На правах рукописи
САМОТРУЕВА МАРИНА АЛЕКСАНДРОВНА
ИЗУЧЕНИЕ РЕГУЛЯТОРНЫХ МЕХАНИЗМОВ ДЕЙСТВИЯ
АНАЛОГОВ ГАМК
НА НЕЙРОИММУННУЮ СИСТЕМУ
14.03.06 – фармакология, клиническая фармакология
03.03.01 – физиология
А В Т О Р Е Ф Е Р А Т
диссертации
на соискание ученой степени
доктора медицинских наук
ВОЛГОГРАД 2012
Работа выполнена в ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения и социального развития РФ», ФГБОУ ВПО «Астраханский государственный университет Министерства образования и науки РФ» и ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения и социального развития РФ»
Научные консультанты: член-корреспондент РАМН
Заслуженный работник высшей школы РФ,
доктор медицинских наук, профессор,
Тюренков Иван Николаевич
Заслуженный работник высшей школы РФ,
доктор биологических наук, профессор
Теплый Давид Львович
Официальные оппоненты: Заслуженный деятель науки РФ,
доктор медицинских наук,
профессор К.М. Резников
Доктор медицинских наук,
профессор Д.Ш. Дубина
Доктор медицинских наук,
профессор С.В. Клаучек
Ведущая организация: ГБОУ ВПО «Ростовский государственный медицинский университет».
Защита состоится «___» _______ 2012 г. в ___ часов на заседании Диссертационного совета Д 208.008.02 при ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет Минздравсоцразвития Российской федерации» (Россия, 400131, Волгоградская область, г. Волгоград, пл. Павших Борцов, 1).
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет Минздравсоцразвития Российской федерации».
Автореферат разослан «_____»_______________2012 г.
Ученый секретарь
диссертационного совета,
доктор медицинских наук, профессор А.Р. Бабаева
Актуальность. Среди актуальных проблем экспериментальной медицины и биологии большое внимание в настоящее время уделяется вопросам нейроиммунофизиологии. Нервная и иммунная системы, участвуя в процессах гомеостаза, характеризуются высокой степенью автономии и при этом тесным и сложным двусторонним взаимодействием. Именно нейроиммунные связи играют важную роль, как при нормальном, так и при патологическом функционировании организма (Ветлугина Т.П., 2003; Черешнев В.А., 2002; Mathews H.L., 2011). Доказано, что стресс, эмоциональные и поведенческие реакции, невротические расстройства и ряд патологических состояний, таких как, нарушения мозгового кровообращения, энцефалопатии различного генеза, шизофрения, болезнь Паркинсона, эпилепсия, рассеянный склероз и др. имеют причинно-следственную связь с изменениями иммунологического статуса организма (Крыжановский Г.Н. 2010; Bhat R., 2010, Banks W.A., 2010).
Наличие общих нейрохимических, нейрофизиологических и иммунологических аспектов указанных состояний, позволило сформулировать концепцию о взаимообусловленности физиологических и патологических процессов в центральной нервной и иммунной системах (Крыжановский Г.Н. 2009, 2010; Irwin M.R., 2008; Tausk F., 2008). Данный подход актуализирует необходимость развития нового научного направления «Нейроиммунофармакология», направленного на создание новых и поиск среди известных лекарственных препаратов средств регуляции нейроиммунных взаимодействий, одним из «ключевых» факторов которых является ГАМК-ергическая система, дизрегуляция которой лежит в основе большинства заболеваний нервной системы (Калуев А.В., 2004; Bjurstm H., 2008; Wang Y., 2009).
Многочисленными исследованиями показана перспективность фармакотерапии патологии ЦНС путем воздействия на систему ГАМК (Бородкина Л.Е., 2009; Мирзоян Р.С., 2003; Тюренков И.Н., 2011). Установлено, что ГАМК-ергические вещества способны восстанавливать кровоснабжение головного мозга за счет улучшения реологических свойств крови и снижения тонуса сосудов мозга (Воронков А.В., 2011; Гаевый М.Д., Ковалев Г.В., 1985); предупреждать разрушительное действие продуктов ПОЛ и повышать активность АОС (Тюренков И.Н., 2000; Smith W.S., 2004); способствовать нормализации количественно-качественного состава фосфолипидов, оказывая протективное влияние на мембранные структуры нервной ткани (Мирзоян Р.С., 2003).
В литературе имеются сведения о модулирующем влиянии производных ГАМК на иммунную систему, проявляющемся в восстановлении фагоцитарной и метаболической функций лейкоцитов, кооперативных взаимодействии между Т- и В-клеточными звеньями иммунного ответа (Беляева С.С., 2004; Идова Г.В., 1993; Bjurstm H., 2008). При этом доказано, что реализация иммуноактивных свойств ГАМК-ергических веществ опосредуется и через центральные механизмы, и через прямое влияние на соответствующие рецепторы клеток, участвующих в иммунном ответе (Костинская Н.Е., 1990). Несмотря на наличие данных, свидетельствующих о важном значении ГАМК в жизнедеятельности организма и влиянии на различные его функции (Тюренков И.Н., 2011), роль ГАМК-ергической системы в процессах иммуномодуляции и нейроиммуномодуляции изучена недостаточно.
Исследование роли нервной системы в регуляции иммуногенеза с помощью психофармакологических средств из группы производных ГАМК представляет не только теоретический, но и практический интерес. С одной стороны, проведение такого рода работ направлено на решение фундаментальных задач, касающихся определения механизмов нейроиммунных взаимодействий. С другой стороны, полученные данные могут способствовать отработке новых патогенетически обоснованных способов лечения нейроиммунной патологии с использованием препаратов, обладающих комбинированным воздействием на иммунную и нервную системы.
Цель исследования. Создание на основе аналогов ГАМК нового класса эффективных нейроиммуномодуляторов для коррекции нарушений функциональной активности нервной и иммунной систем.
Задачи исследования.
- Оценить роль ГАМК-ергической системы в процессах иммуномодуляции, изучив влияние веществ, являющихся агонистами или антагонистами различных типов ГАМК рецепторов или изменяющих ее метаболизм, на клеточное и гуморальное звенья иммунного ответа.
- Провести в ряду структурных аналогов ГАМК, а также их солей и композиций скрининг веществ, обладающих выраженными иммуномодулирующими свойствами на модели экспериментальной иммунологической недостаточности.
- Изучить зависимость «доза – иммуномодулирующий эффект», «время – иммуномодулирующий эффект» для наиболее активных аналогов ГАМК на модели иммунологической недостаточности.
- Изучить особенности иммунореактивности и психоэмоционального состояния лабораторных животных при изменении функциональной активности иммунной системы и стрессогенном воздействии на организм под влиянием наиболее активных аналогов ГАМК.
- Изучить динамику уровня сывороточных ИЛ-1, ИЛ-4, ИЛ-6 при изменении иммунологической реактивности и стрессогенном воздействии на организм под влиянием наиболее активных аналогов ГАМК.
