Состояние прооксидантно-антиоксидантного баланса в процессе развития гнойной раны и возможности коррекции его нарушений (экспериментально-клиническое исследование)

На правах рукописи

Федосов Сергей Ростиславович

состояние

прооксидантно-антиоксидантного баланса

в процессе развития гнойной раны и возможности коррекции его нарушений

(экспериментально-клиническое исследование)

03.00.04 – биохимия

14.00.27 – хирургия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Краснодар – 2009

Работа выполнена в государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Кубанский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (ГОУ ВПО КГМУ Росздрава).

Научные руководители: доктор медицинских наук профессор

Павлюченко Иван Иванович,

доктор медицинских наук профессор

Савченко Юрий Павлович.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук профессор

Нагиев Эйзудин Рамазанович,

доктор медицинских наук профессор

Гуменюк Сергей Евгеньевич.

Ведущая организация: государственное образовательное учреждение

высшего профессионального образования

«Ставропольская государственная

медицинская академия Федерального

агентства по здравоохранению и

социальному развитию», г. Ставрополь.

Защита состоится «____» ____________ 2009 г. в 10.00 на заседании диссертационного совета Д208.038.02 при ГОУ ВПО КГМУ Росздрава (350063, г. Краснодар, ул. Седина, 4, тел. {861} 262-73-75).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО КГМУ Росздрава.

Автореферат разослан «____» ____________ 2009 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета

Д 208.038.02 профессор Л. А. Скорикова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Разработка эффективных методов диагностики течения раневого процесса, а также выбор оптимального метода лечения продолжает оставаться одной из актуальных проблем в современной хирургии [Б.М. Костюченок и соавт., 1976; В.К. Гостищев, 1996; В.Д. Федоров и соавт., 2005]. Пациенты с гнойно-воспалительными заболеваниями составляют от 40% [Ю.К. Абаев, 2006] до 49% больных хирургического профиля [Б.М. Даценко и соавт., 1995]. Доказано, что одним из проявлений раневого процесса является изменение баланса в системах генерации свободных радикалов и антиоксидантной защиты [M. Fredrickson, 1990], которое может являться также одной из причин неблагополучного и осложненного течения раневого процесса. В настоящее время существует недостаток информации о состоянии прооксидантно-антиоксидантного баланса у отдельных когорт пациентов, что затрудняет обоснованный выбор прооксидантной или антиоксидантной терапии [A.M. Rasik и соавт., 2001].

Учитывая вышеизложенное, целью настоящей работы явилась оценка состояния прооксидантно-антиоксидантного баланса в раневом экссудате и в периферической крови в процессе эволюции гнойной раны для прогнозирования течения раневого процесса и коррекции местного лечения.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. разработать новый комплексный подход к оценке состояния прооксидантно-антиоксидантного баланса в раневом отделяемом, включающий авторские методы получения биологического материала, определения выраженности прооксидантных факторов и резервных возможностей антиоксидантной системы;
2. установить особенности изменения прооксидантно-антиоксидантного баланса на местном и системном уровнях в процессе эволюции гнойной раны у пациентов с осложненным и неосложненным течением раневого процесса;
3. определить комплекс основных биохимических и биофизических показателей, необходимых для объективной оценки уровня дисбаланса в системе прооксиданты – антиоксиданты у пациентов с гнойной раной;
4. выявить закономерности изменения изученных показателей прооксидантно-антиоксидантной системы крови в зависимости от площади гнойной раны у пациентов с осложненным и неосложненным течением раневого процесса;
5. оценить влияние местной антиоксидантной терапии на состояние прооксидантно-антиоксидантного баланса и клиническое течение раневого процесса на экспериментальной модели гнойной раны в различные фазы ее развития.

