КРАТКИЙ ОТЧЕТ

О НАУЧНО – ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКОЙ ДЕЯТЕЛЬНОСТИ

ФГБУ «ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР» ИНСТИТУТ ИММУНОЛОГИИ» ФМБА РОССИИ

за 2009 год

г. Москва

В 2009 году Институтом выполнялись работы:

• в рамках ФЦП «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2007-2012 годы» (заказчик ФАНИ России)- 3 темы:

- «Разработка постгеномных технологий создания иммунобиологических препаратов для лечения и профилактики инфекционных и соматических заболеваний»;

- «Конструирование и сравнительный анализ новых рекомбинантных антигенов для экспериментальных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин с использованием УСУ «Стенд для работы с биологическим материалом, инфицированным вирусом СПИД (СПИД)» шифр «2009-07-1.8-00-04-159»;

- «Разработка технологий получения комплекса лекарственных препаратов на основе полисахаридных и пептидных конструкций для профилактики, лечения и реабилитации больных дизентериями Флекснера и Зонне и создание опытного производства субстанций и лекарственных форм этих препаратов».

• по Программе важнейших прикладных научно-исследовательских, опытно-конструкторских, технологических работ (заказчик ФМБА России ) - 8 тем:

- «Разработка кандидатных вакцин против ВИЧ/СПИД» (шифр «КВ ВИЧ-09»);

- «Оценка иммунного и аллергологического статуса у персонала объекта УХО в п.г.т. Горный Саратовской области».

- «Изучение аллергенных свойств пыльцы растений, подверженных действию неблагоприятных экологических и антропогеннных факторов в районах расположения предприятий, обслуживаемых ФМБА России» (шифр «Аллергодиагностика-2").

- «Проведение мероприятий по организации в системе ФМБА России регистра доноров-добровольцев гемопоэтических стволовых клеток»( шифр «Доброволец").

- «Разработка методологии иммуномониторинга в районах расположения особо опасных химических и биологических предприятий. Разработка комплекса тестов для оценки функциональной активности фагоцитов периферической крови человека с помощью проточной лазерной цитометрии и методических рекомендаций по их практическому использованию» (шифр «Стандарт-09").

- «Создание реагентов для установления генетических маркеров особенностей иммунного статуса населения, проживающего на территориях, обслуживаемых ФМБА России» (шифр «Статус").

- «Разработка биомедицинской технологии HLA- типирования, отвечающей международным стандартам, для использования в системе ФМБА России при лечении профессиональных заболеваний» (шифр «Типирование").

- «Подготовка к изданию и издание учебника по иммунологии для медицинских высших учебных заведений, университетов и учреждений послевузовского образования, осуществляющих подготовку специалистов по вопросам медико-санитарного обеспечения химической и биологической безопасности».

• по «Плану научно-исследовательских и опытно-конструкторских работ выполняемых ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России», 6 тем:

- «Разработка и применение методов клинической диагностики нарушений иммунного ответа и сопутствующих заболеваний"(шифр "Диагностика")

- «Разработка технологий получения вакцин, аллергенов и аллерготропинов, создание и испытание иммунокорригирующих средств» (шифр «Иммунобиотехнологии»)

- «Изучение фундаментальной и прикладной биологической роли системы HLA и других генов, ассоциированных с иммунным ответом» (шифр «Иммуногенетика»)

- «Разработка новых методов лечения различных форм иммунопатологии, иммуноопосредованных профзаболеваний и их осложнений» (шифр «Иммунопатология»)

-«Иммуноэпидемиология последствий в Чернобыле и деятельности
предприятий атомно - энергетического комплекса" (шифр "Радиация")

- «Разработка новых тест-систем и методов диагностики нарушений иммунного ответа и сопутствующих заболеваний» (шифр «Тест-системы»)

• по программе Российского фонда фундаментальных исследований (РФФИ) – 4 темы;
• по гранту Imperial College,London, Великобритания, 1 тема;
• по грантам Президента Российской Федерации по государственной поддержке молодых российских учёных – кандидатов наук и их руководителей – 2 темы:

- «Разработка новых подходов к диагностике и лечению вирусных инфекций»;

- «Разработка и тестирование наноконструкций, обладающих противовирусными свойствами по отношению к социально значимым респираторным вирусным инфекциям».

Основные результаты научной и инновационной деятельности за отчетный период,
в том числе по мероприятиям федеральных целевых программ
и национальных проектов

Разработаны новые методы и способы диагностики, лечения и профилактики:

Изучены клинико-иммунологические особенности у пациентов с различными вариантами астматической триады. Выявлены корреляционные связи между наличием эозинофильного воспаления и содержанием эозинофильного катионного белка в крови больных. Проведено комплексное обследование больных БА в стадии обострения.

Исследованы клинико-иммунологические варианты течения хронической идиопатической крапивницы (ХИК) на основе ретроспективного анализа групп больных (ХИК), обследованных и пролеченных в 2000-2008 гг.

Обследованы больные в острый период Herpes zoster и в период постгерпетической невралгии. Изучена динамика изменений клеточного и цитокинового ответа у больных в разные фазы заболевания (от начала заболевания до развития постгерпетической невралгии).