- Изучить механизм иммунотропного действия наиболее активных аналогов ГАМК посредством иммунофармакологического анализа их взаимодействия с основными нейромедиаторными системами in vivo.
- Обосновать перспективность разработки нейроиммуномодуляторов на основе структурных аналогов ГАМК.
Научная новизна. Впервые установлены следующие факты:
- структурные аналоги ГАМК под лабораторными шифрами РГПУ-29, РГПУ-135, РГПУ-138, РГПУ-147, РГПУ-189, РГПУ-186, РГПУ-195 и РГПУ-216 обладают в условиях иммунодепрессии выраженным иммуномодулирующим действием с характерным для каждого из них видом профилактической или терапевтической активности;
- структурные аналоги ГАМК: РГПУ-29, РГПУ-135, РГПУ-138, РГПУ-147, РГПУ-189, РГПУ-186, РГПУ-195 и РГПУ-216 – проявляют способность при изменении активности иммунной системы и стрессогенном воздействии на организм восстанавливать показатели специфического и неспецифического звеньев иммунного ответа, а также устранять проявления тревожно-депрессивных состояний, наиболее выраженная психо- и иммуномодулирующая активность характерна для РГПУ-138 и РГПУ-147;
- структурные аналоги ГАМК: РГПУ-29, РГПУ-135, РГПУ-138, РГПУ-147, РГПУ-189, РГПУ-186, РГПУ-195 и РГПУ-216, проявляя нейроиммуномодулирующую активность, регулируют уровень окислительно-восстановительных процессов как непосредственно в иммунокомпетентных органах, так и в гипоталамической области головного мозга.
- определен нейрохимический механизм иммунотропного действия фенотропила, фенибута и их производных РГПУ-138 и РГПУ-147;
- аналоги ГАМК оказывают модулирующее влияние на концентрацию «ключевых» нейроиммунных цитокинов ИЛ-1, ИЛ-4 и ИЛ-6, что очевидно объясняет механизм их нейроиммуномодулирующего действия.
Теоретическая и практическая значимость работы. Представленная работа вносит важный вклад в развитие новых научных направлений «иммунофизиология» и «нейроиммунофармакология». Участие ГАМК-ергической системы в регуляции нейроиммунных взаимодействий, доказанное в процессе исследования, имеет важное значение для понимания нейромедиаторного контроля иммунологических функций организма. Результаты, отражающие особенности психоэмоционального состояния лабораторных животных при различных вариантах изменения иммунологической реактивности, послужат основой для дальнейших углубленных исследований регуляторных влияний иммунной системы на функциональную активность нервной.
Теоретически и экспериментально обосновано создание нового класса лекарственных средств «Нейроиммуномодуляторы», одними из представителей которого являются аналоги ГАМК. Разработан алгоритм комплексной оценки нейроиммуномодулирующих свойств фармакологических веществ.
Выявлен ряд перспективных аналогов ГАМК: РГПУ-29, РГПУ-135, РГПУ-138, РГПУ-147, РГПУ-186, РГПУ-195 и РГПУ-216 для создания на их основе нейроиммуномодуляторов, эффективных при различных формах иммунопатологии, а также и в качестве средств протекции при стрессогенных воздействиях разного характера.
Реализация результатов. На основании данных диссертационного исследования разработана дальнейшая программа целенаправленного поиска веществ с нейроиммуномодулирующими свойствами среди структурных аналогов ГАМК (кафедра органической химии Российского Государственного Педагогического Университета им. А.И.Герцена). Полученные результаты о нейроиммуномодулирующих свойствах аналогов ГАМК включены в раздел учебных программ курса фармакологии на кафедрах фармакологии и биофармации ФУВ, фармакологии Волгоградского государственного медицинского университета, кафедре органической химии Пятигорской государственной фармацевтической академии, кафедрах фармакологии Воронежской государственной медицинской академии, Ростовского государственного медицинского университета, Астраханской государственной медицинской академии. По материалам настоящей работы получено 3 патента Российской Федерации на изобретение.
Основные положения, выносимые на защиту.
- Участие ГАМК-ергической системы в процессах нейроиммуномодуляции объясняет перспективность поиска среди аналогов ГАМК средств фармакологической коррекции состояний, определяющую патогенетическую роль в которых играют нарушения нейроиммунных взаимодействий.
- Способность фенибута, фенотропила, баклофена устранять иммунологические нарушения (независимо от их направленности) является фактом, свидетельствующим о возможности расширения показаний к применению указанных средств, при таких состояниях как вторичные иммунодефициты, осложнения цитостатической терапии, аутоиммунная патология, стресс-индуцированные нарушения и др.
- Модификация структуры активных аналогов ГАМК (фенибута, фенотропила, баклофена и др.) путем химического связывания с органическими кислотами (лимонной, янтарной, яблочной, глутаминовой, никотиновой и др.) является перспективным направлением в плане создания новых нейроиммуномодуляторов.
- Особенности изменений психоэмоционального состояния и иммунореактивности организма зависят от характера, продолжительности и интенсивности стрессогенного воздействия, что, в свою очередь, определяет направленность модулирующего действия фармакологических аналогов ГАМК.
- Производные ГАМК, проявляя нейроиммуномодулирующую активность, регулируют уровень окислительно-восстановительных процессов как непосредственно в иммунокомпетентных органах, так и в гипоталамической области головного мозга.
- В основе нейроиммуномодулирующего действия аналогов ГАМК лежит способность веществ восстанавливать уровень цитокинов ИЛ-1, ИЛ-4 и ИЛ-6, играющих роль «ключевых» регуляторов нейроиммунных взаимодействий.
- Среди производных ГАМК наиболее перспективны соединения РГПУ-138 и РГПУ-147, которые могут послужить основой для создания эффективных нейроиммуномодуляторов.
Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы были представлены на VII Съезде аллергологов и иммунологов СНГ (Санкт-Петербург, 2009); XVI Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2009; 2011); V Международном конгрессе «Нейронаука для медицины и психологии» (Украина, 2009); III Международной научной конференции «Экспериментальная и клиническая фармакология» (Беларусь, 2009); X Международном конгрессе «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии» (Казань, 2009); Межрегиональной научно-практической конференции «Фармацевтическая наука и практика: достижения и перспективы» (Кемерово, 2009); Международной научной конференции «Фармация и общественное здоровье» (Урал, 2010); VI Российской конференции по нейроиммунопатологии (с международным участием) (Москва, 2010); Международной научно-практической конференции «Фундаментальные и прикладные проблемы стресса» (Витебск, 2010); ХХI Съезде Физиологического общества им. И.П. Павлова (Калуга 2010). По материалам диссертации опубликовано 61 работа, из них: 24 публикации в рецензируемых ВАК журналах, а также глава в зарубежной монографии. Получено 3 патента на изобретение.
Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы «Материалы и методы», собственных экспериментальных данных, обсуждения результатов, выводов, списка литературы. Диссертация иллюстрирована 18 схемами, 96 рисунками, 70 таблицами. Список литературы содержит 474 источника: 205 отечественных и 269 зарубежных.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Эксперименты проведены на лабораторных животных: 4680 мышах линии СВА обоего пола 3-4 мес. возраста и 912 крысах-самцах линии Wistar 6-7 мес. возраста, содержавшихся в условиях вивария при естественном освещении на стандартном режиме питания (ГОСТ Р 50258-92). Все манипуляции с животными проводились с соблюдением Международных рекомендаций Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых при экспериментальных исследованиях.
В настоящей работе было проведено скрининговое исследование иммуномодулирующих свойств 45 аналогов ГАМК: производных фенибута, фенотропила, баклофена, мефебута, глутаминовой кислоты и 4-оксо-1,4-дигидропиримидина с остатком ГАМК, по результатам которого проводилось углубленное изучение психоиммуномодулирующих свойств наиболее активных соединений при цитостатическом и стрессогенном воздействии.
Таблица 1. Аналоги ГАМК
| № | Химическое соединение | Доза | № | Химическое соединение | Доза | |
| Фенибут и его производные * | МЕФЕБУТ и его производные* | |||||
| Фенибут (амино--фенилмасляная кислота) | 25 мг/кг | 25 | Мефебут (РГПУ-29) | 25 мг/кг | ||
| РПГУ-147 | 73 мг/кг | 26 | РГПУ-177 | 50 мг/кг | ||
| РГПУ-147 + Mg2+ | 75 мг/кг | 27 | РГПУ-178 | 51 мг/кг | ||
| РПГУ-149 | 48 мг/кг | 28 | РГПУ-179 | 50 мг/кг | ||
| РПГУ-150 | 49 мг/кг | 29 | РГПУ-180 | 53 мг/кг | ||
| РПГУ-151 | 48 мг/кг | 30 | РГПУ-181 | 58 мг/кг | ||
| РГПУ-152 | 60 мг/кг | 30 | РГПУ-191 | 54 мг/кг | ||
| РПГУ-189 | 50 мг/кг | Баклофен и его производные* | ||||
| РГПУ-195 | 22 мг/кг | 32 | Баклофен (-парахлорфенил ГАМК) | 10 мг/кг | ||
| Гаммоксин | 25 мг/кг | 33 | РПГУ-184 | 14 мг/кг | ||
| фенотропил и его производные * | 34 | РПГУ-185 | 9 мг/кг | |||
| Фенотропил (N-карбамоил-метил-4-фенил-2-пирролидон) | 25 мг/кг | 35 | РПГУ-186 | 9 мг/кг | ||
| РГПУ-87 | 25 мг/кг | 36 | РПГУ-188 | 9 мг/кг | ||
| РПГУ-138 | 55 мг/кг | 37 | РПГУ-190 | 10 мг/кг | ||
| РГПУ-140 | 45 мг/кг | 38 | РГПУ-193 | 10 мг/кг | ||
| РПГУ-154 | 63 мг/кг | Предшественник ГАМК – ГК и ее производные* | ||||
| РПГУ-155 | 57 мг/кг | 39 | ГК | 30 мг/кг | ||
| РГПУ-156 | 50 мг/кг | 40 | РГПУ-135 | 31 мг/кг | ||
| РГПУ-158 | 47 мг/кг | 41 | РГПУ-146 | 30 мг/кг | ||
| РГПУ-206 | 30 мг/кг | 42 | РГПУ-217 | 33 мг/кг | ||
| РГПУ-207 | 31 мг/кг | 43 | РГПУ-202 | 29 мг/кг | ||
| РГПУ-215 | 35 мг/кг | ПРОИЗВОДНЫЕ ХИНОЗОЛИНОНА-4 С ОСТАТКОМ ГАМК** | ||||
| РГПУ-216 | 35 мг/кг | 44 | N cycl QPh GABA | 37 мг/кг | ||
| производные 4-оксо-1,4- дигидропиримидина ГАМК** | 45 | Qph-GABA | 40 мг/кг | |||
| PDM-GABA | 35 мг/кг | |||||
| PDE-GABA | 35 мг/кг | |||||
На этапе скрининга вещества вводили в дозах, составляющих 1/10 от ММ (мг/кг), исключение составили производные баклофена – 1/60 от ММ (таблица 1). Соединения растворяли в 0,89% растворе NaCl ex tempore и вводили в эквимолярных концентрациях. Во всех сериях животные контрольных групп получали в качестве «плацебо» – эквивалентный объем 0,89% раствора NaCl.
Иммунореактивность животных оценивали на основании стандартных иммунофармакологических тестов: РГЗТ, РПГА, латексного теста по изучению фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови, определения массы и клеточности иммунокомпетентных органов, изучения лейкоцитарной формулы (Хаитов Р.М., 2005).
___________________
* Выражаем искреннюю благодарность зав.кафедрой органической химии РГПУ им. А.И. Герцена, з.д.н., д.х.н., проф. В.М. Берестовицкой, к.х.н., доц. О.С. Васильевой и всем сотрудникам кафедры за предоставленные для исследования вещества
** Выражаем искреннюю благодарность зав.кафедрой органической химии ПятГФА, д.х.н., проф. Э.Т. Оганесяну и всем сотрудникам кафедры за предоставленные для исследования вещества
При постановке РГЗТ иммунизацию мышей проводили однократно подкожно 1х107 эритроцитов барана (ЭБ), крыс – внутрибрюшинно (в/б) 2х108 ЭБ. Разрешающая доза антигена составляла 1х108 ЭБ. При постановке РПГА иммунизацию мышей проводили однократным в/б введением ЭБ в дозе 5х108, крыс – 2х108. Уровень плазменных ИЛ-1, ИЛ-4 и ИЛ-6 определяли с использованием твердофазного иммуноферментного метода «сэндвича» (наборы фирмы «Bender Medsystems»).
Для функциональной оценки психоэмоционального статуса животных применяли психофармакологические тесты в стандартной модификации: ОП, ПКЛ, СТ, ВП (Воронина Т.А., 1982; 2000; Калуев А.В., 2002; 2005; Porsolt R.D., 1978).