Новизна результатов исследования

1. Впервые разработан способ лабораторной диагностики окислительного стресса, включающий определение уровня компонентов прооксидантно-антиоксидантных систем организма, который обладает точностью, достаточной для достоверности определения состояния антиоксидантной системы (АОС) на системном уровне у больных с гнойными ранами.
2. Предложен аппаратно-программный комплекс лабораторной диагностики окислительного стресса, основанный на обработке с помощью ЭВМ биофизических показателей состояния АОС на системном и местном уровнях у больных с гнойными ранами.
3. Впервые предложена программа регистрации сигналов хемилюминотестера ЛТ-1, позволяющая определять максимум и площадь быстрой вспышки хемилюминесценции.
4. Модифицированы и внедрены в хирургическую практику способ получения биологического материала из раны для анализа состояния прооксидантно-антиоксидантного баланса на местном уровне и метод контроля динамики изменения площади раны, позволяющий производить планиметрию с высокой скоростью и достаточной точностью.
5. Впервые исследована динамика состояния АОС у больных с гнойными ранами параллельно на системном и на местном уровнях в процессе эволюции гнойной раны, проведен корреляционный анализ изменений отдельных показателей в экссудате раны и в периферической крови в зависимости от площади раны.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

1. Определение прооксидантно-антиоксидантного статуса на локальном уровне дает возможность достоверно дифференцировать характер течения и фазу раневого процесса, а также корректировать проводимое лечение.
2. Имеется прямая взаимосвязь между неферментными показателями, характеризующими окислительный стресс у хирургических больных, и площадью гнойной раны.
3. У всех пациентов с сопутствующим сахарным диабетом отмечается неадекватная реакция АОС на дополнительное ее раздражение в динамике развития гнойного процесса, особенно остро манифестирующая у пациентов с острым гнойным процессом.
4. У пациентов с острым гнойным процессом на фоне сахарного диабета на локальном уровне имеется тенденция к сохранению прооксидатной нагрузки, в то время как у пациентов с хроническим характером течения гнойного процесса особенностью является меньший уровень активации и торпидность динамики оксидативных процессов.

Теоретическая значимость исследования

1. Установлен характер динамики прооксидантно-антиоксидантного баланса на местном уровне (в раневом экссудате) и на уровне организма (в периферической крови) в процессе развития гнойной раны.
2. Доказано наличие взаимосвязи изменений показателей прооксидантно-антиоксидантной системы на местном и системном уровнях.
3. Продемонстрированы различия в изменении прооксидантно-антиоксидантного баланса в условиях неосложненного раневого процесса и в условиях раневого процесса, отягощенного сахарным диабетом.

Практическая значимость исследования. Предложенные методы исследования позволяют оценить характер течения раневого процесса, определить момент перехода раны из одной фазы раневого процесса в другую и оценить индивидуальную потребность в средствах коррекции прооксидантно-антиоксидантного баланса. Разработаны методические рекомендации для проведения исследований, направленных на определение влияния лекарственных средств, применяемых для местного лечения гнойных ран, на прооксидантно-антиоксидантный баланс.

Сведения о практическом использовании результатов исследования. На основании полученных фактов предложены практические рекомендации, используемые в отделении гнойной хирургии краевой клинической больницы № 1 и в отделении хирургии госпиталя МСЧ ГУВД Краснодарского края. Отдельные положения диссертации включены в лекции для общих хирургов и хирургов гнойной специализации на курсах повышения квалификации, а также используются в учебном процессе на кафедре фундаментальной и клинической биохимии и кафедре общей хирургии Кубанского государственного медицинского университета.

Апробация работы. Основные материалы диссертации докладывались и обсуждались: на IV Всероссийской конференции общих хирургов с международным участием «Раны и раневая инфекция» (14–15 мая 2007, Ярославль); на XIV Международной конференции «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии» (1–5 июня 2006, Украина, Крым, Ялта – Гурзуф); на V Всемирном конгрессе по иммунопатологии и аллергии (21–24 апреля 2007, Москва); на XI Международном конгрессе по реабилитации в медицине и иммунореабилитации (22–29 апреля 2006, Тенерифе, Канарские острова, Испания). По результатам исследования опубликовано 14 печатных работ, включая 2 патента на изобретения, 1 патент на полезную модель и 1 свидетельство на регистрацию программы для ЭВМ.

Объем и структура работы. Диссертация состоит из введения, шести глав, заключения, выводов, списка литературы и трех приложений. Список литературы включает 108 отечественных и 64 зарубежных источника. Диссертация изложена на 204 страницах, иллюстрирована 52 рисунками (в том числе 7 фотографиями), 12 таблицами, представлено 3 клинических примера.

МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ

В основу клинических исследований положены результаты наблюдения и лечения 62 больных с гнойными ранами. С целью проведения аналитического и статистического анализа больные были разделены на три основные и две контрольные группы, отличающиеся по нозологии (табл. 1). Пациенты были сопоставимы по возрасту и полу между группами А и группой К1, группой В и группой К2 (p > 0,05).

Таблица 1

Распределение пациентов по группам

Группа	Нозология	Количество
А1	Флегмона стопы на фоне синдрома диабетической стопы	20
А2	Гнойная рана стопы на фоне синдрома диабетической стопы	19
B	Флегмона шеи	23
K1	Пациенты, страдающие тяжелым сахарным диабетом	22
K2	Лица, не страдающие соматическими заболеваниями на момент исследования	20
Всего		104

При поступлении в клинику пациентам выполнялась адекватная хирургическая обработка гнойного очага по традиционной методике [Б.М. Костюченок и соавт., 1986]. В дальнейшем осуществлялись ежедневные перевязки с санацией раны водным раствором антисептика (хлоргексидина биглюконат). Использовались повязки с мазью «Левомеколь» на протяжении всего исследования. Индивидуально для каждого пациента фиксировался момент перехода раны из гнойно-некротической в фазу грануляций (классификация фаз раневого процесса Б.М. Даценко, 1995). Средние сроки момента смены фаз в различных группах составили: в группе А1 – 12±0,4 (1,5) суток, в группе А2 – 10±0,4 (1,7) суток, в группе В – 7±0,2 (1,1) суток.

Площадь раневой поверхности (рис. 1) измерялась на следующие сутки после проведения хирургической обработки гнойного очага с использованием авторского метода [Ю.П. Савченко, С.Р. Федосов, А.М. Плаксин, 2007] и составила в группе А1 56,7 ±1,4 (5.9) см2, в группе А2 – 67,5±1,8 (7,6) см2, в группе В – 77,3±1,6 (7,6) см2.

Рис. 1. Пример фотографии гнойной раны, подготовленной для контроля изменения ее площади в динамике раневого процесса (справа приведен условный эталон площади 25 см2)

Для определения показателей прооксидантно-антиоксидантного баланса на системном уровне забиралась кровь непосредственно из вены пациента с использованием стандартного инструментария и гепаринизировалась в соотношении 1:10, после чего охлаждалась до 8–10° С. Для определения показателей прооксидантно-антиоксидантного баланса на местном уровне отделяемое раны забиралось по методике [А.Р. Ромм и соавт., 1986] в авторской модификации [М.И. Быков и соавт., 2007]. Кровь и экссудат раны забирались на 2, 4, 6, 8, 10, 12 и 14-е сутки от момента хирургической обработки гнойного очага.

Экспериментальная часть работы была направлена на оценку влияния гидрофильных мазей с антиоксидантными свойствами на состояние прооксидантно-антиоксидантного баланса в раневом отделяемом и клинические показатели течения раневого процесса. Опыты выполнены на двенадцати беспородных кроликах-самцах весом 2,5–3 кг. Кролики были разделены на три группы по четыре животных в каждой: в контрольной группе лечение осуществлялось физиологическим раствором хлорида натрия, в группе № 1 – мазью «Левомеколь», в группе № 2 – гидрофильной мазью на основе водного экстракта Fructus Sophorae japonicae. Раневой процесс моделировался гибридным методом, включающим метод моделирования резаной раны [H.P. Ehrlich и соавт., 1968] и метод моделирования абсцесса [Л.А. Мамедов и соавт., 1988]. Сформированная гнойная рана подвергалась лечению путем ежедневных перевязок. Экссудат раны забирался на 1, 3, 5, 7 и 10-е сутки.

Состояние АОС организма оценивали по активности каталазы (КАТ) и супероксиддисмутазы (СОД) эритроцитов, по уровню восстановленных тиоловых групп эритроцитов и амперометрическому определению антиокислительной активности плазмы крови. Активность КАТ исследовали в гемолизате эритроцитов и раневом отделяемом по методу [R. Beers и соавт., 1952] в авторской модификации [И.И. Павлюченко и соавт., 2006], основанному на оценке скорости убыли субстрата фермента (перекиси водорода). Активность СОД определяли в гемолизате эритроцитов и раневом отделяемом по методике [В.А. Костюк и соавт., 1990] в авторской модификации [И.И. Павлюченко и соавт., 2006], которая основана на способности СОД ингибировать индуцированную реакцию аутоокисления кверцетина. Количество тиоловых групп в гемолизате эритроцитов определяли модифицированным методом с использованием реактива Эллмана [В.Н. Орехович, 1977]. Определение АОА плазмы крови и экссудата раны проводилось модифицированным амперометрическим способом [А.Я. Яшин и соавт., 2003] на анализаторе «Яуза-01-ААА». Способ основан на измерении электрического тока, возникающего при окислении биологического образца на поверхности рабочего электрода при определенном потенциале.

