Совершенствование вирусологических исследований водных объектов окружающей среды в системе санитарно-вирусологического надзора

На правах рукописи

Зыкова Татьяна Алексеевна

Совершенствование вирусологических исследований водных объектов окружающей среды в системе

санитарно-вирусологического надзора

03.00.06 – вирусология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Москва – 2006

Работа выполнена в ГУ Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова РАМН

и ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Ростовской области»

Научные руководители:	кандидат медицинских наук Иванова Ольга Евгеньевна доктор медицинских наук, профессор Айдинов Геннадий Тртадович
Официальные оппоненты	кандидат медицинских наук Недачин Александр Евгеньевич доктор медицинских наук Королева Галина Александровна
Ведущая организация:	ФГУН «Санкт-Петербургский НИИЭМ имени Пастера» Роспотребнадзора

Защита состоится ­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­­____2 июня________ 2006 года в ____10.00________

часов на заседании диссертационного совета Д.001.026.01 при ГУ Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова РАМН по адресу:

142782, Московская область, п/о Институт полиомиелита.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова РАМН.

Автореферат разослан__________27 апреля______ 2006 года

Ученый секретарь диссертационного совета

кандидат биологических наук Медведкина О.А.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Инфекционные заболевания продолжают оставаться одной из основных причин болезни и смерти в большинстве стран Европы, в том числе и в России. Только в 2003г в России было зарегистрировано более 32 миллионов случаев инфекционных заболеваний, экономический ущерб от которых составил 27375,7 миллиона рублей (Г.Г. Онищенко, 2004).

Крайнюю актуальность для практического здравоохранения России сохраняет проблема кишечных инфекций, прежде всего вирусного гепатита А, ротавирусного гастроэнтерита и энтеровирусных инфекций. По данным Г.Г. Онищенко (2004) удельный вес острого гепатита А в общей структуре вирусных гепатитов в 2003г составил 58,4%. Высокий уровень заболеваемости гепатитом А наблюдали в регионах, имеющих серьезные проблемы с обеспечением доброкачественной питьевой водой. Антиген вируса гепатита А в РФ в 2003г был обнаружен в 14,7% проб источников децентрализованного водоснабжения и в 6,6% проб воды водоемов первой категории. В России в последние годы отмечается рост числа водных вспышек вирусного гепатита А, ротавирусного гастроэнтерита и энтеровирусных инфекций (Г.Г. Онищенко, 2002).

Традиционные системы водоподготовки, применяемые в нашей стране, не обеспечивают полного освобождения природной воды от вирусов, что обуславливает актуальность исследований в области совершенствования технологии систем очистки природных вод (В.И. Терентьев и др., 2002).

В этих условиях регулярный контроль и адекватная оценка качества воды источников водоснабжения и питьевой воды в отношении их вирусного загрязнения приобретает особое значение.

Проблема санитарно-вирусологического контроля водных объектов становится особенно актуальной в последние годы в связи с увеличением антропогенной и техногенной нагрузки на объекты окружающей среды, ненормируемым сбросом неочищенных или недостаточно очищенных сточных вод в поверхностные водоемы, используемые как источники хозяйственно-питьевого водоснабжения, неудовлетворительным санитарно-техническим состоянием водопроводных коммуникаций.

Действующие в настоящее время нормативно-методические документы, регламентирующие контроль над объектами хозяйственно-питьевого водоснабжения, не всегда обеспечивают эффективный текущий и предупредительный надзор и, как следствие, не всегда позволяют получить объективную и своевременную оценку сложившейся эпидемической ситуации.

В соответствии с СанПиН 2.1.4.1074-01 «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству виды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества» исследования питьевой воды на энтеровирусы проводятся лишь при повторном получении результатов, не соответствующих нормативу, а также по эпидпоказаниям. Обнаружение вируса гепатита А и ротавируса с использованием современных иммунохимических и молекулярно-биологических методов существующими документами не регламентируется.

Контроль за безопасностью питьевой воды с использованием традиционных бактериальных индикаторов и косвенных показателей (колифагов) не всегда надежен и зачастую приводит к неверной оценке ее безопасности в отношении вирусного загрязнения (Т.В. Амвросьева и соавт., 2002; Г.П. Кашкарова и соавт., 2002, 2004; В.В. Малышев и соавт., 2004).

Объемы вирусологических исследований питьевой воды в РФ ограничены, кроме того, проводятся они эпизодически и только на отдельных территориях. Практически отсутствуют сведения о многолетней и внутригодовой динамике вирусной контаминации питьевой и речной воды, что препятствует пониманию механизма влияния водного фактора на эпидемический процесс кишечных вирусных инфекций.

Выработка наиболее эффективной тактики проведения санитарно-вирусологических исследований в условиях современной эпидемической ситуации невозможна без изучения уровня вирусной контаминации водных объектов.

Результативность вирусологического контроля за водными объектами напрямую зависит от выбора показателей качества воды в отношении ее вирусного загрязнения, методов исследований и оценки их результатов. В то же время единых подходов к методикам отбора проб и методологии лабораторных исследований нет.

Все вышеперечисленное диктует необходимость разработки системы вирусологического надзора за водными объектами окружающей среды.

Основной целью настоящего исследования является научное обоснование комплекса наиболее эффективных методов проведения санитарно-вирусологического контроля водных объектов окружающей среды (на материале Ростовской области).

Исходя из поставленной цели, были определены и основные задачи:

1. Установить уровень и структуру вирусного загрязнения водных объектов Ростовской области.

2. Оценить роль водного фактора в распространении кишечных вирусных инфекций на территории Ростовской области.

3. Обосновать необходимость проведения прямых вирусологических исследований речной и питьевой воды.

4. Оценить эффективность традиционных методов водоподготовки по освобождению от вирусной контаминации.

5. Обосновать методические приемы санитарно-вирусологических исследований проб воды разной степени биологического загрязнения (сточной, речной, питьевой).

Научная новизна:

В результате многолетних наблюдений впервые были установлены особенности циркуляции кишечных вирусов в водных объектах Ростовской области, определены цикличность, сезонность и типовой состав циркулирующих вирусов.

Впервые проведена оценка барьерной роли действующих водоочистных сооружений Ростовской области в отношении вирусного загрязнения природной воды в местах водозаборов.

Расширено представление о роли водного фактора в распространении кишечных вирусных инфекций. Впервые выявлена статистическая зависимость между уровнем вирусного загрязнения объектов водоснабжения и уровнем заболеваемости населения Ростовской области вирусным гепатитом А и ротавирусным гастроэнтеритом.

По результатам работы научно обоснована необходимость оптимизации методов исследований и предложена система вирусологического контроля за водными объектами окружающей среды.

Показана целесообразность проведения прямых вирусологических исследований воды с использованием иммунохимических методов определения антигенов вируса гепатита А и ротавируса, наряду с выделением энтеровирусов в культуре клеток.

Практическая значимость:

В результате проведенных исследований была усовершенствована система контроля качества воды разного вида пользования в отношении ее вирусного загрязнения в Ростовской области.

