Фармакология и применение препаратов железа в ветеринарии и животноводстве
На правах рукописи
ТРОШИН АНДРЕЙ НИКОЛАЕВИЧ
ФАРМАКОЛОГИЯ И ПРИМЕНЕНИЕ
ПРЕПАРАТОВ ЖЕЛЕЗА
В ВЕТЕРИНАРИИ И ЖИВОТНОВОДСТВЕ
06.02.03 – ветеринарная фармакология с токсикологией
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
доктора ветеринарных наук
Краснодар 2013
Работа выполнена в ГНУ Краснодарский научно-исследовательский ветеринарный институт Росельхозакадемии.
Научный консультант: доктор ветеринарных наук, профессор,
член-корреспондент РАСХН
Антипов Валерий Александрович
Официальные оппоненты:
доктор ветеринарных наук, профессор
Александров Игорь Дмитриевич,
доктор ветеринарных наук, профессор
Беляев Валерий Анатольевич
доктор ветеринарных наук, профессор,
Уразаев Дмитрий Николаевич
Ведущая организация: ФГБУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности», г. Казань.
Защита состоится «29» августа 2013 года в 1000 на заседании диссертационного совета Д 220.038.07 при ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» по адресу: 350044 г.Краснодар, ул. Калинина, 13
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке при ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» (350044 г. Краснодар, ул. Калинина, 13)
Автореферат размещен на официальном сайте ФГБОУ ВПО «Кубанский ГАУ» - http://kubsau.ru и сайте ВАК РФ – http://vak.ed.gov.ru
Автореферат разослан « » 2013 года
Ученый секретарь
диссертационного совета Родин И.А.
1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы исследования. Современное аграрное производство, основанное на искусственных условиях воспроизводства и содержания, создает предпосылки возникновения и массового проявления нарушений обмена веществ у животных. Анемический синдром часто наблюдается у беременных, кормящих, молодых, быстрорастущих животных. Последние задерживаются в росте и развитии, не полностью реализуют потенциал продуктивности (В.С. Бузлама, М.И. Рецкий и др. 1978; В.Т. Самохин, 1982; А.Г. Шахов и др.; 1995; М.И. Рабинович, 1997; В.А. Антипов, 2001 и др.).
Степень разработанности темы исследования. Изучение роли гипо и гиперферриемии в этиологии и патогенезе болезней способствовало значительному прогрессу в профилактике и лечении анемии и сопутствующих ей болезней животных (J. P. McGowan, A. Chrichton, 1924; Venn, 1947; J.J. А.И. Карелин, 1983; О.В. Мерзленко, 1998; В.В. Сазонова, 2007; И.Д. Александров, 2013).
Неорганические соли железа (II) (чаще всего используют сульфат) в качестве энтеральных форм целесообразны и эффективны (Pierre Blaud, 1832; Hart E.B., 1929), но их применение часто сопровождается нарушением пищеварения и низкой усвояемостью подобных ионных ферропрепаратов, включая органические глюконат, лактат и др.
Полисахаридные комплексы гидроксида железа (III) для инъекций (Binger, 1958, Т.В. Полушина и др., 1974, А.В. Ариповский и др., 2001), применяемые в режиме высоких доз, приводят к перманентной гиперферриемии, как следствие угнетению иммунитета и развитию микроорганизмов, что в сумме с местной воспалительной реакции вплоть до канцерогенеза в месте инъекции. (Oppenheimer S. и др., 1986, 2001, Н.А. Трошин 2002, В.М. Чернов и др., 2004; Д.Н. Уразаев, А.А. Дельцов, 2013).
Аминокислотные хелаты железа гидролизуются и соответственно включаются в метаболизм медленнее других соединений, не высвобождая свободных ионов железа (A.K. Egeli, T. Framstad, 1998, В.И. Дорожкин 1998).
Ферроаквакомплексы, стабилизированные протеинами, вызывают существенно меньшее раздражение (в том числе желудочно-кишечного тракта), а вот использование их жидких лекарственных форм (в том числе для инъекций) ограничено недостаточными растворимостью и стабильностью (Brady, 1978, Pagella P.G. и др., 1984, Кремонези П. и др., 2004).
В последние годы арсенал ферропрепаратов пополнился значительным количеством отечественных и зарубежных лекарственных средств и кормовых добавок, использование которых требует дополнительного изучения в плане всестороннего фармакотоксикологического эксперимента.
Таким образом, проблема анемии требует дальнейшего изучения, разработки и изучения фармакологических свойств и показаний к применению новых ферропрепаратов, отличающихся повышенной биосовместимостью с млекопитающими.
Цели и задачи исследований. Целью настоящего исследования является научное и практическое обоснование разработки комплексных органических и хелатных препаратов железа, изучить их свойства и влияние на организм некоторых животных.
В соответствии с поставленной целью определены задачи:
- разработать комплексные железосодержащие лекарственные средства ферро-квин, биожелезо, бажедин, биомос на основе декстана и декстрина железа;
- изучить фармако-токсикологические, биологические свойства железодекстрановых и железодекстриновых препаратов на лабораторных животных;
- изучить физико-химические показатели препаратов железа;
- провести сравнительную оценку влияния различных доз ферро-квина, био-железа, бажедина, биомоса, феранимала, седимина на концентрацию железа в органах и тканях, метаболизм лабораторных животных;
- применить различные дозы железосодержащих препаратов в рационах животных с определением концентрации железа в тканях;
- разработать нормативно-техническую документацию по получению, применению и контролю качества на новые препараты.
Научная новизна. Впервые разработаны и экспериментально изучены ферропрепараты, представляющие собой железо(III)-декстриновые комплексы: ферро-квин (субстанция), ферро-квин для инъекций и ферро-квин сироп; комплексные препараты седимин и био-железо, а так же кормовые добавки биомос и бажедин.
Впервые установлена терапевтическая эквивалентность трехвалентных форм ферропрепаратов, а так же смешанных двух и трехвалентных, на основе природного сырья для профилактики и лечения железодефицитной анемии у животных.
В работе представлены три патента на изобретения - №2280457 «Лекарственное средство для лечения анемий», № 234985 «Способ обогащения подкормки для пчел» и № 2338516 «Железосодержащее средство для профилактики и лечения анемии у животных».
В результате выполнения работы научно обоснованы и экспериментально установлены принципы получения лекарственных средств, их антианемическое действие и биологическая активность.
Теоретическая и практическая значимость исследований.
Разработанные ферропрепараты обладают выраженным фармакологическим действием, положительно влияют на эритро и гемопоэз. При применении в комплексной терапии незаразных болезней животтных способствуют повышению основных иммунобиологических показателей, сокращению сроков выздоровления и повышению продуктивности животных.
На основании результатов исследований разработаны стандарты организации и технологические инструкции, регламентирующие технологический процесс производства препарата ферро-квин (СТО 9336-001-26582716-06). Широкие производственные испытания препаратов ферро-квина разрешены начальником управления федеральной службы по ветеринарному и фитосанитарному надзору по Краснодарскому краю и республике Адыгея (Временная инструкция от 18.10.2006). Разработана нормативная документация и показания к применению препаратов бажедин, биомос, биожелезо, феранимал, седимин.
Создание препарата ферро-квин является приоритетным региональным инвестиционным проектом в номинации инновационные проекты Краснодарского края по итогам международного экономического форума Сочи-2005.
Апробация работы. Результаты экспериментальных и клинических исследований были представлены: на заседаниях Ученого Совета и научных конференциях факультета ветеринарной медицины ФГОУ ВПО Кубанский ГАУ (Краснодар, 2003-2007 г.г.) и ГНУ Краснодарского НИВИ Россельхозакадемии (2008 – 2013 гг.); на конкурсе Русских инноваций журнала Эксперт (Москва, 2005); на международном экономическом форуме Сочи-2005, на промышленной ярмарке Ганновермессе, (Ганновер, 2005); на международной научно-практической конференции Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях, посвященной 60-летию ГНУ Краснодарского НИВИ (Краснодар, 2006); на I Международной научно-практической конференции «Новости научной мысли» (Днепропетровск, 2006); на международном экономическом форуме «Дни Краснодарского края в Германии», (Мюнхен, 2006); на международной конференции «Фундаментальные и прикладные исследования высшей школы» (Сингапур, 2007); на международном экономическом форуме «Дни Краснодарского края в Китае», (Пекин, 2007); на II Международной научно-практической конференции Аграрная наука сельскому хозяйству (Барнаул, 2007); на международном экономическом форуме «Дни Краснодарского края в Австрии», (Вена, 2007); на международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы ветеринарной медицины, биологии и животноводства» (Троицк, 2007); на Всероссийской научно - практической конференции «Актуальные проблемы функциональной и морфофункциональной диагностики болезней животных» (Новочеркасск, 2007); на IV Международной научно-практической конференции «Агропромышленный комплекс: состояние, проблемы, перспективы» (Пенза, 2007); на XV международном Московском ветеринарном конгрессе (Москва, 2007); «Разработка и внедрение в производство лекарственного средства для профилактики железодефицитной анемии» в 2006 г. отмечены серебряной медалью выставки «Золотая осень» на ВВЦ, г. Москва.
Публикации. Основные научные результаты, включенные в диссертацию, опубликованы в 47 печатных работах, в том числе 3 патентах на изобретение и 17 статьях в ведущих рецензируемых научных журналах.