Состояние прооксидантной системы оценивали в плазме крови по исходному количеству продуктов окислительной модификации биомолекул, реагирующих с тиобарбитуровой кислотой (ТБЧ), а в эритроцитах определяли как базальный их уровень, так и состояние после предварительной индукции [И.Д. Стальная, Т.Г. Гаришвили, 1977]. Также в плазме крови и в экссудате раны оценивали интенсивность быстрой вспышки хемилюминесценции (БВХЛ) с помощью люминотестера ЛТ-01 в составе системы для диагностики окислительного стресса [И.И. Павлюченко, А.А. Басов, С.Р. Федосов, 2006], включающей аналогово-цифровой преобразователь и ЭВМ с авторской «Программой регистрации сигналов хемилюминотестера ЛТ-01», позволяющей регистрировать амплитуду и площадь хемилюминесценции.

В связи с тем что исследуемые показатели зависят от количества эритроцитов, определяли также количество эритроцитов в цельной крови по методу Ресселя [Л.К. Рессель, И. Тодоров, 1961].

Статистический анализ производился на ЭВМ с использование свободного программного обеспечения – системы статистического анализа R [R Development Core Team, 2008].

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

При анализе полученных результатов по отдельным показателям прооксидантно-антиоксидантного статуса на местном уровне (исследование раневого отделяемого) можно отметить следующие закономерности. В сравнении с неосложненным течением раневого процесса (группа В) у пациентов с острым гнойным процессом на фоне сахарного диабета (группа А1) имеется тенденция к сохранению уровня оксидативной нагрузки, в то время как у пациентов с хроническим его характером (группа А2) особенностью является меньший уровень активации и торпидность динамики оксидативных процессов. Эти процессы отмечаются на фоне неадекватной реакции АОС на местном уровне в обеих указанных группах, особенно отчетливо проявляющейся у пациентов с острым гнойным процессом (группа А1).

Проявляющееся со 2-х суток и отмеченное во всех группах снижение АОА раневого экссудата (рис. 1) отражает два одновременно развивающихся процесса: снижение функциональных возможностей АОС в тканях раны и уменьшение образования раневого экссудата по мере перехода раны во вторую фазу. К 14 суткам отмечено снижение этого показателя на 47% (группа А1, p < 0,05), 33,5% (группа А2) и 55,7% (группа В, p < 0,05).

На 2–4-е сутки во всех группах зарегистрирован наибольший уровень максимума и площади БВХЛ раневого экссудата (рис. 2), что является результатом активации прооксидантных систем в тканях раны в первой фазе раневого процесса как побочного эффекта интенсификации окисления при «окислительном взрыве» в фагоцитах. К 14-м суткам отмечено снижение этих показателей на 56,2% (группа А1, p < 0,05), 22,3% (группа А2) и 76,4% (группа В, p < 0,05).

Первоначальное снижение соотношения КАТ/СОД в раневом экссудате на фоне сахарного диабета у пациентов с гнойной раной соответствует развивающему на локальном уровне дисбалансу звеньев АОС в сторону СОД. Отмеченная у пациентов с сахарным диабетом и хронической гнойной патологией динамика характеризует течение раневого процесса - затянутая первая фаза находит отражение в значительном размере плато соотношения КАТ/СОД. Напротив, динамика соотношения КАТ/СОД у пациентов с флегмонами шеи отражает характер неосложненного течения раневого процесса - по мере смены одной фазы другой снижается активность СОД и увеличивается активность КАТ.