Таблица 2. Экспериментальные модели
нарушений функциональной активности нервной и иммунной систем
| Экспериментальная модель | Характер воздействия |
| Иммунодепрессия (Аркадьев В.Г., 2003) ЦИД | Циклофосфамид (150 мг/кг, внутрибрюшинно) (производитель Саранский комбинат «Биохимик», Россия) |
| Иммунный стресс (Акмаев И.Г., 2003) (в авторской модификации) ЛИС | Липополисахарид Pseudomonas aeruginosa (100 мкг/кг, внутрибрюшинно) (производитель НИИЭМ им.Н.Ф.Гамалеи/Медга-мал, Россия) |
| Острый иммобилизационно-болевой стресс (Коломейцева И.А., 1988; Hecht et. al.,1971 (в авторской модификации) ОИБС |
|
| Хронический информационно-физический стресс (Никольская К.А., 2005; Усик С.В., 1981) (в авторской модификации) ХИФС |
|
| Депрессия разной степени тяжести, сформированная в результате хронического «социального» стресса (Августинович Д.Ф., 2008) ХСС |
|
Таблица 3. Дизайн исследования
| Модельная система | Тесты | Вещества |
| 1. Изучение роли ГАМК-ергической системы в нейроиммуномодуляции | ||
| - | РГЗТ и РПГА | Мусцимол, бикукуллин, пикротоксин, баклофен, факлофен, флюмазенил, натрия вальпроат, ГК, дизоциллин |
| 2. Скрининг веществ с иммуномодулирующей активностью | ||
| ЦИД | РГЗТ и РПГА, масса тимуса и селезенки, количество тимоцитов и спленоцитов, лейкоцитарная формула | 45 производных ГАМК (таблица 1) |
| 3. Изучение зависимости «доза-иммуномодулирующее действие» «время-иммуномодулирующее действие» | ||
| ЦИД | РГЗТ и РПГА, фагоцитарная активность нейтрофилов в латексном тесте | 1. «Доза-эффект» – фенибут, баклофен, фенотропил, ГК, РГПУ-29, РГПУ-147, РГПУ-189, РГПУ-195, РГПУ-138, РГПУ-216, РГПУ-135, РГПУ-186 |
| 2. «Время-эффект» – фенибут, баклофен, фенотропил, ГК, РГПУ-29, РГПУ-147, РГПУ-189, РГПУ-195, РГПУ-138, РГПУ-216, РГПУ-135, РГПУ-186 с профилактической (за 3 дня до индукции иммунодепрессии), терапевтической (через 3 дня после индукции иммунодепрессии) целью и одновременно с индукцией патологии | ||
| 3. Курсовое введение – фенибут, баклофен, фенотропил, ГК, РГПУ-29, РГПУ-147, РГПУ-189, РГПУ-195, РГПУ-138, РГПУ-216, РГПУ-135, РГПУ-186 | ||
| 4. Изучение иммуномодулирующего действия производных ГАМК в условиях стрессогенного воздействия | ||
| ЛИС | РГЗТ и РПГА, фагоцитарная активность нейтрофилов в латексном тесте, лейкоцитарная формула | Фенибут, баклофен, фенотропил, ГК, РГПУ-29, РГПУ-147, РГПУ-189, РГПУ-195, РГПУ-138, РГПУ-216, РГПУ-135, РГПУ-186 |
| ОИБС | Фенотропил и РГПУ-138 | |
| ХИФС | Фенотропил и РГПУ-138 | |
| ХСС | Фенибут и РГПУ-147 | |
| 5. Изучение психомодулирующего действия аналогов ГАМК в условиях стрессогенного воздействия | ||
| ЦИД | «Открытое поле», «Приподнятый крестообразный лабиринт», «Вынужденное плавание» («Порсолт»), «Суок-тест» | Фенибут, баклофен, фенотропил, ГК, РГПУ-29, РГПУ-147, РГПУ-189, РГПУ-195, РГПУ-138, РГПУ-216, РГПУ-135, РГПУ-186 |
| ЛИС | Фенибут, баклофен, фенотропил, ГК, РГПУ-29, РГПУ-147, РГПУ-189, РГПУ-195, РГПУ-138, РГПУ-216, РГПУ-135, РГПУ-186 | |
| ОИБС | Фенотропил и РГПУ-138 | |
| ХИФС | Фенотропил и РГПУ-138 | |
| ХСС | Фенибут и РГПУ-147 | |
| 6. Изучение антиоксидантного действия аналогов ГАМК | ||
| ЦИД | 1. Содержание МДА, церулоплазмина, активность каталазы в сыворотке крови. 2. Содержание МДА, скорости аскорбатзависимого и спонтанного ПОЛ, активность каталазы в гомогенате тимуса и селезенки 3. Содержание МДА, скорости аскорбатзависимого и спонтанного ПОЛ, активность каталазы в гомогенате гипоталамической области и префронтальной коры головного мозга | Фенибут, баклофен, фенотропил, ГК, РГПУ-29, РГПУ-147, РГПУ-189, РГПУ-195, РГПУ-138, РГПУ-216, РГПУ-135, РГПУ-186 |
| ЛИС | Фенибут, баклофен, фенотропил, ГК, РГПУ-29, РГПУ-147, РГПУ-189, РГПУ-195, РГПУ-138, РГПУ-216, РГПУ-135, РГПУ-186 | |
| ОИБС | Фенотропил и РГПУ-138 | |
| ХИФС | Фенотропил и РГПУ-138 | |
| ХСС | Фенибут и РГПУ-147 | |
| 7. Изучение возможных механизмов нейроиммуномодулирующего действия аналогов ГАМК | ||
| ЦИД | Уровень плазменных ИЛ-1, ИЛ-4 и ИЛ-6 | Фенибут, фенотропил, РГПУ-138, РГПУ-147 |
| ЛИС | Фенибут, фенотропил, РГПУ-138, РГПУ-147 | |
| ОИБС | Фенотропил и РГПУ-138 | |
| ХСС | Фенибут и РГПУ-147 | |
| - | РГЗТ и РПГА, масса тимуса и селезенки, количество тимоцитов и спленоцитов | Фенотропил и РГПУ-138, фенибут и РГПУ-147 при взаимодействии с антагонистами рецепторов основных нейромедиаторов ЦНС in vivo |
Интенсивность окислительно-восстановительных процессов иммунокомпетентных органов тимуса и селезенки, а также гипоталамической области и префронтальной коры головного мозга оценивали по ПОЛ (исходное, спонтанное и аскорбатзависимое) и активности каталазы в гомогенатах органов. Кроме того, интенсивность антиоксидантной защиты всего организма оценивали по уровню активности каталазы, содержанию МДА и церулоплазмина в сыворотке крови (Гончаренко М.С., 1985; Королюк М.А., 1988; Стальная И.Д., 1977; Тен Э.В., 1981).
Статистическую обработку результатов исследования осуществляли с помощью пакетов программ: Microsoft Office Excel 2007, BIOSTAT 2008 Professional 5.1.3.1, а также «БИОСТАТИКА». В зависимости от характера полученных результатов использовали параметрический метод с определением t-критерия Стьюдента с поправкой Бонферрони и Ньюмена-Кейлса для множественных сравнений, однофакторный дисперсионный анализ с определением критерия Тьюки-Крамера, критерия Шеффера, а также метод рангового однофакторного анализа Крускала-Уоллиса, критерий Данна для множественных сравнений.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Изучение роли ГАМК-ергической системы в процессах нейроиммуномодуляции проводили с применением иммунофизиологического подхода с использованием веществ, являющихся агонистами или антагонистами ГАМК рецепторов или изменяющих ее метаболизм. Применяли анализаторы: мусцимол 2 мг/кг (Sigma, США) – селективный агонист ГАМКА рецепторов; бикукуллин 1,5 мг/кг (Fluka, Швейцария) – селективный антагонист ГАМКА рецепторов; пикротоксин 2 мг/кг (Sigma, США) – неконкурентный антагонист пресинаптических ГАМКА рецепторов, блокатор хлорных каналов ГАМКА-БД ионофорного комплекса; баклофен 10 мг/кг (LEIRAS, Финляндия) – агонист ГАМКВ рецепторов; факлофен 10 мг/кг (Sigma, США) – антагонист ГАМКВ рецепторов; флюмазенил 0,01 мг/кг (Hoffman La Roche Co, Швейцария) – антагонист БД сайта ГАМКА-БД ионофорного комплекса; натрия вальпроат 0,15 мг/кг ("SANOFI-AVENTIS", Франция) – ингибитор ГАМК-трансаминазы и активатор глутаматдекарбоксилазы; L-глутаминовая кислота 10 мг/кг (Sigma, США); дизоциллин 0,15 мг/кг (Sigma, США) – антагонист NMDA-рецепторов. Полученные результаты показали, что активация ГАМК-ергической системы, независимо от того, каким путем она достигнута: применением агонистов ГАМКА рецепторов, антагонистов ГАМКБ рецепторов или средств, повышающих концентрацию ГАМК в синаптическом пространстве – приводит к повышению иммунологической реактивности (рисунок 1). Это указывает на важное значение нейромедиаторной системы в регуляции нейроиммунных взаимодействий и делает очевидной перспективность разработки нейроиммуномодуляторов на основе аналогов ГАМК.