Положения, выносимые на защиту:
- получение и физико-химические свойства железосодержащих препаратов, нормативная документация на препараты;
- результаты изучения токсических и фармакологических свойств разработанных препаратов;
- профилактическая и терапевтическая эффективность ферро-квина, бажедина, биомоса, биожелеза, феранимала, седимина при железодефицитной анемии и некоторых незаразных болезнях животных.
Объем и структура диссертации. Работа изложена на 312 страницах и включает введение - актуальность темы исследования, степень её разработанности, цели и задачи, научную новизну, теоретическую и практическую значимость работы, методологию и методы исследований, положения выносимые на защиту, степень достоверности и апробацию результатов; результаты собственных исследований, их обсуждение; заключение - выводы, предложения, список литературы и приложения. Диссертационная работа проиллюстрирована 22 таблицами и 6 рисунками. Список литературы включает 498 источников, в том числе 275 на иностранных языках.
2. МЕТОДОЛОГИЯ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Работа выполнялась в лаборатории фармакологии ГНУ Краснодарского научно-исследовательского ветеринарного института в соответствии с планом научно-исследовательских работ по заданию 08.04.04 «Разработать новые высокоэффективные средства профилактики и терапии массовых нарушений обмена веществ и других незаразных заболеваний сельскохозяйственных животных (№ государственной регистрации 15070.3666026906.06.8.004.5).
Исследования проведены ООО «Биометаллика» по госконтакту № 2509р/4899 от 17.06.04 при поддержке Фонда содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере.
Препараты ферро-квин, бажедин и биомос изготовлены в НПВП «Ветфарм», г. Тимашевск Краснодарского края и на кафедре терапии и фармакологии Кубанского ГАУ, г. Краснодар. Препараты седимин, феранимал и био-железо – фирмой А-Био, г. Москва.
Доклиническое и клиническое изучение препарата проведено в соответствии с требованиями соответствующих «Руководства по экспериментальному изучению новых фармакологических веществ» и «Руководства по проведению клинических исследований новых лекарственных средств». Использовали здоровых половозрелых животных, прошедших 14-дневный карантин. Содержание экспериментальных животных соответствовало Санитарным правилам по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев). Животные получали стандартную диету в соответствии с действующими нормами. Наряду с подопытными животными содержались контрольные животные. (Хабриев Р.У. с соавт., 2005). При постановке и учете результатов опытов использованы токсикологические, фармакологические, физиологические, клинические, биохимические, морфологические, иммунологические, статистические и другие методы исследований.
В экспериментальной части работы использовали 208 мышей, 210 крыс, 36 морских свинок, 40 кроликов, 3425 свиней, 1236 голов крупного рогатого скота и 12 пчелосемей.
Определение токсичности, с учетом специфики лекарственных средств и кормовых добавок для животных, а так же выявления возможных побочных свойств, неблагоприятного действия и отдаленных последствий проводили в соответствии с «Методическими указаниями по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве», утвержденными ГУВ СССР (1991), а так же «Методическими рекомендациями по токсико-экологической оценке лекарственных средств, применяемых в ветеринарии», РАСХН (1998) и «Научно-методологическими аспектами исследования токсических свойств фармакологических лекарственных средств для животных» (Смирнов А.М., Дорожкин В.И., 2008).
Острую токсичность изучали с использованием грызунов, определяли переносимые, токсические и летальные дозы методом Кербера. За животными в течении 2 недель вели непрерывное наблюдение, учитывали общее состояние, исследовали гематологические показатели, регистрировали сроки интоксикации, гибели и их непосредственные проявления в органах и тканях.
Изучение подострой токсичности ферро-квина проводили при пероральном, подкожном, внутримышечном и внутрибрюшинном введении препарата. Использовали терапевтическую дозу, и дозы эквивалентные соответственно 3-х кратной и 5-ти кратной терапевтической. Препараты для инъекций вводили внутрибрюшинно в дозе составляющей 1/50, 1/20 и 1/10 от дозы LD50.
Изучение хронической токсичности ферропрепаратов проводили на грызунах и продуктивных животных, на которых получен фармакологический эффект. При внутрибрюшинном введении в дозе составляющей 1/10 от дозы LD50. При введении препарата перорально, подкожно и внутримышечно использовали дозу эквивалентную 10-ти кратной терапевтической.
Препарат при пероральном применении вводили внутрижелудочно с помощью металлического зонда с инъектором.
Эмбриотоксические и тератогенные свойства железосодержащего препарата ферро-квин изучали по методике А.П. Шицковой и др. (1977), раннюю и позднюю резорбцию, общую эмбриональную смертность, выживаемость подсчитывали по формулам, предложенным А.М. Малашенко и И.К. Егоровым (1977). Аномалии скелета выявляли по методу Даусона (1984). Критериями оценки эмбриотоксического и тератогенного действия препарата служили показатели гибели зародышей на пред- и постимплантационных стадиях развития (эмбриональный эффект), наличие аномалий развития внутренних органов и скелета (тератогенный эффект), уровень плодовитости, масса зародышей. Препараты вводили инъекционно в дозе 5 и перорально 10 мл/кг массы на 5 и 10 дни беременности подопытных животных (периоды имплантации и органогенеза соответственно).
Раздражающее и кожно-резорбтивное действие препаратов изучали на морских свинках и кроликах методом накожных аппликаций, а так же внутрикожных инъекций и пробирочным методом.
Иммунотоксическое действие оценивали по данным исследования фагоцитарной активности макрофагов, активности лизосомальных мембранных ферментов, влияния препаратов на систему комплемента и на реакцию гиперчувствительности замедленного типа. Фагоцитарную активность макрофагов оценивали по изменению процента фагоцитоза за часа, его индексу за 1 и 5 часов, а так же индексу завершенности фагоцитоза. Постановку реакции НСТ-теста проводили стандартным общепринятым методом. Оценку степени влияния ферро-квина на систему комплемента производили с помощью гемолитического метода титрования сывороточного комплемента.
Влияние ферропрепаратов на РГЗТ. При постановке реакции, сенсибилизацию мышей осуществляли подкожным введением животным эритроцитов барана в дозе 1х107 клеток. На 5 сутки после сенсибилизации животные получали разрешающую дозу – 1х108 ЭБ в 0,05 мл физиологического раствора в подушечку задней лапы. В контрольную лапу вводили физиологический раствор в том же объеме. Местную воспалительную реакцию оценивали через 24 часа по разнице массы опытной и контрольной лап. Для каждой мыши вычисляли индекс реакции. Соответствующие лекарственные формы ферропрепаратов вводили орально и внутримышечно в десятикратной терапевтической дозе - 10 мл/кг массы тела. В первой группе животных препараты вводили за 1 час до сенсибилизации, во второй – за 1 час до разрешающей дозы и в третьей группе за 1 час до сенсибилизации и за 1 час до разрешающей дозы.
Мутагенную активность определяли методом учета доминантных летальных мутаций в зародышевых клетках мышей.
Канцерогенность оценивали методом метафазного анализа аберраций (изменения структуры) хромосом в клетках костного мозга млекопитающих.
Фармакокинетику изучали путем определения содержания железа в органах, тканях и биологических жидкостях белых крыс фотометрическим методом.
Остаточные количества определяли по содержанию железа в органах, тканях и биологических жидкостях фотометрическим методом.
Клиническая оценка фармакологических свойств включала внутреннее и парентеральное применение лекарственных форм разработанных ферропрепаратов с целью профилактики и лечения железодефицитной анемии у животных с учетом заболеваемости и падежа, сохранности животных, их продуктивности, воспроизводительных показателей и качества животноводческой продукции.
В опытах регистрировали данные клинических и лабораторных исследований. Учитывали показатели белкового, углеводного, липидного, макро и микроэлементного обмена.
Группы животных комплектовали по принципу аналогов, с учетом породы, пола, массы, возраста, условий содержания и кормления. Предварительные опыты проводились в условиях клиники факультета ветеринарной медицины, а производственные испытания в условиях учхоза Кубань и на животноводческих объектах аграрных предприятий Краснодарского края.
Профилактическую эффективность ферропрепаратов при железодефицитной анемии изучали на поросятах, которым в опыте в 3-х дневном возрасте, вводили ферро-квин в дозе 1,0 мл на голову, а в контроле – препараты аналоги - урсоферран и ферроглюкин в дозе 1,5 мл на голову) или стерильный физраствор в той же дозе (группа отрицательного контроля). Все препараты применяли в дозах согласно инструкциям по применению. Инъецировали однократно, внутримышечно в область бедра.
Использовали опытные образцы лекарственного средства ферро-квин с содержанием 75 мг/мл железа и серийные образцы урсоферрана 100 мг железа на мл, ферроглюкина – 75 мг железа/мл. До опыта, в 21 и 60 дневном возрасте поросят взвешивали, в 2-х, 5, 15, 30 и 60 дневном возрасте брали кровь для гематологических и биохимических исследований; определяли содержание гемоглобина, подсчитывали количество эритроцитов, лейкоцитов, цветовой показатель крови, СОЭ и лейкоформулу. В сыворотке крови определяли содержание общего белка, глюкозы, железа, ферменты печени.
Терапевтическую эффективность ферропрепаратов изучали на больных железодефицитной анемией, которым в 10-х дневном возрасте, внутрь давали ферро-квин и препарат-аналог - мальтофер, животным третьей группы применяли перорально сульфат железа, животные четвертой группы ферропрепараратов не получали.
Профилактическую эффективность ферро-квина при анемии у супоросных и лактирующих свиней определяли в опыте на свиноматках за месяц до и в течении месяца после опороса. В опыте животным давали ежедневно внутрь препараты железа в форме ферро-квина или сульфата железа, животные третьей группы дополнительных ферропрепаратов не получали.