Результаты исследований были использованы при подготовке нормативных и методических документов:

• методических рекомендаций «Профилактика ротавирусной инфекции», утв. 25.12.2001, № МР 04-1-16/2636; «Метод концентрирования кишечных вирусов в пробах сточной воды с помощью модифицированного метода марлевого тампона» № 04-3-16/458 от 18.05.2005г;

• регионального плана действий по гигиене окружающей среды Ростовской области на 2002-2005гг. (РПДГОС), утвержденного заместителем Главы Администрации (Губернатора) Ростовской области 16.08.2002г и региональной целевой программы «Обеспечение населения Ростовской области питьевой водой»;

• обзора «Ликвидация полиомиелита в Ростовской области. Прошлое, настоящее, будущее». Под редакцией д.м.н., профессора Айдинова Г.Т., д.м. н., профессора Кондратенко Т.А. – Ростов-на-Дону. – 2004;

• информационных писем по проведению санитарно-вирусологических исследований в Ростовской области (№ 04-5/447 от 05.06.1995, № 04-5/753 от 27.04.1999, № 04-3-16/3521 от 28.10.2002);

• ежегодных информационных сборников статистических и аналитических материалов «Анализ деятельности микробиологических лабораторий центров госсанэпиднадзора в Ростовской области по ведомственной отчетности ф. № 6-96 (вирусологические исследования)», приказов ЦГСЭН в Ростовской области, государственных докладов о санитарно-эпидемиологической обстановке в Ростовской области и мерах по ее стабилизации.

Материалы диссертационной работы были использованы при чтении лекций на курсе повышения квалификации в Институте вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН (выездной цикл).

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Высокий уровень вирусной контаминации водных объектов Ростовской области существенно влияет на состояние заболеваемости населения кишечными вирусными инфекциями.

2. Существующие системы водоподготовки природной воды не позволяют полностью исключить вирусное загрязнение питьевой воды.

3. Контроль за вирусной контаминацией водных объектов должен осуществляться с обязательным использованием прямых вирусологических исследований.

4. Экспресс-методы исследований, в том числе определение антигенов вируса гепатита А и ротавируса в ИФА, могут быть использованы в системе санитарно-вирусологического надзора за объектами водоснабжения.

Результаты исследований доложены и обсуждены:

• на 7 съезде Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов, Москва, 1997г;

• на региональных совещаниях врачей эпидемиологов и вирусологов центров госсанэпиднадзора субъектов Южного федерального округа «Эпидемиологический надзор за полиомиелитом и острыми вялыми параличами. Безопасное лабораторное хранение диких полиовирусов» (Ставрополь, октябрь 2002г, Ставрополь, октябрь 2003г);

• на Всероссийской научно-практической конференции «Гигиенические проблемы водоснабжения населения и войск», Санкт-Петербург, 20-21 ноября 2003г;

• на 6-м Международном конгрессе «Вода: экология и технология. Экватэк-2004», Москва, 1-4 июня 2004г;

• на областных совещаниях эпидемиологов и инфекционистов по профилактике ОВП и полиомиелита (Волгодонск, 2003г; Таганрог, 2004г);

• на областном и городском совещаниях эпидемиологов и инфекционистов по профилактике ОКИ и энтеровирусных инфекций (Ростов-на-Дону, 2004г);

• на заседании Ростовского отделения Всесоюзного научного общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Ростов-на-Дону, 2005г).

Апробация диссертации состоялась на заседании межлабораторного ученого совета ИПВЭ им. М.П. Чумакова РАМН 26 января 2006г.

Публикации. По материалам исследований опубликовано 25 печатных работ в отечественных научных журналах и сборниках научных трудов, в том числе 6 в изданиях, рекомендованных ВАК.

Структура и объем диссертации. Работа изложена на 183 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, главы, посвященной материалам и методам исследований, 5 глав собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов, библиографического указателя. Работа содержит 47 таблиц и 30 рисунков. Список литературы включает 172 источника, в том числе 120 отечественных и 52 зарубежных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследований. Выделение и идентификацию энтеровирусов, определение антигенов вируса гепатита А (АГ ВГА) и ротавируса в пробах воды выполняли в вирусологической лаборатории, а исследования проб воды на колифаги – в бактериологической лаборатории ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Ростовской области». Верификацию и внутритиповую дифференциацию выделенных штаммов полиовирусов проводили в лаборатории вирусологии окружающей среды ГУ Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова РАМН (г. Москва). Частичное секвенирование генома полиовирусов проводили в Институте физико-химической биологии им. А.Н. Белозерского МГУ им. М.В. Ломоносова (г. Москва). Период исследований – 1992-2003гг. Объекты, виды и объем исследований представлены в таблице 1.

Таблица 1.

Объекты, виды и объем исследований

Направления исследований	Объекты исследований	Виды исследований	Объем исследований
Вирусологические исследования объектов окружающей среды	1. Питьевая вода 2. Вода поверхностных источников водоснабжения 3. Вода подземных источников водоснабжения 4. Речная вода из зон рекреаций 5. Сточная вода 6. Клинический материал 7. Изоляты полиовирусов	Выделение энтеровирусов Обнаружение АГ ВГА Обнаружение АГ ротавируса Обнаружение колифагов Выделение энтеровирусов Обнаружение АГ ВГА Обнаружение АГ ротавируса Обнаружение колифагов Выделение энтеровирусов Обнаружение АГ ВГА Обнаружение АГ ротавируса Выделение энтеровирусов Обнаружение АГ ВГА Обнаружение колифагов Выделение энтеровирусов Выделение энтеровирусов Внутритиповая дифференциация штаммов полиовирусов	2355 проб 2355 проб 2355 проб 150 проб 872 пробы 872 пробы 872 пробы 62 пробы 402 пробы 402 пробы 402 пробы 477 проб 477 проб 110 проб 2461 проба 1506 проб 73 штамма

Ретроспективный анализ многолетней и вспышечной заболеваемости гепатитом А и ротавирусным гастроэнтеритом проводили с использованием форм Федерального статистического наблюдения «Сведения об инфекционных и паразитарных заболеваниях» ф.№1 (месяц) и ф. №2 (годовая) и Форма № 23 – санэпид ОАСУ – ВСПЫШКА «Донесения о вспышках кишечных инфекций».

Использовали понятия «суммарное вирусное загрязнение» и «число проб с вирусным загрязнением», которые подразумевают число проб с одним или несколькими маркерами вирусного загрязнения (энтеровирусы, антиген вируса гепатита А, антиген ротавируса).

Концентрирование вирусов из проб сточной воды проводили с помощью:

– метода марлевого тампона по В. Moore (1948). Концентрирование вирусов проводили по методу J. Riordan (1962) в традиционной постановке и в собственной модификации. В метод J. Riordan был внесен ряд изменений: для элюции вирусов с тампона использовался 0,05М глициновый буфер рН 11,5 с добавлением 5% сыворотки крупного рогатого скота; время контакта элюирующего раствора с тампоном было увеличено до 18-24 часов при t=+40С+80С; исключен этап предварительного замораживания элюата перед заражением культуры клеток.

– адсорбционного метода с использованием макропористого стекла (МПС), в соответствии с методическими рекомендациями «Метод сбора и концентрирования кишечных вирусов с помощью водопроницаемых пакетов с адсорбентом» № 11-3/191-04 от 04.07.2000.

