Распространение арбовирусов на территории ставропольского края
- На правах рукописи
ВАРФОЛОМЕЕВА Наталия Геннадьевна
РАСПРОСТРАНЕНИЕ АРБОВИРУСОВ НА ТЕРРИТОРИИ
СТАВРОПОЛЬСКОГО КРАЯ
14.02.02 – эпидемиология
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени
кандидата медицинских наук
Ставрополь - 2012
Работа выполнена в Федеральном казённом учреждении здравоохранения «Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
Научный руководитель:
доктор биологических наук
Василенко Надежда Филипповна
Официальные оппоненты:
Буравцева Нина Пантелеймоновна, доктор медицинских наук, профессор, Федеральное казённое учреждение здравоохранения «Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, главный научный сотрудник лаборатории сибирской язвы
Смелянский Владимир Петрович, кандидат медицинских наук, доцент, Федеральное казённое учреждение здравоохранения «Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, заведующий лабораторией организации противоэпидемических мероприятий
Ведущая организация: Федеральное казённое учреждение здравоохранения Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
Защита состоится « 25 » декабря 2012 года в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 208.109.01 при Ставропольском научно-исследовательском противочумном институте по адресу: 355035, г. Ставрополь, ул. Советская, 13-15
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ставропольского научно-исследовательского противочумного института
Автореферат разослан «_____»________2012 г.
| Ученый секретарь диссертационного совета | Жарникова Ирина Викторовна |
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность проблемы. В настоящее время на территории Российской Федерации установлена циркуляция многих арбовирусов, являющихся потенциально опасными для человека. Повсеместное распространение, большое антигенное разнообразие арбовирусов могут привести к осложнению эпидемиологической обстановки, связанной со вспышками арбовирусных инфекций (Львов Д.К. и др., 1989; Львов Д.К., Бутенко А.И., 2007). Благоприятные погодные условия, достаточная кормовая база, снижение дезинсекционных и акарицидных мероприятий в последние годы привели к резкому увеличению численности основных переносчиков арбовирусов – клещей, комаров, что обусловило активизацию и расширение ареала природных очагов арбовирусов (Онищенко Г.Г., 2000). Подтверждением этому явились вспышки Крымской геморрагической лихорадки (КГЛ) и лихорадки Западного Нила (ЛЗН) в Ставропольском крае, Ростовской, Астраханской, Волгоградской областях и других субъектах РФ (Онищенко Г.Г. и др., 2000; Вышемирский О.И. и др., 2001; Колобухина Л.В. и др. 2001; Петров В.А. и др., 2001; Василенко Н.Ф., 2002; Ковтунов А.И. и др., 2003; Васильев А.В. и др., 2005). Эти события, отнесенные Министерством здравоохранения РФ к разряду чрезвычайных, позволили выявить существенные недостатки при проведении санитарно-эпидемиологического надзора за арбовирусами, что связано, прежде всего, с недостаточной изученностью экологических и клинико-эпидемиологических аспектов их циркуляции (Журавлев В.И., 2002).
Результаты проведенных эпидемиологических и эпизоотологических исследований на территории РФ за последние годы свидетельствуют о том, что помимо вирусов Крымской-Конго геморрагической лихорадки (ККГЛ) и Западного Нила (ЗН), наблюдается активная циркуляция других арбовирусов. Положительные находки отмечаются как при исследовании полевого материала, так и в сыворотках крови от лихорадящих больных и здоровых людей (доноров, животноводов) (Краснова Е.М., 2001; Водяницкая С.Ю., 2005; Айдинов Г.В. и др., 2007; Афанасьева Е.Е. и др., 2007; Смирнова С.Е., 2007; Куличенко А.Н. и др., 2008; Картоев А.А., 2011).
В настоящее время на территории Ставропольского края активно функционирует природный очаг КГЛ, в полевом материале выявлен возбудитель ЛЗН, а в сыворотках крови доноров – антитела к нему (Брюханова Г.Д. и др., 2002; Онищенко Г.Г. и др., 2005; Афанасьева Е.Е. и др., 2006; Василенко Н.Ф. и др., 2007 и др.).
В связи с вышесказанным, актуальными направлениями изучения арбовирусов и арбовирусных инфекций являются такие, как установление спектра арбовирусов, циркулирующих на территории Ставропольского края; изучение путей распространения арбовирусов; выяснение условий формирования, сохранения и эпидемической значимости природных очагов арбовирусных инфекций.
Цель работы – изучение распространения арбовирусов на территории Ставропольского края и выяснение их роли в краевой инфекционной патологии.
Основные задачи исследования:
- Изучить природно-климатические условия, способствующие формированию природных очагов арбовирусных инфекций на территории Ставропольского края.
- Определить спектр арбовирусов, циркулирующих на территории края.
- Выявить основных переносчиков и природные резервуары арбовирусов.
- Определить наличие специфических антител к арбовирусам в сыворотках крови людей и животных.
- Выяснить значение арбовирусов в краевой инфекционной патологии.
- Провести эпидемиологическое районирование территории Ставропольского края по степени риска инфицирования людей возбудителями Крымской геморрагической лихорадки и лихорадки Западного Нила.
Научная новизна исследований. Впервые определен спектр арбовирусов, циркулирующих на территории Ставропольского края: ККГЛ, ЗН, клещевого энцефалита (КЭ), Батаи, вирусов Калифорнийской серогруппы (Тягиня, Инко); впервые выявлены антигены вирусов Батаи, Тягиня, Инко в полевом материале. Определены основные виды кровососущих членистоногих, являющихся резервуаром и переносчиками возбудителей природно-очаговых арбовирусных инфекций на территории Ставропольского края (иксодовые клещи, комары) и их природные резервуары (птицы семейства Врановых, дикие млекопитающие, сельскохозяйственные животные). Впервые проведено эпидемиологическое районирование территории Ставропольского края по степени риска возникновения заболеваний среди людей арбовирусными инфекциями (КГЛ, ЛЗН) с использованием модифицированного нами метода расчета интегрального показателя трех совместных событий.
Практическая значимость работы. Результаты исследования использованы при разработке следующих нормативных документов:
- Методические указания «Организация и проведение лабораторной диагностики Крымской геморрагической лихорадки в лабораториях территориального, регионального и федерального уровней». МУК 4.2.3007-12, утвержденные Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 28.03.2012 г.
2. Методические указания «Организация и проведение лабораторной диагностики лихорадки Западного Нила в лабораториях территориального, регионального и федерального уровней». МУК 4.2.3009-12, утвержденные Главным государственным санитарным врачом РФ 29.03. 2012 г.
