Физиологическое становление тромбоцитарного гемостаза у продуктивных животных в постнатальном онтогенезе
На правах рукописи
Медведев Илья Николаевич
ФИЗИОЛОГИЧЕСКОЕ СТАНОВЛЕНИЕ ТРОМБОЦИТАРНОГО ГЕМОСТАЗА У ПРОДУКТИВНЫХ ЖИВОТНЫХ В ПОСТНАТАЛЬНОМ ОНТОГЕНЕЗЕ
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание учёной степени
доктора биологических наук
03.00.13 – физиология
Чебоксары – 2008
Работа выполнена на кафедре адаптивной физической культуры и спорта ГОУ ВПО «Курский институт социального образования (филиал) Российского государственного социального университета» и кафедре физиологии ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И.Скрябина»
Научный консультант:
доктор биологических наук,
профессор Максимов Владимир Ильич
Официальные оппоненты:
доктор биологических наук,
профессор Григорьев Василий Семенович,
доктор биологических наук,
профессор Нигматуллина Разина Рамазановна,
заслуженный деятель науки РФ, доктор биологических наук,
профессор Каталымов Леонид Лазаревич.
Ведущая организация: ГОУ ВПО «Самарский государственный университет».
Защита диссертации состоится «___» _______ 200__г. в ____ часов на заседании объединенного совета ДМ 212.300.03 при ГОУ ВПО «Чувашский государственный педагогический университет имени И.Я. Яковлева» (428800, г.Чебоксары, ул.К.Маркса, 38, ГОУ ВПО «ЧГПУ им. И.Я. Яковлева» тел. (8352) 62-02-83, e-mail: [email protected]).
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «ЧГПУ им. И.Я. Яковлева» по адресу: 428800, г.Чебоксары, ул.К.Маркса, 38.
Автореферат разослан «___» ___________ 200 г.
Учёный секретарь
объединенного совета,
доктор биологических наук В.В. Алексеев
Список принятых сокращений
АА – арахидоновая кислота
АГП – ацилгидроперекиси
АДФ– аденозиндифосфат
АОА – антиоксидантная активность
АТ – агрегация тромбоцитов
АТФ – аденозинтрифосфат
БАВ – биологически активные вещества
БТП – богатая тромбоцитами плазма
ВАТ – внутрисосудистая активность тромбоцитов
ЖКТ – желудочно-кишечный тракт
ИТА – индекс тромбоцитарной активности
КАП – коллаген-аспириновая проба
КИП – коллаген-имидазольная проба
ОФЛ – общие фосфолипиды
ПОЛ – перекисное окисление липидов
СМ – средние молекулы
СОД – супероксиддисмутаза
СРО – свободно радикальное окисление
ТБК – тиобарбитуровая кислота
ТП – тромбопластин
ТС – тромбоксансинтетаза
Тх А2 – тромбоксан А2
ФНП – функциональные нарушения пищеварения
ХС – холестерин
цАМФ – циклический аденозинмонофосфат
ЦО – циклооксигеназа
ЧДД – частота дыхательных движений
ЧСС – частота сердечных сокращений
1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность проблемы. До сих пор знания особенностей физиологии сельскохозяйственных животных в раннем онтогенезе недостаточны. Остается актуальным эмпирический подход к решению проблем, касающихся различных сторон развития системы крови всех видов сельскохозяйственных животных в онтогенезе. Цикл индивидуального развития организма определяется наследственностью, которая в полной мере реализуется лишь, если на каждом этапе его развития будут обеспечены специфичные и обязательные для него условия среды [Лысов В.Ф., Максимов В.И., 2003; Шуканов А.А. и соавт., 2004].
Известно, что функциональная активность тромбоцитарного гемостаза во многом определяет агрегатное состояние крови. В зависимости от степени отклонений условий среды от требующихся в раннем онтогенезе, а также выраженности нарушений обмена веществ имеет место либо адаптация организма, либо возникновение разнообразных форм дисфункций. Большое значение в становлении систем организма оказывают особенности обмена веществ у разных видов животных, в частности у моногастричных и полигастричных. Важным достижением биологии и, в частности физиологии, можно считать введение в практику различных средств и приемов восстановления нарушенного хода физиологических процессов при различных состояниях у животных. Использование их не всегда приводит к эффективному результату, и успех или неуспех коррекции зависит в значительной степени от состояния местной и общей реактивности организма, которые изменяются в ходе онтогенеза, формирования его структур и становления функций [Карпуть, И.М., 1989; Лысов В.Ф., Максимов В.И., 2003].
В общей структуре отклонений от физиологического состояния у животных наиболее уязвимой является фаза новорожденности. На этом этапе развития у телят часто могут возникать функциональные нарушения в системе пищеварения, а у поросят нередко возникает анемия. Функциональные нарушения пищеварения у телят и анемия у поросят ведут к ряду общих изменений в организме во многом через формирование дисфункций тромбоцитов, обуславливающих нарушение реологии крови, возникновение гипоксии и нарушениям сердечной деятельности, обеспечивая снижение резистентности к респираторным болезням, интоксикации, нарушениям обмена веществ и др. [Зинкевич А.М., 1985; Кондрахин И.П., 2003].
В тоже время, динамика активности тромбоцитарного гемостаза и тонких механизмов его реализации у телят и поросят в течение раннего онтогенеза, у телят с функциональными нарушениями пищеварения и поросят с анемией в фазу новорожденности изучены недостаточно: не раскрыты причины возникновения и пути формирования у них тромбоцитопатии; не разработаны эффективные и научно-обоснованные подходы ее коррекции; не выяснено влияние различных индукторов и их сочетаний на агрегационные функции кровяных пластинок, имеющее место в реальных условиях кровотока; не оценена морфологически степень активации тромбоцитов в просвете сосудов, не выяснено состояние ПОЛ тромбоцитов и активность антиокислительных ферментов кровяных пластинок; не изучено состояние тромбопластинообразования, липидный состав тромбоцитарных мембран и особенности обмена арахидоновой кислоты в кровяных пластинках; не разработана тактика мероприятий, направленных одновременно на восстановление гемостатических нарушений с оптимизацией микроциркуляции, нормализацией обменных процессов и коррекцию функциональных нарушений пищеварения у телят и анемии у поросят в фазу новорожденности.
В связи с этим вполне очевидна актуальность и целесообразность изучения становления тромбоцитарного гемостаза у новорожденных телят и поросят в постнатальном онтогенезе. Исходя из этого были сформулированы цель и задачи настоящего исследования.
Цель исследования – выявить особенности физиологического становления тромбоцитарного гемостаза в отдельные фазы раннего онтогенеза у телят и поросят, его изменения при наиболее часто возникающих отклонениях от гомеостаза в фазу новорожденности с поиском эффективной коррекции активности тромбоцитов у телят с функциональными нарушениями пищеварения и поросят при анемии.
Задачи исследования: 1. Исследовать состояние тромбоцитарных функций, содержание средних молекул, активность ПОЛ, уровень антиоксидантной защиты плазмы крови и тромбоцитов, липидный состав кровяных пластинок и протромботический потенциал первичного гемостаза у здоровых телят в раннем онтогенезе. 2. Определить особенности тромбоцитарных функций, активность ПОЛ, антиоксидантной защиты плазмы крови и тромбоцитов, состояние липидного состава кровяных пластинок и протромботический потенциал первичного гемостаза у здоровых поросят в раннем онтогенезе. 3. Провести сравнительный анализ активности тромбоцитов у телят и поросят в раннем постнатальном онтогенезе. 4. Определить динамику содержания средних молекул, активность ПОЛ и состояние антиоксидантной защиты плазмы крови и тромбоцитов, изменения липидного состава кровяных пластинок и уровень активности тромбоцитов у новорожденных телят с риском развития и возникшими функциональными нарушениями пищеварения. 5. Определить степень влияния различных подходов к коррекции тромбоцитарных нарушений и протромботического потенциала первичного гемостаза у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения (традиционная коррекция, сорбент «Экос», «Биопаг-Д», «Фосфопаг», сочетание «Фосфопага» и «Экоса» и сочетание «Фосфопага», «Экоса» и кальция глюконата). 6. Разработать и апробировать способ профилактики тромбоцитарных нарушений у новорожденных телят с риском развития функциональных нарушений пищеварения. 7. Установить особенности активности ПОЛ и состояния антиоксидантной защиты плазмы крови и тромбоцитов, изменения липидного состава кровяных пластинок, сопутствующих развитию тромбоцитарных дисфункций у новорожденных поросят с анемией. 8. Оценить активность тромбоцитарных функций и уровень протромботического потенциала первичного гемостаза у новорожденных поросят с анемией и на фоне изолированного применения препарата железа (ферроглюкин) и его сочетаний с фоспренилом и гамавитом.
Научная новизна исследования состоит в том, что впервые:
1. Определены видовые особенности состояния тромбоцитарного гемостаза, антиоксидантной защиты тромбоцитов, липидного состава их мембран, активности ПОЛ и протромботического потенциала первичного гемостаза у телят и поросят в раннем онтогенезе. 2. Выявлены особенности тромбоцитарного гемостаза, антиоксидантной защиты тромбоцитов, липидного состава их мембран, активности ПОЛ и протромботического потенциала первичного гемостаза у физиологически незрелых новорожденных телят до возникновения функциональных нарушений пищеварения и после их развития, содержания в плазме крови средних молекул, активности ПОЛ плазмы, что позволяет считать эти изменения ранними предвестниками развития функциональных нарушений пищеварения и дисфункций тромбоцитов с усилением их активности и может служить основанием для проведения мер профилактики, направленных на нормализацию свойств кровяных пластинок. 3. Установлена зависимость активности тромбоцитарного гемостаза, антиоксидантной защиты тромбоцитов, липидного состава их мембран, активности ПОЛ и протромботического потенциала первичного гемостаза у физиологически незрелых новорожденных поросят с дефицитом железа. 4. Найден способ коррекции и профилактики функциональных нарушений пищеварения у новорожденных телят, нормализующий активность тромбоцитов и их протромботический потенциал, посредством сочетания «Фосфопага», энтеросорбента «Экос» и кальция глюконата. 5. Определено, что у новорожденных поросят с анемией при применении препарата железа (ферроглюкин) в сочетании с фоспренилом и гамавитом нормализуется активность тромбоцитов и их протромботический потенциал.
Научно-практическая значимость работы. Выполненное исследование содержит новое решение актуальной научной проблемы – оценки специфики становления тромбоцитарного гемостаза у телят и поросят в раннем постнатальном онтогенезе и при наиболее часто возникающих у них отклонениях от гомеостаза в фазу новорожденности.
Установленные особенности становления морфофизиологических параметров тромбоцитарного гемостаза в различные фазы раннего постнатального онтогенеза и при наиболее часто возникающих отклонениях от гомеостаза в фазу новорожденности у телят и поросят необходимы для решения практических задач по созданию нормальных условий содержания животных, обеспечивающих полное проявление их генетических потенциальных возможностей.
Основные положения, выносимые на защиту:
- Для каждой фазы раннего постнатального онтогенеза у крупного рогатого скота и свиней свойственна определенная активность тромбоцитарного гемостаза.
- Активность тромбоцитарного гемостаза у разных видов животных имеет свои особенности.
- Развивающиеся функциональные нарушения пищеварения у телят и дефицит железа у поросят в фазу новорожденности вызывают характерные сдвиги тромбоцитарного гемостаза.
- Дисфункции тромбоцитарного гемостаза в фазу новорожденности возможно корректировать у телят с функциональными нарушениями пищеварения с помощью «Фосфопага», «Экоса» и глюконата кальция, а у поросят с анемией сочетанием ферроглюкина с гамавитом.
