Оглы фармакогностическое изучение растений семейства лоховые
На правах рукописи
Багиров Исмаила Мамед оглы
ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ РАСТЕНИЙ
СЕМЕЙСТВА ЛОХОВЫЕ
Специальность 14.04.02 – фармацевтическая химия, фармакогнозия.
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
кандидата фармацевтических наук
Москва - 2010
Работа выполнена в ГОУ ВПО Первый Московский Государственный Медицинский Университет имени И.М. Сеченова и в Азербайджанском Медицинском Университете
Научный руководитель:
доктор фармацевтических наук,
член-корр. РАМН, профессор Самылина Ирина Александровна
Официальные оппоненты:
- доктор фармацевтических наук,
профессор Казьмина Эма Максимовна
- доктора фармацевтических наук Баландина Ирина Анатольевна
Ведущая организация: ВИЛАР Российской Академии Сельскохозяйственных Наук
Защита состоится «___» ____________ 2011 года в часов на заседании Диссертационного совета Д.208.040.09 при ГОУ ВПО Первый Московский Государственный Медицинский Университет имени И.М. Сеченова (119019, г. Москва, Никитский бул., д.13).
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО Первый Московский Государственный Медицинский Университет имени И.М.Сеченова (117418, г. Москва, Нахимовский пр., 49)
Автореферат разослан «___» ________ 20 г
Ученый секретарь
Диссертационного совета Д.208.040.09,
доктор фармацевтических наук,
профессор Садчикова Наталья Петровна
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы. Обеспечение высококачественными лекарственными средствами населения страны имеет социальное значение. Несмотря на большие успехи в области создания синтетических лекарственных средств, в настоящее время большое внимание уделяется разработке и внедрению в практику здравоохранения эффективных и малотоксичных лекарственных средств на основе лекарственного растительного сырья. Для расширения сырьевой базы и создания эффективных оригинальных препаратов необходимо проводить поиск новых сырьевых источников лекарственных растений, расширять изучение природных биологически активных веществ. Облепиха, произрастающая в Азербайджане, является перспективным источником получения витаминных и противовирусных препаратов. Кроме того, достаточную сырьевую базу имеет лох узколистный, произрастающий в Азербайджане.
Учитывая необходимость комплексного использования растений, наличие достаточной сырьевой базы, широкое применение в народной медицине, а также филогенетическую связь с облепихой крушиновидной, актуальным является фармакогностическое изучение плодов и листьев лоха узколистного.
Вместе с тем морфология, анатомия, химический состав, биологические свойства листьев и плодов лоха узколистного в настоящее время изучены недостаточно. Возможности комплексного использования биологически активных веществ лоха узколистного и облепихи крушиновидной не получили должной проработки.
В связи с выше изложенным, проблема изыскания природных сырьевых источников биологически активных веществ, эффективных для лечения различных заболеваний, является весьма важной и нуждается в решении.
Цели и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось выявление сырьевых источников из растений семейства лоховых, произрастающих в Азербайджане для создания лекарственных средств противоспалительного, ранозаживляющего, противовирусного и кардиотонического действия.
Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи.
- Провести сравнительное морфолого-анатомическое изучение плодов, листьев лоха узколистного и облепихи крушиновидной;
- Изучить полифенольный комплекс листьев лоха и облепихи;
- Изучить жирнокислотный состав масла косточек лоха узколистного и плодов облепихи крушиновидной.
- Выделить и идентифицировать флавоноиды из сырья облепихи и лоха.
- Провести оценку сортов сырья облепихи крушиновидной, богатой жирным маслом и флавоноидами.
Научная новизна. Было проведено изучение морфолого-анатомических признаков плодов и листьев лоха узколистного и облепихи крушиновидной, произрастающих в Азербайджане. Проведенные исследования позволили выявить основные анатомо-диагностические признаки, которые могут быть использованы для идентификации изучаемых видов сырья.
Проведены поисковые работы по выявлению дикорастущей облепихи из различных районов Азербайджана, изучены новые гибридные сорта «Зафарани» и «Шафа» на содержание жирного масла и флавоноидов.
Установлено, что выход масла из дикорастущей облепихи варьирует от 7,14 % до 8,32 %, из новых гибридных сортов от 5,23 % до 7,11 %.
При изучении суммы флавоноидов были выделены и идентифицированы 5 флавоноидов (кверцетин, нарциссин, рутин и 7-рамнозидо-3-глюкозид изорамнетина). Изучение флавоноидного состава цветков лоха узколистного позволило установить наличие элеагнозида и кемпферола.