3. Методические рекомендации «Исследование полевого материала на наличие арбовирусов методами ИФА и ПЦР», одобренные Ученым советом ФГУЗ СтавНИПЧИ Роспотребнадзора (Протокол № 8 от 09.07.2009 г.) и утвержденные директором института.
4. «Методические рекомендации по предварительной подготовке полевого и клинического материала, обеспечивающей сохранность нуклеиновых кислот при температуре 28±4 °С в течение 10 суток», одобренные Ученым советом ФГУЗ СтавНИПЧИ Роспотребнадзора (Протокол № 9 от 09.10.2009 г.) и утвержденные директором института.
- Электронная база данных «Результаты эпизоотологического обследования природного очага Крымской геморрагической лихорадки на территории Предкавказья», одобренная Ученым советом ФГУЗ СтавНИПЧИ Роспотребнадзора (Протокол № 2 от 18.02.2010 г.) и утвержденная директором института.
Научные и практически значимые результаты работы используются в лекционном материале для слушателей курсов первичной специализации и усовершенствования врачей и биологов по особо опасным инфекциям при ФКУЗ Ставропольский противочумный институт Роспотребнадзора.
Основные положения, выносимые на защиту.
1. На территории Ставропольского края циркулируют арбовирусы ККГЛ, ЗН, КЭ, Батаи, Тягиня, Инко, основными переносчиками которых являются клещи родов Hyalomma, Dermacentor, Rhipicephalus, Ixodes, Haemaphysalis, комары рода Aedes, а природными резервуарами - грызуны из семейств Мышиных, Хомяковых и Песчанковых, а так же птицы из сем. Врановых.
2. Наибольшее эпидемиологическое значение в краевой инфекционной патологии среди арбовирусных инфекций имеет Крымская геморрагическая лихорадка.
3. Наличие специфических антител к арбовирусам (ККГЛ, ЗН, КЭ) у местного населения свидетельствует о бессимптомно протекающей инфекции с трансмиссивным механизмом передачи кровососущими членистоногими.
4. Эпидемиологическое районирование территории Ставропольского края при помощи модифицированного нами метода расчета интегрального показателя трех совместных событий с учетом эпидемиологических и эпизоотологических характеристик позволило выделить территории с различной степенью риска инфицирования людей возбудителями КГЛ и ЛЗН.
Личный вклад соискателя. Результаты работы, представленные в диссертации, получены лично автором в сотрудничестве, главным образом, с научным сотрудником лаборатории медицинской зоологии Г.П. Шкарлет и зав. информационно-аналитическим сектором, канд. техн. наук О.Х. Шаяхметовым (ФКУЗ Ставропольский противочумный институт Роспотребнадзора). На защиту вынесены только те положения и результаты работы, в получении которых роль автора была определяющей.
Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы представлены и обсуждены на Всероссийской научной конференции, посвященной 80-летию со дня основания ФГУ «48 ЦНИИ Минобороны России» «Диагностика, лечение и профилактика опасных и особо опасных инфекционных заболеваний. Биотехнология» (Киров, 2008); IX Межгосударственной научно-практической конференции государств-участников СНГ «Современные технологии в реализации глобальной стратегии борьбы с инфекционными болезнями на территории государств-участников содружества независимых государств» (Волгоград, 2008); научно-практической конференции молодых ученых и специалистов научно-исследовательских учреждений Роспотребнадзора «Биологическая безопасность в современном мире» (Оболенск, 2009); юбилейной научно-практической конференции «Актуальные вопросы инфекционной патологии», посвященной 100-летию Ростовского научно-исследовательского института микробиологии и паразитологии (Ростов-на-Дону, 2009); научной конференции «Проблемы современной эпидемиологии. Перспективные средства и методы лабораторной диагностики и профилактики актуальных инфекций» (Санкт-Петербург, 2009); Х Межгосударственной научно-практической конференции «Актуальные проблемы предупреждения и ликвидации последствий чрезвычайных ситуаций в области санитарно-эпидемиологического благополучия населения государств-участников СНГ» (Ставрополь, 2010); научно-практической школы-конференции молодых ученых и специалистов научно-исследовательских организаций Роспотребнадзора «Современные технологии обеспечения биологической безопасности» (Оболенск, 2010, 2011); Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Актуальные проблемы болезней, общих для человека и животных» (Ставрополь, 2012).
Публикации. Основное содержание диссертации изложено в 21 опубликованной научной работе, в том числе 5 работ - в периодических изданиях, рекомендованных «Перечнем…» ВАК РФ.
Структура и объем работы. Диссертация изложена на 184 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, шести глав собственных исследований, заключения, выводов, приложения; иллюстриро-вана 21 таблицей и 23 рисунками. Список литературы включает 347 источ-ников, из них 211 - отечественных и 136 - зарубежных.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
Материалы и методы исследований. Диссертационная работа выполнена в рамках четырех плановых НИР «Изучение факторов природной очаговости Крымской геморрагической лихорадки» № Госрегистрации 01.200.402923), «Совершенствование эпидемиологического и эпизоотологического мониторинга за лихорадкой Западного Нила, геморрагической лихорадкой с почечным синдромом и клещевым боррелиозом в Ставропольском крае» (№ Госрегистрации 01.200.7.0095), «Изучение распространения арбовирусов на территории Ставропольского края» (№ Госрегистрации 01.201.052415), «Изучение эпидемиологических особенностей Крымской геморрагической лихорадки на территории Южного федерального округа» (№ Госрегистрации 01.215.2413).
При выполнении работы использован клинический и полевой материал, собранный нами на территории Ставропольского края, представленный в таблице 1.
Основой методологии нашего исследования был комплексный эпидемиологический подход, включающий эпизоотологическое и эпидемиологическое обследование, а также анализ полученных данных с помощью современных компьютерных программ.
Таблица – 1 Объекты исследования, взятые в работу
| Наименование материала | Количество проб, (экз.) |
| Иксодовые клещи | 104978 (10677) |
| Комары | 3583 (235) |
| Головной мозг птиц и грызунов | 2551 |
| Печень птиц и грызунов | 1209 |
| Сыворотки крови КРС | 1276 |
| Сыворотки крови МРС | 1130 |
| Сыворотки крови доноров | 825 |
| Итого | 17903 (108561) |
Для проведения эпидемиологического анализа заболеваемости КГЛ ис-пользованы еженедельные и окончательные донесения об эпидемической ситуации по КГЛ, представляемые Управлением Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека по Ставропольскому краю и ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в Ставропольском крае в соответствии с разработанными Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека формами отчетности. Проанализированы данные о 548 лабораторно подтвержденных случаях заболевания КГЛ.
