Обмен коллагена костной ткани крыс при воздействии преднизолоном в условиях экспериментального диабета
На правах рукописи
ДАНИЛОВА ОЛЬГА ВЛАДИМИРОВНА
обмен коллагена костной ткани крыс при воздействии преднизолоном в условиях экспериментального диабета
03.01.04. – биохимия
Автореферат
диссертации на соискание учёной степени
кандидата медицинских наук
Уфа - 2010
Работа выполнена в государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Ижевская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».
Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор
Бутолин Евгений Германович
Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор
Моругова Татьяна Вячеславовна
доктор медицинских наук, профессор
Высокогорский Валерий Евгеньевич
Ведущая организация:
Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Казанский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»
Защита диссертации состоится “__” ______________2010 г. в____час. на заседании диссертационного совета Д.208.006.03 при государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию», г. Уфа, ул. Ленина, д.3.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (430000, г. Уфа, ул. Ленина, д. 3).
Автореферат разослан “__”__________2010 г.
Ученый секретарь диссертационного совета:
доктор медицинских наук, профессор Г.Х. Мирсаева
Общая характеристика работы
АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ
Сахарный диабет (СД) в настоящее время является третьей по распространенности нозологией (М.И. Балаболкин, 2000; М.Г. Давыдович и соавт., 2009) и является глобальной медико-социальной проблемой для здравоохранения всех стран мира и пациентов всех возрастов. В настоящее время в мире насчитывается около 175 млн. больных СД, а к 2025 году, ВОЗ прогнозирует увеличение численности болеющих свыше 300 млн. человек, из которых 80-90 % составят больные СД 2 типа (Е.Б. Кравец, 2005; М.И. Балаболкин, 2007; М.Г. Давыдович и соавт., 2009; E.Adeghate et al., 2006). В развитых странах ВОЗ предсказывает к 2025 году увеличение числа больных СД на 41 % (с 51 до 72 млн. человек) (К.Ф. Вартанян, 1999; А.Н. Шишкин и соавт., 2008).
Большая социальная значимость СД заключается в ранней инвалидизации и летальности в связи с поздними осложнениями. Метаболические нарушения, сосудистые и неврологические осложнения СД приводят к развитию изменений практически всех органов и тканей (М.И. Балаболкин, 2000; М.Г. Давыдович и соавт., 2009). Среди них значительное место занимают поражения костной ткани (С.Н. Ткач и соавт., 1986; Н.В. Савинова, 2004). Потеря минеральных компонентов и изменения костной ткани признаны хроническим осложнением СД (В.Л. Орленко, 2000; Я.В. Гирш, 2003).
Несмотря на значительные успехи, достигнутые в области диагностики, изучения патогенеза СД и его влияния на различные органы и системы организма, многие аспекты этой проблемы остаются недостаточно освещенными, в том числе вопрос о развитии костных изменений при этой патологии. Имеющие данные литературы об особенностях метаболизма костной ткани, частоте и механизмах развития остеопении при СД носят достаточно противоречивый характер (Р.Е. Чечурин, 1999; К.Ф. Вартанян, 2003).
Поражение костной системы при СД является одним из малоизученных и малоосвещенных в литературе разделов клинической диабетологии (В.Л. Орленко, 2000). Анализ литературы позволяет заметить, что единого мнения по вопросу о частоте поражения костной системы не существует. По данным различных авторов, патологические изменения костной ткани при диабете встречаются от 0,1 % до 77,8 % наблюдений. Опасность развития малообратимых изменений костной ткани и их значительная роль в снижении качества жизни больных СД определяют необходимость дальнейшего изучения механизмов развития диабетической остеопатии.
В патогенезе изменений костной ткани при СД, помимо инсулиновой недостаточности, важную роль играет избыток глюкокортикоидов (ГК) в организме (С.Н. Ткач и соавт., 1986), способный вызывать нарушение минерального обмена, что приводит к развитию остеопороза (Е.Л. Насонов, 1999). В целом сведения об этом влиянии ГК противоречивы и не поддаются однозначной трактовке (З.А. Бурнашова, 2000).
Основным условием динамической устойчивости костной ткани является функциональное состояние белкового компонента кости и, прежде всего, коллагена (П.А. Ревелл 1993, Н.В. Корнилов и соавт., 2000). В связи с этим возникает интерес к вопросу о состоянии обмена костного коллагена в условиях диабета и гиперкортицизма.
ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ
Определить особенности обмена коллагена в костной ткани и продуктов его метаболизма в плазме крови крыс при аллоксановом диабете, экзогенном гиперкортицизме, их сочетании, а также в условиях дефицита кортикостероидных гормонов.
ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ
- Изучить изменение показателей обмена коллагена в костной ткани и плазме крови крыс в динамике аллоксанового диабета.
- Исследовать показатели обмена коллагена в костной ткани и плазме крови крыс при введении высоких доз преднизолона.
- Изучить изменение показателей обмена коллагена в костной ткани и плазме крови крыс при сочетании аллоксанового диабета с введением высоких доз преднизолона.
- Выявить особенности обмена коллагена и его метаболитов в костной ткани и плазме крови крыс при аллоксановом диабете в условиях дефицита кортикостероидных гормонов.
НАУЧНАЯ НОВИЗНА
В работе впервые выявлено, что экзогенный гиперкортицизм вызывает в начальные сроки воздействия усиление, как процессов синтеза, так и распада коллагена костной ткани. Преобладание катаболизма приводит к снижению содержания суммарного коллагена. Невысокая активность анаболических процессов во второй декаде опыта сопровождается низким содержанием нерастворимого и суммарного коллагенов в губчатой костной ткани.
Впервые получены данные об особенностях обмена коллагена в диафизе бедренной кости и теле 2-го поясничного позвонка в динамике экзогенного гиперкортицизма, аллоксанового диабета и их сочетании. Показано, что в обмене коллагена костной ткани при аллоксановом диабете в первые 30 дней эксперимента превалировали процессы катаболизма на фоне стойкого угнетения процессов его синтеза.
Показано, что при аллоксановом диабете, протекающем на фоне введения преднизолона, в первые дни опыта наблюдалось одновременное угнетение процессов синтеза и распада. В последующие сроки эксперимента рассогласованность анаболических и катаболических реакций в костной ткани вызвали неодинаковые изменения: в компактной кости – усиление катаболизма, а в губчатой – угнетение и синтеза, и распада коллагена.
