Модуляция адгезивно – активных структур микробного ценоза влагалища селективными модификаторами эстрогеновых рецепторов растительного происхождения

на правах рукописи

РЫБАС Яна Александровна.

МОДУЛЯЦИЯ АДГЕЗИВНО – АКТИВНЫХ СТРУКТУР МИКРОБНОГО ЦЕНОЗА ВЛАГАЛИЩА СЕЛЕКТИВНЫМИ МОДИФИКАТОРАМИ ЭСТРОГЕНОВЫХ РЕЦЕПТОРОВ РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ

03.02.03 – микробиология

14.01.01 – акушерство и гинекология

Автореферат

диссертации на соискание учёной степени

кандидата медицинских наук

Москва – 2012

Работа выполнена на кафедре микробиологии и вирусологии медицинского факультета Государственного образовательного бюджетного учреждения высшего профессионального образования «Российский университет дружбы народов» и на базе лаборатории экспериментальной эндокринологии и патологии окружающей среды медицинского факультета Университета Чили.

Научные руководители:

кандидат медицинских наук,

доцент Кравцов Эдуард Георгиевич

доктор медицинских наук,

профессор Черничин Андрей Николаевич

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук Волкова Рауза Асхатовна

доктор медицинских наук,

профессор Ордиянц Ирина Михайловна

Ведущая организация: Федеральное бюджетное учреждение науки Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г. Н. Габричевского.

Защита диссертации состоится 28 марта 2012 года в 15 часов на заседании диссертационного совета Д. 212.203.05 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Российский университет дружбы народов» по адресу: 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 8.

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке Государственного образовательного бюджетного учреждения высшего профессионального образования «Российский университет дружбы народов» по адресу: 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 6.

Автореферат разослан «21» февраля 2012 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета,

кандидат биологических наук, доцент О. Б. Гигани

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Дисбиотические состояния в организме женщины и, в частности, возникновение дисбактериоза влагалища, характеризуются резким снижением количества лактофлоры и бурным размножением условно-патогенных микроорганизмов. Это приводит к развитию в
данной микроэкологической нише вагинитов и вагинозов, а во время беременности может стать причиной инфицирования плода и его оболочек, являясь тем самым причиной серьёзных осложнений в гинекологической и акушерской практике.

По материалам Министерства Здравоохранения и Социального Развития РФ у 60- 70% женщин репродуктивного возраста определяется дисбактериоз влагалища во время беременности, тогда как в постменопаузе он может достигать 90-95% (Минздравсоцразвития, 2008).

Начинать лечение подобных состояний в практике принято с коррекции
гормонального фона организма.

Наиболее распространёнными для этих целей гормональными препаратами являются синтетические аналоги половых гормонов, а также субстанции полученные из растительного сырья и по своему действию сходные с эстрогенами (фитоэстрогены) (Barret J. R., 1996). Помимо положительных эффектов на ткани органов-мишеней эстрогены оказывают и ряд нежелательных эффектов, таких как гипертрофия, отёк и пролиферация тканей. Данный факт побуждает к поиску новых препаратов, которые обладают необходимыми свойствами гормона при отсутствии нежелательных эффектов, к таковым относятся и фитоэстрогены. Необходимо отметить, что данные вещества избирательно взаимодействуют с рецепторами для половых гормонов, а поскольку адгезия основных сочленов микробного ценоза является гормонозависимой, использование фитоэстрогенов открывает широкие возможности для индивидуального подбора пробиотических препаратов и модуляторов эстрогензависимых рецепторов при лечении дисбиотических процессов во влагалище.

Цель и задачи исследования

В связи с вышесказанным цель настоящей работы заключалась в изучении гормонозависимой адгезии и возможности коррекции микробного ценоза влагалища фитоэстрогенами.

По ходу достижения цели последовательно решались следующие задачи:

1. Определялась гормональная зависимость L. acidophilus NК 1, L. fermentum 90 TS-4, С. albicans 506 В на эпителии влагалища женщин репродуктивного периода в разные фазы менструального цикла (МЦ).
2. Определялась гормональная зависимость L. acidophilus NК 1, L. fermentum 90 TS-4, С. albicans 506 В на влагалищном эпителии беременных женщин (группа с высоким содержанием эстрогенов) и женщин в постменопаузе (группа с низким содержанием эстрогенов).
3. Выявлялось корригирующее действие препарата Климадинон®, содержащего фитоэстроген, на адгезию L. acidophilus NК 1, L. fermentum 90 TS-4, С. albicans 506 В к эпителиоцитам влагалища от группы женщин в постменопаузе.
4. Определялось и сравнивалось действие на рецепторы клеток матки крыс линии Sprague-Dawley препарата Климадинон® и предлагаемого чилийской стороной препарата № 181 фракция b, полученного из местного растительного сырья.
5. Изучалось действие на микробный ценоз влагалища крыс линии Sprague-Dawley, препарата № 181 фракция b.

Научная новизна

Впервые показано, что использование различных модуляторов эстрогензависимых рецепторов изменяет адгезивную активность эпителия влагалища к определённым видам лактобактерий и позволяет производить адекватный подбор пробиотических препаратов, а также соответствующих им модуляторов эстрогензависимых рецепторов.

Впервые установлено, что влияние гормонального фона на адгезию различных микроорганизмов видоспецифично.

Впервые выявлено, что адгезивная активность С. albicans 506 В на эпителиоцитах влагалища женщин, имевших в анамнезе хронический кандидоз, увеличена, однако адгезия референс-штаммов лактобактерий на клетках мишеней от тех же пробандов не изменена.

Впервые показано, что применение препарата Климадинон® в постменопаузе усиливает адгезию L. acidophilus NК l и L. fermentum 90 TS-4 на эпителиоцитах влагалища женщин, но не влияет на адгезивную активность С. albicans 506 В в опытах с теми же клетками мишенями.

Впервые установлено, что препарат № 181 фракция b, содержащий фитоэстроген, вызывает гипертрофию миоцитов и отёк эндометрия матки крыс линии Sprague-Dawley, проявляя тем самым эстрогеноподобное действие, однако при совместном подкожном введении с 17 -эстрадиолом снижает колонизацию влагалища крыс лактобактериями, т.е. фактически проявляет антиэстрогенное действие.

Практическая значимость

Экспериментальное изучение адгезивной активности сочленов микробного ценоза, при воздействии селективных модуляторов эстрогензависимых рецепторов открывает перспективы для индивидуального подбора пробиотических штаммов, а также соответствующих модуляторов эстрогензависимых рецепторов в лечении вагинального дисбактериоза.