Реализация результатов исследования. Полученные данные, научные положения и выводы внедрены в работу ветеринарной службы Фатежского, Советского, Суджанского, Октябрьского, Золотухинского, Курского, Железногорского, Обоянского, Конышовского районов Курской области РФ и научно-исследовательскую работу Всероссийского НИВИ патологии, фармакологии и терапии РАСХН.
Апробация. Основные материалы диссертации доложены и обсуждены на: Международной научно-практической конференции «Экология, окружающая среда и здоровье населения Центрального Черноземья (2005), X съезде биохимиков Украины (2006), научной конференции с международным участием «Научные исследования высшей школы» (2006), IV научной конференции с международным участием «Проблемы агропромышленного комплекса (2007), XI Международной научно-производственной конференции «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения» (2007), V Международной конференции «Современные наукоемкие технологии» (2007), 19 Международной межвузовской научно-практической конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии» (2007), V научной конференции с международным участием «Гомеостаз и эндоэкология» (2007), IV научной конференции с международным участием «Фундаментальные и прикладные проблемы медицины и биологии» (2007), научной конференции с международным участием «Научные исследования высшей школы по приоритетным направлениям науки и техники» (2007), Международной научно-практической конференции «Теоретические и прикладные проблемы социально-правовых, медико-биологических, технико-экономических сфер жизни общества (2007, 2008), Научном симпозиуме специалистов, молодых ученых и студентов «Адаптивные реакции в биологии и медицине» в рамках Международной научно-практической конференции «Теоретические и прикладные проблемы социально-правовых, медико-биологических и технико-экономических сфер жизни общества» (2007, 2008), первом международном конгрессе ветеринарных фармакологов «Эффективные и безопасные лекарственные средства» посвященного 200-летию высшего ветеринарного образования и Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины (2008), на расширенном заседании кафедры адаптивной физической культуры и спорта КИСО (филиал) РГСУ с привлечением сотрудников кафедры физиологии Курской государственной сельскохозяйственной академии им. И.И. Иванова, Курского государственного медицинского университета, Белгородского государственного университета, Белгородской сельскохозяйственной академии и Всероссийского НИВИ патологии, фармакологии и терапии РАСХН, Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина 17 октября 2008г.
Публикации. По теме диссертации опубликовано 82 работы, в т.ч. 3 монографии, 17 статей в рецензируемых изданиях, рекомендованных ВАК РФ, получено 10 патентов на изобретение и 2 решения о выдаче патента на изобретение.
Структура и объём работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов собственных исследований, обсуждения, заключения, выводов, практических рекомендаций, указателя использованной литературы, содержащей отечественных и зарубежных источников, и двух приложений, полно раскрывающих суть примененных лечебных подходов. Диссертация изложена на 396 страницах машинописи, включает 49 таблиц и 30 рисунков.
2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
2.1. Характеристика животных
Исследования, положенные в основу диссертации, проведены в 2004-2008гг. на крупном рогатом скоте и свиньях хозяйств Курской области, лабораторные анализы выполнялись у телят и поросят, находившихся под наблюдением на базе Центра гемостазиопатий Курской областной клинической станции переливания крови. В исследование включены 449 здоровых новорожденных телят симментальской и черно-пестрой породы в день отела от здоровых коров 1-2 отела с нормально протекавшей беременностью, находившихся на рациональном кормлении [Калашников А.П. и др., 2003]. Телята осматривались и обследовались за период новорожденности 5 раз (1-2 сут., 3-4, 5-6, 7-8, 9-10 сут.). В случае возникновения признаков ФНП у теленка не позднее, чем через 0,5 сут. после их начала, определялись все оцениваемые показатели, и применялся в течение последующих 10 сут. один из используемых в работе видов коррекции с оценкой тех же показателей по ее завершению. Общее число телят, у которых за период новорожденности развились ФНП, составило 153 (36,7%), при этом 267 (63,3%) остались здоровыми, составив группу контроля. В исследование включены 29 здоровых новорожденных телят с риском облигатного развития ФНП, которым был проведен курс успешной профилактической коррекции. Из новорожденных телят с развившимися ФНП 146 (95,4%) имели признаки физиологической незрелости (масса при рождении менее 20 кг, т.е. менее 7% массы тела матери, длина теленка менее 70 см, наличие менее 4 резцов и менее 12 коренных зубов, пуповина у них отпадала не менее через 12 сут. жизни). Содержание новорожденных животных осуществлялось в стандартных условиях телятника при нередко избыточной выпойке молозивом. Новорожденные телята были подразделены на 8 групп: 1-я – здоровые (контроль) 267 голов, 2-7-я – новорожденные телята с ФНП разделенные с учетом способа коррекции тромбоцитарных нарушений, их количество в группах составило соответственно 25(16,4%), 25 (16,4%), 25 (16,4%) 25 (16,4%), 27 (17,4%) и 26 (17,0%). Во 2-й группе телят коррекцию состояния производили с помощью традиционного для хозяйств подхода (голод на 10-12 ч. с последующим назначением небольших доз молозива -1/4 от обычного количества, 5-6 раз в сут. с постепенным доведением объема молозива до нормы; за 15 мин до выпаивания телятам давали 50,0 мл натурального желудочного сока, разбавленного 50,0 мл теплой воды) с наблюдением в течение 10 сут.; в 3-ей – включения в схему выпаивания вечером включали в виде водной взвеси гидроалюмосиликатный сорбент – «Экос» (производство Белгородского государственного университета) 150мг/кг живой массы в течение 10 сут. на ночь с целью снижения сорбции питательных веществ из рациона; в 4-ой - выпаивания утром 0,01% раствора полигексаметиленгуанидин хлорида («Биопаг-Д», производства Института эколого-технологических проблем г. Москва) по 100,0 мл в сутки в течении 10 сут.; в 5-ой - выпаивания утром полигексаметиленгуанидин фосфата («Фосфопаг», производства Института эколого-технологических проблем г. Москва) в растворе 0,01% включаясь в выпаивание по 100,0 мл в сутки в течении 10 сут.; в 6-ой - применения в течение 10 сут. сочетания «Фосфопага» и «Экос» с распределением их в течение суток следующим образом: 0,01% «Фосфопага» 100,0 в утренние часы, а «Экос» 150мг/кг на ночь для исключения сорбции «Экосом» «Фосфопага»; в 7-ой - применения в течение 10 суток сочетания «Фосфопага», глюконата кальция и «Экоса» с распределением их с течение суток: 0,01% «Фосфопаг» 100,0 мл утром, 10% глюконат кальция 10,0 мл в обед и «Экос» 150мг/кг вечером; в 8-й - проведения профилактической коррекции у 29 здоровых новорожденных телят, имеющих риск облигатного развития ФНП, обследованных в суточном возрасте. С целью профилактики ФНП и нивелирования зарегистрированных у них отклонений, наличие которых позволяло прогнозировать возникновения ФНП сразу же после обследования, проводился 8-сут. превентивный курс коррекции: 0,01% «Фосфопаг» 100,0 мл утром, 10% глюконат кальция 10,0 мл в обед и «Экос» 150мг/кг вечером.
В исследование также включены 22 здоровых теленка 30 сут. возраста, 21 - 3 мес. и 23 - годовалого возраста, содержащихся в стандартных условиях и находящихся на достаточном и полноценном рационе питания.
Проведены исследования 149 новорожденных поросят, 24 здоровых 20- сут. возраста, 23-40-сут. и 22 здоровых животных годовалого возраста породы крупная белая. Новорожденные поросята были разделены на 4 группы: 1-я – здоровые (контроль) – 27, 2-4-я – поросята с анемией (121), в т.ч. хряков 63 (52,1%) и 58 (47,9%) свинок с анемией 1-2-сут. возраста, взятые в исследование сразу после установления у них анемии по общему состоянию животного и лабораторным показателям. Анемия во всех случаях была железодефицитной – уровень железа в крови животных в среднем составлял 13,6±0,45 мкмоль/л, гемоглобин - 84,4±0,90г/л, количество эритроцитов крови - 4,21±0,15х1012/л. Поросята с анемией получены в зимний период от свиноматок 1-2 опороса, находившихся во время беременности на недостаточном и нерациональном питании. Случайным образом новорожденные поросята с анемией были подразделены на 3 равные группы, соответственно по 38 (31,4%), 42 (34,7%) и 41 (33,9%) животных. Коррекция анемии во 2-й группе поросят (38 животных) осуществлялась ферроглюкином по 150 мг (2мл) внутримышечно, двукратно с интервалом между инъекциями 10 сут.; в 3-ей (42 поросенка) - назначался ферроглюкин по 150мг (2мл) внутримышечно, двукратно с интервалом 10 сут и фоспренил 0,05мл/кг внутримышечно, двукратно в разных шприцах в разные точки, первый раз одновременно с первой инъекцией препарата железа и в той же дозе через пять сут. после его первой инъекции; в 4-ой (41 животное) - ферроглюкином 150мг (2мл) внутримышечно, двукратно с интервалом 10 сут. и гамавитом 0,01 мг/кг внутримышечно один раз в сут., пять суток, начиная с первой инъекции ферроглюкина.
2.2.Методы исследования
Зоогигиенические параметры содержания животных соответствовали нормативам. Физиологическую зрелость новорожденных животных определяли по системе интегрального показателя, приведенных в работах В.Ф. Лысова (1977), А.И. Кузнецова, В.Н. Лузиной, В.Г. Лукошкиной (1984).
Для решения поставленных в работе задач проведен морфо-биологический анализ крови, который включал определение эритроцитов [Лысов В.Ф., Ипполитова Т.В., Максимов В.И., Шевелев Н.М., 2004], гемоглобина [Битюков И.П. и др., 1990], гематокритной величины [И.Тодоров, 1963], общего белка в сыворотке крови [Колб, В.Г. и др., 1982]. Кроме того в протокол исследования новорожденных поросят с анемией включено определение содержания в крови сидероцитов, нормобластов и ретикулоцитов, среднего содержания гемоглобина (СГЭ) и средней его концентрации в 1 эритроците (СКЭ), среднего объема (СОЭ) и диаметра (СДЭ) этих клеток крови, концентрации в сыворотке крови железа (СЖ), общей (ОЖСС) и латентной (ЛЖСС) железосвязывающей способности сыворотки крови, коэффициента насыщения трансферрина (ТФ) железом (КНТ), уровня ТФ в сыворотке (СЖ - количества железа, связанного ТФ, ОЖСС – количество железа, которое может быть связано ТФ, ЛЖСС – разницы между ОЖСС и СЖ, КНТ – процента ТФ, связанного с железом, вычисляющегося путем деления СЖ на ОЖСС) [Камышников В.С., 2000].
Активность ПОЛ в плазме оценивали по содержанию ТБК-активных продуктов набором фирмы „Агат-Мед”и ацилгидроперекисей [Гаврилов В.Б. и др., 1983]. Для оценки антиокислительного потенциала жидкой части крови определяли ее антиокислительную активность по Волчегорскому И.А. и соавт. (2000). В плазме оценивали уровень средних молекул по Габриелян Н.Г., Липатова В.И. и др. (1985) при 280нм и 254нм [ Габриэлян Н.И. и др., 1985].