Изучен характер и интенсивность чувства зуда, индуцированного внутрикожным ведением ацетилхолина, в группах контроля и в группах больных атопическим дерматитом (АтД),. изучена роль антимикробных пептидов в лейкоцитах периферической крови, а также влияние топических ГКС на экспрессию генов цитокинов в коже и крови больных АтД легкой и средней степени тяжести и Т- клеточной лимфомой кожи.

Проведен анализ новых наблюдений больных с первичными иммунодефицитами для включения в национальный регистр. Изучены особенности механизмов иммунной защиты и степень иммунной недостаточности у пациентов иммуноопосредованными заболеваниями детского возраста. Изучены системные и локальные механизмы иммунной защиты при синдроме вторичной иммунной недостаточности.

Исследован иммунный и интерфероновый статус у женщин с опухолями молочных желез в послеоперационном периоде. Изучены механизмы лекарственной непереносимости и особенности течения аллергических заболеваний у больных с патологией эндокринной системы.

Разработан протокол проведения комбинированной аллерген-специфической иммунотерапии (АСИТ) поллинозов путем последовательного применения однократного курса инъекционного ускоренного метода и продолжения лечения сублингвальными аллергенами.

Изучена распространенность и особенности клинико-аллергологической и иммунологической характеристики и вариантов течения инсектной аллергии (ИА) к нежалящим насекомым (НН) в различных регионах России.

Подобраны эффективные комбинации иммунотропных препаратов для терапии аллергических заболеваний у иммунокомпрометированных пациентов. Проведен анализ действующих стандартов в аллергологии и иммунологии. Модифицирован стандарт ведения больных с аллергическим ринитом.

Проведен мониторинг антител к капсульному полисахариду возбудителя гемофильной инфекции в сыворотках здоровых и больных различными бронхолегочными заболеваниями людей, а также лиц, вакцинированных форсифицированными вакцинами. Представлены Паспорта на три серии иммунохимической тест-системы для оценки эффективности вакцинации против гемофильной инфекции (совместно с Институтом вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН).

Освоено масштабируемое производство разработанных иммуноаналитических тест-систем для определения антител против возбудителей туберкулеза и растительных антигенов, включая процедуры контроля качества технологического процесса. Проведены государственные испытания тест-систем и получена разрешительная документация для их применения в медицинской диагностике (совместно с Институтом биохимии им. Баха РАН).

Проведено изучение иммуногенных свойств вакцины «Геп-А+В-ин-ВАК-ПОЛ». Установлено, что уже однократное введение препарата вызывало образование антител. Вторая иммунизация давала значительный прирост в титрах. Максимальный титр антител достигался после третьего введения препарата. Исследован лимфопролиферативный ответ у иммунизированных животных. Разработан Проект методических рекомендаций алгоритма дифференциальной диагностики вакцинального и инфекционного иммунитета.

Исследована динамика АГ-специфических цитолитических CD8+ Т-клеток у лиц, вакцинированных гемагглютинином вируса гриппа. Показано, что иммунизация гемагглютинином вируса гриппа приводит к повышению продукции ИФН- Т-клетками в ответ на вакцинный антиген. Разработан Проект патентной заявки на технологию количественного определения антиген-специфических CD8+клеток. Полученные результаты важны для комплексной оценки эффективности иммунизации населения против вируса гриппа.

Проведена разработка методов диагностики, направленных на выявление иммунологических дефектов, специфичных для того или иного возбудителя пиодермии, каким является S. aureus для большинства гнойных инфекций стафилококковой этиологии. Проведена оценка клинической значимости модифицированной реакции торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ) с антигеном S. aureus и ее роль в прогнозировании течения заболевания у больных с хронической рецидивирующей пиодермией (ХРП) методом определения функциональной активности лейкоцитов.

Проведено экспериментально-аналитическое обоснование выбора и создания количественных генно-диагностических систем на основе метода ПЦР для оценки условно-патогенных возбудителей в клинике трансплантации и на вредных производствах (анализ литературы, апробация тест-систем).

Проведено исследование клинико-иммунологических, морфологических особенностей дыхательного тракта при трахеостоме и аллергическом рините у больных с хроническими обструктивными заболеваниями легких.

Разработан протеомный метод, предназначенный для изучения мембранных рецепторов лимфоцитов и их комплексов. Изучены особенности иммунного ответа при 4-х хронических бактериальных инфекциях (хроническом тонзиллите, бактериальном простатите, хроническом цистите и хламидийном уретрите), при ожоговом шоке. Осуществлен мониторинг ВИЧ-инфекции и ко-инфекции гепатита С в различных популяциях, в том числе исследование вклада путей передачи инфекции в распространение эпидемии.

Проведен сбор данных о распространенности и особенностях соматической, аллерго- и иммунопатологии у работников объекта УХО п.г.т. Горный и населения п.г.т. Горный. Проведено испытание лаборатории ЛИСАД-300 (в условиях экспедиции). Проведен отбор лиц из числа персонала объекта УХО с аллергопатологией с целью последующей госпитализации в клинику Института для подбора адекватных методов терапии.

