиторным и персистирующим течением ПВИ длительностью 6 месяцев (р=0,02 и р=0,02, соответственно). ВПЧ 18 типа во всех исследуемых группах обнаруживался только в кооперации с другими генотипами ВПЧ высокого риска.
Изучение биологических особенностей транзиторного и персистирующего течения ПВИ в нашем исследовании показало, что лидирующую позицию независимо от исхода ПВИ занимал ВПЧ 16 типа. При этом транзиторное течение было ассоциировано с ВПЧ 52 типа и инфицированием 1 генотипом вируса, в то время как персистирующее течение ПВИ характеризовалось высокой частотой встречаемости микстинфекции ВПЧ высокого риска и моноинфекции ВПЧ 16 типа. В то же время, в большинстве случаев, как при транзиторном, так и при персистирующем течении ПВИ, определялись одни и те же генотипы вируса. Вероятно, для понимания этого факта необходимо более детальное изучение каждого генотипа вируса, так как в некоторых исследованиях показано, что разные внутритиповые варианты ВПЧ, определяемые на основании генетического полиморфизма, различаются по своей способности вызывать персистирующую инфекцию [Xi L.F. et al., 1995; Villa L.L. et al., 2000; Gagnon S. et al., 2004].
Таким образом, молекулярное генотипирование ВПЧ высокого риска является эффективным методом установления факта персистенции вируса, что имеет большое практическое значение для своевременного предотвращения прогрессирования патологических изменений цервикального эпителия и развития необратимой неопластической трансформации.
Тем не менее, только тип вируса не является определяющим в развитии персистенции, и существуют другие факторы, влияющие на исход ПВИ. В качестве одного из них рассматривается вирусная нагрузка ВПЧ высокого риска [Stanley M., 2003; Song S.H. et al., 2006]. Исследование показателей вирусной нагрузки ВПЧ высокого риска в изучаемых группах женщин показало, что средняя концентрация вируса при транзиторном течении ПВИ была 3,26±0,32 lg ВПЧ на 105 клеток, что сочеталось с преобладанием в этой группе случаев малозначимой нагрузки (41,2%). У женщин с персистирующим течением ПВИ длительностью 6 месяцев средний показатель вирусной нагрузки был достоверно выше (5,64±0,22 lg ВПЧ на 105 клеток, р<0,001), а повышенная вирусная нагрузка встречалась чаще, чем в группе с транзиторным течением ПВИ (р<0,001). При этом малозначимая вирусная нагрузка в данной группе не обнаружена. При персистирующем течении ПВИ длительностью 12 месяцев средняя концентрация вирусной ДНК определялась на уровне 4,28±0,33 lg ВПЧ на 105 клеток, что выше по сравнению с группой транзиторного течения ПВИ (р=0,04), но ниже относительно персистирующего течения ПВИ длительностью 6 месяцев (р=0,001). При этом преобладала вирусная нагрузка от 3 до 5 lg ВПЧ на 105 клеток, а частота встречаемости повышенной снижалась по сравнению с персистирующим течением ПВИ длительностью 6 месяцев (р<0,001). Полученные результаты свидетельствуют о том, что высокая вирусная нагрузка может способствовать персистенции вируса, но не всегда является признаком неблагоприятного исхода ПВИ. В нашем исследовании в группе с персистирующим течением ПВИ длительностью 6 месяцев, несмотря на повышенную вирусную нагрузку ВПЧ высокого риска у пациенток в итоге произошла элиминация вируса, но для этого потребовалось больше времени по сравнению с группой транзиторного течения ПВИ.
Особенности жизненного цикла ВПЧ определяют ведущую роль факторов локального иммунитета в процессах инфицирования и, самое главное, вероятности последующего развития заболевания (элиминация или персистенция ВПЧ) [Современные подходы…, 2009; Stanley M., 2009; Bhat P. et al., 2011]. При изучении иммунологических показателей цервикальной слизи установлены однонаправленные изменения функциональной активности нейтрофилов как в группе с транзиторным, так и в группах с персистирующим течением ПВИ длительностью 6 и 12 месяцев, характеризующиеся достоверным снижением активности, интенсивности фагоцитоза и фагоцитарного числа нейтрофилов, увеличением их лизосомальной активности (табл. 2). Выявленные нами изменения фагоцитарной реакции нейтрофилов отражают нарушение их поглотительной и переваривающей способностей, а также неэффективность внутриклеточной киллерной функции при ПВИ. В то же время, высокое содержание лизосомальных энзимов свидетельствует об активности и способности нейтрофилов к реализации кислороднезависимой биоцидности, направленной на уничтожение вируса [Цыганкова О.В., 2009].