Эпидемиологический анализ заболеваемости КГЛ проводили по таким признакам как территориальное распределение заболеваемости, сезонность,
распределение больных по полу, возрасту, профессии, социальному составу, эпидемиологическим типам заражения, клинической формы и степени тяжести заболевания (Клименко Е.П. и др., 1983).
Полевой материал для исследования доставлен с территорий 26 административных районов Ставропольского края и шести городов. Сбор материала проводили в различных ландшафтно-географических зонах во время экспедиционных выездов сотрудников лабораторий медицинской зоологии, медицинской паразитологии и вирусологии ФКУЗ Ставропольский противочумный институт Роспотребнадзора в период с марта по ноябрь.
Сбор иксодовых клещей осуществляли согласно МУ «Организация и проведение профилактических и противоэпидемических мероприятий против Крымской геморрагической лихорадки» (2009). Комаров отлавливали согласно МУ «Мероприятия по борьбе с лихорадкой Западного Нила на территории Российской Федерации» (2010). Руководствовались также МУ «Сбор, учет и подготовка к лабораторному исследованию кровососущих членистоногих-переносчиков возбудителей природно-очаговых инфекций» (2002).
Проверку достоверности различий или сходства между изучаемыми характеристиками, полученными при исследовании сравниваемых выборок, проводили с помощью коэффициента ранговой корреляции Спирмена (rs) по формуле: 
, где 
- сумма квадратов разностей рангов, а n - число парных наблюдений (по Полякову Л.Е., 1971).
Эпидемиологическое районирование территории Ставропольского края по риску заражения населения арбовирусными инфекциями (КГЛ, ЛЗН) проводили с использованием картографического метода (Шаханина И.Л. и др., 1990) при помощи программы ArcGIS v10.0. При этом использовали модифицированный нами метод расчета интегрального показателя трех совместных событий.
Статистический анализ данных осуществляли с использованием пакета прикладных программ «STATISTICA 6.0», системы электронных таблиц Microsoft Excel 2007. Текстовый и графический материал оформлен на персональном компьютере под управлением операционной системы MS Microsoft XP Professional и офисного пакета MS Offiсe 2007.
Результаты собственных исследований и их обсуждение
Условия, обеспечивающие формирование природных очагов арбовирусных инфекций
Характерной особенностью любой природно-очаговой инфекции, в том числе и арбовирусной, является связь с определенными ландшафтно-географическими и климатическими зонами, где обеспечиваются необходимые условия для циркуляции возбудителя.
Нами установлено, что на территории Ставропольского края имеются факторы, способствующие функционированию и дальнейшему расширению территорий природных очагов арбовирусных инфекций, такие как: разнообразие природно-географических ландшафтов от полупустынь до предгорий; климатические условия - свыше 100 дней в году со среднесуточной температурой более 20 С, до 30 дней - более 30 С, сумма эффективных температур (температура выше 10 С) составляет 3200-3500; разнообразный спектр кровососущих членистоногих (комаров, клещей), мелких грызунов и птиц - основных резервуаров арбовирусов, развитое животноводство. Наличие большого числа миграционных русел перелетных птиц способствует заносу на территорию края арбовирусов из стран Азии и Африки.
Изучение спектра арбовирусов, циркулирующих на территории Ставропольского края
Для определения спектра арбовирусов, циркулирующих на территории Ставропольского края, а также с целью уточнения видового состава основных переносчиков и носителей арбовирусов, изучения особенностей их экологии, распространения и территориальной приуроченности было проведено комплексное исследование кровососущих членистоногих, диких птиц, мелких и крупных млекопитающих.
Проведенные нами исследования позволили установить на территории края наличие шести родов иксодовых клещей: Hyalomma, Dermacentor, Boophilus, Rhipicephalus, Ixodes, Haemaphysalis, представленных 16 видами. Разнообразие климата и растительности в разных ландшафтах в сочетании с хозяйственной деятельностью человека (развитое общественное и частное животноводство), большое количество прокормителей имаго создают благоприятные условия для обитания иксодовых клещей. Расчлененность ландшафта определяет мозаичное распределение клещей в отдельных стациях, различие показателей их численности и зараженности возбудителями инфекционных болезней. Самыми распространенными иксодовыми клещами являются H. marginatum (54,6 %), характерные для полупустынной и степной ландшафтных зон (Нефтекумский, Курский, Арзгирский, Благодарненский, Туркменский, Апанасенковский, Ипатовский, Красногвардейский, Буденновский районы). Второе место по численности приходится на B. annulatus - 13,1 %. Доля D. marginatus составляет 10,3 %, другие виды - от 6,9 до 0,01 %.
В результате проведения эпизоотологического обследования территории края собрано 104978 экз. клещей, из которых сформированы 10677 пулов. Наибольшее количество положительных проб выявлено у H. marginatum - 349 (59,7 %) и D. marginatus - 86 (14,7 %). В табл. 2 представлены результаты инфицированности иксодовых клещей возбудителем КГЛ по видам.
Таблица – 2 Инфицированность иксодовых клещей вирусом ККГЛ в Ставропольском крае (2001-2011 гг.)
| Вид клеща | Количество клещей | Количество пулов | Кол-во положительных пулов в ИФА | |
| Абс. | % | |||
| Hyalomma marginatum | 57284 | 4507 | 349 | 59,7 |
| Hyalomma scupense | 4880 | 707 | 25 | 4,3 |
| Dermacentor marginatus | 10863 | 1601 | 86 | 14,7 |
| Dermacentor reticulatus | 7254 | 659 | 17 | 2,9 |
| Dermacentor niveus | 4 | 3 | 0 | 0 |
| Rhipicephalus rossicus | 4403 | 671 | 16 | 2,7 |
| Rhipicephalus sanguineus | 577 | 114 | 3 | 0,5 |
| Rhipicephalus bursa | 1699 | 199 | 4 | 0,7 |
| Rhipicephalus schulzei | 54 | 3 | 0 | 0 |
| Rhipicephalus pumilio | 1 | 1 | 0 | 0 |
| Haemaphysalis punctata | 1108 | 272 | 14 | 2,4 |
| Haemaphysalis parva | 28 | 10 | 0 | 0 |
| Haemaphysalis sulcata | 13 | 3 | 0 | 0 |
| Haemaphysalis inermis | 11 | 3 | 0 | 0 |
| Boophilus annulatus | 13719 | 1422 | 58 | 9,9 |
| Ixodes ricinus | 3052 | 499 | 13 | 2,2 |
| Итого | 104978 | 10677 | 585 | 100 |
Расчет коэффициента ранговой корреляции Спирмена показал статистически высокую связь между количеством исследованных и количеством положительных пулов (rs = 0,976).
