Иммунный статус поросят при пневмонии, вызванной вирусом репродуктивно-респираторного синдрома свиней
На правах рукописи
Владыкин Максим Сергеевич
ИММУННЫЙ СТАТУС ПОРОСЯТ ПРИ ПНЕВМОНИИ, ВЫЗВАННОЙ ВИРУСОМ РЕПРОДУКТИВНО-РЕСПИРАТОРНОГО СИНДРОМА СВИНЕЙ
06.02.02 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
кандидата ветеринарных наук
г. Новочеркасск
2011
Работа выполнена в Государственном научном учреждении Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт Российской академии сельскохозяйственных наук
| Научный руководитель: | доктор ветеринарных наук Бутенков Александр Иванович |
| Официальные оппоненты: | доктор ветеринарных наук, доцент Хабузов Иван Павлович (Донской госагроуниверситет) доктор биологических наук, доцент Слободяник Валентина Сергеевна (Воронежский гостехуниверситет) |
| Ведущая организация: | ГНУ Краснодарский научно-исследовательский ветеринарный институт Россельхозакадемии |
Защита состоится 11 октября 2011 года в 1200 часов на заседании диссертационного совета Д 006.106.01 при Государственном научном учреждении Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт Российской академии сельскохозяйственных наук.
346421, Ростовская область, г. Новочеркасск, Ростовское шоссе, 0
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт Россельхозакадемии - 346421, Ростовская область, г. Новочеркасск, Ростовское шоссе, 0.
Автореферат разослан « » сентября 2011 г.
Ученый секретарь
диссертационного совета, профессор А.М. Ермаков
- ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы. Основной проблемой для свиноводства остаются респираторные заболевания поросят, несмотря на разработанные современные методы лечения и превентивные меры. Репродуктивно-респираторный синдром свиней (РРСС) - контагиозное заболевание, характеризующееся нарушением функции воспроизводства у свиноматок, абортами, рождением мёртвых или слабых поросят с высокой смертностью. У молодых поросят и животных на откорме вирус вызывает поражение респираторного тракта с преимущественным развитием пневмоний.
По данным многочисленных авторов, изучающих РРСС, на сегодняшний день заболевание приобретает характер панзоотии. Болезнь регистрируется в большинстве стран мира с развитым промышленным свиноводством, наносит значительный экономический ущерб, состоящий как из прямых потерь - недополучения продуктов животноводства, связанных с прохолостами свиноматок, рождением мертвых, так и косвенных - затрат на проведение ветеринарно-санитарных и охранных мероприятий.
Болезнь была впервые зарегистрирована в Америке в 1987 г., в Европе в 1990 г, в настоящее время заболевание распространилось практически во всех странах мира. В России РРСС зарегистрировано официально в 1993 г., затем и в других странах СНГ. Серопозитивных к вирусу РРСС свиней выявляют в более чем 80% хозяйств, заболевание характеризуется широким варьированием клинических проявлений. По данным официальных отчетов ветеринарной службы Российской Федерации за период с 2000 по 2009 гг., на территории России в 73 % обследованных хозяйств у животных были обнаружены специфические к вирусу антитела, а в 25 % выделен вирус РРСС.
При заносе в свиноводческое хозяйство вирус РРСС вызывает у животных генерализованную инфекцию с виремией и распространением по всему организму. Болезнь протекает в острой, хронической и инаппарантной форме, с высокой степенью контагиозности, с потерей животных до 80-100%. На поздних сроках супоросности наблюдают аборты, преждевременные опоросы, рождение мертвых или живых поросят, погибающих в неонатальный период. Респираторные нарушения проявляется у животных на доращивании и в возрасте 14-20 недель, у новорожденных - респираторный синдром характеризуется одышкой, лихорадкой, потерей аппетита, снижением эффективности усвояемости кормов и замедлением роста.
В отдельных хозяйствах сохраняется длительное неблагополучие по данной инфекции, что связано с эпизоотологическими особенностями болезни, обусловленной ВРРСС - наличием длительной персистенции вируса, инаппарантной формы течения болезни.
На сегодняшний день в доступной нам литературе отсутствуют сведения о распространении и клиническом течении заболевания, вызванного ВРРСС, на территории Ростовской области. Нет сведений по клинико-морфологическому и иммунологическому статусу поросят при пневмонии, вызванной ВРРСС, что и послужило основанием для нашего исследования.
Цели и задачи исследования. Провести мониторинг распространения РРСС, выяснить региональные особенности динамики инфекционного процесса РРСС на основе изучения морфофункциональных изменений и иммунного статуса у поросят, больных пневмонией, вызванной ВРРСС.
Для решения данной цели были поставлены следующие задачи:
- Изучить распространение инфекции, вызванной вирусом РРСС, в Ростовской области.
- Изучить морфофункциональные изменения у поросят при пневмонии, вызванной вирусом РРСС.
- Изучить состояние гуморального иммунитета у поросят при пневмонии, вызванной вирусом РРСС.
- Изучить состояние клеточного иммунитета у поросят при пневмонии, вызванной вирусом РРСС.
- Подобрать эффективную схему лечения иммунного статуса при разной тяжести пневмонии у поросят, вызванной вирусом РРСС.
Научная новизна работы. Представлены новые данные по распространению РРСС в свиноводческих хозяйствах Ростовской области. Изучены клинико-эпизоотологические особенности проявления инфекции, вызванной вирусом РРСС. Впервые определено влияние РРСС на морфологические и биохимические показатели крови, гистологические структуры в легких в зависимости от тяжести течения при спонтанной инфекции. Автором впервые получены данные по иммунному статусу поросят при РРСС разной степени тяжести. Апробирована и предложена практике новая схема коррекции иммунного статуса у поросят при пневмонии, вызванной вирусом РРСС. Разработаны и апробированы схемы лечения животных для различных клинических форм заболевания.
Теоретическая и практическая значимость. Представленные результаты по распространению РРСС в свиноводческих хозяйствах могут быть использованы при разработке планов противоэпизоотических мероприятий. Полученные данные по иммунологическому статусу поросят при инфекции, вызванной ВРРСС, могут использоваться в учебном процессе по специальностям «Биология», «Ветеринария» и «Зоотехния», написании учебных пособий и практических рекомендаций. Рекомендована эффективная схема лечения животных при РРСС.