Таблица 2
Количество и функциональная активность нейтрофилов цервикальной слизи у обследованных женщин, М ± m
| Показатели | Группа контроля, n=32 | Группа 1 | Группа 2 | Группа 3 |
| Транзиторное течение ПВИ, n=68 | Персистирующее течение ПВИ, 6 месяцев, n=32 | Персистирующее течение ПВИ, 12 месяцев, n=52 | ||
| Общее количество лейкоцитов,109 /л | 7,41±0,89 | 18,27±2,54 р=0,001 | 11,46±1,93 | 16,88±2,52 р=0,002 |
| Количество жизнеспособных нейтрофилов, % | 39,81±2,89 | 40,65±2,82 | 38,27±2,27 | 35,89±3,38 |
| Количество Жизнеспособных нейтрофилов,109/л | 2,66±0,34 | 7,79±1,11 р<0,001 | 3,56±0,59 р1-2=0,002 | 4,84±0,65 р=0,008 р1-3=0,03 |
| Лизосомальная активность нейтрофилов, у.е. | 29,13±3,37 | 218,63±18,92 р<0,001 | 139,33±24,77 р<0,001 р1-2=0,02 | 179,47±31,05 р=0,006 |
| НСТ-тест спонтанный, % | 23,75±2,08 | 26,85±2,55 | 23,27±3,72 | 23,17±2,86 |
| НСТ-тест спонтанный, у.е. | 0,29±0,03 | 0,32±0,03 | 0,27±0,04 | 0,28±0,04 |
| НСТ-тест активированный,% | 39,31±2,99 | 37,75±2,44 | 41,91±3,52 | 35,11±3,46 |
| НСТ-тест активированный, у.е. | 0,57±0,05 | 0,49±0,04 | 0,53±0,04 | 0,48±0,05 |
| Функциональный резерв нейтрофилов, у.е. | 2,03±0,14 | 2,30±0,28 | 2,42±0,30 | 2,02±0,17 |
| Активность фагоцитоза нейтрофилов, % | 61,69±2,79 | 51,10±1,85 р<0,001 | 44,60±3,81 р<0,001 | 46,78±2,75 р<0,001 |
| Интенсивность фагоцитоза нейтрофилов, у.е. | 2,56±0,20 | 1,66±0,11 р<0,001 | 1,39±0,15 р<0,001 | 1,33±0,12 р<0,001 р1-3=0,03 |
| Фагоцитарное число, у.е. | 3,84±0,21 | 3,15±0,14 р=0,005 | 2,86±0,20 р=0,003 | 2,92±0,21 р=0,001 |
Примечание к таблицам 2-4:
n - количество обследованных женщин,
р - достоверные отличия показателей женщин с ПВИ от показателей практически здоровых женщин,
р1-2 - достоверные отличия показателей группы с персистирующим течением ПВИ длительностью 6 месяцев от показателей группы с транзиторным течением ПВИ,
р1-3- достоверные отличия показателей группы с персистирующим течением ПВИ длительностью 12 месяцев от показателей группы с транзиторным течением ПВИ,
р2-3 - достоверные отличия показателей группы с персистирующим течением ПВИ длительностью 12 месяцев от показателей группы с персистирующим течением ПВИ длительностью 6 месяцев.
В группах с транзиторным и персистирующим течением ПВИ длительностью 12 месяцев установлено повышение общего количества лейкоцитов и абсолютного содержания жизнеспособных нейтрофилов относительно группы контроля. В то время как в группе с персистирующим течением ПВИ длительностью 6 месяцев эти изменения были на уровне тенденции. Вероятно, полученные данные отражают активацию воспалительного процесса при ПВИ, так как ключевым этапом в защите организма от внедрения антигена является выход нейтрофилов из кровяного русла к месту инвазии микроорганизма для решения свои эффекторных задач [Тотолян А.А., Фрейдлин И.С., 2000; Долгушин И.И и др., 2009].
Отличительной особенностью группы с персистирующим течением ПВИ длительностью 6 месяцев по сравнению с транзиторным течением ПВИ стало снижение лизосомальной активности нейтрофилов. По нашему мнению это обусловлено массивной антигенной нагрузкой в данной группе, что приводит к истощению функциональных гранул нейтрофилов. При персистирующем течении ПВИ длительностью 12 месяцев зарегистрировано снижение интенсивности фагоцитоза нейтрофилов по сравнению с транзиторным течением ПВИ.
Изучение гуморальных факторов цервикальной слизи (табл.3) показало, что при персистирующем течении ПВИ длительностью 6 месяцев организм реагировал подключением гуморальных факторов иммунитета, которое проявлялось в увеличении уровня IgG - важнейшего иммуноглобулина, определяющего завершенность и эффективность иммунного ответа [Семенов Д.М. и др., 2008] и, в итоге, способствующего элиминации ВПЧ из организма. В то время как персистирующее течение ПВИ длительностью 12 месяцев характеризовалось повышенными концентрациями sIgA, IgA и IgМ.
