Разработка и биофармацевтическая оценка лекарственных форм теноксикама и напроксена противовоспалительного действия для наружного применения

На правах рукописи

Эль-али фади ахмад

РАЗРАБОТКА И БИОФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА

ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ ТЕНОКСИКАМА И НАПРОКСЕНА ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ДЕЙСТВИЯ ДЛЯ НАРУЖНОГО ПРИМЕНЕНИЯ

14.04.01 – технология получения лекарств

автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата фармацевтических наук

Пермь – 2011

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Казанский государственный медицинский университет»

Научный руководитель:

доктор фармацевтических наук,

доцент Насыбуллина Наиля Марсовна

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук,

профессор Вдовина Галина Петровна,

Управляющая компания «Медисорб Групп», г. Пермь

доктор фармацевтических наук,

доцент Алексеева Ирина Владимировна,

ГБОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации»

Ведущая организация:

ГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная химико-фармацевтическая академия»

Защита диссертации состоится 18 октября 2011 г. в 13.00 часов на заседании диссертационного совета Д 208.068.01 при ГБОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации» по адресу 614990, г. Пермь, ул. Полевая, 2. Тел./факс (342) 233-55-01.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке при ГБОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия» (г. Пермь, ул. Крупской, 46).

Дата размещения объявления о защите диссертации на сайте ПГФА http://www.pfa.ru « » сентября 2011 г.

Автореферат разослан « » сентября 2011 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета,

кандидат фармацевтических наук,

доцент И.А. Липатникова

Общая характеристика работы

Современные стандарты рассматривают боль, как одну из значимых проблем, имеющую не только медицинское значение, но и крайне неблагоприятные социально-экономические последствия. Лечение боли остается одной из наиболее актуальных и трудных задач медицины на протяжении всей истории человечества. Острая, хроническая боль - ведущий клинический симптом ревматических болезней (РБ), широко распространенных в популяции и встречающихся более, чем у 30% населения земного шара.

Большой прогресс в медицинской практике был достигнут, когда было установлено, что нестероидные противовоспалительные препараты (НПВП) связаны с подавлением активности изофермента циклооксигеназы (ЦОГ-2), регулирующей синтез простагландинов и принимающих участие в развитии воспаления и боли. В последние годы среди НПВП особой популярностью у клиницистов пользуются лекарственные вещества (ЛВ) - производное пропионовой кислоты - (напроксен) и производное 1,2-бензотиазина - (теноксикам), обладающие большей продолжительностью действия и высокой эффективностью.

На фармацевтическом рынке России представлены лишь лекарственные формы (ЛФ) с напроксеном и теноксикамом для инъекций и внутреннего применения, оказывающих системное воздействие на организм больного. Несмотря на то, что НПВП эффективны, их нельзя назвать «идеальными» препаратами, поскольку они не лишены побочных действий (поражение желудочно-кишечного тракта, почек, сердечно-сосудистой системы и др.).

Создание ЛФ для лечения РБ и заболеваний опорно-двигательного аппарата, обладающих минимальными побочными эффектами - не только проблема фармакологии, но и фармацевтической технологии. Так, нежелательное действие НПВП на организм резко ограничивается, если эти ЛФ применяются локально в виде гелей. Трансдермальное проникновение ЛФ с НПВП позволяет достигнуть терапевтически эффективных концентраций в «тканях-мишенях» и, в отличие, от системного лечения, избежать высоких концентраций ЛВ в плазме крови, а также предотвратить нежелательные реакции НПВП.

Учитывая высокую эффективность местного лечения, вышеизложенное указывает на целесообразность создания ЛФ наружного применения с использованием НПВП на примере напроксена и теноксикама.

Цель работы. Разработать и исследовать ЛФ напроксена и теноксикама для наружного применения.

Для достижения поставленной цели планировалось решить следующие задачи:

- экспериментально и теоретически обосновать состав и разработать технологию гелей напроксена и теноксикама, предназначенных для лечения РБ;

- исследовать физико-химические, реологические, технологические и биофармацевтические свойства разработанных ЛФ – гелей напроксена и теноксикама для наружного применения;

- разработать методики количественного и качественного определения напроксена и теноксикама в субстанциях и ЛФ для наружного применения - гелях и исследовать их стабильность;

- провести биологические исследования по определению безвредности и специфической активности разработанных ЛФ напроксена и теноксикама для наружного применения;

- разработать и составить нормативную документацию (НД) на гель напроксена и теноксикама.

Научная новизна работы. Физико-химическими и технологическими методами подобраны оптимальные растворители, способствующие увеличению растворимости напроксена и теноксикама и обеспечивающие условия для перехода данных ЛВ из раствора в основу-носитель. Методом ТГА определены температурные факторы, оказывающие влияние на стабильность напроксена и теноксикама в субстанциях и их ЛФ.

Биофармацевтическими методами показано, что оптимальным носителем ЛВ, обеспечивающим наибольшую степень высвобождения напроксена и теноксикама из гелей, является гидроксиэтилцеллюлоза.

Реологическими методами исследования выявлено, что эффективная вязкость гелей напроксена и теноксикама зависит от концентрации, природы ЛВ и структурообразователя, а также технологии изготовления гелей. При повышении температуры до 50 оС значения эффективной вязкости гелей напроксена и теноксикама остаются неизменными. С увеличением полярности растворителя набухающая способность структурообразователя возрастает.

Методами ВЭЖХ, УФ-спектрофотометрии и ТСХ разработаны методики идентификации и количественного определения напроксена и теноксикама в субстанциях и его ЛФ для наружного применения.

На основании комплекса проведенных исследований теоретически и экспериментально обоснованы составы и технологии изготовления 5% геля напроксена и 1% геля теноксикама, обладающих противовоспалительной активностью, фармацевтической доступностью, а также стабильностью.

Практическая значимость и внедрение результатов работы:

- результаты проведенных исследований свидетельствуют о наличии противовоспалительных свойств у 5% геля напроксена и 1 % геля теноксикама и являются обоснованием для дальнейшей оценки их эффективности в клинике;

- экспериментально и теоретически разработаны оптимальные составы 5% геля напроксена и 1% геля теноксикама, обладающих противовоспалительной активностью;

- разработан проект ФСП на 5% гель напроксена и проведена апробация лабораторного регламента на ЗАО «Казанская фармацевтическая фабрика», акт внедрения от 22.03.2010 г.);

- разработан проект ФСП на 1% гель теноксикама и проведена апробация лабораторного регламента на ЗАО «Казанская фармацевтическая фабрика», акт внедрения от 25.03.2010 г.);

- результаты исследований используются в учебном процессе ГОУ ВПО «Казанского государственного медицинского университета» и ФГОУ ВПО «Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана», а также ГОУ ВПО «Казанского государственного технологического университета».