Статистическая обработка результатов проведена программой Microsoft Excel на компьютере «Intel Core i5». Достоверность оценивали методом парных сравнений, c использованием критерия Стъюдента (ГФ XI, 1991).
3. ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
3.1. Получение и физико-химические свойства ферропрепаратов.
Для разработки препаратов использовали действующие и вспомогательные вещества, соответствующие требованиям технологической документации; изготавливали лекарственные средства и кормовые добавки в лабораторных и производственных условиях по фармакопейным методам, изложенным в соответствующих общих и частных статьях.
Физико-химические свойства разработанных ферропрепаратов изучали с учетом их компонентов, а так же лекарственной формы, по фармакопейным методам и НД Департамента ветеринарии – «ветеринарные препараты, показатели качества и безопасности».
Для реализации гипотезы получения стабильных in vitro и in vivo средств предложена трехкомпонентная модель ферропрепаратов. Схематично формулу железо(III)-декстрино-протеинатов, в виде ферроаквакомплексов, можно выразить как Fe(H2O)63+ * RO * RP, где RO – органический комплексообразователь - декстрин, а RP – защитный протеин (хелатор) или в виде Fe3+ * RO * RP.
Аналогичным образом синтезированы препараты двухвалентного железа соответствующие общей формуле Fe2+ * RO * RP.
Описанным методом, руководствуясь составленной нами классификацией ферропрепаратов, изготовили протеиновые формы трехвалентных ферропрепаратов, в частности декстрана и декстрина. В качестве протеина использовали нативные, частично или полностью гидролизованные белки животного или растительного происхождения, такие как альбумин, казеин, коллаген и т.д.
Согласно известным требованиям к ферропрепаратам они должны быть нетоксичными, нейтральными, стойкими в широком диапазоне рН, иметь лиганд с высокой степенью сродства к железу, который, для адекватной усвояемости, должен достаточно быстро включаться в обмен веществ. По итогам анализа предварительных лабораторных тестов для дальнейших исследований нами был отобран комплекс трехвалентного железа с декстрином и частично гидролизованным коллагеном, названный ферро-квином.
Соединение представлено в водорастворимой форме, обеспечивающей получение как минимум однопроцентного раствора при комнатной температуре и нейтральном значении рН среды. Ферро-квин может быть высушен, а впоследствии растворен в воде. Лекарственные формы ферро-квин представлены в виде 7,5% препарата для инъекций, 1% сиропа для внутреннего применения, а так же сухой субстанции, содержащей до 48% трехвалентного железа.
Комплекс трехвалентного хлорида железа конденсированный экстрактом дуба натурального происхождения – биомос, а так же модифицированный с растительными добавками бентонит – товарное название бажедин.
Кроме того в исследованиях использовали препараты феранимал, седимин и биожелезо. Физико-химические характеристики полученных препаратов представлены в таблице 1.
Таблица 1 - Физико-химическая характеристика препаратов
| № | Наименование | Валентность железа | Количество железа, % | Лекарственная форма |
| 1 | Ферро-квин | 3+ | 33-48 | Порошок |
| 2 | Ферро-квин сироп | 3+ | 1-20 | Раствор |
| 3 | Ферро-квин для инъекций | 3+ | 1-10 | Раствор |
| 4 | Бажедин | 2+, 3+ | 1-7 | Порошок |
| 5 | Биомос | 2+, 3+ | 0,05-1 | Паста |
| 6 | Феранимал | 3+ | 7,5 | Раствор |
| 7 | Седимин | 3+ | 2 | Раствор |
| 8 | Био-железо | 3+ | 5 | Раствор |
3.2. Изучение общетоксического действия препаратов ферроквин, бажедин, био-железо и биомос.
Ферроквин представляет собой новую субстанцию и изготовленные на её основе лекарственные формы, а препараты бажедин, био-железо, биомос, седимин, феранимал, а так же препараты контроля –мальтофер, ферроглюкин являются лекарственными формами на основе известных лекарственных веществ (хлорида, декстрана и декстрина железа), в связи с чем токсикологические исследования ферроквина проведены для субстанции и форм, а остальных препаратов в сокращенном объеме токсикологических исследований.
3.2.1. Острая токсичность
В первой серии опытов изучали острую токсичность ферропрепаратов при пероральном способе введения. При введении препарата в дозах 0,1-0,2 мл (мышам) и 1,0-4,0 мл (крысам) не обнаружено какого-либо токсического действия. С увеличением дозы для мышей до 0,3 мл, для крыс до 5 мл на животное при внутреннем применении в течение 3-4 часов отмечались первичные клинические признаки интоксикации, гибели животных не наблюдалось в течение всего периода наблюдения. Первичное клиническое проявление токсического действия препарата проявлялось единичными тетаническими судорогами слабой степени, угнетением, снижением двигательной активности.
Умеренная степень интоксикации, проявляемая соответственно для крыс в дозе 30 мл/кг массы тела и для мышей в дозе 20 мл/кг массы тела характеризовалась мышечным тетанусом, который через 40-60 мин сменялся общим угнетением. Выраженная клиника интоксикации наблюдалась у мышей в дозе 30 мл/кг. Множественные спастические сокращения мышц, непрекращающийся тетанус в течение 2-3 часов, спазм желудка, напряжение брюшной стенки, в дальнейшем угнетение. Общее угнетение и снижение двигательной активности у животных в ответ на введение препарата сохранялось в течение 72 часов после приема препарата.
Во второй серии опытов изучили острую токсичность препарата ферро-квин для инъекций при внутримышечном и подкожном введении. Установлено, что однократная инъекция препарата в максимально допустимых дозах не вызывает гибели животных, клиническая картина отравления слабо выражена.
Патоморфологическое изучение по окончании эксперимента не выявило нарушений в структурной организации внутренних органов.
Препарат по степени токсичности согласно ГОСТ 12.1.007-76 относится к IV классу опасности – малоопасные вещества.
В третьей серии токсикометрической оценки ферро-квина для инъекций, когда препарат вводили внутрибрюшинно в объеме для белых мышей – 1,0 мл, для белых крыс – 6,0 мл; установили среднелетальную дозу, составившую LD50 i.p. для крыс17,67 мл/кг=1325 мг железа на кг и LD50 i.p. для мышей15,5 мл/кг = 1162 мг железа на кг массы. Для белых мышей МПД ферро-квина составила 12,0 мл/кг, LD16 -13,2 мл/кг, LD50 -15,5 мл/кг, LD84 – 18,6 мл/кг, LD100 -20,0 мл/кг. Для белых крыс МПД ферро-квина составила 13,0 мл/кг, LD16 – 14,5 мл/кг, LD50 -17,67 мл/кг, LD84 – 20,7 мл/кг, LD100 -22,0 мл/кг.
Клинические признаки острого отравления ферро-квином у лабораторных животных при внутрибрюшинном введении препарата сходны с предыдущими опытами. Патолого-анатомическая картина вскрытия павших животных показала гиперемию тонкого и толстого отдела кишечника, мелкие одиночные кровоизлияния на брыжейке. Смерть наступала в результате остановки сердца. Желудочки сердца и предсердия наполнены несвернувшейся кровью, в грудной полости – геморрагический экссудат.
В максимально вводимых дозах ферро-квин не вызывал летального эффекта при внутреннем, подкожном и внутримышечном применении.
У крыс признаки интоксикации отсутствовали при внутреннем введении препарата в дозе до 1875 мг железа на кг. Клиника отравления установлена при однократной даче 6 мл препарата на крысу.
Подкожное введение препарата в дозе до 2625 мг железа на кг не отражалось отрицательно на состоянии крыс. У мышей отмечены признаки первичной интоксикации при инъекции железа в дозе 2250 мг на кг массы тела.
Применение препарата внутримышечно мышам и крысам в количестве до 1125 и 1875 мг железа на кг соответственно, не проявлялось клиникой интоксикации.
Учитывая результаты изучения острой токсичности и результаты определения МПД ферро-квина, установлена тест-доза на безвредность – 0,10 мл (внутрибрюшинно) на мышь массой тела 18-20 грамм.
Аналогичные показатели острой токсичности демонстрировали и другие изученные препараты биомос, бажедин, биожелезо, феранимал и седимин, внутреннее применение которых в максимально созможных дозах лабораторным животным не вызывало их гибели.
Изучение подострой токсичности ферро-квина и бажедина при пероральном, подкожном, внутримышечном, внутрибрюшинном введении препарата в течение 10 дней в терапевтической дозе, и дозах эквивалентных соответственно 3-х кратной и 5-ти кратной терапевтической, а так же при внутрибрюшинном введении в дозе составляющей 1/50, 1/20 и 1/10 от дозы LD50 показало, что многократное введение этих препаратов не вызывает существенных изменений в клиническом состоянии животных: поведение, груминг, аппетит, частота дыхания у всех животных опытных групп не отличались от данных групп контроля.
3.2.2. Хроническая токсичность
Хроническую токсичность изучали при пероральном, подкожном, внутримышечном, внутрибрюшинном введении препаратов ферроквин, бажедин, био-железо и биомос в течение 14 дней. В результате изучения полиорганной недостаточности установлено, что коэффициенты массы внутренних органов крыс (моргана/ мкрысы х 1000), которым применяли препарат, существенно не отличались от контроля.
При исследовании крови животных, получавших ферро-квин, не отмечено достоверных изменений в морфологическом составе крови и биохимических показателях по сравнению с показателями в крови животных контрольной группы. Установлено, что при длительном внутрибрюшинном введении препарата присутствует тенденция к снижению количества эритроцитов и гемоглобина на 5-7% и соответственно увеличением билирубина на 15-18%.