Состояние внутритромбоцитарного ПОЛ определяли по концентрации базального уровня МДА в реакции восстановления тиобарбитуровой кислотой в отмытых и ресуспендированных тромбоцитах на основе принципа метода Shmith J.B. et al. (1976) в модификации Кубатиева, А.А., Андреева С.В. (1979) и содержанию ацилгидроперекисей [Гаврилов В.Б. и др., 1983]. В отмытых и ресуспендированных тромбоцитах определяли содержание средних молекул по Габриелян Н.Г., Липатова В.И. и др. (1985) при 280нм и 254нм [Габриэлян Н.И. и др., 1985]. В отмытых и ресуспендированных тромбоцитах [Ястребов Г.Н., 1985] количественно оценены уровни общего холестерола энзиматическим колориметрическим методом набором фирмы „Витал Диагностикум” и общих фосфолипидов по содержанию в них фосфора [Колб В.Г., 1982] с последующим расчетом отношения ОХС/ОФЛ в тромбоцитах. Активность внутритромбоцитарных антиоксидантных ферментов устанавливали для каталазы и супероксиддисмутазы [Чевари С. и др., 1991].
Оценку состояния системы тромбоцитарного гемостаза производили по ряду параметров: подсчитывали количество тромбоцитов в капиллярной крови в камере Горяева; агрегационную активность тромбоцитов оценивали визуальным микрометодом по А.С.Шитиковой (1999) с использованием в качестве индукторов АДФ (0,510-4 М.), коллагена (разведение 1:2 основной суспензии), тромбина (0,125ед/мл.), ристомицина (0,8 мг/мл.) (НПО „Ренам”), адреналина (5,010-6 М. Завод Гедеон Рихтер), а также сочетания АДФ+адреналин, АДФ+коллаген и коллаген+адреналин в приведенных концентрациях. Продукты лабилизации тромбоцитарных фосфолипидов – активаторов свертывания (Ф3 –тромбоцитов) оценивали по методу Е.Д. Еремина (1974) с вычислением индекса тромбоцитарной активности. Активность и время образования тромбоцитарного тромбопластина выявляли по методу Biggs R., Douglas A.S., Macfarlane R.G. (1953). Для косвенной оценки обмена эндогенной арахидоновой кислоты в тромбоцитах, а также активности в них циклооксигеназы (ЦО) и тромбоксансинтетазы (ТС) использованы три пробы переноса по методу Ермолаевой Т.А. и соавт. (1992) с регистрацией агрегации тромбоцитов на фотоэлектроколориметре. Морфологическое определение внутрисосудистой активности тромбоцитов производили с использованием фазовоконтрастного микроскопа по методу Шитиковой А.С. и соавт. (1997).
Кровь для биохимического исследования у животных брали в утренние часы из вены после ночного перерыва приема корма.
Статистическую обработку результатов проводили с использованием критерия (t) Стьюдента, корреляционного и системного многофакторного анализа [Бредерфорд Хилл А., 1958; Углова М.В. и др., 1982].
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Особенности становления тромбоцитарных функций у телят в раннем постнатальном онтогенезе
Оценка тромбоцитарного гемостаза у здоровых новорожденных телят выявила достоверную динамику оцениваемых функций кровяных пластинок при сохранении содержания тромбоцитов в кровотоке животных в границах нормы в течение всего раннего онтогенеза.
ИТА, являющийся высоко значимым показателем при оценке тромбоцитарной стимуляции процесса свертывания крови, составлял в первые двое суток жизни телят 25,3±0,05% и оставался на данном уровне в течение всей новорожденности. Это указывало на стабильность в течение фазы молозивного питания в кровяных пластинках здоровых телят уровня продуктов лабилизации тромбоцитарных фосфолипидов – активаторов свертывания крови. У здоровых телят было установлено постоянство активности тромбопластина за всю фазу новорожденности, составляя в среднем 14,0±0,05с. при времени его образования 2,40±0,01мин. При переходе телят к молочному и молочно-растительному питанию ИТА испытывал тенденцию к нарастанию, достигая достоверного уровня к фазе растительного питания (27,4±0,07%). Вместе с тем, у здоровых телят по завершению фазы новорожденности отмечено достоверное нарастание активности тромбопластина, составлявшей к году жизни 12,9±0,06с. при сокращении времени его образования до 2,28±0,11мин.
Одним из механизмов стабилизации активности АТ у новорожденных телят является постоянный уровень активности в тромбоцитах ЦО и ТС – ферментов метаболизма АА, синтезирующих ТхА2. При этом, в более позднем возрасте у телят тромбоксанообразование неуклонно увеличивалось, что во многом способствовало ускорению АТ.
Стабильность АТ в фазу новорожденности сменялась ее нарастанием в последующие фазы раннего онтогенеза.
У новорожденных в 1-2 суточном возрасте время развития АТ под влиянием коллагена составляло 29,4±0,26с., находясь в последующие сроки наблюдения на аналогичном уровне, составляя в среднем за фазу новорожденности 30,0±0,12с. Аналогичная динамика АТ у здоровых новорожденных телят отмечена под влиянием АДФ (в среднем 39,0±0,28с.) и ристомицина (в среднем 41,0±0,26с.). В более поздние сроки развивалась тромбиновая и адреналиновая АТ также при отсутствии их достоверной динамики в течение фазы новорожденности, составляя в среднем за фазу 54,0±0,2с. и 97,0±0,45 с., соответственно. У новорожденных телят отмечалась также стабильность времени развития АТ и на фоне сочетания индукторов, составлявшем в среднем: для АДФ+адреналин – 36,0±0,50с., для АДФ+коллаген – 27,0±0,09 с., для адреналин+коллаген – 30,1±0,12с.
Сочетание двух индукторов агрегации, имеющих место в реальных условиях кровотока у животных, позволило в большей степени приблизить наше представление об АТ in vivo у здоровых животных к реально возникающему в их кровяном русле агрегационному процессу тромбоцитов в течение всей фазы новорожденности.
В более старшем возрасте у телят отмечается ускорение АТ с сокращением времени, необходимого для ее развития по мере смены фаз раннего онтогенеза. Так, АТ под влиянием коллагена к годовалому возрасту составляла 26,5±0,03с. Аналогичную динамику претерпела к первому году жизни АТ у здоровых животных под влиянием АДФ (35,4±0,02с.) и ристомицина (35,6±0,06с.).
Ускоряясь по мере взросления тромбиновая и адреналиновая АТ, постепенно ускоряющаяся, достигала в фазу растительного питания 47,2±0,03с. и 90,1±0,04 с., соответственно. При сочетанном использовании индукторов отмечена аналогичная динамика с ускорением АТ, подчеркивающая выявленную закономерность при их изолированном применении. Так, к году жизни АТ по сравнению с новорожденностью ускорялась для АДФ+адреналина на 8,4%, для АДФ+коллагена на 9,7%, для адреналин+коллагена на 20,4%.
Найденные закономерности динамики АТ в раннем онтогенезе телят были подтверждены состоянием внутрисосудистой активности тромбоцитов во все сроки наблюдения.
Уровень дискоцитов в крови у здоровых новорожденных телят в 1-2 сутки жизни составил 76,1±0,03%, достоверно не меняясь на протяжении всей фазы новорожденности (в среднем - 82,0±0,16%). Количество диско-эхиноцитов в их кровотоке (в среднем 10,3±0,1%), а также содержание сфероцитов, сферо-эхиноцитов и биполярных форм тромбоцитов, также оставалось стабильным на протяжении всей фазы новорожденности. Вследствие этого сумма активных форм тромбоцитов также не претерпела достоверных изменений, составляя в среднем 18,0±0,2%. В кровотоке новорожденных телят уровни свободно циркулирующих малых и больших агрегатов тромбоцитов не имели достоверной динамики, составляя в начале фазы новорожденности 3,4±0,06 и 0,15±0,03 на 100 свободно лежащих тромбоцитов и в его конце 3,8±0,06 и 0,13±0,02 на 100 свободно лежащих тромбоцитов, соответственно. Количество тромбоцитов, вовлеченных в процесс агрегатообразования, у здоровых телят в начале фазы новорожденности составило 5,3±0,08% и 5,3±0,02% в ее конце. Эти данные говорят о достоверной стабильности ВАТ in vivo в течение всей фазы новорожденности у здоровых телят, обеспечивая у них оптимальную микроциркуляцию во время адаптации к внеутробной жизни.
По завершении фазы новорожденности у телят отмечено уменьшение содержания дискоидных форм тромбоцитов с небольшим, но достоверным нарастанием суммы активных форм кровяных пластинок (к году жизни 25,8%) за счет увеличения диско-эхиноцитов, сфероцитов, сферо-эхиноцитов и биполярных форм тромбоцитов. Одновременно с этим достоверно нарастало число свободно циркулирующих малых и больших агрегатов тромбоцитов, увеличившись к году жизни в 1,23 и 3,83 раза, соответственно. Количество тромбоцитов, вовлеченных в процесс агрегатообразования, у здоровых телят к году жизни также возрос на 38,0%, что говорит о нарастании ВАТ in vivo по мере созревания организма теленка, обеспечивая у них оптимальную микроциркуляцию во время становления функций органов и систем организма.
Таким образом, стабильность активности кровяных пластинок у здоровых новорожденных телят обуславливает постоянство у них ВАТ, оптимальный уровень реологии крови и микроциркуляции в тканях, сменяясь ее нарастанием в последующие фазы раннего онтогенеза, необходимом для нормального роста и развития животных.
В протромботическом потенциале первичного гемостаза у здоровых новорожденных телят наиболее весомыми были время развития АТ со всеми индукторами и их сочетаниями (Рi от 362,83 до 134,17). Достаточно высокие коэффициенты влияния в ТП принадлежали активности ПОЛ в тромбоцитах, их антиоксидантной защиты, содержанию в крови телят агрегатов и уровню вовлеченности в них тромбоцитов. Остальные параметры гемостаза были менее весомы, значимость их существенно не различалась между собой, играя в ТП скромную роль. Взвешенная средняя протромботического потенциала, характеризующая состояние протромботических влияний в первичном гемостазе, у здоровых новорожденных телят составила ХBi ТП = 0,007.
В протромботическом потенциале первичного гемостаза у здоровых телят в раннем онтогенезе наиболее весомыми сохранились время развития АТ со всеми индукторами и их сочетаниями, увеличив величину весовых коэффициентов их влияния (Рi от 381,62 до 152,16). Высокими сохранились коэффициенты влияния уровней ПОЛ, антиоксидантной защиты тромбоцитов, агрегатообразования и вовлеченности в них тромбоцитов при нарастании их абсолютных величин. Остальные параметры гемостаза были по-прежнему менее весомы. Взвешенная средняя протромботического потенциала годовалых телят составила ХBi ТП = 0,019.
Таким образом, у полностью здоровых телят в раннем онтогенезе отмечается рост проагрегантных влияний в первичном гемостазе, что способствует поддержанию гомеостаза внутренней среды организма у них на оптимальном уровне в ответ на меняющиеся условия внешней среды в процессе роста и развития теленка.
3.2. Особенности становления тромбоцитарных функций у поросят в раннем постнатальном онтогенезе
У здоровых поросят в кровотоке в раннем онтогенезе количество тромбоцитов было нормальным.
ИТА, характеризующий степень лабилизации тромбоцитарных фосфолипидов и участвующий в процессе свертывания крови, составлял в первые сутки жизни поросят 24,8±0,07%, испытывая в начале тенденцию к увеличению, а с 4 суток новорожденности достоверное повышение, усилившись к концу фазы молозивного питания на 13,7%. В течение фазы новорожденности у поросят была установлена легкая тенденция к усилению активности тромбопластинообразования, составляя к ее концу 14,4±0,01с. при времени его образования 2,42±0,07мин.