Методом ИФА антиген вируса ККГЛ выявлен в 585 (5,5 %) пробах у клещей 10 видов. В 48 % случаев положительные пробы подтверждены методом ОТ-ПЦР. Максимальная зараженность клещей отмечена в 2005 г. (10,1 %), минимальная – в 2007 г. (2,2 %). После 2007 г. отмечается подъем показателя зараженности, особенно в 2011 г. (рис. 1).
Результаты наших исследований свидетельствуют, что основным резервуаром и переносчиком возбудителя КГЛ в природном очаге этой инфекции на территории Ставропольского края является клещ H. marginatum, что подтверждается показателем высокой вирусофорности (59,7 %) этого вида, а также установленной рядом авторов трансовариальной и трансфазовой передачей возбудителя (Згурская Г.Н., 1974; Смирнова С.Е., 2007 и др.).
Рисунок 1 - Годовые показатели зараженности иксодовых клещей
возбудителем КГЛ
Разнообразие ландшафтно-климатических условий Ставропольского края обусловливает обитание различных видов комаров. На наличие вируса ЗН нами исследованы комары 4 родов: Culex, Aedes, Anopheles, Coquillettidia в количестве 3583 имаго (235 пулов). Антиген вируса ЗН выявлен в 9 пробах суспензий комаров рода Aedes, РНК вируса ЗН обнаружена в 14 пробах суспензий комаров данного рода комаров (табл. 3). Положительные пробы составили 6,0 % от общего количества и 10,1 % от количества проб комаров рода Aedes. Из этого можно предположить, что комары рода Aedes, широко распространенные в крае, могут быть одним из переносчиков вируса ЗН.
Нами исследованы на наличие антигена вируса ЗН широко распространенные на территории края иксодовые клещи Н. marginatum. Из 931 пробы 16 (2,3 %) оказались положительными (rs = 0,8). Эти данные подтверждают существование дополнительного механизма циркуляции и сохранения вируса ЗН в природе, который формируется в определенные периоды при сухой и теплой погоде, когда имеются благоприятные условия для массового размножения клещей, и появляется недостаток в комарах как основных переносчиках возбудителя лихорадки Западного Нила.
С 2006 г. в Ставропольском крае нами проводится мониторинг за возбудителем КЭ. Для лабораторных исследований отбирали виды клещей, которые согласно литературным данным, являются переносчиками и носителями ВКЭ (Верета Л.А., 1975; Коренберг Э.И., 1993, 2008). Из 1381 исследованного пула положительными оказались 124 (9,0 %) (rs = 0,8). Наиболее высокий показатель зараженности у клещей D. marginatus (4,9 %), наименее – (0,9 %) у клещей D. reticulatus. В 2005 г. первые положительные находки ВКЭ в Ставропольском крае были установлены Ю.М. Тоховым (2009).
Таблица – 3 Результаты исследования комаров на наличие антигена и РНК вируса ЗН
| № п/п | Административная территория (город, район) | Точка (населенный пункт) | Вид комара | Количество положительных проб | |
| ИФА | ОТ-ПЦР | ||||
| 1. | г. Ставрополь | Парк Победы, лиственный лес | Aedes cantans | 2 | 3 |
| 2. | Шпаковский | х. Молочный, опушка леса | Aedes cantans | 1 | 2 |
| 3. | Грачевский | с. Красное, 2 км от леса | Aedes cantans | 1 | 1 |
| 4. | Нефтекумский | с. Каясула | Aedes vexans | 1 | 1 |
| 5. | г. Ставрополь | парк Победы, лиственный лес | Aedes dianteus | 1 | 1 |
| 6. | г. Ставрополь | лес, вблизи пересохших дренажных канав | Aedes cantans | 1 | 3 |
| 7. | Шпаковский | х. Молочный, опушка леса | Aedes cantans | 1 | 2 |
| 8. | Изобильненский | х. Смыков, лесополоса | Aedes cantans | 1 | 1 |
| Итого | 9 | 14 | |||
Впервые на территории Ставропольского края исследован полевой материал на наличие антигенов вирусов Батаи и Калифорнийской серогруппы (Инко, Тягиня). Антиген вируса Батаи обнаружен у 5,3 % клещей имаго Rh. rossicus; вируса Тягиня - в 7,6 % суспензий имаго иксодовых клещей D. marginatus. Вирус Инко обнаружен у клещей H. marginatum в 12,1 % проб, сформированных из нимф и имаго. Аналогичные данные получены на территории Ростовской области (Москвитина Э.А. и др., 2009).
Таким образом, в результате выполненных исследований нами определен спектр кровососущих членистоногих (иксодовые клещи H. marginatum, D. marginatus, D. reticulatus, Rh. rossicus, I. ricinus, Haem. punctata; комары рода Aedes), являющихся резервуаром и переносчиками возбудителей природно-очаговых арбовирусных инфекций в Ставропольском крае.
Одним из древнейших резервуаров возбудителей арбовирусных болезней являются птицы. Они играют ведущую роль для многих арбовирусов не только в резервации возбудителей в природных очагах, но и в их переносе на огромные расстояния вплоть до трансконтинентальных заносов во время сезонных миграций.
Нами обследовано 892 особи птиц, от которых на наличие антигенов арбовирусов исследовали пробы головного мозга и печени. Антиген вируса ККГЛ выявлен в 39 пробах (4,5 %) головного мозга птиц (rs = 0,543). Установлено, что основными прокормителями преимагинальных фаз клещей H. marginatum в Ставропольском крае являются грачи, на долю которых приходится 74,4 % положительных проб. Данные наших исследований показали, что основным резервуаром вируса ЗН среди диких птиц в крае также являются грачи, у которых обнаружено 50 % зараженных проб головного мозга и 60 % проб печени. Положительные результаты, полученные от синантропных популяций птиц, свидетельствуют о циркуляции возбудителя в селитебных ландшафтах. Это создает предпосылки для развития вспышек тех болезней птиц, которые являются общими с человеком (Львов Д.К., Ильичев В.Д., 1979). В пробах головного мозга птиц выявлен антиген вируса Батаи (10,6 %) (рис. 2). Основная доля положительных проб на лихорадку Батаи, так же как на КГЛ и ЛЗН, получена от грачей, что свидетельствует о высокой чувствительности этого вида к различным арбовирусным инфекциям.
Рисунок 2 - Районы выявления антигенов вирусов Инко, Тягиня, Батаи и антител к вирусу Батаи
Результаты наших исследований показали, что природным резервуаром вируса ККГЛ среди грызунов на территории Ставропольского края являются мыши сем. Мышиных (Muridae) подрода Sylvaemus и мышь домовая (Mus musculus), в эпизоотический процесс вовлечены другие виды грызунов, что свидетельствует о расширении спектра природных носителей возбудителя КГЛ.