Рисунок 1. Показатели клеточного и гуморального звеньев иммунного ответа
при изменении активности ГАМК-ергической системы
Примечание: * - p<0,05 – достоверность различий по сравнению с контрольной группой (t-критерий Стьюдента с поправкой Бонферрони и Ньюмена-Кейлса для множественных сравнений)
Волгоградскими и астраханскими фармакологами и физиологами в тесном сотрудничестве с химиками Российского государственного педагогического университета им. А.И. Герцена (г.Санкт-Петербург) и Пятигорской государственной фармацевтической академии ведутся активные фармакологические разработки химических соединений, являющихся аналогами ГАМК.
При изучении влияния аналогов ГАМК на процессы нейроиммуномодуляции первым этапом являлось скрининговое изучение иммунотропных свойств 45 веществ (таблица 1). Основной задачей скрининга было выявление перспективных соединений, обладающих выраженным иммунокорригирующим действием в условиях экспериментальной иммуносупрессии для дальнейшей разработки новых нейроиммуномодуляторов и/или расширения спектра фармакологической активности известных средств данной химической группы.
Принимая во внимание противоречивость сведений о способности нейроактивных аминокислот и их аналогов нивелировать изменения активности иммунной системы, мы посчитали актуальным провести изучение иммунотропных свойств указанных выше соединений на модели ЦИД. Как показывают данные литературы, подтвержденные и нашими исследованиями, на фоне воздействия ЦФА происходит угнетение всех звеньев иммуногенеза, что свидетельствует о развитии тотальной иммунодепрессии (Алехин Е.К., 1993; Аркадьев В.Г. и др., 2003; Лебединская Е.А. и др., 2010; Телегин Л.Ю., 2010; Lambert J.V., 2002).
В ходе скрининга выявлены вещества, обладающие выраженной активностью: РГПУ-29, РГПУ-135, РГПУ-138, РГПУ-147, РГПУ-186, РГПУ-189, РГПУ-195 и РГПУ-216, а также исходные вещества – фенибут, фенотропил и баклофен. Перечисленные аналоги ГАМК в большей степени проявляли способность уменьшать выраженность нарушений иммунного гомеостаза, восстанавливая активность клеточного и гуморального звеньев иммунного ответа, а также пролиферативные процессы в иммунокомпетентных органов у животных, что можно расценивать как проявление ими иммунокорригирующих свойств.
Для детализации направленности иммунотропного действия перечисленных выше веществ было выполнено изучение зависимости их активности от дозы, выбор которых проводился с учетом: 1) результатов проведенного ранее на кафедре фармакологии и биофармации ФУВ ВолГМУ и лаборатории токсикологии НИИ фармакологии ВолГМУ изучения токсичности (для РГПУ-147 ЛД50 при в/б введении составляет 1709 мг/кг для крыс самцов и 1491 мг/кг для крыс-самок); 2) результатов проведенного нами скрининга с последующим двукратным увеличением и снижением изучаемой дозы (РГПУ-29; РГПУ-135; РГПУ-138; РГПУ-186; РГПУ-189; РГПУ-195; РГПУ-216); 3) терапевтической дозы также с последующим двукратным ее изменением (для исходных веществ). Согласно требованиям Фармакологического Комитета МЗ РФ, изложенным в Руководстве по экспериментальному изучению новых фармакологических веществ (Под ред. Р.У. Хабриева) изучение зависимости «доза-эффект» для РГПУ-147 проведено в дозах: 1/10 ЛД50 (150 мг/кг), 1/30 ЛД50 (50 мг/кг), 1/100 ЛД50 (15 мг/кг) и 1/150 ЛД50 (10 мг/кг). Для изучения иммунотропной активности других новых производных ГАМК были выбраны следующие дозы: 1/5, 1/10, 1/20 и 1/40 ММ, за исключением РГПУ-186, для которого выбраны дозы 1/30, 1/60, 1/120 и 1/240 ММ.
Анализируя степень выраженности корригирующего действия аналогов ГАМК на иммунореактивность животных, получавших ЦФА, мы определили для каждого из веществ наиболее активные дозы. Наиболее выраженное действие аналоги ГАМК проявляли в дозах, составляющих 1/10 и 1/20 ММ. Исключением явилось соединение РГПУ-186, которое наиболее эффективно было в дозе 1/240 ММ. В минимальных (1/40 ММ) и максимальных (1/5 ММ) из применяемых доз вещества оказывали незначительное иммунотропное действие. Фенибут и фенотропил наиболее значимое иммунокорригирующее действие проявляют в дозах 25 мг/кг и 50 мг/кг, тогда как двухкратное увеличение и снижение дозы сопровождается менее интенсивной восстанавливающей способностью. Интерес представляют результаты, полученные при оценке иммунотропной активности баклофена: по мере увеличения дозы (от 2 мг/кг до 20 мг/кг) корригирующее влияние вещества угасает.
Рисунок 2. Показатели РГЗТ и РПГА под влиянием аналогов ГАМК
при применении в различные сроки относительно индукции иммуносупрессии
(% по отношению к показателям в группе животных с иммунодепрессией)
Изучение активности аналогов ГАМК в аспекте «время-эффект» показало, что для каждого из изучаемых веществ характерен определенный тип (профилактический и/или терапевтический) направленности иммунотропного действия (рисунок 2). Аналоги ГАМК были разделены на следующие группы: 1) вещества преимущественно профилактического действия – фенотропил, РГПУ-138 и РГПУ-195; 2) вещества преимущественно лечебного действия – баклофен, ГК, РГПУ-29, РГПУ-135, РГПУ-147, РГПУ-186; 3) вещества, проявляющие активность в большей степени при применении одновременно с антигенным и цитотоксическим воздействием – фенибут, РГПУ-29 и РГПУ-147; 4) вещества комбинированного лечебно-профилактического действия – РГПУ-147, РГПУ-189, РГПУ-195, РГПУ-216.