По завершению фазы новорожденности ИТА достоверно нарастал от исследования к исследованию, усилившись к 20 сут. жизни на 3,0%, к 40 сут. жизни на 16,2% и к 1 году жизни на 27,8% по сравнению с фазой новорожденности. Это указывало на повышение степени лабильности тромбоцитарных фосфолипидов, обуславливающих рост тромбопластиногенерации на протяжении всего раннего онтогенеза (к концу года жизни активность тромбопластина составляла 12,8±0,06с. при времени его образования 2,28±0,04мин.).
АТ с рядом индукторов и их сочетаний в течение раннего онтогенеза у поросят характеризовалась постепенным ускорением вследствие влияния среды на организм поросенка.
У обследованных здоровых животных отмечалось в течение фазы новорожденности ускорение АТ, особенно под влиянием коллагена с 35,6±0,07 с. в 1-е сутки до 32,5±0,05 с. на 5-е. Несколько медленнее АТ развивалась у поросят под влиянием АДФ и ристомицина, испытывая при этом аналогичную тенденцию к ускорению, а с 3-х суток жизни достоверное усиление агрегационного процесса. АТ с Н2О2 у здоровых новорожденных поросят в первые сутки жизни развивалась за 47,9±0,07 с. с постепенным сокращением ее времени до 46,7±0,02 с. на 5-е сутки. Тромбиновая и адреналиновая АТ также претерпевала туже динамику, в среднем за новорожденность составляя 57,7±0,07 с. и 99,5±0,03 с., соответственно. Оценка АТ при сочетании двух индукторов агрегации позволяла приблизить представление об АТ к реально возникающему в кровяном русле здоровых новорожденных поросят in vivo агрегационному процессу тромбоцитов. Установлено, что в течение фазы новорожденности время развития АТ на фоне сочетания индукторов также сокращалась, достигая на 3-и сутки уровня достоверности и составляя в среднем за новорожденность АДФ+адреналин – 35,4±0,04с., АДФ+коллаген – 24,8±0,06 с., адреналин+коллаген – 27,6±0,11с.
По завершению фазы новорожденности у поросят отмечено дополнительное ускорение агрегационного процесса под влиянием всех индукторов и их сочетаний. По прежнему наиболее активным индуктором был коллаген, АТ с которым к году жизни достигла 26,8±0,02 с., увеличившись на 26,2%. Несколько медленнее АТ развивалась у годовалых поросят под влиянием АДФ, ристомицина и Н2О2, ускорившись за первый год жизни более чем на 20%. АТ под действием тромбина и адреналина также ускорилась на 20,4% и 10,2%. АТ при сочетании двух индукторов агрегации испытала аналогичную динамику, ускорившись на 23,7% для АДФ+адреналин, на 17,5% для АДФ+коллаген и на 22,7% для адреналин+коллаген.
У здоровых поросят к концу новорожденности косвенно зарегистрировано усиление синтеза в тромбоцитах ТхА2 на 5,5%, усиливающееся к году жизни дополнительно на 41,8% по причине неуклонного повышения активности за ранний онтогенез ферментов ее превращения – ЦО (на 77,6±0,07%) и ТС на 18,6%.
В крови здоровых новорожденных поросят дискоцитов в 1-е сутки жизни содержалось 83,1±0,24% с последующей слабой тенденцией к снижению их уровня к концу фазы новорожденности до 82,0±0,16%. При этом, количество диско-эхиноцитов у них увеличивалось, составляя к концу фазы молозивного питания 12,6±0,23%. Содержание сфероцитов, сферо-эхиноцитов и биполярных форм тромбоцитов также испытывало динамику к нарастанию, достигая к 5-м суткам жизни 2,6±0,07%, 1,7±0,01% и 1,1±0,07%, соответственно. За счет этого сумма активных форм тромбоцитов у здоровых животных нарастала за фазу новорожденности на 6,5%. Уровень малых и больших агрегатов в кровотоке здоровых поросят испытывал сначала тенденцию к повышению, а с 3-х суток жизни достоверное увеличение, составляя к концу новорожденности 3,17±0,06 и 0,16±0,06 на 100 свободнолежащих тромбоцитов, соответственно, причем количество тромбоцитов в агрегатах у них нарастало за новорожденность на 10,6%, что указывало на повышение ВАТ у здоровых поросят в первую фазу раннего онтогенеза.
В последующие фазы раннего онтогенеза содержание дискоцитов продолжало снижаться, составляя к году жизни 75,5±0,09%. При этом, количество диско-эхиноцитов у них постепенно увеличивалось, составляя к концу года жизни 17,1±0,04%. Содержание сфероцитов, сферо-эхиноцитов и биполярных форм тромбоцитов также испытывало динамику к нарастанию, увеличившись за ранний онтогенез по сравнению с фазой новорожденности на 40,0%, 73,3% и 44,4%, соответственно. За счет этого сумма активных форм тромбоцитов у здоровых животных нарастала после фазы новорожденности еще на 40,8% с увеличением уровней малых и больших агрегатов в течение раннего онтогенеза в 1,2 и в 3,2 раза, соответственно, при достижении вовлеченности тромбоцитов в агрегаты 8,4±0,07%.
На основе полученных данных можно заключить, что у здоровых поросят в течение раннего онтогенеза отмечается постепенное повышение ВАТ, что является приспособительной реакцией к внеутробному существованию и средовым воздействиям.
Полученные разнонаправленные показатели тромбоцитарных функций, неоднозначно влияющих на первичный гемостаз в целом, требовали комплексной оценки с применением системного многофакторного анализа.
В протромботическом потенциале первичного гемостаза у здоровых новорожденных поросят наиболее весомыми являлись сокращение времени развития АТ со всеми индукторами и их сочетаниями (Рi от 366,74 до 99,54). Относительно высокие коэффициенты влияния в ТП принадлежали уровням ПОЛ плазмы и тромбоцитов, антиоксидантной защиты кровяных пластинок и активности ЦО и ТС в них. Остальные параметры гемостаза были менее весомы. Взвешенная средняя протромботического потенциала у здоровых новорожденных поросят составила ХBi ТП = 0,006.
При вычислении протромботического потенциала первичного гемостаза у здоровых поросят в раннем онтогенезе выявлено, что наибольшую весомость сохранили сокращение времени развития АТ со всеми индукторами и их сочетаниями, увеличение антиоксидантной защиты тромбоцитов и уровень в них ПОЛ. Относительно высокие коэффициенты влияния в ТП принадлежали сумме активных форм тромбоцитов, активности ЦО, ТС и агрегатообразования в кровотоке. Значение взвешенной средней протромботического потенциала составило ХBi ТП = 0,020.
Таким образом, у здоровых поросят в течение раннего онтогенеза в первичном гемостазе отмечается рост проагрегантных влияний, что, безусловно, способствует поддержанию у них гомеостаза внутренней среды организма в ходе роста и развития на оптимальном уровне.
3.3. Сравнительный анализ тромбоцитарных функций у телят и
поросят в раннем постнатальном онтогенезе
Активность тромбоцитарного гемостаза в фазу новорожденности у здоровых телят была стабильной с последующим ее усилением. У поросят отмечено постоянное усиление ее в течение всего раннего онтогенеза.
ИТА, являющийся высоко значимым показателем стимуляции продуктами лабилизации тромбоцитарных фосфолипидов процесса свертывания крови у обоих видов животных в течение фазы новорожденности был стабилен, находясь у телят и поросят на сравнимом уровне. Это во многом объясняло постоянство у телят и поросят в течение фазы молозивного питания активности тромбопластина и времени его синтеза, находившихся у них на сходных уровнях. При переходе телят к молочному и молочно-растительному питанию ИТА испытывал тенденцию к нарастанию, достигая уровня достоверности к фазе растительного питания. У поросят достоверное нарастание данного показателя отмечалось, начиная с фазы молочного питания, превышая к 1 году аналогичный уровень у телят на 24,1%. Это обуславливало у обоих видов увеличение активности тромбопластина и снижение времени его синтеза.
Исследование АТ под действием ряда индукторов и их сочетаний позволило установить в фазу новорожденности у телят стабильность уровня чувствительности к ним тромбоцитов при нарастании ее у поросят. У здоровых новорожденных телят адгезивная способность кровяных пластинок была стабильна за счет постоянства концентрации в их крови фактора Виллебранда – кофактора адгезии тромбоцитов и/или отсутствия динамики числа рецепторов к нему – (GPI в ) на поверхности кровяных пластинок, нарастая в последующие фазы раннего онтогенеза. Стабильность уровня ФВ у новорожденных телят и его последующий рост определен на основе динамики АТ с ристомицином, который по своей способности влиять на тромбоциты, идентичен субэндотелиальным структурам сосудов. Известно, что ФВ соединяется одним концом молекулы с коллагеном, а другим с тромбоцитом через рецептор – гликопротеид Iв, формируя „ось адгезии”: коллаген – ФВ – GPIв, что позволяет предполагать их стабильность у телят в фазу новорожденности числа этих рецепторов на тромбоцитарных мембранах. Рецепторные перестройки на поверхности кровяных пластинок являются следствием процессов развития в организме растущих животных, влияния факторов внешней среды, меняющих соотношение липидов в мембранах тромбоцитов, способствующих динамике активности тромбоцитарного гемостаза в раннем онтогенезе. При этом, к концу фазы молозивного питания у телят адгезия и АТ развивалась более ускоренно, чем у поросят.
Важным механизмом стабильности состояния АТ у телят в фазу новорожденности можно считать постоянство активности обмена арахидоновой кислоты в тромбоцитах, находящегося на более низком уровне, чем у поросят. Благодаря стабильности активности ЦО и ТС в течение фазы новорожденности уровень тромбоксанообразования у телят к концу данной фазы остался существенно ниже аналогичного показателя у поросят. По ее завершению у обоих видов животных отмечено постепенное ускорение адгезии и АТ со всеми индукторами и их сочетаниями, выходя на сравнимый уровень только к фазе растительного питания. Это можно объяснить повышением у телят и поросят с возрастом числа и/или активности рецепторов на мембране тромбоцитов к сильным агонистам агрегации – коллагену и тромбину, обеспечивая рост активности фосфолипазы С, стимулируя фосфоинозитольный путь через диацилглицерол и протеинкиназу С с усилением фосфолирирования белков сократительной системы и интенсификацией сокращения актомиозина.
Усиление у обоих видов животных чувствительности тромбоцитов к слабым агонистам агрегации – АДФ и адреналину, взаимодействующими с соответствующими рецепторами их мембраны, происходит вследствие роста экспрессии фибриногеновых рецепторов (GPIIв-IIIа), стимуляции фосфолипазы А2, регулирующей выход из фосфолипидов арахидоновой кислоты с последующим усилением ее метаболизма циклооксигеназой и тромбоксансинтетазой и увеличенным образованием проагрегантных простагландинов в т.ч. мощнейшего из них - тромбоксана А2. Достоверное нарастание чувствительности к слабым индукторам обусловилось увеличением в течение раннего онтогенеза у обоих видов животных активности показателей обмена арахидоновой кислоты в тромбоцитах, сохраняя к 1 году жизни данный показатель у поросят на более высоком уровне за счет большей активности у них ТС.
Найденные закономерности динамики АТ in vivo в раннем онтогенезе телят и поросят были подтверждены возрастными изменениями у них состояния внутрисосудистой активности тромбоцитов во все сроки наблюдения.
Уровень дискоцитов в крови у здоровых телят в фазу молозивного питания был несколько ниже, достоверно не меняясь у них на ее протяжении. Сумма активных форм тромбоцитов и уровень агрегатов тромбоцитов при стабильности за фазу новорожденности у телят превышали в среднем неуклонно увеличивающиеся аналогичные показатели у поросят.