Проведена оценка иммунного статуса населения, проживающего на территориях, обслуживаемых ФМБА России. Проведен иммунологический и аллергологический мониторинг возрастных особенностей формирования иммуноопосредованной и соматической патологии у лиц, принимавших участие в ликвидации последствий аварии на Чернобыльской АЭС, а также у персонала ГХК и населения г. Железногорска, проживающего в зоне действия комбината. Изучена экологическая и санитарно-гигиеническая характеристика СХК и г. Северска, особенности основных воздействующих факторов на комбинате, частота клинических проявлений дисфункции иммунной системы, иммуноопосредованных и хронических соматических заболеваний у персонала СХК и населения ЗАТО Северск.

Создана комплексная технология HLA-типирования, отвечающая международным стандартам для референс-лабораторий, обеспечивающих подбор тканесовместимых доноров гемопоэтических стволовых клеток. Разработан проект пакета документов для доноров-добровольцев гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) в соответствии с международными требованиями. Проведено генотипирование ДНК-полиморфизмов, ассоцированных с особенностями иммунной системы человека, на образцах биоматериала, полученных от населения, проживающего на территориях, обслуживаемых ФМБА России.

Сконструированы, синтезированы и очищены перспективные праймеры для типирования генов DQA1 и DQB1. Изучена роль HLA-DR-генотипа в развитии аутоиммунного сахарного диабета 1 типа. Определен профиль частот генов, контролирующих иммунный ответ в московской популяции. Работа выполнена на высоком научно-техническом уровне.

Разработана тест-система ИФА для выявления аллергии немедленного типа по специфическому IgE-связыванию с аллергенами стафилококка и тест-система для оценки экспрессии генов дифференцировочных факторов субпопуляций Т-хелперов у здоровых доноров и больных аллергией.

Получены латексные частицы с заданными свойствами, нагруженные липополисахаридами условно-патогенных микроорганизмов, проведена стандартизация стойкой дисперсии коньюгированного латекса, налажено производство опытных партий тест-систем, подготовлен проект опытно-промышленного регламента.

Разработана методика дегрануляции NKТ-клеток и окраски на внутриклеточные маркеры NKТ-клеток, получены нормативные показатели. Разработанный комплекс методов применен для исследования функции NK-клеток при первичных иммунодефицитах и хронической герпесвирусной инфекции. Изучена функциональная активность NKT-клеток с помощью моноклональных антител.

Проведен мониторинговый сбор пыльцы растений вблизи обслуживаемых ФМБА России предприятий с вредными производственными факторами, оценка ее свойств и сравнение со свойствами аналогичной пыльцы из экологически чистых районов. Разработана технология получения аллергена из рыбы, подготовлен лабораторный регламент.

Разработан комплекс тестов для оценки функциональной активности фагоцитов периферической крови человека в норме и при патологии. В основе комплекса лежит применение проточной лазерной цитометрии и бактерий, меченых флуорохромами, что позволяет в течение нескольких минут анализировать количество и функциональную активность нескольких тысяч изучаемых клеток.

Впервые, путем иммунизации пептидными фрагментами цитокинов, удалось получить сайт-специфические антитела, реагирующие с целой молекулой. Установлено, что Т-лимфоциты селезенки мышей, содержащие циркулирующие антитела к ключевым цитокинам Тh1- и Тп2-клеток, сами по себе не отличаются от Т-клеток интактных и контрольных (введение адъюванта) мышей по способности к синтезу IFN- и IL-4 в условиях активации in vitro. Накопление в циркуляции антител к IFN- вызывает ослабление как гиперчувствительности замедленного типа (клеточный иммунный ответ), так и формирования антителообразующих клеток (гуморальный иммунный ответ) при иммунизации мышей эритроцитами барана. Иммунизация пептидом к IL-4 не влияет на клеточный, но снижает гуморальный иммунный ответ при условии индукции антител, реагирующих с целой молекулой IL-4. Получены данные, свидетельствующие в пользу ингибирующего действия накопления антител к IL-4 на уровень аллергического ответа.

Проведены исследования в области биотехнологии (клеточной инженерии) с использованием методов научных исследований, разработанных или освоенных для уникальной установки, стенда (УСУ). Осуществлено развитие материально-технической базы УСУ путем дооснащения имеющихся специализированных комплексов (лабораторий), приобретаемым научным оборудованием для обеспечения и развития исследований в форме коллективного пользования. Проведено конструирование и сравнительный анализ новых рекомбинантных антигенов для экспериментальных анти-ВИЧ/СПИД-вакцин. Выбрано направление исследования – разработка и адаптация методов создания и исследования новых кассетных ВИЧ-специфических рекомбинантных антигенов, содержащих повторы таких представленных на белках вируса иммунодефицита антигенных детерминант, которые стимулируют образование антител, нейтрализующих ВИЧ. Подобраны и синтезированы праймеры, необходимые для выполнения синтеза серии генов, содержащих ВИЧ-специфические вставки и создания серии генетических конструкций кассетных рекомбинантных ВИЧ-специфических антигенов. Синтезированы гены кассетных рекомбинантных ВИЧ-специфических антигенов – Мульти-ВИЧ-АГ-1 и Мульти-ВИЧ-АГ-2. Приготовлены и экспрессированы в E.coli генетические конструкции. Антигены содержат повторяющиеся последовательности 2F5 и 4E10 поверхностного гликопротеида ВИЧ1 gp41, связанные короткими линкерными последовательностями, и гистидиновые остатков на С-конце белка Наработаны и очищены лабораторные образцы антигенов. Подготовлена программа развития УСУ на 2010 год. Созданы две генно-инженерные конструкции, кодирующие последовательность 2F5-4E10 гена env HIV пять и семь раз подряд. Созданы гены pa-1 и pa-2 для клонирования в векторы, получены векторы pПА-1 и pПА-2. Получены штаммы E. coli – продуценты белковых конструкций ПА-1 и ПА-2. Созданы генно-инженерные конструкции, содержащие нуклеотидные последовательности, кодирующие белок gp120 изолята А ВИЧ-1. Проведен сравнительный анализ иммуногенности различных антигенов против ВИЧ/СПИД, отличающихся способом доставки и адъювантами.