Разработанная экспериментальная модель на животных может быть использована для отбора селективных модуляторов эстрогензависимых рецепторов.

При коррекции дисбиотических сдвигов в клинической практике может быть предложено сочетание соответствующих фитоэстрогенов и определённых пробиотических штаммов лактобактерий.

Положения выносимые на защиту

1. Адгезивная активность L. acidophilus NК l и L. fепnепtum 90 TS-4 на клетках мишенях зависит как от циклических изменений эстрадиола, так и от степени постоянно высоких уровней гормона.
2. Адгезивная активность клинического изолята С. albicans 506 В не зависит от циклических гормональных изменений и постоянно высокого уровня эстрогенов.
3. Препарат Климадинон®, содержащий фитоэстроген и применяемый в
   постменопаузе в качестве заместительной гормональной терапии, увеличивает адгезивную активность L. acidophilus NК1 и L. fermentum 90 TS-4, но не влияет на таковую С. albicans 506 В.
4. Адгезия L. fermentum 90 TS-4 в постменопаузе усиливается синтетическим аналогом эстрадиола, содержащимся в препарате Климонорм® (2,0 мг эстрадиола валериат; 0,15 мг левоноргестрел).

5. В модели на неполовозрелых животных, предложенный чилийской стороной, фитоэстроген, содержащийся в препарате № 181 фракция b, влиял на экспрессию рецепторов влагалищных эпителиоцитов аналогично 17-эстрадиолу.
6. В модели на овариоэктомированных животных препарат № 181 фракция b усиливал колонизацию лактобактериями влагалища, его совместное введении с 17-эстрадиолом интактным животным снижало обсеменённость влагалища лактобактериями, т. е. проявлял антиэстрогенные свойства, поскольку не влиял на степень колонизации эпителиоцитов влагалища лактобактериями.

Апробация работы

Результаты работы докладывались и обсуждались:

- на международной научной конференции «Фестиваль науки в РУДН» (Москва, 2011);

-на научной конференции «Эндемичные растения Чили и их использование в практической медицине» (Сантьяго де Чили, 2010);

- на заседании кафедры микробиологии и вирусологии медицинского факультета РУДН (Москва, 2011).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 2 статьи в журналах рекомендованных перечнем ВАК РФ.

Структура и объём работы

Диссертация изложена на 103 страницах машинописного текста, содержит 8 таблиц и 3 рисунка. Работа состоит из введения, обзора литературы и собственных результатов, заключения, выводов и списка цитируемой литературы, который включает 87 отечественных и 131 иностранный источник.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Изучение адгезии микробов на эпителиоцитах влагалища женщин проводилось с использованием двух штаммов лактобактерий: L. fеrmепtum 90 TS-4 и L. acidophilus NК 1 и клиническом изоляте дрожжеподобных грибов (ДПГ) С. albicans 506 В. Штаммы L. fermentum 90 TS-4 и L. acidofilus NК 1 получены из коллекции Университета г. Тарту (Эстония) и являются постоянными обитателями влагалища, а также рекомендованы как
пробиотические МЗ РФ. С. albicans 506 В, использованный в работе, был выделен от беременной женщины, у которой не было клинических проявлений кандидоза (из коллекции Проценко А. В. Кафедра микробиологии и вирусологии медицинского факультета РУДН).

Для выращивания лактобактерий использовали среду МРС-1. C.albicans 506 В культивировали на среде Сабуро.

При изучении адгезии L. fermentum 90 TS-4, L. acidophilus NК 1 и ДПГ С. albicans 506 В на эпителиоцитах влагалища женщин, пациентки в постменопаузальном периоде принимали лекарственный препарат Климадинон® (Бионорика, Германия) - жидкий экстракт корневища цимицифуги (Cimicifuga racemosa L.) или эстроген-гестагеновый
препарат Климонорм® (Shering AG, Германия), содержащий эстрадиола валериат 2,0 мг и леваноргестрел 0,15 мг.

В опытах на крысах линии Sprague-Dawley животным подкожно вводили следующие препараты: 17- эстрадиол вводили в дозе 0,33 мг/кг (в группе неполовозрелых животных каждой особи вводили 0,0165 мг; в группе половозрелых - 0,0495 мг 17 -эстрадиола); препарат № 181 фракция b любезно предоставленный Лабораторией экспериментальной эндокринологии и патологии окружающей среды Universidad de Chile (Сантьяго), руководимой профессором Черничиным А. Н. В последнем случае препарат представлял собой спиртовой экстракт эндемичного для Чили растения, содержащего фитоэстроген. Климадинон® в дозе 24 мг/кг веса животного использовали только в опытах на неполовозрелых крысах с целью сравнения его с препаратом №181 фракция b в отношении экспрессии эстрогензависимых рецепторов клеток-мишеней из матки. Контрольной группе животных вводили 0,3 мл физиологического раствора.

Окраска гистологических срезов проводилась гематоксилин-эозином. Мазки из влагалища окрашивали по Грамму и Папаниколау (Петровский Б. В., 1989).

Адгезию L. fermentum 90 TS-4, L. acidophilus NК 1 и ДПГ С. albicans 506 В изучали на эпителиоцитах 145 женщин, из них 70 женщин в репродуктивном периоде, находящихся в разных фазах МЦ; 25 беременных женщин; 50 женщин в постменопаузе из которых 25 принимали фитоэстроген Климадинон® и 1 пациентка - Климонорм®. От всех женщин было получено информированное согласие. Сравнение действия препарата №181 фракция b с Климадиноном® проводили на неполовозрелых 21-дневных самках крыс линии Sprague-Dawley. В опыте было 90 особей. При изучении влияния на микроценоз влагалища препарата №181 фракция b в сравнении с 17-эстрадиолом и препаратом Климадинон® использовались половозрелые самки крыс той же линии в количестве 112 особей.

Микроскопию мазков при изучении адгезии лактобактерий на клетках влагалищного эпителия женщин проводили с помощью светового микроскопа МБИ-15-2 производства ЛОМО. Микроскопию мазков из влагалища крыс осуществляли, используя оптический микроскоп (Leica СМЕ, США).

Гистологические срезы делали на микротоме (Leica RМ 2125 RT, США). В работе использовались аналитические весы (Ohaus SC 4010, США). Инкубацию гистологических препаратов производили в термостате (Precision Scientific СО 4-С-11, США). Количество эпителиоцитов в образцах из влагалища женщин подсчитывали в камере Горяева. Съёмки
микрообъектов производили цифровой камерой Apple iPhone 4G® (5 megapixel).