Обнаружено, что угнетение стероидогенеза при аллоксановом диабете вызывает снижение интенсивности катаболизма коллагена костной ткани и преобладание его синтеза, что приводит к увеличению содержания суммарного коллагена в компактной и губчатой костной ткани.
НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ
Полученные в ходе эксперимента данные расширяют имеющиеся представления об особенностях обмена коллагена костной ткани при экзогенном гиперкортицизме, аллоксановом диабете, их сочетании, а также дополняют имеющиеся в литературе сведения, касающиеся важной роли глюкокортикоидов в регуляции обмена коллагена костной ткани при диабете.
Результаты исследований могут быть использованы в изучении патогенеза остеопатий у больных СД.
Примененные биохимические методы определения уровня метаболитов коллагена в крови могут быть использованы, в комплексе с другими методами, для оценки состояния обмена коллагена костной ткани у больных СД.
ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:
- Аллоксановый диабет и экзогенный гиперкортицизм сопровождаются изменениями в обмене коллагена костной ткани, характеризующимися преобладанием катаболических процессов.
- Дефицит глюкокортикоидных гормонов на фоне аллоксанового диабета вызывает изменения в обмене коллагена костной ткани, нарушая равновесие между процессами его распада и синтеза, с преобладанием последних.
АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ
Материалы диссертации доложены на Межрегиональной научно-практической конференции, посвященной 85-летию Самарского государственного медицинского университета «Новая идеология в единстве фундаментальной и клинической медицины» (Самара, 2005); VI Всероссийской конференции с международным участием «Механизмы функционирования висцеральных систем» (Санкт-Петербург, 2008), совместном научном заседании сотрудников кафедр биохимии, нормальной физиологии, патофизиологии, клинической биохимии и лабораторной диагностики, биологии с экологией (Ижевск, 2010).
ПУБЛИКАЦИИ
По материалам диссертации опубликовано 14 работ, в том числе 3 – в журналах, рекомендованных ВАК Российской Федерации.
ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
Данные о состоянии обмена коллагена костной ткани при экзогенном гиперкортицизме и аллоксановом диабете включены в лекционные курсы по биохимии, клинической биохимии и лабораторной диагностики, нормальной физиологии для студентов и слушателей факультета повышения квалификации и профессиональной переподготовки, используются в научно-исследовательской работе кафедры биохимии ГОУ ВПО ИГМА.
СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ
Диссертация объемом 144 страницы машинописного текста состоит из введения, обзора литературы, трех глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов и списка литературы. Работа иллюстрирована 10 таблицами и 10 рисунками. Список литературы содержит 228 источника (119 на русском и 109 на иностранных языках).
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Опыты проведены на 284 белых беспородных крысах-самцах массой 180-230 г, находящихся на стандартном рационе вивария со свободным доступом к воде. При проведении экспериментов соблюдались положения Хельсинской декларации о гуманном отношении к животным (Одобрительная форма комитета по биомедицинской этике №154).
Инсулинзависимый сахарный диабет вызывали путем однократного подкожного введения аллоксана тетрагидрата (мезоксалилмочевина, «Fluka Chemika», Швеция) в дозе 170 мг/кг веса животного (Н.А. Пальчикова и соавт., 1987).
Для выяснения влияния глюкокортикоидов на обмен коллагена костной ткани проведены серии, моделирующие избыточное и недостаточное содержание ГК в организме.
Избыток ГК (экзогенный гиперкортицизм) моделировали путем введения преднизолона («Гедеон Рихтер», Венгрия) в дозе 50 мг/кг – в течение 14 дней (J.L. Ambrus et al., 1978).
Явления гипокортицизма индуцировали путем ежедневного подкожного введения аминоглютетимида («ПЛИВА», Хорватия) в дозе 50-100 мг/кг массы тела животного по схеме (В.П. Комиссаренко, 1972). Аминоглютетимид (3-(4-аминофенил)-3-этил-2,6 пипериндион) ингибирует синтез глюкокортикоидов и минералокортикоидов в коре надпочечников, подавляя превращение холестерина в прегненолон, а также синтез эстрогенов, подавляя ароматизацию первого кольца (П.В. Сергеев, 1984)
Для выяснения влияния ГК на обмен коллагена костной ткани при инсулинзависимом диабете проведены серии с сочетанными воздействиями: диабет на фоне введения преднизолона и диабет на фоне введения аминоглютетимида.
Анализ показателей обмена коллагена в плазме крови, диафизе бедренной кости (компактный костная ткань), теле 2-го поясничного позвонка (губчатая костная ткань) проводили на 5, 15, 20, 30 и 45 дни опыта. В указанные дни проводили декапитацию животных под кратковременным эфирным наркозом.
В плазме крови исследовали показатели, характеризующие обмен коллагена: содержание свободного (СО), пептидносвязанного (ПСО) гидроксипролина (П.Н. Шараев и соавт., 1981); коллагенолитическую активность (КА) (E. Schalinatus et al., 1978; в модификации П.Н. Шараева и соавт., 1987).
Состояние метаболизма коллагена в костной ткани оценивали по содержанию свободного гидроксипролина (СО) (П.Н. Шараев и соавт., 1976); суммарного коллагена (СК) (П.Н. Шараев и соавт., 1976) и его фракций: нейтральносолерастворимой (НРК), цитратрастворимой (ЦРК) и нерастворимой (НК) (Л.И. Слуцкий, 1969; Л.Я. Прошина, 1982; В.Б. Спиричев, 1984); коллагенолитической активности (КА) (E. Schalinatus et al., 1978).
Количество СО и ПСО в плазме крови выражали в микромолях на 1 литр плазмы крови (мкмоль/л). Содержание СО, СК и его фракций в исследуемых тканях выражали в миллимолях гидроксипролина на 1 килограмм сухой обезжиренной ткани (мкмоль/кг). КА в плазме крови и тканях выражали в микромолях гидроксипролина на 1 грамм белка за 1 час (мкмоль/г/ч).
Воспроизведение аллоксанового диабета контролировали, определяя в крови концентрацию: глюкозы глюкозооксидазным методом («Витал Диагностикс СПб», Россия); гликозилированного гемоглобина («Лахема Диагностика Брно», Словакия).
Кроме того, в крови определяли: уровень 11-ОКС (А.Г. Резников, 1980); содержание общего кальция и активность щелочной фосфатазы наборами «Витал Диагностикс СПб», Россия.
В исследуемой костной ткани определяли содержание кальция титрометрическим методом (Д.М. Зубаиров, 2001).