Обнаружение антигена вируса ЗН в пробах органов грызунов позволило установить, что носителями возбудителя ЛЗН являются грызуны семейств Мышиных (мышь домовая, мыши подрода Sylvaemus) и Хомяковых (полевки общественная (Microtus socialis) и обыкновенная (Microtus arvalis)).
Удалось выявить антиген вируса Тягиня в головном мозге грызунов сем. Мышиных: мыши домовой и мыши полевой (Apodemus agrarius). Положительные находки составили 10,0 %.
На основании полученных результатов следует заключить, что среди
грызунов, вовлекаемых в носительство арбовирусов, наиболее важную роль играют мыши подрода Sylvaemus и домовые мыши, а так же полевки. Активное участие синантропных видов грызунов в сохранении арбовирусных
инфекций на территории Ставропольского края представляет значительный эпидемиологический интерес, так как массовые осенне-зимние миграции домовой мыши в жилье человека могут способствовать заносу арбовирусов.
На территории Ставропольского края пастбища являются основными стациями обитания клещей – резервуара возбудителя КГЛ и местами выпаса крупного и мелкого рогатого скота – основного прокормителя имаго иксодовых клещей. Специфические антитела к вирусу ККГЛ выявлены у 7,5 % обследованных КРС и 1,3 % МРС (rs = 0,497). В трех случаях отмечено выявление у животных IgG, а у клещей, снятых с этих животных, - антигена вируса ККГЛ. При этом одна проба крови была взята у овцы, с которой сняты клещи Rh. rossicus, две - у крупного рогатого скота (клещи Н. marginatum).
Специфические антитела к вирусу Батаи выявлены в 17 пробах (4,6 %) сывороток крови овец. Нами впервые на территории края обнаружен антиген вируса Батаи у иксодовых клещей и диких птиц, а специфические антитела - у овец, что указывает на возможность формирования природного очага инфекции в данном регионе.
Роль арбовирусов в краевой инфекционной патологии
Формирование напряженных очагов арбовирусных инфекций и обострение эпидемической ситуации во многом обусловлено антропогенным преобразованием биосферы и изменением экологической ситуации. Росту заболеваемости КГЛ способствовало проявление сложившейся общей неблагоприятной тенденции к повсеместной активизации природных очагов вирусных трансмиссивных инфекционных болезней. Это обусловлено действием ряда природных и социальных факторов, способствующих сохранению и увеличению популяции переносчиков возбудителя КГЛ, и массовое сокращение акарицидных обработок природных очагов.
С целью определения клинико-эпидемиологической характеристики КГЛ в Ставропольском крае нами проведен ретроспективный анализ заболеваемости с 1999 г. по 2011 г. За изучаемый период времени было зарегистрировано 548 случаев заболевания КГЛ, что составило 36,5 % от числа всех заболевших КГЛ на Юге России (рис. 3).
Анализ внутригодового распределения заболеваемости КГЛ в Ставропольском крае подтверждает выраженную весенне-летнюю сезонность, которая обусловлена, в первую очередь, активностью иксодовых клещей – переносчиков возбудителя КГЛ, а так же достижением необходимых среднемесячных температур, пребыванием людей в природных биотопах на территории природного очага КГЛ, занятием сельскохозяйственными работами и др.
Показатель заболеваемости КГЛ на 100 тыс. населения колебался от 0,4 в 1999 г. до 0,9 в 2011 г. В 2000 г., когда число заболевших КГЛ возросло в 4,8 раза, показатель заболеваемости повысился до 1,8. В 2001 г. наблюдался спад заболеваемости, а в 2002 г. – снова подъем. С 2003 г. по 2006 г. величина показателя заболеваемости находилась на уровне 1,1 – 1,6. Резкий подъем
Рисунок 3 – Количество больных КГЛ в Ставропольском крае (1999-2011 гг.)
произошел в 2007-2008 гг. (число заболевших составило 63 и 80 соответственно), а начиная с 2009 г., идет спад заболеваемости КГЛ (рис. 4).
Рисунок 4 - Показатель заболеваемости КГЛ на 100 тыс. населения
Изучение путей и факторов передачи инфекции позволило установить, что в подавляющем большинстве случаев заражение происходило при укусе клещом - 48,7 % от общего числа больных. При снятии и раздавливании клещей незащищенными руками заразились 12,9 % больных.
Заболеваемость КГЛ на территории Ставропольского края регистрировалась во всех возрастных группах населения. Средний возраст больных составил 42,5 года.
Установлено максимальное количество больных среди лиц трудоспособного возраста от 20 лет до 60 лет (81,0 %). Кроме того, велика доля лиц старше 60 лет (11,1%), значительную часть которых составляют пенсионеры.
Анализ распределения больных КГЛ в Ставропольском крае по полу показал, что общее количество случаев заболевания КГЛ среди мужчин значительно превышает количество заболевших женщин (соответственно 64,0 % и 36,0 %). Установленная возрастная структура больных КГЛ подтверждает наиболее частые контакты с природными очагами людей трудоспособного возраста (от 20 лет до 60 лет), что определяет группу риска, средний возраст которой составил 41 год. Доля детей до 14 лет с подтвержденным диагнозом КГЛ составила 1,4 %.
Распределение больных КГЛ по социально-профессиональным группам показало, что наибольший удельный вес больных отмечается среди неработающего населения (46,4 %), в том числе и пенсионеров. Этот контингент тесно связан с домашними животными: содержание и уход за ними на частных подворьях, выращивание сельскохозяйственных культур, как на собственных приусадебных участках, так и на полях у частных предпринимателей.
За период с 1999 г. по 2011 г. на территории края 23 случая КГЛ закончились летальным исходом, что составило 4,2 % от всего числа больных, выявленных в данном субъекте РФ (общероссийский показатель – 4,5 %).
Проведенный нами анализ территориального распределения заболеваемости КГЛ показал, что в период с 1999 г. по 2011 г. случаи заболевания зарегистрированы в 25 административных районах Ставропольского края и краевом центре - г. Ставрополе (отсутствовали только в Кировском районе). Установлено, что в легкой форме болезнь протекала у 15 больных, что составило 3,6 % от всех случаев заболевания. На тяжелую форму пришлось 16,2 % случаев, преобладала же среднетяжелая форма - 80,2 %.
В целом, за анализируемый период в Ставропольском крае зарегистрировано 41,2 % случаев КГЛ с геморрагическим синдромом (ГС) и 58,8 % – без геморрагического синдрома. У 13 больных тяжелой формой КГЛ с геморрагическим синдромом (7,6 %) болезнь закончилась летальным исходом (рис. 5).