Изучен жирнокислотный состав плодов облепихи крушиновидной, произрастающей в Азербайджане. Установлено наличие следующих жирных кислот : тридекановая – 0,9%, гексадекановая – 29,7%, 9-гексадекановая – 31,2%, октадекановая 2,6%, 9-октадеценовая 30,2%, 9,12-октадекадиеновая – 0,7%, 5,11,14, 17- эйкозатетраеновая – 0,5%, 13-докозеновая – 1,3%.
Изучен жирнокислотный состав масла косточек лоха узколистного. Установлено наличие следующих жирных кислот: гексадекановая – 6,03%, 7,10-октадекановая, 8,11-октадекадиеновая – суммарно 83%, октадекановая – 8,4%, 10,13-эйкозадиеновая, эйкозановая – 1,25, трикозановая – следы.
На основе выделенных флавоноидов разработан экстракционный препарат «В-1», обладающий кардиотоническим действием.
Из листьев лоха и облепихи выделен полифенольный комплекс, в котором методом ВЭЖХ идентифицированы гидролизуемые танины: стриктинин I, изостриктинин II, казуариктин III, казуаринин IV, гипофенин В V и другие.
Практическая значимость работы. Результаты проведенных исследований показали, что облепиха, произрастающая в Азербайджане, ее новые гибридные сорта могут быть ценным источником для получения облепихового масла, флавоноидного препарата «В-1» с выраженным кардиотоническим действием. А листья лоха узколистного и листья облепихи крушиновидной, произрастающие в Азербайджане могут служить сырьевым источником гидролизуемых танинов и лекарственных препаратов на их основе.
Изученные морфолого-анатомические признаки могут быть использованы для установки подлинности лекарственного растительного сырья и внедрены в нормативную документацию на плоды и листья лоха узколистного, плоды и листья облепихи крушиновидной, произрастающей в Азербайджане.
Апробация работы. Результаты проведенных работ доложены на: I Всемирном Симпозиуме энергии, экономики и экологии (Баку, 1991); XI съезде физиологов и фармакологов в Иране (Табриз, 1993); II съезде биохимиков Азербайджана (Баку, 1993); конференции сотрудников фармацевтического факультета АМУ им. Н.Нариманова, посвященной 75-летию профессора Р.К.Алиева (Баку, 1994); I Всемирном симпозиуме фармацевтов (Стамбул, 1994); конференции, посвященной 100-летию со дня рождения академика М.Топчибашева (Баку, 1995); на I конгрессе фармацевтов Азербайджана с международным участием (Баку, 1998); на межкафедральной конференции.
Связь задач исследования с проблемным планом с планом научных работ учреждения. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом НИР ГОУ ВПО Первый Московский Государственный Медицинский Университет имени И.М. Сеченова по теме «Фармакогностическое изучение лекарственного растительного сырья, лекарственных сборов, лекарственных форм из сырья и разработка методов их стандартизации с учетом влияния антропогенных факторов» (код темы 0407093).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 11 работ; получено одно авторское удостоверение на рационализаторское предложение.
На защиту выносятся:
- результаты морфолого-анатомического изучения плодов, листьев лоха узколистного и облепихи крушиновидной, произрастающих в Азербайджане;
- результаты изучения жирного масла облепихи крушиновидной и лоха узколистного;
- результаты изучения полифенольного комплекса листьев облепихи крушиновидной и лоха узколистного;
- результаты изучения суммы флаваноидов из плодов облепихи крушиновидной и получению на их основе экстракционного флавоноидного препарата «В-1», обладающего кардиотоническим действием и флавоноидов из цветков лоха узколистного.
- результаты поиска новых сырьевых источников облепихи крушиновидной, богатой жирным маслом и флавоноидами.
Объем и структура диссертации. Работа изложена на 106 страницах машинописного текста, содержит 13 таблиц и 29 рисунков. Диссертация состоит из введение, обзора литературы, 4 экспериментальных глав, общих выводов, списка литературы (158 наименований, из них 18 на иностранном языке).
Полученные результаты обработаны статистически, обобщены в таблицах, выражены в соответствующих формулах, которые приведены в работе.
Объекты и методы исследования
Объектом исследования служили листья и созревшие плоды дикорастущей облепихи, цветки, листья и плоды дикорастущего лоха узколистного произрастающих в различных районах Азербайджана и новые гибридные сорта облепихи “Зафарани” и “Шафа”, созданные сотрудниками института генетики и селекции АН Азербайджанской Республики академиком И.Д.Мустафаевым и зав. лаборатории генефонда кандидатом биологических наук Г.Имамалиевым, заготовленные в 1991 - 2005 годах.