Разработаны и стандартизированы условия глубинного культивирования B.fragilis в синтетической питательной среде. Получен полупродукт, содержащий неочищенные цвиттерионные полисахариды B.fragilis.

На основе компьютерного анализа гена-мишени и трехмерной структуры белкового продукта сконструированы рекомбинантные плазмиды, несущие ген-мишень. Исследованы свойства комплексного аллергоида, подготовлен проект лабораторного регламента. Синтезированы и изучена иммуногенность синтетических пептидов, имитирующих Т- эпитопы аллергена пыльцы тимофеевки Phl p. Получены пептиды, способные подавлять пролиферацию эффекторных Т-клеток.

Проанализированы эффекты водорастворимых производных фуллерена С60 на выброс гистамина клетками человека. Проведена оценка ингибирующих эффектов производных фуллерена на IgE-опосредованную гиперчувствительность и на системную анафилаксию, индуцированную у мышей. Получены предшественники пептидил-порфиринов и их дендримеров. Синтезированы полупродукты для синтеза пептидил-порфиринов.

Синтезированы производные полиоксидония. Отработаны методы контроля реакции сочетания инсулина с производными полиоксидония.

Исследованы иммунотропные свойства низкомолекулярных бактериальных пептидогликанов в комбинациях с низкомолекулярными пептидными антигенами. Изучены способы конъюгации бактериальных пептидогликанов с пептидными антигенами и иммуногенность конъюгатов в экспериментах на животных. Исследован эндотоксикоз различной интенсивности с использованием панели эндотоксинов различной активности.

Разработаны новые профилактические средства и диагностические препараты:

Опытно-технологические работы, проводимые в Институте направлены на разработку конкурентоспособных технологий и создание на их основе высокоэффективных и безопасных иммунобиологических препаратов для профилактики и лечения; разработку средств контроля качества, эффективности, адекватности применения препаратов, а также средств для дифференциальной диагностики инфекционного и поствакцинального иммунитета.

Разработаны новые препараты для специфической иммунотерапии - аллерготропины из пыльцы растений и клещей домашней пыли, коньюгированные с синтетическим иммуномодулятором полиоксидонием. Подготовлена научно-техническая документация на получение аллерготропинов из аллергоидов клещей домашней пыли D. Pteronyssinus и D. Farinae, из аллергоидов пыльцы тимофеевки, березы, полыни - «Тимпол», «Берпол», «Полпол». Выпущены опытные партии. Проведены ограниченные клинические испытания аллерготропинов «Берпол», «Полпол».

Проведены ограниченные клинические испытания по оценке реактогенности при иммунизации добровольцев против гепатитов А и В вакциной «ГЕПОЛ А+В». Результаты клинического наблюдения за привитыми после 1, 2 и 3 введения препаратов показали, что вновь разработанная комбинированная гепатитная ди-(А+В) – вакцина с полиоксидонием «ГЕПОЛ А+В» в двух вариантах, с антигенами компонента гепатита В вакцины «Комбиотех Лтд.» и «Шанвак В», являются слабо реактогенными препаратами. Представлены материалы для регистрации препарата гепатитной вакцины: фармакологическая статья, инструкция по применению вакцины, отчет о клинических испытаниях, опытно-промышленный регламент на производство вакцины (совместно с ГИСК им. Тарасевича).

Продолжены исследования по разработке методов создания противоопухолевой вакцины на основе синтетических фрагментов опухольассоциированных антигенов ганглиозидной природы, конъюгированных с белковым носителем. Изучено связывание антител, индуцируемых введением животным синтетической противоопухолевой вакцины, с клетками меланомы В16, изучена динамика гуморального иммунного ответа у вакцинированных мышей после внутрикожной инокуляции клеток меланомы В16. Показано, что бустерная иммунизация клетками меланомы В16 предварительно вакцинированным животных приводит к индукции гуморального иммунного ответа и повышению продолжительности жизни мышей, (100% гибель к 47 суткам в контроле и 30% гибель к 58 дню у вакцинированных животных).

Проведена работа по созданию субъединичной рекомбинантной вакцины против туберкулеза на основе конъюгата белка HSP70 с полиоксидонием. Проведено определение протективного эффекта у животных, иммунизированных конъюгатом и белком теплового шока. Подготовлен отчет о доклинических испытаниях конъюгата белка HSP70 с полиоксидонием, научно-техническая документация на экспериментальную технологию получения рекомбинантного белка HSP70 и его конъюгата с полиоксидонием и проект патентной заявки на технологию получения конъюгата белка HSP70 с полиоксидонием.