Длительное применение препарата сопровождаются также активацией аминотрансфераз на 8-10%, что косвенно свидетельствует о феномене слабого гепатоцитолиза и повышением на 5-10% концентрации креатинина и мочевины в крови, что говорит о напряженном функционировании выделительной системы, однако все вышеуказанные изменения не превышают показатели физиологической нормы для данного вида животных.
Эти изменения согласуются с данными изучения хронической токсичности сахарозного комплекса железа индуцировавшего при внутривенном введении повышение в плазме крови уровня щелочной фосфатазы и аланин - аминотрансферазы у животных исследуемых групп, а также повышение концентрации белка в моче в группе, получающей более высокую дозу препарата.
С учетом полученных результатов при изучении подострой токсичности ферро-квина и LD50, полученной при определении острой токсичности, установлено, что препарат ферро-квин оральный раствор и раствор для инъекций не обладают кумулятивным эффектом. Ввиду отсутствия смертности животных в опытных группах рассчитать коэффициент кумуляции не представляется возможным.
В хроническом опыте препараты не оказывают токсического эффекта, существенно не влияют на органную структуру и на белковый, липидный и углеводный гомеостаз организма.
3.2.3. Эмбриотоксическое и тератогенное действие
В опытах по изучению эмбриотоксического и тератогенного действия на лабораторных животных установлено что существенных различий в плодовитости крыс опытных и контрольной групп не было. Среднее количество плодов на самку в контрольной группе составило 9,9+0,4, а у крыс, получавших ферро-квин в дозе 5 мл/кг массы тела на 5 и 10 дни беременности 9,7+0,6 и 9,7+0,4 соответственно. У крыс, получавших ферро-квин в дозе10 мл/кг массы тела на 5 и 10 дни беременности 9,8+0,5 и 9,6+0,6 соответственно.
Крысята, рожденные от самок опытных групп, не отличались от крысят контрольных самок. Проведенные морфологические исследования показали отсутствие аномалий развития внутренних органов и скелета плодов, рожденных от крыс опытных групп.
3.2.4. Местнораздражающее, кожно-резорбтивное и аллергизирущее действие ферропрепаратов
В результате проведенных исследований местнораздражающего действия препаратов ферроквин, бажедин, био-железо и биомос установлено, что при однократной аппликации на кожные покровы кроликам при плотности нанесения от 0,020 до 0,10 мл/см2 они не вызывают повреждения кожи в виде эритемы или отеков. Аппликация препаратов не вызывала местную реакцию в виде десквамации, аллергической экземы и дерматита.
Определение раздражающих свойств препарата при внутрикожном способе введения показало, что после внутривенного введения 1% раствора трипанового синего в дозе 1 мл/кг массы тела кролика ферро-квин в форме 7,5%-ного раствора оказывал слабое раздражающее действие, через 3 и 4 часа раздражающее действие препарата отсутствовало.
При визуальной оценке состояния конъюнктивы, роговицы и век глаз кроликов установлено, что ферро-квин вызывает слабое раздражение конъюнктивы спустя 1 час после закапывания, которое проходило уже к 2-му часу. Таким образом, ферро-квин обладает слабораздражающим действием при наружном применении.
При изучении кожно-резорбтивного действия на кожные покровы мышей и крыс установлено, что аппликация ферро-квина (20-ти кратная) не вызывала гибели животных, не нарушала целостности кожи на месте нанесения, не нарушала функционирования организма животных.
Трехнедельный эксперимент по изучению аллергизирующего действия ферро-квина, бажедина, био-железа и биомоса показал, что двадцатикратная аппликация препаратов не вызывала явлений сенсибилизации организма подопытных животных.
3.2.5. Иммунотоксические свойства
Исследования влияния ферропрепаратов на фагоцитарную активность макрофагов перитонеального экссудата мышей показали что они не оказывают негативного влияния на фагоцитарную активность макрофагов (% фагоцитоза по сравнению с контролем достоверно не отличается). Кроме того, при применении ферро-квина в превосходящей дозе наблюдается тенденция к активации переваривающей способности фагоцитов, повышая индекс завершенности фагоцитоза на 1-2%.
Данные НСТ – теста, свидетельствуют о том, что ферро-квин существенно не влияет на количество НСТ-положительных нейтрофилов.
Оценку степени влияния ферро-квина на систему комплемента изучили на морских свинках с помощью гемолитического метода титрования сывороточного комплемента. Активность комплемента в опыте с введением ферро-квина в дозах 5 и 10 мл/кг массы животных существенно не отличалась от данных животных, которым препараты не вводили и была значительно ниже показателей группы животных которым инъецировали левамизол.
3.2.6. Оценка канцерогенной и мутагенной активности
Изучение параметров мутагенности и канцерогенности ферропрепаратов особенно актуально с учетом существующего риска возникновения новообразований при их инъекциях.
Для оценки мутагенных свойств ферро-квина учитывали постимплантационную смертность. В опыте данные смертности эмбрионов и количества живых эмбрионов на одну самку при применении ферро-квина в 3 фазу сперматогенеза (зрелые сперматозоиды, самки оплодотворенные непосредственно после введения ферро-квина самцам), во 2 фазу сперматогенеза (поздние сперматиды, самки оплодотворенные через неделю после введения ферро-квина самцам) и в 1 фазу сперматогенеза (ранние сперматиды, самки оплодотворенные через 2 недели после введения ферро-квина самцам) не отличаются от данных группы животных не получавших ферропрепараты.
Данные исследований канцерогенной и мутагенной активности ферро-квина – сиропа и препарата для парентерального применения методом метафазного анализа аберраций (изменения структуры) хромосом в клетках костного мозга лабораторных животных представлены в таблице 6.
В опытных и контрольных группах не наблюдалось существенного (более чем десятикратного) увеличения количества клеток со структурными нарушениями хромосом: разрывами, транслокациями, дицентриками и кольцевыми хромосомами. В результате проведённых исследований у ферро-квина – сиропа и раствора для инъекций не выявлено канцерогенной и мутагенной активности при применении его в дозе 10TD в остром эксперименте, что указывает на отсутствие у изучаемого лекарственного средства цитогенетического действия.
3.2.7. Фармакокинетика препаратов
Фармакокинетику ферро-квина для инъекций, феранимала и седимина изучали при их внутримышечном, подкожном и внутрибрюшинном способах введения. Фармакокинетику ферроквина, бажедина, биомоса и био-желаза, соответственно при их внутреннем применении.
Внутримышечное введение препарата ферро-квин в дозе 1 мл/кг массы тела в пересчете на действующее вещество соответствовало 75 мг трехвалентного железа на килограмм массы животного, феранимала и седимина в дозах рекомендучемых производелелем (1-2 мл голову). В таблице 2, содержащей фактические данные эксперимента, отражена динамика количества железа в различных тканях, указывающая на активную абсорбцию препарата при его внутримышечном введении.
Содержание железа в крови значительно увеличилось сразу после введения препарата (до 29 мкг железа на г ткани), достигло максимума к третьему часу (до 62 мкг железа на г ткани). Оставалось на высоком уровне в течение суток (до 25 мкг железа на г), а к третьему дню значительно уменьшилось. На пятый день было минимальным и к седьмому дню железо уже не обнаруживалось.
В печени железо было обнаружено к третьему часу эксперимента. Его концентрация была ниже чем в крови на 55%, что свидетельствует об активной абсорбции железа другими тканями, в частности кроветворными.
Стабильно высокий уровень экзогенного железа на протяжении исследования с первого часа и до пяти суток после инъекции введения препарата был обнаружен в костном мозге. Максимум концентрации этого металла в костном мозге обнаружен на первые – третьи сутки эксперимента, когда его содержание было стабильно высоким на уровне 46 – 28 мкг железа на г ткани.
Наибольшее содержание железа было в мышцах (от 72 мкг железа на г сразу после введения, до 27 мкг железа на г на третьи сутки). Вместе с тем к 7 – 9 суткам экзогенные количества железа в мышцах установлены не были.
В содержимом толстого отдела кишечника на протяжении эксперимента препарат обнаружен не был. Это свидетельствует о том, что изученные ферропрепараты не выводятся через желудочно-кишечный тракт.
С третьего по шестой часы небольшое количество железа (от 4 до 19 мкг/г) было обнаружено в почках.
Из общего количества железа 23,8% его было обнаружено в крови, около 13,2 % в печени и 28% в костном мозге. Мышцы содержали максимальное количество железа – примерно 32,5%, почки – минимальное – 2,5%.
Такое распределение железа характерно для его устойчивых комплексов. Следовательно, использование протеина повысило стабильность железосодержащего комплекса in vivo и улучшило показатели фармакодинамики препарата. В отличие от железо-сорбитолового комплекса, утилизирующегося до 60% печенью, значительная часть железа из изученных препаратов (до 84% для ферро-квина) обнаружена в костном мозге, крови и мышцах.