Изучение адгезивных свойств микроорганизмов

На первом этапе исследования была сформирована группа из 70 здоровых женщин в возрасте от 18 до 40 лет, у которых изучали адгезию L. fermentum 90 TS-4, L. acidophilus NК 1 и С. a1bicans 506 В на вагинальных эпителиоцитах. У данной группы пробандов мазки из влагалища брали в разные фазы МЦ.

С целью исключения цикличности гормонального фона на показатели адгезии, были сформированы 3 группы. Первая группа включала 25 женщин со стабильным высоким уровнем эстрогена, вторая группа 24 - с низким, и третья группа - 26 женщин, у которых проводилась длительная заместительная гормональная терапия. Основное исследование проводили в группе беременных женщин, в группе женщин в постменопаузальном периоде, а также в группе женщин в период постменопаузы, но которым проводили терапию препаратом Климадинон® (РЛС России под ред. Вышковского Г. Л., 2009). У одной из женщин проводилась заместительная гормональная терапия эстроген-гестагеновым препаратом Климонорм® (РЛС России под ред. Вышковского Г. Л., 2009). Всего в данном эксперименте под наблюдением находилось 75 женщин. Для проведения опытов по определению адгезивной активности L. fermentum 90 TS-4, L. acidophilus NК 1 и C. albicans 506 В собранный вагинальный эпителий отмывали, после чего, определив концентрацию клеток в камере Горяева, смешивали с культурой соответствующих микробов в концентрации 1:100. Учёт адгезии бактерий проводили на 50 эпителиальных клетках по следующим показателям:

1. К – процент эпителиальных клеток, имеющих на своей поверхности микроорганизмы
2. ИА - индекс адгезивности микроорганизмов, показывает среднее количество микроорганизмов, адгезированных на 1 эпителиальной клетке, участвующей в адгезии
3. ИО - индекс обсеменённости, количество лактобактерий в одном поле зрения.

Определение сухого веса вещества в спиртовом экстракте препарата №181 фракция b

Флакон с высушенным спиртовым экстрактом препарата №181 фракция b помещали в эксикатор с хлористым кальцием, затем взвешивали. После определения веса флакона с препаратом его содержимое с 2 мл дистиллированной воды переносили в другой флакон. Исследуемый флакон высушивали при 100° С, затем давали ему остыть в эксикаторе с хлористым кальцием и взвешивали до постоянного веса. Сухой вес вещества определяли
по разнице масс флакона с препаратом и без него.

Определение биологического действия препарата №181 фракция b

Для определения биологического действия препарата №181 фракция b в сравнении с синтетическим препаратом 17-эстрадиол и препаратом Климадинон® были использованы 21- дневные крысы линии Sprague-Dawley. Опыт проводили на 90 животных, которые были разделены на 6 групп по 15 пробандов в каждой. Достоверность различий показаний между группами определялась по таблице Стьюдента для малых выборок. Первая группа животных (контрольная), получала физиологический раствор (0,3 мл), 2-ой группе животных вводили 17-эстрадиол (0,33 мг/кг), 3-ей - препарат №181фракция b совместно с 17-эстрадиолом, 4-ой - препарат №181 фракция b (0,5 мг сухого вещества/кг), 5-ой - препарат сравнения Климадинон® (24 мг/кг), а 6-ой - Климадинон® совместно с 17-эстрадиолом. Все препараты вводились подкожно. Через 24 часа после начала опыта производили затравку эфирным наркозом и вскрытие животных,во время которого были удалены рога матки; последние фиксировали 10% формалином, разведённом на 0,1 М фосфатном буфере рН 7,3-7,4. После фиксации препараты обезвоживали, заключали в парафин и делали гистологические срезы. В 30 срезах матки каждой крысы подсчитывали среднее в поле зрения число эозинофилов (степень инфильтрации матки эозинофилами), миоцитов в мышечном слое матки (показатель гипертрофии миометрия), а также число
клеток базального слоя слизистой оболочки матки (показатель степени отёка эндометрия). По каждому из вышеперечисленных параметров выводили среднее число и его ошибку.

Овариоэктомия

Половозрелым самкам крыс линии Sprague-Dawley в возрасте 10 недель была проведена овариоэктомия по стандартному протоколу (Киршенблат Я. Д.; 1965). В опыт были взяты 56 животных.

Изучение действия на микроценоз влагалища препарата №181 фракция b

Для изучения действия на микроценоз влагалища препарата №181 фракция b использовали половозрелых самок крысы линии Sprague-Dawley. Были сформированы 2 группы животных по 56 особей в каждой, всего 112 особей. Достоверность различий выборки определялась по таблице Стьюдента для малых выборок. В опыт отбирали здоровых животных в состоянии эструса, для чего предварительно проводили микроскопию мазка из влагалища. В l-ю группу вошли овариоэктомированные крысы, во 2-ю - интактные. Каждая из групп была разделена на 4 подгруппы по 14 животных в каждой. Две первые подгруппы (контроль) получали по 0,3
мл физиологического раствора; 2- е опытные - по 0,0495 мг 17-эстрадиола (О, 33 мг/кг); 3-и по 0,5 мг сухого вещества на кг веса препарата №181 фракция b; 4-е - 17-эстрадиол и препарат №181 фракция b одновременно в дозах, соответствующих данным препаратам. Из влагалища каждой из экспериментальных крыс были взяты по 2 мазка. Основной мазок окрашивали по Граму, дублирующий по Папаниколау. В мазках просчитывали ИА, выводили средний показатель и его ошибку по группе. Достоверность различий сравниваемых показателей производили по критерию Стьюдента (t), определяя вероятность в зависимости от объёма выборки по таблице.

Статистическая обработка полученных данных

Полученные в процессе работы данные обрабатывали методами вариационной статистики с использованием программы MS Office Excel.

