Диагностика и специфическая профилактика инфекционного энцефаломиелита перепелов
ТАДЖИКСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК
ИНСТИТУТ ВЕТЕРИНАРИИ
На правах рукописи
ШАРИПОВ МАХМАДУЛЛО АЗИЗОВИЧ
ДИАГНОСТИКА И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА ИНФЕКЦИОННОГО ЭНЦЕФАЛОМИЕЛИТА ПЕРЕПЕЛОВ
06.02.02 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология,
микология с микотоксикологией и иммунология
АВТОРЕФЕРАТ
на соискание ученой степени
кандидата ветеринарных наук
Душанбе – 2012
Работа выполнена в болезней птиц Института Ветеринарии Таджикской академии сельскохозяйственных наук, Национальном центре ветеринарной диагностики Службы государственного ветеринарного надзора Министерства сельского хозяйства Республики Таджикистан.
| Научный руководитель: | доктор ветеринарных наук Салимов Тоджиддин Мухиддинович |
| Научный консультант: | доктор ветеринарных наук, профессор, член-корреспондент ТАСХН Мирзоев Давлатали Мирзоевич |
| Официальные оппоненты: | кандидат ветеринарных наук Дмитриева Маргарита Евгеньевна доктор ветеринарных наук Хабибов Абдуджалил Халилович |
| Ведущая организация: | Национальный центр ветеринарной диагностики СГВН МСХ РТ |
| Защита диссертации состоится « 23 » апреля 2012 г. в 10.00 часов на заседании диссертационного совета ДМ 050.001.01 при Институте ветеринарии Таджикской академии сельскохозяйственных наук по адресу: 734005, Республика Таджикистан, г. Душанбе, ул. А. Каххорова, 43, ИВ ТАСХН, тел. (992-372) 27-39-95. | |
| С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института ветеринарии ТАСХН. | |
| Автореферат разослан « 23 » марта 2012 г. | |
Ученый секретарь
диссертационного совета,
кандидат ветеринарных наук З.Д. Ашурова
1. ОБЩАЯ ХАРАКЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность проблемы. Условия рыночных отношений, в которых развивается современное промышленное птицеводство, характеризуются значительным ростом конкуренции, при которой успех предприятия на рынке зависит от качества выпускаемой продукции и эффективности производства, определяющих конечный финансовый результат. требует Постоянное расширение производства продукции птицеводства, что требует увеличения плотности поголовья, обусловлено ростом потребительского спроса. У птицеводческих предприятий появляются новые серьезные проблемы, связанные с заболеваниями домашней птицы, среди которых значительный экономический ущерб наносят инфекционные, особенно, вирусные болезни, в том числе инфекционный энцефаломиелит птиц (ИЭП) [**20, 145].
Инфекционный энцефаломиелит птиц (эпизоотический тремор, болезнь из Новой Англии) – остро протекающее вирусное заболевание, которое имеет широкое распространение во всем мире [**20, 78, 145, 214, 216] и является причиной значительных экономических проблем – потерь от падежа птицы, снижения мясной и яичной продуктивности, выводимости цыплят, дополнительных затрат на профилактику и ликвидацию болезни [**20, 22, 62, 69, 103, 145]. Поэтому быстрая и эффективная диагностика болезни позволяет прогнозировать развитие эпизоотического процесса, оценить возможный экономический ущерб, своевременно и правильно разработать план мероприятий по ликвидации инфекционного заболевания и дальнейшей производственной деятельности.
В хозяйствах, где не проводится вакцинация против ИЭП, несмотря на то, что клиническое заболевание встречается не часто, существует вероятность его возникновения, поэтому проблема диагностики и профилактики данной патологии остается актуальной [**214, 216].
Цель работы – на примере имевшего место заболевания на одной из перепеловодческих ферм Республики Таджикистан изучить наиболее эффективные методы диагностики, профилактики и контроля ИЭП.
В соответствии с целью работы в задачи исследований входило:
1. Изучить клинические и патоморфологические признаки ИЭП.
2. Описать развитие заболевания и определить его последствия (заболеваемость, падеж, влияние на рост и развитие переболевшей птицы).
3. Провести серологическое и гистологическое исследования патологического материала.
4. Исследовать формирование у перепелок иммунитета к ИЭП, разработать схему вакцинации птицы против инфекционных заболеваний вирусной этиологии.
5. На основе полученных результатов разработать рекомендации по диагностике и профилактике ИЭП.
Научная новизна. Впервые в Республике Таджикистан диагностирован инфекционный энцефаломиелит перепелок. В результате комплекса научно-производственных исследований, проведенных на одной из перепеловодческих ферм, где имело место заболевание, выявлена вариабельность проявления японскими перепелками яичного направления клинических признаков инфекционного энцефаломиелита птиц. Гистологическое изучение патологического материала от больных животных выявило зависимость между клиническими симптомами и патологическими изменениями.
Учитывая, что самок племенной группы используют до 8, а промышленной – до 10 месяцев, определена актуальность проблемы профилактики ИЭП, вирус которого сдерживает рост и развитие птицы, снижает ее продуктивность, что имеет отрицательные экономические последствия.
Практическая ценность. Установлено, что вакцинация родительского стада перепелок вакциной против инфекционного энцефаломиелита птиц живой сухой, изготовленой из штамма Calnek 1143M инфекционного энцефаломиелита птиц (ИЭП) в соответствии с рекомендованными производителем дозами эффективна при профилактике заболеваемости молодняка перепелов ИЭП. Поэтому эта вакцина должна быть введена в схему вакцинопрофилактики вирусных инфекций перепелов.