Таблица 2 Содержание железа в органах и тканях крыс после внутримышечного введения ферро-квина, феранимала и седимина в дозе 1 мл/кг массы тела*
| Биосубстрат | Препарат | Содержание железа препарата (мкг/г ткани) через, часов | Содержание железа препарата (мкг/г ткани) через, суток | ||||||||
| 1 | 3 | 6 | 12 | 24 | 2 | 3 | 5 | 7 | 9 | ||
| Кровь | ферро-квин | 24 | 64 | 24 | 33 | 25 | 21 | 17 | 5 | 0 | 0 |
| феранимал | 27 | 62 | 21 | 27 | 19 | 14 | 5 | 9 | 0 | 0 | |
| седимин | 29 | 57 | 15 | 19 | 12 | 9 | 0 | 0 | 0 | 0 | |
| Печень | ферро-квин | 0 | 23 | 22 | 19 | 7 | 9 | 5 | 0 | 0 | 0 |
| феранимал | 0 | 27 | 28 | 19 | 12 | 9 | 0 | 0 | 0 | 0 | |
| седимин | 0 | 24 | 24 | 22 | 29 | 19 | 2 | 0 | 0 | 0 | |
| Почки | ферро-квин | 0 | 4 | 17 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| феранимал | 0 | 0 | 19 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | |
| седимин | 0 | 5 | 11 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | |
| Мышцы | ферро-квин | 57 | 49 | 35 | 25 | 19 | 22 | 12 | 7 | 0 | 0 |
| феранимал | 72 | 37 | 37 | 22 | 28 | 34 | 27 | 15 | 0 | 0 | |
| седимин | 64 | 50 | 31 | 28 | 24 | 31 | 9 | 2 | 0 | 0 | |
| Костный мозг (бедренная кость) | ферро-квин | 12 | 46 | 32 | 22 | 29 | 32 | 28 | 18 | 0 | 0 |
| феранимал | 9 | 41 | 38 | 31 | 22 | 29 | 21 | 12 | 0 | 0 | |
| седимин | 11 | 36 | 44 | 35 | 26 | 30 | 19 | 11 | 0 | 0 | |
*-Данные приведены за вычетом концентрации эндогенного железа в ткани
При интраперитонеальном введении ферро-квина в крови содержание железа увеличилось до максимальных значений (67 мкг железа на г) сразу после введения препарата. В течение суток было стабильно высоким (до 44-62 мкг железа на г). К третьему дню незначительно уменьшилось, а к пятому дню железо уже не обнаруживалось.
В печени железо было обнаружено в течении часа после введения препарата (до 8 мкг железа на г), к третьему часу эксперимента существенно увеличилось (до 27 мкг железа на г) и оставалось на высоком уровне ещё три часа. К двенадцатому часу наметилось снижение его количества (до 20 мкг железа на г), а к двадцать четвертому содержание железа в печени было приблизительно вдвое меньше максимального уровня отмеченного к шестому часу. В целом в печени железа содержалось примерно в три раза меньше чем в крови, что свидетельствует об активной абсорбции железа другими тканями (в частности кроветворными), в значительной мере минуя печень.
Стабильно высокий, сопоставимый с кровью, уровень экзогенного железа на протяжении исследования с первого часа и до пяти суток после внутрибрюшинного введения препарата был обнаружен в костном мозге. Максимум концентрации этого металла в костном мозге обнаружен к третьему часу эксперимента, когда его содержание было стабильно высоким на уровне 56-71 мкг железа на г ткани.
Распределение железа, введенного внутрибрюшинно: 43,6% его было обнаружено в крови, около 14 % в печени и 34,3% в костном мозге. Почки содержали около 7% железа.
При подкожном введении ферропрапатов содержание железа в крови увеличилось к третьему часу, достигло максимума к двенадцатому и оставалось на высоком уровне в течении суток, к третьему дню уменьшилось вдвое, к пятому было минимальным и к седьмому уже не обнаруживалось.
В печени концентрация железа была примерно вдвое ниже чем в крови, что свидетельствует о его абсорбции другими тканями, в частности органами кроветворения.
Стабильно высокий уровень экзогенного железа на протяжении исследования с первого часа и до пяти суток после подкожного введения препарата был обнаружен в костном мозге. Максимум концентрации этого металла в костном мозге обнаружен на первые – третьи сутки эксперимента, когда его содержание было стабильно высоким на уровне 56 – 52 мкг железа на г ткани.
Соотношение подкожно введенного железа: 44,2% его было обнаружено в крови, около 17% в печени и 34% в костном мозге. Мышцы и почки содержали минимальное количество железа – примерно 5%.
Внутреннее применение ферроквина, бажедина, био-железа и биомоса характеризовалось следующими особенностями фармакокинетики. В содержимом толстого отдела кишечника установлено наибольшее количество экзогенного железа через один час после начала опыта 95-107 мкг железа на г ткани. На протяжении трех суток этот показатель уменьшился почти в двадцать раз до минимального значения 5-8 мкг железа на г ткани.
С шестого по двенадцатый часы опыта небольшие количества железа (1-12 мкг железа на г ткани) обнаруживались в мышцах и до трех суток в почках.
Содержание железа достигло максимума в крови и печени к двадцать четвертому часу эксперимента до 37 и 27 мкг железа на г соответственно.
Стабильно высокий уровень экзогенного железа на протяжении исследования с первого часа и до пяти суток после перорального введения препарата обнаружен в костном мозге. Максимум концентрации этого металла в костном мозге обнаружен на первые – третьи сутки эксперимента, когда его содержание было на уровне 56 – 52 мкг железа на г ткани.
Суммируя данные внутреннего применения ферропрепаратов выявляем, что 79,9 % железа было обнаружено в крови и костном мозге, а всего около 18% в печени и почках. Мышцы абсорбировали минимальное количество железа – примерно 2 %.
3.2.8. Остаточные количества ферропрепаратов
В результате анализа данных опыта по внутреннему и инъекционному применению изучаемых препаратов установлено, что через 3 суток после их введения (при 5-ти дневном курсе применения) остаточные количества железа определяются во всех исследуемых органах и биологических жидкостях.
На 7 сутки после введения препаратов железо практически отсутствует во всех органах, тканях и жидкостях организма подопытных животных.
Как показывают данные изучения фармакокинетики и фармакодинамики ферропрепаратов при различных способах введения, в наибольшей концентрации они содержатся в крови и костном мозге, элиминируются преимущественно в печени. Препараты быстро всасываются и включаются в метаболизм, в связи с чем в период после 48 часов после введения препарата экзогенное железо в свободном виде в организме практически не присутствует.
3.2.9. Влияние ферропрепаратов на качество мясопродуктов
Гигиеническую оценку на качество мясопродуктов проводили на кроликах с массой тела 2,7-3,0 кг и поросятах в возрасте 60 – 70 дней. В результате ветеринарно-санитарной экспертизы мясопродуктов, полученных от животных убитых по истечении 7 дней после внутреннего и 14 дней после инъекционного применения препаратов железа, установлено отсутствие отрицательного влияния ферротерапии на качество продуктов животного происхождения.
4. Научно-производственное испытание железосодержащих препаратов.
Профилактическую эффективность парентерального применения ферропрепаратов изучили в опытах на поросятах в возрасте 1 – 60 дней. Результаты исследования представлены в таблице 3.
У подопытных поросят уровень гемоглобина повышался до 15 дня жизни, в группе ферро-квина до 92,5 г/л, феранимала до 115,3, ферроглюкина до 98,5 г/л. У животных контрольной группы напротив, к пятидневному возрасту уровень гемоглобина возрастал, а к 15-ти дневному возрасту снижался до 78,8 г/л. С этим согласуется и увеличение количества эритроцитов, как относительно фоновых показателей, так и отрицательного контроля. Более высокие значения в 15 дневном возрасте установили в группах ферроглюкина и феранимала, количество эритроцитов составило 3,86 и 4,14 млн/мл.
Цветовой показатель крови, повышался в 5 дневном возрасте с последующим снижением к 15 дню жизни, как у подопытных животных, так и отрицательного контроля.
К тридцатидневному возрасту гематологические показатели у поросят выровнялись, однако у подопытных животных из группы ферро-квина, уровень гемоглобина был несколько ниже относительно групп феранимала и ферроглюкина, но существенно выше чем в группе отрицательного контроля. Кроме того, необходимо отметить, что относительно высокий уровень гемоглобина и содержание эритроцитов у поросят из контрольной группы, связаны, прежде всего, с обезвоживанием организма животных по причине диарей, что также подтверждает низкий цветовой показатель крови, повышенное содержание лейкоцитов и данные заболеваемости. В период с 30 дней до 2-х месячного возраста, динамика роста количества гемоглобина и эритроцитов у подопытных животных сохранялась, наиболее высокие показатели в группе ферро-квина.