С помощью этой программы определялись следующие показатели:

- средние значения показателей по группам, разницу между ними оценивали по критериям Стьюдента (t) при малых выборках, при критическом значении t на уровне значимости 0,05;

- значение сигмы () для всех изучаемых показателей;

Корреляционная зависимость между качественными показателями определялась по тетрахорическому показателю связи (Плохинский Н. А., 1937).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Исследование адгезии L. acidophilus NК l, L. fermentum 90 TS-4 и С. albicans 605 В на эпителии влагалища женщин детородного возраста

Приступая к изучению роли гормонального фона на формирование микробного ценоза урогенитального тракта женщин, мы, прежде всего, оценили изменения адгезии лактобактерий и ДПГ рода Candida на эпителиоцитах влагалища в разные фазы менструального цикла. Для решения этой задачи была отобрана группа из 70 человек здоровых женщин детородного возраста. При оценке активности адгезии выбранных микробов мы пользовались показателем ИА (индекс адгезии), представляющим собой среднее количество адгезированных микробов на одном эпителиоците. Средние показатели индекса адгезии двух видов лактобактерий и клинического изолята С. albicans в разные фазы менструального цикла представлены в табл. 1, из которой следует, что выраженная динамика показателей отмечается в те сроки МЦ, когда происходят изменения гормонального фона. Они существенны в случае адгезии лактобактерий, но не совпадают с такими изменениями в случае ДПГ. Подтверждением этому является сравнительный анализ различий ИА в разные дни МЦ. На основании приведённых данных в табл. 1 и сравнительного анализа с учётом доверительных интервалов представлен график (рис. 1), на котором отражена динамика показателей адгезивной активности микробов, использованных как тест-объекты на фоне изменения концентрации эстрадиола в крови.

Таблица 1.

Средние показатели адгезии (количество микробов на 1 эпителиоците)

L. acidophilus NK1, L. fermentum 90 TS-4 и C. albicans 506 B на эпителиоцитах влагалища женщин детородного возраста в разные фазы менструального цикла.

Штаммы микроорга-низмов	Дни менструального цикла
	7 (середина I- ой фазы МЦ)			13 (конец I-ой фазы МЦ)			14 (овуляция)			28 (конец II-ой фазы МЦ)
L. acidophilus NK1	15,8±1,2 (1)			29,4±1,4 (2)			12,8±0,75 (3)			15,4±0,3 (4)
L. fermentum 90TS4	9,2±0,75 (5)			12,4±0,9 (6)			6,8±0,4 (7)			8,2±0,6 (8)
C. albicans 506 B	15,2±0,45 (9)			12,6±0,8 (10)			16,2±0,65 (11)			15,4±0,95 (12)
Сравниваемые группы	1-2	2-3	1-3	1-4	5-6	6-7	5-7	5-8	9-10	10-11	9-11	9-12
t при p<0,05	7,5	10,4	2,1	0,3	2,73	5,7	2,8	1,02	2,8	3,5	1,25	0,7

Динамика адгезивной активности С. albicans 506 В отлична от аналогичных показателей лактобактерий. Из табл. 1 следует, что достигая своих максимальных значений на 7 и 28 дни цикла, адгезия ДПГ, в отличие от лактобактерий снижается на 13 день (t=2,8), после чего, в день овуляции она возрастает относительно показателей 13 дня цикла (t=3,5) и возвращается к показателям первой фазы МЦ (t=1,25), которые сохраняют свои значения и во 2-ой фазе цикла (t=0,7).

Из рис. 1 следует, что на 7 день МЦ (1 фаза, характеризующаяся высоким уровнем эстрадиола в крови) как L. acidophilus NK 1, так и L. fermentum 90 TS-4 проявляют высокую адгезивную активность. Она достигает максимальных значений к 13-му дню МЦ, когда происходит пик выброса эстрадиола, что в свою очередь, ведёт к достоверному увеличению адгезивной активности по сравнению с этим показателем на 7 день цикла как L. acidophilus NK l (t=7,5), так и L. fermentum 90 TS-4 (t=2,73). Затем, на 13 день, когда уровень эстрогенов в крови резко падает, адгезия обоих штаммов лактобактерий снижается относительно её значений в конце 1 фазы цикла, достигая минимальных значений на 14 день МЦ – в момент овуляции (t =2,1, t=10,4;t=2,8, t=5,7). В конце второй фазы МЦ адгезивная активность L. acidophilus NKl и L. fermentum 90 TS4 вновь возрастает и возвращается к уровням середины I-ой фазы. Следует отметить, что адгезивная активность L. acidophilus NK1 остаётся достоверно выше адгезии L. fermentum 90 TS4 как в первую, так и во вторую фазы менструального цикла.

Рисунок 1. Средний показатель ИА L. acidophilus NК 1, L. fermentum 90 TS-4, С. albicans 506 В на одном эпителиоците в зависимости от фазы МЦ и уровня эстрадиола.

Таким образом, адгезивная активность лактобактерий находится в прямой зависимости от изменения уровня эстрогена в разные фазы МЦ, в то время как адгезия взятого в опыт штамма ДПГ оказывается в меньшей зависимости от этого. Отмечается даже некоторое увеличение рассматриваемого показателя на 14 день менструального цикла (t=2,8), т.е. при высоком показателе эстрогена в первую фазу цикла адгезивность эпителия повышается только к лактобактериям.

Исследование адгезии L. acidophilus NK l, L. fermentum 90 TS-4 и С. albicans 605 В на эпителии влагалища беременных женщин и пробандов в постменопаузе

В процессе МЦ популяция микробного ценоза влагалища сама по себе динамична, поэтому полученные в предыдущем опыте результаты не могли трактоваться однозначно. Это могло быть связано с одной стороны c изменением экспрессии рецепторов комплементарных адгезинам взятых в опыт микробов, а с другой, изменением клеточного состава вагинального эпителия при смене фаз МЦ. Следует учитывать тот факт, что эпителий влагалища многослойный и происходит постоянное его слущивание до
базального слоя. Поскольку интенсивность данного процесса находится в зависимости от фазы МЦ, следует помнить, что при заборе эпителия у женщин мы имеем дело с разным клеточным пулом. В связи с этим было проведено исследование адгезивной активности L. acidophilus NК 1, L. fermentum 90 TS-4 и С. albicans 605 В в группе беременных женщин и женщин в постменопаузальном периоде. Для решения вопроса о возможности коррекции адгезии тест-штаммов микробов при проведении гормонозаместительной терапии фитоэстрогенами в исследование была включена третья группа. В неё входили женщины в постменопаузальном периоде, принимавшие Климадинон®. Первая группа была представлена женщинами с постоянно высоким уровнем эстрогена, а вторая - низким уровнем этого гормона, что позволило и в том, и другом случае избежать цикличности клеточной популяции во влагалище.

В табл. 2 приведены показатели ИА трёх видов бактерий на эпителиоцитах влагалища исследуемых групп женщин.