Продолжена разработка вакцины против гемофильной инфекции. Проведена отработка методов глубинного культивирования в полусинтетической среде и выделения поверхностных антигенов H. influenzae (тип b, штамм № 267), их модификация, наработка и физико-химическая характеристика. Произведен анализ токсичности и серологических свойств модифицированных антигенов. Выпущены опытные серии препарата, изучены их иммунобиологические характеристики. Разработаны проекты опытно-промышленного регламента и ФСП на кандидат-вакцину против гемофильной инфекции.

Получены образцы низкоэндотоксичных липополисахаридов из Sh.sonnei, фаза1 и изучены их физико-химические свойства, чистота и пирогенность. В результате исследования на прямой модели эндотоксического шока через 72 часа после введения эндотоксина было отмечено повышение выживаемости мышей (CBAC57BL/6)F1, иммунизированных низкоэндотоксичными мЛПС и НЭТ-ЛПС и нативным S-ЛПС Sh.sonnei, фаза 1, что связано с индукцией ранней толерантности. При двукратной иммунизации НЭТ-ЛПС и мЛПС Sh.sonnei было определено наличие перекрёстно реагирующих антител IgG класса, а при иммунизации мЛПС так же отмечена зависимость доза-эффект. При трехкратной иммунизации обоими препаратами были определены антитела IgG и IgM классов только к собственному ЛПС. Разработаны принципиально новые подходы к коррекции (повышению) антиэндотоксинового статуса человека. Проведена комплексная оценка механизмов профилактики шока на основе данных применения НТ-ЛПС на человеке и экспериментальных животных. Подготовлены НТД по схемам использования и дозировкам препарата при клинических испытаниях, проект ФСП на противошоковую вакцину, протокол клинических испытаний противошоковой кандидат-вакцины.

Изучение иммуномодулирующих свойств препаратов на основе ЛПС Sh. sonnei показало, что эти препараты обладают иммуностимулирующей (адъювантной) активностью и могут рассматриваться в качестве потенциальных вакцинных компонентов. Продолжено изучение иммуномодулирующих свойств препаратов на основе ЛПС Sh. sonnei и изучение характеристик безопасности этих препаратов.

Проведены исследования кандидатных вакцинных препаратов, полученных на основе фракций д-ЛПС S. flexneri, включающие изучение и анализ серологических характеристик всех выделенных препаратов и определение содержания в них примесей белков и нуклеиновых кислот, а также изучение структуры и иммунобиологических свойств полученных препаратов. Различными методами проведена наработка образцов препаратов д-ЛПС S. flexneri. Разработаны условия выполнения технологического процесса, проект Фармакопейной статьи препарата для профилактики дизентерии Флекснера, композиция финальной формы препарата для лечения и реабилитации больных дизентерией Зонне.

ВИЧРЕПОЛ – первая и пока единственная отечественная вакцина против ВИЧ/СПИД, 1-я фаза клинических испытаний которой успешно завершена. Отчет об этих испытаниях был одобрен соответствующими организациями, и было рекомендовано продолжение испытаний – переход ко 2-й фазе клинических испытаний.

С целью повышения иммунного ответа на вакцину «ВИЧРЕПОЛ» усовершенствован протокол вакцинации (увеличена прививочная доза вакцины). Подготовлена реагентная и методическая база для создания и исследования новых антигенов и анти-ВИЧ/СПИД вакцин, в том числе, для оценки иммунного ответа при проведении доклинических и клинических испытаний различных вакцин против ВИЧ/СПИД.

Выполнен комплекс работ по подготовке фазы II клинических испытаний вакцины «ВИЧРЕПОЛ», целью которых является исследование иммуногенности повышенной дозы вакцины и дальнейший мониторинг безопасности вакцины «ВИЧРЕПОЛ»:

Исследованы рецептор-направленные адъюванты на основе пептидогликанов из бактериальной стенки для включения в состав кандидатных вакцин против ВИЧ-инфекции/СПИДа. Показана их способность индуцировать иммунный ответ, в том числе, на антигены, в чистом виде не проявляющие иммуногенности. Показано, что иммуногены, составленные из пептидного антигена, повторяющего V3-петлю gp120 - гликопротеина оболочки ВИЧ1, и изучаемых адъювантных препаратов, позволяют индуцировать у животных выработку антипептидных антител в титре 104.

Создан новый вектор, обеспечивающий экспрессию клонированнных белков оболочки ВИЧ на мембране трансфецированных клеток, отработан метод трансфекции клеток мышиной миеломы SP 2.0.

Для создания метода эффективной очистки рекомбинантных белков получены штаммы-продуценты стрептавидина и TEV-протеазы.

Наработанный и очищенный белок rec(24-41) и вакцина «ВИЧРЕПОЛ» будут использованы при проведении фазы II клинических испытаний. Методы, разработанные в ходе НИР, позволяют на постоянной основе в больших масштабах получать любые рекомбинантные белки, синтезируемые в E. coli, и обеспечивать высокую степень чистоты и гомогенности, отвечающую требованиям, предъявляемым к препаратам, предназначенным для введения человеку.