Концентрацию изучаемых показателей в крови выражали: 11-ОКС – в микрограммах на 1 литр плазмы (мкг/л), общего кальция и глюкозы в миллимолях на 1 литр плазмы (ммоль/л), гликированного гемоглобина – в микромолях фруктозы на 1 грамм гемоглобина (мкмоль/г Hb), активность щелочной фосфатазы – в наномолях на литр плазмы за секунду (нмоль/(с*л)). Количество кальция в костной ткани выражали в молях на килограмм сухой ткани (моль/кг).
В качестве контроля были использованы результаты исследований, проведенных на интактных животных и крысах с подкожным введением 0,9 % раствора натрия хлорида.
Результаты исследований обрабатывали методом вариационной статистики с определением достоверности измерений (р) по критерию Стьюдента (t), оценка нормальности распределения признаков проводилась по критерию Шапиро-Уилка, связь между явлениями оценивали при помощи корреляционного анализа, рассчитывая коэффициент корреляции Пирсона (r). Математические операции проводились с использованием компьютерной программы «Excel 2003».
Результаты исследований и их обсуждение
Коллаген составляет около 90 % всех белков костной ткани (Л.Я. Рожинская, 2000; В.В. Поворознюк и соавт., 2004; M.F.Young, 2003; P.Fratzl et al., 2004). Метаболизм коллагена подразумевает наряду с постоянным биосинтезом, уравновешивающий его процесс катаболизма (Л.И. Слуцкий, 1969; Е.Г. Бутолин и соавт., 2005). Изучение фракционного состава коллагена позволяет судить о характере изменений в обмене исследуемого биополимера. На ускорение синтеза указывает увеличение содержания суммарного коллагена и его растворимых фракций (В.И. Мазуров, 1974; В.Н. Никитин и соавт., 1977; С.Е. Переведенцева 1997). Катаболические процессы приводят к повышению коллагенолитической активности, содержания свободного гидроксипролина и снижению суммарного коллагена в тканях (Л.И. Слуцкий, 1969; П.Н. Шараев, 2001; Н.В. Савинова, 2004).
При экзогенном гиперкортицизме, моделируемом введением животным преднизолона, содержание 11-ОКС в плазме крови крыс возрастало к 5 дню до 638,23±60,28 мкг/л (+177,28 %; p=2,58*10-10) против 230,17±13,70 мкг/л в контроле, оставалось повышенным на 15 и 20 дни опыта, начиная с 30 дня, уровень исследуемых гормонов не отличался от данных интактных животных.
Концентрация глюкозы в плазме крови опытных животных была повышена в течение 30 дней опыта и достигала максимума на 5 день наблюдения (7,7±0,50 ммоль/л; p=0,004). В последующие дни уровень гликемии медленно уменьшался, оставаясь при этом выше контрольных значений, а на 45 день снижался на 11,21 % (p=0,022) в сравнении с контролем. Уровень гликированного гемоглобина не менялся на протяжении всего опыта.
Содержание СО в плазме крови при введении преднизолона возрастало на 5 и 20 дни эксперимента соответственно на 39,96 % (p=0,0002) и 66,83 % (p=0,01). Уровень ПСО повышался на 5 день наблюдения на 68,09 % (p=0,048), затем снижался к 15 дню до 4,13±1,06 мкмоль/л (-74,36 %; p=5*10-6), а с 20 дня наблюдения значимо не изменялся. КА в плазме крови существенно возрастала на 5 и 30 дни после введения преднизолона на 404,31 % (p=0,005) и 194,83 % (p=0,0002) соответственно.
В обмене коллагена костной ткани крыс при введении преднизолона на 5 день отмечалось усиление, как процессов синтеза, так и распада. Об активации анаболизма свидетельствует увеличение содержания НРК в бедренной кости с 10,54±0,41 до 17,51±0,95 ммоль/кг (p=6*10-6), а в позвонке с 12,17±0,47 до 17,39±1,59 ммоль/кг (p=0,012). Параллельно возрастал уровень ЦРК в позвонке с 4,99±0,39 до 6,18±0,29 ммоль/кг (p=0,026). Увеличение интенсивности распада характеризовалось повышением в ткани бедренной кости и позвонка уровня СО соответственно на 30,48 % (p=3,4*10-5) и 81,83 % (p=10-7), снижением содержания НК в диафизе бедренной кости с 175,05±6,16 до 121,81 ммоль/кг (p=2,2*10-5), а в ткани позвонка с 182,32±4,54 до 113,35±6,30 ммоль/кг (p=2,6*10-7). В последующие дни динамика обмена коллагена носила неодинаковый характер в компактной и губчатой костной ткани. В диафизе бедра процессы распада активно протекали с 20 по 30 дни: в этот период содержание СО в ткани возрастало соответственно до 0,95±0,05 (р=0,02) и 0,97±0,05 (p=0,03), против 0,76±0,04 ммоль/кг в контроле. КА на 43,69 % (p=0,012) и на 47,74 % (p=0,011) соответственно превышала данные интактных животных. На 45 день СО и КА в компактной кости были снижены, а в ткани позвонка процессы катаболизма были угнетены на 15, 20 и 45 дни воздействия, СО в эти сроки был снижен соответственно на 21,65 % (p=0,0094), 53,43 % (p=10-8) и 20,17 % (p=0,016). КА в этот период достигала лишь 0,61±0,12 (р=0,039), 0,57±0,11 (р=0,045) и 0,58±0,16 мкмоль/г/ч (p=0,014) соответственно против 1,25±0,19 мкмоль/г/ч в контроле. В обеих изучаемых тканях с 15 по 20 дни эксперимента синтетические реакции были угнетены: уровень НРК снижался в ткани бедра на 20,39 % (p=0,027) и 52,96 % (p=2,1*10-8), в позвонке - на 37,95 % (р=7,5*10-5) и 67,98 % (р=5*10-10) соответственно.
Рассогласованность процессов синтеза и распада коллагена привели к снижению содержания СК в диафизе бедренной кости на 5 день наблюдения с 187,32±4,03 до 138,26±6,52 ммоль/кг (p=10-6). В теле поясничного позвонка снижение уровня СК отмечалось на 5, 15 и 20 дни наблюдения с 197,20±3,29 до 136,92±6,47 (р=2,52*10-9), 147,6±3,99 (p=7,6*10-10) и 178,88±5,68 ммоль/кг (p=0,044) соответственно. Возможно это связано с тем, что ГК угнетают образование остеобластов и синтез коллагена (Л.И. Слуцкий, 1969; А.М. Герасимов и соавт., 1986; Ф. Франке и соавт., 1995; В.Г. Подковкин и соавт., 2009; I.Steinebach, 2008), путем снижения уровня м-РНК проколлагена, а также - ингибированием активности ферментов пролил- и лизилгидроксилаз. (Л.Я. Рожинская, 2000; Е.С Северин, 2003). В наших исследованиях обнаружена отрицательная корреляция между концентрацией 11-ОКС в плазме крови и содержанием СК в теле 2-го поясничного позвонка (r=-71; p<0,01).