Таблица 3
Показатели гуморальных факторов иммунитета цервикальной слизи
у обследованных женщин, М ± m
| Показатели | Группа контроля n=32 | Группа 1 | Группа 2 | Группа 3 |
| Транзиторное течение ПВИ, n=68 | Персистирующее течение ПВИ, 6 месяцев,n=32 | Персистирующее течение ПВИ, 12 месяцев,n=52 | ||
| sIg А, г/л | 0,022±0,006 | 0,027±0,007 | 0,037±0,012 | 0,076±0,013 р<0,001 р1-3<0,001 р2-3=0,005 |
| Ig А, г/л | 0,11±0,03 | 0,09±0,02 | 0,14±0,04 | 0,28±0,05 р=0,01 р1-3=0,001 р2-3=0,04 |
| Ig М, г/л | 0,01±0,002 | 0,03±0,01 | 0,01 ±0,001 | 0,06±0,02 р2-3=0,02 |
| Ig G, г/л | 0,52±0,06 | 0,40±0,06 | 0,60±0,05 р1-2=0,03 | 0,54±0,06 |
При изучении цитокинового профиля цервикальной слизи (табл.4) установлено повышение экспрессии ИЛ-2 во всех исследуемых группах, что свидетельствует об активации иммунокомпетентных клеток в ответ на ПВИ [Кетлинский С.С., Симбирцев А.С., 2008]. Транзиторное и персистирующее течении ПВИ длительностью 6 месяцев характеризовались однонаправленными изменениями уровней цитокинов, что выражалось в повышении концентрации ИФН- и ИФН- в цервикальной слизи. Повышенная экспрессия интерферонов в группах с транзиторным и персистирующим течение ПВИ длительностью 6 месяцев свидетельствует о работе противовирусных механизмов, а ИФН–, выступая в качестве провоспалительного цитокина, обеспечивает запуск цитокинового каскада, направленного на формирование очага воспаления с привлечением эффекторных клеток. При персистирующем течении ПВИ длительностью 12 месяцев нами зарегистрирован дефицит ИНФ- в цервикальной слизи.
На основании полученных данных можно сделать вывод о том, что при персистирующем течении ПВИ длительностью 6 месяцев угнетение нейтрофильного звена иммунитета цервикальной слизи в условиях повышенной вирусной нагрузки обусловливает персистенцию ВПЧ высокого риска, но ее срок ограничивается, благодаря запуску IgG-иммунного ответа на фоне повышенной экспрессии ИНФ- и ИНФ-. Тогда как в группе женщин с персистирующем течением ПВИ длительностью 12 месяцев дефицит ИНФ-, который может быть обусловлен как нарушениями в функционировании иммунной системы женщины, так и способностью ВПЧ высокого риска подавлять синтез интерферонов и работу интерферон-сигнальных путей, способствует длительной персистенции ВПЧ. При этом, высокие уровни sIgA, IgA и IgМ, обеспечивающие первую линию иммунной защиты слизистых оболочек [Карамов Э.В. и др., 2008; Кишкун А.А., 2009], по нашему мнению, сопровождают вирусоносительство, сдерживая чрезмерную агрессивность свободных вирусов.
Таблица 4
Уровни цитокинов цервикальной слизи у обследованных женщин, M±m
| Показатели | Группа контроля, n=32 | Группа 1 | Группа 2 | Группа 3 |
| Транзиторное течение ПВИ, n=68 | Персистирующее течение ПВИ, 6 месяцев,n=32 | Персистирующее течение ПВИ, 12 месяцев,n=52 | ||
| ИФН-, пг/мл | 785,40±164,61 | 2382,95±372,14 р=0,009 | 1983,73±405,70 р=0,03 | 994,78±160,62 р1-3=0,01 р2-3=0,04 |
| ИФН-, пг/мл | 803,50±65,66 | 1166,29±100,03 р=0,02 | 1123,32±101,29 р=0,01 | 1009,05±98,91 |
| ИЛ-1, пг/мл | 4091,25±727,84 | 6766,95±1345,49 | 5654,32±1901,12 | 4244,38±1204,44 |
| РАИЛ-1, пг/мл | 4623,84±762,62 | 6186,69±1046,66 | 5722,82±1187,12 | 5181,86±580,07 |
| ИЛ-2, пг/мл | 178,60±11,37 | 325,61±41,38 р<0,001 | 351,35±79,41 р=0,01 | 245,98±19,23 р=0,007 |
| ИЛ-4, пг/мл | 281,51±53,66 | 453,70±76,96 | 350,70±68,92 | 231,47±28,68 |
| ИЛ-8, пг/мл | 8904,22±1718,08 | 14908,42±2221,30 | 11197,23±3583,08 | 11550,61±2002,03 |
| ИЛ-10, пг/мл | 212,64±11,34 | 283,44±38,10 | 182,54±14,33 | 222,91±26,77 |
| ФНО-, пг/мл | 381,41±73,15 | 350,05±37,67 | 365,17±69,85 | 348,69±52,18 |
Помимо определения изменений количественных параметров, одной из существенных характеристик функционирования иммунной системы является баланс взаимосвязей ее компонентов [Кологривова Е.Н. и др., 2005; Петленко С.В. и др., 2010]. По данным литературы, активация и вовлечение в процесс тех или иных механизмов иммунного ответа, а, следовательно, и исход инфекционного процесса, определяется не только степенью патогенности возбудителя, но и его количеством [Железникова Г.Ф., 2006; Новиков Д.К., Новиков П.Д., 2009; Devi P.U. et al., 2009; Faust H. et al., 2011]. В нашей работе исследуемые группы отличались по показателям вирусной нагрузки ВПЧ высокого риска. В связи с этим, для установления влияния количества ДНК ВПЧ на механизмы иммунного ответа был проведен корреляционный анализ между уровнем вирусной нагрузки ВПЧ высокого риска и показателями местного иммунитета в исследуемых группах.