Результаты, представленные в табл. 2, показывают, что при высоком уровне эстрогенов (в группе беременных женщин) оба вида лактобактерий проявляют высокую адгезивную активность. При этом в группе беременных женщин, как и в случае исследования адгезии в динамике менструального цикла, штамм L. acidophilus NК 1 проявлял большую активность, чем L. fermentum 90 TS-4 (t=13,2). У женщин в постменопаузальном периоде, когда уровень эстрогенов был стабильно низким, ИА обоих видов лактобактерий значительно снижается, относительно данных показателей в группе
беременных (t=68,3) для L. acidophilus NК 1; (t=52,6) для L. fermentum 90 TS-4.

Как уже было отмечено ранее, в группе беременных женщин адгезия L. acidophilus NК 1 выше, чем L. fermentum 90 TS-4; у пациенток в постменопаузе, не принимавших фитоэстроген, такие различия отсутствуют (t=0,2). В группе женщин в постменопаузе, которые принимали Климадинон®, отмечается увеличение адгезивной активности L. fermentum 90 TS-4 по сравнению с адгезией L. acidophilus NК 1 (t=4,2).

У женщин в постменопаузальном периоде снижается адгезивная активность С. albicans 506 В, по сравнению с аналогичным показателем в группе беременных (t=2,5). В то же время, как показано в таблице 1, у женщин репродуктивного возраста на 23 день, т.е. во 2-ю фазу МЦ, когда уровень эстрадиола в крови практически достигает значений 1-ой фазы цикла, адгезивная активность кандид повышается относительно данного параметра на 13 день, т.е. в конце 1-ой фазы, когда уровень эстрадиола минимален (t= 2,3).

Таблица 2.

Показатели адгезивной активности (среднее количество бактерий адгезированных на 1 эпителиоците) L. acidophilus, L. fermentum и C.albicans на эпителиоцитах влагалища женщин.

Штаммы микроорганизмов	Группы
	беременные n=25			ПМП* n=25			ПМП (ФЭ)** n=25
L. acidofilus NK1	43,6±0,5 (1)			2,6±0,3 (4)			8,2±0,4 (7)
L. fermentum 90 TS4	34,3±0,5 (2)			2,7±0,4 (5)			10,7±0,4 (8)
C. albicans 506B	7,9±0,4 (3)			6,4±0,5 (6)			6,2±0,5 (9)
Сравниваемые группы	4-5	7-8	1-4	2-5	3-6	1-2	2-3	5-6	8-9
t при p<0,05	0,2	4,2	68,3	52,6	2,5	13,2	44,0	6,2	7,5

Примечание. *ПМП - постменопаузальный период; ФЭ - фитоэстроген

Однако следует отметить, что на адгезию С. albicans 506 В в группе беременных и женщин в постменопаузе могли оказать влияние уровни адгезивной активности данного микроба у женщин с хроническим кандидозом, которые также были включены в исследование и имели высокое среднее значение адгезии кандид в обеих группах. В связи с этим из выборки были исключены показатели адгезии 11 пробандов, имевших в анамнезе хронический кандидоз. Для определения степени адгезии в сравниваемых
группах по ИА была выведена медиана (Ме) по данным показателям. Пробанды, имевшие уровень адгезии микроба выше полученного значения медианы относились к варианту с высокой адгезивной активностью, а в случае, если данный показатель был ниже значение Ме, они были отнесены к индивидуумам с низкой адгезивной активностью. Поскольку обычный коэффициент корреляции является параметрическим показателем и даёт меру связи между двумя количественными признаками, учесть степень связи при определении альтернативной изменчивости между качественными признаками он не может, т. е. невозможно определить, достоверны ли различия в группах, или на увеличение степени адгезии повлияло наличие в группах пробандов с высокой степенью адгезии данного микроорганизма. Для определения достоверности параметров необходимо было определить непараметрический показатель, отражающий степень связи между признаками по частоте их встречаемости, для чего был использован тетрахорический показатель связи (Плохинский Н. А., 1937). Ниже приводится пример расчёта такого показателя.

Расчет тетрахорического показателя проводили по формуле:

r = ; r = ; r = 0,52±0,1

m = (значения показателей, приведённых в формулах см. в табл. 3)

В табл. 3 представлено распределение здоровых пробандов в зависимости от встречаемости высокого и низкого уровня адгезии в группе беременных и женщин в постменопаузе.

Таблица 3.

Распределение здоровых пробандов в зависимости от встречаемости высокого и низкого уровня адгезии C. albicans 506B в группе беременных и женщин в постменопаузе.

Исследуемые группы	Количество пробандов с высоким индексом адгезии	Количество пробандов с низким индексом адгезии	Всего
Беременные	(а) 6	(b) 13	(a+b) 19
ПМП*	(c) 7	(d) 14	(d+c) 21
Всего	(a+c) 13	(b+d) 27	(n) 40

Примечание. *ПМП - постменопаузальный период

Полученный показатель свидетельствует, что адгезивная активность С. a1bicans 506 В умеренно связана с гормональным фоном. Приближение показателя к 1 характеризует нарастание степени связи.

Аналогично были проведены расчёты по определению данного показателя между другими группами пробандов для определения степени связи между адгезивной активностью микроба и уровнем эстрадиола. Следует отметить, что при изучении ИА L.acidophilus NК 1 и L. fermentum 90 TS-4 не наблюдалось различий данного показателя между здоровыми пробандами и имевшими в анамнезе хронический кандидоз. В связи с этим, при расчетах тетрахорического показателя связи, последние не исключались из выборки.

Данные, представленные в табл. 2 и 4 показывают, что при снижении уровня эстрадиола, в группе женщин в постменопаузе адгезия С. a1bicans 506 В значительно уменьшается по сравнению с группой беременных, у которых уровень эстрадиола стабильно высокий (t=2,5); при этом ассоциативная связь адгезии с уровнем гормона умеренная (г=0,51). Приём Климадинона® в постменопаузе не влиял на адгезию данного штамма кандид и ассоциация уровня адгезии и содержания эстрадиола оставалась стабильной (t=2,8; r=0,51). Установлено, что у пробандов применявших и не применявших данный фитоэстроген в постменопаузе, достоверные различия между ИА в группах отсутствуют, связь между адгезией кандид и применением фитоэстрогена отсутствует (t=0,3; г=0,09).

Таблица 4.