Резорбтивное действие ГК можно объяснить тем, что при их введении изменяется соотношение OPG/RANKL. RANKL экспрессирован на клеточной поверхности остеобластов и их предшественников, связывается с RANK, находящимся на предшественниках остеокластов и стимулирует дифференцировку и активность остеокластов (Е.Г. Зоткин, 2003; А.П. Шепелькевич и соавт., 2008; Н.М. Шуба, 2008; W.J. Boyle et al., 2003). ГК повышают синтез коллагеназы за счет посттранскрипционных механизмов, а также вызывают подавление синтеза тканевого ингибитора металлопротеиназы-I, что, по-видимому, и определяет стимулирующий эффект гормонов на деградацию коллагена I типа (Е.Г. Зоткин, 2003). Кроме того, ГК повышают костную резорбцию за счет подавления всасывания кальция в кишечнике и увеличения экскреции кальция в связи с ухудшением канальцевой реабсорбции, вызывая тем самым транзиторную гипокальциемию (Франке и соавт., 1995; В.В. Поворознюк и соавт., 2004), которая стимулирует выработку паратгормона
 |  |
 |  |
 |  |
Рис. 1. Изменение фракционного состава коллагена в диафизе бедренной кости (слева) и теле 2-го поясничного позвонка (справа) при введении преднизолона (А), аллоксановом диабете (Б) и при сочетании аллоксанового диабета с введением преднизолона (В). Обозначения: НРК – нейтральносолерастворимый коллаген; ЦРК – цитратрастворимый коллаген; НК – нерастворимый коллаген.
Достоверность к контролю: *-p<0,05; **-p<0,01; ***- p<0,001.
и усиливает резорбцию костной ткани (Л.Я Рожинская, 2000; Ф.Х. Камилов и соавт., 2005; E.M. Kagel et al., 1995; C.A. Lill et al., 2002). В наших исследованиях введение животным преднизолона сопровождалось снижением содержания кальция в диафизе бедренной кости в первые 20 дней исследования, а в теле 2-го поясничного позвонка – в течение всего эксперимента.
При аллоксановом диабете увеличение концентрации глюкозы в плазме отмечалось у животных во все дни наблюдения. Наибольших значений гипергликемия достигала на 5 и 30 дни эксперимента, когда уровень глюкозы с 6,10±0,16 ммоль/л возрастал соответственно до 9,06±0,64 (p=0,005) и 9,45±0,23 ммоль/л (p=2,9*10-10). Содержание гликированного гемоглобина в плазме крови крыс возросло к 15 дню эксперимента до 4,47±0,19 (+22,49 %; p=0,011) против 3,65±0,25 мкмоль/гHb в контроле и оставалось повышенным во все последующие дни наблюдения.
Динамика содержания 11-ОКС в плазме крыс с аллоксановым диабетом носила фазный характер: на 5 день опыта концентрация гормонов снизилась до 110,13±17,31 мкг/л (p=10-5), что на 52,15 % меньше значений интактных крыс (230,17±13,70 мкг/л), на 15 день значимых изменений не выявлялось, а на 20, 30 и 45 день определялось выраженное увеличение концентрации 11-ОКС в плазме крови.
Содержание СО в плазме крови снижалось на 15 день опыта до 12,99±0,48 мкмоль/л (-23,55 %; p=0,002), в последующие дни опыта уровень СО был выше контрольных значений, достигая максимума на 30 день – 55,39±1,61 мкмоль/л (+226,02 %; p=4,7*10-8). Динамика содержания ПСО носила сходный характер. В течение эксперимента значимых отличий КА плазмы крови не выявлялось.
В костной ткани крыс с аллоксановым диабетом отмечалось угнетение синтетических процессов в течение первых 30 дней эксперимента. В ткани диафиза бедра содержание НРК в эти сроки был снижено, достигая минимальных значений на 20 день – 6,75 ±0,33 (p=10-6) против 10,54 ±0,41 ммоль/кг в контроле. В ткани позвонка содержание этой растворимой фракции уменьшалось на 5, 20 и 30 дни соответственно на 56,7 % (р=1,4*10-7), 51,42 % (р=10-6) и 39,52 % (р=2*10-6). К 45 дню уровень НРК возрос и превышал данные интактных животных в бедренной кости на 54,51 % (p=10-7), а в ткани позвонка на 26,22 % (p=0,043). Количество ЦРК в изучаемых тканях был меньше контрольных значений на 5, 20 и 30 дни наблюдения, достигая минимальных значений на 30 день опыта – 1,38±0,16 ммоль/кг (-67,32 %; p=10-5) в компактной кости и 1,45±0,29 ммоль/кг (70,98 %; p=10-5) в губчатой костной ткани.
Угнетение синтеза коллагена, вероятно, связано с дефицитом инсулина, который обладает анаболическим эффектом на метаболизм костной ткани и прямым стимулирующим влиянием на синтез изучаемого белка. (Р.Е. Чечурин и соавт., 1999; К.Ф. Вартанян, 2003; Ф.Х. Камилов и соавт., 2005). В условиях дефицита инсулина нарушается остеобластическая функция – происходит снижение выработки коллагена (Е.И. Марова, 2003; А.Н. Шишкин и соавт., 2008). Ряд авторов объясняют эти изменения пониженным образованием ИФР-I и связывающих его белков (В.Л. Орленко, 2000; Е.И. Марова, 2003; А.Н. Шишкин и соавт., 2008; M. Cokolic, 1998).
При сахарном диабете изменения белкового обмена в костях связаны с катаболическим влиянием на него ГК (С.Н. Ткач и соавт., 1986). Относительная или абсолютная недостаточность инсулина сопровождается увеличением секреции ГК и приводит к активации остеокластов и усилению катаболических процессов в костном матриксе (В.Л. Орленко, 2000; P.Lopez-Ibarra et al., 1992).