Концентрирование вирусов в пробах речной и питьевой воды проводили в соответствии с методическими рекомендациями по изучению роли водного фактора в заболеваемости населения вирусным гепатитом А (№28-6/17 от 20.05.1986), «Методическими рекомендациями по организации и проведению эпидемиологического и санитарно-вирусологического надзора за качеством воды водоисточников, питьевой воды в системе водоснабжения с целью профилактики заболеваемости гепатитом А и другими кишечными вирусными инфекциями» № 01-19/12-13 от 11.09.1992, методическими рекомендациями «Ротавирусная инфекция» №15-6/6 от 07.03.1989, методическими рекомендациями «Метод сбора и концентрирования кишечных вирусов с помощью водопроницаемых пакетов с адсорбентом» №11-3/191-04 от 04.07.2000.

Выделение и идентификацию энтеровирусов проводили в соответствии с Руководством по вирусологическим исследованиям полиомиелита (ВОЗ, 1998). Для выделения энтеровирусов использовали культуры клеток RD, Hep-2 и L20В. Для идентификации энтеровирусов в реакции нейтрализации использовали сыворотки диагностические энтеровирусные сухие, изготовленные ФГУП «Предприятие по производству бактерийных и вирусных препаратов ИПВЭ им. М.П.Чумакова РАМН».

Повторное типирование и внутритиповую дифференциацию полиовирусов в ГУ ИПВЭ им. М.П. Чумакова РАМН осуществляли с помощью стандартных процедур, рекомендованных ВОЗ (Manual for virological investigation of poliomyelitis, WHO, 1997) в тесте микронейтрализации с кроличьими антисыворотками к вирусам полиомиелита (RIVM, Bilthoven, the Netherlands). Внутритиповую дифференциацию проводили методом иммуноферментного анализа (ИФА) с перекрестно-адсорбированными поликлональными кроличьими антисыворотками (RIVM, Bilthoven the Netherlands) и с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) с праймерами, специфичными к вакцинным штаммам Sabin.

Определение антигенов ВГА и ротавируса проводили методом твердофазного ИФА с использованием коммерческих тест-систем производства НПО «Вектор-Бест» (г. Новосибирск), ЗАО «Биоиммуноген» (г. Москва).

Определение содержания колифагов проводили методом агаровых слоев в соответствии с «Методическими указаниями по санитарно-микробиологическому анализу воды поверхностных водоемов» № 2285-81 от 19.01.1981 и титрационным методом в соответствии с МУК «Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды» № 4.2.1018-01.

Полевые исследования:

1. Сравнение эффективности концентрирования энтеровирусов из проб сточной воды с использованием метода марлевого тампона в собственной модификации и метода МПС.

Пакет с МПС и марлевый тампон одновременно помещали в ток сточной воды в одну и ту же точку на семь суток. После завершения экспозиции марлевый тампон и пакет с МПС одновременно извлекали из тока сточной воды, и доставляли в вирусологическую лабораторию с соблюдением условий холодовой цепи. Концентратами проб заражали три клеточные культуры (RD, L20B, HEP-2) одновременно.

2. Изучение эффективности очистки природной воды от вирусной контаминации в условиях действующих водоочистных сооружений.

Отбор проб для вирусологических исследований проводили одномоментно в двух точках: на входе и на выходе очистных сооружений водопровода. Исследования на очистных сооружениях ОАО «Исток» г. Каменск-Шахтинского проводили в период с ноября 2000г по август 2002г. Пробы воды отбирали один раз в две недели в объеме 10,0 л. Концентрирование вирусов в пробах воды проводили двухэтапным методом с использованием ионообменной смолы АВ 17-8 и гидроокиси алюминия с последующим осаждением сульфатом аммония. На Азовских водоочистных сооружениях для концентрирования вирусов использовали метод МПС. Пакеты помещали в ток воды до и после очистки одномоментно. После трех-четырех дневной экспозиции пакеты извлекали из воды, одномоментно в ток воды устанавливали новые пакеты с МПС. Таким образом, последовательно меняя пакеты, удалось пропустить через МПС весь объем воды, поступавшей на очистные сооружения и выходящей после очистки в течение всего периода наблюдения. Исследования проводили с января 2002г по декабрь 2002г включительно.

3. Оценка информативности колифагов в отношении вирусного загрязнения воды.

Отбор проб для исследования на колифаги, энтеровируса и антигены вирусов гепатита А и ротавируса проводили одновременно.

При анализе результатов исследований применяли методы математической статистики: вычисление интенсивных и экстенсивных показателей; оценку достоверности показателей определяли по величине ошибки репрезентативности, оценку достоверности разницы двух показателей – с помощью доверительного коэффициента Стьюдента. Установление причинно-следственных связей между инфекционной заболеваемостью и уровнем вирусного загрязнения воды проводили с использованием коэффициента корреляции. Все вычисления проводили с использованием пакета прикладных программ Exсel.

Заболеваемость кишечными вирусными инфекциями. Ростовская область относится к регионам средней эндемичности по вирусному гепатиту А (С.Л. Мукомолов и др., 2000). Несмотря на то, что заболеваемость гепатитом А в Ростовской области в период с 1992г по 2003г имела четко выраженную тенденцию к снижению, удельный вес вспышечной и групповой заболеваемости оставался стабильным и составлял 2,5-5,0% от общего числа зарегистрированных случаев. При этом ведущая роль в ухудшении эпидемической ситуации и возникновении вспышек среди населения принадлежала водному пути передачи вируса гепатита А. Из общего числа официально зарегистрированных вспышек гепатита А, 61,4% были водными.

В отношении ротавирусного гастроэнтерита в Ростовской области проявилась отчетливо выраженная тенденция к росту заболеваемости.

Проведенный анализ позволяет утверждать, что энтеровирусные инфекции – актуальная для Ростовской области проблема. При обследовании больных с диагнозами серозный менингит, острая кишечная инфекция, острый вялый паралич неполиомиелитные энтеровирусы (НПЭВ) были выделены от 7,2% заболевших. Чаще всего НПЭВ были изолированы от детей в возрасте 0-2 года (29,8%) и 11-14 лет (22,8%).

В результате исследований было показано, что интенсивность циркуляции неполиоэнтеровирусов среди больных и во внешней среде совпадала. Была установлена летне-осенняя сезонность циркуляции неполиомиелитных энтеровирусов в сточной воде и среди больных, однако в сточной воде период сезонной циркуляции был более длительным (с августа по ноябрь), чем у больных (с августа по сентябрь). При отсутствии официальной регистрации энтеровирусных инфекций исследования сточной воды позволяли получать объективную информацию о циркуляции энтеровирусов среди населения.

Оптимизация методов лабораторного контроля водных объектов. Сравнивали эффективность методов концентрирования вирусов: метода J. Riordan в традиционной постановке, в собственной модификации и метода макропористого стекла (МПС) для сточной воды; бентонита, ионообменной смолы и МПС для питьевой воды.

При использовании метода отбора проб сточной воды с помощью марлевого тампона и элюции вирусов по методу J. Riordan цитопатогенные объекты (ЦПА) удалось обнаружить в 8,2+1,2% проб. При использовании метода элюции вирусов в собственной модификации ЦПА были обнаружены в 15,6+0,9% проб сточной воды.