С первого наблюдения отмечается снижение АОА плазмы крови (рис. 2) у пациентов с сахарным диабетом (на 44,8% в группе А1 и на 48,2% в группе А2 относительно контрольных значений; p < 0,05). Это является следствием истощения АОС крови в результате длительной активации факторов прооксидантной направленности как ответа макроорганизма на гнойное воспаление. Обращает на себя внимание, что характер описанного в группе В изменения АОА плазмы имеет значительные отличия от характера изменения в эти сроки аналогичного показателя групп А1 и А2. Так, в группах А1 и А2 изначально показатель АОА был ниже и снижение его на протяжении всего периода наблюдения отмечалось относительно медленнее и с меньшей амплитудой, чем в группе В. Это может быть связано с тем, что у пациентов с сахарным диабетом изначально отмечается дисбаланс АОС и снижение ее резервных возможностей по нейтрализации возрастающей в результате развития гнойного процесса прооксидантной нагрузки.

Описываемое во всех группах повышение максимума и площади БВХЛ плазмы крови (рис. 3) в начале развития раневого процесса является результатом активации факторов прооксидантной направленности крови как системного ответа макроорганизма на микробную агрессию, проявляющуюся развитием флегмоны. Обращает на себя внимание, что в группах А1 и А2 изначально показатель максимума БВХЛ был выше контрольных значений на 44,8 и 48,2% соответственно (p < 0,05), а увеличение его в последующем периоде наблюдения происходило относительно медленнее и с меньшей амплитудой, чем в группе В. Это может быть связано с тем, что у пациентов с сахарным диабетом развивается эндотоксикоз, в том числе повышается концентрация в крови продуктов азотистого обмена (обладающих антиоксидантными свойствами), и снижение напряженности иммунных реакций, которое предопределяет уменьшение прооксидантной нагрузки, что детерминирует фиксацию прооксидантно-антиоксидантного баланса на более высоком уровне с тенденцией к дисбалансу в сторону прооксидантного звена.

Динамика концентрации SH-групп в плазме крови в ранние сроки течения раневого процесса отражает продолжающееся снижение емкости наиболее быстро реагирующего на прооксидантную агрессию звена АОС (минимальное значение в группе А1 составило 73,5%, в группе А2 – 60,6%, в группе В – 63,4% от показателя контрольной группы; p < 0,05). Отмечаемый в более поздние сроки прирост концентрации SH-групп является отражением регенерации этого звена АОС при снижении прооксидантной нагрузки. Большая скорость регенерации SH-групп у пациентов с сохранным метаболизмом (группа В) в сравнении с пациентами, страдающими СД и имеющими патологию обмена веществ (группы А1 и А2), отражает дисфункцию звена быстрого реагирования АОС при сахарном диабете.

Зарегистрированное во всех группах на 2–4-е сутки повышение ТБЧ плазмы (группа А1 на 142,9%, группа А2 на 83% и группа В на 204% от показателя контрольной группы; p < 0,05) и ТБЧ эритроцитов (группа А1 на 110%, группа А2 на 68,9% и группа В на 79% от показателя контрольной группы; p < 0,05) соответствует накоплению в плазме крови продуктов перекисного окисления, реагирующих с тиобарбитуровой кислотой, и является результатом активации прооксидантной системы на фоне снижения функциональной активности АОС.

Отчетливое снижение активности КАТ в первые несколько суток в гемолизате эритроцитов у пациентов с гнойными ранами (в группе А1 на 39,2%, p < 0,05; в группе А2 – на 32,6%, p < 0,05; в группе В – на 12% от показателя контрольной группы) может соответствовать ингибированию этого фермента в результате накопления в крови токсических продуктов. Прирост активности КАТ в середине периода наблюдения соответствует восстановлению ее активности в результате прекращения поступления токсинов и естественной детоксикации. Динамика активности КАТ в более поздние сроки отражает восстановление защитных механизмов АОС у больных в результате проведения стационарного лечения и благоприятного течения заболевания.

Описываемый в начале эволюции раны рост активности СОД в гемолизате эритроцитов (в группе А1 – на 34%, в группе А2 – на 32% и в группе В – на 32,6% от показателя контрольной группы; p < 0,05) может соответствовать активации этого фермента как звена первой линии АОС и является ответом на гиперактивацию синтеза активных форм кислорода. У пациентов групп А1 и А2 отмеченная динамика характеризует активацию СОД как фермента первой линии АОС в условиях нарушений метаболизма, обусловленных сахарным диабетом: реакции прооксидантного и антиоксидантного компонента торпидны, а амплитуда реакции значительно снижена.