Диссертационное исследование проведено в соответствии с темой научных исследований Государственного научного учреждения Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт Россельхозакадемии “Разработать методы ранней диагностики, эффективные средства и способы профилактики и лечения массовых заболеваний у молодняка высокопродуктивных животных”, государственная регистрация №15070.3666026906.06.8.001.2.
Реализация результатов исследований. Результаты исследований используются при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий по эпизоотологии и патанатомиии в ФГОУ ВПО «Донской государственный аграрный университет», в работе Ростовской областной ветеринарной лаборатории, в трех хозяйствах Ростовской области.
Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены и обсуждены на ежегодных научно-практических конференциях ГНУ «Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт» в 2008-2010 гг.; на VII Международной конференции молодых ученых, посвященной 75-летию профессора А.В. Газданова, «Актуальные и новые направления сельскохозяйственной науки», г. Владикавказ, 2011 г.; на III Международной научно–практической конференции «Инновационные процессы в АПК», посвященной 50-летию образования аграрного факультета РУДН, Москва, 2011 г.
Публикации. По материалам диссертационной работы опубликованы 10 научных работ, из них 4 – в рецензируемых изданиях, рекомендованных ВАК РФ.
Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследований, результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы. Работа изложена на 133 страницах компьютерного текста, содержит 23 таблицы, иллюстрирована 38 рисунками. Библиографический список включает 203 источника, в том числе 144 зарубежных.
Основные положения, выносимые на защиту:
1. Динамика показателей морфологических и биохимических исследований крови, отражающая развитие пневмонии поросят, вызванной вирусом РРСС, носит диагностический характер при определении тяжести течения заболевания.
2. Динамика иммунного статуса у свиней, инфицированных вирусом РРСС, отражает тяжесть течения инфекционного процесса, а изменения в легких носят типичный характер и могут развиться до развития клинических форм. Коррекция иммунного статуса улучшает курабельность РРСС.
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы, методы и объемы исследований
Работу выполняли с 2008 по 2010 гг. в лаборатории функциональной диагностики болезней сельскохозяйственных животных ГНУ СКЗНИВИ Россельхозакадемии, в Ростовской областной ветеринарной лаборатории, а также в хозяйствах Ростовской области.
При изучении распространения инфекционных и инвазионных заболеваний использовались отчетные данные ГУРО «Ростовская областная ветеринарная лаборатория».
За период с 2008 по 2010 гг. в хозяйствах Ростовской области осмотру подвергнуто 6481 свиней. Из них у 22% выявлена инфекционная патология. За подопытными животными было установлено постоянное клиническое наблюдение, при этом учитывали процент заболеваемости, выздоровления и падежа. Ежедневно клинически обследовали поросят, а лабораторные исследования проводили при первичном и повторном осмотрах и при выздоровлении.
Для изучения эпизоотической ситуации по пневмонии поросят, вызванной вирусом РРСС, было проведено обследование поголовья свиней в 10 хозяйствах Ростовской области: ООО "Урсдон" Усть-Донецкого района, ОАО «Боковский» Боковского района, ОНО ОПХ "Красноармейское" Орловского района, ООО "Донская Нива" Октябрьского района, ИП Васильченко Семикаракорского района, ЗАО «Русская свинина» Каменского и Миллеровского районов, ЗАО «Батайское» Азовского района, СПК «к-з Краснокутский» Боковского района, СПК «Русь» Сальского района, СПК «Родина» Матвеево-Курганского района.
Опыты по изучению морфологических, биохимических и иммунологических показателей у свиней, больных РРСС, были проведены на базе следующих хозяйств: ООО "Бусел" г. Новочеркасска, ООО "Донская Нива" Октябрьского района, ИП Васильченко Семикаракорского района Ростовской области (табл. 1).
Таблица 1
Объем проведенных исследований, голов
| № п./п. | Вид проведенного исследования | Всего проведено исследований | |
| 1 | Исследовано животных клинически, голов | 4674 | |
| 2 | Выявлено больных животных, голов: | Вирусные заболевания | 644 |
| 3 | В том числе РРСС | 334 | |
| 4 | Бактериальные заболевания | 472 | |
| 5 | Вскрыто павших поросят, голов | 43 | |
| 6 | Проведено лабораторных исследований: | Гематологических | 460 |
| 7 | Иммунологических | 360 | |
| 8 | Биохимических | 460 | |
| 9 | ПЦР | 1514 | |
Диагностику пневмонии поросят, вызванной вирусом РРСС, проводили в ГУРО «Областная ветеринарная лаборатория» с помощью тест-системы для выявления ДНК возбудителя в патологическом материале методом полимеразно-цепной реакции (ПЦР) с электрофоретической детекцией продуктов амплификации в агарозном геле, а также определяли наличие специфических антител к возбудителю пневмонии поросят, вызванной вирусом РРСС, в сыворотке крови методом ИФА.
В целях определения тяжести и особенностей течения пневмонии, вызванной ВРРСС, для животных проводили морфологические и биохимические исследования крови в ГУРО «Областная ветеринарная лаборатория» и в лаборатории функциональной диагностики болезней с.-х. животных ГНУ СКЗНИВИ РАСХН.
Опыты по иммунологическому состоянию больных животных проводили на трех группах поросят по 40 голов в каждой. Первая группа, контрольная, включала клинически здоровых животных без признаков заболевания. Во второй группе были животные с первой стадией заболевания, у которых отмечался кашель, но был сохранен аппетит. В третья опытной группе включали поросят со второй стадией заболевания, характеризующейся кашлем, тяжелой одышкой, адинамией, анорексией. Определение концентрации сывороточных иммуноглобулинов проводили с помощью реакции Манчини; количества Т – лимфоцитов и их субпопуляций методом розеткообразования — Е-РОК. Тимусзависимые Т-лимфоциты имеют рецепторы для эритроцитов барана, которые выступают, таким образом, специфическим маркером для их распознавания (Е-РОК: Erythrocyte — розеткообразующие клетки). Выявляли 2 субпопуляции: теофиллинчувствительные Т-лимфоциты (Т-супрессоры), утратившие способность к розеткообразованию под влиянием обработки теофиллином, и теофиллинустойчивые Т-клетки (Т-хелперы) лимфоциты, сохранившие такую способность.
Статистическую обработку результатов исследований проводили по Н.А. Плохинскому (1970), Хитоси Кумэ (1990) с использованием компьютерной техники.
2.2. Структура инфекционной патологии свиней в Ростовской области
В хозяйствах региона ежегодно переболевают инфекционными болезнями от 35 до 98% поросят. Из общего количества павших поросят в 2008-2010 гг. гибель их от респираторных болезней составила 52,1%.