Метод отбора проб сточной воды с помощью марлевого тампона и элюцией вирусов в собственной модификации по эффективности в 2,1 раза превышал метод J.Riordan. Разница показателей была статистически достоверна (t=5,4; p<0,001) (таблица 2).

Таблица 2

Частота выделения энтеровирусов из проб сточной воды при отборе методом марлевого тампона

Метод элюции вирусов	Число исследованных проб	Число проб с ЦПА		Число проб с ПВ		Число проб с НПЭВ
		абс	%+m	абс	%+m	абс	%+m
метод J. Riordan	514	37	7,2+1,1	13	2,5+0,7	24	4,7+0,9
модифицированный	1422	213	15,0+0,9	58	4,1+0,5	155	10,9+0,8

Было установлено, что наиболее эффективным из доступных методов концентрирования вирусов из сточной воды оказался метод МПС.

При параллельных исследованиях с помощью метода марлевого тампона в собственной модификации удалось выделить ЦПА из 12,4+3,2%, а при использовании МПС – из 24,8+4,2% проб сточной воды. Таким образом, было показано, что использование метода МПС по эффективности в 2,0 раза превышало модифицированный метод марлевого тампона. Разница показателей была статистически достоверна (t=2,3; p<0,05) (таблица 3).

Серологическое разнообразие штаммов, выделенных с помощью метода МПС, оказалось больше.

Таблица 3

Эффективность концентрирования вирусов в пробах сточной воды с помощью метода марлевого тампона в собственной модификации и метода МПС

Метод концентрирования	Число исследованных проб	Число проб с ЦПА		Число проб с ПВ		Число проб с НПЭВ
		абс	%+m	абс	%+m	абс	%+m
метод тампона	105	13	12,4+3,2	3	2,9+1,6	10	9,5+2,8
метод МПС	105	26	24,8+4,2	8	7,6+2,5	18	17,1+3,6

При сравнении концентрирующей способности бентонита, ионообменной смолы АВ 17-8 и МПС для исследования питьевой воды было установлено, что бентонит статистически достоверно в 2 раза превосходил концентрирующую способность ионообменной смолы по показателю суммарного вирусного загрязнения (t=2,2) и в 3,8 раза по показателю присутствия антигена ВГА (t=2,9) (таблица 4).

Таблица 4

Результаты исследований проб питьевой воды при концентрировании с помощью ионообменной смолы и бентонита (Ростовская область, 1992-1994гг)

Метод концентрирования	Ионообменная смола, n=112				Бентонит, n=70
	Число проб с вирусным загрязнением	В том числе			Число проб с вирусным загрязнением	Число проб с вирусным загрязнением
		с энтеровирусами	с антигеном ВГА	с антигеном ротавируса		с энтеровирусами	с антигеном ВГА	с антигеном ротавируса
Абс. число	15	8	6	1	19	4	14	1
%	13,4+3,2	7,1+2,4	5,3+2,1	0,9+0,9	27,1+5,3	5,7+2,7	20,0+4,7	20,0+1,4

Концентрирующая способность МПС была достоверно в 1,7 раза выше, чем у ионообменной смолы по показателю суммарного вирусного загрязнения (t=2,0) и в 5,7 раза по показателю наличия антигена ротавируса (t=2,9) (таблица 5).

Таблица 5

Результаты исследований проб воды из разводящей сети водопровода при концентрировании с помощью ионообменной смолы и адсорбента (МПС) в период 1999г и 2001г

Метод концентрирования	Ионообменная смола, n=167				МПС, n=116
	Число проб с вирусным загрязнением	В том числе			Число проб с вирусным загрязнением	Число проб с вирусным загрязнением
		с энтеровирусами	с антигеном ВГА	с антигеном ротавируса		с энтеровирусами	с антигеном ВГА	с антигеном ротавируса
Абс. число	21	6	12	3	25	5	12	12
%	12,6+2,5	3,6+1,4	7,2+2,0	1,8+1,0	21,6+3,8	4,3+1,8	10,3+2,8	10,3+2,8

Было установлено, что наибольшее число выделений энтеровирусов происходит при элюции биф-экстрактом (50,0%), а антигенов вируса гепатита А и ротавируса – трис-буфером (88,6% и 97,6% соответственно).

Сопоставление результатов исследований при различной кратности отбора проб сточной воды позволило сделать вывод о преимуществе еженедельного отбора проб с семидневной экспозицией тампона или пакета с МПС в токе сточной воды. Это дало возможность проследить за циркуляцией энтеровирусов, в том числе и полиовирусов, в течение всего года.

Практика отбора проб сточной воды на канализационных насосных станциях каждого района г. Ростова-на-Дону себя не оправдала. Было показано, что оптимальными точками отбора для Ростовской области оказались городские очистные сооружения канализации после механической очистки и канализационные коллекторы детских инфекционных стационаров (до обеззараживания).

Таблица 6

Сравнительная частота выделения энтеровирусов в отдельных точках отбора проб сточной воды г. Ростова-на-Дону

Объект		1998	1999	2000	2001	2002	Всего
Очистные сооружения г. Ростова-на-Дону	число исследованных проб	16	48	39	39	68	210
	число выделенных штаммов	2	6	3	4	8	23
	% штаммов от числа проб	12,5	12,5	7,7	10,3	11,8	11,0
Всего детские стационары	число исследованных проб	15	87	83	61	88	334
	число выделенных штаммов	1	18	14	15	18	66
	% штаммов от числа проб	6,7	20,7	16,9	24,6	20,5	19,8

Данные, представленные в таблице 6, с высокой степенью вероятности (t=2,75; р<0,0,1) позволяют утверждать, что частота находок энтеровирусов в пробах сточной воды из канализационных коллекторов детских инфекционных стационаров была выше, чем в пробах из городских очистных сооружений канализации.

Сопоставление результатов исследований вирусного загрязнения воды по показателям обнаружения колифагов, энтеровирусов, аденовирусов и антигена ВГА позволило установить, что наиболее полное представление об уровне вирусной контаминации воды было получено путем выделения вирусов на чувствительных клеточных культурах и современными иммунохимическими методами. Частота обнаружения колифагов в пробах воды с вирусным загрязнением составила 62,7% для речной и 37,5% для питьевой воды (таблица 7).

Таблица 7

Результаты исследований на маркеры вирусного загрязнения и колифаги в Ростовской области.

Период исследования	Объект	Число исследованных проб	Число проб с маркерами вирусного загрязнения		Число проб с колифагами		Число проб с маркерами вирусного загрязнения и колифагами
			абс. число	% от числа исследованных проб	абс. число	% от числа исследованных проб	абс. число	% от числа проб с вирусным загрязнением
1992-1994гг, 2002-2003гг.	вода речная	172	59	34,3	80	46,5	37	62,7
	вода питьевая	150	16	10,7	16	10,7	6	37,5

Организация вирусологического надзора за сточными водами. Предложена усовершенствованная система надзора за циркуляцией энтеровирусов в сточной воде, что позволило увеличить частоту выделений энтеровирусов. Средняя частота обнаружения энтеровирусов в сточной воде в период 1992-1998гг составляла 7,2%, а в 1999-2003гг (после внедрения новой системы надзора) – 13,3%.