Зарегистрированная в группах А1 и А2 динамика коэффициента окислительной модификации биомолекул эритроцитов – КОМБэр (повышение в 3,2 и 3,4 раза соответственно показателю контрольной группы) отражает как исходную тяжесть повреждения биомолекул в результате прооксидантной нагрузки, так и неспособность организма к быстрой компенсации развившегося окислительного стресса. В группе В, напротив, следует отметить как тяжелое исходное повреждение биомолекул в результате прооксидантной нагрузки, так и нормальную реакцию АОС, позволяющую добиться быстрой компенсации окислительного стресса. Несмотря на значительную активацию прооксидантного звена, в группе В отмечается быстрое снижение КОМБэр (в 7 раз от начала наблюдения к 10-м суткам), отражающее адекватное функционирование и высокую реакционную способность АОС за счет сохранности ее резервов.

Необходимо отметить факт статистически значимого (p < 0.05) влияния площади раны на большую часть показателей прооксидантно-антиоксидантного баланса, за исключением ферментов (КАТ и СОД). Влияние на уровень БВХЛ, АОА, ТБЧ и количество SH-групп имеют строго определенную направленность, которая соответствует представлениям о возрастании прооксидантной нагрузки при увеличении морфологического субстрата – раневой поверхности. Напротив, активность КАТ и СОД имеет индивидуальный и вариабельный характер, поэтому не удалось обнаружить прямой зависимости их активности от площади раны.

Таким образом, показатели прооксидантно-антиоксидантного баланса в экссудате раны и в крови не могут быть охарактеризованы ни как полностью идентичные, ни как полностью антагонистичные. В процессе эволюции гнойной раны показатели АОА и БВХЛ изменяются с отчетливой взаимосвязью. Так, изменения АОА крови и АОА экссудата раны характеризуются разнонаправленностью, а изменения максимума/площади БВХЛ крови и максимума/площади БВХЛ экссудата раны – однонаправленностью. В отличие от них показатели активности ферментов в крови и в экссудате раны изменяются без определенной взаимосвязи, что отражает их индивидуальность как структурную, так и функциональную в связи с особенностями синтеза, активации и ингибирования.

Рис. 4. Динамика антиоксидантной активности экссудата раны

Рис. 5. Динамика площади экспериментальной раны

На модели гнойной раны у экспериментальных животных (кроликов) показано, что по совокупности оцениваемых показателей АОА гидрофильной мази на основе вытяжки из Fructus Sophorae japonicae значительно превосходит аналогичный показатель мази «Левомеколь» (рис. 4). Важно отметить наличие некоторого антиоксидантного эффекта применения мази «Левомеколь», что в связи с отсутствием в составе этой мази антиоксидантных компонентов следует оценивать как непрямое антиоксидантное действие, связанное с облегчением течения раневого процесса и ускорением перехода раны в фазу грануляций.

При анализе скорости снижения площади экспериментальной модели гнойной раны отмечено (рис. 5), что первые 7 суток наименьшая площадь раны отмечалась в группе экспериментальных животных, получавших местное лечение мазью «Левомеколь» (группа Л). Наиболее выраженные отличия регистрировались к 3-м суткам, когда скорость заживления раны в этой группе превышала скорость в группе экспериментальных животных, не получавших местного лечения (группа К, p < 0,05), в 1,5 раза и превышала скорость в группе экспериментальных животных, получавших лечение мазью «Софора» (группа С, p < 0,05), в 2,8 раза. К 5 суткам группа сравнения занимала последнее место по скорости заживления раны, группа Л – второе (в 3 раза быстрее группы К, p < 0,05), группа С – первое (в 5 раз быстрее группы К, p < 0,05). После пяти суток скорость заживления раны в группе Л продолжала снижаться, что в сочетании с продолжающимся нарастанием скорости заживления раны в группе С привело к выходу последней в лидеры по эффективности местного лечения. Относительно группы сравнения к 10 суткам скорость заживления раны в группе Л была ниже на 30%, а в группе С – выше в 2,8 раза (p < 0,05).

Таким образом, под действием мази с антиоксидантными свойствами прооксидантно-антиоксидантный баланс достоверно смещается в сторону антиоксидантного звена, а также удлиняется первая фаза раневого процесса и увеличивается скорость эпителизации во второй фазе раневого процесса.