Мы провели ретроспективный анализ уровня заболеваемости свиней инфекционными болезнями в Ростовской области за период 2008-2010 годы.
Из заболеваний, причиной которых являются вирусы, следует назвать парвовирусную инфекцию, РРСС, цирковирусную инфекцию, трансмиссивный гастроэнтерит и ротавирусную инфекцию.
Нами изучен удельный вес РРСС в сравнительном аспекте и в динамике. Наиболее часто за исследуемый период регистрировали микоплазмоз – 22,8 %, цирковирусную инфекцию – 15.9%, РРСС и колибактериоз – по 12,5%, ПВИС – 10,1%, пастереллез – 8,5%. На долю остальных заболеваний приходилось в сумме 17,7% (рис. 1).
Пик заболеваемости свиней РРСС приходился на конец зимы – начало весны, что, по-видимому, связано со снижением иммунного статуса свиней на фоне гиповитамонозов, ухудшение качества комбикормов в зимне-весенний период. Такую динамику можно объяснить и резкими изменениями климатических факторов, которые приводят к манифестации инфекции при наличии возбудителя в организме.
Рис. 1. Нозологический профиль инфекционной патологии свиней в Ростовской области в 2008-2010 годах
В 2008 г. смертность от РРСС у подсвинков составила 2,53% при летальности 29,1%. В 2009 г. эти показатели существенно не изменились – смертность составила 2,62%, а летальность – 25,2%.
Таблица 2
Динамика заболеваемости, смертности и летальности при РРСС
| Год | Восприимчивых животных, гол | Заболело, гол. | Пало, гол. | Заболева- емость, % | Смертность, % | Летальность, % |
| 2008 | 1341 | 117 | 34 | 8,7 | 2,53 | 29,1% |
| 2009 | 1256 | 131 | 33 | 10,4 | 2,62 | 25,2% |
| 2010 | 1127 | 142 | 29 | 12,5 | 2,57 | 20,4% |
Соотношение вирусных и бактериальных заболеваний свиней в Ростовской области с учетом сочетанных проявлений инфекционной патологии составляет приблизительно 1:1. По распространенности инфекций свиней РРСС занимает ведущее место. Кроме того, наиболее часто регистрируют микоплазмоз-22,8%, цирковирусную инфекцию – 15,9%, колибактериоз –12,5%, ПВИС – 10,1%, пастереллез – 8,5%. На долю остальных заболеваний приходится в сумме 17,7%. За период с 2008 по 2010 гг. заболеваемость свиней РРСС составила в среднем 10,5%.
Из 360 поросят, у которых возбудитель был выделен методом ПЦР, 131 голов (40,0%) были 0-8-недельного возраста, 100 голов – в возрасте 9-16 недель (30,5%), 86 голов – в возрасте 17-24 недель (26,3%). Пик заболеваемости приходился на возраст 8-18 недель.
2.3. Манифестация инфекции, вызванной вирусом РРСС
Репродуктивно-респираторный синдром - вирусное заболевание, манифестирующееся абортами, рождением мертвых поросят, преждевременными опоросами или задержанием опороса, поражением органов дыхания и окрашиванием кожи ушей и других органов.
В откормочных хозяйствах болезнь у подсвинков проявляется симптомами поражения органов дыхания, чаще болеет молодняк от 4 до 6 месяцев. У инфицированного поголовья вирус выделяется во внешнюю среду с калом, мочой, мокротой и выдыхаемым воздухом. Молодняк заражается трансплацентарным, алиментарным и аэрогенным путями. Способствуют возникновению болезни повышенная влажность и загазованность воздуха, сквозняки. У подсвинков заболевание протекает в виде бронхопневмоний - развивается катаральная, катарально-гнойная или крупозная пневмония с изменениями в интерстиции. У больных бронхопневмонией поросят отмечают лихорадку, угнетение, анорексию, истощение и глухой кашель. Респираторная форма ассоциированной инфекции характеризуется внезапным повышением температуры тела до 41-42°С, гиперемией слизистой оболочки носа, носоглотки и трахеи, угнетением, сухим болезненным кашлем, обильным серозно-слизистым истечением из носа (ринитом) и пенистым слюноотделением. По мере развития болезни слизь становится густой, в дыхательных путях образуются слизистые пробки и очаги гнойного воспаления, иногда некроза. При тяжелом течении болезни отмечают признаки асфиксии.
По степени тяжести пневмония, вызванная вирусом РРСС, у подопытных поросят протекала легко, средне, тяжело и крайне тяжело. Тяжесть течения заболевания мы определяли по совокупности шести неспецифических симптомов и степени их проявления, которые можно оценить визуально и по результатам специальных лабораторных исследований.
2.4. Морфофункциональные изменения при пневмонии, вызванной вирусом РРСС
Для изучения клинико-морфологической картины пневмонии, вызванной вирусом РРСС, рассмотрены 134 секционных наблюдений поросят 2-6 месяцев. Грипп, энзоотическая пневмония, цирковироз, пастереллез, гемофилез, микоплазмоз, бардотелиоз исключались методом ПЦР в областной ветеринарной лаборатории. На анализ отправляли кусочки легких. Исследования в период с 2008 по 2010 гг., базировались на сопоставлении клинической картины, морфологических, биохимических показателей крови и патологоанатомических вскрытий. У животных с субклиническим течением и отдельными участками поражения легких на гистологическом уровне не отмечали резко выраженных границ поражения легочной ткани. Участки поражения носили локальный аспект и характеризовались перибронхиальными и периваскулярными пролифератами альвеолярных клеток и макрофагов, которые располагались хорошо выраженными островками и были хорошо заметны при обзорной микроскопии.
При поражении отдельных долек легкого граница между пораженным и непораженным участком легкого была хорошо заметна, на пораженном участке отмечалась повышенная клеточность легочной ткани и заполнение альвеол экссудатом. При отсутствии экссудата в альвеолах отмечался отек межальвеолярных перегородок и стенки бронхиол, в острой стадии заболевания ярко выраженная экссудация в просвет альвеол. В экссудате обнаруживалось большое количество эритроцитов и лейкоцитов, при окраске гематоксилин – эозином он имел красный цвет, при окраске трихром по Масону в нем выделялись синие нити фибрина. Такую картину мы интерпретировали как фибринозное воспаление, которое проходило все стадии. В просвете альвеол увеличивалось количество лейкоцитов, они постепенно замещали эритроциты, затем клеточность альвеол снижалась и в итоге рассасывался фибринозный экссудат и восстанавливалась воздушность легочной ткани. При массивном распространении процесса обнаруживались по всем полям легких участки на разной стадии фибринозного воспаления, при этом величина участков зависела от тяжести течения заболевания и локальности процесса. Так, при легком течении отмечались поражения только в краниальных долях легких, а участки воспаления ограничивались диаметром от 0,3 до 1 см.