Материалы диссертации вошли в нормативную документацию, утвержденную Службой государственного ветеринарного надзора МСХ РТ:
1. Инструкция о мероприятиях по борьбе с инфекционным энцефаломиелитом птиц / Утв. СГВН МСХ РТ 11.04.2008 г.
2. Рекомендации по диагностике и профилактике инфекционного энцефаломиелита птиц.
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Результаты изучения клинических и патоморфологических признаков ИЭП.
2. Результаты определения развития заболевания и его последствий (заболеваемость, падеж, влияние на рост и развитие переболевшей птицы).
3. Результаты серологических и гистологических исследований патологического материала.
4. Результаты изучения формирования у перепелок иммунитета к ИЭП, схема вакцинации птицы против инфекционных заболеваний вирусной этиологии.
5. Рекомендации по диагностике и профилактике ИЭП.
Апробация работы. Материалы диссертации доложены на ежегодных заседаниях ученого совета Института ветеринарии ТАСХН (2008 – 2011), республиканской конференции «Вклад молодых ученых в развитие сельскохозяйственной науки», посвященной 20-летию независимости Республики Таджикистан и 20-летию организации ТАСХН (Душанбе, 2010 г.), научно-практической конференции, посвященной 80-летию Таджикского НИИ профилактической медицины «Краевые аспекты инфектологии» (Душанбе, 2011 г.).
Публикации. Основные положения диссертации опубликованы в 6 печатных работах.
Структура и объем диссертации. Работа состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения.
Диссертация изложена на 101 странице, иллюстрирована 11 таблицами и 5 рисунками. Список литературы содержит 230 источников. В приложение включены материалы, подтверждающие внедрение результатов исследования в практику.
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Работа выполнена в лаборатории болезней пчел и птиц в 2007 – 2011 гг. Исследования проводили в рамках лечебно-профилактических и противоэпизоотических мероприятий, связанных с диагностикой и ликвидацией ИЭП перепелок на ПОО «Шарифзода» (Файзабадский район, Республика Таджикистан), а также с отработкой эффективных схем и методов профилактики заболевания. В работе представлены результаты исследований, проведенных в лабораториях ГНУ ВНИВИП Россельхозакадемии (г. Санкт-Петербург), Института ветеринарии ТАСХН, Национального центра ветеринарной диагностики СГВН МСХ РТ (порядок и конкретно).
В диссертации использованы данные ветеринарных, зоотехнических, экономических отчетов и производственной документации, актов вакцинаций, патологоанатомического вскрытия трупов птицы и отходов инкубации, экспертиз лабораторных исследований.
Исследования проводились в производственных условиях, при строгом соблюдении наставлений по применению вакцин и препаратов. Для получения достоверных результатов опытные и контрольные группы птицы имели одинаковый возраст, иммунный статус, условия кормления, содержания, ветеринарное обслуживание, обслуживающий персонал. При проведении опыта охват поголовья составлял не менее 3000 гол. птицы.
Животные. Объектом исследований являлись 2 партии японских перепелов яичного направления, которые находились под наблюдением с использованием клинического, патологоанатомического и серологического методов контроля эпизоотического состояния.
Испытуемую вакцину против инфекционного энцефаломиелита птиц живую сухую, изготовленную из штамма Calnek 1143M инфекционного энцефаломиелита птиц (ИЭП) (Россия, ФГУ ВНИИЗЖ) выпаивали с водой.
В работе использовали гистологическое исследование патологического материала; иммуноферментный анализ (ИФА) с наборами BioChek, с обработкой результатов с помощью компьютерной программы «BioChek» в соответствии с «Временным наставлением по применению набора для обнаружения в ИФА антител к инфекционному энцефаломиелиту птиц», разработанному фирмой «BioChek» совместно с ФГУ ВГНКИ.
Проведение гистологического исследования. Перепелята с клиническими признаками ИЭП были вынужденно убиты для получения патологического материала (головного мозга, поджелудочной железы, сердца, железистого и мышечного желудков).
Освобождение головного мозга перепелят производили общепринятым методом. Головной мозг извлекали целиком и помещали в фиксирующую жидкость. Для фиксации головного мозга применяли щадящий метод: сначала материал выдерживали в 5%-ном растворе нейтрального формалина в течение 12 часов, а затем помещали в 10%-ный раствор формалина. Объем фиксирующей жидкости превышал объем материала в 10 раз. Зафиксированный материал в стеклянной, плотно укупоренной посуде доставляли для исследования.
От поджелудочной железы, сердца, железистого и мышечного желудка отбирали кусочки тканей размером 1 см2 и толщиной 0,2 – 0,5 см, которые помещали в консервирующий раствор, приготовленный по методу Кальтера С.С. [**25]. Срезы изготавливали на микротоме [**25], окрашивали по Нисслю (гематоксилин + эозин).
Гистологические срезы исследовали методом темнопольной микроскопии. Для микроскопического исследования (темнопольная микроскопия) гистологических срезов применяли световой микроскоп (см. темнопольная микроскопия) Nicon E 200 (Япония), увеличение 4010.