Дальнейшее изучение психо- и иммуномодулирующих свойств аналогов ГАМК проводили с использованием наиболее эффективных доз и, принимая во внимание особенности их иммунопротективного и иммунотерапевтического действия.
В течение многих десятилетий основная цель прикладной иммунологии сводилась к поиску возможных стимуляторов иммунной системы (Алехин Е.К. и др., 1994; Кржечковская В.В., 2006; Оковитый С.В., 2003). Однако, в период разработки аутоиммунной теории большинства заболеваний центральной нервной и других систем организма, возникла острая потребность в средствах, проявляющих иммуномодулирующие свойства, эффективность которых определяется исходным состоянием иммунитета. В связи с этим целостное заключение об эффективности иммунотропных веществ невозможно без оценки их активности на модели гипериммунизации. В качестве экспериментальной модели был выбран ЛПС-индуцированный иммунный стресс, сопровождающийся активацией всех звеньев иммуногенеза (рисунок 3). Было установлено, что наиболее выраженной способностью устранять развивающиеся при остром иммунном стрессе явления гиперреактивности клеточного звена иммунного ответа, а также процессов фагоцитоза обладали РГПУ-135, РГПУ-138, РГПУ-147 и РГПУ-189. В отношении гуморальной иммунореактивности корригирующее действие проявил лишь РГПУ-138 (рисунок 3).
Принимая во внимание тот факт, что иммунная и кроветворная системы тесно взаимосвязаны и оценка лейкопоэзмодулирующей активности фармакологических средств является подтверждением наличия иммунотропного действия, мы посчитали актуальным изучить способность производных ГАМК уменьшать или полностью устранять нарушения в процессе лейкопоэза. Было установлено, что ЦФА вызывает лейкопению за счет уменьшения числа лимфоцитов, сегментоядерных нейтрофилов и эозинофилов на фоне увеличения числа палочкоядерных форм нейтрофилов. Применение ЛПС сопровождалось явлениями лейкоцитоза за счет нарастания относительного числа сегментоядерных нейтрофилов (рисунок 4).
Рисунок 3. Показатели РГЗТ и РПГА в условиях ЛПС-индуцированного иммунного стресса
под влиянием аналогов ГАМК
Примечание: и * - p<0,05 – достоверность различий по сравнению с контролем 1 и 2 соответственно (t-критерий Стьюдента с поправкой Бонферрони и Ньюмена-Кейлса для множественных сравнений)
Исследование влияния производных ГАМК на лейкопоэз при воздействии ЦФА показало, что фенотропил, РГПУ-29, РГПУ-138, РГПУ-147, РГПУ-189, РГПУ-195 и РГПУ-216 оказывают выраженное стимулирующее действие на процессы восстановления костномозгового кроветворения, «заблокированного» цитостатиком (рисунок 4). При иммунном стрессе, приводящем к резкому повышению количества лейкоцитов в крови, аналоги ГАМК корригируют состояние процессов кроветворения. При этом, восстановление количества лейкоцитов до контрольных параметров отмечается у животных, получавших фенибут, фенотропил, баклофен и соединения РГПУ-138, РГПУ-147, РГПУ-189, а коррекция лейкоцитарного профиля наблюдается под влиянием фенотропила, фенибута, РГПУ-135, РГПУ-138, РГПУ-147, РГПУ-186. Восстановление соотношения нейтрофилы/лимфоциты в сторону увеличения доли последних, свидетельствует о способности аналогов ГАМК устранять ингибирующее влияние иммунного стресса на лимфоидный росток и уменьшать явления гранулоцитарной гиперплазии клеток крови (рисунок 4).
Рисунок 4. Показатели лейкограммы на фоне применения ЦФА и ЛПС
под влиянием аналогов ГАМК
Примечание: и * - p<0,05 – достоверность различий по сравнению с контролем 1 и 2 соответственно (t-критерий Стьюдента с поправкой Бонферрони и Ньюмена-Кейлса для множественных сравнений)
В литературе часто поднимается вопрос о том, имеют ли нарушения иммунореактивности при нервно-психической патологии реальное патогенетическое значение или же они являются не более чем вторичными признаками процесса. До настоящего времени этот вопрос однозначно не решен, хотя в ряде экспериментальных и клинических исследований отмечена выраженная связь между развитием иммунных и психоэмоциональных нарушений (Крыжановский Г.Н. и др., 2010; Tausk F. et al., 2008). В связи с этим, актуально изучение возможных причинно-следственных связей между формированием иммунного дисбаланса и изменением поведенческих реакций и психоиммунокорригирующего действия аналогов ГАМК.
Установлено, что любое воздействие на иммунитет сопровождается изменением психоэмоционального статуса. При тестировании животных в ОП, ПКЛ, СТ и ВП получены данные, указывающие на формирование, как в условиях иммунной недостаточности, так и при иммунном стрессе изменений поведения животных тревожно-депрессивного характера. Показано, что наиболее выраженное психомодулирующее действие проявляют фенотропил, фенибут, РГПУ-135, РГПУ-138, РГПУ-147, устраняя ЦФА- и ЛПС-спровоцированные вторичные нарушения поведения (таблицы 4-9).
