Разработка технологии и методов стандартизации современных лекарственных средств на основе тибетских прописей
На правах рукописи
Кабишев
Константин Эдуардович
РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ И МЕТОДОВ СТАНДАРТИЗАЦИИ СОВРЕМЕННЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ НА ОСНОВЕ ТИБЕТСКИХ ПРОПИСЕЙ
14.04.01 – технология получения лекарств
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени
доктора фармацевтических наук
Москва
2011 г.
Диссертационная работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском институте лекарственных и ароматических растений (ВИЛАР) РАСХН.
Научный консультант:
доктор фармацевтических наук,
профессор Саканян Елена Ивановна
Официальные оппоненты:
доктор фармацевтических наук,
профессор Истранов Леонид Прокофьевич
доктор фармацевтических наук Лякина Марина Николаевна
доктор химических наук,
профессор Скачилова Софья Яковлевна
Ведущая организация:
ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет Федерального агентства Министерства здравоохранения и социального развития РФ»
Защита состоится «___» ________2011 г. на заседании Диссертационного совета Д 006.070.01 во Всероссийском научно-исследовательском институте лекарственных и ароматических растений (ВИЛАР) РАСХН (117216, г. Москва, ул. Грина, д.7) по адресу:123056, ул.Красина, д.2.
С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ВИЛАР по адресу: 117216, г. Москва, ул. Грина, д.7
Автореферат разослан «___» _______ 2011 г.
Ученый секретарь Диссертационного совета
Д 006.070.01
доктор фармацевтических наук Громакова
Алла Ивановна
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы. Традиционная медицина является одним из источников информации об использовании лечебных свойств растений. Систематизированный многовековой опыт, отраженный в тщательно разработанных схемах и методах лечения, зафиксирован в письменных руководствах (трактатах). Изучение рецептуры, содержащейся в трактатах, позволяет использовать растения, эффективность применения которых доказана веками, для разработки современных препаратов.
Следует отметить, что традиционная тибетская медицина широко использует лекарственное растительное сырье в виде твердых, мягких и жидких лекарственных форм: порошков (для присыпок, вдуваний и приема внутрь), пилюль, линиментов, мазей, паст, суппозиториев, водных вытяжек (настоев и отваров) и масляных экстрактов, настоек, сборов и др.
Однако, при создании современных лекарственных средств на основе тибетских прописей приемы, рекомендуемые соответствующими трактатами для получения конкретной лекарственной формы, нетехнологичны и требуют адаптации к условиям современных производств. В связи с этим, представляются актуальными исследования по разработке лекарственных средств природного происхождения на основе прописей тибетской медицины с использованием современных вспомогательных веществ и лекарственных форм.
Выбор объектов исследования был осуществлен при проведении анализа литературных источников традиционной тибетской медицины. Среди растений, характеризующихся полифункциональностью фармакологических эффектов, наше внимание привлекли представители рода остролодочник – Oxytropis (Pall.) DC. Их применяли наружно в виде мазей и присыпок как ранозаживляющие и противовоспалительные средства (при ранах, ожогах, экземах), интраназально (для вдуваний и капель) - как противовоспалительные и противовирусные средства при ОРВИ, в т.ч. гриппе, для внутреннего применения (в виде водных вытяжек), как противовоспалительные и антимикробные средства при тяжелых инфекционных заболеваниях. Кроме того, представляют интерес и растительные объекты, используемые для нормализации обменных процессов. К их числу следует отнести многокомпонентный сбор, используемый для приготовления лечебных ванн, применяемых при заболеваниях опорно-двигательного аппарата и кожи - "Табан Аршан", в состав которого входят побеги багульника болотного, трава полыни холодной, побеги мирикарии длиннолистной, побеги можжевельника сибирского, трава эфедры односемянной. В качестве растительного сырья применяемого индивидуально, выбрана череда трехраздельная, растение, широко используемое как в традиционной тибетской медицине, так и в официнальной медицинской практике для лечения кожных заболеваний обменного характера. Перспективным к углубленному изучению растением является софора желтоватая, применяемая в тибетской медицине в качестве средства для лечения заболеваний органов дыхания. Кроме того, для профилактики и лечения заболеваний эндокринной системы, представлялось целесообразным изучение такого растительного объекта как просо посевное, которое в составе лечебных «чан», применялось при сахарном диабете.
Однако, во всех случаях технология лекарственных средств по тибетским прописям трудоемка, не экономична и плохо воспроизводима в условиях современных производств, поэтому перечисленные растительные объекты были использованы в качестве моделей для создания методологических подходов к разработке современных лекарственных средств на основе тибетских прописей.
Цель исследования. Разработка современных подходов к технологии и стандартизации лекарственных средств растительного происхождения на основе прописей традиционной тибетской медицины.
Задачи исследования.
1. Анализ традиционных тибетских рецептурных прописей и выбор объектов для создания на их основе современных лекарственных средств.
2. Проведение исследований по оптимизации методики (ГФ XI) определения экстрактивных веществ в растительном сырье, как одного из основополагающих критериев оценки эффективности процесса экстракции.
3. Создание алгоритма разработки лекарственных средств на основе тибетских прописей.
4. Апробация предложенного алгоритма на моделях создания лекарственных средств из травы остролодочника остролистного, травы череды трехраздельной, корней софоры желтоватой и семян проса посевного, сбора Табан аршан, разработка технологии экстрактов из указанных видов сырья.
5. Разработка состава и технологии лекарственных форм с сухими экстрактами травы остролодочника остролистного, череды трехраздельной, сухим экстрактом корней софоры желтоватой, а также сухим и жидким экстрактом из семян проса посевного, сбора Табан аршан
6. Выбор показателей оценки качества и разработка методов их определения для полученных экстрактов и лекарственных средств на их основе.
7. Разработка нормативных и технологических документов в виде проектов ФС и ТУ, а также ЛР и ТИ.
Научная новизна.
- Впервые предложена модифицированная методика определения экстрактивных веществ в сырье (для ГФ XII), позволяющая учитывать поглощение сырьем экстрагента и кратность экстракций.
- Впервые предложен алгоритм разработки лекарственных средств на основе тибетских прописей, основанный на получении лекарственной формы по традиционной тибетской технологии и выборе соответствующей ей лекарственной формы, производство которой может быть осуществлено в условиях современных производств.
- Впервые проведена апробация предложенного алгоритма на моделях создания лекарственных средств:
- Экстракта травы остролодочника остролистного (патентом РФ 2116797 от10.08.98.);
- Мази с экстрактом травы остролодочника остролистного (патент РФ 2132692 от10.07.99.);
- Назальных капель с экстрактом травы остролодочника остролистного (патент РФ 2196597 от 5.03.2001.);
- Бальнеологических таблеток трех составов с экстрактом травы череды трехраздельной;
- Бальнеологических таблеток трех составов с экстрактом из сбора Табан аршан.
- Сиропа с жидким экстрактом семян проса посевного;
- Таблеток с сухим экстрактом семян проса посевного;
- Сиропа с сухим экстрактом корней софоры желтоватой;
- Геля для внутреннего применения с сухим экстрактом корней софоры желтоватой.
Практическая значимость.
1. Результаты исследований были использованы при разработке НД в виде проектов ФС на экстракт остролодочника остролистного, дерматологическую мазь с экстрактом остролодочника остролистного, назальные капли двух составов с экстрактом остролодочника остролистного, экстракт череды трехраздельной, таблетки двух составов с экстрактами травы череды и экстрактом из сбора Табан аршан, сироп и гель для внутреннего применения с экстрактом софоры желтоватой, ТУ на семена проса посевного, сухого и жидкого экстрактов семян проса, сироп и таблетки с экстрактами проса, также лабораторных регламентов и технологических инструкций на приведенные выше препараты и БАДы.
2. Результаты исследований были использованы рядом предприятий, а именно:
- Центром восточной медицины (препараты на основе сбора Табан аршан и корней софоры желтоватой);
- ООО «Травы Башкирии» (использование последовательной экстракции);
- ООО «Экос» (технология сиропа с растительными экстрактами);
- ФГУП «Муромский приборостроительный завод» (цех по производству галеновых ЛС: последовательная экстракция);
- ФГУП «Муромский приборостроительный завод» (цех по производству галеновых ЛС: методика определения экстрактивных веществ).
3. Результаты исследований внедрены в учебный процесс:
- ГОУ ВПО «Тюменская государственная медицинская академия Росздрава» (лекции ФПК по специальности «Фармацевтическая технология»
- ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» (материалы включены в лекции и практические занятия студентов фармацевтического факультета).
Связь задач исследования с проблемным планом НИР.
Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематикой и планом научно-исследовательских работ Всероссийского научно-исследовательского института лекарственных и ароматических растений по "Программе фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению развития агропромышленного комплекса Российской Федерации на 2006-2010 гг.", заданию 04.13. Разработка технологии производства высокоэффективных лечебных и профилактических препаратов из растительного сырья.
Основные положения, выносимые на защиту:
- Разработка методологических подходов к созданию современных лекарственных средств на основе прописей тибетской медицины.
- Методика определения экстрактивных веществ в растительном сырье, предназначенная для включения в ГФ XII издания.
- Состав, технология, методы стандартизации и фармакологическое действие экстракта остролодочника остролистного, дерматологической мази и интраназальных капель на его основе.
- Состав, технология, методы стандартизации бальнеологических таблеток «Табан аршан».
- Состав, технология, методы стандартизации экстракта травы череды и бальнеологических таблеток на его основе.
- Состав, технология, методы стандартизации жидкого и сухого экстрактов из семян проса посевного, сиропа и таблеток на их основе.
- Состав, технология и методы стандартизации сиропа и геля для внутреннего применения с экстрактом корней софоры желтоватой.
Апробация:
Основные результаты исследований доложены на международной конференции 7-8 апреля 1999 г., СПб, “Фармация в XXI веке: инновации и традиции”; 3 международном съезде “Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения”, СПб - Пушкин, 29 июня - 1 июля 1999; IV Международном съезде в Великом Новгороде, 2000 г.; VII Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство".-2-6 апреля 2001 г.; юбилейной межвузовской научно-практической конференции Пермской государственной фармацевтической академии в 2000 г.; региональной конференции "Фармация Центрального Черноземья: проблемы, достижения и перспективы" в Курске, декабрь 2000 г.; Международном съезде «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения» в Петродворце, 2001г; Научной юбилейной конференции, посв. 25-летию со дня открытия в Москве Центрального научно-исследовательского института рефлексотерапии в Москве, 1-2 марта, 2002 г.; IV Международной научно-практической конференции «Здоровье и образование» в Москве, 2003 г.; VШ Международном съезде, Мииккеле, Финляндия, 2004 г.; XI Российском Национальном конгрессе «Человек и лекарство» 19-23 апреля 2004 г.; международной научно-практической конференции, посвященной 85-летию академии, СПб 2004 г., научных конференций Пятигорской ГФА «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции», 2005, 2007, 2008 и 2009 гг., научной конференции «Фармация и общественное здоровье», Екатеринбург, 2010г.