Анализ взаимосвязей показал, что во всех исследуемых группах установлены связи вирусной нагрузки преимущественно с иммуноглобулинами и цитокинами цервикальной слизи, что подтверждает ключевую роль гуморальных факторов врожденного иммунитета в реализации процессов пролиферации, дифференцировки и активации иммунокомпетентных клеток при включении противовирусного иммунитета. Учитывая полученные данные, следующим этапом мы проанализировали взаимосвязи между уровнями цитокинов, как основных регуляторов иммунного ответа, и другими иммунологическими показателями цервикальной слизи.
При сопоставлении результатов корреляционного анализа вирусной нагрузки и цитокинов с иммунологическими факторами цервикальной слизи мы установили, что в группе с транзиторным течением ПВИ концентрация вирусной ДНК коррелировала с sIgA и ИФН- (рис.1). В свою очередь sIgA и ИФН- связаны с уровнем ФНО-, который является одним из ключевых цитокинов в реализации противовирусного иммунного ответа, а также в регуляции интенсивности воспаления и эффективности иммунной защиты [Рязанцева Н.В. и др., 2006; Зима А.П. и др., 2007; Кетлинский С.С., Симбирцев А.С., 2008]. В ходе дальнейшего анализа установлено, что ФНО- чаще других был задействован в иммунологических взаимосвязях, среди которых обращают на себя внимание, с одной стороны, положительные связи ФНО- - РАИЛ-1, ФНО- - ИФН-, с другой стороны – отрицательные связи ФНО- – ИНФ-, ФНО- – ИЛ-4. Полученные результаты свидетельствуют о сохранении баланса про- и противовоспалительных цитокинов у женщин данной группы. По данным литературы, ФНО- может оказывать ингибирующий эффект на рост ВПЧ-инфицированных клеток, который усиливается действием ИФН [Семенов Д.М. и др., 2008]. Следовательно, установленная положительная взаимосвязь ФНО- - ИФН- может свидетельствовать о сопряженности противовирусной активности данных цитокинов в ответ на ПВИ. Таким образом, в данной группе создаются благоприятные условия для реализации полноценного иммунного ответа, направленного на элиминацию ВПЧ высокого риска.
Рис.1. Корреляционные связи показателей в группе с транзиторным течением ПВИ
Примечание для рис.1-3: ____ положительные связи, ---- отрицательные связи
Рис.2. Корреляционные связи показателей в группе с персистирующим течением ПВИ длительностью 6 месяцев
При персистирующем течении ПВИ длительностью 6 месяцев установлены положительные связи между вирусной нагрузкой ВПЧ высокого риска и активностью индуцированного НСТ-теста нейтрофилов, ИЛ-2, ИФН- и Ig М и отрицательные связи - с лизосомальной активностью нейтрофилов, общим количеством лейкоцитов и абсолютным содержанием жизнеспособных нейтрофилов (рис.2). В свою очередь, ИЛ-2 и IgM коррелировали с уровнем ИЛ-1, а ИФН- был связан с РАИЛ-1 и ИЛ-10. К тому же, взаимосвязь ИЛ-8 - РАИЛ-1, которая прослеживается во всех трех группах обследованных женщин, в данном случае меняет свое направление и становится отрицательной. Интересно обратить внимание и на взаимосвязь вирусной нагрузки с ИФН-, которая была отрицательной в группе с транзиторным течением ПВИ и стала положительной при персистирующем течении ПВИ длительностью 6 месяцев. ИФН-, обладая прямой противовирусной активностью и являясь важнейшим иммунорегулятором, усиливает синтез HLA-антигенов клетками, что приводит к ускорению процессов распознавания и переработки антигенов, активирует другие клетки иммунной системы, участвующие в элиминации патогена. Таким образом, персистирующее течение ПВИ длительностью 6 месяцев характеризовалось как увеличением корреляционных связей, так и изменением их характера по сравнению с транзиторным течением ПВИ. Учитывая, что вирусная нагрузка в группе с персистирующим течением ПВИ длительностью 6 месяцев была выше порога прогрессии (более 5 lg на 105 клеток человека), увеличение количества взаимосвязей отражает напряженность и согласованную работу факторов местного иммунитета в ответ на массивную антигенную атаку, что обусловливает элиминацию ВПЧ высокого риска, но в течение более длительного времени.