Разработаны реагенты для типирования гена DRB1 HLA класса II с использованием новой технологии анализа результатов - флюоресцентной детекцией результатов ПЦР, позволяющей проводить оценку реакции в закрытой пробирке. Флюоресцентная технология анализа результатов реакции позволяет избежать загрязнения помещений и реактивов продуктами предшествующих реакций, что повышает качество и точность результатов. Разработанные реагенты позволяют проводить типирование гена DRB1 на уровне "низкого" разрешения, что позволяет проводить подбор пар донор-реципиент при родственных пересадках кроветворных стволовых клеток, а также могут быть использованы как набор для первичного скрининга неродственных доноров кроветворных стволовых клеток.

Разработаны ПЦР-диагностикумы для детекции респираторно-синцитиальной вирусной (РСВ) инфекции, вирусов парагриппа (ВПГ) 1-го, 2-го и 3-го типа. ПЦР-диагностикумы успешно протестированы на культуре РСВ, и кДНК ВПГ 1, 2 и 3, а также клинически апробированы на материале от пациентов с симптомами ОРВИ.

Проведена работа по совершенствованию и расширению спектра определяемых параметров иммунного статуса и видов возбудителей инфекционных заболеваний разработанными ранее образцами оригинальных приборов и используемых с ними тест-систем (совместно с Институтом аналитического приборостроения РАН, Санкт-Петербург).

Разработаны нормативные документы:

• Проекты лабораторных и производственных регламентов производства новых лекарственных и профилактических препаратов и тест-систем (аллерготропины, вакцины, анатоксины, диагностикумы).
• «Проект методики дифференциальной оценки клеточного ответа на вакцину «ГЕП-А+В-инВАК-ПОЛ».
• Сертификаты качества опытных партий и протокол доклинических испытаний белка HSP70 и его конъюгата с полиоксидонием (совместно с ОАО «ВНЦ молекулярной диагностики и лечения», Москва).
• Комплект документации по организации регистра доноров стволовых гемопоэтических клеток. (План мероприятий по созданию регистра доноров-добровольцев. Проект организационной структуры регистра. Компьютерная программа для поддержки ведения регистра доноров добровольцев).
• План мероприятий по организации референс-лаборатории HLA-типирования на базе института, включающий реализацию концепции о структуре и оснащении современной типирующей лаборатории в соответствии с международными требованиями.
• Ведется разработка проекта нормативной документации для HLA-генотипирующей лаборатории
• Алгоритм ранней диагностики аллергических заболеваний и иммунодефицитных состояний у лиц, работающих в системе ФМБА России. Подготовлен перечень клинических и лабораторных маркеров аллергических заболеваний и иммунодефицитных состояний у работников особо опасных и вредных производств и методики их выявления.
• Методические рекомендации «Совершенствование организации ранней диагностики, терапии и профилактики заболеваний, обусловленных нарушениями в системе иммунитета у лиц, работающих в системе ФМБА России».
• Заключение о состоянии иммунного статуса персонала Горно-химического комбината (ГХК), работающего в условиях воздействия радиации в малых дозах. Подготовлены рекомендации по проведению коррекции и профилактики иммунопатологии у персонала основного производства ГХК.
• Методические рекомендации по совершенствованию медицинского обслуживания лиц, принимавших участие в ЛПА на ЧАЭС.
• Реферативный сборник зарубежных материалов по биомедицинским нанотехнологиям в области иммунологии, аллергологии и иммунобиологических лекарственных препаратов.
• Подготовлена рукопись учебника «Иммунология (норма и патология)». Проведена работа по созданию оригинал – макета учебника и его верификации авторами. Отпечатано 3 000 экземпляров учебника.
• Метод оценки переваривающей активности лейкоцитов, основанный на изменении интенсивности свечения облака (GeoMean) лейкоцитов в динамике.
• Методика фиксации препаратов фагоцитоза.
• Методические рекомендации «Оценка поглотительной, бактерицидной и переваривающей активности лейкоцитов периферической крови человека с помощью проточной лазерной цитометрии».
• Методические рекомендации «Профилактика профессионального заражения ВИЧ-инфекцией медицинских работников в учреждениях здравоохранения Московской области».
• Информационный бюллетень «Эпидемический процесс ВИЧ-инфекции и организация службы по борьбе со СПИДом в Московской области».
• Рекомендации для врачей «Школа пациентов: обучение супружеских пар, дискордантных по ВИЧ-инфекции, направленное на снижение рискованного поведения».

Внедрение результатов НИОКР в практику

Институт не имеет своего производства. Поэтому работы заканчиваются на стадии разработки технологий получения различных препаратов. Разработанные технологии Институт готов передавать заинтересованным предприятиям для производства продукции.

Так, иммуноаналитическая тест-система для определения антител после вакцинации против гемофильной инфекции планируется к производству на предприятии ЗАО «НПФ ДНК технологии». Технология создания вакцины ГЕПОЛ А+В передана в фармацевтическую компанию «Петровакс». Технология производства аллерготропинов передана в НПЦ «Медицинская иммунология». Для производства вакцины против гемофильной инфекции и противошоковой вакцины ООО «ГРИТВАК» заканчивает в г. Оболенске строительство производственного комбината. Передача других технологий находится в стадии переговоров с различными предприятиями, в частности, с концерном «Микроген».