Публикации:
По теме диссертации опубликована 61 работа, из них: 18 тезисов докладов, 39 статей (из них 17 работ, в изданиях рецензируемых ВАК РФ), 4 патента РФ, одна монография.
Объем и структура диссертации: Диссертация изложена на 358 страницах, включает введение, обзор литературы, восемь глав экспериментальных исследований, выводы, список литературы. Работа содержит 191 таблицу, 86 рисунков. Библиографический указатель включает в себя 510 источников литературы, из них 84 на иностранных языках.
Основное содержание работы
Современное состояние и перспективы разработки лекарственных средств на основе тибетских прописей (обзор литературы) (глава 1) состоит из разделов, характеризующих лекарственные формы, применяемые в тибетской медицине и современной медицинской практике. Приведен анализ способов получения экстракционных препаратов в тибетской практике и на современных отечественных и зарубежных фармацевтических производствах.
Приведены сведения о фитопрепаратах, применяемых в отечественной дерматологической практике и анализ ассортимента лекарственных форм, предназначенных для интраназального применения. Особое внимание уделено современным подходам к оценке качества лекарственных средств природного происхождения. Рассмотрены возможности бальнеотерапии и охарактеризованы современные подходы к разработке фитопрепаратов для бальнеологической практики.
Показаны перспективы использования растений тибетской медицины в профилактике и лечении сахарного диабета и заболеваний органов дыхания.
Проведен анализ тибетских прописей и обоснован выбор наиболее перспективных из них для создания лекарственных средств.
Материалы и методы исследований изложены в главе 2 диссертации: приведено описание объектов исследований и материалов, необходимых для выполнения работы. В разделе методы исследований изложены технологические (определение технологических показателей сырья, порошков и гранулятов, оценка технологических свойств таблеток, оценка качества мазей и капель и др.), фитохимические (цветные и осадочные реакции, бумажная и тонкослойная хроматография и др.), аналитические (спектрофотометрические, титриметрические, капиллярный электрофорез, ВЭЖХ), фармакологические (изучение острой токсичности, психотропного и ранозаживляющего действия, антигипоксической и противовоспалительной активности, иммунотропных свойств и др.) и микробиологические методики выполненных исследований. Разработка составов, отдельные фрагменты технологических и фармакологических исследований выполнены в ГОУ ВПО Санкт-Петербургская государственная химико-фармацевтическая академия.
Современные подходы к определению технологических показателей сырья, влияющих на процесс экстрагирования (глава 3)
Так как во всех случаях фитоэкстракты являются субстанциями для получения лекарственных средств, то на первом этапе исследований была оптимизирована их технология. Одним из основных критериев оценки эффективности процесса экстракции является определение выхода экстрактивных веществ. При этом, как правило, используется методика, рекомендованная ГФ XI. Однако в ней встречается ряд недостатков, одним из которых является то, что она основана на равновесии в системе сырье - экстрагент. При восполнении экстрагента равновесие нарушается, что приводит к заниженным результатам. Вторым недостатком является проведение процесса экстрагирования без учета коэффициента поглощения экстрагента сырьем, и, следовательно, в различных морфологических группах лекарственного растительного сырья гидромодуль различен. Ряд других известных методик также не позволяет адекватно оценить выход экстрактивных веществ в зависимости от используемой в дальнейшем технологии экстракционного препарата.
Для адекватной оценки содержания экстрактивных веществ в сырье были проведены исследования по модификации методики ГФ XI на 19 растительных объектах 8 морфологических групп с использованием экстрагентов различной полярности (вода очищенная, спирт этиловый 40%, 70% и 90%), а также с применением различных способов экстракции.
Суть предлагаемой методики заключается в том, что она учитывает особенности последующего технологического процесса.
Предлагаемая методика достоверна, эффективна и позволяет получить выход экстрактивных веществ выше на 5% - 10% по сравнению с методикой ГФ XI. Кроме того, показано, что учет поглощения экстрагента сырьем позволяет дополнительно увеличить выход экстрактивных веществ на 1-2%, что позволяет объективно оценивать эффективность процесса экстрагирования.
Полученные данные были использованы при разработке технологии экстрактов из травы остролодочника остролистного, череды трехраздельной и семян проса посевного, сбора Табан аршан, корней софоры желтоватой.
Методологические подходы к разработке лекарственных средств на основе растений тибетской медицины (глава 4)
В результате многочисленных исследований, нами был разработан алгоритм создания лекарственных средств на основе прописей традиционной тибетской медицины, представленный в виде схемы в на рис. 1.
Отличительной особенностью предложенного алгоритма является проведение технологических, биофармацевтических и фармакологических исследований по сравнительной оценке эффективности, безопасности и качества лекарственных форм, полученных по тибетской технологии и современных лекарственных форм с использованием одних и тех же растительных объектов
На последнем этапе проводится стандартизация разработанного лекарственного средства, изучаются сроки и условия хранения, составляется НД.
Реализация данного алгоритма была проведена на примерах создания лекарственных препаратов с сухим экстрактом остролодочника остролистного, бальнеотерапевтических средств с сухими экстрактами «Табан аршан» и череды трехраздельной, препаратов с экстрактами проса посевного и софоры желтоватой.
Разработка лекарственных форм с экстрактом остролодочника остролистного (глава 5)
В результате фитохимических исследований было установлено наличие в растениях рода остролодочник Oxytropis DC., в частности остролодочника остролистного, таких групп биологически активных веществ (БАВ), как флавоноиды, сапонины, кумарины, феноло- и аминокислоты, ситостерины. С целью изучения специфической активности остролодочника, была получена серия экстрактов с использованием экстрагентов различной полярности, детально изучен их фитохимический состав и проведена оценка фармакологической активности.
Установлено, что всеми видами фармакологической активности, характерными для травы остролодочника остролистного обладает экстракт, полученный последовательной обработкой сырья экстрагентами различной полярности. Таким образом, фитохимические исследования подтвердили идентичность экстракта набору БАВ травы остролодочника, а фармакологические исследования показали, что при разработке лекарственных форм целесообразно применять полиэкстракт. В связи с этим была разработана технология экстракта, оригинальность которой защищена патентом.
Как отмечалось ранее, остролодочник остролистный применялся в тибетской медицине в качестве ранозаживляющего и противовоспалительного средства в виде мази. Для проведения сравнительных исследований была получена мазь остролодочника остролистного по технологии тибетских трактатов, содержащая масляный экстракт остролодочника, в которой основой являлся животный жир.
Параллельно готовили мази на липофильных, дифильных и гидрофильных основах.
В качестве наиболее перспективной для дальнейших исследований была выбрана мазь, названная «Оксофил», содержащая в своем составе экстракт остролодочника остролистного в количестве 0,2 %, эмульсионную основу и консервант – кислоту сорбиновую. В качестве объектов сравнения были использованы мазь индометациновая, мазь «Флуцинар», «Лоринден», мазь и желе «Солкосерил», мазь календулы, а также мазь, приготовленная по тибетской технологии. Наличие выраженного ранозаживляющего действия (на модели линейной кожной раны и плоскостной раны), антипролиферативной, антиэкссудативной, местной и общей анальгезирующей активности мази с экстрактом остролодочника остролистного - «Оксофил» было подтверждено соответствующими фармакологическими исследованиями. Следует отметить, что мазь, полученная по тибетской технологии, по эффективности во всех экспериментах уступала мази «Оксофил».
На следующем этапе была проведена стандартизация мази "Оксофил" по таким показателям как подлинность и количественное определение содержания действующих веществ и консерванта, размер частиц, содержание воды, величина рН. Полученные результаты были использованы при составлении ФСП и лабораторного регламента на данную мазь.
Таким образом, разработана технология дерматологической мази с полиэкстрактом остролодочника остролистного, которая может быть реализована в условиях современных производств и позволяет с максимальной эффективностью использовать специфическую активность полиэкстракта.
Разработанные подходы к подбору концентрации и состава мази «Оксофил» были использованы при создании дерматологической мази с сухим экстрактом караганы колючей – Caragana spinosa (Pall.)DC, сем. Бобовых – Fabaceae L., которая является объектом тибетских прописей и используется в качестве противовоспалительного и ранозаживляющего средства.
Так как трава остролодочника остролистного применялась интраназально в виде отвара и порошка для вдуваний при острых респираторных заболеваниях, на следующем этапе были проведены исследования по разработке лекарственной формы для интраназального применения.
Для проведения сравнительных исследований были приготовлены капли остролодочника остролистного по технологии тибетских трактатов.
Скрининговые исследования по подбору оптимальной концентрации экстракта в лекарственных формах проводились с использованием методов “in vivo” путем постановки серии экспериментов, позволяющих определить влияние экстракта остролодочника в различных концентрациях на слизистую оболочку носа кролика (по разработанному нами методу оценки противовоспалительной активности назальных препаратов на модели острого катарального ринита с использованием гистологических методов; лекарственные формы с экстрактом остролодочника наносили как на неповрежденную слизистую оболочку,так и на слизистую оболочку после формалинового отека (рис. 2) ).
Для обеспечения пролонгированного действия в состав капель вводили высокомолекулярные вещества (ВМС): метилцеллюлозу-100 (МЦ), Na-карбоксиметилцеллюлозу (Na-КМЦ), оксипропилметилцеллюлозу (ОПМЦ). При выборе концентрации ВМС руководствовались показателями вязкости раствора.
Кроме того, были проведены исследования по определению возможности получения капель на эмульсионной основы м/в.
Анализ данных, свидетельствует о том, что применение капель на гидрофильной и эмульсионной основах приводит к значительному увеличению этого коэффициента, а значит и ускорению очищения слизистой оболочки носа.
Таким образом, для дальнейших исследований были выбраны капли, содержащие 0,05% экстракта остролодочника остролистного как на гидрофильной основе – 2% растворе оксипропилметилцеллюлозы, так и на эмульсионной основе, состоящей из масла персикового 5,0 г, эмульгатора Т-2 – 2,5 г, ОС-20 – 2,5 г, пропиленгликоля – 1,5 г и воды очищенной до 100 г.
Было установлено, что при введении капель на гидрофильной основе имело место быстрое и полное восстановление транспортной функции мерцательного эпителия, а при применении капель на эмульсионной основе восстановление подвижности ресничек мерцательного эпителия носило плавный характер.