При анализе корреляционных связей в группе с персистирующим течением ПВИ длительностью 12 месяцев установлена только одна положительная взаимосвязь между вирусной нагрузкой ВПЧ высокого риска и уровнем Ig А, который был связан положительной корреляционной связью с ИЛ-4 (рис.3). Обращает на себя внимание отсутствие взаимосвязей IgA и ИЛ-4 с другими иммунологическими показателями цервикальной слизи. По нашему мнению снижение числа и отсутствие связанности компонентов локального иммунитета при высокой дозе антигена препятствует удалению вируса, поддерживая его персистенцию. Более того, отмечено исчезновение связей между ФНО- и другими цитокинами и появление отрицательных связей между провоспалительными цитокинами (ИЛ1- и ИЛ-8) и противовоспалительным ИЛ-10, для которого выявлено максимальное количество связей. По данным литературы, направленность цитокинового профиля в сторону формирования гуморального иммунного ответа при вирусных инфекциях является прогностически неблагоприятным признаком течения заболевания [Наследникова И.О. и др., 2007; Маркелова Е.В. и др., 2008; Сотниченко С.А. и др., 2009]. Поэтому, установленные нами взаимосвязи можно рассматривать как патогенетический механизм, опосредующий формирование персистенции ВПЧ высокого риска у женщин этой группы.
Рис.3. Корреляционные связи показателей в группе с персистирующим течением ПВИ длительностью 12 месяцев
Таким образом, корреляционный анализ взаимосвязей между уровнем вирусной нагрузки ВПЧ высокого риска и иммунологическими показателями цервикальной слизи показал наличие существенных различий в состоянии локальной иммунной системы женщин в зависимости от дозы антигена, что доказывает участие этого молекулярно-биологического маркера в иммунологических процессах, определяющих течение и исход ПВИ.
Установленные молекулярно-биологические и иммунологические особенности исследуемых групп были использованы для выявления маркеров риска развития и длительности персистенции ВПЧ высокого риска.
Построение прогностических моделей проводилось с помощью метода бинарной логистической регрессии. В качестве наиболее информативных показателей в математические модели вошли:
- для прогноза риска развития персистирующего течения ПВИ длительностью 6 месяцев: вирусная нагрузка ВПЧ высокого риска и ИНФ- цервикальной слизи.
- для прогноза риска развития персистирующего течения ПВИ длительностью 12 месяцев: IgA и ИНФ- цервикальной слизи.
Модель логистической регрессии для определения риска развития персистирующего течения ПВИ длительностью 6 месяцев: Логит (Р) = -22,3341+(4,2036) вирусная нагрузка ВПЧ высокого риска (lg ВПЧ на 105 клеток)+ (0,0008) ИФН- цервикальной слизи (пг/мл).
Модель логистической регрессии для определения риска развития персистирующего течения ПВИ длительностью 12 месяцев: Логит (Р) = -1,2352+(17,8125) IgA цервикальной слизи (г/л) + (-0,0012) ИФН- цервикальной слизи (пг/мл).
Зная Логит (Р), расчитывается само значение P – вероятность отнесения пациента к группе риска:
где e - константна, равная 2,718281828. При подстановке значений указанных показателей, полученных при обследовании каждой пациентки, вычисляется значение вероятности отнесения ее к группе риска. Если Р<0,5 пациентку следует причислить к группе отсутствие риска, если P>0,5 – к группе наличие риска.
Полученные результаты дают возможность использовать показатели, вошедшие в данные модели, в качестве дополнительных лабораторных маркеров риска развития персистирующего течения ПВИ, а также прогнозировать длительность персистенции ВПЧ высокого риска в репродуктивном тракте женщины.