Была выражена мозаичность поражения, при более тяжелом течении заболевания целые доли одновременно имели темно-красный цвет легкого, при гистологическом исследовании в альвеолах обнаруживалось много эритроцитов. Если поражалась большая часть легкого, животные, как правило, погибали, а стадия разрешения так и не наступала.
Таким образом, при пневмонии, вызванной вирусом РРСС, у свиней в легких можно выделить несколько гистологических паттернов: при субклиническом течении возможна локальная пролиферация альвеолярного и бронхиального эпителия с формированием периваскулярных островков; при лобулярных поражениях пневмония носит интерстициальный характер с развитием участков фибринозного воспаления которые находятся на разных стадиях разрешения; при лобарных поражениях всегда развивается фибринозная пневмония, можно выделить практически все ее стадии.
У поросят с субклинической формой пневмонии, вызванной вирусом РРСС, были следующие показателей крови: к четырехмесячному возрасту - эритропения до 5±0,91012/л и лейкопения до 13,7±3,9109/л, до 5,8±0,1 ммоль/л; снижение уровня ионизированного калия. Уровень общего белка снизился и составил 57,6±2,1г/л; повысились СОЭ (9,1±4,1 мм/ч), количество альбуминов (24,8±1,9 г/л), уровень мочевины (8,6±1,3 ммоль/л), глюкозы (5,5±0,1 ммоль/л) и активность аланинаминотрансферазы (113,6±12,2Е/л), щелочной фосфатазы (103,9±14,1 Е/л), лактатдегидрогеназы (209,1±3,6 Е/л). У поросят с острым течением заболевания к четырехмесячному возрасту снизились: количество эритроцитов до 3,9±0,7 1012/л и лейкопении до 10,6±2 109г/л, до 3,9±0,1 ммоль/л, и уровень ионизированного калия. Уровень общего белка снизился и составил 51,5±2,2 г/л; повысились СОЭ (14,5±3,8 мм/ч), количество альбуминов (19,3±2,2 г/л), уровень мочевины (11,5±1,8 ммоль/л), глюкозы (9,3±0,1 ммоль/л) и активность аланинаминотрансферазы (136,6±12,7 Е/л), щелочной фосфатазы (185,1±12,9 Е/л), лактатдегидрогеназы (214,9±3,8 Е/л).
2.5. Результаты изучения иммунологического статуса у поросят с пневмонией, вызванной вирусом РРСС
Результаты определения относительного и абсолютного содержания Т-лимфоцитов у подопытных поросят в возрасте двух месяцев представлены в табл. 3.
Таблица 3
Показатели клеточного иммунитета периферической крови у подопытных поросят в 2-месячном возрасте
| Группа, (n = 20) | Т - лимфоциты | ||||||
| Т-лимфоциты | Т-хелперы, | Т-супрессоры, | Тх/Тс | ||||
| % | 109/л | % | 109/л | % | 109/л | ||
| Контрольная | 59,1 ± 0,6 | 3,5±0,1 | 30,1 ± 1 | 1,0± 0,1 | 19,4 ± 1,3 | 0,6±0,02 | 1,7 |
| I опытная | 49,2 ± 1,5* | 1,2±0,02*** | 26,9 ± 2,1* | 0,3±0,02*** | 16,8± 1,8 | 0,2±0,02*** | 1,7 |
| II опытная | 34,4± 1,5** | 0,4±0,04*** | 25,1 ± 1,2** | 0,08±0,01*** | 12,3 ± 1* | 0,02±0,02*** | 2,2 |
| III опытная | 15,7 ± 2,1** | 0,3±0,09*** | 21,3 ± 1,5** | 0,04±0,06*** | 8,9 ± 1,2* | 0,01±0,02*** | 2,6 |
* p<0,05,** p <0,01,*** p <0,001 - в сравнении с животными контрольной группы.
Результаты определения относительного и абсолютного содержания В-лимфоцитов у подопытных поросят представлены в табл. 4.
Таблица 4
Показатели гуморального иммунитета у подопытных поросят
в 2-месячном возрасте
| Группа, (n = 20) | В-лимфоциты | Иммуноглобулины | |||
| % | 109/л | А, мг/мл | G, мг/мл | М, мг/мл | |
| Контрольная | 50,9 ± 2,3 | 24,1±0,1 | 4,7±0,1 | 16,9±0,2 | 1,7±0,03 |
| I опытная | 60,8 ± 0,4 | 15,7±0,07 | 3,5±0,05 | 16,1±0,2 | 1,6 ± 0,1 |
| II опытная | 75,6 ± 2,3** | 13,3±0,1** | 2,7±0,1 ** | 14,1±0,2 | 1,5± 0,04 |
| III опытная | 77,9 ± 2,7** | 11,1±0,1** | 2,6±0,2 ** | 12,5±0,3 | 1,5± 0,06 |
*p<0,06,** p <0,01 - в сравнении с животными контрольной группы
Установлено, что у поросят контрольной группы число лейкоцитов периферической крови было 13,9109г/л, процентное количество Т-лимфоцитов составило 59,1, а абсолютное 3,5109/л; Т-хелперов и Т- супрессоров соответственно 1109/л и 0,6109/л.
У поросят первой опытной группы отмечалась лейкопения до 10,8109/л., сопровождаясь снижением процентного содержания Т-лимфоцитов до 49,2, а абсолютного до 1,2109/л, что на 2,3109/л меньше, чем в контрольной группе. Процентное и абсолютное значение Т-хелперов и Т-супрессоров составило 26,9 и 0,3109/л, 16,8% и 0,2109/л соответственно, что на 0,7109/л и 0,5109/л меньше, чем в контрольной группе.
Во второй опытной группе лейкопения была до 7,1109/л и лимфопения до 19,4109/л. Лимфопения сопровождалась снижением процентного содержания Т-лимфоцитов до 34,4, а абсолютного - до 0,4109/л, что на 3,1109/л меньше, чем в контрольной группе. Процентное и абсолютное значения Т-хелперов и Т-супрессоров составили 25,1 и 0,1109/л; 12,3 и 0,03109/л соответственно, что на 0,9109/л и 0,6109/л меньше, чем в контрольной группе.