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в рамках плана научных исследований Казанского государственного медицинского университета Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (№ гос. регистрации 01200706870) и в рамках гос. регистрации плановой тематики НИР ЦНИЛ КГМУ (№ гос. регистрации 01200852209) по теме: «Изыскание противовоспалительных и ранозаживляющих лекарственных средств для местного и общего применения», утвержденной приказом Минздравсоцразвития России от 20.05.2009 № 257.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на XIII-й, XIV-й и XV-й Всероссийской научно-практической конференции «Молодые ученые в медицине» (Казань, 2008-2010 гг.); на XVI-м Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2009), на 1-й и 2-й Республиканской научной конференции «Актуальные вопросы повышения качества последипломной подготовки фармацевтических кадров» (Казань, 2009-2010 гг.); на 2-й Региональной научно-практической конференции «Синтез и перспективы использования новых БАС» (Казань, 2009); на научной конференции биохимиков «История и достижение Казанской биохимической школы», (Казань, 2009); на научной конференции Пятигорской государственной фармацевтической академии (Пятигорск, 2010).

Конкретное участие автора в получении научных результатов. Все приведенные в диссертации данные получены при личном участии автора, как на этапе постановки задач и разработки методических подходов к их выполнению, так и при наборе первичных фактических данных, статистической обработке и анализе полученных результатов.

Публикации. Основное содержание диссертации представлено в 25 публикациях (4 публикации в изданиях, рекомендуемых ВАК РФ).

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 154 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы (глава 1), описания материалов и методов исследования (глава 2), изложения собственных результатов (3-5 главы), выводов и приложения. Работа иллюстрирована 38 таблицами и 20 рисунками. Библиографический указатель включает 134 источников, в том числе 94 отечественных и 40 иностранных авторов. Во введении сформулирована актуальность, научная новизна и практическая значимость работы, указаны объем и структура диссертации.

Обзор литературы посвящен изучению ассортимента ЛФ для наружного применения с НПВП. Во второй главе дана характеристика материалов и методов исследования, а также приборов, используемых в работе. Изложены экспериментальные условия разработки методик количественного и качественного определения напроксена и теноксикама в ЛФ для наружного применения. В третьей главе изложены результаты физико-химических, технологических свойств напроксена и структурообразователя, результаты экспериментально-теоретического подбора состава и разработки технологии изготовления 5% геля напроксена, а также результаты изучения стабильности и фармацевтической доступности напроксена в геле. В четвертой главе отражены результаты экспериментального изучения по разработке и исследованию 1% геля теноксикама. Приведены результаты реологических, биофармацевтических исследований, а также результаты по изучению стабильности 1% геля теноксикама. В пятой главе рассмотрены результаты биологических и микробиологических исследований ЛФ для наружного применения – 5% геля напроксена и 1% геля теноксикама.

В приложении представлены документы, подтверждающие внедрение результатов исследования в практику.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Объекты исследования. В экспериментальных исследованиях использовали субстанции и вспомогательные вещества (ВВ), полученные от заводов-изготовителей с соответствующими протоколами анализа по требованиям НД: напроксен; теноксикам; ацетонитрил; гидроксиэтилцеллюлоза (ГЭЦ); натрий-карбоксиметилцеллюлоза (Na-KMЦ), глицерин; димексид; желатин; карбопол 940; кислота ортофосфорная; ксантановая камедь (КК); метанол; полиэтиленглюколь 400 (ПЭГ-400); полисорбат-20; пропиленгликоль (ПГ); триэтаноламин, пропилпарабен и метилпарабен; спирт этиловый (этанол); среда Сабуро; фосфатный буфер, вода очищенная;

Методы исследования. Для достижения поставленной цели и решения задач использовали комплекс исследований по определению физико-химических, технологических, реологических, биофармацевтических, микробиологических и фармакологических свойств напроксена и теноксикама, определяющие качественные и количественные показатели, фармацевтическую доступность ЛВ из его ЛФ - гелей, стабильность, микробиологическую чистоту и противовоспалительную активность разработанных ЛФ напроксена и теноксикама для наружного применения.

Физико-химические, технологические и биофармацевтические методы анализа гелей напроксена и теноксикама осуществляли на кафедре фармацевтической технологии ГОУ ВПО «КГМУ». Оценку высвобождения напроксена и теноксикама из гелей осуществляли методами диффузии в агар и равновесного диализа через полупроницаемую мембрану. Реологические показатели гелей напроксена и теноксикама определяли на ротационном вискозиметре «Реотест-2» (Германия) на базе кафедры химии и технологии переработки эластомеров ГОУ ВПО «КГТУ».

Разработку методик определения качественного и количественного анализа напроксена и теноксикама в субстанциях и в гелях осуществляли методами ВЭЖХ, УФ-спектрофотометрии на приборах LC-20, Schimadzu (Япония) и Specord 40 (Германия) на базе лаборатории физико-химического анализа ИОФХ им. А.Е. Арбузова КНЦ РАН. Термогравиметрический анализ (ТГА) напроксена и теноксикама осуществляли на кафедре технологии пластических масс института полимеров ГОУ ВПО «КГТУ».

Биологические методы анализа гелей напроксена и теноксикама проводили на животных на различных моделях в соответствии с Методическими указаниями по изучению новых нестероидных противовоспалительных препаратов (Москва, 2008) на базе кафедры фармакологии и токсикологии ФГОУ ВПО «КГАВМ им. Н.Э. Баумана». Оценку микробной чистоты ЛВ и их ЛФ проводили по методике, рекомендованной ГФ XII-го издания (ОФС 42-0067-07) на базе кафедры микробиологии ГОУ ВПО «КГМА».

Анализ стабильности гелей напроксена и теноксикама осуществляли в процессе естественного и ускоренного хранения. Оценку термической и коллоидной стабильности гелей напроксена и теноксикама проводили на лабораторной центрифуге фирмы “Mеtronex” (Польша) в соответствии с ГОСТом 29188.3-91 «Изделия косметические. Методы определения стабильности эмульсий». Определение показателей качества готовых лекарственных форм осуществляли в соответствии с требованиями ОСТ 91500.05.001.00 “Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения".

Статистическую обработку всех материалов исследования осуществляли с помощью пакета прикладных программ Excel 2007 с вычислением средней арифметической ошибки, критерия Стьюдента.

Разработка и исследование геля напроксена

Напроксен рекомендован в клинической практике для лечения РБ. При создании ЛФ напроксена для наружного применения одной из задач исследования явилась разработка состава и технологии геля напроксена, для получения которого необходимо: 1) приготовление раствора ЛВ и 2) приготовление основы - носителя ЛВ, обеспечивающего легкость, высокую активность при боли и воспалении различной этиологии, нетравматичность нанесения ЛФ, а также равномерность распределения ЛВ на участках кожи и слизистых.