Рис. 2. Влияние лекарственных форм с экстрактом остролодочника остролистного на величину коэффициента ускорения движения ресничек мерцательного эпителия
Это позволяет рекомендовать капли, приготовленные на гидрофильной основе, в острую фазу воспалительного процесса, когда преобладают явления альтерации, а капли на эмульсионной основе - на более поздних стадиях воспаления.
Изучение специфической активности капель проводили по следующим показателям: влияние на течение острого катарального ринита, на транспортную функцию ресничек мерцательного эпителия слизистой оболочки носа, на некоторые показатели иммунитета, а также определение противоаллергической, интерфероногенной и противовирусной активности. В качестве препаратов сравнения использовали “Пиносол” и “Cанорин”.
Результаты фармакологических исследований свидетельствуют о том, что капли «Оксофил» оказывают выраженное благотворное влияние на течение острого ринита, превосходя по своей активности препараты сравнения и сравнимы с каплями приготовленные по тибетской технологии, что подтверждает адекватность разработанной технологии.
Влияние препарата на процесс антителообразования изучали в луночной реакции гемагглютинации на 30-ти белых беспородных крысах самцах. В результате эксперимента выявлено, что интраназальное введение капель "Оксофил" не изменяет уровень антителопродукции у крыс.
Для определения влияния исследуемых капель с экстрактом остролодочника на функциональную активность лимфоцитов использовали реакцию бластной трансформации лимфоцитов под действием митогена.
В результате проведенного исследования можно сделать вывод, что интраназальные капли с экстрактом остролодочника оказывают умеренное стимулирующее влияние на Т-клеточный иммунный ответ, сравнимое с препаратом «Тимоген».
Противоаллергическое действие капель исследовали на модели системной анафилаксии (анафилактический шок) на морских свинках.
Испытание капель на противовирусную и интерфероногенную активность проводилось на базе лаборатории этиологических методов диагностики НИИ детских инфекций под руководством проф. Аксенова О.А. Противовирусную активность экстракта в отношении вируса парагриппа (штамм Сендай) и вируса герпеса 1-го серотипа определяли в культуре ткани L-41 (лимфобласты человека). Установлено, что капли были активны в отношении вируса герпеса 1-го серотипа.
При испытании капель на интерфероногенную активность установлено, что они стимулируют в основном интерферон -типа.
Для оценки качества капель использовали такие показатели, как подлинность (флавоноидные соединения и консервант), количественное содержание (флавоноидные соединения и консервант), величина рН, плотность, номинальный объем, микробная чистота.
Эти показатели были включены в проект ФСП, кроме того нами была осуществлена наработка капель в лабораторных условиях и составлен лабораторный регламент на получение капель «Оксофил».
Определение сроков годности капель проводили в условиях естественного хранения при температуре +3-5оС. Исходя из полученных результатов наблюдений срок годности составил 5 лет. Все качественные и количественные характеристики капель соответствовали требованиям проекта ФСП.
Таким образом, предложены высокоэффективные интраназальные капли с полиэкстрактом остролодочника двух составов, обладающих противовоспалительным и противовирусным действием, технология которых может быть реализована в условиях современных фармацевтических производств.
Разработка состава и технологии бальнеологической лекарственной формы (растворимых таблеток) с экстрактами череды трехраздельной и сбора «Табан аршан») (глава 6)
Несмотря на эффективность бальнеологических процедур, широко применяемых в тибетской медицине их традиционная технология в условиях современной бальнеотерапии неприемлема ввиду длительности и трудоемкости процесса.
В частности, используемый на одну процедуру (ванну) отвар, необходимо готовить в 3 приема в емкости вместимостью около 30 литров, используя для этих целей 3- 4 кг сырья. При этом продолжительность процесса экстракции составляет 10-12 часов, а срок хранения такого отвара ограничен сутками.
Альтернативной лекарственной формой для приготовления ванн могут служить фитоэкстракты. При этом, предпочтение должно быть отдано сухим экстрактам, так как они стабильны при хранении и удобны при транспортировке.
Апробация была проведена на примере сухого экстракта травы череды трехраздельной. Для разработки технологии сухого водорастворимого экстракта череды трехраздельной нами был проведен комплекс исследований, включающий научное обоснование выбора экстрагента, на основании его доступности, удобства использования, возможности регенерации, оптимизацию процесса экстракции БАВ из сырья, с учетом основных факторов, влияющих на выход экстрактивных и основных групп действующих веществ. При этом было установлено, что оптимальным экстрагентом является 20% спирт этиловый.
Проведенные исследования подтвердили необходимость оптимизации технологии экстракции БАВ из травы череды трехраздельной, с учетом влияния на этот процесс таких факторов, как измельченность сырья, гидромодуль, продолжительность экстракции и количество экстракций.
Оптимизация технологии экстракта из травы череды трехраздельной проводилась при помощи метода латинского квадрата с построением плана 4х4. Согласно требованиям ФС стандартизацию травы череды трехраздельной проводили по содержанию в ней полисахаридов.
В качестве основных критериев, позволяющих оценить эффективность процесса экстракции, нами были выбраны такие характеристики, как выход полисахаридов и экстрактивных веществ.
Для дальнейшей работы были выбраны следующие условия проведения экстракции: измельченность сырья 1 – 2 мм, гидромодуль 1:10, кратность 2, продолжительность экстракции 1 ч.
Параметры, полученные в результате оптимизации процесса экстракции, в дальнейшем были использованы при наработке экстракта в лабораторных условиях и составлении лабораторного регламента.
Оценку качества сухого экстракта проводили по следующим показателям: содержание влаги, наличие тяжелых металлов, содержание действующих веществ. При этом для определения количественного содержания полисахаридов в экстракте череды, наряду с гравиметрическим методом была использована методика спектрофотометрии, основанная на реакции взаимодействия продуктов гидролиза полисахаридов с антронсерным реактивом с образованием окрашенных продуктов, имеющих максимум поглощения при длине волны 625 нм.
Установлено, что содержание полисахаридов в экстракте составляет около 18%. Метрологические характеристики полученных результатов анализа свидетельствуют о точности и воспроизводимости УФ-спектроскопии и перспективности ее использования при оценке качества травы череды трехраздельной и экстракта, полученного из нее.
Для количественного определения содержания флавоноидных соединений в экстракте череды предложена спектрофотометрическая методика, основанная на реакции комплексообразования с алюминия хлоридом.
Все методики, используемые нами при стандартизации экстрактов и лекарственных форм на их основе, валидированы по показателям линейность, воспроизводимость, повторяемость и правильность.
Согласно полученным данным содержание полисахаридов в экстракте череды трехраздельной должно составлять не менее 17,0%, а содержание флавоноидов в экстракте череды трехраздельной в пересчете на лютеолин должно составлять не менее 0,50%. По разработанной технологии наработано пять серий экстракта, которые заложены на хранение в естественных условиях. Полученные данные были использованы при составлении проектов ФСП и лабораторного регламента.
Ранее был получен сухой экстракт сбора «Табан аршан», также предназначенный для бальнеологических процедур и осуществлена его стандартизация (Саканян Е.И., 1996).
Нами была проведена наработка суммарного экстракта «Табан аршан» в условиях предприятия «Хармс». Для оценки его качества были разработаны и утверждены технические условия ТУ № 9158 - 001- 00481985-2002. Получено разрешение на его применение в качестве косметического средства в бальнеологической практике.
Для разработки таблетированной лекарственной формы с сухими экстрактами череды и «Табан аршан» необходимо было: определить оптимальную концентрацию экстракта в лекарственной форме, а также состав и количество вспомогательных веществ, для обеспечения необходимых технологических свойств гранулята и последующего быстрого растворения таблеток в теплой воде.
Проверка технологических свойств экстракта череды показала, что он обладает низким значением насыпной массы (0,3920 г/см3), неудовлетворительной сыпучестью (1,10-1,30 г/с), плохой прессуемостью, угол естественного откоса составил 35-45 о, а также гигроскопичностью. Все эти характеристики указывают на необходимость улучшения структурно-механических свойств экстрактов путем введения вспомогательных веществ и последующего гранулирования таблетируемой массы. В качестве связующего вещества был выбран 5% крахмальный клейстер, в количестве 1% от таблетируемой массы. Кроме того, в состав таблеток в качестве разрыхлителя был введен твин-80. При разработке составов бальнеологических таблеток были проведены эксперименты по созданию таблеток традиционного состава (1) и быстрорастворимых таблеток (состав 2).
При этом в таблетки состава №1 был введен как наполнитель натрия хлорид, в качестве вспомогательного вещества, обеспечивающего улучшение технологических характеристик экстракта, а также способствующего проявлению его терапевтического эффекта при приеме бальнеологических процедур.
Преимуществом таблеток второго состава является высокая скорость растворения. Для обеспечения этого качества в состав таблеток были введены газовыделяющие компоненты: натрия гидрокарбонат, янтарная и сорбиновая кислоты. Известно, что янтарная кислота является биологически активным веществом и используется в ряде биологически активных добавок и наружных лекарственных и косметических средств в качестве антисептического, антигипоксического, противовирусного средства. Сорбиновая кислота обладает выраженным антимикробным действием, что обеспечивает в ряде случаев консервирующий эффект.
При разработке составов таблеток с экстрактом «Табан аршан» были проведены аналогичные исследования. Для экстракта «Табан аршан» технологические показатели составили: значение насыпной массы (0,3160 г/см3), сыпучесть (0,8-1,10 г/с), угол естественного откоса 35-45 о. Влажность 1,8%.
Для проведения предварительной стадии таблетирования, как показали сравнительные технологические исследования, следует использовать метод влажной грануляции, с последующим продавливанием таблеточной массы через сито-гранулятор с отверстиями диаметром 5 мм. Для сушки влажного гранулята использовали сушильный шкаф (температура 45-50°С). Оптимальное время сушки гранулята было определено экспериментально, по величине остаточной влажности, которая должна быть не более 3-4%. Оно составило около 60 минут. Для осуществления стадии сухого гранулирования использовали сито-гранулятор с отверстиями диаметром 1-2 мм. Опудривание гранул проводили в емкости, содержащей тальк в количестве 1% от таблетируемой массы.
Для выбора оптимального режима таблетирования гранулята, наработанного в указанных выше условиях исследовали влияние на качество таблеток давления прессования, от которого зависят не только такие показатели качества как прочность на истирание, прочность на сжатие, растворимость, но и производительность, и износ таблеточных машин. Таблетки средней массы 0,85 г и диаметром 0,12 мм получали при удельных давлениях прессования 30, 60, 90, 120, 150, 180 МПа.
Полученные таблетки трех составов с экстрактами череды и «Табан аршан» были исследованы по таким технологическим и физико-химическим характеристикам как прочность на истирание, прочность на сжатие, растворимость в зависимости от давления прессования. Результаты проведенных экспериментов свидетельствуют о том, что удовлетворительные показатели качества таблеток наблюдаются при давлении прессования более 120 МПа.