Изучение внешних признаков и микроскопии плодов и листьев облепихи крушиновидной и лоха узколистного осуществлялось в соответствии с требованиями ГФ ХI издания, т.1, стр. 277. Препараты изучали под микроскопом МБИ-3 (увеличения 7 х 1,5 х 10; 7 х 1,5 20; 15 х 1,5 х 10; 15 х 1,5 х 20). Результаты документировали микрофотографиями с помощью фотоаппарата «Canon» и микрофотонасадки МФН-12.
Содержание флаваноидного состава собранных материалов проверяли цианидиновой реакцией и методом бумажной хроматографии. При проведении бумажной хроматографии (БХ) использовали бумагу марки «Filtrak F» № 17.Хроматографирование проводили восходящим, нисходящим, одномерным и двумерным способами при комнатной температуре (17 - 22°С), используя системы растворителей: 15% раствор уксусной кислоты, н-бутанол-уксусная кислота-вода (5:1:4).
Для выявления пятен флаваноидов на хроматограмме в качестве проявителя использовали 10% водно-метанальный раствор щелочи, насыщенный (2%) метанальный раствор азотокислого цирконила и пары аммиака.
Окраску пятен флаваноидов наблюдали в видимом УФ-свете до и после проявления.
Для выделения флаваноидов пользовались избирательной экстракцией, колоночной хроматографии на полиамидном сорбенте.
Выделенные флавоноиды после перекристаллизации из соответствующих растворителей и высущивания подвергли анализу. Температуру плавления выделенных флаваноидных соединений определяли на блоке Кофлера.
При анализе флаваноидных гликозидов применяли методы кислотного ферментативного гидролиза. При проведении гидролиза использовали 1, 3, 5, 10%- ные растворы серной кислоты, фермент эмульсин, рамнодиастазу и препарат гриба – Aspergyllus oryzae.
После гидролиза флаваноидных гликозидов пятна сахаров на бумажной хроматограмме обнаруживали анилинфталатом реагентом.
Идентификацию выделенных флавоноидных соединений из изучаемых объектов осуществляли в сравнении также с известными стандартными образцами методом бумажной хроматографии.
Количественное содержание облепихового масла в собранных из различных районов Азербайджана плодах определяли весовым методом. после экстракции сырья хлороформом
Определение показателей жирного масла проводили в соответствии с общей фармакопейной статьей 472 «Масла жирные» ГФ Х.
Анализ метиловых эфиров жирных кислот проводили методом хромато-масс-спектрометрии на приборе Finnigan-Polaris.
Условия проведения анализа: колонка кварцевая капиллярная - 30 м х 0,3 мм; неподвижная жидкая фаза – полидиметилсилоксан SE-30; время анализа – 20 мин; объем вводимой пробы – 0,1 мкл; температура инжектора - 250°С; детектор – масс-спектрометрический, температура - 250°С; газ-носитель – гелий, расход 10 мл/мин; температура колонки программировалась от 225 до 235°С со скоростью 5 град/мин.
Изучение полифенольного комплекса листьев облепихи и лоха узколистного проводили методом жидкостной хроматографии фирмы Woters c диодной линейкой, использовалась стальная колонка 150х4,0 мм, сорбент Диасорб 130 С16-Т и Диасфер -110-С-8, вводимая проба 10 мкл. Скорость элюирования 1 мл/мин. Продолжительность хроматографирования 25 мин. Длина волны детектирования 270 нм.
Определение содержания флавоноидов осуществляли по фармакопейным и общепринятым методикам.
Статистическую обработку результатов проводили по общим методам вариационной статистики соответствующей статьи ГФ XI.
ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
Изучение диагностических признаков плодов и листьев облепихи крушиновидной и лоха узколистного, произрастающих в Азербайджане.
На первом этапе наших исследований было проведено изучение морфолого- анатомичеких признаков плодов и листьев лоха узколистного и облепихи крушиновидной. Результаты исследований приведены в таблицах 1-4.
В результате проведённого анатомо-морфологического анализа облепихи крушиновидной и лоха узколистного установлено, что изучаемые объекты схожи по диагностическим признакам, однако имеются отличия. Отличия у плодов: форма, цвет, вкус, запах, размеры плодов; цвет мякоти; форма и цвет косточек; размеры косточек; частота встречаемости микроскопических диагностических признаков; отсутствием у плодов лоха узколистного звездчатых волосков. В паренхимнных клетках лоха узколистного присутствуют палочковидные кристаллы. Все клетки паренхимы плодов облепихи крушиновидной содержат капельки масла, имеются секреторные ходы, обильно содержащие жирное масло. Отличие у листьев: форма, размеры, цвет и характер края листовой пластинки; размерами клеток эпидермиса, частотой встречаемости диагностических признаков (волосков), характером эпидермиса черешка.