Определение степени связи адгезивной активности L. acidophilus NK1,

L. fermentum 90 TS-4 и C. albicans 506 B от уровня эстрадиола по тетрахорическому показателю.

Сравниваемые группы	Тетрахорический показатель связи (r)
	L. acidofilus NK1	L. fermentum 90 TS4	С. albicans 506 B
Беременные - ПМП*	0,71±0,106	0,96±0,005	0,52±0,115
Беременные – ПМП (ФЭ)**	0,69±0,068	0,96±0,01	0,51±0,117
ПМП* - ПМП (ФЭ)**	0,53±0,1	0,56±0,01	0,09±0,16

Примечание: *ПМП - постменопаузальный период, ** ФЭ – фитоэстроген Климадинон

Адгезия L. acidophilus NК 1 и L. fermentum 90 TS-4 на эпителиоцитах влагалища является гормонозависимой и достоверно снижается в постменопаузе. Связь между высокой активностью микробов и уровнем эстрадиола в крови достаточно тесная, тетрахорический показатель связи прибижается к 1 как в случае изучения ИА L. acidophilus NК 1 (г=0,71), так и в случае L. fermentum 90 TS-4 (r=0,96), то есть
практически достигает 1, что указывает на высокую зависимость адгезивной активности данных видов лактобактерий от уровня эстрогенов.

Как следует из табл. 2 и 4, в группе женщин, принимавших препарат

Климадинон®, значительно повышается адгезивная активность как L. acidophilus NК 1 (t=11,2), так и L. fermentum 90 TS-4 (t=13,3). Связь показателей адгезии с гормональным уровнем в том и другом случаях умеренная (r=0,53 для L. acidophilus NК 1 и r=0,56 для L. fermentum 90 TS-4) по сравнению с женщинами в постменопаузе, не принимавшими этот фитоэстроген. Из этого следует, что количество женщин, у которых Климадинон® дал повышение адгезии, увеличилось относительно умеренно, но уровень адгезии лактобактерий значительно возрос у положительно среагировавшиx на лечение пациенток. Адгезия выбранного тест-штамма кандид на фоне терапии фитоэстрогеном не изменяется (t=0,3), что также подтверждается тетрахорическим показателем связи (r=0,09). Следственно проводимое лечение не изменило частоту случаев с высоким уровнем адгезии и также не изменило средний уровень адгезии по группе.

Несколько иной эффект был получен у женщины, применявшей Климонорм® (препарат используемый для заместительной гормональной терапии, содержащий эстрадиола валериат - 2 мг и левоноргестрел - синтетический аналог прогестерона 150 мкг).

Адгезивная активность L. acidophilus NК 1 составила 2,6, по сравнению с данным показателем у женщин, не получавших никакой терапии (2,6±0,3). В то же время адгезия L. fermentum 90 TS-4 достигала (6,0) тогда как в контроле этот же показатель составил 2,7±0,4. Следует отметить, что у данной пациентки был хронический кандидозный вульвовагинит. Адгезивная активность кандид на её эпителиоцитах составила (10,9), что существенно не отличалось от (1l,1±0,45) данного показателя репрезентативной группы женщин, больных кандидозным вульвовагинигом в постменопаузальном периоде (t=0,4 при р<0,05). Это позволяет считать, что препарат Климонорм® активирует адгезию L. fermentum 90 TS-4, но не влияет на адгезию L.acidophilus NК 1 и С. albicans 506 В.

Таким образом, можно заключить, что адгезия обоих выбранных штаммов лактобактерий является гормонозависимой. Применение препаратов, направленных на коррекцию гормонального фона в постменопаузе и имеющих различный состав и механизм действия, по-разному влияют на адгезивные свойства L. acidophilus NК 1 и L. fermentum 90 TS-4. Адгезия изученного варианта ДПГ не ассоциируется с уровнем эстрогенов в крови при отсутствии их циклических колебаний, однако, при изменении уровня эстрогена в МЦ адгезивная активность данного штамма кандид проявляет обратную зависимость от уровня гормона в крови. Возникает вопрос, возможно ли повышение адгезии изученных видов лактобактерий в постменопаузе путём применения фитоэстрогенов?

Приведённые данные позволяют предположить, что повышение уровня эстрадиола вызывает экспрессию только определённых рецепторов на поверхности эпителиоцитов влагалища женщин. Это определяет избирательную адгезию сочленов микробного ценоза. Использование гормонозамещающей терапии путём применения различных препаратов, в
том числе фитоэстрогенов, позволяет стимулировать экспрессию только определённых рецепторов и избирательно повышать адгезию некоторых видов бактерий.

Биологическая модель для выбора препаратов, содержащих фитоэстрогены, корригирующие микробный ценоз влагалища

Изучение модулирующего действия на адгезию микробов к вагинальному эпителию фитоэстрогена Климадинона® в постменопаузальном периоде показало, что этот препарат оказывается эффективным для восстановления нормального ценоза влагалища, где доминирующими являются лактобактерии. Поиск новых препаратов аналогичного действия возможен при условии использования лабораторной модели для их испытания. Именно в этом аспекте проводилась оценка нового препарата № 181 фракция b, полученного из эндемичного чилийского растения.

Очевидно, что в этом случае проблема формирования микробного ценоза при испытании новых фитоэстрогенов напрямую связана с механизмом экспрессии эстрогензависимых рецепторов. В связи с этим при оценке предложенного для испытания чилийской стороной препарата мы использовали модель, разработанную в лаборатории экспериментальной эндокринологии и патологии окружающей среды (LEEPА) Universidad de Chile в рамках Российско-Чилийского сотрудничества и при поддержке
CONICYT (проект Anillos de Investigacin АСТ07, Chile). Исходя из того, что
модулирующее действие фитоэстрогена Климадинона® на адгезию основных сочленов микробного ценоза влагалища было продемонстрировано на группе женщин, находящихся в постменопаузе, т. е. с низким уровнем эстрадиола, соответствующей ей можно было принять группу неполовозрелых животных. В этом случае можно было исключить влияние эндогенного эстрадиола на результаты.

На неполовозрепых 21-дневных крысах были проведены исследования препарата № 181 фракция b в сравнении с другими модуляторами эстрогеновых рецепторов.

Действие препарата № 181 фракция b на экспрессию эстрогензависимых рецепторов

Биологическое действие препарата № 181 фракция b изучали на крысах линии Sprague-Dawley. Препаратами сравнения были выбраны 17-эстрадиол и Климадинон®. В опыт были взяты 30 особей 21-дневных крыс.

Критериями оценки действия эстрадиола на рецепторы матки млекопитающих являлись увеличение толщины базального слоя эндометрия за счёт отёка ткани, гипертрофия миометрия (Jensen E. V., 1972), и степень миграции эозинофилов из кровяного русла в ткани матки (Tchernitchin A. N., 1976). Проводили сравнительный анализ действия Климадинона®, использованного нами ранее в опытах с эпителиоцитами влагалища женщин, препарата № 181 фракция b и синтетического 17-эстрадиола.