Следует отметить, что в случае получения шипучих таблеток с целью предотвращения взаимодействия компонентов, при добавлении крахмального клейстера и твина-80 использовали раздельное гранулирование кислотного и щелочного компонентов с половинным количеством экстракта.
Полученные партии таблеток различных составов были проанализированы по таким показателям, как описание, растворимость, качественный анализ и количественное содержание основных групп действующих веществ.
Таблетки с экстрактом «Табан аршан» стандартизовали по количественному содержанию дубильных веществ (титриметрически) и флавоноидов (спектрофотометрически).
Для оценки биодоступности (степени высвобождения действующих веществ) разработанных препаратов использовали метод равновесного диализа.
Сущность метода заключается в моделировании процесса прохождения действующих веществ через кожные покровы с использованием мембраны, с размером пор, соответствующих таковым кожным покровам (0,2 мкм).
Для проведения равновесного диализа была разработана система, состоящая из двух камер: наружная, объемом 50 мл и внутренняя (объемом 20 мл), разделенные между собой мембраной (рис.3). Внешняя камера заполняется определенным объемом физиологического раствора, внутренняя – водой, на мембрану помещается исследуемый препарат. Процесс диализа осуществляется при температуре 37-40 °С, что соответствует обычной температуре ванны. Время диализа составляет не более 30 минут.
Биодоступность разработанных составов оценивали по количеству БАВ, перешедших из внутренней камеры во внешнюю, в течение 30 минут.
Так как ранее было отмечено, что основными группами БАВ таблеток с экстрактом «Табан аршан» являются дубильные вещества и флавоноиды, то в основу оценки биодоступности легли методики определения количественного содержания этих групп БАВ в жидкости наружной и внутренней камеры.
1
2
3
4
- Вода (t° 37-40°C)
Рис. 3. Схема диализной камеры.
- внутренняя диализная камера; 2 – внешняя диализная камера; 3 – мембрана; 4 – таблетка; 5 – термостат
Для качественного анализа и количественной оценки были использованы спектрофотометрия и ВЭЖХ. Результаты приведены на рис. 4, 5 и табл.1.
Рис. 4. Хроматограмма водного раствора таблеток
с экстрактом «Табан аршан»
Рис. 5. Хроматограмма диализата таблеток с экстрактом
«Табан аршан»
Таблица 1. Флавоноидный состав диализата таблеток с экстрактом «Табан аршан»
| Время, мин | Площадь | Площадь, % | Идентифицировано |
| 14,3 | 14848 | 31,110 | Рутин |
| 16,5 | 2792 | 5,851 | Гиперозид |
| 21,2 | 21190 | 44,396 | Не идентифицировано |
| 28,5 | 1805 | 3,782 | Лютеолин |
| 29,0 | 7093 | 14,861 | Кверцетин |
| Итого | 47729 | 100,000 |
Полученные результаты свидетельствуют о том, что в диализате таблеток с экстрактом «Табан аршан» преобладают рутин и кверцетин. В меньшем количестве диализат таблеток содержит лютеолин.
Это, в свою очередь, позволяет сделать вывод о том, что флавоноидные соединения диализируют через полупроницаемую мембрану в количестве, составляющем около 45% от исходного содержания, что свидетельствует о наличии у этой группы БАВ как поверхностного действия на кожные покровы, так и воздействия на организм в целом путем проникновения в системный кровоток. Анализ перехода через полупроницаемую мембрану дубильных веществ и полисахаридов, выполненный с использованием той же методики, свидетельствует о том, что для них характерна невысокая проницаемость, составляющая около 7%, объяснимая достаточно большим размером молекул этих групп БАВ.
Полученные результаты позволяют предположить наличие более выраженного поверхностного воздействия полисахаридов и дубильных веществ на кожные покровы, что в свою очередь может способствовать наличию подсушивающего, ранозаживляющего и противовоспалительного действия бальнеологических процедур. Таким образом, разработанная модель оценки биодоступности бальнеологических процедур с растительными экстрактами, может быть предложена в качестве стандартной модели при проведении оценки биодоступности таблетированных бальнеологических лекарственных форм. Она позволяет оценить степень поверхностного и проникающего действия основных групп БАВ разрабатываемых лекарственных средств.
Так как растительные экстракты, входящие в состав бальнеологических таблеток содержат комплекс БАВ, то необходимо учесть возможную степень их взаимного влияния на высвобождение.
С этой целью по аналогичной технологии были получены шипучие таблетки, содержащие индивидуальные действующие вещества – танин, сумма полисахаридов, выделенных в чистом виде из травы череды и флавоноидные соединения – рутин и цинарозид в количествах, эквивалентных их содержанию в бальнеологических таблетках с растительными экстрактами.
Для разработанных таблеток с индивидуальными веществами был проведен диализ, в условиях, аналогичных для таблеток с экстрактами. Результаты представлены на рис. 6 и 7.
В результате проведенных исследований определено, что индивидуальные вещества (танин, полисахариды, флавоноидные соединения) диализируют из таблеток в количествах, сопоставимых с высвобождаемым количеством аналогичных групп БАВ из таблеток с растительными экстрактами, содержащими их комплекс. Взаимного влияния на высвобождение из таблеток данные группы БАВ не оказывают.
 |
| Рис. 6. Содержание основных групп БАВ в диализате таблеток с экстрактом череды |
Рис.7. Содержание основных групп БАВ в диализате
таблеток с экстрактом «Табан аршан»
Острую токсичность экстрактов оценивали на белых нелинейных мышах самцах массой тела при внутрибрюшинном и пероральном пути введения. Оценку антигипоксической активности экстрактов проводили на модели острой гипоксической гипобарической гипоксии.
Установлено, что экстракты обладают противогипоксической активностью. Ранозаживляющее действие экстракта череды проверяли на модели линейной кожной раны крыс. В ходе выполненных исследований выявлено стимулирующее влияние экстракта на заживление раневого повреждения кожи. Кроме того, для оценки ранозаживляющей активности таблетированных лекарственных форм была разработана оригинальная методика проведения бальнеологических процедур. В качестве препарата сравнения были использованы ванны с экстрактом хвойным натуральным. Животные контрольной группы проходили бальнеологические процедуры в воде очищенной.
Установлено, что все анализируемые образцы обладают ранозаживляющим действием. В результате микробиологических исследований проведена сравнительная оценка антимикробного действия экстрактов «Табан аршан», череды, таблетированных лекарственных форм на их основе и препарата сравнения – экстракта хвойного. Установлено, что из трех проверенных экстрактов наиболее выраженным бактерицидным действием по грамм-положительным и грамм-отрицательным микроорганизмам обладает экстракт «Табан аршан» и таблетки на его основе, что сопоставимо с активностью экстракта череды по действию на грамм-положительные бактерии. Активность хвойного экстракта значительно ниже и не зависит от морфологических особенностей тест-микроорганизмов.
Таким образом, предложена технология водорастворимых экстрактов, как на основе моносырья, так и многокомпонентных сборов и современные лекарственные формы, которые могут существенно повысить качество проводимых лечебных бальнеологических процедур. Результаты исследований реализованы в виде соответствующих проектов ТУ и ТИ.
Разработка технологии и стандартизация экстрактов из семян проса посевного и лекарственных средств на их основе (глава 7)
В тибетской медицине семена проса посевного используются для лечения заболеваний обменного характера в виде «чана» – спиртосодержащего препарата. Для проведения сравнительной оценки нами был получен «чан» из семян проса посевного по тибетской технологии. Схема приведена на рис.8.
Семена проса Вода Дрожжи
Брожение
нагрев до 40 оС,
выдержка 3 суток
Процеживание
Рис.8. Схема получения чана из семян проса посевного.
Полученный «чан» представлял собой жидкость темно-желтого цвета, с сильным характерным запахом. Однако, как и в случае бальнеологических лекарственных форм, получение «ЧАН» длительно и нетехнологично в условиях современных производств, а готовый продукт имеет небольшой срок хранения.
В связи с тем, что семена проса посевного не являются фармакопейным сырьем, на первом этапе была проведена их макро- и микродиагностика, а также товароведческий анализ по основным числовым показателям. Результаты приведены в табл.2.
Таблица 2.Товароведческий анализ семян проса (n=5; Р95%)
| Наименование сырья | Анализируемые показатели | |||||
| Абсолютная влажность, % | Общая зола с учетом влаж- ности сырья, % | Зола, не растворимая в 10% растворе НСI, % | Экстрактивные вещества, % | Минеральные примеси, % | Органичес- кие примеси, % | |
| Семена проса | 7,1 +0,55 | 4,8 + 0,21 | 2,1 +0,28 | 18,3 +3,15 | 0,6 + 0,02 | 0,7+0,03 |
С целью выявления основных групп БАВ нами проведено фитохимическое исследование семян проса посевного, которое позволило установить наличие флавоноидных соединений, аминокислот и полисахаридов. При изучении состава флавоноидных соединений установлено, что они являются производными кверцетина, рамназина, кемпферола и изокверцетрина. Изучение аминокислотного состава спиртового извлечения из семян проса посевного позволило заключить, что в нем содержится 10 аминокислот, идентифицированных как триптофан, фенилаланин, лейцин, метионин, валин, пролин, треонин, серин, аланин, глицин. Так как основной группой БАВ являются флавоноидные соединения и аминокислоты, то стандартизацию сырья целесообразно проводить по этим группам БАВ. Для количественного определения флавоноидных соединений была использована спектрофотометрическая методика. Изучение УФ – спектра продуктов кислотного гидролиза суммы флавоноидов семян проса посевного (комплекс с алюминия хлоридом), показало наличие максимума поглощения при длине волны 410 нм, характерной для кверцетина (в аналогичных условиях), поэтому количественное определение суммы флавоноидных соединений в сырье и экстрактах проводили при данной длине волны (в пересчете на кверцетин). Установлено, что в семенах проса посевного содержание суммы флавоноидных соединений в пересчете на кверцетин должно быть не менее 0,2%.
Для количественной оценки содержания аминокислот проведено определение с помощью метода капиллярного электрофореза. Результаты определения представлены на рис. 9 и 10 и в табл.3.
Анализ полученных данных позволяет сделать вывод о том, что содержание триптофана значительно больше, чем других свободных аминокислот, далее следуют лейцин, пролин, фенилаланин, валин, треонин и аланин. При этом содержание таких аминокислот как метионин, серин и глицин незначительно. В целом содержание суммы аминокислот составляет около 0,1%.
Далее определялись технологические показатели сырья и изучались основные факторов, влияющих на процесс экстрагирования биологически активных веществ из семян проса посевного.