Рисунок 5 – Анализ заболеваемости КГЛ по степени тяжести и наличию ГС
Снижение количества больных КГЛ с геморрагическими проявлениями, возможно, связано с изменением вирулентности вируса ККГЛ, с введением провизорной госпитализации больных по поводу укусов клещами или снятии их с себя, а также с проведением больным адекватной терапии в ранние сроки болезни. Анализ динамики выявления больных КГЛ с различными формами тяжести болезни показал, что в целом на протяжении анализируемого периода отмечается стойкая тенденция к увеличению регистрации случаев со среднетяжелыми формами болезни, преимущественно за счет снижения количества случаев заболевания с тяжелыми формами. Это может свидетельствовать о своевременности обращения больных в лечебно-профилактические учреждения и более качественной ранней диагностике КГЛ.
Таким образом, нами установлено, что Крымская геморрагическая лихорадка среди природно-очаговых арбовирусных инфекций на территории Ставропольского края занимает ведущее место в краевой инфекционной патологии, при этом за период с 2003 г. по 2011 г. наблюдается стойкая тенденция к уменьшению числа больных КГЛ с геморрагическим синдромом, а также к увеличению регистрации среднетяжелых форм болезни, преимущественно за счет снижения количества тяжелых форм.
Одним из признаков, указывающих на наличие циркуляции возбудителей инфекций на определенных территориях, является выявление антител к ним в сыворотках крови доноров (Смирнова С.Е., 2003).
Антитела класса G к вирусу ККГЛ выявлены в 20 образцах из 825 исследованных, что составило 2,4 %. Положительными на наличие IgG к вирусу ЗН оказались 23 сыворотки крови (2,8 %). При исследовании положительных проб на авидность оказалось, что семь сывороток крови содержали низкоавидные антитела (индекс авидности 12-42 %), свидетельствующие о недавно перенесенной болезни. В 1,9 % исследованных сывороток крови доноров получены положительные результаты на наличие IgG к вирусу КЭ.
В связи с тем, что возбудитель ЛЗН относится, так же как и вирус клещевого энцефалита, к экологической группе арбовирусов, семейству Flaviviridae, роду Flavivirus, все положительные на анти-ВЗН пробы сывороток крови доноров были исследованы на наличие специфических антител к ВКЭ с помощью набора реагентов для иммуноферментного выявления IgG к вирусу клещевого энцефалита «ВектоВКЭ-IgG». При этом перекрестных результатов не выявлено.
На основании полученных данных ретроспективно установлено, что в 2008 г. и 2010 г. в Ставропольском крае имели место случаи заболевания лихорадкой Западного Нила.
Результаты наших исследований позволили выявить наличие иммунной прослойки среди населения края к арбовирусам Крымской-Конго геморрагической лихорадки, Западного Нила, клещевого энцефалита, что свидетельствует о бессимптомно протекающей инфекции с трансмиссивным механизмом передачи кровососущими членистоногими.
Впервые при проведении серологических исследований в сыворотках крови доноров выявлены специфические антитела к ВКЭ, что, наряду с обнаружением антигена вируса КЭ у клещей, указывает на возможную циркуляцию этого возбудителя в отдельных районах края. Серопозитивные реакции свидетельствуют о циркуляции этих возбудителей и возможном заражении людей, что, скорее всего, связано с активизацией природных очагов этих инфекций на сопредельных с краем территориях. В связи с этим актуален вопрос о внедрении в практику здравоохранения Ставропольского края диагностики арбовирусных инфекционных заболеваний, в том числе ЛЗН и ВКЭ.
Районирование территории Ставропольского края по степени
активности природных очагов арбовирусов
На основе данных эпидемиологического и эпизоотологического обследования районов Ставропольского края и результатов серологического мониторинга нами проанализирована территориальная распространенность арбовирусных инфекций и установлено, что уровни и интенсивность заболеваемости населения, циркуляция возбудителей среди носителей и переносчиков, состояние коллективного иммунитета среди людей и животных в разрезе административных территорий Ставропольского края существенно отличаются. Учитывая различную частоту и интенсивность этих показателей в различных административных районах, нами проведено эпидемиологическое районирование территории края по степени риска инфицирования арбовирусными инфекциями (КГЛ, ЛЗН), также учитывалась приуроченность районов к ландшафтно-географическим зонам. При этом мы использовали собственную модификацию метода расчета интегрального показателя по трем совместным событиям (рассчитывали средние выборочные показатели для трех совместных событий и затем применяли метод экспертных оценок).
Эпидемиологическое районирование территории Ставропольского края по КГЛ основано на материалах, полученных за 13 лет изучения природного очага (с 1999 г. по 2011 г.), по ЛЗН - на материалах, полученных в течение семи лет обследования территории (с 2005 г. по 2011 г.).
В результате проведенного районирования выделено три зоны территории Ставропольского края с различной степенью риска инфицирования возбудителем КГЛ:
- зона высокого риска, включающая шесть районов, из них три района (Ипатовский, Благодарненский, Степновский) расположены в степной ландшафтно-географической зоне, три района (Апанасенковский, Нефтекумский, Курский) - в полупустынной;
- зона среднего риска, состоящая из 11 районов, причем, большинство районов относятся к степной зоне (Красногвардейский, Труновский, Изобильненский, Петровский, Андроповский, Новоселицкий, Буденовский), три района (Туркменский, Арзгирский, Левокумский) – к полупустынной, один (Александровский) - к лесостепной;
- зона низкого риска, охватывающая девять районов, (Грачевский, Кочубеевский, Георгиевский, Советский, Кировский, Шпаковский) - из лесостепной зоны, в том числе и г. Ставрополь, один район (Новоалександровский) – из степной зоны; два (Минераловодский, Предгорный) – в предгорной (рис. 6).
Аналогичная методика применена и для районирования территории Ставропольского края по ЛЗН, где также выделены три зоны (высокого, среднего и низкого риска заражения).
Рисунок 6 - Районирование территории Ставропольского края по степени риска инфицирования возбудителем КГЛ
ВЫВОДЫ
1. Впервые определен спектр арбовирусов, циркулирующих на территории Ставропольского края: Крымской-Конго геморрагической лихорадки, Западного Нила, клещевого энцефалита, Батаи, вирусов Калифорнийской серогруппы (Тягиня, Инко); впервые выявлены антигены вирусов Батаи, Тягиня, Инко в полевом материале.
2. Впервые проведенное эпидемиологическое районирование территории Ставропольского края с использованием картографического метода и модифицированного нами расчета интегрального показателя трех совместных событий с учетом эпидемиологических и эпизоотологических характеристик, позволило выделить территории с различной степенью риска (высокой, средней, низкой) инфицирования людей возбудителями Крымской геморрагической лихорадки и лихорадки Западного Нила.