Создаваемые на основе разработанных технологий вакцины и диагностические препараты внесут значительный вклад в диагностику, профилактику и лечение целого ряда социально опасных инфекций, что повысит качество жизни и даст экономический эффект по снижению заболеваемости населения. Иммунобиологические препараты нового поколения будут использованы для профильной вакцинации больших контингентов населения России. Общая численность нуждающихся в подобной помощи составляет 30-50 млн. человек. Успех в разработке этих препаратов позволит широко применять данный технологический подход для создания новых профилактических и лечебных средств. для лечения и профилактики различных групп иммунозависимых заболеваний: онкологических, аллергических, инфекционных.

Проведенные Институтом научные мероприятия

1. Расширенная Коллегия ФМБА – доклад директора.
2. Участие в подготовке Закона о биомедицинских технологиях и их продукции.
3. Экспертиза научно-технических отчетов и методических рекомендаций, подготовленных в системе ФМБА.
4. Участие в выставке «Индустрия здоровья».
5. Научная командировка Николаевой И.А. в Танзанию 14.05-14.08.09 г. в рамках проекта «Стратегическое партнерство в здравоохранении» в качестве эксперта ВОЗ по ВИЧ/CПИД- инфекции.
6. Подготовлены предложения по корректировке приоритетных направлений развития науки и перечня критических технологий.
7. Подготовлены и проведены 3 заседания Проблемной комиссии № 3 ФМБА.
8. Подготовлен перечень конкретных первоочередных мероприятий по внедрению в деятельность в деятельность лечебно-профилактических учреждений ФМБА России на 2009-2011 г.г. современных лечебно-диагностических технологий.
9. Подготовлены предложения по поддержке проектов по разработке и производству лекарственных средств.
10. Участие в XV-ой Международной выставке «Высокие технологии. Инновации. Инвестиции», март 2009 г., г. Санкт-Петербург.
11. Организация подготовки и проведения Х-го международного конгресса «Современные проблемы иммунологии и иммунофармакологии» 20-23 мая 2009 г., г. Казань. В рамках Конгресса сотрудниками Института организованы 3 пленарные сессии, 40 тематических секций, 12 школ для практических врачей.
12. Участие в выставке «Здоровье нации – основа процветания России», 16-19 сентября 2009 г., г. Москва.
13. Участие в подготовке и проведении 27-й Международной выставки-ярмарки «FIHAV-2009» в Гаване (Куба).
14. Проведение выставки «Передовые российские технологии» в Каракасе (Венесуэла).
15. Научная командировка старших научных сотрудников Коробовой С.В. и Корнилаевой Г.В. в Научный институт Сан-Рафаэле (Италия, Милан) для изучения новых методов оценки нейтрализующей активности антител против ВИЧ (1-15 ноября 2009 г.)