В третьей опытной группе лейкопения доходила до 6,5109/л и лимфопения до 15,6109/л, сопровождаясь снижением процентного содержания Т-лимфоцитов до 15,7, а абсолютного - до 0,3109/л, что на 3,1109/л меньше, чем в контрольной группе. Процентное и абсолютное значения Т-хелперов и Т-супрессоров составили 21,3 и 0,04109/л; 8,9 и 0,01109/л соответственно - на 0,9109/л и 0,6109/л меньше, чем в контрольной группе.
Анализ показателей, характеризующих гуморальное звено иммунитета у поросят в возрасте двух месяцев (табл. 4), выявил, что относительное содержание в крови В-лимфоцитов у поросят контрольной группы составил 50,9%, а в абсолютном значении 24,1±0,1109/л, средний уровень иммуноглобулина А, G и М - соответственно 4,7; 16,9; 1,7.
У поросят первой опытной группы процентное количество В-лимфоцитов периферической крови увеличилось до 60,8, но, учитывая лейкопению и лимфопению, абсолютное значение В-лимфоцитов снизилось до 15,7±0,1109/л, что на 35% ниже, чем в контрольной группе. Средний уровень иммуноглобулина А, G и М составил соответственно 3,5; 16,1; 1,6 мг/мл, то есть на 27,1; 5,1 и 3,6 % ниже, чем в контрольной группе.
Во второй опытной группе процентное количество В-лимфоцитов периферической крови увеличилось до 75,6, но, учитывая лейкопению и лимфопению, абсолютное значение В-лимфоцитов оказалось 13,3±0,1109/л, что на 49,4% ниже, чем в контрольной группе. Средний уровень иммуноглобулина А, G и М составил соответственно 2,7; 14,1; 1,5 мг/мл, что на 45,8, 17,9 и 7,9 % ниже, чем в контрольной группе.
В третьей опытной группе процентное количество В-лимфоцитов периферической крови увеличилось до 77,9, но, учитывая лейкопению и лимфопению, абсолютное значение В-лимфоцитов оказалось 11,1±0,1109/л, - на 59,6% ниже, чем в контрольной группе. Средний уровень иммуноглобулина А, G и М составил соответственно 2,6; 12,5; 1,5 мг/мл, что на 49, 28,8 и 9,4 % ниже, чем в контрольной группе.
Результаты определения относительного и абсолютного содержания Т-лимфоцитов и В-лимфоцитов у подопытных поросят в возрасте трех месяцев представлены в табл. 5.
Установлено, что у поросят контрольной группы число лейкоцитов периферической крови было 15,1109/л, процентное количество Т-лимфоцитов - 60,7, абсолютное 4,5±0,1109/л, Т-хелперов и Т- супрессоров соответственно 33,2%, абсолютное 1,2±0,01109/л; 14%, абсолютное 0,5±0,02109/л.
Таблица 5
Показатели клеточного иммунитета периферической крови у подопытных поросят в возрасте трех месяцев
| Группа, (n = 20) | Т - лимфоциты | ||||||
| Т-лимфоциты | Т-хелперы, | Т-супрессоры, | Тх/Тс | ||||
| % | 109/л | % | 109/л | % | 109/л | ||
| Контрольная | 60,7 ± 0,6 | 4,2±0,04 | 33,2 ± 1 | 1,2±0,02 | 14 ± 0,7 | 0,5±0,03 | 2,6±0,01 |
| I опытная | 54,5 ± 1,6* | 2,2±0,02 | 30,4 ± 1,9* | 0,6±0,04 | 13,6± 2 | 0,3±0,03 | 2,5±0,01 |
| II опытная | 40± 1,7** | 0,8±0,04 | 26,5 ± 1,3** | 0,2±0,03 | 12,6± 0,8** | 0,09±0,01 | 2,3±0,01 |
| III опытная | 33,3± 1,4** | 0,3±0,04 | 21,3 ± 1,5** | 0,07±0,06 | 10,6± 0,9** | 0,03±0,01 | 2,2±0,01 |
* p<0,06,** p <0,01 - в сравнении с животными контрольной группы.
У поросят первой опытной группы отмечали лейкопению до 12,7109/л и лимфопению до 38,6109/л, что сопровождалось снижением процентного содержания Т-лимфоцитов до 54,6, а абсолютного до 2,2±0,1109/л, то есть на 51,8% меньше, чем в контрольной группе. Процентное и абсолютное значения Т-хелперов и Т-супресоров составили 30,4%, абсолютное 0,6109/л и 13,6%, абсолютное 0,3109/л соответственно, что на 56,9% и 55% меньше, чем в контрольной группе.
Во второй опытной группе отмечалась лейкопения до 8,4109/л и лимфопения до 27,9109/л, сопровождаясь снижением процентного содержания Т-лимфоцитов до 40%, а абсолютного до 0,8±0,04109/л, что на 89,6% меньше в сравнении с контрольной группой. Процентное и абсолютное значения Т-хелперов и Т-супрессоров составили 26,5%, 0,2±0,03109/л и 12,6%, 0,09±0,01109/л соответственно - на 94,6% и 91,7% меньше, чем в контрольной группе.
В третьей опытной группе лейкопения была до 5,8109/л и лимфопения до 21,8109/л, сопровождаясь снижением процентного содержания Т-лимфоцитов до 33,3%, а абсолютного до 0,3±0,04109/л - на 100,9% меньше в сравнении с контрольной группой. Процентное и абсолютное значения Т-хелперов и Т-супрессоров составили 21,3%, 0,07±0,05109/л и 10,6%, 0,03±0,01109/л соответственно, что на 104,2 и 103,1% меньше, чем в контрольной группе.
Все эти изменения: снижение общего числа Т-лимфоцитов и отдельных популяций РОК и их соотношений (р-РОК и в-РОК) - по всей видимости, отражают нарушение лимфопоэза, перераспределение клеток и изменение регуляторного потенциала лимфоидных тканей при постоянном потреблении микотоксинов с кормами.
Анализ показателей, характеризующих гуморальное звено иммунитета в возрасте трех месяцев (табл. 6), выявил, что относительное содержание в крови В-лимфоцитов у поросят контрольной группы составило 49,3%, а в абсолютном значении 24,6±0,1109/л, средний уровень иммуноглобулинов А, G и М соответственно 3,9; 16,4; 2,9 мг/мл.