ВЫВОДЫ
- У женщин с транзиторным и персистирующим течением папилломавирусной инфекции установлена высокая частота встречаемости вируса папилломы человека 16 типа. На втором месте при транзиторном течении папилломавирусной инфекции находится вирус папилломы человека 52 типа и вообще не определяется вирус папилломы человека 35 типа. При персистирующем течении папилломавирусной инфекции длительностью 6 месяцев наравне с вирусом папилломы человека 16 типа определяется вирус папилломы человека 52 типа, второе место занимают 31 и 51 типы вируса папилломы человека и не обнаруживаются вообще 39 и 58 типы вируса папилломы человека. При персистирующем течении папилломавирусной инфекции длительностью 12 месяцев вторым по частоте встречаемости является вирус папилломы человека 31 типа, и в разном проценте случаев выявляются все 12 определяемых типов вируса папилломы человека высокого риска.
- У женщин с персистирующим течением папилломавирусной инфекции установлена высокая частота инфицирования двумя и более типами вируса папилломы человека высокого риска: при персистирующем течении папилломавирусной инфекции длительностью 6 месяцев – 50% случаев, при персистирующем течении папилломавирусной инфекции длительностью 12 месяцев – 57,7% случаев.
- У пациенток с транзиторным и персистирующим течением папилломавирусной инфекции имеются однонаправленные изменения факторов местного иммунитета, заключающиеся в снижении активности, интенсивности фагоцитоза и фагоцитарного числа нейтрофилов, увеличении лизосомальной активности этих клеток и уровня ИЛ-2.
- У женщин с персистирующим течением папилломавирусной инфекции длительностью 6 месяцев отличительными особенностями являются снижение лизосомальной активности полиморфноядерных лейкоцитов и повышение уровней ИФН-, ИФН-, IgG в цервикальной слизи.
- У женщин с персистирующим течением папилломавирусной инфекции длительностью 12 месяцев установлено снижение интенсивности фагоцитоза нейтрофилов, дефицит ИНФ- и повышение концентраций sIgA, IgA и IgМ в цервикальной слизи.
- Персистирующее течение папилломавирусной инфекции в репродуктивном тракте женщины ассоциировано с клинически значимыми показателями вирусной нагрузки вируса папилломы человека высокого риска: при персистирующем течении папилломавирусной инфекции длительностью 6 месяцев - 5,64±0,22 lg вируса папилломы человека на 105 клеток человека, при персистирующем течении папилломавирусной инфекции длительностью 12 месяцев - 4,28±0,33 lg вируса папилломы человека на 105 клеток человека.
- Выявлены корреляционные связи между вирусной нагрузкой вируса папилломы человека высокого риска и иммунологическими показателями цервикальной слизи: при транзиторном течении папилломавирусной инфекции - положительная взаимосвязь вирусной нагрузки вируса папилломы человека высокого риска с sIgА и отрицательная – с ИФН-, при персистирующем течении папилломавирусной инфекции длительностью 6 месяцев - положительные связи между вирусной нагрузкой вируса папилломы человека высокого риска и активностью индуцированного НСТ-теста нейтрофилов, ИЛ-2, ИФН- и Ig М, отрицательные связи - между вирусной нагрузкой вируса папилломы человека высокого риска и лизосомальной активностью нейтрофилов, общим количеством лейкоцитов и абсолютным содержанием жизнеспособных нейтрофилов, при персистирующем течении папилломавирусной инфекции длительностью 12 месяцев - между вирусной нагрузкой вируса папилломы человека высокого риска и IgА цервикальной слизи.
- Маркерами риска развития персистирующего течения папилломавирусной инфекции в репродуктивном тракте женщины длительностью 6 месяцев являются вирусная нагрузка вируса папилломы человека высокого риска и уровень ИНФ- цервикальной слизи. Маркерами риска развития персистирующего течения папилломавирусной инфекции в репродуктивном тракте женщины длительностью 12 месяцев являются уровни IgA и ИНФ- цервикальной слизи.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
- Абрамовских, О.С. Анализ частоты выявления ВПЧ у женщин с предраком и раком шейки матки, проживающих в Челябинской области / О.С. Абрамовских, И.Ю. Орнер, Л.Ф.Телешева, К.В. Никушкина, М.А. Беренда // Генодиагностика инфекционных заболеваний: сб.тр. / под ред. В.И.Покровского.– М.: Универ. Книга, Паис, 2007. – Т.3. – С.75-76.
- Беренда, М.А. Выявление ВПЧ ВКР у женщин с доброкачественными заболеваниями шейки матки, проживающих в Челябинской области / М.А. Беренда, О.С. Абрамовских, А.Н.Ахматова, Л.Ф.Телешева, К.В. Никушкина // Материалы VII итоговой научно-практической конференции молодых ученых Челябинской государственной медицинской академии. – Челябинск, 2009. – С.16-18.