3. Установлено, что факторами, благоприятствующими циркуляции арбовирусов и дальнейшему расширению территорий природных очагов арбовирусных инфекций в Ставропольском крае, являются: разнообразие природно-географических ландшафтов от полупустынь до предгорий; климатические условия - свыше 100 дней в году со среднесуточной температурой более 20 С, до 30 дней - более 30 С, сумма эффективных температур (температура выше 10 С) составляет 3200-3500; разнообразный спектр кровососущих членистоногих (комаров, клещей), мелких грызунов и птиц - основных резервуаров арбовирусов, развитое животноводство.
4. Определены основные переносчики возбудителей природно-очаговых арбовирусных инфекций на территории Ставропольского края - кровососущие членистоногие: иксодовые клещи Hyalomma marginatum, Dermacentor marginatus, Dermacentor reticulatus, Rhipicephalus rossicus, Ixodes ricinus, Haemaphysalis punctata и комары рода Aedes.
5. Природными резервуарами арбовирусов являются грызуны из семейств Мышиных (мышь домовая, мышь полевая, мыши подрода Sylvaemus), Хомяковых (полевки общественная и обыкновенная) и Песчанковых (песчанка тамарисковая), а так же птицы из семейства Врановых, ведущая роль среди которых принадлежит грачам.
6. На территории Ставропольского края впервые выявлены антитела к вирусу Батаи в сыворотках крови овец (4,6 %), что является косвенным подтверждением существования природного очага лихорадки Батаи в данном регионе.
7. Наличие специфических антител к арбовирусам (ККГЛ- 2,4 %; ЗН- 2,8 %; КЭ - 1,9 %) у местного населения (доноров крови) свидетельствует о бессимптомно протекающей инфекции с трансмиссивным механизмом передачи кровососущими членистоногими.
8. Наибольшее эпидемиологическое значение в краевой инфекционной патологии среди арбовирусных инфекций имеет Крымская геморрагическая лихорадка. В период с 2003 г. по 2011 г. наблюдается стойкая тенденция к уменьшению количества больных КГЛ с геморрагическим синдромом (41,2 %). В то же время отмечается увеличение доли среднетяжелых форм болезни (80,2 %) преимущественно за счет снижения количества тяжелых форм (16,2 %).
Список научных работ, опубликованных по теме диссертации
1. Василенко Н.Ф., Трияндофилова Н.Г., Бейер А.П., Малецкая О.В., Орлова Т.Н., Заревина Л.И., Горобец Е.А., Шапошникова Л.И., Гудиева А.Ю., Левченко Б.И. Результаты эпизоотологического обследования природного очага Крымской геморрагической лихорадки на территории Ставропольского края в 2007 г. // Диагностика, лечение и профилактика опасных и особо опасных инфекционных заболеваний. Биотехнология: материалы Всерос. науч. конф. посвящ. 80-летию со дня основания ФГУ «48 ЦНИИ Минобороны России», Киров. 20-21 ноября 2008 г. Киров, 2008. - С. 234–237.
2. Василенко Н.Ф., Трияндофилова Н.Г., Бейер А.П., Малецкая О.В., Заревина Л.И., Орлова Т.Н., Горобец Е.А., Шапошникова Л.И., Гудиева А.Ю., Левченко Б.И. Результаты эпизоотологического и эпидемиологического обследования природного очага Крымской геморрагической лихорадки на территории Ставропольского края в 2007 г. // Современные технологии в реализации глобальной стратегии борьбы с инфекционными болезнями на территории государств-участников содружества независимых государств: матер. IX Межгос. науч.-практ. конф. государств-участников СНГ, Волгоград, 30 сентября – 2 октября, 2008 г. Волгоград, 2008. - С. 186–187.
3. Шкарлет Г.П., Трияндофилова Н.Г., Василенко Н.Ф., Григорьев М.П., Морозова О.В. О случаях выявления антигена вируса Западного Нила у птиц на территории Ставропольского края // Кавказский орнитологический вестник. Ставрополь, 2009. Вып. 21. - С. 206–209.
4. Афанасьева Е.Е., Варфоломеева Н.Г., Шкарлет Г.П., Василенко Н.Ф. Мониторинг за лихорадкой Западного Нила в Ставропольском крае (2005 -2008 гг.) // Биологическая безопасность в современном мире: матер. науч.-практ. конф. молодых ученых и специалистов научно - исследовательских учреждений Роспотребнадзора (Оболенск, Московская обл., 21-22 апреля, 2009 г.). Оболенск, 2009. - С. 37-39.
5. Варфоломеева Н.Г., Шкарлет Г.П., Афанасьева Е.Е., Василенко Н.Ф., Орлова Т.Н., Шапошникова Л.И., Малецкая О.В. Изучение циркуляции некоторых арбовирусов на территории Ставропольского края в 2008 г. // Биологическая безопасность в современном мире: матер. науч.-практ. школы-конференции молодых ученых и специалистов научно-исследовательских учреждений Роспотребнадзора (21-22 апреля, 2009 г., Оболенск, Московская обл.). Оболенск, 2009. - С. 10-12.
6. Шкарлет Г.П., Варфоломеева Н.Г., Василенко Н.Ф., Григорьев М.П., Газиева А.Ю., Заревина Л.И., Горобец Е.А. Значение интразональных комплексов и птиц семейства врановых в распространении некоторых арбовирусов // Актуальные вопросы инфекционной патологии: сборник докладов юбилейной науч.-практ. конф., посвящ. 100-летию Ростовского НИИ микробиологии и паразитологии. Ростов-на-Дону, 2009. - С. 188-191.
7. Газиева А.Ю., Варфоломеева Н.Г., Григорьев М.П., Василенко Н.Ф., Заревина Л.И. Значение мелких млекопитающих в циркуляции вируса ККГЛ на территории Предкавказья // Проблемы современной эпидемиологии. Перспективные средства и методы лабораторной диагностики и профилактики актуальных инфекций: труды Всерос. науч. конф., 19-20 ноября 2009 г. Санкт-Петербург, 2009. - С. 235.
8. Варфоломеева Н.Г., Василенко Н.Ф., Малецкая О.В., Тохов Ю.М., Шкарлет Г.П., Заревина Л.И., Горобец Е.А., Исмаилова Г.К., Ермаков А.В., Куличенко А.Н. Изучение циркуляции арбовирусов на территории Ставропольского края // Актуальные проблемы предупреждения и ликвидации последствий чрезвычайных ситуаций в области санитарно-эпидемиологического благополучия населения государств-участников СНГ: тезисы Х Межгос. науч.-практ. конф. Ставрополь, 2010. - С. 29-30.