Усовершенствованная нами система надзора включала:

- использование более эффективных методов концентрирования вирусов (метод элюции вирусов с марлевого тампона в собственной модификации и метод МПС);

- внедрение регулярного использования в практику работы лаборатории клеточной культуры RD;

- увеличение общего числа исследований (более 300 в год);

- увеличение периода и кратности отбора проб (один раз в неделю в течение всего года);

- выбор оптимальных точек для отбора проб сточной воды (городские очистные сооружения и коллекторы детских инфекционных стационаров до обеззараживания стоков).

В целом с 1992г по 2003г в Ростовской области при исследовании сточной воды энтеровирусы были выделены из 298 проб, что составляет 12,1% от числа исследованных. Динамика выделений энтеровирусов отмечалась крайней неравномерностью от 4,8% до 19,7%.

Частота выделения энтеровирусов из проб сточной воды на разных административных территориях Ростовской области была подвержена значительным колебаниям от 1,7% до 27,3%.

Всего было изолировано 97 штаммов полиовирусов (3,9% от числа исследованных проб). Преобладания определенного серотипа по результатам многолетних наблюдений в Ростовской области не установлено. В общей структуре выделенных полиовирусов штаммы типа 1 составили 32,0%, типа 2 – 34,0%, типа 3 – 34,0%. Все штаммы были оценены как вакциннородственные.

Всего за период 1992-2003гг в Ростовской области было выделено 215 штаммов неполиоэнтеровирусов, что составило 8,7% от числа исследованных проб. Среди НПЭВ, циркулирующих в Ростовской области, наиболее многочисленную группу представляют ЕСНО-вирусы (51,3% от общего числа выделенных штаммов энтеровирусов). Внутри этой серологической группы преимущественно были распространены ЕСНО 7, 11, 14, 16. На серологическую группу Коксаки В приходилось 9,9% всех выделенных из сточной воды штаммов, в том числе на Коксаки В1 – 4,5%, Коксаки В3 – 3,2%, Коксаки В5 – 1,9%.

Была установлена смена доминирующего во внешней среде серотипа энтеровируса, без четкой периодичности. Энтеровирусы Коксаки В3 циркулировали в период 1996г по 1998г, Коксаки В5 – с 1998г по 1999г. После трехлетнего отсутствия вирус Коксаки В3 вновь появился в 2002г и продолжал циркулировать в 2003г. В 2002г впервые в Ростовской области был выделен энтеровирус Коксаки В 1, который продолжал циркулировать и в 2003г. На смену эпидемически значимым серотипам ЕСНО 11 и ЕСНО 16, максимум циркуляции которых пришелся на 2000г и 2001г соответственно, в 2002г пришел ЕСНО 7, а в 2003г – ЕСНО 5. В 2002г впервые за весь период наблюдения из сточной воды были выделены энтеровирусы ЕСНО 6 и ЕСНО 31.

Поверхностные источники водоснабжения. Предложенная нами система вирусологического надзора за источниками водоснабжения и питьевой водой включает:

- регулярный контроль воды в местах водозаборов, на выходе очистных сооружений водопроводов и в разводящей сети;

- отбор проб воды не реже одного раза в месяц в течение всего года;

- концентрирование вирусов методом МПС;

- проведение прямых вирусологических исследований с использованием клеточных культур RD и HEP-2 для выделения энтеровирусов и иммунохимических методов определения антигенов ВГА и ротавируса.

За период 1992-2003гг при исследовании воды из поверхностных источников водоснабжения число проб воды, имеющих маркеры вирусного загрязнения, составило 29,4% (таблица 8). Энтеровирусы были выделены в 3,1%, антиген ВГА был обнаружен в 21,8%, антиген ротавируса – в 17,4% проб. Средние показатели обнаружения маркеров вирусного загрязнения воды из поверхностных источников водоснабжения в Ростовской области превышали те же показатели по России (энтеровирусы в 1,4 раза, антиген ВГА на 2,4 раза, антиген ротавируса в 1,7 раза).

Таблица 8

Динамика показателей вирусного загрязнения поверхностных источников водоснабжения в Ростовской области

Годы	Число исследо- ванных проб	Число проб проб с вирусным загрязнением,%	Число проб с энтеро- вирусами, %	Число проб с АГ ВГА, %	Число проб с АГ рота- вируса, %
1992	76	11,8	3,9	9,2	0,0
1993	39	20,5	12,8	7,7	5,1
1994	56	28,6	7,1	19,6	1,8
1995	75	18,7	1,3	17,3	0,0
1996	76	7,9	2,6	3,9	1,3
1997	81	13,6	3,7	6,2	3,7
1998	67	23,9	7,5	0,0	16,4
1999	36	11,1	0,0	8,3	2,7
2000	55	16,4	3,6	9,1	5,5
2001	82	18,3	0,0	13,4	8,5
2002	162	75,3	0,6	67,3	61,7
2003	55	38,8	0,0	29,9	34,3
Всего	872	29,4	3,1	21,8	17,4

Число проб воды в речных водозаборах, имеющих маркеры вирусного загрязнения, на разных административных территориях области различалось в широких пределах от 8,3% до 49,7%. Было отмечено возрастание вирусной контаминации поверхностных вод по мере продвижения от среднего течения реки Дон к ее устью. Дополнительным загрязнителем является р. Северский Донец.

При изучении многолетней динамики вирусного загрязнения речной воды установлена определенная цикличность. И, если для отдельных вирусов период от одного максимального уровня до другого составлял от 3 до 5 лет, то в целом для кишечных вирусов цикличность составляла 4 года. Максимальный показатель суммарного вирусного загрязнения воды поверхностных источников водоснабжения был зарегистрирован в 1994г (28,6%), 1998г (23,9%) и 2002г (75,3%).

Показатель выделения энтеровирусов в пробах воды из речных водозаборов варьировал от 1,3% до 12,8%. Среди энтеровирусов, типовую принадлежность которых удалось установить, преобладали вирусы группы ЕСНО. В группе Коксаки В преобладал серотип 3.

При анализе помесячного распределения положительных находок энтеровирусов выявлена весенне-летняя сезонность (рисунок 1). На период с мая по сентябрь приходится 83,4% от общего числа штаммов энтеровирусов, изолированных из речной воды. Максимальное число выделенных штаммов энтеровирусов зарегистрировано в июне (21,2%).

Рисунок 1 Сезонное распределение выделений энтеровирусов в пробах речной воды на территории Ростовской области, 1992-2003гг.

В многолетней динамике находок антигена ВГА в пробах речной воды зарегистрированы три цикла подъема и три цикла снижения показателей. Частота обнаружения антигена ВГА варьировала от 3,9% до 67,3%.

Рисунок 2 Сезонное распределение положительных находок антигена ВГА в речной воде в Ростовской области, 1992-2003гг.

При анализе ежемесячной динамики находок антигена ВГА в речной воде отмечена ярко выраженная весенне-летняя сезонность (рисунок 2), 64,1% всех положительных проб приходится на период с апреля по август, с пиком в июле (21,5%).