Таблица 1
Внешние признаки плодов лоха узколистного
и облепихи крушиновидной
| Диагностический признак плода | Лох узколистный Eleagnus angustifolia L. | Облепиха крушиновидная Hippophaё rhamnoides L. |
| Форма | округлая, продолговато-яйцевидная, овально-продолговатая | от шаровидной до удлиненно эллипсовидной формы |
| Цвет, вкус и запах | желтовато-коричневый с красноватым оттенком. Вкус – сладковатый. Запах слабый, своебразный | от желтого до темно-оранжевого цвета, реже красноватого. Вкус – сладковато-кислый. Запах слабый, своебразный |
| Размер | длина 16-30 мм, ширина 12-20 мм | длина 4-15 мм, ширина 3-8 мм |
| Цвет мякоти | желтовато-белый | Желтый, желто-оранжевый |
| Форма и цвет косточек | продолговато-яйцевидная или цилиндрическая, с заостренными или тупыми концами, желто-бурая с продольными бороздками | яйцевидно-продолговатая, гладкая, с обеих сторон лоснящаяся, светло- или темно-каштановая, иногда почти черная с продольной бороздкой |
| Размер и количество косточек в плоде | длина 10-25 мм ширина 4-5 мм | Длина 4-7 мм Ширина 2,5 мм |
| Косточка одна | ||
Таблица 2
Внешние признаки листьев лоха узколистного
и облепихи крушиновидной
| Диагностический признак листа | Лох узколистный Eleagnus angustifolia L. | Облепиха крушиновидная Hippophaё rhamnoides L. |
| Форма листовой пластинки, наличие черешка | продолговато-ланцетные, заостренно-эллиптические, у основания ширококлиновидные, черешковые | линейные или линейно-ланцетные, короткочерешковые |
| Размер | длина 2-7 см, ширина 0,5-1,7 см | длина 2-8 см, ширина 0,3-0,8 см. |
| Характер края | цельнокрайные | цельнокрайные, со слабо завернутыми внутрь краями |
| Цвет | сверху серовато-зеленый, снизу серебристо-белый от покрывающих их серебристых чешуек | сверху серовато-темно-зеленый, снизу серебристо-белый от покрывающих их белых и буроватых чешуек и звездчатых волосков |
| Запах | слабый, своеобразный | |
| Вкус | вкус слабо-горький | |
Таблица 3
Диагностические признаки при микроскопическом изучении листьев лоха узколистного и облепихи крушиновидной
| Диагностический признак листа | Лох узколистный Eleagnus angustifolia L. | Облепиха крушиновидная Hippophaё rhamnoides L. | ||
| Клетки верхнего эпидермиса | Прямые стенки | |||
| Длина 12-37 мкм, ширина 8-23 мкм | Длина 21-50 мкм, ширина 18-37 мкм | |||
| Клетки нижнего эпидермиса | Более тонкостенные по сравнению с клетками верхнего эпидермиса, стенки прямые или слабоизвилистые | |||
| Длина 8-23 мкм, ширина 6-12 мкм | Длина 12-33 мкм, ширина 6-18 мкм | |||
| Устьица | Только на нижнем эпидермисе, аномоцитный тип (4-8 клеток), встречаются с частотой 345-603 на 1 мм2. | |||
| Длина 23-29 мкм, ширина 12-23 мкм | Длина 25-29 мкм, ширина 18-21 мкм | |||
| Кутикула | Ровная, в области жилки с нижней стороны листа - морщинистая | |||
| Волоски | Щитковидные: 1 ряд коротких радиально расположенных клеток ножки и 1 ряд длинных, узких радиально расположенных клеток щитка, которые могут плотно прилегать друг к другу. Звёздчатые: 5 и более (15-25) длинных узких клеток, сросшихся основаниями | |||
| С нижней стороны - 86-190 на 1 мм2, с верхней стороны – 0-69 на 1 мм2 | С нижней стороны – 103-207 на 1 мм2, с верхней стороны – 0-35 на 1 мм2 | |||
| Мезофилл | Палисадная паренхима: 2-3 ряда с нижней стороны и 1 ряд с верхней стороны. Губчатая паренхима: 3-7 рядов округлых клеток, образующие межклетники – аэренхиму. Уголковая колленхима: наблюдается в области жилки и более выражена с нижней стороны листа (до 6-12 рядов) | |||
| Проводящие пучки | Закрытые коллатеральные, тонкостенные, на поперечном разрезе полулунной формы. | |||