Таблица 3 Влияние железосодержащих препаратов на состав крови поросят
| группы | день жизни | Эритроциты, 1012/л | Гемоглобин, г/л | Цветовой показатель | Железо, мкмоль/л |
| фон (2-й день жизни) | 2-й | 2,36±0,45 | 83,6±6,1 | 0,99±0,15 | 14,2±1,29 |
| Ферро-квин | 5 | 3,03±0,30 | 89,4±2,3 | 0,92±0,10 | 17,7±4,16 |
| 15 | 3,70±0,29 | 92,5±1,9 | 0,75±0,10 | 19,3±3,09 | |
| 30 | 3,29±0,48 | 94,0±3,3 | 0,86±0,08 | 26,9±1,65 | |
| 60 | 4,22±0,18 | 106,0±3,5 | 0,75±0,01 | 34,5±1,68 | |
| Феранимал | 5 | 2,93±0,71 | 89,3±5,1 | 0,92±0,17 | 30,9±8,34 |
| 15 | 4,14±0,65 | 115,3±17,2 | 0,83±0,06 | 18,3±5,72 | |
| 30 | 3,45±0,40 | 97,3±4,6 | 0,80±0,07 | 33,0±5,13 | |
| 60 | 4,48±0,76 | 96,0±15,1 | 0,66±0,01 | 38,5±1,41 | |
| Ферроглюкин | 5 | 2,78±0,30 | 90,7±2,3 | 0,98±0,09 | 16,1±1,83 |
| 15 | 3,86±0,52 | 98,5±12,7 | 0,78±0,10 | 8,7±0,05 | |
| 30 | 3,60±0,19 | 87,0±2,1 | 0,72±0,03 | 28,5±6,78 | |
| 60 | 3,97±0,55 | 89,3±12,2 | 0,67±0,06 | 32,9±1,51 | |
| Седимин | 5 | 2,99±0,28 | 85,8±1,4 | 0,85±0,10 | 16,0±1,83 |
| 15 | 3,75±0,31 | 95,6±10,6 | 0,76±0,11 | 18,1±0,09 | |
| 30 | 4,11±0,22 | 99,0±2,2 | 0,73±0,08 | 18,5±3,48 | |
| 60 | 3,56±0,43 | 103,8±6,2 | 0,88±0,10 | 32,9±3,42 | |
| контроль (без применения препаратов) | 5 | 2,18±0,40 | 87,3±2,3 | 1,17±0,26 | 8,0±2,11 |
| 15 | 3,06±0,93 | 78,8±20,7 | 0,80±0,20 | 5,3±0,54 | |
| 30 | 4,47±0,24 | 81,3±8,3 | 0,55±0,08 | 14,1±3,82 | |
| 60 | 4,30±0,39 | 89,7±7,1 | 0,63±0,11 | 21,0±1,50 |
Изучая лейкопоэз, наиболее существенные изменения, а именно в количественном и качественном составе лейкоцитов крови, наблюдали в группе, где применяли ферро-квин. Данные характеризовались абсолютным и относительным снижением количества лейкоцитов (лимфоцитов) по сравнению с фоном в 5 дневном возрасте и увеличением их количества (в пределах физиологических значений) на всем протяжение эксперимента. Начиная с 30-го дня жизни, у подопытных животных, четко прослеживалась тенденция снижения содержания гранулоцитов и увеличения агранулоцитов, показатели белой крови имели одинаковую тенденцию, как в опытных, так и в контрольных группах. Необходимо отметить повышенное количество лейкоцитов в контрольной группе, что связано с заболеваемостью желудочно-кишечными болезнями.
Изучая влияние препаратов на биохимические показатели сыворотки крови, установили, что у поросят из опытных групп содержание сывороточного железа было закономерно выше, относительно фона и группы отрицательного контроля. Однако наиболее высокие и стабильные показатели наблюдали в группе с феранималом, тогда как у животных, которым вводили ферро-квин и ферроглюкин, количество железа соответствовало друг другу. В белковом и углеводном обмене четких закономерностей не наблюдалось.
В месячном возрасте у поросят опытных групп уровень сывороточного железа был на приблизительно одинаковом уровне, в районе 27-33 мкмоль/л, что почти в 2 раза превышало показатели группы отрицательного контроля.
В двухмесячном возрасте данные изменения сгладились, уровень железа у подопытных и контрольных животных был на одном уровне, в пределах физиологической нормы. В белковом, углеводном и обмене ферментов печени, четких закономерностей не наблюдалось.
Токсических явлений на фоне введения ферропрепаратов у поросят не отмечено, температура была в пределах физиологической нормы и не отличалась от таковой в контроле. Уже через 3-4 дня подопытные поросята были более активны, имели характерно розовую окраску кожи, лучший аппетит, чем отличались от поросят группы отрицательного контроля.
Лучшие результаты по приросту живой массы и сохранности получены в группе ферро-квина с дозой введения 1 мл (таблица 4). Более низкий среднесуточный прирост живой массы был в группах феранимала и ферроглюкина. В частности, при удовлетворительных хозяйственных условиях после применения ферро-квина в дозе 1,0 мл получен дополнительный прирост массы тела в среднем 3,3 кг на одного поросенка, пало 4,2% поросят. Применение феранимала и ферроглюкина позволило увеличить прирост живой массы поросят на 3,2, 0,4 кг и сохранности 91,3 и 87,5% соответственно. При этом падеж поросят в контрольной группе составил в среднем 22,4% при заболеваемости третьей части от общего количества поросят.
Таблица 4 Профилактическое действие железосодержащих препаратов
| группы | Заболе-вае-мость, % | Со-хран-ность, % | Средняя масса головы в возрасте, дней. | Среднесуточный прирост, г. | |||
| 10 | 30 | 60 | До 21 го дня жизни | До 60 го дня жизни | |||
| Ферро-квин | 16,7 | 95,8 | 2,64±0,1 | 5,82±0,9 | 19,3±0,3 | 211,8±54,1 | 294,3±14,2 |
| Феранимал | 18,1 | 91,3 | 2,52±0,2 | 4,99±0,5 | 19,1±0,5 | 164,0±28,3 | 293,8±7,8 |
| Ферроглюкин | 29,1 | 87,5 | 2,56±0,1 | 4,78±0,8 | 15,9±0,3 | 150,5±34,7 | 244,5±7,1 |
| Седимин | 20,2 | 90,1 | 2,55±0,3 | 5,04±0,9 | 19,5±0,6 | 170,1±31,5 | 290,1±6,5 |
| Контроль | 31,7 | 78,6 | 2,58±0,1 | 4,61±0,6 | 14,3±0,4 | 159,5±33,2 | 218,8±20,0 |
Терапевтическую эффективность изучали на поросятах в возрасте 9-11 дней, больных алиментарной анемией. После 10 дневного курса дачи препаратов, наиболее существенные изменения в крови наблюдали у поросят опытных групп. Отмечалась четкая тенденция к увеличению в крови содержания эритроцитов и гемоглобина. Наиболее ярко количество увеличивалось во второй группе (мальтофер): к 20-му дню жизни (в 1,8 1,1 раза) и в первой (ферро-квин) на 52,814,2% соответственно. У животных, которым вводили сульфат железа, содержание эритроцитов увеличилось в 1,6 раза, а гемоглобин повысился на 6,7%. Однако необходимо отметить, что у этих животных, как ответная реакция на введение препарата возникла диарея, продолжающаяся в течение 5-7 дней, с резким обезвоживанием организма.
К тридцатидневному возрасту, тенденция повышения содержание гемоглобина у подопытных животных сохраняется. Наиболее четко это прослеживается в группе ферро-квина, данный показатель превышает таковой в контроле на 29,9%. Количество эритроцитов напротив, снижается, однако данные изменения характерны при высокой функциональной способности клеток и корригируют с высоким цветовым показателем крови. К 2-х месячному возрасту гематологические показатели крови стабилизируются, однако у подопытных животных групп (мальтофер и ферро-квин) содержание эритроцитов, гемоглобина и цветовой показатель крови в значительной степени превышает, аналогичные показатели интактных животных и группы – сульфат железа.
Влияние ферропрепаратов на гемопоэз у свиней изучали в опытах на супоросных и лактирующих свиноматках. При внутреннем применении препарата, содержащего 10 %-ный раствор железо-протеинового комплекса (группа 1 – опыт), супоросным свиноматкам в течении 30 дней до опороса и 30 дней после, в дозе 500 мг железа на голову, установлено, что препарат эффективен при железодефицитной анемии у беременных и лактирующих животных.
В контрольных группах – второй (давали сульфат железа в той же дозе и те же сроки) и третьей (без дачи дополнительного железа) количество гемоглобина и содержание сывороточного железа было значительно ниже.
Клиническое состояние животных к окончанию эксперимента не отличались от физиологических показателей, присущих здоровым животным.
Дополнительное введение в рацион препаратов железа способствовало повышению сохранности полученных от свиноматок поросят, уменьшению их заболеваемости и повышению темпов прироста их массы.
Применение ферропрепаратов в качестве средства патогенетической терапии при внутренних болезнях животных изучили в опыте на телятах больных диспепсией. Учитывая роль недостатка железа в патогенезе диспепсии включение ферропрепаратов в комплекс лечебных мероприятий при этой болезни способствовало сокращению сроков лечения животных и скорейшему восстановлению их продуктивности.
Для повышения эффективности комплекса лечебных мероприятий при диспепсии у телят нами были применены препараты «ферро-квин» и урсоферран. Отмеченные в опыте уменьшение срока выздоровления телят на один день, а так же увеличение прироста живой массы телят мы связываем с активизацией гемопоэза под воздействием препаратов железа.
Таблица 5 - Влияние ферропрепаратов на количество, сохранность, заболеваемость и рост поросят, полученных от свиноматок получавших перорально ферро-квин (М±m; n=36)
| Наименование препарата | Ферро-квин (n=12) | Сульфат железа (n=12) | Контроль (n=12) |
| Количество полученного приплода, голов | |||
| 34 | 32 | 31 | |
| День жизни | Масса поросенка, кг | ||
| 1 | 1,16± 0,25 | 1,12 ± 0,6 | 1,06±0,43 |
| 21 | 5,3± 0,60 | 4,9± 0,58 | 5,0± 0,75 |
| 30 | 8,6± 0,37 | 8,2± 0,64 | 7,9 ± 0,44 |
| Сохранность поросят, % | |||
| 21 | 89 | 85 | 82 |
| 30 | 82 | 78 | 76 |
| Заболеваемость поросят, % | |||
| 21 | 12 | 16 | 20 |
| 30 | 15 | 22 | 34 |
Ферропрепараты обладают выраженной терапевтической эффективностью при диспепсии телят, характеризующейся нормализацией минерального обмена, выражающейся в повышении Hb, увеличении количества эритроцитов у телят в возрасте 1 – 30 дней.