В нашем исследовании катаболические реакции в ткани бедренной кости активно протекали с 15 по 20 дни исследования, в эти сроки отмечался рост СО на 58,10 % (p=10-5) и 63,10 % (p=0,01). КА на 15 день диабета превышала контроль на 28,09 % (p=0,045), достигая 1,12±0,05 мкмоль/г/ч. Обнаружена сильная корреляционная связь (r=0,70; p<0,01) между данным показателем и содержанием СО в изучаемой ткани. В позвонке процессы распада протекали фазно: содержание СО повышалось на 15 и 30 день на 56,61 % (p=1,7*10-7) и 62,66 % (p=0,018) соответственно и уменьшалось на 20 и 45 дни соответственно на 44,56 % (p=0,006) и 48,72 % (p=1,69*10-7). Одновременно уменьшалась КА на 70,85 % (p=0,0014) и 59,32 % (p=0,049) соответственно указанным дням. На 45 день воздействия в обеих изучаемых тканях активировался синтез коллагена (возрастало содержание НРК), интенсивность катаболизма существенно снижалась.
На фоне описанных сдвигов в обмене коллагена содержание СК в диафизе бедренной кости снижалось к 20 дню на 20,45 % (p=0,006) относительно контроля и составляло 148,94±10,34 ммоль/кг. Содержание СК в губчатой костной ткани было меньше контрольных значений во все сроки эксперимента, за исключением 30 дня. Минимальное содержание СК в теле позвонка отмечалось на 20 день диабета и составляло 132,92 ±7,80 ммоль/кг (-33,30; p=8,2*10-9) против 197,20±3,29 ммоль/кг в контроле.
При сочетании аллоксанового диабета с введением преднизолона содержание глюкозы в плазме крови экспериментальных животных было повышено во все дни опыта, уровень гликемии был максимален на 5 и 15 день опыта, когда содержание глюкозы увеличивалось с 6,10±0,16 до 21,08±5,51 (р=0,034) и 16,83±1,7 ммоль/л (р=10-6) соответственно. Количество гликированного гемоглобина возрастало к 5 дню эксперимента с 3,90±0,28 до 6,67±0,63 мкмоль/г Hb (р=0,0014) и оставалось повышенным до 30 дня эксперимента, максимально отличаясь от контроля на 20 день – на 87,99 % (р=10-6).
Введение преднизолона на фоне аллоксанового диабета характеризовалось увеличением содержания 11-ОКС плазме крови на 5 и 15 дни исследования на 78,37 % (p=0,004) и 228,24 % (p=8,6*10-15). На 20 день исследования содержание изучаемых гормонов значительно снижалось в сравнении с контрольными показателями.
В плазме крови КА была значительно повышена в первые 20 дней сочетанного воздействия, достигая максимума на 15 день опыта (+284,83%; p=0,0002). На 30 день исследования КА в плазме крови существенно снижалась в сравнении с контролем (0,031±0,003 мкмоль/г/ч; p=0,003). Концентрация СО в плазме на 20 и 30 дни превышала показатели интактных животных соответственно на 226,02 % (p=5,05*10-8) и 82,12 % (p=0,008). Уровень ПСО в плазме крови был повышен в первые 20 дней воздействия.
ГК усиливают костную резорбцию и подавляют костеобразование, что приводит к снижению костной массы (Е.Г. Зоткин, 2003; P. Oelzner et al., 1997; E.T. Molenaar et al., 2000). В компактной костной ткани увеличение КА отмечалось на 5 день (1,76±0,09 мкмоль/г/ч; p=10-6) и 15 дни сочетанного воздействия (3,32±0,55; p=0,0012). Начиная с 20 дня, данный показатель не отличался от значений контроля (0,87±0,09 мкмоль/г/ч), что также может быть связано со снижением содержания 11-ОКС в плазме крови. СО в ткани бедренной кости увеличивался с 20 по 30 дни исследования на 47,83 % (р=0,005) и 70,00 % (p=0,001). В ткани позвонка при сочетанном воздействии интенсивность процессов распада коллагена была невысока: с 5 по 15 день опыта уровень СО был снижен и составлял соответственно 0,50±0,09 (p=8*10-5) и 0,40±0,06 ммоль/кг (p=5,7*10-8), рост его отмечался лишь на 20 и 30 дни на 43,03 % (p=0,002) и 37,48 % (p=0,01). КА не изменялась значимо в первые дни исследования, а с 30 дня сочетанного воздействия была стойко угнетена.
Динамика содержания растворимых фракций коллагена в костной ткани при сочетании сахарного диабета и гиперкортицизма носила фазный характер. В компактной кости содержание НРК было снижено на 5 и 20 дни наблюдения на 31,35 % (p=0,004) и 17,84 % (p=0,049) в сравнении с контролем (13,23±0,85 ммль/кг), но, в отличие от серии с «чистым» диабетом, на 15 и 30 дни опыта показатель возрастал соответственно до 16,35±0,93 (p=0,027) и 17,24±0,86 ммоль/кг (p=0,007). В губчатой ткани позвонка уровень НРК снижался на 5 и 45 день на 49,42 % (p=4*10-8) и 25,38 % (p=0,0011) в сравнении с контролем (11,50±0,45 ммоль/кг), а на 15 день возрастал до 19,21±0,51 ммоль/кг (p=10-10). Активация синтетических процессов, возможно, связана с влиянием ГК на кальций-фосфорный обмен. Обнаруженная нами гиперкальциемия на 15 день исследования могла увеличить выработку кальцитонина, который ингибирует активность остеокластов и стимулирует остеобласты, увеличивая синтез ими коллагена (Б.Л. Риггз и соавт., 2000; Ф.Х. Камилов и соавт., 2005). Увеличение уровня НРК в бедренной кости на 30 день можно объяснить тем, что содержание 11-ОКС в плазме крови в этот период не отличалось от контрольных значений. В литературе имеются сведения, что в физиологических условиях ГК повышают количество рецепторов на клетках кости к ИФР- I и др. (Ф.Х. Камилов и соавт., 2005).
В ходе нашего эксперимента дисбаланс процессов синтеза и деградации коллагена привел к снижению содержания СК в бедренной кости на 15, 30 и 45 дни, минимальное значение определялось на 45 день – 134,22±4,03 ммоль/кг (-28,35 %; p=6,3*10-8). Снижение содержания кальция в диафизе бедренной кости отмечалось с 20 дня и до конца эксперимента. Полученные нами результаты не противоречат данным литературы о том, что при сахарном диабете обнаруживается уменьшение преимущественно кортикальной кости (С.Н. Ткач и соавт., 1986).,
В позвонке на 20 и 30 дни СК увеличивался соответственно на 18,37 % (p=0,002) и 12,01 % (p=0,011) что связано, вероятно, с низкой интенсивностью реакций распада биополимера. В то время как в серии с изолированным введением аллоксана отмечалось стойкое снижение показателя в течение всего опыта.