Об увеличении в крови телят и поросят в раннем онтогенезе активных форм тромбоцитов свидетельствуют данные исследования ВАТ. Кроме того, высокая ВАТ может косвенно говорить о постепенном росте доступности коллагена сосудистой стенки вследствие повреждения эндотелия факторами среды и повышения в крови растущих животных различных индукторов агрегации (тромбина, АДФ, адреналина).
В ходе развития в кровотоке у телят и поросят становится все больше кровяных пластинок, принявших округлую форму и образовавших отростки с переходом от дискоцита к диско-эхиноциту, затем к сфероциту и сферо-эхиноциту. Рост уровня диско-эхиноцитов обуславливает развитие гемостатической активности тромбоцитов при повышении адгезии и агрегации, связанной с экспрессией на их мембране фибриногеновых рецепторов (GP IIв – IIIа). Увеличение диско-эхиноцитов повышает стимуляцию каталитических свойств фосфолипидов плазматической мембраны и приводит к генерации фактора ХА и тромбина.
После фазы новорожденности в течение всего последующего раннего онтогенеза у телят и поросят постепенно уменьшалось количество дискоидных форм тромбоцитов с достоверным ростом суммы активных форм кровяных пластинок и усилением агрегатообразования. К 1 году жизни по большинству показателей ВАТ сравнялась у обоих видов.
Таким образом, выявленные закономерности тромбоцитарной активности у здоровых телят и поросят в раннем онтогенезе обуславливает оптимальный уровень ВАТ и микроциркуляции в тканях, адекватный с одной стороны их генетической программе, а с другой влияниям внешней среды и может считаться видовой приспособительной реакцией к внеутробному существованию.
Установлено, что в данную возрастную фазу у телят и поросят в протромботическом потенциале первичного гемостаза наиболее весомыми являются время развития АТ со всеми индукторами и их сочетаниями, активность ПОЛ в тромбоцитах и их антиоксидантная защита. Кроме того, у телят достаточно значимы величины уровней тромбоцитарных агрегатов в кровотоке и величина вовлеченности в них тромбоцитов, у поросят – активность ЦО и ТС. Остальные параметры гемостаза были менее весомы, играя в ТП скромную роль.
Таким образом, у полностью здоровых новорожденных животных в первичном гемостазе отмечается легкое превалирование уровня проагрегантных влияний, более выраженное у телят, обуславливающееся их видовыми особенностями реакции на воздействия внешней среды.
В протромботическом потенциале первичного гемостаза у здоровых телят и поросят в раннем онтогенезе наибольшую весомость сохраняли время развития АТ со всеми индукторами и их сочетаниями, повысив величину весовых коэффициентов. Высокая значимость в первичном гемостазе у обоих видов сохранились за ПОЛ, антиоксидантной защитой тромбоцитов и уровнем агрегатообразования. У телят в ТП также отмечена выраженная значимость показателя вовлеченности в агрегаты тромбоцитов, а у поросят – активности ЦО и ТС в тромбоцитах. Остальные параметры гемостаза были менее весомы.
Таким образом, имеющий место в раннем онтогенезе рост проагрегантных влияний в первичном гемостазе отмечается у полностью здоровых телят и поросят практически в равной степени, слабо преобладая у последних. Найденные видовые особенности ТП, безусловно, способствуют поддержанию гомеостаза внутренней среды организма у телят и поросят на оптимальном уровне в ответ на меняющиеся условия внешней среды в ходе роста и развития обоих видов сельскохозяйственных животных.
3.4. Особенности тромбоцитарных функций у новорожденных телят с ФНП
ФНП – это фактор, дестабилизирующий гомеостаз животного, что особенно должно отражаться на компонентах функциональной системы крови, а значит и на реологических ее свойствах. Крупный рогатый скот, особенно новорожденные телята, выражено реагируют на изменения постоянства среды желудочно-кишечного тракта, что должно отразиться и на функциях крови и реологических свойствах тромбоцитов (Лысов В.Ф., 1979; Максимов В.И., 1995)
При развитии ФНП количество тромбоцитов в крови телят оставалось без изменений. ИТА в группе животных с ФНП возрастал с 32,6±0,03% до их развития до 39,2±0,05% на их фоне (в контроле – 26,0±0,03%). У телят с ФНП было найдено повышение активности (Р<0,01) тромбопластина с 12,0±0,02с., перед их возникновением и 9,6±0,02с. на его фоне с компенсаторным замедлением его синтеза до 2,95±0,05 мин. (в контроле – 2,40±0,01мин.).
До развития ФНП в простой пробе переноса, косвенно зарегистрировано усиление синтеза в тромбоцитах проагрегантных метаболитов АА, в том числе ТхА2 максимально увеличивающееся на высоте ФНП за счет активации ЦО и ТС, активность которых нарастала при развитии ФНП.
Важную роль в активации биферментной системы тромбоксанообразования в кровяных пластинках играет увеличение СМ в тромбоцитах при ФНП. Рост СМ280 и СМ254 сильно прямо коррелировал с восстановлением АТ в простой пробе переноса – r = 0,82 (t = 5,86) и r = 0,76 (t = 8,90), что говорит о тесной взаимосвязи повышения уровня СМ в тромбоцитах и активации тромбоцитарных функций в условиях ФНП.
У телят на фоне манефестации ФНП отмечалось ускорение АТ, особенно под влиянием коллагена. Несколько медленнее АТ развивалась у этих животных под влиянием ристомицина и АДФ. Тромбиновая и адреналиновая АТ также развивались быстрее, чем в контроле (Р<0,01). Время развития АТ на фоне сочетания индукторов было еще более укороченным за счет их взаимопотенциирующего действия.
По ранней АТ с ристомицином, который по своей способности влиять на тромбоциты, идентичен субэндотелиальным структурам сосудов косвенно зарегистрировано повышение уровня ФВ при ФНП. Известно, что ФВ способен соединяться одним концом молекулы с коллагеном, а другим с тромбоцитом через рецептор – гликопротеид Iв, формируя „ось адгезии”: коллаген – ФВ – GPIв, что позволяет предполагать повышение числа этих рецепторов на тромбоцитарных мембранах.
Связь сильных агонистов агрегации – коллагена и тромбина в стандартных концентрациях с рецепторами на мембране тромбоцитов ведет к активации фосфолипазы С, стимуляции фосфоинозитольного пути через диацилглицерол и протеинкиназу С с фосфолирированием белков сократительной системы. Инозитолтрифосфат способствует выходу Са2+ из внутритромбоцитарных депо, обусловливая интенсификацию сокращения актомиозина.
Слабые агонисты агрегации тромбоцитов – АДФ и адреналин взаимодействуют с рецепторами их мембраны и вызывают экспрессию фибриногеновых рецепторов (GPIIв-IIIа), стимулируют фосфолипазу А2, регулирующую выход из фосфолипидов арахидоновой кислоты с усилением образования ТХА2, стимулирующего АТ посредством фосфолипазы А2 и С и прямого выхода Са2+ в цитоплазму.
Не исключено, что видная роль в усилении АТ с сильными и слабыми индукторами играют сдвиги в липидном составе мембран тромбоцитов, связанные с их нагруженностью ХС, снижением ОФЛ и усилением в них ПОЛ.
Сочетанное использование двух индукторов агрегации, имеющих место в реальных условиях кровотока позволило приблизить наше представление об АТ in vivo у новорожденных животных с ФНП животных к реально возникающему в их кровяном русле агрегационному процессу тромбоцитов.
Корреляционный анализ выявил статистически значимые обратные сильные и средней силы связи между содержанием СМ280 и СМ254, АГП и ТБК-соединений в крови телят с ФНП одной стороны и активностью у них АТ под влиянием всех примененных индукторов и их сочетаний с другой. При сочетании индукторов статистическая связь АТ с СМ плазмы была выше, чем в случае одного индуктора, причем связь АТ с СМ254 оказалась максимальной.
Статистическая связь АГП и МДА тромбоцитов, с одной стороны, и АТ, с другой, оказалась обратной и для большинства индукторов средней силы.
Высокая ВАТ косвенно говорит о доступности коллагена сосудистой стенки вследствие повреждения эндотелия и повышения в крови больных различных индукторов агрегации (тромбина, АДФ, адреналина). Вероятно, токсические агенты, появляющиеся в крови при ФНП ведут к возникновению микротравм сосудистых стенок, что неизбежно вызывает усиление ВАТ у этих телят.
Дискоциты в крови у здоровых телят с развивающимися в последующем ФНП составили 70,0±0,3%, при манифестации ФНП - 62,0±0,2%. Количество диско-эхиноцитов на этом фоне увеличивалось до 18,0±0,4%. При этом, содержание сфероцитов, сферо-эхиноцитов и биполярных форм тромбоцитов при развитии ФНП также значительно превышало контрольные значения. Сумма активных форм тромбоцитов достоверно увеличивалась, число малых и больших агрегатов в свободной циркуляции в кровотоке телят при функциональных нарушениях пищеварения возросло почти в 2 раза. Количество тромбоцитов в агрегатах при функциональных нарушениях пищеварения достигало 14,6±0,02%, против 5,0±0,2% в контроле.
Проведенный корреляционный анализ между суммой активных форм тромбоцитов и уровнем внутритромбоцитарных МДА и АГП выявил прямую связь средней силы – r = 0,50 (t = 3,60) и r = 0,56 (t = 5,38), соответственно. При этом, между суммой активных форм тромбоцитов и содержанием в кровяных пластинках средних молекул на 280нм и 254 нм найдена сильная прямая корреляционная связь - r = 0,78 (t = 10,55) и r = 0,84 (t = 8,65), соответственно.
Наиболее весомыми в общем агрегационном процессе телят с функциональными нарушениями пищеварения являлись уменьшение времени развития АТ со всеми индукторами и их сочетаниями (Pi от 833,3 до 452,4). Достаточно высокие коэффициенты влияния в ТП принадлежали возросшему ПОЛ в плазме и тромбоцитах и ослаблению каталазы и СОД в последних (Pi от 386,0 до 253,4) и числу малых (Pi =386,4) и числу средних и больших агрегатов в кровотоке (Pi =351,8) Остальные параметры тромбоцитарного гемостаза были менее весомы. Значимость их существенно не различалась между собой, играя в ТП скромную роль.
Взвешенная средняя протромботического процесса у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения составила ХBi ТП исход = 0,399.
Таким образом, повышение активности кровяных пластинок у новорожденных телят с ФНП способствует усилению у них ВАТ, ухудшению реологии крови и увеличению риска тромботических осложнений. Особую роль в этом играет увеличение содержания в тромбоцитах СМ и активное внутритромбоцитарное ПОЛ.
3.5. Коррекция тромбоцитарных функций у новорожденных телят с ФНП комплексом из «Фосфопага», «Экоса» и глюконата кальция
В целях коррекции выявленных реологических нарушений тромбоцитарных функций у новорожденных телят с ФНП проведен поиск адекватных подходов к их коррекции. С этой целью были апробированы коррекция традиционная для хозяйств, в которых велись исследования, сорбент «Экос», препараты «Биопаг-Д» и «Фосфопаг» и сочетание «Фосфопага» и «Экоса», а также лечебный комплекс из «Фосфопага», «Экоса» и глюконата кальция. Полная нормализация всех нарушенных параметров тромбоцитарного гемостаза у телят произошла на фоне комплексной коррекции, тогда как традиционная коррекция и сорберт «Экос» обеспечили весьма скромную динамику оцениваемых показателей, «Биопаг-Д» и «Фосфопаг» оказали более выраженное позитивное влияние, а сочетание «Фосфопага» и «Экоса» приблизило все параметры к уровню контроля, однако не позволив достичь ни по одному из значений уровня, характерного для здоровых животных.