Постановка РГА с аллантоисной жидкостью от инфицированных эмбрионов. Эритроциты для постановки РГА готовили из крови петуха и получали ее дефибринированием с использованием стеклянных шариков (бус). Для этого кровь поместили в банку с притертой крышкой и встряхивали ее до полного остывания, так как остывшая кровь теряет способность свертываться. Затем дефибринированную кровь фильтровали через стерильную марлю, разливали в пробирки с изотоническим раствором хлористого натрия и центрифугировали в течение 10 мин при 1000 об./мин. Обработку повторяли до получения бесцветной и прозрачной надосадочной жидкости. Из осадка эритроцитов готовили 1%-ную суспензию на 0,85%-ном растворе хлористого натрия.
РГА ставили на плексиглазовых титрационных планшетах. Общепринятым способом в лунках готовили двукратные разведения вируссодержащего материала (аллантоисной жидкости), начиная с 1:2 до 1:2048. После раститровки планшет оставляли на 30 мин при комнатной температуре. Через установленное время во всех лунках планшета наблюдали скопление осевших эритроцитов в центре лунок в виде «пуговки» с ровными краями, что указывало на отсутствие агглютинации.
Сыворотка. Отбор проб крови проводили из подкрыльцовой вены, в количестве не менее 25 проб от каждой партии. Кровь собирали в пробирки. Пробирки с кровью прогревали в термостате при t= +37оС в течение 20 мин. Затем стеклянной палочкой отделяли сгусток от стенок пробирки. Пробирки отстаивали в холодильнике при t= +8оС в течение 4 часов и отсасывали сыворотку. Сыворотку в пробирках инактивировали на водяной бане при t= +56оС в течение 30 мин.
Проведение иммуноферментного анализа. Для исследования использовали сыворотку крови перепелок по 10 – 15 (оставшиеся пробы помещали в архив) проб от каждой партии (птичника), объемом не менее 0,2 – 0,3 см3.
Исследование проводили в соответствии с инструкцией по проведению ИФА с использованием наборов и программы BioChek.
Результаты серологических исследований выражали в обратных значениях титров.
Отдельные методические приемы представлены по ходу изложения материала диссертации.
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Зооветеринарные аспекты выращивания перепелов
на ПОО «Шарифзода»
Предприятие с ограниченной ответственностью «Шарифзода» (Республика Таджикистан, Файзабадский район), основанное в 1998 году, поставляет на потребительский рынок пищевое яйцо, мясо и суточных перепелят. Предприятие специализируется на выращивании японских перепелов яичного направления продуктивности, яйценоскость которых составляет 250 – 300 и более яиц в год. Яйцекладку эти перепела начинают в пятинедельном возрасте, причем оплодотворенность яиц перепелок 8 – 40-недельного возраста составляет 80 – 90%, а вывод молодняка – 70%.
Перед каждой закладкой (яиц) инкубаторы дезинфицируют парами формальдегида. Применяется режим инкубации, обеспечивающий вывод молодняка на уровне 87 – 95%. На 16-е сут после начала инкубации яйца переносят в выводной шкаф, где на 17 – 18-й день выводятся птенцы, которых сразу поят и после обсыхания переносят в помещение для выращивания.
При выращивании перепелят до 3 – 4 недель применяют клеточную систему. Стенки и пол клетки изготовлены из металлической сетки (размер ячейки 1010 мм). Дверка клетки устроена в передней стенке, нижняя часть (высота – 7 см) которой стационарная, верхняя часть – прикреплена на шарнирах к нижней части и открывается сверху вниз. Высота клеток для молодняка 14 см. Под сетчатым полом клетки размещены металлические противни для помета. В первые 5 – 7 дней выращивания пол клетки покрывают плотной гофрированной бумагой, которую ежедневно меняют.
Птенцов содержат, соблюдая температурный режим. В первые две недели для перепелят устанавливают круглосуточное освещение (30 лк), затем, сокращая его продолжительность на 2 ч в неделю, доводят до 17 ч. Интенсивность освещения делают умеренной – 20 лк над уровнем кормушки, или около 4 Вт / м2. Оптимальная влажность при содержании перепелов любого возраста – 60 – 65%.
Плотность посадки в клетках – 77 см2 / гол. до 3-недельного и 115 см2 / гол. от 3-недельного возраста.
Для первой недели выращивания перепелят применяют кормушку-противень (глубина – 2 см), которую в дальнейшем заменяют на желобковую. Питьевую воду наливают в вакуумные поилки. Величина кормового фронта – 1,5 см на голову в первые 3 недели жизни и 2,5 см на голову – от 3 недель.
Первую неделю перепелят кормят 5 раз в день, затем число кормлений сокращают до 4 раз. В первый день перепелят кормят круто сваренными куриными или перепелиными яйцами, протертыми вместе со скорлупой. На второй день жизни к яйцу добавляют творог из расчета 2 г на голову в день. На третий день в рацион включают свежую рубленую зелень, на четвертый день уменьшают в корме количество вареных яиц и увеличивают количество творога. С 8-го по 28-й день жизни основу корма перепелят составляет комбикорм. В 100 г корма для молодняка в возрасте 1 – 4 недели должно содержаться обменной энергии 1260 кДж (300 ккал), 28% сырого протеина, не более 3% сырой клетчатки, 1% кальция и 0,8% фосфора. С 29-го по 42-й день перепелам дают корма по рациону взрослых, включая дробленые зерновые корма, хотя содержание протеина снижают до 16 – 18%.