Критерии оценки эффективности ферротерапии.
Учитывая что, целесообразность применения ферропрепаратов обусловлена благоприятным результатом возмещения недостатка железа в макроорганизме. Принимая во внимание нормализацию всех физиологических показателей, измененных в виде суммы симптомов железодефицитной анемии (указанных в соответствующем разделе), ориентиром эффективности ферротерапии является рост количества гемоглобина крови.
Время наступления положительного эффекта от применения ферропрепаратов зависит не только от индивидуальных свойств иммунобиологической реактивности организма, уровня его кормления и содержания, но и от пути введения препарата, его химической и фармацевтической формы, скорости абсорбции, количества железа усвоенного на килограмм массы организма.
Первый объективный эффект от применения ферропрепаратов наблюдается около седьмого дня после начала лечения. Он выражается в возникновении ретикулоцитарного криза, проявляющегося многократным (в 2-10 раз по сравнению с исходным) увеличением количества ретикулоцитов. В течении следующих 14 дней наблюдают рост количества гемоглобина и числа эритроцитов. К концу первого месяца после начала лечения исчезают гипохромия и микроцитоз. Насыщение депо железа происходит позже.
Эффективность парентерального применения феранимала и седимина беременным характеризуется приростом количества гемоглобина в течении первых десяти дней после начала лечения соответствует ежедневному увеличению количества гемоглобина на 0,6 ± 0,02 г/л и 0,5± 0,01 соответственно.
При послеродовой анемии среднеуточный прирост уровня гемоглобина составляет до 1,3 г/л при использовании бажедина, биожелеза и биомоса
При внутривенном применении ферроквина в дозах до удовлетворения расчетного дефицита железа прирост количества гемоглобина составил за 14 дней около 2,6 г/л в день.
Препарат ферро-квин давали анемичным 10-ти дневным поросятам (Hb 62,00±2,83) ежедневно в дозе 5 мг железа на кг массы. За двадцать дней ежедневный прирост гемоглобина составил 2,92 г/л, при достижении 120,40±3,29 г/л гемоглобина и цветового показателя 1,20±0,24 к тридцатому дню жизни.
В группе животных с аналогичными стартовыми показателями крови, получавших в тех же дозах и те же сроки железо-декстрин гемоглобин ежедневно увеличивался на 1,94, сульфат железа на 1,67, а в группе негативного контроля, не получавшей ферропрепаратов, на 1,19 г/л, а цветовой показатель по истечении 20 дневного опыта достиг 0,95, 0,90 и 0,77 соответственно.
В опыте на здоровых крысах имевших исходный гемоглобин 146,8 ±12,1 г/л и цветовой показатель 0,7 однократная инъекция ферро-квина в дозе 75 мг/кг массы позволила увеличить к девятому дню наблюдений гемоглобин до 172,6 ± 20,4 при цветовом показателе 1,2, ежедневный прирост гемоглобина составил 2,8 г/л.
В сравнительном исследовании применения ферропрепаратов супоросным и лактирующим свиньям мы изучили влияние ежедневной дачи 5 мг железа на кг массы животного течении 30 дней до опороса и 30 дней после опороса на гематологические показатели. К седьмому дню до опороса количество гемоглобина в группе животных получавших внутрь с кормом ферро-квин выросло с начальных 116 ±1,65 до максимальных 146 ±5,45 г/л (за 60 дней наблюдений в трех группах), ежедневный прирост составил 1,3 г/л.
В условиях алиментарного дефицита железа для различных возрастных групп животных показателем эффективного применения ферропрепаратов является суточное увеличение количества гемоглобина на 1-3 г/л.
ВЫВОДЫ
1. Химическими и биотехнологическими методами получено 37 новых биологически активных препаратов железа, с различным физико-химическим составом. Путем скрининга, оптимизации технологии синтеза получена субстанция железо-протеинового комплекса – ферро-квина.
2. Разработана технология получения и стабилизации препарата Бажедин, сочетающего в себе двух и трехвалентные ионы железа.
3. Жидкие и твердые лекарственные формы ферро-квина, предназначены для внутреннего и инъекционного применения в качестве средства для профилактики и лечения железодефицитной анемии у животных. Бажедин, био-железо и биомос предназначены для использования в кормовых добавках и премиксах в качестве источника железа. Содержание железа в препаратах составляет от 0,05 до 48%.
4. Исследование параметров токсичности препарата ферро-квин свидетельствует о его безвредности и отсутствии побочных эффектов в дозах превышающих профилактические и лечебные более чем в десять раз.
6. При внутреннем применении препаратов трехвалентного железа ферро-квин, бажедина и биомоса установлена их высокая профилактическая и терапевтическая эффективность при железодефицитной анемии у крыс, поросят, телят и собак, а так же при экспериментальной анемии у лабораторных животных. В опыте на анемичных 10-ти дневных поросятах (стартовый уровень Hb 62,0±2,83), при применении ферро-квина в дозе 5 мг железа на кг массы в день, за двадцать дней лечения ежедневный прирост гемоглобина составил 2,92 г/л, при достижении 120,4±3,29 г/л гемоглобина и цветового показателя 1,2±0,24 к тридцатому дню жизни.
7. Применение ферропрепаратов в форме железо-органо-протеинатов супоросным и лактирующим свиньям в дозе 500 мг железа на голову течении 30 дней до опороса и 30 дней после опороса существенно влияет на гематологические показатели. К седьмому дню до опороса количество гемоглобина в группе животных получавших внутрь с кормом ферро-квин выросло с начальных 116,2 ±1,65 до максимальных 146,3 ±5,45 г/л (за 60 дней наблюдений в трех группах), ежедневный прирост составил 1,3 г/л.
8. При внутримышечном или подкожном способах применения установлен высокий уровень гемопоэтической активности ферро-квина, феранимала и седимина у крыс, поросят-сосунов и молодняка крупного рогатого скота. Однократная инъекция ферро-квина в дозе 75 мг железа на кг массы крысам с исходным гемоглобином 146,8 ±12,1 г/л и цветовым показателем 0,7 позволила увеличить к девятому дню наблюдений гемоглобин до 172,6 ± 20,4 при цветовом показателе 1,2, ежедневный прирост гемоглобина составил 2,8 г/л.
Однократная внутримышечная инъекция ферро-квина, феранимала и седимина поросятам сосунам в дозе 0,5 – 2,5 мл предупреждает развитие алиментарной анемии в течение подсосного периода их жизни.
9. Применение ферропрепаратов в форме органо-протеиновых комплексов не оказывает отрицательного влияния на иммунный статус животных. Ферро-квин, бажедин и биомос рекомендуются в качестве средств этиотропной и патогенетической терапии в регламентах лечения и профилактики незаразных болезней животных, в частности диспепсии и бронхопневмонии молодняка.
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
Нормативная документация на железосодержащие препараты.
Экспериментальные данных токсичности и фармакологических свойств новых отечественных железосодержащих препаратов.
Для ветеринарии и животноводства предлагаются внутренние и инъекционные формы препарата ферро-квин, бажедин, биомос, био-железо, феранимал и седимин, обладающие высокими профилактическими и терапевтическими параметрами при железодефицитной анемии у животных.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ
АВТОРОМ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
- Трошин, А.Н. Применение бажедина в животноводстве / А.Л.Буланкин, Н.А.Трошин, С.В. Симирников, А.Н.Трошин // Информационный листок. ЦНТИ. Краснодар. 339-92. 1992. С. 1-2
- Трошин, А.Н. Применение препарат Биомос-ВЖ / А.Л.Буланкин, А.Н.Трошин, Н.А.Трошин., М.Т.Кацеба // Информационный листок. ЦНТИ. Краснодар. 75-94. 1994. С. 1-2
- Трошин, А.Н. Задачи и проблемы ветеринарной фармации в России / А.Н.Трошин, Н.А.Трошин // «Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях» Материалы Международной научно-практической конференции. Воронеж. 2002, С. 669 – 670
- Трошин, А.Н. Патент на изобретение № 2280457 «Лекарственное средство для лечения анемий». RU C1, A61K33/26, 2005. М., ФГУ ФИПС, Опубл. 27.07.2006 бюл. №21.
- Трошин, А.Н. Хроническая токсичность железосодержащего препарата «ферро-квин» / А.Н. Трошин // Труды Кубанского государственного аграрного университета. Выпуск №1. – Краснодар: КГАУ, 2006. С. 206 -215.
- Трошин, А.Н. Кожно-резорбтивное действие железосодержащего препарата ферро-квин / А.Н. Трошин, А.В. Нечаева // Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях. Материалы международной научно-практической конференции, посвященной 60-летию ГНУ Краснодарского НИВИ, Символика. Краснодар. 2006. С. 78-81.
- Трошин, А.Н. Раздражающее действие железосодержащего препарата ферро-квин сиропа / А.Н. Трошин, А.В. Нечаева, В.И. Кровная // Там же. С. 81-82.
- Трошин, А.Н. Эмбриотоксические и тератогенные свойства железосодержащего препарата ферро-квин / А.Н. Трошин, А.В. Нечаева // Там же. С. 82-84.
- Трошин, А.Н. Острая токсичность железосодержащего препарата «Ферро Квин» / А.Н. Трошин // Труды Кубанского государственного аграрного университета. Выпуск №2. – Краснодар: КГАУ, 2006. С. 134 – 145.
- Трошин, А.Н. Иммунотоксичность железосодержащего препарата ферро-квин / А.Н. Трошин, А.В. Нечаева // Труды Кубанского государственного аграрного университета. Выпуск № 4. – Краснодар: КГАУ, 2006. С. 136-145.