В предварительных экспериментах по выбору оптимальной концентрации напроксена в ЛФ для наружного применения нами было выявлено, что наиболее приемлемой является концентрация 5%.

Известно, что наибольший терапевтический эффект ЛВ проявляет в растворенном состоянии, при введении его в основу геля. Поэтому, интерес представляли исследования по растворимости напроксена в разных растворителях при повышении температуры на стадии нагревания раствора ЛВ.

Методом ТГА исследовали влияние температур на стабильность напроксена с позиции возможного изменения его структуры в интервале от 0 оС до 500 оС.

В ходе изучения термоустойчивости напроксена показано, что при различных температурах наблюдается потеря массы ЛВ, отличающаяся от первоначальной его массы: так, при температуре 105 оС - 5%-я потеря, при температуре 280 оС - 10%-я потеря массы напроксена и при 305 оС - 50% потеря. При 500 оС наступает 100%-я деструкция напроксена.

В результате данных исследований выявлено, что напроксен проявляет устойчивость в области температур от 0 оС до 280 °С.

Разработка геля напроксена предусматривала подбор растворителя, для введения ЛВ в гель в растворенном состоянии. Поэтому первоначально изучали растворимость напроксена в чистых растворителях, а также в бинарных и тройных смесях, исследуя при этом процесс гелеобразования.

В качестве гелеобразователей использовались высокомолекулярные соединения (ВМС): карбопол, ГЭЦ, КК и желатин, известные своей способностью образовывать в воде устойчивые гели. Однако напроксен не растворим в воде и при введении его в гель выпадает в осадок.

Поэтому одной из задач получения геля с ЛВ являлся подбор оптимального растворителя, с одной стороны, позволяющий растворить ЛВ, а с другой – улучшить процесс гелеобразования и создать условия перехода ЛВ из раствора в гель.

Оценка растворимости напроксена в чистых растворителях показала, что напроксен растворим в этиловом спирте (этаноле) и димексиде.

В смеси: димексид - этанол в соотношении (1:2) наблюдается лучшая растворимость напроксена, однако получить качественный гель в таких условиях было затруднительно. В связи с этим возникла необходимость вводить в данную систему растворителей водную фазу, где в качестве растворителей использовали смесь, состоящую из 3-х компонентов: димексид - этанол - вода в разных соотношениях и 4-х компонентов ПЭГ 400 : димексид: вода: этанол (таблица 1). Выбрав смеси растворителей в различных соотношениях, указанных в таблице 1 представляло интерес оценить процесс набухания ВМС, при одновременном изучении растворимости напроксена в данных системах растворителей.

Таблица 1

Смеси растворителей димексид - этанол - вода и

ПЭГ 400 - димексид – вода - этанол в различных пропорциях

№ образца	Соотношение растворителей
1	димексид : этанол : вода (1:1:8)
2	димексид : этанол : вода (1:2:7)
3	димексид : этанол : вода (3:3:4)
4	ПЭГ 400 : димексид: вода: этанол (1:1:7:1)

При исследовании процесса набухания образцов желатина и КК в данной системе растворителей получались образцы гелей, обладающие низкой степенью набухания, поэтому в дальнейшем, в качестве структурообразователей исследовались ВМС (карбопол 940 и ГЭЦ) в указанных выше системах растворителей.

Кинетика набухания ВМС и кинетика растворимости напроксена в смеси изучаемых растворителей представлены на рисунках 1 и 2.

Рис.1. Кинетика набухания ВМС в смеси растворителей (димексид- этанол- вода) в про-порциях: (1:1:8)- 1; (1:2:7) - 2; (3:3:4) - 4 и в смеси (ПЭГ 400: димексид: вода: этанол) в пропорции (1:1:7:1) - 3. По оси абсцисс - время, ч; по оси ординат – степень.

Предварительные исследования по оценке степени набухания ГЭЦ и карбопола 940 (рис.1) при одновременном изучении растворимости напроксена (рис. 2) в системе различных растворителей, указанных в таблице 1, показали, что процесс набухания карбопола и ГЭЦ имеет одинаковый характер, но зависит от компонентов и их соотношения в системе растворителей.

Рис.2. Кинетика растворимости напроксена в смеси растворителей (димексид - этанол - вода) в пропорциях: (1:1:8)- 1; (1:2:7)- 2; (3:3:4)- 4 и в смеси (ПЭГ400: димексид: вода: этанол) в пропорции (1:1:7:1) – 3. По оси абсцисс - время, ч; по оси ординат - степень растворимости напроксена.

Как видно из рис.1 кинетический профиль набухания ВМС (образец 1) в системе координат «степень набухания – время» располагается выше кинетических профилей набухания образцов 2 и 4, соответствующих системе растворителей: димексид-этанол-вода в пропорциях 1:2:7 и 3:3:4 и выше образца 4, соответствующего системе (ПЭГ 400-димексид-вода-этанол) в пропорции (1:1:7:1). При этом степень набухания ВМС при уменьшении соотношения водной фазы в указанных системах уменьшалась в ряду растворителей в пропорциях: 1:1:8 - 1:2:7 - 1:1:7:1 - 3:3:4. Напротив, в этом же ряду растворителей одновременно возрастала степень растворимости напроксена, которая достигала максимума в системе растворителей в пропорции (3:3:4). Однако в данной системе растворителей при таком соотношении гелеобразование было затруднено.

Тем самым, было показано, что для получения стабильных гелей с напроксеном оптимальным растворителем является смесь, представленная 3-мя растворителями: димексид - этанол - вода в пропорции 1:2:7. Данные результаты позволили выбрать оптимальный растворитель, обеспечивающий с одной стороны - растворимость напроксена, а с другой – набухаемость ВМС. Эти результаты положены в основу разработки состава и технологии получения 5% геля напроксена. Для полного изучения технологических свойств гелей, использовали различные комбинации ВВ, представленные в таблице 2. Все составы 5% гелей напроксена оценивали по критериям: внешний вид, pH, термическая и коллоидная стабильность.