Для контроля роста и развития перепелят их ежедекадно взвешивают группами, сопоставляя среднюю массу с примерными нормативами их массы по возрастным периодам.
Сохранность цыплят в процессе выращивания в нормальных условиях содержания в первые 4 недели жизни составляет 90 – 92% и во второй период – 98 – 99%.
В клетки для взрослой птицы перепелят пересаживают в возрасте 3 недель. Самок содержат отдельно от самцов. Сухие, теплые помещения (с окнами), в которых устанавлены клетки для перепелов, оборудованы вентиляцией, обеспечивающей поступление свежего воздуха в расчете на 1 кг живой массы птицы не менее 1,5 м3/ч в холодное время и не менее 5 м3/ч в теплый период. Для искусственного освещения клеток, в которых находится птица, используют энергосберегающие лампы (40 – 50 Вт).
Клетки (600600 мм, высота в передней части – 125, в задней – 105 мм) для группового содержания перепелов (30 – 50 перепелов) изготовлены в виде отдельных конструктивных разборных элементов из металлических прутьев с полимерным покрытием. Для посадки и обслуживания птицы в передней части клетки сделана дверца. Кормушка укреплена спереди, а поилка – сзади клетки. Передняя и задняя стенки имеют дополнительные решетки, передвижением которых можно изменять просвет кормовых отверстий. Клетки установлены на стеллажи.
Интенсивный рост молодняка и высокая яичная продуктивность самок проявляется при условии обеспечения их кормами, содержащими все необходимые питательные вещества: белки, углеводы, жиры, макро-, микроэлементы и витамины. Взрослых птиц кормят три раза в день, в одно и то же время. Для увеличения в рационе перепелов минеральных веществ в корм добавляют мел, известняк, скорлупу яиц и поваренную соль.
Используются специально выпускаемые минеральные и витаминные премиксы.
Комбикорм для перепелов может состоять и из таких компонентов (в процентах от общей массы комбикорма): кукуруза желтая – 20, просо – 15,7, пшеница – 19, подсолнечниковый жмых – 4,9, молоко сухое – 4, мука мясокостная – 12, мука рыбная – 12, дрожжи сухие – 6, травяная мука – 3, ракушка молотая – 2, соль поваренная – 0,3, минеральная добавка – 0,5. В 100 г такого комбикорма содержится 22,6% сухих протеинов, 2% кальция, 1,6% фосфора и 0,6% натрия.
На ПОО «Шарифзода» с учетом описанных выше рекомендаций и наличия / отсутствия компонентов разработаны собственные рационы кормления для перепелов 1 – 4 недель, 5 – 7 недель и взрослых.
Все корма измельчают, после чего их хорошо перемешивают. Зелень скармливают птице отдельно и измельченной. Ракушка молотая и гравий постоянно находятся в кормушках.
На ПОО «Шарифзода» выполняются следующие ветеринарно-профилактические требования:
1. Размещать перепелов в помещении изолированно от птицы других видов, в каждом отдельном помещении содержать перепелов одной возрастной группы.
2. Своевременно очищать пол клеток от помета, регулярно мыть клетки, кормушки, поилки и прочий инвентарь. Обеззараживание кормушек и поилок проводить не реже одного раза в неделю. Для этого применяют 5%-ный раствор формалина.
3. Поддерживать в чистоте территорию фермы. При входе во все производственные помещения птицефермы помещать дезинфекционные кюветы с ковриками из пенопласта или пористой резины, регулярно поливая их 2%-ным раствором формалина или 1%-ным раствором едкого натра.
4. Не допускать контакта персонала с работниками, обслуживающими другие виды птицы. Инвентарь должен быть закреплен за каждым помещением. Весь обслуживающий персонал и посетители обеспечиваются халатами, специальной обувью и шапочками.
5. Соблюдать санитарные перерывы между сдачей поголовья на мясо и приемом новой партии: при замене взрослой птицы – 15 дней, молодняка – 10 и раз в год 20 дней. Во время санитарных перерывов делать двукратную дезинфекцию помещений: влажная – методом полива (орошения) 5%-ным раствором кальцинированной соды или 2 – 3%-ным горячим (70оС) раствором едкого натра из расчета 1 – 2 мл на 1 мл на I2 м и вторая – аэрозольная из расчета 15 – 20 мл / м3 помещения. Мелкие предметы и инвентарь дезинфицируют погружением в горячий раствор, спецодежду кипятят.
6. Перед каждой закладкой перепелиных яиц на инкубацию проводить их дезинфекцию и помещения инкубатория парами формалина. Можно использовать также аэрозоли гексахлорфена в триэтиленгликоле. При дезинфекции помещения и оборудования вместо марганцовокислого калия можно использовать хлорную известь, содержащую 20% активного хлора, в соотношении 1 часть формалина и 1 часть хлорной извести.
7. При использовании белковых и минеральных добавок к комбикормам необходимо проверять их на бактериальную обсемененность.
8. Ежедневно вести наблюдения за состоянием перепелов, поедаемостью корма и потреблением воды.
9. Немедленно отправлять в ветеринарную клинику павшую птицу, упакованную в влагонепроницаемую тару. Во время эпидемии острых заразных заболеваний павшую птицу сжигать или зарывать в землю на глубину 1,5 м с тем, чтобы предотвратить доступ к ней бродячих и диких животных.