ВЫВОДЫ

1. Разработанный новый комплексный подход к диагностике состояния прооксидантно-антиоксидантного баланса в раневом отделяемом (методы измерения площади раны, забора биологического материала из гнойной раны и оценки прооксидантно-антиоксидантного баланса) позволяет проводить достоверную оценку состояния прооксидантно-антиоксидантного баланса в раневом отделяемом на протяжении всего периода экссудации.
2. В процессе эволюции гнойной раны отмечены изменения показателей прооксидантно-антиоксидантной системы, характеризующие развитие окислительного стресса, в условиях которого на ранних этапах течения раневого процесса отмечаются характерные сдвиги в сторону прооксидантного звена, которые частично стабилизируются на более поздних этапах за счет снижения прооксидантной нагрузки в ране.
3. Проведенными исследованиями установлено, что наибольшую ценность для практического применения имеют биофизические и интегральные показатели, отражающие общий уровень прооксидантной нагрузки и степень истощения антиоксидантной системы, а определение этих показателей в раневом отделяемом позволяет достоверно различать характер динамики гнойной раны, фазу раневого процесса и осуществлять коррекцию хирургического лечение.
4. Установлено, что показатели прооксидантно-антиоксидантной системы крови имеют прямую статистически значимую зависимость от площади раны, что определяет степень выраженности окислительного стресса. Выявлено снижение антиокислительной активности и количества сульфгидрильных групп, а также повышение показателей хемилюминесценции и концентрации ТБК-активных продуктов при увеличении морфологического субстрата — поверхности гнойной раны.
5. При местном лечении экспериментальной гнойной раны с использованием гидрофильной мази на основе вытяжки из Fructus Sophorae japonicae с экспериментально доказанными антиоксидантными свойствами было установлено смещение прооксидантно-антиоксидантного баланса в сторону антиоксидантного звена, что детерминирует удлинение первой и укорочение второй фазы раневого процесса.

Практические рекомендации

В клинической практике целесообразно использовать показатели прооксидантно-антиоксидантного баланса, демонстрирующие отчетливую взаимосвязь при определении их в экссудате раны и в крови. Можно утверждать, что изолированное повышение прооксидантного звена в гнойной ране, как правило, свидетельствует о некупированном гнойном процессе в ней, а изолированное повышение прооксидантного звена в крови может свидетельствовать о наличии другого (недренированного) гнойного очага, сочетанное же повышение или снижение этих показателей отражает неосложненное течение раневого процесса. Контроль в динамике таких показателей позволяет осуществлять мониторинг проводимого лечения.

Список научных работ, опубликованных по теме диссертации

1. Basov A.A., Pavluchenko I.I., Fedosov S.R. Inhibition of peroxide oxidation in author's test-system by the different medicines // Internation Conference «Reactive oxygen and Nitrogen species, antioxidant and human health». Smolensk, 22–25 September 2003. - Smolensk, 2003. – P. 8–9.

* 2. Басов А.А., Павлюченко И.И., Плаксин А.М., Федосов С.Р. Использование аналогово-цифрового преобразователя в составе системы сбора и обработки информации с хемилюминотестера LT-1 // Вестник новых медицинских технологий. – 2003. – Т. 10, №4. – С. 67–68.

* 3. Басов А.А., Павлюченко И.И., Федосов С.Р. Некоторые аспекты разработки программного обеспечения для экспериментальной биохимической лаборатории // Вестник новых медицинских технологий. – 2002. – Т. 9, № 2. – С. 87.

* 4. Быков М.И., Павлюченко И.И., Басов А.А., Федосов С.Р., Луговая И.А., Моргоев А.Э. Параметры системы про-/антиоксиданты крови и гнойных ран у больных сахарным диабетом // Аллергология и иммунология. – 2006. – Т. 1, № 7. – С. 117.

* 5. Быков М.И., Павлюченко И.И., Федосов С.Р., Моргоев А.Э. Анализ эффективности использования методики «Sorption&Imprinting» с целью забора биологического материала из раны для биохимического анализа // Аллергология и иммунология. – 2007. – Т. 1, № 8. – С. 110–111.