Состояние дефицита глюкокортикоидов в организме животных моделировали путем введения аминоглютетимида. Препарат подавляет ферментативное превращение холестерина в прегненолон в надпочечниках и ингибирует синтез ГК (В.П. Комиссаренко, 1984; П.В. Сергеев, 1984)
Содержание 11-ОКС в плазме крови на 5 день исследования снижалось с 230,17±13,70 до 89,78 мкг/л (p=10-6). На 15 и 20 дни уровень гормонов оставался существенно сниженным: на 27,78 % (p=0,02) и 38,92 % (p=0,002) соответственно. На 30 день значимые отличия от контроля не определялись, а к 45 дню содержание 11-ОКС в плазме экспериментальных животных возросло до 578,78 мкг/л (+151,45 %; p=3*10-10).
Концентрация глюкозы в плазме крови снижалась на 20 день воздействия до 5,24±0,26, что на 14,08 % (p=0,01) меньше контроля. На 30 и 45 дни отмечалось увеличение уровня глюкозы в плазме крови на 9,82 % (p=0,021) и 24,37 % (p=3*10-6) соответственно. В течение всего срока наблюдения содержание глюкозы коррелировало с концентрацией 11-ОКС в плазме крови (r=0,76; p<0,01). Количество гликированного гемоглобина в крови экспериментальных животных увеличивалось на 15 и 20 дни соответственно до 4,69±0,21 мкмоль/г Hb (+20,38 %; p=0,049) и 6,64±0,21 мкмоль/г Hb (+70,39 %; p=0,005) против 3,90±0,28 мкмоль/г Hb в контроле.
В плазме крови животных, получающих аминоглютетимид, концентрация СО была повышена с 5 по 30 дни. Наибольший рост отмечался на 15 день (+241,75 %; р=6,7*10-14). Содержание ПСО на 5 день опыта резко возрастало с 16,09±1,37 до 112,21±5,16 мкмоль/л, что на 596,97 % (p=3,2*10-10) превышало значения интактных крыс. КА плазмы крови снижалась на 30 день исследования с 0,067±0,01 до 0,029±0,003 мкмоль/г/ч (-57,33 %; p=0,01).
В теле 2-го поясничного позвонка в первые 20 дней воздействия активно протекали процессы распада коллагена, о чем свидетельствует увеличение КА на 5 день воздействия на 59,32 % (p=0,049) и содержания СО на 5, 15 и 20 дни соответственно на 62,61 % (p=7*10-6), 38,59 % (p=0,004) и 26,12 % (p=0,01), во второй половине опыта интенсивность катаболизма существенно уменьшалась: КА снижалась на 30 и 45 дни до 0,62±0,12 (р=0,004) и 0,52±0,10 мкмоль/г/ч (p=0,01) против 1,25±0,19 в контроле; количество СО в этот период также было меньше данных интактных животных на 27,93 % (p=0,011) и 35,94 %; (p=0,016). Синтез коллагена в губчатой костной ткани интенсивно протекал на 5 и 20 дни введения аминоглютетимида – в этот период НРК возрастал с 11,50±0,45 до 14,73±1,33 (p=0,012) и 17,74±0,84 ммоль/кг (p=10-6). На 20 день опыта на 39,14 % (p=0,0011) также был повышен ЦРК в изучаемой ткани. На фоне этих изменений в обмене изучаемого белка в теле 2-го поясничного позвонка наблюдалось прогрессирующее увеличение содержания СК с 20 по 45 дни эксперимента. На 45 день количество СК в губчатой ткани позвонка достигло 261,74±10,34 ммоль/кг (+32,74 %; p=4,2*10-9).
Усиление катаболических процессов в компактной костной ткани отмечалось также в течение первых 20 дней введения аминоглютетимида, когда были повышены показатели распада коллагена. КА в диафизе бедренной кости на 5 день исследования возрастала до 1,51±0,20 мкмоль/г/ч (p=0,005) против 0,87±0,09 мкмоль/г/ч в контроле и оставалась повышенной на 15 день на 70,79 % (p=0,01). Рост СО в диафизе бедра отмечался на 5, 15 и 20 дни введения аминоглютетимида на 70,47 % (р=0,02), 64,10 % (p=0,04) и 55,22 % (p=0,002) соответственно указанным дням. Полученные результаты согласуются с данными литературы, согласно которым ГК способны ингибировать экспрессию множества генов, вовлеченных в синтез провоспалительных цитокинов (Д.А. Воеводин и соавт., 2006; Дж. Гриффин и соавт., 2008), в условиях дефицита ГК нарушается баланс выработки про- и
 |  |
 |  |
Рис. 2. Изменение фракционного состава коллагена в диафизе бедренной кости (слева) и теле 2-го поясничного позвонка (справа) при введении аминоглютетимида (А), при сочетании аллоксанового диабета с введением аминоглютетимида (Б). Обозначения: НРК – нейтральносолерастворимый коллаген; ЦРК – цитратрастворимый коллаген; НК – нерастворимый коллаген. Достоверность к контролю: *-p<0,05; **-p<0,01; ***- p<0,001.
противовоспалительных цитокинов, что может активировать процессы резорбции в костной ткани.
Содержание НРК в диафизе бедренной кости снижалось на 15 день опыта до 10,26±0,88 (p=0,044), а на 20 день превышало данные контроля на 18,20 % (p=0,049). Угнетение синтеза в ранние сроки эксперимента на фоне усиленного распада привело к снижению содержания суммарного коллагена в диафизе бедренной кости на 5 и 15 дни исследования на 11,09 и 13,17 % (p=0,01). Однако увеличение выработки растворимых коллагенов на 20 день опыта (НРК – на 15,03 %; p=0,049 и ЦРК – на 50,91 %; p=0,001) восстановило уровень СК, а 45 день опыта характеризовался увеличением содержания этого показателя компактной костной ткани.