3.2. Особенности клинического проявления
и патологоанатомических изменений
Инфекционный энцефаломиелит птиц в ПОО «Шарифзода» был выявлен среди 10-дневных перепелят (1951 гол.), которые вывелись 26.04.2007 г. Инкубационное яицо (3000 шт.) было собрано с 30.03.2007 г. по 06.04.2007 г. и заложено в инкубатор 07.04.2007 г., а 24.04.2007 г. помещено в выводной шкаф. Вывод (26.04.2007 г.) перепелят в этой партии составил 65%.
С 27.04 по 04.05.2007 г. пали 22 птенца (в среднем 2,75 гол.; 4,2% в месяц), что не превышает нормы падежа для молодняка в возрасте 1 – 30 дней (9%), а 05.05.2007 г. пали 13 перепелят, что в пересчете на месячный показатель составляет 20%. Павшие птенцы были истощены (7 из них затоптаны). При патологоанатомическом вскрытии наиболее выраженным изменением была гиперемия поджелудочной железы.
06.05.2007 г. пали 25 перепелят, заболели 43, из которых в тот же день пали 27. В этот день падеж составил 52 гол., или 80% в месяц. Такие падеж и заболеваемость с учетом результатов клинического осмотра заболевших и патологоанатомического вскрытия (опять наблюдали гиперемию поджелудочной железы) павших указывали на инфекционный характер патологии. Больные птенцы, у которых наблюдали возбуждение, сонливость, нарушение координации движений, тремор, парезы и параличи конечностей, были отделены (заболевших цыплят, делили на группы с учетом даты выявления заболевания).
При постановке диагноза возникли подозрения на ньюкаслскую болезнь, инфекционный энцефаломиелит птиц и нарушение баланса питательных элементов, но последнее после анализа рациона было исключено.
06.05.2007 г. было выявлено 43 больных перепеленка, из которых у 26 гол. (по 13) наблюдали сонливость и тремор, по 7 птенцов были с признаками нарушения координации движений и с этим симптомом в сочетании с тремором, 3 перепеленка были возбуждены. Парезов и параличей конечностей не отмечали.
Количество заболевшей птицы 07.05.2007 г. увеличилось на 54, из них у 16 птенцов были нарушения координации движений, у 13 – сонливость, у 9 – тремор, у 6 перепелят отмечены парезы и по 5 гол. были возбуждены и проявляли признаки нарушения координации движений с тремором. Прогрессирование болезни сопровождалось усилением нервных расстройств, но не переходило в паралитический синдром.
Большинство (52 гол.) из выявленных 08.05.2007 г. больных птенцов было подавлено и неуверенно (сонливость), количество птиц с парезами составило 11, у 10 гол. походка была шатающейся, 7 – были возбуждены (первичный клинический признак), 5 – с нарушениями координации движений в сочетании с тремором, только тремор наблюдали у 4 перепелят. Нарастание нервных симптомов у некоторых птиц сопровождалось еле слышным попискиванием.
Наибольшее число больных птенцов (113) отделили 09.05.2007 г., когда у 65 гол. отмечали сонливость, у 14 – нарушения координации движений с тремором, у 12 – только нарушения координации движений, у 10 – парезы, по 6 перепелят проявляли признаки возбуждения и тремора. При усилении расстройств движения птенцы становились мало подвижными, если двигались, то на выгнутых ногах, спотыкались и падали.
С 10.05.2007 г. количество ежедневно выявляемых больных перепелят стало уменьшаться. В этот день выделили 102 больных птицы, у 12 из них были параличи конечностей, большинство (42 гол.) из них были сонливы, хотя их общее состояние и аппетит были нормальными. Нарушения координации движений наблюдали у 15 гол., тремор – у 12, возбуждение – у 9, парезы – у 8, явления нарушения координации движений в сочетании с тремором – у 4 гол. У части больных птиц расстройства движения сменялись полной неподвижностью, за чем следовали истощение, прострация и смерть.
11.05.2007 г. выделили 89 больных птиц, из которых 69 гол. проявляли сонливость, у 5 были нарушения координации движений с тремором, у стольки же птенцов отмечали параличи конечностей, 4 птицы были возбуждены, 3 – с нарушениями координации движений, у 2 – отмечали тремор, у 1 – парез. Расстройства движения и слабость не позволяли птицам добраться до корма, что приводило к истощению.
12.05.2007 г. число отделенных больных перепелят (41), в том числе подавленных и сонливых (29) резко сократилось, у 7 гол. наблюдали возбуждение, у 3 – нарушения координации движений в сочетании с тремором, у 2 птиц конечности были парализованы. Количество птенцов с сильными нервными расстройствами в этот день значительно сократилось. Больные перепелята стояли на плюснах, опираясь на хвост, или падали на бок.
С 13.05 по 15.05.2007 г. вспышка пошла на убыль. В эти дни было выделено соответственно 38, 15 и 18 больных птиц. Каждый день отделяли по 6 гол. с параличами конечностей, в сонливом состоянии были соответственно 27, 3 и 7 гол., количество перепелят с другими клиническими признаками было незначительным.
Нами выявлена вариабельность проявления японскими перепелками яичного направления клинических признаков инфекционного энцефаломиелита птиц. У заболевших перепелят вначале проявляются легкие симптомы на глазах, нарушения координации движений приводит к прогрессированию атаксии. Птенцы не контролируют скорость движения и походку, все время отдыхают. Усиление расстройства движения, обусловливает малоподвижность, птицы сидят на подколенных суставах. Полная неподвижность приводит к истощению, прострации, за чем следует смерть.