- Летяева, О.И. Иммунологические особенности персистирующей папилломавирусной инфекции шейки матки / О.И. Летяева, О.С. Абрамовских, Л.Ф. Телешева, И.Ю. Орнер, И.Л. Батурина, М.А. Беренда // Вестн. Урал. мед. акад. науки. – 2009. – №2/1. – С.119-120.
- Долгушина, В.Ф. Клинико-иммунологическая эффективность применения препарата «Ликопид» в лечении хронического цервицита, аасоциированного с ВПЧ-инфекцией / В.Ф. Долгушина, О.С. Абрамовских, И.В. Бойко, А.Н. Ахматова, М.А. Беренда // Всероссийская научно-практическая конференция «Амбулаторно-поликлиническая практика – платформа женского здоровья»: сб.тез. – М., 2009. – С.62-63.
- Абрамовских, О.С. Особенности местного иммунитета цервикального канала у женщин с доброкачественными заболеваниями шейки матки, ассоциированными с одним и более типами ВПЧ ВКР / О.С. Абрамовских, Л.Ф. Телешева, М.А. Беренда, А.Н. Ахматова // Мед. иммунология. – 2009. – Т.11, №4-5. – С. 400.
- Абрамовских, О.С. Особенности состояния местного иммунитета у женщин с хроническим цервицитом, ассоциированным с ВПЧ-инфекцией / О.С. Абрамовских, И.В. Бойко, А.Н. Ахматова, М.А. Беренда // Всероссийская научно-практическая конференция «Амбулаторно-поликлиническая практика – платформа женского здоровья»: сб.тез. – М., 2009.– С.3-4.
- Абрамовских, О.С. Анализ спектра генотипов вируса папилломы человека высокого канцерогенного риска при цервикальной патологии / О.С. Абрамовских, М.А.Зотова, Л.Ф.Телешева // Материалы II Ежегодного Всероссийского конгресса по инфекционным болезням. – М., 2010. – С.4.
- Абрамовских, О.С. Ассоциация вируса папилломы человека высокого канцерогенно риска с сопутствующими урогенитальными инфекциями вирусно-бактериальной природы / О.С. Абрамовских, Л.Ф. Телешева, М.А. Зотова, О.И. Летяева // Современные аспекты дерматовенерологии: Всерос. науч.-практ.конф.: тез.докл. – М.: Анахарсис, 2010. – С.55-56.
- Абрамовских, О.С. Вирусная нагрузка при цервикальной патологии, ассоциированной с вирусом папилломы человека / О.С. Абрамовских, Л.Ф. Телешева, М.А. Зотова, В.С. Насонова // Материалы II Ежегодного Всероссийского конгресса по инфекционным болезням. – М., 2010. – С. 122.
- Абрамовских, О.С. Вирусная нагрузка при эктопии шейки матки, ассоциированной с вирусом папилломы человека высокого канцерогенного риска / О.С. Абрамовских, Л.Ф. Телешева, М.А. Зотова, В.Ф. Долгушина, Д.А. Куевда, Л.В. Плаксина // Молекулярная диагностика: сб.тр. / под ред. В.И.Покровского.– М.: Киселева Н.В., 2010.– Т.3.– С.350-352.
- Абрамовских, О.С. Инновационный подход к диагностике папилломавирусной инфекции урогенитального тракта женщин Челябинской области / О.С. Абрамовских, М.А. Беренда, Л.Ф. Телешева, И.Ю. Орнер, И.Л. Батурина // Оптимизация высшего медицинского и фармацевтического образования: менеджмент качества и инновации: материалы I науч.-практ. конф. –Челябинск: Изд-во ЧелГМА, 2010. – С.11-13.
- Абрамовских, О.С. Оптимизация диагностики папилломавирусной инфекции в Челябинской области / O.С. Абрамовских, М.А. Зотова, Л.Ф. Телешева, И.Ю. Орнер, И.Л. Батурина, А.Н. Ахматова, К.В. Никушкина, Л.Г. Хавлюк // Материалы Российской научно-практической конференции «Стратегия развития онкорадиологической службы в регионах РФ». – Челябинск, 2010. – С.5-6.
- Зотова, М.А. Особенности течения папилломавирусной инфекции при эктопии шейки матки, ассоциированной с хроническим цервицитом / М.А. Зотова, О.С. Абрамовских, В.Ф. Долгушина, Л.Ф. Телешева, В.С. Насонова // Молекулярная диагностика: сб.тр. / под ред. В.И.Покровского.– М.: Киселева Н.В., 2010.– Т.3.– С.364-366.