Таблица 2

Составы исследуемых образцов гелей с напроксеном

№ образца	1	2	3	4	5	6	7	8
Компоненты
Напроксен	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0
Димексид	10.0	10.0	10.0	20	10.0	10.0	14.0	10.0
ПЭГ - 400	-	-	20.0	-	30.0	10.0	20.0	30.0
Консерванты	0.4	0.4	0.4	0.4	0.4	0.4	0.4	0.4
Глицерин	-	-	-	-	-	-	14.0	-
Желатин	-	-	-	-	-	-	2.5	-
Ксантановая камедь	-	-	1.0	-	-	-	-	-
Карбопол	1.0	-	-	-	-	1.0	-	-
ГЭЦ	-	3.0	-	3.0	3.0	-	-	3.0
Спирт этиловый (этанол)	20.0	20.0	-	50.0	-	-	-	32.0
Эмульгатор	0.2	0.2	-	-	-	-	-	-
Вода очищенная	До 100.0	До 100.0	До 100.0	До 100.0	До 100.0	До 100.0	До 100.0	До 100.0

Как показали исследования по оценке качества гелей напроксена на предмет коллоидной и термической стабильности: состав 4 (на основе ГЭЦ), состав 7 (на основе желатина и глицерина) и состав 8 (на основе ГЭЦ с ПЭГ-400) в течение 3-х месяцев хранения проявляли нестабильность. При этом образец геля состава 3 оказывался нестабильным в течение 2-х недельного срока хранения и приобретал запах. Образец геля состава 5 в течение срока хранения расслаивался и изменял значения pH, не выдерживая при этом испытания на термическую и коллоидную стабильность.

На основании результатов термической и коллоидной стабильности образцов, приведенных в таблице 2, отбирались составы гелей напроксена на основе карбопола и ГЭЦ (составы 1,2,6), исследованные в дальнейшем на предмет реологических и биофармацевтических свойств и оказывающих влияние на процессы высвобождения ЛВ из гелей и на их потребительские свойства: намазываемость, адгезию, способность выдавливаться из туб.

Для изучения реопараметров выбранных составов гелей напроксена строили кривые кинетики деформации в координатах: скорость сдвига - напряжение сдвига в области изменения градиентов скорости течения от малых к большим и от больших к малым.

Реограмма течения 5% гелей напроксена представлена на рис. 3.

Рис.3. Реограммы течения 5% гелей напроксена на различных основах.

1 –5% гель напроксена на основе карбопол;

2 –5% гель напроксена на основе ГЭЦ;

6 –5% гель напроксена на основе карбопола и ПЭГ-400.

Как видно из рисунка 3, реологические свойства изучаемых образцов гелей напроксена на разных основах неодинаковы: показатели эффективной вязкости и напряжение сдвига наиболее оптимальны при использовании гелевой основы – ГЭЦ.

Важным критерием проявления фармакологического эффекта ЛВ является их фармацевтическая доступность, показателем которой служит высвобождение ЛВ – напроксена из ЛФ – гелей. Для оценки высвобождения напроксена из 5 % гелей использовали метод равновесного диализа через полупроницаемую мембрану. Количество высвободившегося напроксена из гелей определяли методом УФ-спектрофотометрии. Отбор проб изучаемых образцов диализата с ЛВ – напроксеном осуществляли в течение 48 часов.

Степень высвобождения напроксена из гелей оценивали также с помощью микробиологического метода, основанного на способности исследуемого ЛВ угнетать рост микроорганизмов на стандартной тест - культуре C. albicans. Учет результатов проводили через 48 - 72 часа.

Средние кинетические профили высвобождения напроксена из 5% гелей на разных основах, определяемые методом равновесного диализа представлены на рис. 4.

при р<0,05

Рис. 4. Средние кинетические профили высвобождения напроксена из 5% гелей,

где: 1 –5% гель напроксена на основе карбопол;

2 –5% гель напроксена на основе ГЭЦ;

6 – 5% гель напроксена на основе карбопол и ПЭГ- 400.

Анализ результатов показал, что в течение 48 часов наблюдения процесс высвобождения напроксена из 5% гелей носит пролонгированный характер. Более полно напроксен высвобождается из 5% гелей на основах карбопол с ПЭГ 400 (образец 6) и ГЭЦ (образец 2) в сравнении с основой карбопол (образец 1) и при этом подчиняется уравнению Higuchi, в соответствии с диффузионным механизмом высвобождения ЛВ. Значения кажущихся коэффициентов диффузии составили для гелей: образца 1 - 0,59 ± 0,09 см/c; образца 2 - 0,84 ± 0,03 см/c и для образца 6 - 0,77 ± 0,05 см/c. Это говорит о том, что процесс высвобождения ЛВ из гелей идет с неодинаковой скоростью и зависит от природы ВВ, а также от технологии приготовления гелей. Тем самым, результаты высвобождения напроксена из гелей, определяемые методами равновесного диализа и микробиологическим методом вполне сопоставимы. Проведенный комплекс исследований свидетельствовал в пользу выбора оптимального состава 5% геля на основе ГЭЦ, технологическая схема которого приведена на рис. 5.

Рис. 5. Технологическая схема производства 5% геля напроксена

(Кх- контроль химический, Кб - контроль биологический, Кт - контроль технологический).

Для количественного и качественного определения содержания напроксена в субстанции и 5% геле с помощью ВЭЖХ и ТСХ разработаны методики анализа. Относительная ошибка определения напроксена (1.07 %) укладывается в пределы погрешности метода хроматографического анализа ± 2 %.

Стабильность наработанных образцов 5% геля напроксена, упакованных в тубы алюминиевые по 30 г оценивали на 5-ти сериях в условиях естественного и ускоренного хранения по параметрам, включенным в ФСП: внешний вид, рН, подлинность, количественное содержание, посторонние примеси и микробная чистота в соответствии с требованиями ОСТа 91500.05.001.00 «Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения». Результаты данного исследования представлены в таблице 3.

Таблица 3

Показатели качества 5% геля напроксена

№	показатели	Методы определения	нормы	Соответствие нормам
1	Описание	Визуально ГФ XII – го изд.	Однородная кремообразная масса, белого цвета, со слабым запахом спирта.	Соотв-т
2	Подлинность	ТСХ	Пятна на хроматограмме раствора испытуемого образца должны соответствовать аналогичным пятнам на хроматограмме раствора стандартного образца.	Соотв-т
3	Вязкость	ОФС 42-0038-07	0,34-108 Па с	Соотв-т
4	Масса содержимого упаковки	ОСТ 64-492-85	Согласно требованиям ОСТ от 48,5 до 51,5 г.	Соотв-т
5	pH водн. извлечения	Потенциометрия ГФ XII-го изд.	От 5,5 до 6,5	Соотв-т
6	Размер частиц	ГФ XII-го изд.	Не > 60мкм	Соотв-т
7	Родственные примеси	ТСХ	На хроматограмме раствора испытуемого образца не должно быть дополнительных пятен	Соотв-т
8	Микробная чистота	ОФС 42-0067-07	не более 100 бактерий и грибов, не более 10 энтеробактерий и других гр(–) в 1,0 г (мл), отсутствие St. aureus и Ps. aeruginosa	Соотв-т
9	Количественное определение	ВЭЖХ и УФ- спектро-фотометрия	Содержание напроксена (в упоковке) от 95,0 % до 105,0 % от заявленного содержания.	Соотв-т
10	Упаковка		По 30 г в алюминиевой тубе с внутренним лаковым покрытием на основе клея БФ-2 и с бушонами из полиэтилена низкого давления. Тубу вместе с инструкцией по применению упаковывают в картонную коробку.	Соотв-т
11	Маркировка		В соответствии с ФСП	Соотв-т
12	Срок годности		2 года	Соотв-т