Среди клинических признаков, по которым выделяли больных птиц, наиболее распространенным была сонливость (320 гол.), количественные показатели (наименьший 06.05 и 07.05.2007 г. – 13 гол., наибольший 11.05.2007 г. – 69 гол.) которой держались на высоком уровне в течение 8 дней вспышки. В последние два дня с этим клиническим симптомом выделили только 10 перепелят.
С нарушениями координации движений отделили 63 птицы (наибольшее число – 16 – 07.05.2007 г., наименьшее количество – 3 – 11.05.2007 г.). Тремор и его в сочетании с нарушениями координации движений отмечали в равном числе случаев – по 51 гол. Далее идут возбуждение (44 гол.), паралич конечностей (37 гол.) и парез (36 гол.).
Необходимо отметить, что расстройства движения в основном наблюдали в первую половину вспышки заболевания, а параличи – во вторую.
3.3. Лекарственная терапия
Отделенным цыплятам, разбитым на группы с учетом дня выявления заболевания, для исключения бактериальных инфекций и предупреждения нарушения баланса питательных элементов в связи с истощением, выпаивали антибиотик Доксициклин 50% (ИНВЕСА) и витаминный комплекс Мультивит (ИНВЕСА).
Доксициклин 50% (оральный порошок, в состав которого входят доксицилин (гиклат), 500 мг; и наполнитель д.5. для 1 г).
Тетрациклины – это бактериостатические антибиотики, тормозящие синтез протеинов микробов. Это антимикробное действие является результатом фиксации подединицы 30 S рибосомы соединениями хелатов с группами фосфатов РНК-кода. Таким образом. невозможна фиксация РНК переноса на РНК-коде.
Спектр действия охватывает:
- бактерии Грам-негативные: Pasteurella spp., Escherichia coli, Salmonella spp.;
- бактерии Грам-позитивные: Staphylococcus aureus, Streptococcus spp.;
- анаэробные бактерии: Clostridium spp.;
- микоплазма;
- Rickettsias, Clamidias и некоторые простейшие.
Мультивит – представляет собой растворимый в воде витаминный комплекс, в 1 л которого содержится: витамина А – 10 000 000 МЕ, витамин D3 – 2 000 000 МЕ, витамина Е – 2 г, витамина В1 гидрохлорида – 4 г, витамина В2 фосфата натрия – 600 мг, витамина В6 гидрохлорида – 600 мг, витамина РР – 6 г, пантотената натрия – 2 г, витамина С – 20 г, витамин К3 – 2 г. Препарат не содержит генноинженерно-модифицированных организмов.
Компенсирует дефицит водорастворимых и жирорастворимых витаминов, вызванный несбалансированным кормлением. В зависимости от различных стадий роста птицы применение препарата обеспечивает быстрый рост и развитие, снижает падеж, способствует увеличению привесов, повышению яйценоскости, позволяет поддерживать максимальный уровень продуктивности в зимний период, уменьшает влияние стрессов, возникающих при изменении температуры, при транспортировке, вакцинации, лечении противоинфекционными, антигельминтными и противопаразитарными препаратами. Благодаря водной основе, препарат быстро адсорбируется и легко усваивается в организме. Малотоксичен, хорошо переносится птицей.
Птице при нехватке, витаминов, поступающих с кормом при извращенном аппетите, нарушении роста и развития, при репродуктивных изменениях: снижении яйценоскости, выводимости цыплят, уменьшении толщины скорлупы. Используется как вспомогательное средство при лечении антигельминтными, противоинфекционными препаратами и при лечении кокцидиоза, а также как добавка к рациону.
Единственным источником питьевой воды для больной птицы была вода, смешанная с лекарством (Доксициклин 50% – 50 мг / 1 л в течение 3 дней, Мультивит – 0,5 мл / 1 л в течение 5 дней).
Все птицы, у которых не наблюдали нарушений координации движений (249 гол.), выздоровели по окончании курса лечения, что свидетельствует о высокой (100%) эффективности применения комплекса Доксициклин 50% - 50 мг / 1 л в течение 3 дней, Мультивит – 0,5 мл / 1 л в течение 5 дней при первых клинических признаках ИЭП.
3.4. Гистологическое исследование патматериала
Клиническая картина (нервные признаки, указывающие на поражение ЦНС) и патологоанатомические изменения, выражавшиеся исключительно в гиперемии поджелудочной железы, вызывали подозрение, что вспышка в ПОО «Шарифзода» была вызвана действием вируса ИЭП. Наиболее быстрым методом постановки диагноза при ИЭП является гистологическое исследование, так как серологическая и вирусологическая диагностика возможны при условии нарастания титра антител в результате переболевания.
Перепелята 13-дневного возраста с ярко выраженными клиническими симптомати были вынуждено убиты бескровным способом. От них взяли пробы головного мозга, поджелудочной железы, тканей железистого и мышечного желудков (органы, в которых обнаруживают основные микроскопические поражения при ИЭП) [**86, 92], которые для гистологического исследования отправили в ГНУ ВНИВИП Россельхозакадемии.
Результаты гистологического исследования подтвердили предварительный диагноз: выявлены характерная для ИЭП микроскопическая патология.