Рис.9. Электрофореграммы стандартного раствора аминокислот (вверху) и извлечения (внизу)
Примечание: Arg – аргинин; Lys- лизин; Tyr-тироксин; Phe-фенилаланин; Leu, Ile-лейцин, изолейцин; Met-метионин; Val-валин; Pro-пролин; Thr-треонин; Ser-серин; Ala-аланин; Gly-глицин; Asp-аспарагин; Glu-глицин.
Рис. 10. Электрофореграммы стандартного раствора триптофана (вверху) и извлечения (разбавление 1:4, внизу).
Примечание:Trp- триптофан
Таблица 3. Результаты анализа аминокислот в семенах проса посевного
| Аминокислота | Содержание свободных аминокислот, % |
| Триптофан | 0,016 |
| Фенилаланин | 0,008 |
| Лейцин | 0,012 |
| Метионин | 0,005 |
| Валин | 0,008 |
| Пролин | 0,011 |
| Треонин | 0,007 |
| Серин | 0,004 |
| Аланин | 0,008 |
| Глицин | 0,006 |
| Всего | 0,085 |
В результате оптимизации технологии сухого экстракта из семян проса посевного для дальнейшей работы были выбраны следующие условия проведения экстракции: измельченность сырья 0,5 – 1 мм, гидромодуль 1:10, кратность 3, продолжительность экстракции 120 мин, что обеспечивает высокий выход БАВ.
В качестве экстрагента для получения сухого экстракта был выбран спирт этиловый 40%, так как он обеспечивает переход основных групп БАВ (флавоноидные соединения и аминокислоты) и, в отличие от 70% и 95% спирта, не экстрагирует из семян жирное масло.
Изучение эффективности процесса экстракции показало, что выбранные параметры экстракции являются оптимальными, приводя к извлечению из сырья порядка 82% экстрактивных веществ и 85% флавоноидов.
Параметры, полученные в результате оптимизации процесса экстракции, в дальнейшем были использованы при наработке экстракта в лабораторных условиях и составлении технологической инструкции. Экстракт получали методом дробной мацерации, с последующим сгущением и сушкой. Полученный экстракт представляет собой порошок коричневого цвета, горьковатого вкуса, характерного запаха. Оценку качества сухого экстракта проводили по следующим показателям: содержание влаги, гигроскопичность, растворимость, наличие тяжелых металлов, содержание действующих веществ.
Количественное содержание суммы флавоноидных соединений в сухом экстракте проса определяли спектрофотометрически. Установлено, что в сухом экстракте проса содержание суммы флавоноидных соединений в пересчете на кверцетин должно быть не менее 0,9%, суммы аминокислот – около 0,3%.
Для изучения срока годности было наработано 5 серий экстракта, которые заложены на хранение в естественных условиях в банках из темного стекла, залитых парафином. Оценку качества экстракта проводили согласно НД. В результате исследований установлен срок годности, составляющий 3 года.
Для опытной наработки экстракта проса жидкого было использовано сырье с исходным содержанием суммы флавоноидных соединений 0,21% и экстрактивных веществ – 18,3%.
При выборе метода экстракции для получения жидкого экстракта выбор был сделан в пользу метода реперколяции. Он позволяет получить концентрированные вытяжки без последующего упаривания, а постоянное поступление экстрагента в перколяторы способствует максимальному переходу БАВ из сырья в вытяжку и полное истощение сырья. Количество экстрагента берут 8-кратное по отношению к сырью. При выборе измельченности учитывали результаты оптимизации приведенные выше – измельченность 0,5-1 мм.
Полученный жидкий экстракт (1:1) представляет собой жидкость желтого цвета с характерным запахом, сладковатого вкуса. Хорошо смешивается с водой и 20-70% этиловым спиртом.
По данной технологии наработано 5 серий жидкого экстракта.
Установлено, что выход экстрактивных веществ составляет 18,5% (эффективность 85%), выход флавоноидных соединений составляет 0,2% (эффективность 90%).
Стандартизацию жидкого экстракта осуществляли по общепринятым методикам: описание, подлинность, подтверждающую наличие флавоноидных соединений и аминокислот. Количественное определение суммы флавоноидных соединений проводили спектрофотометрически (суммы флавоноидных соединений в пересчете на кверцетин должно быть не менее 0,2%).
Содержание свободных аминокислот в жидком экстракте определяли методом капиллярного электрофореза. Оно должно быть не меньше 0,15%.
Содержание спирта, плотность, тяжелые металлы и сухой остаток определяли по методикам ГФ XI. Таким образом, установлено, что плотность исследуемых образцов составляет 1,3478-1,3601 г/см3, содержание спирта в экстракте не менее 36% об., тяжелых металлов не более 0,001%, содержание сухого остатка в жидком экстракте проса должно быть не менее 18%.
Определение сроков и условий хранения проводили для экстракта, расфасованного по 50 мл во флаконы темного стекла ФВ-50-20 по ОСТ 64-2-71-80, укупоренные пробками из полиэтилена по ГОСТ 163-37-77, с навинчиваемыми пластмассовыми крышками по ОСТ 64-2-87-81. Хранение осуществляли в темном месте при температуре 1825 оС. Полученные результаты свидетельствуют о воспроизводимости показателей качества, заложенных в спецификацию, в течение 3 лет.
Специфическую активность жидкого экстракта проса определяли в опытах «in vivo».
При оценке антигипоксической активности в опытах на мышах, экстракт проса жидкий (в дозе 1,78 г/кг (доза определена экспериментально) и «чан» (в дозе 2,51 г/кг (доза определена экспериментально) на модели острой гипобарической гипоксии (препарат сравнения – гутимин в дозе 0,025 г/кг) показали прирост жизни (по отношению к контролю – воде очищенной) на 580% и 490% соответственно, (гутимин – на 680%). Выживаемость при использовании экстракта проса составила 30%, чана – 25% и гутимина – 40%, длительность жизни составила около 5 мин у всех препаратов (контроль- 1 мин.). Оценку гипогликемического действия разработанных препаратов проводили на модели адреналиновой гипергликемии на крысах (1,5 мг/кг). В качестве препарата сравнения был использован фармакопейный гипогликемический сбор «Арфазетин» и экстракт галеги. Контроль – вода очищенная. Для оценки гипогликемического действия использовали глюкозотолерантный тест. Проверка антидиабетической активности экстрактов проводилась на модели аллоксанового диабета.
Таким образом, в результате проверки специфической активности установлено, что экстракт проса жидкий превосходит препарат сравнения «Арфазетин» и средство, приготовленное по тибетской технологии – «чан».
Предварительными исследованиями физико-химических, технологических и структурно-механических свойств сухого экстракта проса было установлено, что экстракт обладает плохой прессуемостью, низким значением насыпной массы и неудовлетворительной сыпучестью; таблетки его имеют плохую распадаемость, а также значительную силу выталкивания из пресс-формы (табл.4).
Таблица 4. Технологические характеристики экстракта проса посевного сухого
| № пп | Характеристика | Ед. измерения | Экстракт |
| 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 | Влажность Сыпучесть Угол естественного откоса Насыпная масса Коэффициент вибрационного уплотнения Коэффициент уплотнения Коэффициент прессуемости Прочность Истираемость Сила выталкивания Распадаемость | % кг/с•10-3 град. кг/м3 Н % Н с | 3,75+0,33 4,03+0,19 45,3+2,5 450 460 2,56+0,09 0,070 82,18+16,1 1,47 279,9+24,8 1200 |
Все эти характеристики указывают на необходимость улучшения структурно-механических свойств экстракта путем влажного гранулирования, а также введения вспомогательных веществ. Результаты подбора вспомогательных веществ представлены в табл.5.
Параметром оптимизации явилась распадаемость таблеток. Анализ полученных результатов показал, что наиболее эффективен из разрыхляющих веществ крахмал, вид связующего вещества существенного влияния на качество таблеток не оказывает.
Таблица 5. Основные показатели качества таблеток полученных с использованием различных вспомогательных веществ
| Состав | Показатели качества таблеток | |||||
| Лек. в-во | Вспомогательные вещества | Сила выталкивания, Н | Прочность на излом, Н | Истирание, % | Распадаемость, с | |
| Экстракт | Крахмал 10% до грануляции, 5% крахм. клейстер 10% раствор ПВП, крахмал 15% после грануляции 20% р-р ПВП, крахмал 15% после грануляции 30% сах. сироп, крахмал 15% после грануляции 3% р-р МЦ, крахмал 15% после грануляции | 250,88 267,66 326,34 320,78 199,92 | 84,28 78,40 51,94 41,16 82,32 | 0,33 0,34 0,24 0,48 0,38 | 600 240 810 600 360 | |
С целью выбора оптимальных условий таблетирования, необходимых для получения качественных таблеток, изучено влияние остаточной влажности, фракционного состава гранулята, давления прессования таблеток на их качество. Анализ результатов экспериментов показал, что с понижением остаточной влажности гранулятов улучшается их сыпучесть, увеличивается сила выталкивания таблеток из пресс-формы, повышается прочность таблеток на излом и истирание, ухудшается распадаемость. На основании полученных данных оптимальная остаточная влажность составляет 0,65+1,43%.
Фракционный состав гранулятов также оказывает влияние на качество гранулятов и таблеток. С увеличением количества мелкой фракции (0,25мм; 0,125мм) наблюдается тенденция к уменьшению сыпучести гранулятов и повышению силы выталкивания таблеток из пресс-формы. В результате проведенных экспериментов установлены оптимальные фракционные составы гранулятов: 1,0-0,25 мм, фракции 0,125 не более 5%. Повышение давления прессования таблеток до определенных значений повышает механическую прочность таблеток, ухудшает распадаемость, увеличивает силу выталкивания таблеток из пресс-формы. Значительные изменения величины давления прессования (более 180 Мпа) приводят к понижению механической прочности таблеток. Таким образом, оптимальное давление прессования составляет 120-160 Мпа. Показатели, требующие нанесения покрытий на эти таблетки отсутствуют. Таким образом, получены таблетки с экстрактом проса сухим плоскоцилиндрические, серовато-бурого цвета с вкраплениями. Диаметр 9,0+0,05мм; высота 3,0+0,4мм.
Так как основной группой биологически- активных веществ (БАВ) экстракта являются флавоноиды, то идентификацию и определение количественного содержания проводили по этой группе БАВ. Содержание суммы флавоноидов в пересчете на кверцетин в одной таблетке должно быть не менее 0,001 г.
Для определения сроков годности и условий хранения таблеток проведена их наработка и закладка на хранение в естественных условиях в банках из стекломассы с треугольным венчиком типа БВС-20-27,5-ОС-1 по ТУ 64-2-239-79, укупоренную крышкой типа 1.2 по ОСТ 64-2-87-81. Полученные результаты свидетельствуют о воспроизводимости показателей качества, заложенных в спецификацию, в течение 3 лет. Нами также разработана форма с экстрактом проса жидким в виде сиропа. Для приготовления сиропа взят сорбит, который используется в случаях, связанных с невозможностью применения сахара и глюкозы. В качестве консерванта использована сорбиновая кислота.