9. Бейер А.П., Малецкая О.В., Варфоломеева Н.Г., Акименко В.А., Харченко Т.В. Современное состояние природных очагов, сочетанных с другими инфекционными болезнями, на территории Ставропольского края // Актуальные проблемы предупреждения и ликвидации последствий чрезвычайных ситуаций в области санитарно-эпидемиологического благополучия населения государств-участников СНГ: тезисы Х Межгос. науч.-практ. конф. Ставрополь, 2010. - С. 18-19.
10. Василенко Н.Ф., Варфоломеева Н.Г., Заревина Л.И., Ларичев В.Ф., Терехин С.А., Ермаков А.В., Бутенко А.М. Применение иммуноферментной тест-системы для выявления антител к вирусу Батаи у овец в Ставропольском крае // Актуальные проблемы предупреждения и ликвидации последствий чрезвычайных ситуаций в области санитарно-эпидемиологического благополучия населения государств-участников СНГ: тезисы Х Межгос. науч.-практ. конф. Ставрополь, 2010. - С. 168.
11. Варфоломеева Н.Г., Трусова И.Н., Василенко Н.Ф., Ларичев В.Ф., Романенко Е.Н., Бутенко А.М. Сравнительная оценка чувствительности и специфичности иммуноферментных тест-систем при выявлении IgM и IgG к вирусу Крымской-Конго геморрагической лихорадки // Актуальные проблемы предупреждения и ликвидации последствий чрезвычайных ситуаций в области санитарно-эпидемиологического благополучия населения государств-участников СНГ: тезисы Х Межгос. науч.-практ. конф. Ставрополь, 2010. - С. 169.
12. Василенко Н.Ф., Варфоломеева Н.Г., Малецкая О.В., Харченко Т.В., Шапошникова Л.И., Шкарлет Г.П., Исмаилова Г.К., Картоев А.А., Куличенко А.Н. Эпидемиологическая обстановка по Крымской геморрагической лихорадке на территории Северо-Кавказского федерального округа // Современные технологии обеспечения биологической безопасности: матер. науч.-практ. школы-конференции молодых ученых и специалистов научно-исследовательских учреждений Роспотребнадзора (Оболенск, Московская область, 25-27 мая, 2010 г.). Оболенск, 2010. - С. 350-353.
13. Шкарлет Г.П., Варфоломеева Н.Г., Василенко Н.Ф., Заревина Л.И., Газиева А.Ю., Горобец Е.А. Характеристика весеннего населения птиц исскуственных насаждений и их значение в распространении арбовирусных инфекций // Естественные и технические науки. 2010. Вып. 3. - С. 80-82 (журнал из перечня ВАК).
14. Варфоломеева Н.Г., Ермаков А.В., Василенко Н.Ф., Шкарлет Г.П., Малецкая О.В., Кирейцева О.А., Заикина И.Н., Куличенко А.Н. Эпидемиологическая обстановка по природно-очаговым вирусным инфекциям на территории Ставропольского края // Пробл. особо опасных инф. 2011. Вып. 2 (108). С. 16-18 (журнал из перечня ВАК).
15. Кирейцева О.А., Варфоломеева Н.Г., Василенко Н.Ф., Харченко Т.В., Шкарлет Г.П., Малецкая О.В., Ермаков А.В., Куличенко А.Н. Эпидемиологическая и эпизоотологическая обстановка по Крымской геморрагической лихорадке на юге России в 2010 г. // Современные технологии обеспечения биологической безопасности: материалы III науч.-практ. конф. и специалистов научно-исследовательских организаций Роспотребнадзора (31 мая - 2 июня 2011г., Оболенск, Московская обл.). Оболенск, 2011. - С. 36-39.
16. Волынкина А.С., Варфоломеева Н.Г., Шкарлет Г.П., Василенко Н.Ф., Заревина Л.И., Малецкая О.В. Мониторинг природного очага лихорадки Западного Нила на территории Ставропольского края // Современные технологии обеспечения биологической безопасности: материалы III науч.-практ. конф. и специалистов научно-исследовательских организаций Роспотребнадзора (31 мая - 2 июня 2011г., Оболенск, Московская обл.). Оболенск, 2011. - С. 164 - 166.
17. Василенко Н.Ф., Малецкая О.В., Тохов Ю.М., Варфоломеева Н.Г., Кирейцева О.А., Харченко Т.В., Ермаков А.В., Куличенко А.Н. Эпидемиологическая обстановка по Крымской геморрагической лихорадке на Юге России в 2010 г. и прогноз на 2011 г. // Пробл. особо опасных инф. 2011 г. Вып. 1(107). - С. 13-15 (журнал из перечня ВАК).
18. Волынкина А.С., Ермаков А.В., Василенко Н.Ф., Варфоломеева Н.Г., Малецкая О.В., Заикина И.Н., Горобец Е.А. Эпидемиологическая обстановка по Крымской геморрагической лихорадке на юге России в 2011 г. //Современные проблемы военной медицины, обитаемости и профессионального отбора: матер. Всерос. науч.-практ. конф. 17-18 ноября 2011 г. Санкт-Петербург, 2011. - С. 283-284.
19. Василенко Н.Ф., Смоленский В.Ю., Волынкина А.С., Варфоломеева Н.Г., Заикина И.Н., Малецкая О.В., Ашибоков У.М., Тохов Ю.М., Ермаков А.В., Куличенко А.Н. Особенности эпидемиологической обстановки по Крымской геморрагической лихорадке в Российской Федерации в 2011 г. // Пробл. особо опасных инф. 2012. Вып. 1(111). - С. 22-25 (журнал из перечня ВАК).
20. Ермаков А.В., Василенко Н.Ф., Варфоломеева Н.Г., Кирейцева О.А., Волынкина А.С., Заикина И.Н., Малецкая О.В., Куличенко А.Н. Иммунологический мониторинг за трансмиссивными природно-очаговыми инфекциями на территории Кавказских Минеральных Вод // Медицинский вестник Северного Кавказа. 2012 г. Вып. 1(25). - С. 43-46 (журнал из перечня ВАК).
21. Василенко Н.Ф., Волынкина А.С., Малецкая О.В., Варфоломеева Н.Г., Заикина И.Н., Тохов Ю.М., Горобец Е.А., Ашибоков У.М., Ермаков А.В., Куличенко А.Н. Эпидемиологическая обстановка по Крымской геморрагической лихорадке в Российской Федерации в 2011 г. и прогноз на 2012 г. // Актуальные проблемы болезней, общих для человека и животных: Материалы Всерос. науч.-практ. конф. с междунар. участием 23-24 мая 2012 г. Ставрополь / Под ред. А.Н. Куличенко. Ставрополь: ООО «Экспо-Медиа». 2012. - С. 26-27.