В ганглиозном слое мозжечка отмечали характерные поражения клеток Пуркинье, ядро которых увеличено и смещено к периферии клетки. Часть клеток Пуркинье подверглась дегенерации и некрозу, а на месте распавшихся образовались гомогенные ацидофильные гранулы. В результате пролиферации и очагового скопления клеток нейроглии образуются глиальные узелки.
В срезах поджелудочной железы в междольковой соединительной ткани и в области островков Лангерганса наблюдали лимфоидноклеточный пролиферат в виде округлого, увеличенного, отграниченного от окружающей ткани лимфоцитарного фолликула.
В продолговатом мозге отмечены различные поражения двигательных нейронов – центральный хроматолиз, смещенное к периферии клетки ядро, некроз, нейрофагия. Контуры части ядер размыты, отдельные клетки подверглись полному распаду.
Муфты, состоящие из 3 – 4 слоев клеток, свидетельствующие о периваскулярной клеточной инфильтрации вокруг сосудов, обусловленной скоплением лимфоцитов, лимфобластов, гистиоцитов и плазматических клеток, присутствуют в срезах мышечного желудка. Характерным для ИЭП является и скопление лимфоцитов в мышечной стенке железистого желудка.
Таким образом, полученные нами при гистологическом исследовании результаты подтверждают зависимость между клиническими симптомами и патологическими изменениями.
3.5. Серологическая диагностика ИЭП
Серологические исследования (500 проб сывороток крови) провели в лаборатории болезней птиц Института ветеринарии ТАСХН на оборудовании и наборах фирмы «BioChek».
Первое исследование этой партии перепелят провели на 15 день после вспышки болезни (во время начала яйцекладки). Средний геометрический титр составлял 7146 (CV 60%, разброс титров 306 – 11689) (табл. 1), что в соответствии с методикой интерпритации результатов свидетельствовало о недавнем действии вируса и подтверждало результаты гистологического исследования. Передача вируса от родительского стада была исключена отрицательными результатами ИФА еще во время вспышки болезни.
Таблица 1
Результаты исследования на ИЭП сывороток крови цыплят в ИФА
| Возраст, нед. | |||
| 5 (начало яйцеклади) | 10 (пик яйценоскости | 40 (перед убоем) | |
| Ср. геом. титр | 7146 | 9356 | 14478 |
| CV, % | 60 | 41 | 23 |
| Разброс титров | 306 – 11689 | 405 – 13456 | 4025 – 19034 |
Сыворотки крови птиц из подвергшейся воздействию вируса стаи были также исследованы методом ИФА в 10 (пик яйценоскости) и 40 недель (перед убоем). Установлено, что в эти сроки средние геометрические титры увеличились соответственно до 9356 (CV 41%, разброс титров 405 – 13456) и 14478 (CV 23%, разброс титров 4025 – 19034).
Таким образом, учитывая, что самок племенной группы используют до 8, а промышленной – до 10 месяцев, актуальной становиться проблема профилактики ИЭП, вирус которого сдерживает рост и развитие птицы, снижает ее продуктивность, что имеет отрицательные экономические последствия.
3.6. Вакцинопрофилактика ИЭП переплов
В настоящее время не существует удовлетворительного способа лечения острых вспышек ИЭП у птенцов перепелов, поэтому единственным способом контроля заболевания является вакцинация племенных стай в период роста, что гарантирует от инфицирования птицу в начале откладывания яиц и предупреждает вертикальную передачу вируса. Материнские антитела будут защищать потомство от контакта с вирусом ИЭП в критические первые 2 – 3 недели.
На основании установленного в результате эпизоотических, клинических, гистологических и серологических исследований диагноза – инфекционный энцефаломиелит птиц – с апреля 2008 г. на ПОО «Шарифзода» в схему профилактических и противоэпизоотических мероприятий введена вакцинация против ИЭП.
Вакцинацию провели в возрасте 4 недель методом выпаивания с водой, однократно. Для вакцинации применяли вакцину против инфекционного энцефаломиелита птиц живую сухую, изготовленую из штамма Calnek 1143M инфекционного энцефаломиелита птиц (ИЭП) (Россия, ФГУ ВНИИЗЖ).
Для оценки эффективности препарата у перепелок опытной группы через 14 и 21 день после вакцинации были отобраны пробы сыворотки крови и исследованы в ИФА на оборудовании и наборах Biochek. Кроме этого были исследованы сыворотки крови вакцинированной птицы в возрасте 10 (пик яйценоскости) и 40 недель (перед убоем). Результаты опыта представлены в таблице 2.
Таблица 2
Результаты вакцинопрофилактики перепелок против ИЭП
| Срок после вакцинации, дней | Возраст, недель | |||
| 14 | 21 | 10 | 40 | |
| Ср. геом. титр | 4066 | 7064 | 12654 | 2760 |
| CV, % | 62 | 27 | 24 | 52 |
| Разброс титров | 1099 – 5166 | 2560 – 9940 | 4449 – 16344 | 883 – 5436 |
Установлено, что вакцинация перепелок вакциной против инфекционного энцефаломиелита птиц живой сухой, изготовленой из штамма Calnek 1143M инфекционного энцефаломиелита птиц (ИЭП) является эффективной, о чем свидетельствует средний геометрический титр, который в 14 дней после вакцинации равнялся 4066 (CV 62%, разброс титров 1099 – 5166), в 21 – 7064 (CV 27%, разброс титров 2560 – 9940), в 10- и 40-недельном возрасте этот показатель соответственно составил 12654 (CV 24%, разброс титров 4449 – 16344) и 2760 (CV 52%, разброс титров 883 – 5436).