Исследования микробиологической чистоты 5% гелей напроксена проводили в соответствии с требованиями ОФС 42-0067-07 (ГФ XII - го изд.). В результате исследований было показано, что 5% гель напроксена обладает антимикробным действием по отношению к тест-культуре С. аlbicans и. соответствует требованиям ОФС по разделу «Микробиологическая чистота».

Исследования на стабильность показали, что наработанные серии образцов 5% геля напроксена на основе ГЭЦ по анализируемым показателям соответствовали предъявляемым требованиям НД и позволили установить срок годности - 2 года

Разработка и исследование геля теноксикама

В последние годы наряду с препаратами НПВП – производными пропионовой кислоты, заслуживают внимание и ЛВ производные 1,2 - бензотиазина, отличающиеся высокой эффективностью, избирательностью и наибольшим периодом полувыведения, одним из которых является теноксикам. Разрабатывая технологию и осуществляя выбор оптимального состава геля теноксикама, руководствовались теми же принципами, используемыми нами при разработке 5% геля напроксена.

В предварительных исследованиях на животных по изучению токсичности и специфической активности образцов гелей теноксикама была выбрана концентрация теноксикама 1%, проявляющая противовоспалительную активность в условиях «in vivo».

Для введения теноксикама в ЛФ, необходимо было изучить его растворимость в различных растворителях и с помощью метода ТГА оценить влияние температурного фактора на стабильность субстанции ЛВ в интервале температур от 0 оС до 600 оС. В ходе изучения термоустойчивости теноксикама нами определено, что при возрастании температуры наблюдается различная в процентном соотношении потеря массы ЛВ, отличающаяся от первоначальной его массы. Так, при температуре 215 оС наблюдается 5%-я потеря массы теноксикама. При температуре 230 оС - 10%-я потеря массы ЛВ; при 265 оС – 50%-я потеря массы ЛВ, а при 560 оС наступает 100% -я деструкция теноксикама. В ходе данных исследований выявлено, что теноксикам проявляет устойчивость в области температур от 0 оС до 230 °С.

Результаты исследования растворимости теноксикама, проведенные в соответствии с требованиями ГФ XII - го издания показали, что последний не растворим в воде, глицерине, в маслах, ПГ; легко растворим в димексиде, умеренно растворим в ПЭГ 400, мало растворим в этаноле. Исследования по подбору бинарных и тройных смесей свидетельствовали, что теноксикам практически нерастворим в смесях: этанол + ПГ и ПЭГ- 400 + ПГ в соотношении (1:1); очень мало растворим в смесях: ПЭГ-400 + димексид в соотношении (1:1) и ПЭГ- 400 + ПГ + в соотношении (1:1:1).Умеренно растворим в смеси: димексид + ПГ + этанол в соотношении (1:1:1); растворим в смесях: димексид - этанол в соотношении (1:1), ПЭГ- 400 + димексид + этанол в соотношении (1:1:1) и ПЭГ- 400 + ПГ + димексид в соотношении (1:1:1).

При создании геля теноксикама, как и в случае с напроксеном, важно было подобрать оптимальный растворитель, обеспечивающий растворимость ЛВ и условия его перехода из раствора в гель. В качестве гелеобразователей были отобраны карбопол и ГЭЦ. Основываясь на вышеизложенные результаты по разработке геля напроксена, в качестве растворителей (в которых бы теноксикам растворялся и при этом переходил из раствора в гель), нами был апробирован растворитель, представленный смесью: димексид-этанол-вода в соотношении (1:2:7). При этом было выявлено, что кинетика набухания карбопола и ГЭЦ зависит от соотношения компонентов и, в первую очередь, от массовой доли водной фазы. При увеличении количества воды в упоминаемой выше системе растворителей набухание карбопола и ГЭЦ возрастает, а при увеличении массовой доли органических растворителей увеличивается растворимость теноксикама, но при этом процесс гелеобразования уменьшается. Тем самым, подобран оптимальный состав растворителей, обеспечивающий максимальную растворимость теноксикама и удовлетворительную степень набухания карбопола и ГЭЦ. Полученные результаты положены в основу разработки состава и технологии изготовления геля теноксикама.

В предварительных фармакологических исследованиях на животных по оптимизации концентрации теноксикама в ЛФ для наружного применения – геле нами было выявлено, что наиболее приемлемой является концентрация 1%.

Для выбора оптимального состава геля теноксикама осуществляли подбор ВВ, для чего использовали разные комбинации в различных пропорциях. Составы 1% гелей теноксикама представлены в таблице 4.

Таблица 4

Составы исследуемых 1% гелей с теноксикамом

№ образца	I	II	III	IV	V	VI	VII	VIII
Компоненты
Теноксикам	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0	1.0
Димексид	10.0	10.0	10.0	10.0	10.0	10.0	10.0	10.0
ПЭГ - 400	-	-	10.0	10.0	10.0	10.0	10.0	10.0
Консерванты	0.4	-	0.4	0.4	-	-	0.4	0.4
Глицерин	-	-	-	-	-	15.8	19.0	-
Желатин	-	-	-	-	-	-	2.1	-
КК	-	-	1.0	-	-	-	-	-
Карбопол	1.0	-	-	-	-	1.0	-	-
ГЭЦ	-	3.0	-	3.0	3.0	-	-	-
Na-KMЦ	-	-	-	-	-	-	-	3.0
Спирт этиловый	20.0	20.0	-	-	-	-	-	-
Эмульгатор	0.4	0.4	-	-	-	-	-	-
Вода очищенная	До 100.0	До 100.0	До 100.0	До 100.0	До 100.0	До 100.0	До 100.0	До 100.0

Как видно из таблицы 4, образцы 1% гелей теноксикама I и VI изготовлены на основе карбопола; образец III на основе КК; образцы гелей II, IV, V на основе ГЭЦ; образец VII на желатино-глицериновой основе, а образец VIII на основе Na-КМЦ. Все составы гелей теноксикама оценивались на термическую и коллоидную стабильность, в ходе которой было выявлено, что гели теноксикама составов IV,V,VII и VIII по данному показателю не выдержали испытаний. Наиболее предпочтительными образцами 1% гелей теноксикама, используемые для биофармацевтических и реологических исследований, явились составы I, II, III и VI.