| Черешок | Клетки прямостенные, длиной 8-33 мкм, шириной 4-18 мкм. Устьиц нет. Волоски как на эпидермисе, 86-259 на 1 мм2. Крупный проводящий пучок в виде незамкнутого кольца. Флоэма хорошо выражена и расположена над ксилемой мощным слоем и частично под ней. Во флоэме – щелевидные полости, разделяющие её на продольные сегменты. Под эпидермисом – уголковая колленхима, хорошо выражена в боковых частях черешка. | |||
| Эпидермис состоит из группы клеток (2 шт.) с утолщёнными внешними стенками и тонкими стенками внутри группы. | Эпидермис похож на эпидермис верхней стороны листа, но с большим количеством волосков. | |||
Таблица 4
Диагностические признаки при микроскопическом изучении плодов лоха узколистного и облепихи крушиновидной
| Диагностический признак плода | Лох узколистный Eleagnus angustifolia L. | Облепиха крушиновидная Hippophaё rhamnoides L. | |
| Клетки эпидермиса | Многоугольные, стенки прямые, внутренние и боковые – тонкие, наружные – утолщённые, кутинизированные | ||
| Длина 8-25 мкм, ширина 4-17 мкм | Длина 23-58 мкм, ширина 3-46 мкм Около волосков клетки мелкие. | ||
| Устьица | Редко встречающиеся, 0-13 на 1 мм2, аномоцитного типа, длиной 25-38 мкм, шириной 17-29 мкм | отсутствуют | |
| Волоски | Щитковидные: 1 ряд коротких радиально расположенных клеток ножки и 1 ряд длинных, узких радиально расположенных клеток щитка, которые могут плотно прилегать друг к другу. При опадании волосков – розетка клеток (6-10) с диаметром 33-92 мкм. | ||
| Встречаются с частотой 0-21 на 1 мм2, более часто – в области плодоножки. Диаметр 200-367 мкм. | Щитковидные: 0-35 на 1 мм2, чаще – в области плодоножки. Диаметр 250-566 мкм. Звёздчатые: на столбике при плоде, состоят из 5 и более (15-25) длинных узких клеток, сросшихся основаниями | ||
| Паренхима | Паренхимные клетки (длина 57-680 мкм, ширина 34-159 мкм) имеют выросты различной формы, а их содержимое темно-коричневую окраску. Внутри клеток мезокарпия – палочковидные кристаллы, длиной 4-21 мкм, шириной 0,4-0,8 мкм. Проводящие пучки со спиральными трахеидами. | Все клетки паренхимы содержат капельки масла. Во внутреннем слое мякоти – проводящие пучки со спиральными трахеидами и секреторными ходами, обильно содержащими масло. | |
| Семя | Кожура тонкая, клетки её спавшиеся, кроме клеток эпидермиса. Стенки клеток эпидермиса извилистые, наружные и боковые утолщены. Под кожурой – 1-3 ряда клеток, являющиеся остатком эндосперма. Ядро семени состоит из тонкостенных, крупных, рыхло расположенных клеток, заполненных маслом и мелкими алейроновыми зёрнами. | Эпидермис кожуры состоит из характерных палисадных клеток с неравномерно утолщенной оболочкой. За ним расположен слой мелкоклеточной спавшейся паренхимы. Под ней несколько рядов крупных клеток, а затем спавшиеся клетки (остаток перисперма). Далее слой алейроновых клеток и мелкоклеточный зародыш с хорошо различимой палисадной тканью в семядолях, пронизанной рядом проводящих пучков. Клетки зародыша богаты маслом и содержат алейроновые зерна. | |
Изучение жирного масла из сырья облепихи крушиновидной
и лоха узколистного
Жирное масло из облепихи крушиновидной и лоха узколистного получали общепринятыми методами. Нами было изучено жирное масло плодов облепихи крушиновидной. Методом хромато-масс-спектрометрии установлено наличие следующих жирных кислот: тридекановая – 0,9%, гексадекановая – 29,7%, 9-гексадекановая – 31,2%, октадекановая 2,6%, 9-октадеценовая 30,2%, 9,12-октадекадиеновая – 0,7%, 5,11,14, 17- эйкозатетраеновая – 0,5%, 13-докозеновая – 1,3%. Преобладающими компонентами жирного масла изученного образца облепихового масла являются гексадекановая, 9-гексадекановая и 9-октадеценовая.