Активация синтеза, возможно, объясняется тем, что ингибирование выработки ГК сопровождается компенсаторным увеличением продукции АКТГ (В.П. Комиссаренко, 1972), при этом усиливается синтез СТГ. (Зайчик и соавт., 2000). В кости СТГ индуцирует продукцию ИФР-I и II, которые активируют пролиферацию остеобластов и стимулируют синтез коллагена I типа (Л.Я. Рожинская, 2000; T.L. Carthy et al., 1989; R. Barnard et al., 1991).
У животных с аллоксановым диабетом, протекающим в условиях дефицита кортикостероидных гормонов, содержание 11-ОКС в плазме крови повышалось лишь на 20 день воздействия на 79,29 % (p=6*10-5), а в остальные сроки было снижено, за исключением 45 дня.
Концентрация глюкозы в плазме крови при сочетанном воздействии была увеличена во все сроки наблюдения. На 5 день исследуемый показатель возрастал с 6,10±0,16 ммоль/л до 12,38 ммоль/л (+106,77 %; p=0,009). Наибольших значений гипергликемия достигала на 20 и 30 дни. Уровень гликемии в течение эксперимента тесно коррелировал с содержанием 11-ОКС (r=0,76; p<0,01). Содержание гликированного гемоглобина на фоне двойного воздействия также было увеличено во все дни опыта и прямо коррелировало с уровнем гликемии (r=0,58; p<0,01).
КА плазмы крови опытных животных лишь на 20 день возрастала до 0,14±0,03 мкмоль/г/ч (p=0,019). Уровень СО повышался в плазме крови на 15 и 30 дни эксперимента с 16,99±0,74 до 30,94±1,36 (p=4,3*10-8) и 32,47±3,60 мкмоль/л (p=0,003) соответственно. Содержание ПСО в плазме крови на 15, 20 и 30 дни последовательно возрастало, превышая аналогичные показатели контроля на 44,82 % (р=0,03), 57,29 % и 72,13 % (p=0,02) соответственно.
В компактной костной ткани КА возрастала к 15 дню до 2,94±0,56 мкмоль/г/ч (p=0,005) и оставалась повышенной на 20 день сочетанного воздействия. На 30 день эксперимента КА в диафизе бедра снижалась до 0,33±0,10 мкмоль/г/ч (p=0,002), вместе с этим снижалось и содержание СО с 0,86±0,05 до 0,60±0,08 ммоль/кг (p=0,048). В ткани позвонка КА снижалась соответственно на 15 и 20 дни эксперимента 58,47 % (р=0,023) и 48,47 % (p=0,01), на 30 день отличий от контроля не выявлено, а на 45 день КА возрастала до 2,31±0,16 мкмоль/г/ч (p=0,001). В губчатой костной ткани уровень СО уменьшался во все сроки опыта (кроме 20 дня). Минимальное значение СО (0,49±0,06 ммоль/кг; p=0,001) отмечались на 45 день сочетанного воздействия.
Содержание НРК при сочетанном воздействии, как в компактной, так и губчатой костной ткани было повышено на 15, 20 и 45 дни исследования. В диафизе бедренной кости в указанные сроки показатель возрастал с 13,23±0,85 до 16,91±0,96 (р=0,011), 16,31±0,95 (р=0,03) и 16,34±0,84 ммоль/кг (p=0,049) соответственно. В ткани позвонка рост НРК в эти сроки составил 34,15 % (p=0,0012), 36,89 % (p=0,02) и 72,19 % (p=0,002) в сравнении с контролем.
Количество ЦРК в ткани бедренной кости на 15 день опыта снижалось до 3,24±0,39 ммоль/кг, (-37,17 %; p=0,04). В гомогенате ткани позвонка содержание ЦРК снижалось на 5 и 30 дни сочетанного воздействия соответственно на 48,49 % (р=0,0011) и 31,82 % (p=0,007) в сравнении с контролем (4,79±0,23 ммоль/кг).
В ткани диафиза содержание СК на 15 и 45 дни опыта возрастало с 187,32±4,03 до 219,75±4,57 и 214,04±8,95 ммоль/кг, что на 17,31 % (p=2*10-5) и 14,27 % (p=0,049) соответственно больше контроля. В гомогенате ткани тела позвонка уровень СК на 5 день на 32,35 % (p=6*10-11) превышал данные интактных крыс. В дальнейшем, на 15, 20 и 30 дни исследования изучаемый показатель оставался повышенным на 17,92 % (p=0,004), 13,03 % (р=0,04) и 14,25 % (p=0,02) соответственно.
Увеличение содержания СК костной ткани при сочетании аллоксанового диабета с введением блокаторов стероидогенеза обусловлено усилением синтеза биополимера, протекающего на фоне низкой активности процессов катаболизма. Усиление синтетических процессов коллагена при сочетанном воздействии может быть связано с уменьшением ингибирующего влияния ГК на функциональную активность остеобластов, синтез ИФР-I и коллагена I типа. Это подтверждается обнаруженной нами сильной отрицательной корреляцией (r=-0,7; p<0,01) между содержанием 11-ОКС в плазме крови и уровнем НРК в бедренной кости в первые 15 дней опыта.
Данные наших экспериментов свидетельствуют о том, что введение избыточных доз ГК, аллоксановый диабет, а также их сочетание сопровождаются выраженными нарушениями в обмене коллагена костной ткани. Следует отметить, что реакция костной ткани диафиза бедренной кости (компактная костная ткань) и тела 2-го поясничного позвонка (губчатая костная ткань) на моделируемые состояния часто носила неоднозначный и разнонаправленный характер. Как правило, более чувствительной к повреждающим факторам оказывалась губчатая костная ткань позвонка, так как метаболически она более активна, чем компактная (В.В. Поворознюк и соавт., 2004; Ф.Х. Камилов и соавт., 2005; J. Reeve et al., 1993; I. Steinebach, 2008).
ВЫВОДЫ
- Экзогенный гиперкортицизм, моделируемый введением высоких доз преднизолона, вызывает изменения в метаболизме коллагена костной ткани, характеризующиеся усилением, как синтеза, так и распада биополимера в начальные сроки эксперимента, разнонаправленным течением этих процессов во второй и третьей декаде опыта и угнетением катаболизма коллагена в изучаемых тканях на 45 день.
- Экспериментальный диабет, индуцированный аллоксаном, вызывает изменения в обмене коллагена костной ткани, проявляющиеся угнетением синтетических процессов в течение первых 30 дней и активацией катаболических процессов с 15 дня воздействия, которые сменяются на 45 день опыта снижением распада и увеличением синтеза коллагена.