Таблица 4. Влияние фенотропила и его производных на поведение животных в СТ
в условиях ЦФА-индуцированной иммунодепрессии
| Экспериментальные группы (n = 8) Поведенческие показатели (M ± m) | Контроль 1 (физ. раствор) | Контроль 2 (ЦФА) | Фенотропил (25 мг/кг) + ЦФА | РГПУ-138 (50 мг/кг) + ЦФА | РГПРУ-216 (35 мг/кг) + ЦФА |
| Светлый отсек СТ | |||||
| Время, проведенное в отсеке, с | 75,1 ± 9,9 | 21,9 ± 2,7 | 52,4 ± 3,9*** | 55,9 ± 7,3*** | 38,3 ± 3,9* |
| Число посещенных сегментов | 17,3 ± 3,6 | 3,3 ± 0,75 | 21,4 ± 2,6*** | 22,6 ± 4,0*** | 24,3 ± 3,8*** |
| Число остановок в отсеке | 3,3 ± 0,22 | 2,0 ± 0,22 | 2,4 ± 0,32 | 1,4 ± 0,22 | 2,5 ± 0,32 |
| Исследовательские «заглядывания» вниз | 6,0 ± 0,7 | 2,0 ± 0,22 | 6,9 ± 0,65*** | 6,0 ± 0,65*** | 6,5 ± 0,65*** |
| Направленные движения головой | 9,3 ± 0,97 | 2,1 ± 0,1 | 9,5 ± 0,97*** | 9,0 ± 0,76*** | 9,5 ± 0,65*** |
| Средняя скорость, посещенные сегменты/время в отсеке | 0,23 ± 0,02 | 0,14 ± 0,009 | 0,4 ± 0,01*** | 0,41 ± 0,02*** | 0,63 ± 0,01*** |
| Темный отсек СТ | |||||
| Время, проведенное в отсеке, с | 218,0 ± 9,3 | 264,4 ± 5,9 | 250,9 ± 9,3 | 237,9 ± 7,1 | 260,9 ± 3,8 |
| Число посещенных сегментов | 45,8 ± 5,8 | 24,6 ± 2,1 | 48,4 ± 2,6*** | 43,8 ± 2,3*** | 30,5 ± 1,6 |
| Число остановок в отсеке | 5,9 ± 0,65 | 8,5 ± 0,76 | 3,3 ± 0,32*** | 5,1 ± 0,43** | 4,1 ± 0,32*** |
| Исследовательские «заглядывания» вниз | 10,8 ± 1,2 | 5,5 ± 0,54 | 11,0 ± 0,43*** | 10,1 ± 1,4*** | 9,6 ± 0,65** |
| Направленные движения головой | 16,0 ± 2,9 | 8,1 ± 0,54 | 17,6 ± 0,86*** | 14,3 ± 1,7*** | 14,5 ± 1,3** |
| Средняя скорость, посещенные сегменты/время в отсеке | 0,21 ± 0,02 | 0,09 ± 0,002 | 0,19 ± 0,04*** | 0,18 ± 0,02*** | 0,12 ± 0,02** |
| Средняя скорость движения, посещенные сегменты/300с | 0,24 ± 0,01 | 0,04 ± 0,01 | 0,16 ± 0,01*** | 0,18 ± 0,01*** | 0,17 ± 0,01*** |
| Латентный период выхода из центра, с | 6,9 ± 1,2 | 13,8 ± 2,7 | 5,4 ± 1,2*** | 6,4 ± 1,1*** | 6,4 ± 0,76*** |
| Соскальзывания задних лап | 0,87 ± 0,1 | 5,1 ± 0,5 | 0*** | 0*** | 0*** |
| Число фекальных болюсов | 0,75 ± 0,22 | 1,8 ± 0,43 | 0,5 ± 0,1*** | 0,37 ± 0,1*** | 0,37 ± 0,1*** |
| Фризинг, с | 0 | 47,4 ± 3,78 | 0*** | 0*** | 0*** |
| Кратковременный груминг, | 0,62 ± 0,1 | 2,4 ± 0,22 | 0,82 ± 0,1*** | 0,57 ± 0,1*** | 1,6 ± 0,1* |
| Переходы через центр | 2,8 ± 0,43 | 0,87 ± 0,1 | 1,8 ± 0,2*** | 2,4 ± 0,3*** | 1,9 ± 0,2* |
Примечание: В таблицах 4-9: и * - р<0,05 достоверность различий по сравнению с контролем 1 и с контролем 2 соответственно (ранговый однофакторный анализ Крускала-Уоллиса, критерий Дана для множественных сравнений)
Таблица 5. Влияние фенибута и его производных на поведение животных в СТ
в условиях ЦФА-индуцированной иммунодепрессии
| Экспериментальные группы (n = 8) Поведенческие показатели (M ± m) | Контроль 1 (физ. раствор) | Контроль 2 (ЦФА) | Фенибут (25 мг/кг) + ЦФА | РГПУ-29 (25 мг/кг) + ЦФА | РГПУ-147 (50 мг/кг) + ЦФА | РГПРУ-189 (50 мг/кг) + ЦФА | РГПУ-195 (25 мг/кг) + ЦФА |
| Светлый отсек СТ | |||||||
| Время, проведенное в отсеке, с | 75,1 ± 9,9 | 21,9 ± 2,7 | 47,5 ± 4,9** | 43,6 ± 7,5* | 52,6 ± 8,6** | 45,9 ± 3,9* | 45,3 ± 7,8* |
| Число посещенных сегментов | 17,3 ± 3,6 | 3,3 ± 0,75 | 19,3 ± 1,5*** | 15,6 ± 2,9*** | 17,3 ± 3,2*** | 16,5 ± 2,3*** | 16,6 ± 2,9*** |
| Число остановок в отсеке | 3,3 ± 0,22 | 2,0 ± 0,22 | 2,3 ± 0,32 | 2,0 ± 0,32 | 2,3 ± 0,32 | 3,8 ± 0,32* | 3,4 ± 0,54* |
| Исследовательские «заглядывания» вниз | 6,0 ± 0,7 | 2,0 ± 0,22 | 7,1 ± 0,76*** | 4,0 ± 0,65** | 5,0 ± 0,65*** | 4,9 ± 0,22*** | 5,1 ± 0,65*** |
| Направленные движения головой | 9,3 ± 0,97 | 2,1 ± 0,1 | 8,5 ± 0,43*** | 5,5 ± 0,8** | 5,6 ± 0,65*** | 6,5 ± 0,32*** | 7,1 ± 0,54*** |
| Средняя скорость, посещенные сегменты/время в отсеке | 0,23 ± 0,02 | 0,14 ± 0,009 | 0,4 ± 0,02*** | 0,36 ± 0,01*** | 0,32 ± 0,01*** | 0,37 ± 0,02*** | 0,38 ± 0,01*** |
| Темный отсек СТ | |||||||
| Время, проведенное в отсеке, с | 218,0 ± 9,3 | 264,4 ± 5,9 | 251,0 ± 5,0 | 250,9 ± 9,3 | 238,9 ± 10,9 | 244,3 ± 3,99 | 246,6 ± 5,7 |
| Число посещенных сегментов | 45,8 ± 5,8 | 24,6 ± 2,1 | 36,4 ± 2,3* | 40,9 ± 4,4** | 41,9 ± 2,3*** | 35,9 ± 4,1 | 37,1 ± 4,4* |
| Число остановок в отсеке | 5,9 ± 0,65 | 8,5 ± 0,76 | 4,4 ± 0.43* | 5,1 ± 0,65** | 5,1 ± 0,65** | 5,1 ± 0,65* | 4,3 ± 0,32* |