Кроме того, нами получено и изучено жирное масло косточек лоха узколистного. Методом хромато-масс-спектрометрии установлено наличие следующих жирных кислот: гексадекановая – 6,03%, 7,10-октадекановая, 8,11-октадекадиеновая – суммарно 83%, октадекановая – 8,4%, 10,13-эйкозадиеновая, эйкозановая – 1,25, трикозановая –следы. Преобладающими компонентами жирного масла косточек лоха узколистного является жирная кислота С 18 с двумя ненасыщенными двойными связями.
Изучение флавоноидов плодов облепихи крушиноввидной и цветков лоха узколистного.
Выделение флавоноидов из сырья облепихи крушиновидной осуществляли методом колоночной хроматографии. Полученные фракции анализировали методом бумажной и тонкослойной хроматографии.
Идентификацию выделенных флавоноидов осуществляли по следующим критериям: растворимость в различных растворителях (эфир, хлороформ, спирт различной концентрации, вода очищенная), определение температуры плавления, отсутствию депрессии смешанной пробы со стандартным образцом, хроматографическая подвижность (значение Rf, окраска зон адсорбции). Углеводную часть гликозидов устанавливали после кислотного и ферментативного гидролиза.
Физико-химические свойства флавоноидов из плодов облепихи и цветков лоха представлены в таблице 5.
Выделение и идентификацию флавоноидов цветков лоха узколистного проводили аналогично исследованиям флавоноидного состава плодов облепихи. Выделены и идентифицировать 2 флавоноида: кемпферол и элеагнозид.
Таблица 5
Физико–химические свойства выделенных флавоноидов
из изучаемых видов сырья.
| Наименование вещества | формула | Т. пл., С | [] 20 | Источник лекарственного сырья |
| Изорамнетин (3,5,7,4'-тетраокси-3'-метоксифлавон) –F-1 | С16H12O7 | 305-310 | - | Плоды облепихи и ее производственные отходы |
| Кверцетин (3,5,7, 3, 4'- пентаоксифлавон) – F-2 | С15H10O7 | 310-313 | - | Тот же источник |
| Нарциссин (изорамнетин –3-0 ( - - глюкопира-нозид или 3-рутинозид изорамнетина) – F-3 | С28H32O16 | 174-177 | -10 (C. 0.5 метанол) | Тот же источник |
| Рутин (3-рамногликозид - 3,5,7, 3', 4'- пентаокси-флавон или 3 рутинозид кверцетина) F-4 | С28H32O16 | 174-177 | -30 (0.58 этанол) | Тот же источник |
| 7 – рамнозидо-3 –глюко-зид изорамнетина – F-5 | С27H30O16 | 189-191 | -104,2 (С. 0,1 метанол) | Плоды облепихи |
| Кемпферол (3, 5, 7. 4 – тетраоксифлавон) – FL -I | С15H10O6 | 279-281 | - | Цветки лоха узколистого |
| Элеагнозид (3-0- - - глюкопиранозид – 7 -[6- II – кумарил галактозид] кемпферола – FL - II | 256-258 | -54 (С. 0,5 метанол) | Цветки лоха узколистого |
Изучение танинов листьев облепихи крушиновидной и лоха узколистного.
Нами был получен сухой экстракт из листьев лоха узколистного и листьев облепихи крушиновидной, произрастающих в Азербайджане. Экстракты нарабатывались по следующей технологической схеме: экстракцию измельченных листьев проводили водным ацетоном, затем обрабатывали смесью нефракса и бутилового спирта; очищенную водную фазу концентрировали и высушивали.
Полученные экстракты представляли совой аморфные порошки зеленовато-коричневого цвета со слабым специфическим запахом, вяжущего вкуса; комкуются при хранении; гигроскопичны.
Растворы экстрактов в 50% этоноле дают положительную реакцию с 1% раствором желатина (появляется хлопьевидный осадок – танинны), с нитритом натрия в кислой среде в течение 60 минут развивается окрашивание раствора от розового до сине-зеленого цвета (эллаготаниты), с раствором железа окисного хлорида в спирте появляется сине-фиолетовое окрашивание (галлоэллаготанины).
Экстракты облепихи крушиновидной и лоха узколистного представляют собой сухие вещества на основе полифенольных соединений. Биологически активными компонентами являются гидролизуемые таннины, в том числе, стриктинин I, изостриктинин II, казуариктин III, казуаринин IV, гипофенин В V и другие. Общими структурными элементами для этих соединений являются глюкоза, галлоильный и гексагидроксидифеноильныи остатки. Из веществ нетанниновой природы в состав препарата входят метиловый эфир инозита-квебрахит (около 15 %), флавоноиды (не более 20 %), неорганические соли макро- и микроэлементов.