Для определения уровня материнских антител у перепелят, выведенных из яиц вакцинированных птиц, сыворотки крови первых исследовали в ИФА в возрасте 1, 2, 3, 4, 5, 9, 12, 15, 19 и 25 дней, то есть в период, когда перепелята наиболее подвержены заражению вирусом ИФА. Полученные результаты свидетельствуют, что вакцинация родительского стада вакциной против инфекционного энцефаломиелита птиц живой сухой, изготовленной из штамма Calnek 1143M инфекционного энцефаломиелита птиц (ИЭП) действенна и обеспечивает уровень материнских антител, предупреждающий ИЭП у перепелят в возрасте 1 – 25 дней, когда средний титр соответственно составлял 6700 и 880 (табл. 3), что определяет необходимость вакцинации родительского стада перепелов.
Таблица 3
Уровень материнских антител у перепелят
| Возраст, дней | ||||||||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 9 | 12 | 15 | 19 | 25 | |
| Ср. титр | 6700 | 9200 | 6800 | 7600 | 3800 | 1998 | 1767 | 1479 | 1250 | 880 |
Таким образом, вакцинация родительского стада перепелок вакциной против инфекционного энцефаломиелита птиц живой сухой, изготовленой из штамма Calnek 1143M инфекционного энцефаломиелита птиц (ИЭП) в соответствии с рекомендованными производителем дозами эффективна при профилактике заболеваемости молодняка перепелов ИЭП. Поэтому эта вакцина должна быть введена в схему вакцинопрофилактики вирусных инфекций перепелов.
ВЫВОДЫ
1. Выявлена вариабельность проявления японскими перепелками яичного направления клинических признаков инфекционного энцефаломиелита птиц. У заболевших перепелят вначале проявляются легкие симптомы на глазах, нарушения координации движений приводит к прогрессированию атаксии. Птенцы не контролируют скорость движения и походку, все время отдыхают. Усиление расстройства движения, обусловливает малоподвижность, птицы сидят на подколенных суставах. Полная неподвижность приводит к истощению, прострации, за чем следует смерть. Расстройства движения в основном наблюдали в первую половину вспышки заболевания, а параличи – во вторую.
2. Все птицы, у которых не наблюдали нарушений координации движений (249 гол.), выздоровели по окончании курса лечения, что свидетельствует о высокой (100%) эффективности применения комплекса Доксициклин 50% - 50 мг / 1 л в течение 3 дней, Мультивит – 0,5 мл / 1 л в течение 5 дней при первых клинических признаках ИЭП.
3. Результаты гистологических исследований выявили зависимость между клиническими симптомами и патологическими изменениями.
4. Учитывая, что самок племенной группы используют до 8, а промышленной – до 10 месяцев, актуальной является проблема профилактики ИЭП, вирус которого сдерживает рост и развитие птицы, снижает ее продуктивность, что имеет отрицательные экономические последствия.
5. Вакцинация родительского стада перепелок вакциной против инфекционного энцефаломиелита птиц живой сухой, изготовленой из штамма Calnek 1143M инфекционного энцефаломиелита птиц (ИЭП) в соответствии с рекомендованными производителем дозами эффективна при профилактике заболеваемости молодняка перепелов ИЭП. Поэтому эта вакцина должна быть введена в схему вакцинопрофилактики вирусных инфекций перепелов.
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
1. Инструкция о мероприятиях по борьбе с инфекционным энцефаломиелитом птиц / Утв. СГВН МСХ РТ 11.04.2008 г.
2. Рекомендации по диагностике и профилактике инфекционного энцефаломиелита птиц.
Список статей, опубликованных по теме диссертации
Шарипов М.А Инфекционный энцефаломиелит перепелок в Таджикистане / Шарипов М.А. – Ветеринария. – 2011. – №4 – С. 11 – 13.
Шарипов М. Эпизоотология и специфическая профилактики инфекционного энцефаломиелита у перепелов / Шарипов М.. Салимов Т.М., Мирзоев Д.М.// Докл рес, посвящ.20-летию независимости РТ и 20-летию организации ТАСХН. – Душанбе, 2010.- С. 379 – 384.
Шарипов М. Хусусияти эпизоотологии ва чараени энцефаломиелити сироятии бедонахо дар Чумхурии Точикистон / Салимов Т.М., Мирзоев Д.М.// Докл. ТАСХН. – 2011. – №11.
Шарипов М.А Эпизоотология инфекционный энцефаломиелит перепелов / Шарипов М.А // Актуальные проблемы развития сельскохозяйственной науки: междунар. научю конф., посвящ. 20 летию огранизации ТАСХН. – Душанбе, 2011.
Салимов Т.М. Передача материнских антител потомству при инфекционно энцефаломиелите у перепелов / Шарипов М.А, Мирзоев Д.М. // Сб. научно-технич. конф., посвящ. 80-летию ТИИПМ. – Душанбе, 2011. – С. 142 – 144.
Шарипов М. Баъзет хусусиятхои биологии бедонахо / Шарипов М. – Фермер. – 2012. №3 – С. 14 – 18.