Таблица 6
Показатели гуморального иммунитета у подопытных поросят в возрасте трех месяцев
| Группа, (n = 20) | В-лимфоциты | Иммуноглобулины | ||||
| % | 109/л | А, мг/мл | G, мг/мл | М, мг/мл | ||
| Контрольная | 49,3± 2,2 | 24,6±0,05 | 3,9±0,6 | 16,4±0,3 | 2,9±0,1 | |
| I опытная | 55,4±2 | 19,4±0,1 | 3,2±0,8 | 15,7±0,5 | 1,9 ± 0,1 | |
| II опытная | 69,9±2,7** | 17,7±0,1** | 2,5±1,6** | 14,9±0,8 | 1,4± 0,5** | |
| III опытная | 76,7±2,6** | 15,2±0,1** | 2,4±1,4** | 14,8±0,6 | 1,3± 0,4** | |
* p<0,06,** p <0,01 - в сравнении с животными контрольной группы.
У поросят первой опытной группы процентное количество В-лимфоцитов периферической крови увеличилось до 55,4, но, учитывая лейкопению и лимфопению, абсолютное значение В-лимфоцитов снизилось до 19,4±0,1109/л, что на 23,2% ниже, чем в контрольной группе. Средний уровень иммуноглобулина А, G и М составил соответственно 3,2; 15,7; 1,9 мг/мл, что на 32,5; 5,2 и 33,5 % ниже показателей контрольной группы.
Во второй опытной группе процентное количество В-лимфоцитов периферической крови увеличилось до 69,9, но, учитывая лейкопению и лимфопению, абсолютное значение В-лимфоцитов оказалось 17,7±0,1109/л, что на 31% ниже, чем в контрольной группе. Средний уровень иммуноглобулина А, G и М был соответственно 2,5; 14,9; 1,4 мг/мл - на 38,1, 9,6 и 56,8 % ниже показателей контрольной группы.
В третьей опытной группе процентное количество В-лимфоцитов периферической крови увеличилось до 76,7, но, учитывая лейкопению и лимфопению, абсолютное значение В-лимфоцитов оказалось 15,2±0,1109/л, что на 42,2% ниже, чем в контрольной группе. Средний уровень иммуноглобулина А, G и М составил соответственно 2,4; 14,8; 1,3 мг/мл, что на 30,6; 11,1 и 59,7 % ниже, чем в контрольной группе.
Результаты определения относительного и абсолютного содержания Т-лимфоцитов и В-лимфоцитов у поросят с пневмонией, вызванной вирусом РРСС, в возрасте четырех месяцев представлены в табл. 7.
Установлено, что у поросят контрольной группы среднее число лейкоцитов в периферической крови было 17,7109/л, процентное количество Т-лимфоцитов составило 53,4, а абсолютное среднее 4,5109/л, Т-хелперов и Т- супрессоров соответственно 31,6%, 1,3109/л и 15,2%, 0,6109/л.
У поросят первой опытной группы отмечалась лейкопения до 13,7109/л и лимфопения до 38,2109/л, что сопровождалось снижением процентного содержания Т-лимфоцитов до 49,9, а среднего абсолютного - до 2,2109/л, то есть на 57,3% меньше, чем в контрольной группе. Процентное и абсолютное значения Т-хелперов и Т-супрессоров - 24,7; 0,5109/л и 13,5; 0,3109/л соответственно, что на 68,9 и 62,9% меньше, чем в контрольной группе.
Таблица 7
Показатели клеточного иммунитета периферической крови у подопытных поросят в возрасте четырех месяцев
| Группа, (n = 20) | Т - лимфоциты | ||||||
| Т-лимфоциты | Т-хелперы, | Т-супрессоры, | Тх/Тс | ||||
| % | 109/л | % | 109/л | % | 109/л | ||
| Контрольная | 53,4 ± 0,4 | 4,5±0,01 | 31,6 ± 0,9 | 1,3±0,02 | 15,2 ± 0,6 | 0,6±0,02 | 2,3±0,02 |
| I опытная | 49,9 ± 1,3 | 2,2±0,1 | 24,7 ± 1,9* | 0,5±0,15 | 13,5± 1,6 | 0,3±0,03 | 2±0,01 |
| II опытная | 37,1 ± 1,4** | 0,9±0,01 | 20,1 ± 1,5** | 0,1±0,02 | 11,1 ± 0,8** | 0,09±0,01 | 1,9±0,01 |
| III опытная | 34,7 ± 1,8** | 0,5±0,02 | 18,2 ± 1,3** | 0,07±0,01 | 10,5 ± 1** | 0,04±0,02 | 1,9±0,02 |
* p<0,06,** p <0,02 - в сравнении с животными контрольной группы.
У поросят второй опытной группы - лейкопения до 10,6109/л и лимфопения до 28,3109/л, сопровождаясь снижением процентного содержания Т-лимфоцитов до 37,1, а абсолютного - до 0,9109/л, что на 88,6% меньше, чем в контрольной группе. Процентное и абсолютное значения Т-хелперов и Т-супрессоров - 20,1; 0,1109/л и 11,1; 0,09109/л соответственно, что на 96,9 и 94,3% меньше, чем в контрольной группе.
Таблица 8
Показатели гуморального иммунитета у подопытных поросят в возрасте четырех месяцев
| Группа, (n = 20) | В-лимфоциты | Иммуноглобулины | |||
| % | 109/л | А, мг/мл | G, мг/мл | М, мг/мл | |
| Контрольная | 56,6 ± 2,5 | 29,7±0,2 | 4,1±0,9 | 12,6±0,2 | 2,1 ± 0,2 |
| I опытная | 16,1 ± 2,8 | 20,9±0,2 | 2,8±1,4 | 11,8±0,4 | 1,3 ± 0,4 |
| II опытная | 72,9 ± 3,2 | 18,7±0,03 ** | 2,4±1,6 ** | 11,5±0,5 | 1,6 ± 0,8 |
| III опытная | 75,4 ± 2,9 | 14,7±0,1 ** | 2,2±1,3 ** | 11,1±0,4 | 1,5 ± 0,3 |
p<0,06,** p <0,01 - в сравнении с животными контрольной группы
В третьей опытной группе - лейкопения до 8,2109/л и лимфопения до 21,5109/л, сопровождаясь снижением процентного содержания Т-лимфоцитов до 34,7, а абсолютного - до 0,5109/л, то есть на 97,9% меньше, чем в контрольной группе. Процентное и абсолютное значения Т-хелперов и Т-супрессоров - 18,2; 0,07109/л и 10,5; 0,04109/л соответственно, что на 103,5 и 102,1% меньше, чем в контрольной группе.