Динамика обнаружения антигена ротавируса в местах водозаборов была подвержена значительным колебаниям от 1,2% до 61,7%. Было зарегистрировано три цикла роста и снижения показателей. Каждый последующий максимальный уровень выделений ротавируса был значительно выше предыдущего (5,1%, 16,4% и 61,7%).

Рисунок 3 Сезонное распределение положительных находок антигена ротавируса в пробах речной воды в Ростовской области, 1992-2003гг.

Анализ помесячной динамики распределения находок антигена ротавируса в речной воде позволил установить, что период его наиболее интенсивной циркуляции начинается с паводка и продолжается в летние месяцы (рисунок 3). На шесть месяцев с февраля по июль приходится 69,5% всех годовых выделений антигена ротавируса. Максимум выделений зарегистрирован в апреле (13,9%).

Подземные источники водоснабжения. Подземные источники водоснабжения в Ростовской области были в значительной степени контаминированы кишечными вирусами. В целом 12,4% проб воды из подземных источников содержали различные маркеры вирусного загрязнения. Энтеровирусы были обнаружены в 1,7% проб и представлены различными серологическими вариантами, однако преобладания одного из них не обнаружено. Антиген ВГА был обнаружен в 9,7% проб воды, антиген ротавируса в 5,0% проб. В общей сумме положительных находок преобладал антиген ВГА.

Рисунок 4. Удельный вес маркеров вирусного загрязнения в подземных и поверхностных источниках водоснабжения

При сравнении показателей вирусного загрязнения подземных и поверхностных источников водоснабжения было установлено, что подземные источники по всем показателям оказались менее подвержены вирусному загрязнению (рисунок 4). В поверхностных водозаборах Ростовской области антиген ВГА был обнаружен в 2,2 раза чаще, чем в подземных источниках, антиген ротавируса – в 3,5 раза, а энтеровирусы в 1,8 раза.

Зоны массового рекреационного водопользования. Проведенные исследования позволили установить высокий уровень вирусной контаминации открытых водоемов Ростовской области в местах массового рекреационного водопользования. Были установлены существенные различия уровня вирусного загрязнения воды в разных точках отбора проб и в отдельные годы. В целом в Ростовской области 20,3% проб воды из зон рекреаций содержали маркеры вирусного загрязнения. Энтеровирусы были обнаружены в 7,1%, антиген вируса гепатита А в 13,6% проб.

Показатели вирусного загрязнения в зонах массового рекреационного водопользования г. Ростова-на-Дону, превышали те же показатели не только в местах водозаборов, но и в местах сброса канализационных вод (рисунок 5). Показатель выделения энтеровирусов в зонах рекреаций был на 38,7%, а антигена вируса гепатита А на 15,8% выше, чем в местах сброса городской канализации.

Несмотря на то, что разница показателей вирусного загрязнения воды в зонах рекреации и местах сброса канализационных вод была не значительна, эта закономерность прослеживалась в течение длительного периода наблюдений.

Рисунок 5 Выделение энтеровирусов и антигена ВГА в поверхностных водоемах г. Ростова-на-Дону, 1992-1997гг.

Была установлена прямая корреляционная связь между заболеваемостью населения гепатитом А и суммой находок энтеровирусов и антигена ВГА в речной воде (r=+0,61+0,2). Наиболее сильная достоверная связь между находками антигена ВГА в зонах рекреаций и заболеваемостью гепатитом А в г. Ростове-на-Дону была установлена для детей 7-10лет (r=+0,82+0,17). Помимо этого была установлена прямая корреляционная связь заболеваемости гепатитом А населения г. Ростова-на-Дону с ежемесячными находками антигена ВГА в зонах рекреаций (r=+0,39). Приведенные данные свидетельствуют о наличии постоянно действующего фактора, способствующего интенсивному загрязнению воды в зонах рекреаций.

Вирусное загрязнение питьевой воды в Ростовской области. При исследовании воды в системе разводящей сети водопровода было установлено, что показатель суммарного вирусного загрязнения составил 13,8%. Энтеровирусы были обнаружены в 2,3% исследованных проб, антиген ВГА обнаружен в 7,7%, антиген ротавируса в 6,6% проб (таблица 9).

При относительном разнообразии выделенных штаммов энтеровирусов, явного преимущества одного из серологических типов не было обнаружено. Большая часть выделенных штаммов энтеровирусов относилась к группам Коксаки В и ЕСНО.

В общей сумме положительных находок наибольший удельный вес приходился на антиген ВГА (46,4%) и антиген ротавируса (39,7%).

Цикличности обнаружения кишечных вирусов в питьевой воде, в отличие от речной воды, не установлено.

Таблица 9

Результаты вирусологических исследований проб воды в системе разводящей сети водопроводов Ростовской области

Годы	Число ис- следован- ных проб	Число проб с вирусным загрязнением		Число проб с энтеровирусами		Число проб с антигеном ВГА		Число проб с антигеном ротавивуса
		абс	%	абс	%	абс	%	абс	%
1992	51	8	15,7	2	3,9	6	11,8	0	-
1993	73	11	15,1	3	4,1	7	9,6	5	6,8
1994	116	15	12,9	5	4,3	9	7,8	1	0,9
1995	150	12	8,0	1	0,7	11	7,3	0	-
1996	73	5	6,8	2	2,7	2	2,7	1	1,4
1997	63	0	-	0	-	0	-	0	-
1998	61	6	9,8	1	1,6	0	-	5	8,2
1999	74	8	10,8	4	5,4	4	5,4	0	-
2000	115	25	21,7	4	3,7	10	8,7	20	17,4
2001	190	42	22,1	7	3,7	23	12,1	17	8,9
2002	144	34	23,6	0	-	20	13,9	31	21,5
2003	155	8	5,2	0	-	7	4,5	1	0,6
Всего	1265	174	13,8	29	2,3	97	7,7	83	6,6

Вода в системе разводящей сети водопровода на отдельных территориях Ростовской области была подвержена вирусной контаминации в разной степени. К причинам, определяющим это положение, мы отнесли следующие:

- разный уровень контаминации исходной воды (в сельских районах с меньшей плотностью населения, соответственно, и ниже уровень циркуляции кишечных вирусов, уровень вирусной контаминации речной воды в источнике увеличивается к устью р. Дон);

- исследование проб питьевой воды только в период эпидемического неблагополучия повышает вероятность обнаружения кишечных вирусов;

- отсутствие полного комплекса очистки на водоочистных сооружениях.

Рисунок 6 Сезонность циркуляции энтеровирусов в пробах питьевой воды в Ростовской области, 1992-2003гг

На период с июля по сентябрь приходилось 44,1% всех выделений энтеровирусов (рисунок 6). Помимо этого, было зарегистрировано еще два периода повышенного выделения энтеровирусов в питьевой воде: в феврале и мае (коэффициент сезонности 17,6% и13,2% соответственно).

Рисунок 7 Сезонное распределение находок антигена ВГА в пробах питьевой воды в Ростовской области, 1992-2003гг

Антиген ВГА в питьевой воде в течение года выявлялся относительно равномерно, с незначительным увеличением числа обнаружений в весенне-летний период (рисунок 7). На период с мая по август приходилось 47,1% всех находок антигена ВГА, с максимальным значением, как и в речной воде, в июле (14,8%).