Кроме того, нами изучен полифенольный комплекс экстрактов листьев облепихи крушиновидной и лоха узколистного методом ВЭЖХ.
ВЭЖХ-спектры РСО гипорамина (смесь гидролизуемых галло- и эллаготанинов) и экстрактов листьев облепихи крушиновидной и лоха узколистного приведены на рис. 1-3
Результаты анализа показали, что в экстракте листьев лоха узколистного и листьев облепихи крушиновидной присутствуют гидролизуемые танины: стриктинин I, изостриктинин II, казуариктин III, казуаринин IV, гипофенин В V и другие. Общими структурными элементами для этих соединений являются глюкоза, галлоильный и гексагидроксидифеноильныи остатки.
Рис. 1 Хроматограмма ВЭЖХ образца гипорамина (РСО)
Рис. 2 Хроматограмма ВЭЖХ образца экстракта облепихи
Рис. 3 Хроматограмма ВЭЖХ образца экстракта лоха узколистного.
Оценка сырья плодов облепихи дикорастущей.
Нами проведены исследования по выявлению дикорастущей облепихи в различных районов Азербайджана, а также изучению новых гибридных сортов “Зафарани” и “Шафа” на содержание жирного масла и флавоноидов. Данные приведены в таблице 6
Таблица 6.
Содержание жирного масла и флавоноидов
из исследуемых объектов.
| Районы и дата заготовки плодов облепихи | Выход масла, % | Выход флавоноидов, % |
| Кусарчай, 24 ноября | 5,4 | 2,8 |
| Самур-Девечинский канал, 28 ноября | 5,6 | 3,0 |
| Аксунский район, 30 ноября | 5,2 | 2,6 |
| Шеки, 2 декабря | 6,7 | 2,9 |
| Лаиджская местность, 5 декабря | 6,8 | 3,0 |
| Исмаиллинский район, 15 декабря | 7,1 | 2,9 |
| Баку, участок Института генетики и селекции “Зафарани”, 15 августа | 5,5 | 2,7 |
| Баку, участок Института генетики и селекции “Шафа”, 30 октября | 6 | 2,2 |
| Производственные отходы плодов облепихи | 15 | 10 |
Таким образом, в результате проведенных экспериментальных исследований установлено, что наибольшее содержание облепихового масла (6,8 – 7,1 %) и флавоноидов (2,5 - 3,2 %) содержится в высокогорных Шекинском и Исмаиллинском районах Азербайджана. Содержание облепихового масла в гибридных сортах “Зафарани” и «Шафа» составило 5 – 6%, а количество флавоноидов от 2,5 до 3%.
Общие выводы:
- Проведено сравнительное изучение внешних признаков и микроскопии плодов облепихи и лоха узколистного. Общими диагностическими признаками плодов изучаемых растений являются наличие щитковидных волосков. Отличительными диагностическими признаками в плодах лоха узколистного являются наличие палочковидных кристаллов в мезокарпии, а в плодах облепихи крушиновидной – наличие звездчатых волосков и секреторных ходов, обильно содержащих жирное масло.
- Проведено сравнительное изучение внешних признаков и микроскопии листьев лоха узколистного и облепихи крушиновидной. Общими диагностическими признаками листьев изучаемых растений являются устьичный комплекс аномоцитного; щитковидные и звездчатые волоски; проводящие пучки - закрытые коллатеральные, полулунной формы. Отличие состоит в размерах эпидермальных клеток, частоте расположения устьичных комплексов и волосков на верхнем и нижнем эпидермисе листа, а также в структуре эпидермиса черешка
- Изучено жирное масло из плодов облепихи крушиновидной. Методом хромато-масс-спектрометрии в жирном масле облепихи крушиновидной установлено наличие следующих жирных кислот: тридекановая – 0,9%, гексадекановая – 29,7%, 9-гексадекановая – 31,2%, октадекановая 2,6%, 9-октадеценовая 30,2%, 9,12-октадекадиеновая – 0,7%, 5,11,14, 17- эйкозатетраеновая – 0,5%, 13-докозеновая – 1,3%. Преобладающими компонентами жирного масла изученного образца облепихового масла являются гексадекановая, 9-гексадекановая и 9-октадеценовая.