Сироп с экстрактом проса жидким представляет собой вязкую жидкость желтого цвета, без характерного запаха. Для подтверждения подлинности используется цветная реакция на флавоноидные соединения (цианидиновая проба) и метод ТСХ; сорбиновую кислоту предложено идентифицировать методом ТСХ и по максимуму поглощения в УФ области при длине волны 254 нм; для идентификации сорбита используют метод ТСХ. Кроме того, определяются такие показатели как плотность (при 20 оС 1,24-1,26 г/см3); величину рН (4,4 - 4,7); показатель преломления (1,4390-1,4410). Установлено, что в сиропе с экстрактом проса содержание суммы флавоноидных соединений в пересчете на кверцетин должно быть не менее 0,04%, содержание кислоты сорбиновой должно быть не менее 0,05%.
Сироп по 100 мл во флаконах темного стекла ФВ-100-20 по ОСТ 64-2-71-80, укупоренных пробками из полиэтилена по ГОСТ 163-37-77, с навинчиваемыми пластмассовыми крышками по ОСТ 64-2-87-81, хранили в темном месте при температуре 18-25 оС. Полученные результаты свидетельствуют о воспроизводимости показателей качества, заложенных в спецификацию, в течение 3 лет. На экстракты семян проса посевного и БАДы на их основе разработана нормативная и технологическая документация в виде ТУ и ТИ.
Методологические подходы к разработке современных жидких лекарственных форм для внутреннего применения, использованные при создании лекарственных средств на основе жидкого экстракта проса, были в последующем успешно апробированы при работе с экстрактом софоры желтоватой. Это растение широко используется в традиционной тибетской медицине в виде такой лекарственной формы как отвар для внутреннего применения, назначаемого при лечении инфекционно-воспалительных заболеваний органов дыхания. Нами проведены исследования по разработке лекарственных форм с жидким экстрактом софоры желтоватой в виде сиропа и геля для внутреннего применения.
Разработка технологии и стандартизация лекарственных средств на основе экстракта из корней софоры желтоватой (глава 8)
В результате проведенных ранее фитохимических и технологических исследований был обоснован выбор экстрагентов, обеспечивающих наиболее полную экстракцию БАВ из сырья. Также было установлено, что наиболее высокий выход (в %) экстрактивных веществ наблюдается при сочетании следующих параметров: измельченность сырья – 2 мм, гидромодуль 1:10, продолжительность экстракции – 2 часа и кратность экстракции – 2. По данной технологии было наработано 5 опытных серий экстракта, которые были использованы для разработки лекарственных форм на его основе.
Анализ данных литературы и предварительные фармакологические исследования, проведенные ранее, показали наличие у экстракта софоры желтоватой таких фармакологических свойств, как антибактериальное, противовирусное, противовоспалительное, жаропонижающее, антигипоксическое. Лекарственной формой, в которой могли бы наиболее полно реализоваться данные эффекты экстракта при лечении заболеваний органов дыхания, являются сиропы.
Были проведены исследования по разработке состава, технологии и параметров и методов стандартизации сиропа с экстрактом из корней софоры желтоватой.
Учитывая физико-химические и фармакологические свойства сорбита, которые актуальны при комплексном лечении инфекционно-воспалительных заболеваний органов дыхания, а также возможности расширения контингента пациентов, которым может быть назначен разрабатываемый препарат (больные сахарным диабетом), в качестве основы был выбран сироп сорбита (64%).
На основании анализа литературных данных и результатов предварительных фармакологических испытаний выбрана концентрация 1/10 LD50=1640 мг/кг–т.е. 0,15 г экстракта на 1 прием. Сироп – это недозированная лекарственная форма, принимаемая ложками, в данном случае предполагается чайная ложка, т.е. 5,0 г сиропа – на 1 прием.
Для увеличения срока годности при хранении сиропа в негерметичной упаковке, в качестве консерванта была выбрана кислота сорбиновая, так как она является продуктом природного происхождения, как и действующие вещества экстракта, и имеет низкую токсичность.
Стандартизацию сиропа проводили по следующим показателям: описание, подлинность, плотность, рН, показатель преломления, количественное содержание.
Полученный сироп представляет собой вязкую полидисперсную жидкость бурого цвета с характерным запахом, сладкого вкуса.
Для определения подлинности сиропа на основе экстракта софоры желтоватой подтверждали присутствие алкалоидов, флавоноидных соединений, сорбита и сорбиновой кислоты. Для идентификации сорбиновой кислоты использовали метод ТСХ.
Идентификацию сорбита проводили методом ТСХ, в системе растворителей этанол: гидроксид аммония:вода (40:2:8), после обработки смесью 1% водного раствора калия перманганата и 2% водного раствора натрия гидрокарбоната в соотношении 1:1 и нагревании в сушильном шкафу при температуре 100-105°С в течение 2-3 минут.
Количественное определение содержания суммы алкалоидов в сиропе проводили с использованием ГЖХ в сравнении со стандартным образцом (СО) матрина. Результаты количественного определения алкалоидов методов ГЖХ представлены табл.6.
Таблица 6. Количественное содержание алкалоидов в сиропе с экстрактом корней софоры желтоватой (п5; Р95%)
| № опыта | Содержание, % | Метрологическая характеристика |
| 1 | 0,172 | Х = 0,172 % |
| 2 | 0,171 | S = 0,002915 |
| 3 | 0,173 | Sx= 0,001304 |
| 4 | 0,168 | T= 2,14 |
| 5 | 0,176 | x = 0,00278; = 1,6% |
Таким образом, количественное содержание суммы алкалоидов в сиропе в пересчете на матрин, определенное методом ГЖХ, должно быть не более 0,18 %.
Для количественного определения содержания суммы флавоноидов в сиропе нами была использована спектрофотометрическая методика.
Результаты определения содержания суммы флавоноидных соединений в пересчете на нарингин в сиропе представлены в табл.7.
Проведенные фитохимические исследования позволили установить преобладание в сумме флавоноидных соединений нарингина. Это подтвердило совпадение максимумов поглощения УФ-спектров нарингина и суммы флавоноидных соединений.
Таблица 7. Метрологическая характеристика количественного определения содержания суммы флавоноидных соединений в сиропе с экстрактом корней софоры желтоватой (п5; Р95%)
| № опыта | Содержание, % | Метрологическая характеристика |
| 1 | 0,138 | Х = 0,1402 |
| 2 | 0,142 | S = 0,0032 |
| 3 | 0,144 | Sx= 0,0014 |
| 4 | 0,136 | T= 2,13 |
| 5 | 0,141 | x = 0,0031; = 2,17% |
Полученные результаты свидетельствуют, что количественное содержание суммы флавоноидов в сиропе в пересчете на нарингин должно быть не менее 0,13%.
Для изучения срока годности 5 серий сиропа его помещали по 100 мл во флаконы темного стекла ФВ-100-20 по ОСТ 64-2-71-80, укупоренные пробками из полиэтилена по ГОСТ 163-37-77, с навинчиваемыми пластмассовыми крышками по ОСТ 64-2-87-81. Критериями качества служили следующие показатели: внешний вид, подлинность, показатель преломления, плотность, значения рН, микробиологическая чистота, количественное содержание действующих веществ.
Оценивая стабильность физико-химических показателей и количественного содержания действующих веществ в сиропе в течение 3,5 лет, позволило установить срок хранения для данного сиропа 3 года.
При разработке состава геля для внутреннего применения особое внимание при исследованиях по подбору и оптимизации состава лекарственной формы было уделено изучению различных гелеобразователей на предмет возможности использования в лекарственных формах для внутреннего применения.
В результате анализа данных литературы установлено, что наиболее рациональными и перспективными являются альгинат натрия и натрий-карбоксиметилцеллюлоза (Na-КМЦ). Для проведения исследований оптимального состава гелей были выбраны общепринятые концентрации гелеобразователей – 5 % раствор Na-КМЦ, 6% раствор натрия альгината.
Важным показателем качества и эффективности геля, как лекарственной формы для приема внутрь, является способность биологически активных веществ высвобождаться из ЛФ, о чем можно судить по результатам исследования их диффузии через полупроницаемую мембрану.
Для предварительной оценки высвобождающей способности биологически активных веществ (флавоноидов) были приготовлены 3% гели сухого экстракта корней софоры желтоватой на 6% растворе натрия альгината и 5% растворе Na-КМЦ. Оценку проводили в опытах in vitro методом равновесного диализа через полупроницаемую мембрану.
На основании проведенных исследований, для дальнейших исследований выбран гель на основе Na-КМЦ.
Полученный гель представляет собой вязкую прозрачную с опалесценцией массу светло-коричневого цвета, горько-сладкого вкуса, с характерным запахом.
Стандартизацию полученного геля проводили по выбранным показателям: описание, подлинность, значение рН, количественное содержание основных биологически активных веществ – алкалоидов, флавоноидов, а также вязкость.
Таким образом, предложены взамен традиционных тибетских лекарственных форм таких как мазь с масляным экстрактом остролодочника – мазь «Оксофил» с полиэкстрактом остролодочника, капель на водной основе (отвара) травы остролодочника – капли с полиэкстрактом остролодочника на гидрофильной и эмульсионной основах, настоев из сбора «Табан аршан» и травы череды – быстрорастворимых таблеток для ванн с экстрактами из этих объектов, «чана» из семян проса посевного – жидкого и сухого экстрактов проса, а также сиропа и таблеток с этими экстрактами, которые могут быть реализованы в условиях современных фармацевтических производств и предложены к применению в официнальной медицинской практике.
В результате проведенных исследований были разработаны проекты ФСП и лабораторные регламенты на эти лекарственные формы.
Выводы
- Проведен анализ тибетских прописей и осуществлен выбор растительных объектов для создания на их основе ЛС.
- Предложена модифицированная методика определения экстрактивных веществ в ЛРС, позволяющая учитывать особенности экстракции, предназначенная для ГФ XII изд.
- Предложен алгоритм разработки ЛС на основе тибетских прописей производство которых может быть реализовано в условиях современных фармацевтических производств.
- Разработана технология, определены показатели качества и методы их оценки для сухого экстракта из травы остролодочника остролистного, дерматологической мази и интраназальных капель «Оксофил». Составлен пакет НД в виде проектов ФСП, ЛР, отчетов о доклинических испытаниях экстракта и препаратов серии «Оксофил», которые могут быть использованы при внедрении в медицинскую практику этих средств, обладающих выраженным противовоспалительным, ранозаживляющим, обезболивающим и противовирусным действием. Оригинальность разработок защищена патентами РФ.