Количество тромбоцитов в кровотоке животных до и после коррекции находилось в пределах общепринятой нормы, не отличаясь от такового в группе контроля. С помощью комплексной коррекции стало возможным ввести в границы нормы ИТА (с 41,2±0,01% до 26,0±0,06%), что косвенно указывало на уменьшение в кровяных пластинках телят продуктов лабилизации тромбоцитарных фосфолипидов – активаторов свертывания крови. При этом, была получена достоверная нормализация активности тромбопластина с 9,8±0,06с. до 13,9±0,02с. с оптимизацией времени его синтеза – 2,41±0,02 мин. (в контроле – 2,40±0,01мин.).
Комплекс из «Фосфопага», «Экоса» и глюконата кальция оказывал нормализующее влияние на важный механизм ускорения АТ при ФНП, нормализуя интенсивность обмена арахидоновой кислоты в тромбоцитах, обеспечивая оптимизацию тромбоксанообразования (30,6±0,02%), благодаря нормализации активности обоих ферментов ее превращения – циклооксигеназы и тромбоксансинтетазы.
У телят с ФНП на фоне примененной коррекции отмечалось значительное удлинение АТ. Так, наиболее ранняя АТ зарегистрирована под влиянием коллагена, указывая на нормализацию количества и биодоступности коллагеновых рецепторов - GPIa-IIa и GPVI на мембранах кровяных пластинок и восстановление эластичности микрососудов с исключением контакта тромбоцитов с волокнами коллагена сосудистой стенки.
Тромбиновая и адреналиновая АТ и АДФ также наступала в те же сроки, как в контроле, что обеспечивалось нормализацией активности на поверхности тромбоцитов телят с ФНП рецепторов к АФД, адреналину и тромбину. Время развития АТ на фоне сочетания индукторов будучи исходно укороченным, также претерпело позитивную динамику, соответствуя к концу коррекции группе здоровых животных.
Нормализация АТ при взаимопотенциирующем действии индукторов стала возможной благодаря оптимизации обмена веществ в тканях, сосудистой стенке и тромбоцитах, а также функционирования внутритромбоцитарных путей реализации АТ, в т.ч. через ослабление фосфолипаз С и А2, уменьшение экспрессии фибриногеновых рецепторов (GвIIв-IIIa) на мембране кровяных пластинок и депрессию образования в них физиологического агреганта – тромбоксана.
У телят с ФНП на фоне комплексной коррекции содержание дискоцитов в кровотоке достоверно увеличилось до уровня контроля (82,3±0,6%).
Количество в крови телят диско-эхиноцитов, сфероцитов и сферо-эхиноцитов на фоне коррекции достоверно снизилось, не отличаясь от контрольных значений. При этом сумма активных форм тромбоцитов нормализовалась (17,7±0,04%). Число малых и число средних и больших агрегатов в кровотоке телят с ФНП на комплексной коррекции уменьшились до 3,7±0,05 и 0,15±0,02 на 100 свободно лежащих тромбоцитов, соответственно, не отличаясь от контрольных значений.
Выраженное снижение протромботического потенциала (с ХBi ТП исход = 0,399 до ХBi ТП «Фосфопаг»+ «Экос»+глюконат кальция = 0,026) у новорожденных телят с ФНП на фоне сочетания «Фосфопага», «Экоса» и глюконата кальция говорит о возможности нормализации первичного гемостаза с его помощью. Положительное значение ТП при приближении его абсолютного значения к нулю свидетельствует о сохранении слабой проагрегантной направленности первичного гемостаза у животных, прошедших данный вид коррекции, не позволяющей возникнуть явлениям кровоточивости. Наибольшая весомость в процессе нормализации ТП в данном случае принадлежала удлинению времени АТ со всеми индукторами и их сочетаниями, ослаблению ПОЛ в плазме и тромбоцитах, повышению в последних активности СОД и каталазы, ослаблению тромбоксанообразования и снижению уровней тромбоцитарных агрегатов всех размеров.
Таким образом, повышенная активность кровяных пластинок у новорожденных телят с ФНП на фоне комплексной коррекции нормализуется по всем оцениваемым показателям, оптимизируя реологию крови и исключая тем самым риск тромботических осложнений. Важнейшую роль в этом играют нормализация на фоне комплексной коррекции содержания в тромбоцитах СМ, выход на уровень контрольных значений внутритромбоцитарного ПОЛ и оптимизация рецепторных и пострецепторных механизмов восприятия сигнала кровяными пластинками извне.
Установлено, что возникающие при ФНП тромбоцитарные дисфункции могут быть предотвращены своевременным применением у телят сочетания «Фосфопага», «Экоса» и глюконата кальция, способных корректировать активность тромбоцитов и профилактирующих ФНП.
3.6. Особенности тромбоцитарных функций у новорожденных поросят с анемией
У новорожденных поросят с анемией количество тромбоцитов в кровотоке животных не отличалось от такового в группе контроля. У них ИТА превышал контроль в 1,49 раз, что косвенно указывало на увеличение в кровяных пластинках животных уровня продуктов лабилизации тромбоцитарных фосфолипидов – активаторов свертывания крови. Кроме того, у них было найдено достоверное повышение активности тромбопластина на 46,8% при компенсаторном замедлении его синтеза до 2,72±0,02 мин (в контроле – 2,41±0,02 мин), что являлось важным стимулом гемостаза в целом при анемии.
Исследование АТ под действием ряда индукторов и их сочетаний выявило высокую чувствительность тромбоцитов поросят с анемией к внешним стимулам с активацией их агрегационной способности.
У обследованных животных с анемией отмечалось ускорение АТ, особенно под влиянием коллагена. Несколько медленнее АТ у поросят с анемией развивалась под влиянием АДФ и ристомицина, еще позднее АТ регистрировалась у них с Н2О2. Тромбиновая и адреналиновая АТ также развивались быстрее, чем в контроле (р<0,01). Время развития АТ на фоне сочетания индукторов было еще более укороченным: АДФ+адреналин – 18,3±0,02с., АДФ+коллаген – 17,6±0,01 с., адреналин+коллаген – 12,1±0,05с. Оценка АТ при сочетании двух индукторов агрегации позволила приблизить представление об АТ к реально возникающему в кровяном русле новорожденных поросят с анемией агрегационному процессу тромбоцитов.
Установлено, что новорожденных поросят имеющих анемию отмечается усиление адгезивной способности кровяных пластинок, идущей по двум механизмам. Первый механизм – увеличение плотности коллагеновых рецепторов-гликопротеидов Iа – IIа и VI на мембране тромбоцитов, что косвенно установлено по ускорению АТ с коллагеном. Второй механизм – нарастание адгезии тромбоцитов у новорожденных поросят с анемией связан с высокой выработкой WF структурами сосудов и активным его связывания с рецепторами к нему – (GPI в ) на поверхности кровяных пластинок. Повышение уровня WF регистрируется у этих животных на основе ранней АТ с ристомицином, который по своей способности влиять на тромбоциты, идентичен субэндотелиальным структурам сосудов. Увеличение синтеза WF вызывает на основе положительной обратной связи повышение числа рецепторов к нему на тромбоцитарных мембранах, вызывая рост их адгезивной готовности.
В условиях усиления чувствительности тромбоцитов к индукторам агрегации при анемии усиливается фиксация индукторов к рецепторам на мембране кровяных пластинок, вызывая высокую активацию фосфолипазы С сильными агонистами и стимулирующую фосфоинозитольный путь через диацилглицерол и протеинкиназу С с фосфолирированием белков сократительной системы и стимулирующую фосфолипазы А2, регулирующей выход из фосфолипидов арахидоновой кислоты повышением выхода проагрегантных простагландинов в т.ч. ТХА2 за счет активации ЦО и ТС.
Корреляционный анализ показал статистически значимые обратные сильные и средней силы связи между содержанием АГП и МДА в тромбоцитах анемичных поросят и времени АТ на фоне примененных индукторов и их сочетаний.
Корреляционный анализ между активностью каталазы и СОД тромбоцитов, с одной стороны, и АТ со всеми используемыми индукторами и их сочетаниями, с другой, выявили прямую сильную и средней силы статистическую связь. Причем, в случае АТ с сочетаниями индукторов статистическая связь ее с ПОЛ и антиоксидантной защитой кровяных пластинок оказалась максимальной.
В крови поросят с анемией дискоцитов содержалось - 51,3±0,03% (в контроле – 82,6±0,13%). Количество диско-эхиноцитов у них было увеличено втрое. Содержание сфероцитов, сферо-эхиноцитов и биполярных форм тромбоцитов у анемичных животных превышало контрольные значения в 6 раз, в 2,5 раза и 1,7 раза, соответственно. Сумма активных форм тромбоцитов у них была выше контрольных значений в 2,8 раза.
Нарастание агрегирующей способности кровяных пластинок ведет к повышению содержания активных форм тромбоцитов и к увеличению числа циркулирующих агрегатов различных размеров в крови животных.
Малых и больших агрегатов в их кровотоке содержалось 18,2±0,08 на 100 свободно лежащих тромбоцитов и 5,01±0,03 на 100 свободно лежащих тромбоцитов против контроля – 3,04±0,02 на 100 свободно лежащих тромбоцитов и 0,14±0,03 на 100 свободно лежащих тромбоцитов, соответственно, причем количество тромбоцитов в агрегатах у них было выше, чем в контроле в 2,07 раза.
В протромботическом потенциале первичного гемостаза у новорожденных поросят с анемией наиболее весомыми являлись сокращение времени развития АТ со всеми индукторами и их сочетаниями (Рi от 367,21 до 217,43), активности антиоксидантной защиты кровяных пластинок и ПОЛ в них (Рi от 384,15 до 275,26). Относительно высокие коэффициенты влияния в ТП принадлежали увеличенному содержанию ХС (Рi=183,42), сниженному уровню в тромбоцитах ОФЛ (Рi=168,92) и возросшей активности ЦО (Рi=151,12) и ТС (Рi=133,71). Остальные параметры гемостаза были менее весомы. Значимость их существенно не различалась между собой, играя в ТП скромную роль.
Взвешенная средняя протромботического потенциалау новорожденных поросят с анемией составила ХBi ТП = 0,362.
С целью поиска наиболее эффективной коррекции тромбоцитарных нарушений у новорожденных поросят с анемией применен препарат железа – ферроглюкин и его сочетания с фоспренилом и гамавитом. Установлено, что изолированное применение ферроглюкина и его сочетание с фоспренилом недостаточно корректирует у них тромбоцитарные дисфункции. Нормализация тромбоцитарных функций у новорожденных поросят с анемией была возможна только в случае применения ферроглюкина с гамавитом.
3.7. Возможности сочетания ферроглюкина и гамавита в
коррекции состояния новорожденных поросят с анемией
Количество тромбоцитов в кровотоке животных до и после коррекции находилось в пределах общепринятой нормы, не отличаясь от такового в группе контроля. Сочетание ферроглюкина с гамавитом нормализовало активность тромбоцитов у поросят с анемией. ИТА у них через 5 дней после окончания коррекции снизился на 50,5%, достигнув контрольного уровня - 26,5±0,12% при нормализации активности тромбопластина (14,0±0,04с.) с переходом на контрольный уровень времени его синтеза (2,41±0,02 мин.). Полученные результаты указывают на то, что ферроглюкин с гамавитом способны при сочетанном применении нормализовать у поросят с анемией активность основного запускающего механизма плазменного гемостаза - усиленного тромбопластинообразования.