- Изучено жирное масло косточек лоха узколистного. Методом хромато-масс-спектрометрии в жирном масле установлено наличие следующих жирных кислот: Методом хромато-масс-спектрометрии установлено наличие следующих жирных кислот: гексадекановая – 6,03%, 7,10-октадекановая, 8,11-октадекадиеновая – суммарно 83%, октадекановая – 8,4%, 10,13-эйкозадиеновая, эйкозановая – 1,25, трикозановая – следы. Преобладающими компонентами жирного масла косточек лоха узколистного является жирная кислота С 18 с двумя ненасыщенными двойными связями.
- Из плодов облепихи крушиновидной выделены и идентифицированы с использованием стандартных образцов следующие флавоноиды: изорамнетин, кверцетин, нарциссин, рутин, 7-рамнозидо-3-глюкозид изорамнетина.
- Из цветков облепихи крушиновидной выделены и идентифицированы следующие флавоноиды: кемпферол, элеагнозид (3-0- - - глюкопиранозид – 7 -[6- II – кумарил галактозид] кемпферола.
- Проведено изучение гидролизуемых танинов в листьях облепихи крушиновидной и лоха узколистного методом ВЭЖХ. Идентифицированы: стриктинин I, изостриктинин II, казуариктин III, казуаринин IV, гипофенин В V. Гидролизуемые танины в листьях лоха узколистного идентифицированы впервые.
- Проведена оценка плодов дикорастущей облепихи из разных районов Азербайджана. Установлено, что наибольшее содержание облепихового масла (6,8 – 7,1 %) и флавоноидов (2,5 - 3,2 %) содержится в высокогорных Шекинском и Исмаиллинском районах Азербайджана. Содержание облепихового масла в гибридных сортах “Зафарани” и «Шафа» составило 5 – 6%, а количество флавоноидов от 2,5 до 3%.
По теме диссертации опубликованы следующие работы:
1. Насудари А.А., Багиров И.М. Биохимическое изучение гибридных форм облепихи // II Cъезд биохимиков Азербайджана. Тезисы доклада. Баку.12-14 июля 1993г. - С.10.
2. Насудари А.А., Багиров И.М., Тахмазов Ф.А., Акпербеков Б.А. Химическое исследование флавоноидов в производственных отходах облепихи // Научная конференция АМУ им. Н. Нариманова, посвященная 75-летию профессора Р.К. Алиева. Тезисы доклада. Баку. 1994г. – С.29.
3. Насудари А.А., Багиров И.М. Исследование облепихи, произрастающей и культивируемой в Азербайджане для получения лекарственных препаратов // Научная конференция, посвященная 100-летию со дня рождения акад. М. Топчибашева. Тезисы доклада. Баку. 1995г. – С.416.
4. Насудари А.А., Багиров И.М. Использование облепихи, произрастающей в Азербайджане для получения облепихового масла // I Конгресс фармацевтов Азербайджана. Тезисы доклада. Баку. 1998г. – С.23.
5. Nasudari A.A., Bagirov I.M. Efficient use of the Sea-buckthorn Groving in Azerbaijan and its industrial wastes for Sea-buckthorn oil production// Proceeding of the first Internaional symposium on energy, ecology and economy. Bacu. 1991.- P. 380-385/
6. Nasudari A.A., Bagirov I.M., Bandalieva A.A. Obtaining of rutin, hippophae oil, scutin and flavoscutin from Azerbaijan flora medical plants// First Internacional meting on pharmacy pharmacentical sciens istambul. 1994. - P.67.
7.Багиров И.М., Насудари А.А. Конечные результаты изучения плодов облепихи распространенной и выращиваемой в Азербайджане// Научная конференция, посвященная 60-летию высшего фармацевтического образования в Азербайджане. Материалы юбилейной конференции.. Баку. 1999г. С.135-136.
8. Багиров И.М. Медицинское значение изучения производственных отходов облепихи. // Научно-практический журнал “Здоровье”. Баку. 1999.- №7.- С. 38-42.
9. Самылина И.А., Иващенко Н.В., Багиров И.М. Анализ жирного масла лоха узколистного // Аптечный форум “От производителя до аптеки и потребителя”. Тезисы докладов.Москва, 2007г.-С. 101-102.
10. Самылина И.А., Иващенко Н.В., Багиров И.М. Изучение анатомо-диагностических признаков листьев лоха узколистного. // Аптечный форум “От производителя до аптеки и потребителя”. Тезисы докладов. Москва, 2007г.-С. 102-103.
11. Багиров И.М., Иващенко Н.В., Потанина О.Г. Разработка характеристик подлинности плодов лоха узколистного.// Фармация. 2007г. -№ 4- С. 15-17.