- Предложена технология водорастворимых экстрактов, как на основе моносырья (трава череды), так и многокомпонентных составов (экстракт из сбора Табан аршан), на основе которых разработаны состав и технология оригинальных бальнеологических лекарственных средств в виде таблеток с экстрактом череды и Табан аршан, предложены методы оценки их качества и проведена их оценка в опытах «in vivo» и «in vitro». Составлен пакет НД в виде проектов ФСП, ЛР, ТУ и ТИ на экстракты череды и Табан аршан и таблеток на их основе, которые могут быть использованы при внедрении в медицинскую практику.
- Разработана технология сухого и жидкого экстрактов из семян проса посевного, используемого в традиционной тибетской медицине в качестве средства, нормализующего обменные процессы. В качестве перспективных форм разработаны таблетки с сухим экстрактом и сироп с жидким экстрактом проса. Составлен пакет НД в виде проектов ТУ и ТИ, которые могут быть использованы при внедрении в медицинскую практику этих средств, нормализующих обменные процессы.
- Проведено масштабирование получения сухого экстракта из корней софоры желтоватой, разработаны лекарственные формы на его основе в виде сиропа и геля для внутреннего применения. Составлен пакет НД в виде проектов ФСП, ЛР на разработанные препараты.
Список работ, опубликованных по теме диссертации:
1. Саканян, Е.И. Разработка технологии дерматологической мази с применением остролодочника остролистного / Е.И. Саканян, Е.Е. Лесиовская, Б.Л. Молдавер, Л.В. Пастушенков, С.М. Бахтина, К.Э. Кабишев // Тезисы докладов Всерос. науч. конф. "Химия и технология лекарственных веществ".– СПб., 1994.– 113 с.
2. Бахтина, С.М. Разработка лекарственных препаратов на основе остролодочника остролистного / С.М. Бахтина, К.Э. Кабишев, Е.Е. Лесиовская, Е.И.Саканян // Актуальные проблемы фармации: сб. науч. статей.– Барнаул: Алтайский Гос. Мед. Университет, 1995.– С. 295-299.
3. Бахтина С.М. Противогипоксическая и анальгезирующая активности некоторых видов остролодочника / С.М. Бахтина, К.Э. Кабишев, Е.Е. Лесиовская, Е.И.Саканян, Е.В. Коноплева // Казанский медицинский журнал.– 1995.– том LXXVI.– №3.– С. 205-207.
4. Кабишев, К.Э. Изучение биофармацевтических аспектов создания дерматологической мази с экстрактом остролодочника остролистного / К.Э. Кабишев // Тез. докл. Всерос. конф. по трад. мед.– Чебоксары, 1996.– С. 48-50.
5. Кабишев, К.Э. Количественное определение флавоноидных соединений в сухом экстракте остролодочника остролистного и дерматологической мази / К.Э. Кабишев, Е.И. Саканян, Б.Л. Молдавер, Е.Е. Лесиовская // Тез. докл. Всерос. конф., посв.10-летию фарм. факультета Самарского мед. ин-та.– Самара, 1996.– С. 36.
6. Кабишев, К.Э. К вопросу разработки препаратов на основе экстракта остролодочника остролистного (Oxytropis oxyphylla (Pall.), DC / К.Э. Кабишев, Е.И. Саканян, Б.Л. Молдавер, Е.Е. Лесиовская // Тез. докл. Всерос. науч. конф. ”Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии”.Санкт-Петербург, 2-5 июня 1999г.– СПб., 1999.– С.89.
7. Кабишев, К.Э. К вопросу создания интраназальных лекарственных форм с полиэкстрактом остролодочника остролистного / К.Э. Кабишев, Е.И. Саканян, Б.Л. Молдавер, Е.Е. Лесиовская // Тез. докл. Междунар. конф. “Фармация в XXI веке: инновации и традиции”. Санкт-Петербург, 7-8 апреля 1999 г.– СПб.,1999.– С.53.
8. Кабишев, К.Э. Разработка методики количественного определения содержания сорбиновой кислоты в мази “Оксофил / К.Э. Кабишев, Е.И. Саканян, Б.Л. Молдавер // Тез. докл. Междунар. конф. “Фармация в XXI веке: инновации и традиции”. Санкт-Петербург, 7-8 апреля 1999 г.– СПб., 1999.– С.54.
9. Кабишев, К.Э. Разработка методики определения экстрактивных веществ при получении растительных полиэкстрактов / К.Э. Кабишев, Е.И. Саканян, Б.Л. Молдавер // Тез. докл. Междунар. конф. “Фармация в XXI веке: инновации и традиции”, Санкт-Петербург, 7-8 апреля 1999 г.– СПб., 1999.– С.72.
10. Кабишев, К.Э. Об исследовании фитохимического состава и фармакологической активности сухих экстрактов из травы остролодочника остролистного / К.Э. Кабишев, Е.И. Саканян, Б.Л. Молдавер, Е.Е. Лесиовская // Тез. докл. Междунар. конф. “Фармация в XXI веке: инновации и традиции”, Санкт-Петербург, 7-8 апреля 1999 г.– СПб., 1999.– С.136.
12. Кабишев, К.Э. Результаты доклинических испытаний новой дерматологической мази “Оксофил” / К.Э. Кабишев, Е.И. Саканян, Б.Л. Молдавер, Е.Е. Лесиовская // Тез. докл. Междунар. конф. “Фармация в XXI веке: инновации и традиции”. Санкт-Петербург, 7-8 апреля 1999 г.– СПб.,1999.– С.197.
13. Кабишев, К.Э. Разработка технологии полиэкстракта из травы остролодочника остролистного - растения тибетской медицины” / К.Э. Кабишев, Е.И. Саканян, Б.Л. Молдавер, Е.Е. Лесиовская // Сб. трудов НИИФ. Т. XXXVIII: Современные проблемы фармацевтической науки и практики. Ч. II.– М., 1999 г.– С.221-224.
14. Бахтина, С.М. Изучение психотропных и стресспротективных свойств сухого экстракта из надземной части остролодочника остролистного - растения традиционной тибетской и народной монгольской медицин / С.М. Бахтина, К.Э. Кабишев, Е.И. Саканян, Е.Е. Лесиовская / Сб. трудов НИИФ. Т. XXXVIII: Современные проблемы фармацевтической науки и практики. Ч. II.– М., 1999 г.– С.309-312.
15. Кабишев, К.Э. Новый подход к определению содержания экстрактивных веществ в лекарственном растительном сырье / К.Э. Кабишев, Е.И.Саканян, Б. Л. Молдавер, С.М.Бахтина // Сб. материалов 3 международного съезда “Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения”. СПб - Пушкин, 29 июня - 1 июля 1999 г.– СПб., 1999.– С.121-123.
16. Способ получения сухого экстракта из растительного сырья: патент РФ 2116797 от10.08.98 / К.Э. Кабишев, Е.И. Саканян, Б.Л. Молдавер, Е.Е. Лесиовская, С.М. Бахтина.
17. Дерматологическая, противовоспалительная, ранозаживляющая и обезболивающая мазь «Оксофил»: патент РФ 2132692 от10.07.99 / К.Э. Кабишев, Е.И. Саканян, Б.Л. Молдавер, Е.Е. Лесиовская, С.М. Бахтина
18. Оксофил: свидетельство на товарный знак № 156826 от 22.09.97.
19. Кабишев, К.Э. Разработка методик качественного и количественного определения сорбиновой кислоты в мази "Оксофил" / К.Э. Кабишев, Е.И. Саканян, Б.Л. Молдавер // Сб. науч. трудов НИИФ. Т.XXXIX: Фармация на современном этапе – проблемы и достижения. Ч.II.– М., 2000.– С. 41-43.
20. Сафонов, В.В. Разработка состава, технологии и методов анализа дерматологической мази с экстрактом караганы колючей / Сафонов В.В., К.Э. Кабишев, Е.И. Саканян, Е.Е.Лесиовская// Сб. науч. трудов НИИФ. Т.XXXIX: Фармация на современном этапе – проблемы и достижения. Ч.II.– М., 2000.– С. 41-43.
21. Лесиовская, Е.Е. Современные препараты для местного лечения инфекционно-воспалительных заболеваний верхних дыхательных путей (обзор) / Е.Е. Лесиовская, Е.И. Саканян, У.Г. Переплеткина, К.Э. Кабишев // ФармЭкспресс.– 2000.– №3.– С. 3-5.
22. Лесиовская, Е.Е. О перспективности применения интраназальных капель "Оксофил" в детской практике / Е.Е. Лесиовская, Е.И. Саканян, У.Г. Переплеткина, К.Э. Кабишев // Актуальные проблемы фармации: сб. науч. статей.– Барнаул, 2000.– (Алтайский гос. мед. Университет).– С. 253.
23. Сафонов, В.В. К вопросу изучения антимикробной активности растительных экстрактов / В.В. Сафонов, М.Ю. Сафонова, Е.Е. Лесиовская, Е.И. Саканян, У.Г. Переплеткина, К.Э. Кабишев // Актуальные проблемы фармации: сб. науч. статей.– Барнаул, 2000.– (Алтайский гос. мед. университет). – С. 250.
24. Лесиовская, Е.Е. О необходимости создания новых интраназальных лекарственных препаратов для лечения респираторных заболеваний у детей / Е.Е. Лесиовская, Е.И. Саканян, У.Г. Переплеткина, К.Э. Кабишев // Медлайн.– 2000.– №22.– С.11-12.
25. Переплеткина, У.Г. Изучение специфической активности интраназального препарата с экстрактом остролодочника остролистного / У.Г. Переплеткина, К.Э. Кабишев, С.М. Бахтина, Е.И. Саканян, Е.Е. Лесиовская // Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения: материалы IV Международного съезда. Великий Новгород.– Великий Новгород: "Адаптация", 2000.– С.208-210.
26. Лесиовская, Е.Е. Фитотерапия в комплексном лечении дерматитов / Е.Е. Лесиовская, Л.В. Пастушенков, Е.И. Саканян, К.Э. Кабишев, Л.Ф. Мельникова, О.А. Хассельхорст. // Фармэкспресс.– 2000.– №12.– С.5-8.
27. Переплеткина, У.Г. Оценка влияния интраназальных лекарственных форм с экстрактом остролодочника остролистного на течение острого катарального ринита / У.Г. Переплеткина, К.Э. Кабишев, С.М. Бахтина, Е.И. Саканян, Е.Е. Лесиовская // Тез. докл. матер. юбил. межвуз. науч.-практ. конф. / Пермская государственная фармацевтическая академия.– Пермь, 2000.– С.188.