- Трошин, А.Н. Анализ потребности и параметры разработки новых ферропрепаратов / А.Н. Трошин, А.В. Нечаева // Материалы I Международной научно-практической конференции «Новости научной мысли».- Днепропетровск, Наука и образование. 2006. Т. 6. С. 97-98
- Трошин, А.Н. Сравнительная эффективность ферротерапии железодефицитной анемии у животных / А.Н. Трошин, А.В. Нечаева // Там же. С. 93-95
- Трошин, А.Н. Фармакопрофилактика алиментарной анемии поросят / А.Н. Трошин, А.В. Нечаева // Там же. С. 95-97
- Трошин, А.Н. Биодоступность и перспективы ферро-протеинов в качестве источника железа при его дефиците / А.Н. Трошин, А.В. Нечаева, А.Н. Трошин // Материалы Международной конференции «Фундаментальные и прикладные исследования высшей школы». М. «Современные наукоемкие технологии» №3. 2007. С. 31 – 32.
- Трошин, А.Н. Инфекции на фоне ферротерапии железодефицита и возможные пути их предотвращения / А.Н. Трошин, А.В. Нечаева, А.Н. Трошин // Там же. С. 37 – 38.
- Трошин, А.Н. Железо-протеинат Ферро-квин для стимуляции гемопоэза у свиноматок / А.Н. Трошин, А.В. Нечаева, А.Н. Трошин // Там же. С. 35 – 36.
- Трошин, А.Н. Синтез железо-протеиновых комплексов как путь повышения эффективности и безопасности ферротерапии животных при железодефицитной анемии/ А.Н. Трошин, А.В. Нечаева // СПб Ветеринарная практика. №1(36) 2007 С. 24-27.
- Трошин, А.Н. Трошин А.Н., Нечаева А.В. Некоторые параметры оценки эффективности применения ферропрепаратов / А.Н. Трошин, А.В. Нечаева // Материалы XV международного Московского ветеринарного конгресса. М., 2007. С. 180-181.
- Трошин, А.Н. Лечение алиментарной анемии свиней железосодержащим препаратом ферро-квин / А.Н. Трошин, И.Н. Бессмертная, Е.А. Лысенко, А.В. Молоховская, Д.В. Стрельникова // Труды Кубанского гос. агроуниверситета. Выпуск 426 (454). – Краснодар: КубГАУ, 2007. – С. 63-66.
- Трошин, А.Н. Применение нового железосодержащего препарата ферро-квин для профилактики железодефицитной анемии у новорожденных поросят/А.Н. Трошин, И.Н. Бессмертная, Е.А. Лысенко, А.В. Молоховская, Д.В. Стрельникова // Там же. – С. 66-68.
- Трошин, А.Н. Разработка лекарственных средств обладающих биологической активностью при железодефицитной анемии / А.Н. Трошин, И.Н. Бессмертная, Е.А. Лысенко, А.В. Молоховская, Д.В. Стрельникова // Там же. – С. 68-70.
- Трошин, А.Н. Изучение фармакокинетики и остаточных количеств железосодержащего препарата «ферро-квин® сиропа» / А.Н. Трошин, Т.И. Ермакова // Аграрная наука сельскому хозяйству: сборник статей. В 3 Т. / II Международная научно-практическая конференция. Барнаул: Изд-во АГАУ, 2007. Т. 2. С. 464-467.
- Трошин, А.Н. Параметры фармакокинетики и остаточных количеств железосодержащего препарата «ферро-квин®» для подкожных инъекций [Электронный ресурс] / А.Н. Трошин, Т.И. Ермакова // Научный электронный журнал «Современные проблемы науки и образования». №3, 2007, 0420700037/0054 – Режим доступа: www.science-education.ru
- Трошин, А.Н. Фармакокинетика ферро-квина для инъекций / А.Н. Трошин, Т.И. Ермакова, Н.В. Когденко, А.Н. Трошин // Материалы Международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы ветеринарной медицины, биологии и животноводства». УГАВМ. Троицк 2007 г., С. 154-157.
- Трошин, А.Н. Особенности фармакокинетики нового железосодержащего препарата ферро-квин / А.Н. Трошин, Т.И. Ермакова, Н.В. Когденко, Н.А. Трошин // Там же. С. 157-161.
- Трошин, А.Н. Изменение гематологических показателей организма при использовании различных форм и путей введения ферропрепаратов / А.Н. Трошин, Т.И. Ермакова, Н.В. Когденко, А.Н. Трошин // Материалы Всероссийской научно - практической конференции «Актуальные проблемы функциональной и морфофункциональной диагностики болезней животных» Новочеркасск. 2007 г. С. 41-43.
- Трошин, А.Н. Ферропрофилактика железодефицитной анемии как фактор технологического стресса / А.Н. Трошин, Н.В. Когденко, Н.А. Трошин // Там же. С. 43-44.
- Трошин, А.Н. Причины и результаты побочного действия железосодержащих препаратов / А.Н. Трошин, Н.В. Когденко // Там же. С. 44-46.
- Трошин, А.Н. Применение препарата ферро-квин для профилактики железодефицитной анемии у свиней / А.Н. Трошин // Ветеринарный врач. Казань. 2007 № 1 С. 44-47.
- Трошин, А.Н. Внутренние и парентеральные ферропрепараты, история и классификация / А.Н. Трошин, Н.В. Когденко // Материалы IV Международной научно-практической конференции «Агропромышленный комплекс: состояние, проблемы, перспективы. Пенза. ГСХА. 2007. С. 91-92
- Трошин, А.Н. Варианты синтеза железодекстрана как фактор его терапевтической неэквивалентности. / А.Н. Трошин, Н.В. Когденко // Материалы IV Международной научно-практической конференции «Агропромышленный комплекс: состояние, проблемы, перспективы. Пенза. ГСХА. 2007. С. 89-91
- Трошин, А.Н. Недостаточное всасывание соединений железа в организме, проблемы и возможные решения / А.Н. Трошин, Н.В. Когденко // Там же. С. 93-94
- Трошин, А.Н. Оральные препараты железа эффективны при железодефицитной анемии поросят / А.Н. Трошин, Н.В. Когденко // Там же. С. 97-98
- Трошин, А.Н. Препараты железа в медицине и ветеринарии вчера, сегодня и завтра [Электронный ресурс] / А.Н. Трошин, Н.В. Когденко, А.В. Нечаева // Научный журнал КубГАУ, 2007, № 28(4) – Режим доступа: http://ej.kubagro.ru/2007/04/pdf/05.pdf
- Трошин, А.Н. Получение препарата и его профилактическая эффективность при железодефицитной анемии у животных [Электронный ресурс] / А.Н. Трошин, А.В. Нечаева // Научный журнал КубГАУ, 2007, № 28(4) – Режим доступа: http://ej.kubagro.ru/2007/04/pdf/06.pdf
- Трошин, А.Н. Изучение мутагенной активности и канцерогенности железосодержащего препарата ферро-квин / А.Н. Трошин, А.В. Нечаева // Труды Кубанского государственного аграрного университета. Выпуск № 10. – Краснодар: КГАУ, 2008. С. 138-142
- Трошин, А.Н. Трошин А.Н., Нечаева А.В. Лечение железодефицитной анемии телят. Труды Кубанского государственного аграрного университета. Выпуск № 12. – Краснодар: КГАУ, 2008. С. 172-184.
- Трошин, А.Н. Железосодержащее средство для профилактики и лечения анемии у животных / А.Н. Трошин, А.В. Нечаева, А.Н. Трошин // Патент № 2338516 RU C1, A61K31/047, М., ФГУ ФИПС, 2008. Опубликовано 20.11.2008 Бюл. №32
- Трошин, А.Н. Способ обогащения подкормки для пчел / А.Н. Трошин, Н.В. Когденко, А.В. Нечаева, А.Н. Трошин // Патент № 2349085. RU C1. A01K53/00 Опубликовано 20.03.2009 Бюл. № 8.
- Трошин, А.Н. Инновационные подходы к лечению анемии / А.Н. Трошин, В.А. Антипов // Труды Кубанского государственного аграрного университета.- Серия: Ветеринарные науки № 1 (ч. 1).- Краснодар.-2009., С. 295 – 297.
44. Трошин, А.Н. Влияние ферро-квина на показатели обмена веществ поросят / А.В. Степика, А.В. Нечаева, А.Н. Трошин // «Актуальные проблемы современной ветеринарии», Материалы междунар. науч.-практ. конф., посвященной 65-летию ветеринарной науки Кубани/ Материалы международной научно-практической конференции ФГОУ ВПО Кубанский ГАУ, 2011, часть 1, С. 85-87.
45. Трошин, А.Н. Инновационные средства компенсации железодефицита у животных / В.А. Антипов, А.Н. Трошин, А.В. Степика, Р. Гимранов // Научные основы повышения продуктивности сельскохозяйственных животных. // Сборник научных трудов 4-й международной научно-практической конференции. СКНИИЖ 2011, С. 42-46.
46. Трошин, А.Н. Перспективы использования железосодержащих руд при анемии животных / В.А. Антипов, А.Н. Трошин // Актуальные вопросы ветеринарной фармакологии и фармации: Материалы меж. науч.-практ. конф. - Краснодар, 2012. - С. 162-165
47. Трошин, А.Н. Сравнительная эффективность железодекстриновых и железопротеиновых комплексов при внутреннем применении при лечении анемии животных / А.Н. Трошин, А.В. Степика // Там же. С. 89-92.