Исследование АТ под действием ряда индукторов и их сочетаний выявило нормализацию чувствительности тромбоцитов анемичных животных к внешним стимулам с выходом их агрегационной активности на контрольный уровень.
К концу применения ферроглюкина и гамавита у поросят отмечено достоверное удлинение времени развития АТ с изолированными индукторами и их сочетаниями. Через 5 дней после окончания применения ферроглюкина и гамавита АТ затормозилась со всеми индукторами и их сочетаниями. Наиболее активным индуктором АТ был коллаген, что указывало на приближение количества и биодоступности коллагеновых рецепторов - GPIa-IIa и GPVI на мембранах кровяных пластинок к уровню здоровых животных. На втором месте находились АДФ, ристомицин, Н2О2 и тромбин. Активность адреналиновой АТ также нормализовалась, развиваясь через 99,4±0,08с после добавления индуктора. Оптимизация с ристомицином на фоне коррекции указывала на нормализацию еще одного механизма адгезии тромбоцитов у новорожденных поросят с анемией – снижение до контрольного уровня фактора Виллебранда в крови с уменьшением числа рецепторов (GPIв) к нему на поверхности кровяных пластинок. Сочетание индукторов, усиливающее их агрегирующее действие, способствовало более ранней АТ. Так, при сочетании адреналина и коллагена АТ на фоне коррекции тормозилась на 87,2%, АДФ и коллагена на 36,6%, АДФ и адреналина в 2,39 раза, что указывало на нормализацию АТ в условиях, приближенных к реальным.
Аналогичные позитивные изменения на поверхности тромбоцитов поросят с дефицитом железа произошли с рецепторами к АДФ, адреналину и тромбину с одновременным нарастанием активности системы антиокисления тромбоцитов, обуславливающим повышение резистентности к Н2О2.
Нормализация АТ при взаимопотенциирующем действии ее индукторов стала возможной благодаря оптимизации функционирования внутритромбоцитарных путей реализации АТ, в т.ч. через ослабление фосфолипаз С и А2, уменьшение экспрессии фибриногеновых рецепторов (GвIIв-IIIa) на мембране кровяных пластинок и депрессию образования в них физиологического агреганта – тромбоксана.
Оценка динамики обмена арахидоновой кислоты в тромбоцитах у поросят с анемией показала, что через 5 дней после коррекции ферроглюкином и гамавитом нормализуется тромбоксанообразование за счет одновременного снижения активности ЦО и ТС.
К концу курса применения ферроглюкина и гамавита у поросят с анемией отмечено увеличение содержания в кровотоке дискоидных форм кровяных пластинок, при достоверном снижении содержания активированных тромбоцитов (30,8±0,08%) за счет сокращения количества и оптимизации соотношения всех их разновидностей (диско-эхиноцитов, сфероцитов, сферо-эхиноцитов и биполярных форм). Количество свободно циркулирующих в крови малых тромбоцитарных агрегатов (10,2±0,08 на 100 свободно лежащих тромбоцитов), средних и больших агрегатов (2,6±0,04 на 100 свободно лежащих тромбоцитов) также уменьшилось. Число тромбоцитов, вовлеченных в агрегаты, снизилось в 1,53 раза.
Последующее наблюдение за животными с анемией, прошедшими курс коррекции ферроглюкином и гамавитом, выявило значительную дополнительную положительную динамику ВАТ. Так, через 5 дней после коррекции содержание дискоцитов в кровяном русле поросят увеличилось до 83,2±0,04% при нормализации суммы активных форм тромбоцитов за счет дополнительного снижения в крови животных всех разновидностей активированных кровяных пластинок. Через 5 дней после завершения курса применения ферроглюкина и гамавита у поросят нормализовалось содержание свободно циркулирующих малых (3,4±0,08 на 100 свободно лежащих тромбоцитов), средних и больших агрегатов (0,6±0,03 на 100 свободно лежащих тромбоцитов) при контрольном уровне вовлечения в них тромбоцитов.
Наиболее весомым в протромботическом потенциале первичного гемостаза у поросят после коррекции ферроглюкином и гамавитом являлось замедление развития АТ со всеми индукторами и их сочетаниями (Рi от 707,4 до 161,9), ослабление ПОЛ и рост активности антиоксидантных ферментов кровяных пластинок (Рi от 426,1 до 336,2). Относительно высокие коэффициенты влияния в ТП принадлежали ослаблению активности ЦО (Рi=530,4) и ТС (Рi=248,1). Остальные параметры тромбоцитарного гемостаза играли в ТП скромную роль.
Взвешенная средняя протромботического потенциала у новорожденных поросят с анемией составила ХBi ТП ферроглюкин+гамавит = 0,028.
Приближение значения ТП к «0» указывает на уравновешивание про- и антитромботических влияний в первичном гемостазе поросят с анемией на фоне ферроглюкина и гамавита, указывая на полную коррекцию у них тромбоцитарных функций с исключением риска микротромбозов. Достигнутая нормализация тромбоцитарного гемостаза с помощью ферроглюкина и гамавита позволяет считать его применение предпочтительным у новорожденных поросят с анемией с целью снижения риска микротромбозов и оптимизации микроциркуляции. Ферроглюкин с гамавитом улучшают агрегационные свойства тромбоцитов через оптимизацию эритропоэза, процессов перексидации и стимуляцию обмена веществ.
ВЫВОДЫ
- У крупного рогатого скота и свиней становление тромбоцитарного гемостаза происходит с возрастом, характеризуясь относительно высокой степенью совершенства и активностью, обеспечивая в течение постнатального периода онтогенеза адекватную адаптацию к условиям внешней среды.
- 1.1. У телят в фазу новорожденности отмечается стабильность тромбоцитарного гемостаза (агрегация тромбоцитов с сочетаниями индукторов АДФ с адреналином, АДФ с коллагеном, адреналин с коллагеном и сумма активных форм составляли в 1-2 сутки 36,3±0,14с, 26,8±0,05с., 28,4±0,03с, 23,9±0,04%, 3-4 сутки 37,5±0,10с, 27,6±0,02с, 32,1±0,07с, 19,6±0,02%, 5-6 сутки 34,8±0,08с, 28,1±0,07с, 29,9±0,10с, 21,0±0,05%, 7-8 сутки 38,1±0,03с, 26,9±0,15с, 31,6±0,09с, 15,8±0,01%, 9-10 сутки 36,4±0,16с, 27,2±0,07с, 30,3±0,14с, 19,0±0,16%, соответственно) с низким уровнем протромботического потенциала (ХBi ТП =0,007).
- 1.2. У поросят в фазу новорожденности происходит нарастание активности тромбоцитарного гемостаза (агрегация тромбоцитов с сочетаниями индукторов АДФ с адреналином, АДФ с коллагеном, адреналин с коллагеном и сумма активных форм составляли в 1 сутки 36,5±0,03с, 24,8±0,04с., 28,6±0,09с, 16,9±0,80%, 2 сутки 36,0±0,01с, 24,5±0,02с, 28,2±0,11с, 17,0±0,18%, 3 сутки 35,4±0,05с, 24,9±0,01с, 27,4±0,13с, 17,5±0,15%, 4 сутки 35,0±0,08с, 24,7±0,03с, 27,2±0,10с, 17,7±0,23%, 5 сутки 34,3±0,04с, 25,0±0,06с, 26,4±0,06с, 18,0±0,08%, соответственно) с низким уровнем протромботического потенциала (ХBi ТП =0,006).
- 1.3. У телят в раннем онтогенезе отмечается нарастание активности тромбоцитарного гемостаза (агрегация тромбоцитов с сочетаниями индукторов АДФ с адреналином, АДФ с коллагеном, адреналин с коллагеном и сумма активных форм составляли в среднем за фазу новорожденности 36,0±0,50с, 27,0±0,09с., 30,1±0,12с, 18,0±0,20%, в фазу молочного питания 36,1±0,20с, 26,2±0,03с, 28,3±0,06с, 19,6±0,03%, в фазу молочно-растительного питания 34,6±0,07с, 25,0±0,03с, 26,5±0,07с, 21,6±0,04%, в фазу растительного питания 33,2±0,02с, 24,6±0,05с, 25,0±0,11с, 23,9±0,05%, соответственно с небольшим увеличением протромботического потенциала (ХBi ТП =0,019).
- 1.4. У поросят в течение всего раннего онтогенеза отмечается неуклонный рост активности тромбоцитарного гемостаза (агрегация тромбоцитов с сочетаниями индукторов АДФ с адреналином, АДФ с коллагеном, адреналин с коллагеном и сумма активных форм составляли в среднем за фазу новорожденности 35,4±0,04с, 24,8±0,06с., 27,6±0,11с, 17,4±0,11%, в фазу молочного питания 32,6±0,02с, 24,1±0,08с, 25,3±0,08с, 19,9±0,02%, в фазу молочно-растительного питания 31,0±0,04с, 22,8±0,07с, 24,0±0,07с, 22,6±0,05%, в фазу растительного питания 28,6±0,07с, 21,1±0,09с, 22,5±0,06с, 24,5±0,06%, соответственно с небольшим увеличением протромботического потенциала (ХBi ТП =0,020).
- Более выраженное усиление функций первичного гемостаза у здоровых поросят в течение раннего онтогенеза уравнивалось с активностью такового у телят к годовалому возрасту.
- Физиологическая незрелость новорожденных телят, имеющих риск развития ФНП, сопровождается характерными нарушениями активности тромбоцитарного гемостаза.
- У физиологически незрелых телят имеется врожденная мембранопатия тромбоцитов (ХС - 0,80±0,02 мкмоль/109 тр, ОФЛ - 0,40±0,05 мкмоль/109 тр, ХС/ОФЛ - 2,00±0,04).
- При физиологической незрелости у новорожденных телят вследствие наличия липидного дисбаланса в мембранах тромбоцитов происходит ослабление антиоксидантной защищенности кровяных пластинок (СОД - 7820,0±26,50 МЕ/109 тр., каталаза - 1470,0±6,75 МЕ/109 тр.), что в совокупности с ослаблением антиоксидантного состояния плазмы создает предпосылки к повышению в них перекисного окисления липидов (базальный МДА - 1,20±0,001 нмоль/109 тр., АГП - 3,05±0,04 Д233/109 тр., дополнительно усиливающегося при манефестации функциональных нарушений пищеварения (базальный МДА - 1,54±0,004 нмоль/109 тр., АГП - 3,49±0,01 Д233/109 тр.).
- У новорожденных телят с признаками физиологической незрелости отмечается более высокий уровень функционирования тромбоцитарного гемостаза, чем у физиологически зрелых животных (агрегация тромбоцитов с сочетаниями индукторов АДФ с адреналином, АДФ с коллагеном, адреналин с коллагеном и сумма активных форм составляли 28,0±0,08 с., 23,0±0,06 с., 24,0±0,30 с., 30,0±0,05 %, соответственно), способствуя его дополнительной активации при развитии функциональных нарушений пищеварения (агрегация тромбоцитов с сочетаниями индукторов АДФ с адреналином, АДФ с коллагеном, адреналин с коллагеном и сумма активных форм составляли 20,0±0,12 с., 18,4±0,09 с., 20,3±0,07 с., 38,0±0,3 %, соответственно).