- Абрамовских, О.С. Перспективы использования иммуннокорригирующей терапии в лечении папилломавирусной инфекции в сочетании с дисбиозом вагинального биоптата у женщин репродукивного возраста / О.С. Абрамовских, О.И. Летяева, М.А. Зотова // Материалы итоговой юбилейной научной сессии кафедры акушерства и гинекологии ФПК ГОУ ВПО УрГМА Росздрава и ФГУ «НИИ ОММ» Минздравсоцразвтия России. – Екатеринбург, 2010. – С.9-11.
- Абрамовских, О.С. ПЦР-диагностика папилломавирусной инфекции у девочек подросткового возраста / О.С. Абрамовских, М.А. Зотова, Л.Ф. Телешева, Л.В. Плаксина // Молекулярная диагностика: сб.тр. / под ред. В.И.Покровского.– М.: Киселева Н.В., 2010.– Т.3.– С.352-354.
- Абрамовских, О.С. Результаты иммунокорригирующей терапии в лечении папилломавирусной инфекции в сочетании с бактериальным вагинозом / О.С. Абрамовских, М.А. Зотова, О.И. Летяева // Современные аспекты дерматовенерологии: Всерос.я науч.-практ. конф.: тез.докл. – М.:Анахарсис, 2010. – С.84-85.
- Долгушин, И.И. Содержание цитокинов в цервикальной слизи женщин с хроническим цервицитом, ассоциированным с папилломавирусной инфекцией, в зависимости от вирусной нагрузки / И.И. Долгушин, В.Ф. Долгушина, Л.Ф. Телешева, О.С. Абрамовских, М.А. Зотова, А.Н. Ахматова // Цитокины и воспаление. – 2010. –Т.9, №4. – С.20-22.
- Зотова, М.А. Спектр генотипов и вирусная нагрузка у женщин с эктопией шейки матки и хроническим цервицитом / М.А. Зотова, О.С. Абрамовских, Л.Ф. Телешева, О.И. Летяева // Современные аспекты дерматовенерологии: Всероссийская науч.-практ.конф.:тез.докл. – М.:Анахарсис, 2010. – С.85-86.
- Зотова, М.А. Факторы врожденного иммунитета цервикального секрета при эктопии шейки матки, ассоциированной с папилломавирусной инфекцией / М.А. Зотова, О.С. Абрамовских, Л.Ф. Телешева // Мед. наука и образование Урала. – 2010. – №3. – С.100-102.
- Абрамовских, О.С. Характеристика нейтрофилов цервикальной слизи у женщин с хроническим цервицитом, ассоциированным с папилломавирусной инфекцией в зависимости от вирусной нагрузки / О.С. Абрамовских, А.Н. Ахматова, В.Ф. Долгушина, М.А. Зотова, К.В. Никушкина, Л.Ф. Телешева // Рос. аллергол. журн. – 2010. – №5, Вып.1. – С.3-4.
- Абрамовских, О.С. Характеристика цитокинового статуса при латентной папилломавирусной инфекции / О.С. Абрамовских, В.Ф.Долгушина, И.В.Бойко, М.А.Зотова, К.В. Никушкина, Е.А.Мезенцева // Рос. иммунол. журн. - 2010. – Т. 4 (13), №4.– С.428.
- Зотова, М.А. Цитокиновый профиль цервикальной слизи у женщин с латентной папилломавирусной инфекцией / М.А.Зотова, В.Ф.Долгушина, А.Н. Ахматова, Л.Ф.Телешева, И.Ю. Орнер, Е.А.Мезенцева // Вестн. Урал. мед. акад. науки. – 2010. – №2/1 (29). – С. 85.
- Абрамовских, О.С. Частота встречаемости вируса папилломы человека высокого канцерогенного риска при патологии шейки матки в Челябинской области / О.С. Абрамовских, В.Ф. Долгушина, Л.Ф. Телешева, М.А. Зотова, Д.А. Куевда // Вестн. Урал. мед. акад. науки. – 2010. –№3 (31). – С. 122-125.
- Зотова, М.А. Папилломавирусная инфекция у женщин при цитологической норме и цервикальной эктопии / М.А.Зотова, О.С. Абрамовских // Вестн. Новосиб. Гос. Ун-та. – 2011. – Т.9, Вып.2. – С.48-52.
На правах рукописи
ЗОТОВА
Мария Александровна
ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ И МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ
ФАКТОРЫ ПЕРСИСТИРУЮЩЕГО ТЕЧЕНИЯ
ПАПИЛЛОМАВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ
14.03.09 – клиническая иммунология, аллергология
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени
кандидата биологических наук
Челябинск – 2011
Отпечатано в типографии …. Подписано в печать 18.11.2011г. Формат 6084 1/16. Гарнитура ……….. Бумага офсетная. Печать на ризографе. Объем 2 усл. п.л.
Тираж 100экз.