| Исследовательские «заглядывания» вниз | 10,8 ± 1,2 | 5,5 ± 0,54 | 9,1 ± 0,76** | 10,1 ± 1,1*** | 6,9 ± 0,2 | 8,8 ± 0,43* | 9,9 ± 0,76*** |
| Направленные движения головой | 16,0 ± 2,9 | 8,1 ± 0,54 | 12,8 ± 0,97** | 16,9 ± 0,76*** | 12,1 ± 1,1* | 11,0 ± 0,76** | 11,9 ± 1,5* |
| Средняя скорость, посещенные сегменты/время в отсеке | 0,21 ± 0,02 | 0,09 ± 0,002 | 0,14 ± 0,03* | 0,16 ± 0,02* | 0,18 ± 0,02** | 0,15± 0,03* | 0,15 ± 0,02* |
| Средняя скорость движения, посещенные сегменты/300 с | 0,24 ± 0,01 | 0,04 ± 0,01 | 0,19 ± 0,01*** | 0,22 ± 0,01*** | 0,27 ± 0,02*** | 0,24 ± 0,01*** | 0,22 ± 0,02*** |
| Латентный период выхода из центра, с | 6,9 ± 1,2 | 13,8 ± 2,7 | 7,5 ± 1,1*** | 5,5 ± 0,86*** | 6,9 ± 0,55*** | 9,9 ± 1,6* | 8,1 ± 0,76** |
| Соскальзывания задних лап | 0,87 ± 0,1 | 5,1 ± 0,5 | 2,0 ± 0,22*** | 1,3 ± 0,22*** | 1,4 ± 0,22*** | 3,1 ± 0,22* | 2,0 ± 0,22*** |
| Фекальные болюсы | 0,75 ± 0,22 | 1,8 ± 0,43 | 0,37 ± 0,1*** | 0,37 ± 0,1*** | 0,62 ± 0,1*** | 0*** | 0,37 ± 0,1*** |
| Фризинг, с | 0 | 47,4 ± 3,78 | 6,9 ± 0,54*** | 8,6 ± 1,7*** | 7,5 ± 1,1*** | 9,1 ± 1,2*** | 10,9 ± 0,76*** |
| Кратковременный груминг | 0,62 ± 0,1 | 2,4 ± 0,22 | 0*** | 0*** | 0,5 ± 0,43*** | 0,37 ± 0,1*** | 0,25 ± 0,22*** |
| Переходы через центр | 2,8 ± 0,43 | 0,87 ± 0,1 | 1,4 ± 0,1* | 2,4 ± 0,3*** | 1,6 ± 0,22* | 1,9 ± 0,22* | 1,4 ± 005* |
| Остановка на границе | 5,6 ± 1,3 | 14,4 ± 2,7 | 0,75 ± 0,22*** | 5,3 ± 1,8*** | 3,6 ± 0,02*** | 1,1 ± 0,1*** | 0,37 ± 0,1*** |
| Падения вниз | 0 | 0,37 ± 0,002 | 0*** | 0*** | 0*** | 0,12 ± 0,1* | 0,12 ± 0,1* |
| Таблица 6. Влияние баклофена, ГК и их производных на поведение животных в СТ в условиях ЦФА-индуцированной иммунодепрессии | ||||||
| Экспериментальные группы (n = 8) Поведенческие показатели (M ± m) | Контроль 1 (физ. раствор) | Контроль 2 (ЦФА) | Баклофен (2 мг/кг) + ЦФА | РГПУ-186 (2,3 мг/кг) + ЦФА | ГК (30 мг/кг) + ЦФА | РГПУ-135 (30 мг/кг) + ЦФА |
| Светлый отсек СТ | ||||||
| Время, проведенное в отсеке, с | 44,9 ± 9,2 | 4,5 ± 0,86 | 36,9 ± 5,7*** | 43,1 ± 5,9*** | 26,7 ± 5,3*** | 44,2 ± 5,4*** |
| Число посещенных сегментов | 9,8 ± 1,2 | 3,9 ± 0,1 | 11,9 ± 1,7*** | 10,1 ± 0,76*** | 6,9 ± 1,6* | 12,3 ± 0,5*** |
| Число остановок в отсеке | 1,1 ± 0,21 | 0,25 ± 0,1 | 3,9 ± 0,54*** | 2,6 ± 0,43*** | 1,7 ± 0,54*** | 1,6 ± 0,43** |
| Исследовательские «заглядывания» вниз | 4,5 ± 0,86 | 0,25 ± 0,1 | 5,6 ± 0,76*** | 6,9 ± 0,43*** | 3,6 ± 0,76*** | 6,8 ± 0,43*** |
| Направленные движения головой | 7,4 ± 1,5 | 0,37 ± 0,1 | 7,8 ± 0,54*** | 8,6 ± 0,65*** | 5,8 ± 0,54*** | 9,6 ± 0,65*** |
| Средняя скорость, посещенные сегменты/время в отсеке | 0,22 ± 0,02 | 0,07 ± 0,009 | 0,32 ± 0,02*** | 0,23 ± 0,01*** | 0,26 ± 0,02*** | 0,27 ± 0,01*** |
| Темный отсек СТ | ||||||
| Время, проведенное в отсеке, с | 242,1 ± 11,0 | 270,8 ± 3,2 | 257,1 ± 6,6 | 251,4 ± 6,8 | 267,1 ± 6,6 | 261,4 ± 6,8 |
| Число посещенных сегментов | 35,8 ± 4,2 | 12,5 ± 3,1 | 28,6 ± 2,8* | 27,1 ± 2,4* | 29,6 ± 2,5* | 39,1 ± 2,4*** |
| Число остановок в отсеке | 3,1 ± 0,22 | 7,6 ± 0,43 | 5,4 ± 0,32* | 4,1 ± 0,54** | 5,4 ± 0,32* | 4,1 ± 0,54** |
| Исследовательские «заглядывания» вниз | 8,9 ± 0,43 | 4,5 ± 0,76 | 8,3 ± 0,54** | 9,6 ± 0,65** | 8,3 ± 0,54** | 9,6 ± 0,65** |
| Направленные движения головой | 12,0 ± 0,97 | 8,3 ± 0,86 | 12,6 ± 1,3* | 13,5 ± 0,76** | 10,6 ± 1,3 | 12,5 ± 0,67* |
| Средняя скорость, посещенные сегменты/время в отсеке | 0,15 ± 0,02 | 0,05 ± 0,002 | 0,11 ± 0,02*** | 0,11 ± 0,02*** | 0,11 ± 0,01*** | 0,15 ± 0,02*** |
| Средняя скорость движения, посещенные сегменты/300 с | 0,35 ± 0,01 | 0,1 ± 0,02 | 0,29 ± 0,02** | 0,34 ± 0,01*** | 0,30 ± 0,02* | 0,35 ± 0,01*** |
| ЛП выхода из центра, с | 13,0 ± 1,8 | 25,8 ± 8,1 | 6,0 ± 0,86*** | 5,0 ± 1,1*** | 12,0 ± 0,86* | 5,4 ± 1,1*** |
| Соскальзывания задних лап | 0,87 ± 0,1 | 5,1 ± 0,54 | 2,6 ± 0,32*** | 1,8 ± 0,32*** | 3,6 ± 0,32* | 0*** |
| Фризинг, с | 0 | 47,4 ± 3,8 | 10,9 ± 2,7*** | 0*** | 21,7 ± 2,6** | 0*** |
| Фекальные болюсы | 0,37 ± 0,1 | 1,4 ± 0,22 | 0,37 ± 0,1** | 0,37 ± 0,1** | 0,37 ± 0,1*** | 0,37 ± 0,1*** |
| Кратковременный груминг | 0,62 ± 0,1 | 1,4 ±0,22 | 0,12 ± 0,1*** | 0*** | 0,12 ± 0,1*** | 0*** |
| Переходы через центр | 1,3 ± 0,1 | 0,37 ± 0,1 | 1,4 ± 0,1*** | 2,0 ± 0,22*** | 1,4 ± 0,1** | 2,0 ± 0,22** |
| Падения вниз | 0 | 0,37 ± 0,001 | 0*** | 0*** | 0*** | 0*** |