Для каждого образца 1% геля теноксикама, рассчитывали реопараметры, на основании которых строили реограммы течения 1% гелей с различным содержанием ВВ. Реограмма течения 1% геля теноксикама на различных основах представлена на рисунке 6.

Изучение реологических свойств исследуемых гелей теноксикама показало наличие разных значений реологических характеристик: напряжение сдвига, эффективной вязкости в зависимости от скорости сдвига у изучаемых образцов.

При этом наиболее оптимальным составом с реологическими показателями является образец II на основе ГЭЦ.

Рис.6. Реограммы течения 1% гелей теноксикама на разных основах.

I – 1% гель теноксикам на основе карбопол;

II – 1% гель теноксикам на основе ГЭЦ;

VI – 1% гель теноксикам на основе карбопол и ПЭГ- 400.

Оценку гелевой основы высвобождать ЛВ - в диализат проводили методом равновесного диализа через полупроницаемую мембрану и методом диффузии в агаровый слой в течение 48 часов времени наблюдения. Результаты по высвобождению теноксикама из гелей, определяемые методом диализа через полупроницаемую мембрану представлены на рисунке 7.

при р<0,05

Рис.7. Средние кинетические профили высвобождения теноксикама из 1 % гелей,

где: I –1% гель теноксикам на основе карбопола;

II –1% гель теноксикам на основе;

VI –1% гель теноксикам на основе карбопола и ПЭГ-400.

Исследования по оценке высвобождения теноксикама из гелей, осуществляемых методом диффузии в агаровый гель и методом равновесного диализа, показало, что наибольшей степенью высвобождения теноксикама в диализат обладает 1% гель на основе ГЭЦ (образец II) по сравнению с гелем на основe карбопол (образец I) и ПЭГ 400 (образец VI).

Для полного описания процесса высвобождения теноксикама из 1% гелей использовали уравнение Higuchi. Используя уравнение Higuchi, вычисляли значения кажущихся коэффициентов диффузии. Так, для образцов гелей состава I коэффициент диффузии составил в пределах 0,58 ± 0,08; для образцов состава II – 0,89± 0,03 и для образцов состава VI в пределах 0,79 ± 0,06, что говорит о том, что процесс высвобождения теноксикама из гелей идет с неодинаковой скоростью и зависит от природы ВВ, а также от технологии приготовлении гелей.

Таким образом, высвобождение теноксикама из гелей, определяемое различными методами исследования (методом диффузии в агаровый слой и методом равновесного диализа через мембрану), позволяет сделать вывод, что наибольшая степень высвобождения теноксикама наблюдается из 1% гелей на основе ГЭЦ (образец II) в сравнении с другими образцами гелей.

Проведенный комплекс исследований с использованием различных методов анализа позволил экспериментально и теоретически обосновать состав 1% геля теноксикама и технологию его получения на основе ГЭЦ. Технологическая схема производства 1% геля теноксикама представлена на рис.8.

Рис.8. Технологическая схема производства 1% геля теноксикама.

(Кх - контроль химический, Кб - контроль биологический, Кт - контроль технологический)

Наработанные 1% гели теноксикама наряду с предложенной технологией оценивали в соответствии с требованиями проекта ФСП (таблица 5).

Таблица 5

Показатели качества 1% геля теноксикама

№	показатели	Методы определения	нормы	Соответствие нормам
1	Описание	Визуально ГФ XII – го изд.	Однородная кремообразная масса, белая, со слабым запахом спирта.	Соотв-т
2	Подлинность	ГЖХ	Времена удерживания основных пиков на хроматограмме испытуемого раствора должны соответствовать временам удерживания основных пиков на хроматограмме раствора стандартного образца теноксикама.	Соотв-т
3	Вязкость	ОФС 42-0038-07	0,34-108 Па с	Соотв-т
4	Масса содержимого упаковки	ОСТ 64-492-85	Согласно требованиям ОСТ от 48,5 до 51,5 г.	Соотв-т
5	pH водн. извлечения	Потенциометрия ГФ XII-го изд.	От 5,5 до 6,5	Соотв-т
6	Размер частиц	ГФ XII-го изд.	Не > 60мкм	Соотв-т
7	Родственные примеси	ГЖХ	Любой единичной примеси не более 0,2%. Суммы примесей не более 0,5%.	Соотв-т
8	Микробная чистота	ОФС 42-0067-07	не более 100 бактерий и грибов, не более 10 энтеробактерий и др. гр(–) в 1,0 г (мл), отсутствие St. aureus и Ps. aeruginosa	Соотв-т
9	Количественное определение	ВЭЖХ и УФ-Спектро-фотометрия	Содержание напроксена (в упоковке) от 95,0 % до 105,0 % от заявленного содержания	Соотв-т
10	Упаковка		По 30 г в алюминиевой тубе с внутренним лаковым покрытием на основе клея БФ-2 и с бушонами из полиэтилена низкого давления. Тубу вместе с инструкцией по применению упаковывают в картонную коробку.	Соотв-т
11	Маркировка		В соответствии с ФСП	Соотв-т
12	Срок годности		2 года	Соотв-т

Для определения подлинности, посторонних примесей, количественного содержания теноксикама в геле разработаны методики анализа с использованием методов УФ-спектрофотометрии, ВЭЖХ и ГЖХ. Посторонние примеси в 1% геле теноксикама оценивали по методике, валидированной по параметру «специфичность», для доказательства которого получены хроматограммы раствора модельной смеси геля теноксикама и стандартов примесей (USP RS). В области удерживания примесей теноксикама дополнительные пики отсутствуют, при этом пики теноксикама и примесей разделены с Кразд. > 1,5. Нормирование содержания любой посторонней примеси в гелях теноксикама проводили на уровне не более 0,1%, суммарное содержание - не более 0,3 %. Пригодность методики определения содержания теноксикама в гелях подтверждена результатами анализа модельных смесей теноксикама в гелях и установлением критериев: «специфичность», «линейность» и «правильность». Исследования микробиологической чистоты проводили по методике, рекомендованной ГФ XII издания (ОФС 42-0067-07). В результате было выявлено соответствие разработанных 1% гелей теноксикама требованиям ОФС по показателю «Микробиологическая чистота». Изучение стабильности геля теноксикама 1% в тубах алюминиевых с внутренним лаковым покрытием на основе клея БФ-2 и с бушонами из полиэтилена низкого давления позволили установить срок годности – 2года.