Как следует из приведённых в табл. 5, 17-эстрадиол почти в 2 раза увеличивал инфильтрацию матки эозинофилами относительно контроля, вызывал пролиферацию миометрия и отёк эндометрия. При введении препарата № 181 фракция b не наблюдалось инфильтрации матки эозинофилами, но происходила умеренная пролиферация миометрия и наблюдался незначительный отёк эндометрия. Фитоэстроген Климадинон® незначительно увеличивал инфильтрацию матки эозинофилами относительно контроля, вызывал пролиферацию миометрия, но не влиял на отёк эндометрия. Следует отметить, что при введении животным препарата №181 фракция b гипертрофия мышечного слоя матки, а также отёк базального слоя слизистой оболочки, были достоверно ниже данных показателей, чем при введении 17-эстрадиола. При совместном введении препарата № 181 фракция b с 17- эстрадиолом эффект был сходен с тем, который наблюдался только при действии эстрадиола, однако степень изменений в тканях матки была гораздо ниже. Из этого следует, что препарат № 181 фракция b, обладает гормоноподобным действием как на классические цитозоль-ядерные рецепторы клеток тканей матки, так и на эстрогеновые рецепторы мембраны этих клеток. Выраженность эффекта фитоэстрогенов значительно ниже такового, чем при введении синтетического аналога эстрадиола, следовательно вероятность проявления нежелательных эффектов снижается. В то же время Климадинон® при его введении с 17-эстрадиолом полностью нивелировал стимулирующее действие эстрадиола на инфильтрацию эозинофилами, полностью подавлял отёк эндометрия, но не снимал эффекта стимуляции пролиферации миометрия.

Таблица 5.

Изменения в тканях матки экспериментальных животных после обработки эстрадиолом и фитоэстрогенами.

Вводимый животным препарат				Изучаемые клеточные показатели (среднее в одном поле зрения)
				эозинофилы				миоциты					клетки базального слоя слизистой оболочки матки
физ. раствор				2,45±0,5 (1)				131,4±1,7 (7)					94,03±2,1 (13)
эстрадиол – 17				4,76±0,5(2)				70,4±1,7 (8)					49,1±1,05 (14)
образец препарата 181 b				2,18±0,3 (3)				104,3±1,7 (9)					85,31±1,86 (15)
образец препарата 181 b + эстрадиол – 17				5,68±1,3 (4)				112,5±2,2 (10)					84,32±2,01 (16)
Klimadynon®				0,43±0,09 (5)				127,1±2,2 (11)					104,19±0,8 (17)
Klimadynon® + эстрадиол – 17				0,34±0,1 (6)				117,4±1,7 (12)					101,26±0,8 (18)
сравниваемые группы	1- 2	1- 3	1- 4		1- 5	1- 6	7- 8		7- 9	7- 10	7-11	7- 12		13- 14	13-15	13-16	13-17	13- 18
t при p<0,05	3,3	0,4	2,3		4,0	4,2	25,4		11,3	6,5	1,5	5,8		19,6	3,1	3,3	4.6	3,2

Таким образом, показано, что различные препараты, воздействующие на эстрогензависимые рецепторы матки проявляют себя по- разному. Отличия в ответах на стимуляцию эстрогеновых рецепторов различными фитоэстрогенами является основанием к поиску вариантов препаратов для дальнейшего испытания.

Рисунок 2. Эозинофилы в тканях матки (окраска гематоксилин-эозином)

Изменение микробного ценоза влагалища под действием фитоэстрогена (препарата № 181 фракция b)

Исследование воздействия на микробный ценоз влагалища фитоэстрогенов оценивали по препарату № 181 фракция b, любезно предоставленному Лабораторией экспериментальной эндокринологии и патологии окружающей среды Университета Чили. Экстракт из эндемично произрастающего растения Центральной Долины в Республике Чили проходит доклинические испытания, в связи с чем изучение его действия на микроценоз влагалища проводилось на лабораторных животных. Группы животных, отобранные для исследования были сформированы таким образом, чтобы гормональный фон крыс был гомологичен таковому в группах женщин, на эпителиоцитах которых изучали адгезивную активность L. acidophilus NК 1, L. fermentum 90 TS-4 и C. albicans 506 В. Было сформировано 2 группы по 56 особей половозрелых крыс линии Sprague-Dawley. Первая группа (контрольная) - интактные крысы, находившиеся в репродуктивном периоде; вторая - овариоэктомированные крысы - соответствовала группе женщин в период постменопаузы, поскольку уровень эстрогенов в их организме был минимален.

Как показано в таблице 6, абсолютное число лактобактерий во влагалище крыс после овариоэктомии значительно снижается. Введение таким животным 17-эстрадиола восстанавливает микробный ценоз практически до состояния, отмеченного перед овариоэктомией, хотя среднее число лактобактерий у оперированных животных после введения эстрадиола несколько ниже данного показателя в контроле, когда таким животным вводили физиологический раствор (t=16,5 при р<0,05). Введение 17-эстрадиола интактным животным не влияет на их микробную флору.

Исследуемый фитоэстроген №181 фракция b увеличивал обсеменённость влагалища лактобактериями у овариоэктомированных животных. Следует отметить, что ИО лактобактериями во влагалище оперированных крыс после введения данного препарата был выше, чем у животных данной группы, получавшей 17-эстрадиол. В то же время, при совместном введения препарата № 181 фракция b с 17-эстрадиолом, в группе овариоэктомированных крыс ИО оставался на уровне контроля, тогда как у интактных животных он снижался относительно данного показателя.

Полученные данные позволяют предположить, что препарат № 181 фракция b обладает конкурентным действием при взаимодействии 17-эстрадиола с эстрогенным рецептором у половозрелых животных. Снижение размножения лактобактерий можно объяснить тем, что эндогенный гормон у неоперированных животных вытесняется фитоэстрогеном. В то же время связывание им рецепторов, фиксирующих эстрадиол, не позволяет последнему проявить своё стимулирующее действие на адгезию сочленов микробного ценоза.

Таблица 6.

Изменение количества лактобактерий в мазках из влагалища экспериментальных животных после обработки эстрадиолом и препаратом

№ 181 фракция b (среднее количество микробов в 1 поле зрения).