Рисунок 8 Сезонность циркуляции антигена ротавируса в пробах питьевой воды в Ростовской области, 1992-2003гг.

Наиболее высокие показатели коэффициента сезонности антигена ротавируса в питьевой воде, в отличие от речной воды, были зарегистрированы в летние месяцы, 40,9% находок антигена ротавируса в питьевой воде пришлось на период с июня по август (рисунок 8). Максимальное число находок антигена ротавируса в питьевой воде обнаружено в декабре (21,0%).

Таким образом, было установлено, что сезонность распределения маркеров вирусного загрязнения в питьевой воде отличается от сезонности их распределения в речной воде: период сезонного подъема короче, регистрируются периоды повышенного выделения вне сезонного подъема.

Маркеры вирусного загрязнения в пробах питьевой воды, отобранных по эпидпоказаниям, встречались на 64,8% чаще, чем в пробах, исследованных при плановом контроле.

Установлена прямая достоверная корреляционная связь между заболеваемостью населения Ростовской области ротавирусным гастроэнтеритом и количеством находок антигена ротавируса в питьевой воде (r=+0,72+0,15).

Наличие прямой корреляционной связи с заболеваемостью, цикличности и сезонности позволяет включить в процедуру текущего санитарно-вирусологического контроля качества воды иммунохимические методы определения антигенов ВГА и ротавируса.

Барьерная роль водоочистных сооружений в отношении вирусного загрязнения. При изучении эффективности работы водоочистных сооружений Ростовской области по освобождению от вирусной контаминации было установлено, что традиционная схема водоподготовки, включающая коагуляцию, отстаивание, фильтрование и обеззараживание, снижала содержание энтеровирусов на 9,7%, антигена ВГА на 46,5%, антигена ротавируса на 63,2%. Средний показатель суммарного вирусного загрязнения на выходе очистных сооружений водопроводов составил 14,1%, энтеровирусы присутствовали в 2,8% проб, антиген ВГА в – 7,9%, антиген ротавируса – в 6,4%.

Вывод о невозможности обеспечить полную очистку воды от вирусной контаминации традиционными методами подтверждался результатами полевых испытаний, проведенных в условиях действующих водоочистных сооружений с различным исходным уровнем вирусной контаминации и разными способами водоподготовки, когда отбор проб воды из места водозабора и на выходе очистных сооружений водопровода проводили одномоментно.

При проведении полного цикла водоподготовки на водоочистных сооружениях АO «Исток» г. Каменск-Шахтинский количество находок энтеровирусов снижалось в 2,1 раза, антигена ВГА в 7 раз, а антигена ротавируса в 2,6 раза. На Азовских водоочистных сооружениях количество находок антигена ВГА снижалось на 80,9%, антигена ротавируса на 61,2%.

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что в период наблюдения с 1992г по 2003г все водные объекты Ростовской области, включая питьевую воду, были подвержены вирусной контаминации. Энтеровирусы присутствовали в 12,1% проб сточной воды, 3,1% проб поверхностных источников водоснабжения, 2,3% проб воды из разводящей сети водопровода. Антиген ВГА обнаруживали в 21,8% проб поверхностных источников водоснабжения, 7,7% проб разводящей сети водопровода. Антиген ротавируса присутствовал в 9,7% проб поверхностных источников, 6,6% проб разводящей сети водопровода.

2. Показано, что циркуляция кишечных вирусов в речной воде характеризуется периодичностью в четыре года. Установлено, что энтеровирусам в речной воде присуща летне-осенняя, антигену ВГА – весенне-летняя, антигену ротавируса– зимне-весенне-летняя сезонность. В питьевой воде для кишечных вирусов свойственно укорочение периода сезонной циркуляции и появление периодов повышенного выделения вне сезонного подъема.

3. Уровень вирусной контаминации водных объектов влияет на состояние заболеваемости кишечными вирусными инфекциями. Установлена прямая корреляция между уровнем заболеваемости вирусным гепатитом А и частотой обнаружения антигена вируса гепатита А в речной воде. Показано, что использование рекреационных вод для купания является постоянно действующим фактором, способствующим распространению заболеваемости гепатитом А среди населения. Установлена прямая корреляционная связь между уровнем заболеваемости ротавирусным гастроэнтеритом и частотой обнаружения антигена ротавируса в питьевой воде.

4. Традиционные технологии водоподготовки не обеспечивают полного освобождения природной воды от вирусной контаминации.

5. Предложенные системы вирусологических исследований водных объектов окружающей среды позволяют проводить эффективный санитарно-эпидемиологический надзор за циркуляцией кишечных вирусов.

6. Использование косвенных показателей загрязнения воды (колифагов) не дает полного представления об уровне вирусной контаминации. Регулярный контроль за объектами водоснабжения необходимо проводить с применением прямых вирусологических исследований, включая иммунохимические методы определения антигенов ВГА и ротавируса.

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

1. Некоторые итоги изучения санитарно-вирусологического фона водных объектов Ростовской области / Зыкова Т.А., Мазрухо Т.В., Асмолова Н.Ю. // «Актуальные вопросы профилактики чумы и других инфекционных заболеваний, материалы межгосударственной научно-практической конференции, посвященной 100-летию открытия возбудителя чумы». – Ставрополь. – 1994. – С.243-244

2. Сравнительное изучение методов концентрации энтеровирусов в воде / Зыкова Т.А., Мазрухо Т.В., Асмолова Н.Ю., Говорухина М.В. // «Региональные проблемы охраны окружающей среды и здоровья населения». Сборник научных трудов под редакцией академика РАМН А.И.Потапова. – Ростов-на-Дону. – 1997 – С.109-110

3. Распространение инфекции, вызванной вирусом Коксаки В среди детей / Швагер М.М., Зыкова Т.А., Асмолова Н.Ю., Говорухина М.В., Мазрухо Т.В. // «Региональные проблемы охраны окружающей среды и здоровья населения». Сборник научных трудов под редакцией академика РАМН А.И.Потапова. – Ростов-на-Дону. – 1997. – С.162-163

4. Эпидемический процесс вирусного гепатита А (ВГА) / Швагер М.М., Кононыхин М.Т., Пономарева Е.А., Зыкова Т.А. // «Региональные проблемы охраны окружающей среды и здоровья населения». Сборник научных трудов под редакцией академика РАМН А.И.Потапова. – Ростов-на-Дону. – 1997. – С.157-158

5. К вопросу о популяционном иммунитете к полиомиелиту в Ростовской области / Кондратенко Т.А., Швагер М.М., Колесникова В.Б., Дмитриевский Е.В., Говорухина М.В., Зыкова Т.А., Мазрухо Т.В., Асмолова Н.Ю. // Материалы 7 Съезда всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов, паразитологов. – Москва. – 1997. – Т. 2. – С.98-99

6. Заболеваемость полиомиелитом и острыми вялыми параличами в области /Айдинов Г.Т., Швагер М.М., Сароян Ю.Д., Зыкова Т.А, Говорухина М.В. // «Региональные проблемы охраны здоровья населения Центрального Черноземья». Материалы научно-практической конференции под редакцией академика РАМН А.Н. Потапова. – Белгород. – 2000. – С.304-308