Биологические методы исследования

ЛФ напроксена и теноксикама для наружного применения

Экспериментальные исследования по изучению общетоксического и местнораздражающего действия гелей напроксена и теноксикама выполнены в соответствии с «Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (Москва, 2005). В результате проведенных исследований в опытах на животных установлено, что 5% гель напроксена и 1% гель теноксикама, а также гелевые основы: карбопол и ГЭЦ при накожных аппликациях хорошо переносились, не влияли на общее состояние и поведение животных и визуально не вызывали признаков раздражения кожи. На протяжении всего опыта ни в одной из групп животных не было отмечено гибели, при этом на органах животных (легкие, печень, селезенка, почки, желудок), получавших накожно 5% гели напроксена и 1% гели теноксикама, а также основы, в сравнении с контролем патологические изменения не обнаруживались. Эти данные позволяют заключить, что 5% гель напроксена и 1% гель теноксикама не оказывают общетоксического и местно-раздражающего действия.

Изучение специфической активности 5% геля напроксенаи 1% геля теноксикама, а также гелевой основы ГЭЦ проводили на модели формалинового отёка и на модели УФ-эритемы. В качестве препаратов сравнения использовались известные противовоспалительные ЛФ с НПВП в виде гелей - «Долгит» (Германия), «Феброфид» (Польша) и «Вольтарен» (Швейцария). Модель «формалинового отёка воспроизводили введением 0,1 мл 2 % раствора формалина в полость коленного сустава экспериментальных крыс. Гели 5% напроксена и 1% теноксикама наносились на лапу крысы непосредственно после введения раствора формалина. Выраженность воспалительной реакции оценивали онкометрически в динамике через 3, 4 и 5 часов после индукции воспаления по степени уменьшения прироста отёка лапы по сравнению с контрольной группой.

Результаты влияния 5% гелей напроксена и 1% гелей теноксикама на формалиновый отек показали, что данные ЛФ обладают антиэкссудативным действием. При этом наибольшую специфическую активность проявляли 5% гель напроксена и 1% гель теноксикама на основе ГЭЦ и по противовоспалительному действию не уступали препаратам сравнения.

На модели УФ-эритемы показано, что наибольшей активностью при профилактическом и лечебном применении обладают 5% гель напроксена на основе ГЭЦ и гель «Вольтарен». Результаты по оценке специфической активности 5% геля напроксена и 1% геля теноксикама прошли экспертизу Локального Этического комитета ГОУ ВПО «КГМУ» (протокол заседания бюро от 18.02.09 г).

Общие выводы

1. На основании комплекса физико-химических, реологических, технологических, биофармацевтических и биологических исследований теоретически и экспериментально обоснованы составы и технология получения 5% геля напроксена и 1% геля теноксикама, обладающих высокой противовоспалительной активностью, фармацевтической доступностью, стабильностью и оптимальными реологическими показателями, рекомендуемых для лечения ревматических заболеваний.

2. Физико-химическими методами подобран оптимальный состав растворителей, состоящий из димексида, этанола и воды в соотношении (1:2:7), способствующий растворимости напроксена и теноксикама для введения их в гелевую основу. Методом ТГА определены условия, при которых напроксен в интервале температур от 0 оС до 280 оС, а теноксикам в интервале от 0 оС до 220 оС проявляют термоустойчивость. С использованием методов УФ - спектрофотометрии, ВЭЖХ, ГЖХ и ТСХ разработаны методики для определения качественных и количественных показателей, а также стабильности гелей напроксена и теноксикама

3. Технологическими и реологическими методами установлено, что оптимальным носителем, обеспечивающий наибольшее высвобождение напроксена и теноксикама из гелей и их реопараметры (вязкость, напряжение сдвига, тиксотропность) является гидроксиэтилцеллюлоза. Биофармацевтическими исследованиями показано, что высвобождение напроксена и теноксикама из гелей носит пролонгированный характер и зависит от: природы и концентрации структурообразователя, наличия ВВ, а также от технологии изготовления ЛФ. Процесс высвобождения напроксена и теноксикама из гелей описывается уравнением Higuchi, определяющего линейную зависимость количества высвобождаемого ЛВ от времени высвобождения.

4. В опытах на животных по изучению специфической активности на различных моделях выявлено, что 5% гель напроксена и 1% гель теноксикама на основе гидроксиэтилцеллюлозы проявляют высокую противовоспалительную активность. Микробиологическими методами исследования показано, что 5% гель напроксена обладает антимикробным действием по отношению к тест-культуре C. аlbicans, при этом 1% гель теноксикама не обладает антимикробным действием.