Снижение общего числа Т-лимфоцитов и отдельных популяций РОК и их соотношения (р-РОК и в-РОК) отражает нарушение лимфопоэза при постоянном потреблении микотоксинов с кормом, перераспределение клеток и изменение регуляторного потенциала лимфоидных тканей.
Анализ показателей, характеризующих гуморальное звено иммунитета у поросят в возрасте четырех месяцев (табл. 8), выявил, что относительное содержание в крови В-лимфоцитов у животных контрольной группы составило 56,6%, а среднее абсолютное значение 29,7109/л, уровень иммуноглобилина А, G и М составил соответственно 4,1; 12,6; 2,1 мг/мл.
У поросят первой опытной группы процентное количество В-лимфоцитов периферической крови снизилось до 16,1, но, учитывая лейкопению и лимфопению, абсолютное число В-лимфоцитов снизилось до 20,9109/л, что на 32,7% меньше, чем в контрольной группе. Уровень иммуноглобулина А, G и М составил соответственно 2,8; 11,8; 1,3 мг/мл, то есть на 32,3; 6,7 и 42,9 % ниже показателей контрольной группы.
Во второй опытной группе процентное количество В-лимфоцитов в периферической крови увеличилось до 72,9, но, учитывая лейкопению и лимфопению, абсолютное среднее значение В-лимфоцитов оказалось 18,7±0,03, что на 40,7% ниже, чем в контрольной группе. Средний уровень иммуноглобулина А, G и М - соответственно 2,4; 11,5; 1,6 мг/мл - на 44,7; 10,5 и 28,6 % ниже, чем в контрольной группе.
В третьей опытной группе процентное количество В-лимфоцитов в периферической крови увеличилось до 75,4, но, учитывая лейкопению и лимфопению, абсолютное среднее значение В-лимфоцитов оказалось 14,7±0,1, что на 40,7% ниже, чем в контрольной группе. Средний уровень иммуноглобулина А, G и М составил соответственно 2,2; 11,1; 1,5 мг/мл, то есть на 48,6; 13,4 и 33,2 % ниже показателей контрольной группы.
2.6. Сравнительный анализ схем лечения свиней, больных пневмонией, вызванной вирусом РРСС
Для сравнительной оценки эффективности различных схем лечения свиней при пневмонии, вызванной вирусом РРСС, было создано 3 группы животных по 21 животному в каждой группе.
Первая группа - 21 животное в возрасте 4 мес., с диагнозом пневмония, вызванная вирусом РРСС средней тяжести.
Вторая группа - 21 животное в возрасте 4 мес., с диагнозом пневмония, вызванная вирусом РРСС с тяжелым течением заболевания.
Третья группа - 21 животное в возрасте 4 мес. с диагнозом пневмония, вызванная вирусом РРСС с очень тяжелым течением заболевания.
Каждая группа была разбита на три подгруппы: контрольную и две опытные.
Животных контрольных подгрупп всех групп лечили одинаково, по следующей схеме: драксин, в/м в дозе 1 мл (100 мг) на 40 кг массы животного однократно; ронколейкин, подкожно в дозе 3 000 МЕ/кг с интервалом 24 часа пять дней подряд.
Животных первых опытных подгрупп каждой группы лечили по следующей схеме: драксин, в/м в дозе 1 мл (100 мг) на 40 кг массы животного однократно; ронколейкин, подкожно в дозе 3 000 МЕ/кг с интервалом 24 часа пять дней подряд; интровит-е-селен, в/м в дозе 1 мл на 10 кг массы тела однократно.
Животных вторых опытных подгрупп каждой группы лечили по следующей схеме: драксин, в/м в дозе 1 мл (100 мг) на 40 кг массы животного однократно; ронколейкин, подкожно в дозе 3 000 МЕ/кг с интервалом 24 часа пять дней подряд; интровит-Е-селен, в/м в дозе 1 мл на 10 кг массы тела однократно; оксодигидроакридинилацетат натрия в/м, в дозе 5 мг/кг 2 инъекций с интервалом 48 часов.
Динамику заболевания отслеживали по клиническим и лабораторным признакам. При этом морфологические исследования крови проводили один раз в день, а биохимические один раз в 3 дня.
Наиболее эффективной схемой лечения поросят при пневмонии, вызванной вирусом РРСС, является сочетание драксина, в/м в дозе 1 мл на 40 кг массы животного однократно; ронколейкина, подкожно в дозе 3 000 МЕ/кг с интервалом 24 часа пять дней подряд; интровита-Е-селена, в/м в дозе 1 мл на 10 кг массы тела однократно; оксодигидроакридинилацетата натрия в/м, в дозе 5 мг/кг 2 инъекций с интервалом 48 часов.
3. ВЫВОДЫ
1. Инфекционная патология свиней в Ростовской области представлена в основном бактериальными заболеваниями (48,1% от общей инфекционной патологии). По распространенности инфекций свиней РРСС занимает третье место (12,5%). Кроме того наиболее часто регистрируют микоплазмоз – 22,8%, цирковирусную инфекцию – 15,9%, РРСС и колибактериоз – по 12,5%, ПВИС – 10.1%, пастереллез – 8,5%. На долю остальных заболеваний 21,5%.
2. За период с 2008 по 2010 гг. заболеваемость свиней пневмонией, вызванной вирусом РРСС, составила в среднем 10,4%. За этот период заболеваемость свиней РРСС была относительно стабильна, варьируя от 8,7% в 2008 году до 12,5% в 2010 году.
3. Наряду с РРСС из 94 клинически больных поросят у 26 (30,43%) из них зарегистрирован пастереллез, у 15 – цирковирусная инфекция, 12 случаев (14,05%) приходилось на РРСС и 10 (11,7%) на пастереллез с репродуктивно-респираторным синдромом. У 8 (9,36%) поросят наряду с РРСС выявляли бордетеллиоз. Только в двух случаях (2,34%) РРСС был обнаружен без присутствия других возбудителей. Как выяснилось, наиболее часто респираторному РРСС сопутствуют пастереллез (42,1%), РРСС (35,1%) и ЦВИС (26,9%).