- Введение преднизолона животным с аллоксановым диабетом вызывает неодинаковые изменения в обмене коллагена компактной и губчатой костной ткани, характеризующиеся превалированием катаболических процессов в диафизе бедренной кости, что проявляется стойким снижением суммарного коллагена; и угнетением процессов распада коллагена в теле 2-го поясничного позвонка, что приводит к накоплению суммарного коллагена и его нерастворимой фракции.
- Гипокортицизм, воспроизводимый введением аминоглютетимида, вызывает активацию распада коллагена костной ткани в первые 20 дней воздействия и снижение интенсивности этого процесса в последующие сроки, сопровождающиеся выраженным повышением синтеза коллагена на 20 день исследования, что приводит к увеличению содержания суммарного коллагена в поздние сроки опыта.
- При сочетании аллоксанового диабета с введением аминоглютетимида обмен коллагена костной ткани характеризуется превалированием синтетических процессов, что проявляется увеличением содержания нейтральносолерастворимой фракции и суммарного коллагена, как в компактной, так и в губчатой костной ткани.
- Метаболизм коллагена костной ткани при аллоксановом диабете зависит от содержания глюкокортикоидных гормонов и характеризуется качественными и количественными изменениями фракционного состава и коллагенолитической активности.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
Использованные в работе биохимические методы определения коллагена костной ткани и его фракций могут быть рекомендованы в клинике для оценки состояния костной ткани, а также в качестве критерия риска развития остеопатий у больных сахарным диабетом.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
- Данилова, О.В. Обмен коллагена компактной костной ткани крыс при аллоксановом диабете на фоне введения блокатора стероидогенеза / О.В. Данилова, Е.Г. Бутолин // Морфологические ведомости. – 2008. – №3-4. – С.31-33.
- Данилова, О.В. Обмен коллагена в диафизе бедренной кости крыс при введении аминоглютетимида на фоне аллоксанового диабета / О.В. Данилова // Аспирантский вестник Поволжья. – 2009. – №7-8. – С.171-173.
- Данилова, О.В. Изменение обмена коллагена в губчатой костной ткани и плазме крови крыс при сочетании аллоксанового диабета с введением высоких доз преднизолона / О.В. Данилова, Е.Г. Бутолин // Сибирский медицинский журнал. – 2010. - №1. – С.52-54.
- Бутолин, Е.Г. Изменение обмена биополимеров соединительной ткани у крыс при экспериментальном сахарном диабете / Е.Г. Бутолин, О.В. Данилова, А.И. Глазырин, И.И. Мосягин // Материалы межрегиональной научно-практической конференции, посвященной 85-летию Самарского государственного медицинского университета. – Самара, 2005. – С.63-65.
- Переведенцева, С.Е. Содержание суммарного коллагена в тканях крыс при аллоксановом диабете / С.Е. Переведенцева, Н.В. Савинова, С.Р. Трофимова, О.В. Данилова // Труды Ижевской государственной медицинской академии. – Ижевск, 2005. – Т 43. – С.32-33.
- Данилова, О.В. Состояние метаболизма коллагена костной ткани при экзогенном гиперкортицизме / О.В. Данилова, Н.В. Савинова, С.Е. Переведенцева // Материалы III региональной научно-практической конференции «Проблемы геронтологии и гериатрии – 2006». – Сыктывкар – Санкт-Петербург, 2006. – С. 75-76.
- Савинова, Н.В. Особенности метаболизма коллагена костной ткани при гипокортицизме у крыс с аллоксановым диабетом / Н.В. Савинова, О.В. Данилова, С.Е. Переведенцева // Труды Ижевской государственной медицинской академии. – Ижевск, 2006. – Т 44. – С.15-17.
- Савинова, Н.В. Особенности метаболизма коллагена в компактной и губчатой костной ткани крыс при экспериментальном диабете / Н.В. Савинова, С.Е. Переведенцева, О.В. Данилова // Материалы межрегиональной научной конференции «Патофизиология современной медицине», посвященной 70-летию кафедры патофизиологии Ижевской государственной медицинской академии. - Ижевск, 2007. – С.121-123.
- Данилова, О.В. Обмен коллагена компактной костной ткани при введении аминоглютетимида / О.В. Данилова, Е.Г. Бутолин // VI Всероссийская конференция с международным участием, посвященная 50-летию открытия А.М. Уголевым мембранного пищеварения «Механизмы функционирования висцеральных систем»: Тезисы докладов. – Санкт-Петербург, 2008. – С.62.
- Данилова, О.В. Изменение содержания суммарного коллагена и его фракции в костной ткани крыс при введении избыточных доз глюкокортикоидов // О.В. Данилова // Вятский медицинский вестник. – 2008 – №1. – С.78-80.
- Переведенцева, С.Е. Влияние преднизолона на содержание кальция в крови и костной ткани крыс / С.Е. Переведенцева, О.В. Данилова, Н.В. Савинова // Вятский медицинский вестник. – 2008 – №1. – С.80-81.
- Данилова, О.В. Влияние избыточных доз глюкокортикоидов на обмен коллагена костной ткани крыс / О.В. Данилова // Материалы II международной научной конференции молодых ученых-медиков. – Курск, 2008. – С.34-35.
- Данилова, О.В. Обмен коллагена и содержание кальция в диафизе бедренной кости крыс при сочетании диабета и введения преднизолона / О.В. Данилова // Материалы Российской конференции «Актуальные проблемы теоретической и прикладной биохимии». Российская конференция, посвященная 80-летию со дня рождения Р.И. Лившица, приуроченная к 65-летию Челябинской государственной медицинской академии. – Челябинск, 2009. – С.34-36.
- Данилова, О.В. Обмен коллагена губчатой костной ткани при сочетании аллоксанового диабета с введением блокатора стероидогенеза / О.В. Данилова // Труды Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Вопросы патогенеза типовых патологических процессов». – Новосибирск, 2009. – С.105-108.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ГК - глюкокортикоиды
ИФР-I - инсулиноподобный фактор роста-I
КА - коллагенолитическая активность
НРК - нейтральносолерастворимый коллаген
НК - нерастворимый коллаген
11-ОКС - 11-оксикортикостероиды
ПСО - пептидносвязанный гидроксипролин
ПТГ - паратиреоидный гормон
СД - сахарный диабет
СО - свободный гидроксипролин
СК - суммарный коллаген
RANKL - лиганд рецептора-активатора ядерного фактора-каппа В
RANK - рецептор-активатор ядерного фактора-каппа В
OPG - остеопротегерин