5. На основании разработанных показателей качества подготовлена НД, с использованием которой возможно осуществление контроля 5% геля напроксена и 1% геля теноксикама в процессе производства и хранения. Данные ЛФ отвечают современным требованиям, предъявляемым к качеству и стабильности лекарственных средств, пригодных для промышленного производства.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Эль Али Ф.А. Биофармацевтические аспекты создания противовоспалительных лекарственных форм / Ф.А. Эль Али // Тезисы XIV-й Всеросс. научно-практической конференции: «Молодые ученые в медицине», Казань, 25-26 апреля 2007 г. - С.245-246.
2. Эль Али Ф.А., Исследование физико-химических свойств нестероидных противовоспалительных лекарственных форм / Ф.А. Эль Али // Тезисы XIV-й Всеросс. научно-практической конференции: «Молодые ученые в медицине», Казань, 24-25 апреля 2008 года - С. 188-189.
3. Насыбуллина Н.М. Биофармацевтические аспекты создания наружных лекарственных форм противовоспалительного действия / Н.М. Насыбуллина, Ф.А. Эль Али, Р.А. Мустафин, Э.И. Алмакаева и др. // Тез. докл. XVI-го Росс. нац. конгр.: «Человек и лекарство». - М., 2009. – С.705.
4. Насыбуллина Н.М. Поиск и разработка наружных лекарственных форм противовоспалительного действия / Н.М. Насыбуллина, Ф.А. Эль Али, Р.А. Мустафин, Э.И. Алмакаева и др. // Матер. Республ. научно - практ. конференции «Актуальные вопросы повышения качества последипломной подготовки фармацевтических кадров». - Казань, 2009. - С.117-119.
5. Эль Али Ф.А. Технологические аспекты создания лекарственных форм противовоспалительного действия для наружного применения / Ф.А. Эль Али, Н.М. Насыбуллина, Д.Р. Замалдинова // Тезисы XIV-й Всеросс. научно-практической конференции: «Молодые ученые в медицине», Казань, 2009. - С. 153.
6. Насыбуллина Н.М. Биофармацевтическая оценка лекарственных форм НПВП для наружного применения/ Н.М. Насыбуллина, Ф.А. Эль Али, Р.А. Мустафин, Э.И. Алмакаева и др.// Матер. II-й Региональной научно-практ. конференции: «Синтез и перспективы использования новых биологически активных соединений» - Казань, 2009. - С.142-144.
7. Насыбуллина Н.М. Микробиологический метод анализа в создании НПВП для наружного применения / Н.М. Насыбуллина, Ф.А. Эль Али, Э.И. Алмакаева и др.// Матер. II-й Региональной научно-практ. конференции: «Синтез и перспективы использования новых биологически активных соединений» - Казань, 2009.- С. 140-141.
8. Эль Али Ф.А. Контроль качества лекарственной формы напроксена наружного применения / Ф.А. Эль Али, Н.М. Насыбуллина, И.А. Салахов // Журнал «Фармация», М., № 1.- 2009. – С.6-8.
9. Эль Али Ф.А. Определение теноксикама в лекарственной форме для наружного применения / Ф.А. Эль Али, Н.М. Насыбуллина, И.А. Салахов // Журнал «Фармация», М., № 3.- 2009. – С.20-23.
10. Насыбуллина Н.М. Разработка наружных нестероидных противовоспалительных лекарственных форм / Н.М. Насыбуллина, Ф.А. Эль Али, Р.А. Мустафин и др.// журнал. РАЕ «Фундаментальные исследования». – М., № 12, 2007. – С. 348-349.
11. Эль Али Ф.А. Микробиологический метод исследования в изучении наружных лекарственных форм с НПВП / Ф.А. Эль Али, А.Т. Хусаинова., Н.М. Насыбуллина // Тезисы XIV-й Всеросс. научно-практической конференции «Молодые ученые в медицине», Казань, 2009. – С.153-154.
12. Эль Али Ф.А. Оценка токсичного действия теноксикама и напроксена в опытах на животных / Ф.А. Эль Али, Н.М. Насыбуллина // Тезисы и научно-практ. конференции: «Становление и достижения биохимической школы Казанского университета», Казань, 12 ноября 2009. – С.150-151.
13. Эль Али Ф.А. Изучение физико-химических свойств напроксена с помощью термогравиметрического метода анализа / Ф.А. Эль Али // Тезисы XV-й Всеросс. научно-практической конференции: «Молодые ученые в медицине», Казань, 2 - 3 апреля 2010 г. - С.236.
14. Насыбуллина Н.М. Изучение растворимости производных бензотиазина и процесса набухания гелеобразователя / Н.М. Насыбуллина, Р.А. Мустафин, Ф.А. Эль Али // Журнал «Фармация», М., № 5.- 2010. – С.29-31.
15. Эль Али Ф.А. Разработка метода количественного определения напроксена в лекарственной форме для наружного применения / Ф.А. Эль Али, Н.М. Насыбуллина, И.А. Салахов // Тезисы 44 - й Всеросс. научной конференции с международным участием студентов и молодых ученых: «Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной, клинической медицины и фармации» Тюмень 2010 – С. 53-54.
16. Эль Али Ф.А. Этапы определения токсичности лекарственных средств 1,2-бензотиазина при накожных аппликациях в опытах на животных / Ф.А. Эль Али, Р.А. Мустафин // Тезисы научных работ студентов и молодых ученых Всеросс. научно-практической конференции с международным участием, посвященной 1000-летию г. Ярославля 2010 – С. 356-357.
17. Эль Али Ф.А. Создание трансдермальных лекарственных форм производных 1,2 - бензотиазина / Ф.А. Эль Али, Р.А. Мустафин // Тезисы научных работ студентов и молодых ученых Всеросс. научно-практической конференции с международным участием, посвященной 1000-летию г. Ярославля 2010 – С. 357.
18. Насыбуллина Н.М./ Доклинические исследования в создании лекарственных форм нестероидной структуры/ Н.М. Насыбуллина, Ф.А. Эль Али, Р.А. Мустафин, // Журнал «Клиническая фармакология и терапия», материалы второй международной конференции: «Информация о лекарственных средствах – качественному использованию лекарств».- Казань, 15-16 октября 2010. - С.73-74.
19. Насыбуллина Н.М. Доклинические этапы в создании противо-воспалительных лекарственных форм для наружного применения / Н.М. Насыбуллина, Ф.А. Эль Али //Тезисы Республ. научно-практ. конференции: «Актуальные вопросы повышения качества последипломной подготовки фармацевтических кадров».- Казань, 25 марта 2010 – С. 163-167.
20. Эль Али Ф.А. Оценка структурно-механических свойств лекарственных форм для наружного применения / Ф.А. Эль Али, Н.М. Насыбуллина // Тезисы Республ. научно-практ. конференции: «Актуальные вопросы повышения качества последипломной подготовки фармацевтических кадров». - Казань, 25 марта 2010 –С. 261-265.
21. Насыбуллина Н.М. Термогравиметрический анализ производных 1,2-бензотиазина / Н.М. Насыбуллина, Ф.А. Эль Али, Р.А. Мустафин, // Тезисы Всеросс. конференции с элементами научной школы для молодежи «Актуальные проблемы органической химии ».- Казань 6-8 октября 2010 г. – С. 155.
22. Насыбуллина Н.М. Создание лекарственных форм для наружного применения препаратов - производных 1,2-бензотиазина / Н.М. Насыбуллина, Ф.А. Эль Али, Р.А. Мустафин. // Тезисы сборника научных трудов: «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции». – в.65. - Пятигорск, 2010 – С. 217 - 218.
23. Насыбуллина Н.М., Использование ВЭЖХ для количественного определения теноксикама в лекарственной форме для наружного применения / Н.М. Насыбуллина, Ф.А. Эль Али, И.А. Салахов // Тезисы сборника научных трудов: «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции». – в.65. - Пятигорск, 2010 - С. 359 - 360.
24. Насыбуллина Н.М. Изучение набухающей способности полимера в геле напроксена / Н.М. Насыбуллина, Ф.А. Эль Али //Тезисы сборн. матер. Всеросс. конференции с элементами научной школы для молодежи: «Проведение научных исследований в области синтеза, свойств и переработки высокомолекулярных соединений, а также воздействие физических полей на протекание химических реакций». – Казань, 10-12 ноября 2010 г. – С. 71.
25. Насыбуллина Н.М. Аналитические исследования в области создания лекарственных форм производных пропионовой кислоты /Н.М. Насыбуллина, Ф.А. Эль Али //Тезисы сборн. матер. Всеросс. конференции с элементами научной школы для молодежи: «Проведение научных исследований в области синтеза, свойств и переработки высокомолекулярных соединений, а также воздействие физических полей на протекание химических реакций». – Казань, 10-12 ноября 2010 г. – С. 156.