4. Из 370 поросят, у которых возбудитель выделен методом ПЦР, 135 голов (36,5%) были 10-15-недельного возраста, 100 голов – в возрасте 15-20 недель (27%), 88 голов – в возрасте 5-10 недель (26,1%). Пик заболеваемости приходился на возраст 8-18 недель.
5. У поросят тяжелым течением заболевания к трехмесячному возрасту отмечались снижение количества эритроцитов до 4,1±1,3 1012/л и лейкопения до 8,4±1,9109г/л и до 4,1±0,1 ммоль/л, а также уровень ионизированного калия. Уровень общего белка снизился и составил 54,5±4,1 г/л; повысились СОЭ (9,2±5,6 мм/ч), количество альбуминов (20,5±2,5 г/л), уровень мочевины (12,5±1,1 ммоль/л), глюкозы (10,1±0,1 ммоль/л) и активность аланинаминотрансферазы (140,1±10,6 Е/л), щелочной фосфатазы (184,1±7,1 Е/л), лактатдегидрогеназы (180,9±6,4 Е/л).
6. У поросят со средним течением заболевания выраженных изменений иммунного статуса не было. У поросят с РРСС тяжелой формы отмечалось снижение Т-хелперов с 33,2±1% до 26,5±1,3%; Т-супрессоров с14±0,7% до 12,6±0,8%; В-лимфоцитов с 49,3±2,2% до 69,9±2,7%; содержание иммуноглобулинов А и М снизилось с 3,9=0,6 и 2,9=0,1мг/мл до 2,5=1,6 и 1,4=0,5 мг/мл соответственно. У животных с очень тяжелым течением заболевания при РРСС снижение Т-хелперов до 21,3±1,5%; Т-супрессоров до 10,6±0,9%; В- лимфоцитов до 76,7±2,6%; содержание иммуноглобулинов А и М уменьшилось до 2,4±1,4 и 1,3±0,4 мг/мл соответственно относительно показателей у животных контрольной группы.
7. Наиболее эффективной схемой лечения при пневмонии поросят, вызванной вирусом РРСС, является сочетание драксина в/м в дозе 1 мл на 40 кг массы животного однократно; интровита-Е-селена, в/м в дозе 1 мл на 10 кг массы тела однократно; оксодигидроакридинилацетата натрия в/м, в дозе 5 мг/кг 2 инъекций с интервалом 48 часов.
Данная схема оказалась эффективной при лечении животных с хроническим течением пневмонии, вызванной вирусом РРСС.
4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
- Для лечения свиней при пневмонии, вызванной вирусом РРСС, рекомендовать сочетание драксина, в/м в дозе 1 мл на 40 кг массы животного однократно; интровит-Е-селена, в/м в дозе 1 мл на 10 кг массы тела однократно; оксодигидроакридинилацетат натрия в/м, в дозе 5 мг/кг 2 инъекций с интервалом 48 часов.
- Полученные данные по морфофункциональным изменениям при РРСС лежат в основе классификации заболевания по тяжести течения, что дает основание строить прогноз эффективности проводимой терапии.
- Результаты исследований могут быть использованы как справочный материал при составление учебных пособий и руководств по физиологии и патологии домашних животных для студентов по специальности «Ветеринария» и «Зоотехния».
- СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ:
- Ключников, А.Г. Место РРСС в нозопрофиле инфекционной патологии свиней в Ростовской области / А.Г. Ключников, А.Н. Бодряков, М.С. Владыкин //Ветеринарная патология, 2010 – N 3(34). – С. 32-37.
- Бодряков, А.Н. Морфофункциональные изменения крови при пневмонии, вызванной вирусом РРСС. / А.Н. Бодряков, М.С. Владыкин // Ветеринарная патология, 2011 – N 1(36). – С. 9-11.
- Ключников, А.Г. Состояние гуморальной и клеточной системы иммунитета у свиней с репродуктивно-респираторным синдромом свиней/ А.Г. Ключников, Л.П. Миронова, С.Н. Карташов, М.С. Владыкин //Ветеринарная патология, 2011 – N 1(36) – С. 13-15.
- Ключников, А.Г. Влияние инфицирования свиней вирусом РРСС на иммунный статус / А.Г. Ключников, Л.П. Миронова, С.Н. Карташов, А.Н. Бодряков, М.С. Владыкин. //Вестник Саратовского госагроуниверситета им. Н.И. Вавилова, 2011 – N 3 – С. 9-11.
- Бодряков, А.Н. Биохимические исследования крови у поросят, больных РРСС / А.Н. Бодряков, М.С. Владыкин // Инновационные процессы в АПК. Сборник статей III Международной научно-практической конференции преподавателей, молодых ученых, аспирантов и студентов факультета РУДН – Москва, 2011 – С. 313-314.
- Бодряков, А.Н.. Иммунный статус у свиней, больных пневмонией, вызванной вирусом РРСС / А.Н. Бодряков, М.С. Владыкин // Инновационные процессы в АПК. Сборник статей III Международной научно-практической конференции преподавателей, молодых учёных, аспирантов и студентов факультета РУДН - Москва, 2011 – С. 315-316.
- Владыкин, М.С. Особенности морфологических изменений легких при репродуктивно-респираторном синдроме / М.С. Владыкин // «Научное обеспечение инновационного развития отечественного животноводства». Материалы Всероссийской научно-практической конференции ГНУ СКЗНИВИ г. Новочеркасск, 2011 – С. 69-72.
- Владыкин, М.С. Особенности иммунного статуса при репродуктивно-респираторном синдроме свиней / М.С. Владыкин // «Научное обеспечение инновационного развития отечественного животноводства». Материалы Всероссийской научно-практической конференции ГНУ СКЗНИВИ, г. Новочеркасск, 2011 – С. 75-78.
- Владыкин, М.С. Место РРСС в нозопрофиле инфекционной патологии свиней Ростовской области / М.С. Владыкин // «Научное обеспечение инновационного развития отечественного животноводства». Материалы Всероссийской научно-практической конференции ГНУ СКЗНИВИ, г. Новочеркасск, 2011. – С. 162-165.
- Владыкин, М.С. Характеристика клеточного иммунитета при репродуктивно-респираторном синдроме свиней / М.С. Владыкин // Материалы VII Международной конференции молодых ученых, посвященной 75-летию профессора А.В. Газданова, «Актуальные и новые направления сельскохозяйственной науки», г. Владикавказ, 2011 – С. 257-261.