* 6. Луговая И.А., Павлюченко И.И., Федосов С.Р., Басов А.А., Быков М.И. Активность ферментов антирадикальной защиты в эритроцитах и в раневом отделяемом у больных с осложненным течением сахарного диабета // Открытое образование. – 2006. – № 3. – С. 425–427.

7. Павлюченко И.И., Белоножкина Е.С., Павлюченко Е.В., Басов А.А., Федосов С.Р. Антиоксидантные свойства некоторых пищевых веществ и фармпрепаратов // Материалы национальной научно-практической конференции с международным участием «Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека». Смоленск, 19–22 сентября 2001. – Смоленск, 2001. – С. 13–14.

8. Павлюченко И.И., Быков И.М., Басов А.А., Федосов С.Р., Быков М.И., Гайворонская Т.В., Моргоев А.Э., Луговая И.А. Интегральные методы диагностики и мониторинга эндотоксикоза и окислительного стресса у больных с различной патологией // Материалы научно–практической конференции «Достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины». – Астрахань - Волгоград - Москва, 2006. – С. 229–232.

9. Савченко Ю.П., Павлюченко И.И., Федосов С.Р., Охременко О.С. Использование экспериментальных моделей IN VITRO для оценки антиоксидантной активности мазевых лекарственных форм, применяемых для местного лечения ран // Материалы IV Всероссийской конференции общих хирургов с международным участием «Раны и раневая инфекция». Ярославль, 14–15 мая 2007. – Ярославль, 2007. – С. 199–202.

10. Савченко Ю.П., Павлюченко И.И., Федосов С.Р., Охременко О.С. Использование экспериментальных моделей IN VIVO для оценки антиоксидантной активности мазевых лекарственных форм, применяемых для местного лечения ран // Материалы IV Всероссийской конференции общих хирургов с международным участием «Раны и раневая инфекция». Ярославль, 14–15 мая 2007. – Ярославль, 2007. – С. 202–205.

* – работа опубликована в журнале, включенном ВАК в Перечень ведущих и рецензируемых научных журналов и изданий.

Список патентов на изобретения и полезные модели

1. Пат. 2182706 Российская Федерация, МПК7 G01N 33/48. Способ контроля антиокислительной активности профилактических и лечебных антиоксидантных средств / И.И. Павлюченко, А.А. Басов, Федосов С.Р.; заявитель и патентообладатель Павлюченко И.И., Басов А.А., Федосов С.Р. – № 2003123776; заявл. 28.07.2003; опубл. 10.09.2004 // Бюл. – 2004. – №25. – 20 с.
2. Пат. 2236008 Российская Федерация, МПК А61К 33/00. Способ лабораторной диагностики окислительного стресса организма человека / И.И. Павлюченко, А.А. Басов, С.Р. Федосов; заявители и патентообладатель Павлюченко И.И., Басов А.А., Федосов С.Р. – № 2006101586/22; заявл. 19.01.2006; опубл. 27.07.2006 // Бюл. – 2006. – №21. – 2 с.
3. Свидетельство об официальной регистрации программы для ЭВМ 2006611562. Программа для регистрации сигналов хемилюминотестера ЛТ-1 / И.И. Павлюченко, С.Р. Федосов, А.А. Басов; заявитель и правообладатель Павлюченко И.И., Федосов С.Р., Басов А.А. – № 2006610783; заявл. 16.03.2006; зарег. 10.05.2006.
4. Пат. 2301626 Российская Федерация, МПК А61В 10/00. Способ определения площади дефекта кожи и контроля ее изменений / Ю.П. Савченко, С.Р. Федосов, А.М. Плаксин; заявитель и патентообладатель Савченко Ю.П., Федосов С.Р., Плаксин А.М. – № 2005135783/14; заявл. 17.11.2005; опубл. 27.06.2007 // Бюл. – 2007. – №18. – 4 с.

Список сокращений

АОА – антиокислительная активность

АОС – антиоксидантная система

БВХЛ – быстрая вспышка хемилюминесценции

КАТ – каталаза

КОМБэр – коэффициент окислительной модификации биомолекул

эритроцитов

СОД – супероксиддисмутаза

ТБК – тиобарбитуровая кислота

ТБЧ – тиобарбитуровое число

ЭВМ – электронная вычислительная машина

SH-группы – сульфгидрильные группы