Основные публикации Института

1. Дьяконова В.А., Пак В.Г., Будихина А.С., Аршинова С.С., Олиферук Н.С., Голубева Н.М., Рябова Н.Л., Санков М.Н., Мартынов А.И., Симонова А.В., Пинегин Б.В. Оценка функциональной активности фагоцитарной системы человека в норме и при патологии. Пособие для врачей клинической лабораторной диагностики. М. МБК Консалтинг, 2009 г. –35стр.
2. Олиферук Н.С., Аршинова С.С., Мартынов А.И., Пинегин Б.В. Нормативные параметры фагоцитарной системы человека, определенные с помощью проточной цитофлуориметрии. Пособие для врачей клинической лабораторной диагностики. М. МБК Консалтинг, 2009 г. - 44 стр.
3. Пальцев М.А., Хаитов Р.М., Алексеев Л.П. Иммуногенетика и биобезопасность. Медицина, Москва, 2009. 255страниц – монография
4. Хаитов Р.М., Ильина Н.И., Медуницына Е.Н. и др. (коллектив авторов). Аллергология и иммунология: национальное руководство. Под ред. Р.М. Хаитова, Н.И. Ильиной. – М.: ГЭОТАР-Медиа. – 2009. – 649 с.
5. Хаитов Р.М., Пинегин Б.В., Ярилин А.А. Атлас по иммунологии и аллергологии. – М.: ГЭОТАР-Медиа. – 2009. – 420 с.
6. Хаитов Р.М., Пинегин Б.В., Ярилин А.А. Руководство по клинической иммунологии. Диагностика заболеваний иммунной системы. Руководство для врачей. М., ГЭОТАР-Медиа. 2009. 345 с.
7. Хаитов Р.М., Решетников А.В., Сидорович И.Г., Карамов Э.В., Гудима Г.О. Клинические испытания первой отечественной анти-ВИЧ/СПИД-вакцины. 2009, Москва, «ГЭОТАР-Медиа», 680 с.
8. Ярилин А.А., Климова С.В., Симонова А.В., Пащенков М.В., Никонова М.Ф., Донецкова А.Д., Мартынов А.И., Аршинова С.С., Пинегин Б.В. Применение проточной цитометрии для оценки функциональной активности иммунной системы человека. Москва, 2009. Пособие для врачей клинической лабораторной диагностики.
9. Борисова Л.В., Яздовский В.В., Болдырева М.Н., Сергеев И.В. Особенности распределения HLA-аллелей I и II классов в Чувашской популяции. Физиология и патология иммунной системы, 2009, №3, с.21-28
10. Васильев А.А., Орадовская И.В., Мельников Г.Я., Феоктистов В.В., Викулов Г.Х., Мансурова Ю.Г., Муругина Н.Е., Скрипкина Л.Э., Трикман О.П. Зависимость частоты клинических признаков дисфункции иммунной системы от возраста среди персонала Горно-химического комбината Красноярского края, по данным мониторинга 2007- 2008 гг. Российский аллергологический журнал, 2009. – №4,– с 22-33.
11. Гудима Г.О., Сидорович И.Г., Карамов Э.В., Хаитов Р.М. Вакцины против ВИЧ-инфекции/СПИДа. Часть 1. //Физиология и патология иммунной системы. – 2009. – Т.13, №3. – С.3-20.
12. Ильина Е.В О.М. Курбачева Н.И. Ильина Способы оценки контроля бронхиальной астмы Ст., Российский аллергологический журнал, 2009, N2, стр. 6-17
13. Кофиади И.А., Хаитов Р.М., Алексеев Л.П., Сидорович И.Г., Карамов Э.В. Генетический полиморфизм человека и устойчивость к ВИЧ/СПИДу. Популяционный аспект. // Иммунология.– 2009. – Т.30, №4. – С.196-202.
14. Некрасов А.В., Н.Г. Пучкова, С.М. Харит, Беляева Т.В, Лиознов Д.А., Ельшина Г.А., Горбунов М.А., Лонская Н.И. Вакцина Гриппол® Нео: Результаты клинических исследований безопасности и реактогенности (фаза II).// Эпидемиология и вакцинопрофилактика, 2009, 5(48): 54-60.
15. Федосеева В.Н., Манько В.М., Камышева В.А., Мартынов А.И., Лункина Е.В. “ Формирование иммуно- и аллергопатологий при воздействии ОВ ФОС”, ж.”Медицина экстремальных ситуаций”, 2009 г., №2, стр.95-111.
16. Хаитов М.Р., Литвин Л.С., Шиловский И.П., Башкатова Ю.Н., Мазуров Д.В., Файзулоев Е.Б., Зверев В.В. Разработка и изучение наноструктур, обладающих РСВ-специфической противовирусной активностью in vivo. Физиология и патология иммунной системы. том 13, №6 за 2009 год, стр. 3-7.
17. Хаитов Р.М, Болдырева М.Н., Алексеев Л.П. Физиологическая роль системы HLA и популяционные аспекты. //Российский физиологический журнал им. И.М. Сеченова. – 2009. – Т.95, №3. – С.235-249.
18. Khaitov M.R, Laza-Stanca V, Edwards MR, Walton RP, Rohde G, Contoli M, Papi A, Stanciu LA, Kotenko SV, Johnston S. L. Article. Respiratory Virus Induction of Alpha- Beta- and Lambda-interferons in Bronchial Epithelial Cells and Peripheral Blood Mononuclear Cells. Article.// Allergy, 2009, v.64(3), p.375-386.
19. Perepelov Andrei V., Vyacheslav L. L’vov, Bin Liu, Sof’ya N. Senchenkova, Mariya E. Shekht, Aleksander S. Shashkov, Lu Feng, Petr G. Aparin, Lei Wang, Yuriy A. Knirel. A similarity in the O-acetylation pattern of the O-antigens of Shigella flexneri types 1a, 1b, and 2a. // Carbohydrate Research 344 (2009) 687-692.

Участие в реализации международных проектов

• Тема: «Оптимизация методов изучения макрофагов» - совместные исследования (лаборатория активации иммунитета, зав.лаб. Атауллаханов Р.И. совместно с профессором Вольфгангом Бесслером, Германия, г. Фрайбург, Университет Альберта-Людвига, на условиях личной договоренности, без всяких финансовых обязательств).Срок действия - 2009-2014 гг. Показано, что оптимальными, функциональными тестами являются реакции макрофага на бактериальный липопептид и иммуномакс.
• Тема: «Фенотип миелоидных супрессорных клеток» - совместные исследования (лаборатория активации иммунитета, зав.лабораторией Атауллаханов Р.И. совместно с профессором М.Агаджаняном, США, г. Хантингтон, Институт молекулярной медицины, на условиях личной договоренности). Срок действия – 2009-2015 гг. Определено сочетание фенотипических признаков, необходимых и достаточных для идентификации миелоидных супрессорных клеток.
• Тема: «Продукция Ил/ИФН- альвеолярными макрофагами при риновирус-индуцированных приступах бронхиальной астмы» (лаборатория нано-и биомедицинских технологий, зав. лабораторией М.Р.Хаитов совместно с Лондонским Имперским Колледжем, Великобритания по гранту GA2LEN & EAACI Exchange Research Fellowship,который выиграла сотрудник лаборатории Никонова А.А. Срок действия 2009-2010. Отработаны способы выделения альвеолярных макрофагов, а также методика инфицирования риновирусом 16 типа in vitro.