7. Клиническая характеристика инфекционных заболеваний у детей, сопровождающихся синдромом острого вялого паралича / Симованьян Э.Н., Бовтало Л.Ф., Сароян Ю.Д., Зыкова Т.А., Мельник Е.И. // Труды 3 научной сессии Ростовского государственного медицинского Университета. – Ростов-на-Дону. – 2000. – С.186-188

8. Современные микробиологические методы исследования о в эпиддиагностике вспышечной заболеваемости / Айдинов Г.Т, Швагер М.М., Рыжков В.Ю., Ковалев Е.В., Зыкова Т.А., Янушевская Н.В. // «Актуальные проблемы обеспечения санэпидблагополучия в регионах Центральной России». Научные труды Федерального научного центра гигиены им. Ф.Ф.Эрисмана под редакцией академика РАМН, профессора А.И.Потапова. – 2001. – выпуск 2, часть 2. – Липецк. – С.132-134

9. Некоторые подходы к организации вирусологического контроля за объектами водоснабжения / Зыкова Т.А., Говорухина М.В., Асмолова Н.Ю., Мазрухо Т.В., Швагер М.М., Рыжков В.Ю. // Материалы 8 Съезда Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов, часть 3. – Москва.– 2002. – С.25-26

10. Организация эпиднадзора за полиомиелитом и ОВП в Ростовской области / Айдинов Г.Т., Швагер М.М., Рыжков В.Ю., Кипайкин В.А., Сароян Ю.Д., Зыкова Т.А. // Эпидемиологический надзор за полиомиелитом и острыми вялыми параличами: Сборник материалов по обмену опытом работы в регионах Российской Федерации. М.: Федеральный центр госсанэпиднадзора Минздрава России. – 2002. – С. 173-176

11. Оценка чувствительности клеточной культуры L 20 В к полиовирусам / Зыкова Т.А. // «Инфекционные и паразитарные болезни в современном обществе. Клинико-лабораторное обеспечение инфектологии». Материалы юбилейной научно-практической конференции, посвященной 80-летию образования кафедры инфекционных болезней ММА им. И.М.Сеченова. – Москва. – 2003. – С.85-86

12. Дополнительные мероприятия в эпиднадзоре за полиовирусом / Зыкова Т.А., Иванова О.Е., Еремеева Т.П. // Материалы международного конгресса «Ликвидация и элиминация инфекционных болезней – прогресс и проблемы». – Санкт-Петербург. – 2003. – С.4

13. Серологический контроль за проведением Национальных дней иммунизации против полиомиелита в Ростовской области / Зыкова Т.А., Говорухина М.В. // Материалы международного конгресса «Ликвидация и элиминация инфекционных болезней – прогресс и проблемы». – Санкт-Петербург. – 2003. – С.5

14. Влияние вирусной контаминации водных объектов на уровень заболеваемости кишечными инфекциями / Айдинов Г.В., Зыкова Т.А. // Материалы международного конгресса «Ликвидация и элиминация инфекционных болезней – прогресс и проблемы». – Санкт-Петербург. – 2003. – С.105

15. Оценка возможностей очистных сооружений водопровода снижать вирусную контаминацию питьевой воды / Айдинов Г.В., Соловьев М.Ю., Зыкова Т.А. // «Здоровье населения и среда обитания». Информационный бюллетень. – Москва. – 2003. – №8. – С.24-28

16. Результаты многолетних вирусологических исследований источников водоснабжения Ростовской области / Айдинов Г.Т., Зыкова Т.А., Говорухина М.В. // «Гигиенические проблемы водоснабжения населения и войск». Материалы Всероссийской научно-практической конференции – Санкт-Петербург. – 2003. – С.18-19

17. Использование адсорбента в водопроницаемой оболочке для предварительной концентрации вирусов в пробах питьевой воды / Айдинов Г.Т., Зыкова Т.А., Говорухина М.В., Иванова О.Е., Еремееа Т.П. // «Гигиенические проблемы водоснабжения населения и войск». Материалы Всероссийской научно-практической конференции. – Санкт-Петербург. – 2003. – С.19-20

18. Острые вялые параличи в дифференциальной диагностике полиомиелита на этапе его ликвидации // Бовтало Л.Ф., Сароян Ю.Д., Зыкова Т.А. // «Современные проблемы педиатрии». Материалы юбилейной научно-практический конференции, посвященной 90-летию со дня рождения профессора А.Г. Шовкуна. – Ростов-на-Дону. – 2004. – С.29-31

19. Вирусологический мониторинг за объектами водоснабжения / Зыкова Т.А., Айдинов Г.В. // «Социально-гигиенические и эпидемиологические проблемы сохранения здоровья военнослужащих и населения». Научные труды Федерального научного центра гигиены им. Ф.Ф.Эрисмана под редакцией академика РАМН, профессора А.И.Потапова, выпуск 11. – Нижний Новгород. – 2004. – С.33-34

20. Сравнение двух методов отбора проб сточной воды / Зыкова Т.А. // «Социально-гигиенические и эпидемиологические проблемы сохранения здоровья военнослужащих и населения». Научные труды Федерального научного центра гигиены им. Ф.Ф.Эрисмана под редакцией академика РАМН, профессора А.И.Потапова, выпуск 11. – Нижний Новгород.– 2004. – С.102

21. Использование коагулянта оксихлорида алюминия (БОПАК-Е) в очистке воды от вирусного загрязнения / Айдинов Г.В., Зыкова Т.А., Соловьев М.Ю. // «Вода: экология и технология». Материалы 6 международного конгресса Экватек-2004, часть 2. – Москва. – 2004. – С.787-788

22. Контроль вирусологической безопасности зон массового рекреационного водопользования / Зыкова Т.А., Айдинов Г.В., Иванова О.Е., Еремеева Т.П. // «Вода: экология и технология». Материалы 6 международного конгресса Экватек-2004, часть 2. – Москва. – 2004. – С.793-794

23. Некоторые подходы к организации эпиднадзора за циркуляцией полиовирусов во внешней среде / Зыкова Т.А., Айдинов Г.В., Швагер М.М., Иванова О.Е., Еремеева Т.П. // Здоровье населения и среда обитания». Информационный бюллетень. – 2004. – №10(139). – С.19-24

24. Ассоциации кишечных вирусов в водных объектах внешней среды / Зыкова Т.А., Говорухина М.В., Асмолова Н.Ю., Мазрухо Т.В., Кудря Е.В. // Труды всероссийской научной конференции «Эпидемиология, лабораторная диагностика и профилактика вирусных инфекций». – Санкт-Петербург. – 2005. – С. 127-129

25. Частота элюции кишечных вирусов с макропористого стекла при использовании различных буферных растворов / Зыкова Т.А., Говорухина М.В., Асмолова Н.Ю., Мазрухо Т.В., Кудря Е.В. // Труды всероссийской научной конференции «Эпидемиология, лабораторная диагностика и профилактика вирусных инфекций». – Санкт-Петербург. – 2005. – С. 167-169.