Подгруппа	Вводимый животным препарат			Интактные крысы		Овариэктомиро-ванные крысы
1-я (контроль)*	Физиологический раствор			26,43±1,46 (1)		0,95±0,46 (5)
2-я**	17-эстрадиол			24,28±1,15 (2)		20,78±1,17 (6)
3-я***	Препарат №181 фракция b			26,60±1,23 (3)		25,1±0,49 (7)
4-я****	Препарат № 181 фракция b+ 17-эстрадиол			12,80±1-05 (4)		1,41±0,46 (8)
Сравниваемые группы	1-2	1-3	1-4	1-6	2-6	1-7	1-8
t при p<0,05	1,16	0,08	7,6	16,5	2,9	0,8	0,7

Примечание: *1-я ( контроль)- животным вводили физиологический раствор; 2-я** - животным вводили 17 – эстрадиол; 3-я*** - животным вводили препарат № 181 фракция b; 4 -я**** - животным вводили препарат № 181 фракция b и 17 – эстрадиол.

Следует отметить, что при изучении действия препарата №181 фракция b на рецепторный аппарат матки овариоэктомированных животных, его действие оказалось сходным с 17-эстрадиолом, как в случае его изолированного, так и в случае совместного введения с эстрадиолом. Введение самого препарата увеличивало обсеменённость влагалища овариоэктомированных крыс даже по сравнению с группой оперированных животных, которым вводили 17-эстрадиол. То есть в отсутствии эндогенных гормонов сродство препарата к эстрогензависимым рецепторам эпителиоцитов влагалища возрастает. Это позволяет предположить, что препарат действует на различные субтипы эстрогензависимых рецепторов, чем и можно объяснить отмеченные различия.

ВЫВОДЫ

1. Адгезия используемых в гинекологической практике пробиотиков на основе L. acidophilus NК 1 и L. fermentum 90 TS-4 может быть оценена как гормонозависимая.
2. Адгезия клинического изолята С. albicans 506 В к влагалищным эпителиоцитам не зависит от гормонального фона.
3. Модулятор эстрогензависимых рецепторов Климадинон®, содержащий фитоэстроген, активирует адгезию лактобактерий и не влияет на адгезивную активность С. albicans 506 В.
4. Препарат Климонорм®, включающий в себя синтетический эстрадиол, избирательно стимулировал адгезию L. fermentum 90 TS-4 у женщины в постменопаузе.
5. Предложенный чилийской стороной препарат № 181 фракция b, полученный из фито-эндемика Центральной Долины Чили воздействовует на колонизацию влагалища овариоэктомированных животных как эстроген, при влиянии на экспрессию эстрогензависимых рецепторов в матке - действовует сходно с 17 -
   эстрадиолом.
6. В модели на неполовозрелых животных - крысах линии Sprague-Dawley, предложенный чилийской стороной фитоэстроген, содержащийся в препарате № 181 фракция b влиял на экспрессию рецепторов клеток мишеней аналогично эстрадиолу-17, при меньшем проявлении отрицательных эффектов гормона.
7. В модели на овариоэктомированных животных препарат №181 фракция b не влиял на колонизацию лактобактериями влагалища при его совместном введении с эстрадиолом, т. е. проявлял антиэстрогенные свойства.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Рыбас Я. А., Кравцов Э. Г., Далин М. В., Родриго Альберто Бустаманте Вальдебенито, Черничин-Варламов А Н. Возможности использования фитоэстрогенов для коррекции микробного ценоза влагалища //Вестник РУДН. Серия «Медицина». - 2011. - № 3 - С. 31-33.
2. Рыбас Я. А., Karla Ferrada Gonzles, Кравцов Э. Г., Tchernitchin А N., Далин М. В. Влияние фитоэстрогенов на микробный ценоз влагалища крыс линии Sprague–Dawley//Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. – 2011. - Т. 152 - № 7. - С. 90-92

Рыбас Яна Александровна (Россия)

Модуляция адгезивно-активных структур микробного ценоза влагалища селективными модификаторами эстрогеновых рецепторов растительного происхождения

Изучена гормонозависимая адгезия L. acidophilus NК 1, L. fermentum 90 TS-4, С. albicans 506 В на эпителии влагалища женщин и возможность коррекции микроценоза влагалища эстрогенсодержащими препаратами растительного происхождения. Показано, что использование различных модуляторов эстрогензависимых рецепторов изменяет адгезивную активность эпителия влагалища к определённым видам лактобактерий и позволяет производить адекватный подбор пробиотических препаратов и соответствующих им модуляторов эстрогензависимых рецепторов. Выявлено, что адгезивная активность С.albicans 506В на эпителиоцитах влагалища женщин, имевших в анамнезе хронический кандидоз, увеличена. Адгезия референс-штаммов лактобактерий на клетках мишеней от этих же пробандов не изменена. Показано, что применение препарата Климадинон® в постменопаузе усиливает адгезию референс-штаммов лактобактерий на эпителиоцитах влагалища женщин, но не влияет на адгезивную активность С. aIbicans 506 В. Установлено, что препарат №181 фракция b, содержащий фитоэстроген, вызывает гипертрофию миоцитов и отёк эндометрия матки крыс линии Sprague-Dawley, проявляя тем самым эстрогеноподобное действие, однако при совместном подкожном введении с 17-эстрадиолом снижает колонизацию влагалища крыс лактобактериями.

Rybas Yаnа Alexandrovna (Russia)

Modulation of adhesively-active structures of microbial coenosis of vagina with selective estrogen receptor’s modifiers of plant origin

Studied hormonal adhesion of L. acidophilus NК1, L. fermentum 90 TS4, С. aIbicans 506 В in the epithelium of the vagina of women and the possibility of corrесtion of microbial coenosis of vagina with estrogen herbal medicines. It is shown that using estrogen receptors modulators changes the adhesive activity of the vaginal epithelium to certain kinds of Lactobacilli and allows for adequate selection of probiotic preparations, as well as selective modulators of estrogen receptors. Revealed that the adhesive activity of С. albicans 506 В оn vaginal epitheliocytes of women with а history of chronic candidiasis is increased, but the adhesion of reference strains of lactobacilli on target cells from the same probands is not changed. It is shown that using Klimаdуnon® in postmenopausal women increases the adhesion of studied species of Lactobacilli оn epitheliocytes of а woman's vagina, but does not affect the adhesive activity of С. albicans В 506 in the experiments with the same target cells. It is established that "drug of № 181 fraction b", which contains phytoestrogen, causes myocyte hypertrophy and swelling of the uterine endometrium of rats Sprague - Dawley, thereby showing estrogen-like effect, but during the subcutaneous co-injections with 17 -estradiol reduces the colonization of lactobacilli of the vagina of rats.