28. Переплеткина, У.Г. К вопросу разработки лекарственных препаратов для местного лечения воспалительных заболеваний слизистой оболочки носа и околоносовых пазух / У.Г. Переплеткина, К.Э. Кабишев, Е.И. Саканян, Е.Е. Лесиовская, Т.С. Потехина, С.М. Бахтина // Тез. докл. регион. конф. "Фармация Центрального Черноземья: проблемы, достижения и перспективы". Курск, декабрь 2000 г.– Курск, 2000.– С. 76-78.
29. Интраназальное средство для лечения и профилактики ринитов различной этиологии «Оксофил»: патент РФ 2196597 от 5.03.2001 / Е.Е. Лесиовская, Е.И. Саканян, К.Э. Кабишев, У.Г. Переплеткина, С.М. Бахтина, Т.С. Потехина.
30. Кабишев К.Э. Применение в бальнеологии сухих водорастворимых экстрактов из растительного сырья / К.Э. Кабишев, Т.С. Потехина, Е.И. Саканян // Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения: материалы V Международного съезда.– Петродворец: "Адаптация", 2001.– С. 451-453.
31. Лесиовская, Е.Е. Интраназальные средства для лечения простудных заболеваний / Е.Е. Лесиовская, Е.И.Саканян, К.Э. Кабишев, У.Г. Переплеткина, С.М. Бахтина // Ремедиум (Северо-Запад).– 2001.– №10.– С. 14-18.
32. Кабишев, К.Э. Методологические подходы к использованию растений традиционной медицины / К.Э. Кабишев, Е.И. Саканян, Е.Е. Лесиовская, Т.С. Потехина, С.М. Бахтина // Сборник материалов Научной юбилейной конференции, посв. 25-летию со дня открытия в Москве Центрального научно-исследовательского института рефлексотерапии. Москва, 1-2 марта 2002 г.– М., 2002.– С. 189-191.
33. Кабишев, К.Э. Идентификация и количественное определение суммы флавоноидных соединений в интраназальных лекарственных формах «Оксофил» с полиэкстрактом остролодочника остролистного / К.Э. Кабишев, Е.И. Саканян // Растительные ресурсы.– 2002.– Т.38, вып.2.– С. 85-94.
34. Кабишев, К.Э. Определение экстрактивных веществ в лекарственном растительном сырье при различной технологии получения экстрактов / К.Э. Кабишев Е.И.Саканян, Б.Л.Молдавер // Растительные ресурсы.– 2002.– Т. 38, вып.3.– С.113-120.
35. Серебренникова, Ю.А. Влияние бальнеологических лекарственных форм с растительными экстрактами на процесс заживления ран у крыс / Ю.А. Серебренникова, Е.И. Саканян, К.Э. Кабишев // Материалы 1 Межвузовской конференции аспирантов и соискателей «Предпосылки и эксперимент в науке».– СПб., 2003.– С.31-32.
36. Кабишев, К.Э. О разработках составов и методов стандартизации некоторых фитопрепаратов на основе тибетских прописей / К.Э. Кабишев, Ю.А.Серебренникова, Е.И.Саканян, Лесиовская Е.Е // Материалы IV Международной научно-практической конференции «Здоровье и образование».– М., 2003.– С.278-279.
37. Кабишев, К.Э. Изучение фитохимического состава и разработка методов стандартизации экстракта проса посевного Panicum miliaceum L. / К.Э. Кабишев, Е.И. Саканян // Материалы IV Международной научно-практической конференции «Здоровье и образование».– М., 2003.– С.279-280.
38. Кабишев, К.Э. Современное состояние и перспективы развития бальнеотерапии / К.Э. Кабишев, Ю.А. Серебренникова, Е.И.Саканян, В.Ц. Болотова, Е.И. Пасько, Н.В. Хоронеко // Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения: материалы VII Международного съезда.– СПб., 2003.– С. 44-46.
39. Серебренникова, Ю.А. Подходы к стандартизации бальнеологических лекарственных средств / Ю.А.Серебренникова, Е.И. Саканян, К.Э. Кабишев // Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения: материалы VШ Международного съезда.– Финляндия, Мииккеле: " Фитофарм", 2004.– С. 291-293.
40. Кабишев, К.Э. Использование растений традиционной тибетской медицины в современной фармацевтической практике / К.Э. Кабишев // Материалы международной научно-практической конференции, посвященной 85-летию академии.– СПб., 2004.– С.171-174.
41. Серебрянникова, Ю.А. Современные подходы к стандартизации бальнеологических лекарственных средств / Ю.А. Серебрянникова, Е.И. Саканян, К.Э. Кабишев // Материалы международной научно-практической конференции, посвященной 85-летию академии “Выпускник фармацевтического ВУЗа (факультета) в прошлом, настоящем и будущем” 09.09.04 – 13.09.04 / Санкт-Петербургская государственная химико-фармацевтическая академия.– СПб.: СПХФА, 2004.– С.283-285.
42. Кабишев, К.Э. Современные технологии создания бальнеологических препаратов / К.Э. Кабишев // Состояние и перспективы подготовки специалистов для фармацевтической отрасли: материалы науч.метод.конф. СПХФА, 20 февраля 2004 г.– СПб., 2004.– С. 55-58.
43. Серебренникова, Ю.А. Количественное определение суммарного содержания валепотриатов в надземной части Verbena officinalis L. И некоторых лекарственных растительных сборах/ Серебренникова Ю.А., К.Э. Кабишев, Е.И.Саканян, Хассельхорст О.А. // Растительные ресурсы.– 2004.– Т. 40, вып.3.– С.107-111.
44. Серебренникова, Ю.А. К вопросу разработки методов стандартизации бальнеологических лекарственных форм / Ю.А. Серебренникова, Е.И. Саканян, К.Э. Кабишев, К.М. Саканян // Сборник науч.тр. Пятигорской ГФА «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции». Вып.60.– Пятигорск, 2005 г.– С.281-283.
45. Серебренникова, Ю.А. Бальнеотерапия в современной медицинской практике (обзор) / Серебренникова Ю.А., К.Э. Кабишев, Е.И.Саканян, К.М.Саканян // Вестник Воронежского государственного университета. Серия Химия, Биология, Фармация.– 2005.– Вып.1.– С.225-232.
46. Кабишев, К.Э. Бальнеотерапия и современные подходы к разработке фитопрепаратов для бальнеологической практики / К.Э. Кабишев // Вестник БГУ, сер. Медицина и фармация.– 2005.– вып. 5.– С.147-156.
47. Кабишев, К.Э. Фитопрепараты в отечественной дерматологической практике / К.Э. Кабишев // Вестник Воронежского государственного университета. Серия Химия, Биология, Фармация.– 2005.– Вып.1.– С.189-201.
48. Кабишев, К.Э. Современные подходы к разработке лекарственных средств на основе тибетских прописей / К.Э. Кабишев // Вестник Воронежского государственного университета. Серия Химия, Биология, Фармация.– 2005.– Вып.1.– С.181-189.
49. Кабишев, К.Э. Изучение аминокислотного состава семян проса посевного / К.Э. Кабишев, Е.И. Саканян // материалы региональной науч.-практ. конф., посвящ. 40-летию фф. КГМУ 15.12.2006 г. «Достижения, проблемы и перспективы фармацевтической науки и практики».– Курск, 2006 г. - С.291-293.
50. Кабишев, К.Э. Изучение специфической активности экстрактов из семян проса посевного (Panicum miliaceum Pall. L.) сем. злаковых – Poaceae./ К.Э.Кабишев, Е.И.Саканян, С.М.Бахтина// сборник науч.тр. Пятигорской ГФА «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции», 2007 г., вып.62, С.477-480.
51. Кобелева, Е.В. Перспективы разработки лекарственных средств на основе софоры желтоватой / Е.В. Кобелева, К.Э. Кабишев, Саканян Е.И.// Тезисы научно-практической конференции “Пути и формы совершенствования фармацевтического образования. Создание новых физиологически активных веществ», Воронеж, март 2007, С.128-133.
52. Кабишев, К.Э. Перспективы разработки составов, технологии и методов стандартизации лекарственных и лечебно-профилактических средств растительного происхождения / К.Э.Кабишев Е.И. Пасько, Е.В.Кобелева, Е.И.Саканян // Вестник Российской военно-медицинской академии №1 (17), 2007 г., С.151-152.
53. Кобелева, Е.В. Возможности создания новых фитопрепаратов для лечения заболеваний органов дыхания на основе экстракта софоры желтоватой / Е.В. Кобелева, К.Э. Кабишев // Тезисы Международного конгресса «Интегративная медицина 2007», Москва, июнь 2007, с.59.
54. Кобелева, Е.В. Софора желтоватая – перспективный источник лекарственных средств для лечения заболеваний органов дыхания / Е.В. Кобелева, К.Э. Кабишев // Сборник тезисов 63-й региональной конференции по фармации и фармакологии. – Вып. 63. - Пятигорск, 2008. – С.430-434.
55. Кобелева, Е.В. К вопросу разработки препаратов из экстракта софоры желтоватой / Е.И. Саканян, Е.В. Кобелева, К.Э. Кабишев // “Здоровье – основа человеческого потенциала: проблемы и пути их решения: Труды Всеросс.науч.-практ.конф. с международным участием. – СПб.: Изд-во Политехн. Ун-та, 2008. – С.239-240.
56. Kabischev, K.E. Development of modern approaches to formulation and standartization of medicinal preparations and medicated products of plant origin on the basis of the traditional Tibetan medicine formulas. Мэз засал (Улан-Батор). – № 11. - 2008.- С.168-173, Kabischev K.E., E.V. Kobeleva, E.I.Sakanyan.
57. Саканян, Е.И. Разработка технологии и стандартизация сиропа с экстрактом софоры желтоватой для лечения заболеваний органов дыхания / Е.И. Саканян, Е.В. Кобелева, К.Э. Кабишев // Сборник тезисов 64-й региональной конференции по фармации и фармакологии. – Вып. 64. - Пятигорск, 2009., с.332-335.
58. Саканян, Е.И. Разработка лекарственной формы в виде геля для внутреннего применения с экстрактом софоры желтоватой / Е.И. Саканян, Е.В. Кобелева, К.Э. Кабишев «Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии» №1, 2010, с.50-53.
59. Кобелева, Е.В. Разработка лекарственных средств с экстрактом софоры желтоватой / Е.В. Кобелева, Е.И. Саканян, К.Э. Кабишев «Фармация и общественное здоровье» матер. ежегодной конф., Екатеринбург, 2010, С.242-245.
60. Кабишев, К.Э. Современное состояние и перспективы разработки лекарственных и лечебно-профилактических средств на основе тибетских прописей «Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии», 2010, Кабишев К.Э. (принята к печати).
61. Кабишев, К.Э. Лекарственные средства в традиционной тибетской медицине: история и современность» / СПб, 2010.- 424 с. Е.И.Саканян, К.Э. Кабишев.