- При возникновении функциональных нарушений пищеварения у новорожденных телят отмечается увеличение внутрисосудистой активности тромбоцитов, что способствует увеличению содержания у них в кровотоке активных форм кровяных пластинок (дискоциты - 62,0±0,2%, сумма активных форм - 38,0±0,3%) и их агрегатов различного размера (малые агрегаты - 15,2±0,06 на 100 свободно лежащих тромбоцитов, средние и большие агрегаты - 4,7±0,03 на 100 свободно лежащих тромбоцитов), способствуя нарастанию у них протромботического потенциала (ХBi ТП =0,399).
- Применение у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения традиционной коррекции, сорбента «Экос» и «Биопага-Д», «Фосфопага» и его сочетания с «Экос» недостаточно оптимизирует перекисное окисление липидов плазмы и тромбоцитов, несколько снижая в них уровень средних молекул, не оказывая влияния на липидный дисбаланс в мембранах тромбоцитов, не позволяя достичь нормализации состояния тромбоцитарного гемостаза и исключить риск развития внутрисосудистого микротромбообразования за счет слабого влияния на протромботический потенциал первичного гемостаза (ХBi ТП традиционная коррекция =0,392, ХBi ТП «Экос» = 0,360, ХBi ТП «Биопаг-Д» = 0,301, ХBi ТП «Фосфопаг» = 0,234, ХBi ТП «Фосфопаг»+«Экос» = 0,121).
- Нормализация всех исследуемых биохимических и гематологических показателей (агрегация тромбоцитов с сочетаниями индукторов АДФ с адреналином, АДФ с коллагеном, адреналин с коллагеном и сумма активных форм составляли к концу коррекции 36,0±0,03с., 27,0±0,05с., 30,0±0,05с., 17,7±0,04, соответственно) возможна на фоне 10 суточного применения комплекса из «Фосфопага», «Экоса» и глюконата кальция, нивелирующего риск микротромбозов с переводом реологических свойств тромбоцитов на уровень здоровых телят при приближении протромботического потенциала приблизился к нулевому уровню (ХBi ТП «Фосфопаг»+ «Экос»+глюконат кальция = 0,026).
- Профилактическое применение в течение 8 суток комплекса, состоящего из «Фосфопага», «Экоса» и глюконата кальция, предотвращает развитие функциональных нарушений пищеварения и тромбоцитопатии с нормализацией субфизиологических нарушений тромбоцитарного гемостаза у новорожденных телят (агрегация тромбоцитов с сочетаниями индукторов АДФ с адреналином, АДФ с коллагеном, адреналин с коллагеном и сумма активных форм составляли по окончании коррекции 35,8±0,02 с., 27,3±0,08 с., 29,8±0,02 с., 18,8±0,06 %, соответственно) при приближении протромботического потенциала к нулевому уровню ( ХBi ТП профилактика = 0,025).
- У новорожденных поросят с анемией имеются выраженные нарушения тромбоцитарного гемостаза (агрегация тромбоцитов с сочетаниями индукторов АДФ с адреналином, АДФ с коллагеном, адреналин с коллагеном и сумма активных форм составляли 18,3±0,02с, 17,6±0,01с., 12,1±0,05с, 48,7±0,02%) при высоком уровне протромботического потенциала (ХBi ТП =0,362) первичного гемостаза, создавая условия для микротромбообразования.
- Применение ферроглюкина у новорожденных поросят с анемией не оказывает влияния на нарушения тромбоцитарного гемостаза (агрегация тромбоцитов с сочетаниями индукторов АДФ с адреналином, АДФ с коллагеном, адреналин с коллагеном и сумма активных форм составляли через 5 суток после коррекции 19,1±0,04с, 17,6±0,04с., 12,4±0,06с, 47,9±0,02%, соответственно) и величину протромботического потенциала (ХBi ТП =0,356) первичного гемостаза.
- Коррекция анемии у новорожденных поросят с помощью ферроглюкина и фоспренила вызывает позитивную динамику тромбоцитарного гемостаза (агрегация тромбоцитов с сочетаниями индукторов АДФ с адреналином, АДФ с коллагеном, адреналин с коллагеном и сумма активных форм составляли через 5 суток после коррекции 33,5±0,04с, 24,8±0,07с., 25,9±0,07с, 25,6±0,04%,, соответственно) и снижение величины протромботического потенциала (ХBi ТП =0,174) первичного гемостаза, не достигающего уровня здоровых животных.
- Сочетание ферроглюкина с гамавитом у новорожденных поросят с анемией нормализует тромбоцитарный гемостаз (агрегация тромбоцитов с сочетаниями индукторов АДФ с адреналином, АДФ с коллагеном, адреналин с коллагеном и сумма активных форм составляли через 5 суток после коррекции 35,0±0,08с, 24,6±0,05с., 28,5±0,03с, 16,8±0,04%, соответственно) и снижает протромботический потенциал (ХBi ТП =0,028) первичного гемостаза до уровня контроля.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
- Для оценки состояния тромбоцитарного гемостаза и прогнозирования его дополнительной активации у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения рекомендуется определять с обработкой полученных данных системным многофакторным анализом и вычислением величины протромботического потенциала.
- Для коррекции дисфункций первичного гемостаза новорожденным телятам с функциональными нарушениями пищеварения необходимо включать в схему выпаивания комплекс из «Фосфопага», «Экоса» и глюконата кальция на 10 суток.
- С целью профилактики тромбоцитопатии у новорожденных телят при обнаружении у них мембранопатии тромбоцитов, увеличения уровня средних молекул и перекисного окисления липидов в них, в схему выпаивания на 8 суток рекомендуется включать «Фосфопаг», «Экос» и глюконат кальция.
- Адекватность проводимой коррекции у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения и у новорожденных поросят с признаками анемии рекомендуется проверять путем определения у них активности агрегации in vitro с изолированными индукторами и их сочетаниями и внутрисосудистой активности тромбоцитов.
- Для коррекции тромбоцитарных нарушений у новорожденных поросят с анемией рекомендуется применение в течение 10 сут. сочетания ферроглюкина 150 мг (2мл) внутримышечно, двукратно с интервалом 10 сут. и гамавита 0,01 мг/кг внутримышечно один раз в день, пять дней, начиная с первой инъекции ферроглюкина.
- У новорожденных поросят с легкой анемией без признаков тромбоцитопатии для предотвращения развития тромбоцитарных дисфункций возможно использовать сочетание ферроглюкина по 150мг (2мл) внутримышечно, двоекратно с интервалом 10 дней и фоспренила 0,05мл/кг внутримышечно, двоекратно в разных шприцах в разные точки, первый раз одновременно с первой инъекцией препарата железа, второй раз в той же дозе через пять дней после его первой инъекции.
Результаты исследований внедрены в хозяйствах Курского, Конышевского, Железногорского, Обоянского, Фатежского, Золотухинского, Октябрьского, Суджанского, Советского районов Курской области.
По результатам исследований получены 9 патентов на изобретения Российской Федерации.
Основные положения диссертации используются в учебном процессе при преподавании физиологии в Курском институте социального образования (филиал) РГСУ и Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии имени К. И. Скрябина.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Медведев, И.Н. Диагностика агрегационных нарушений у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова, С.Ю. Завалишина / Методические рекомендации, Курск.- 2005.-10с. (10/4).
2. Горяинова, И.А. Тромбоцитарные дисфункции у новорожденных телят / И.А. Горяинова, И.Н. Медведев, С.Ю. Завалишина.- М., 2005.- 130 с. (130/100).
3. *Медведев, И.Н. Быстрая эффективная коррекция нарушений тромбоцитарного гемостаза у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Международный вестник ветеринарии. -2006.-№3-4.-С.24-27. (4/2).
4. *Медведев, И.Н. Нарушения тромбоцитарного гемостаза у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Международный вестник ветеринарии. -2006.-№3-4.-С.63-67. (5/3).
5. Медведев, И.Н. Оценка внутрисосудистой активности тромбоцитов у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения / И.Н., Медведев, И.А. Горяинова, С.Ю.Завалишина // Методические рекомендации.- Курск, 2006.-12с. (12/5).
6. Медведев, И.Н. Нарушения тромбоцитарного гемостаза и подходы к его коррекции у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова.-М., 2006.-170с.(170/140).
7. *Медведев, И.Н. Применение «Биопага-Д» новорожденным телятам при диспепсии / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Зоотехния. -2006.-№12.-С.19-20(2/1).
8. Медведев, И.Н. Пути возникновения тромбоцитарных нарушений у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Материалы IV научной конференции с международным участием «Проблемы агропромышленного комплекса», январь 2007. / Ж. «Успехи современного естествознания». -2007.-№1.-С.44-45.(2/1).
9. Медведев, И.Н. Внутрисосудистая активность тромбоцитов здоровых новорожденных телят в регионе Курской магнитной аномалии / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Материалы научной конференции с международным участием «Научные исследования высшей школы», 2-12 декабря 2006г., Испания, Марокко, Тенерифе, Мадера / Ж. «Фундаментальные исследования». -2007.-№1-С.83.(1/0,5).
10. *Медведев, И.Н. Коррекция диспепсии с предотвращением тромботических осложнений у новорожденных телят / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Молочное и мясное скотоводство.-2007.-№2.-С.42-43.(2/1).
11. Медведев, И.Н. Воздействие препарата «Биопаг-Д» на агрегационную функцию и перекисное окисление липидов тромбоцитов у новорожденных телят, больных диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Материалы V Международной конференции «Современные наукоемкие технологии», февраль 2007, Египет, г.Хурагда / Ж. «Успехи современного естествознания». -2007.-№2.-С.53-54.(2/1).
12. Медведев, И.Н. Коррекция функций тромбоцитов у новорожденных телят с диспепсией с помощью «Фосфопага» / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Материалы V научной конференции с международным участием «Гомеостаз и эндоэкология» 21-28 февраля 2007г. Хургада (Египет) / Ж. «Успехи современного естествознания». -2007.-№2.-С.37-38.(2/1).
13. Медведев, И.Н. Тромбоцитарные нарушения у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Материалы V научной конференции с международным участием «Гомеостаз и эндоэкология» 21-28 февраля 2007г. г. Хургада (Египет) / Ж. «Успехи современного естествознания».- 2007.-№2.-С.37. (1/0,5).
14. Medvedev, I.N Biological aspects og infringements thrombocyte hemostasis / I.N Medvedev, Т.А. Belova, I.A. Gorainova // EUROPEAN JOURNAL OF NATURAL HISTORY.- 2007.-№2.-Р.71-73.(3/1).
15. Medvedev, I.N Prompt effective correction of thrombocyte hemostasis diaturbances in new-born calves with dyspepsia / I.N Medvedev, I.A. Gorainova // European Journal academy of natural history. -2007.-№2.-Р.47-50.(4/2).
16. Медведев, И.Н. Внутрисосудистая активность тромбоцитов у новорожденных телят с диспепсией и ее коррекция «Фосфопагом» / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Материалы IV научной конференции с международным участием «Фундаментальные и прикладные проблемы медицины и биологии», 1-11 марта, 2007г. Индия / Ж. «Успехи современного естествознания». -2007.-№3.-С.91-92.(2/1).
17. *Медведев, И.Н. Коррекция дисфункции у новорожденных телят с диспепсией сорбентом «Экос» / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Зоотехния. -2007.-№3.-С.26-28.(3/1).
18. Медведев, И.Н. Диагностика состояния тромбоцитарного гемостаза у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова, С.Ю. Завалишина // Методические рекомендации.- Курск, 2007.-16с.(16/6).
19. Медведев, И.Н. Нивелирование нарушений тромбоцитарного гемостаза у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Кардиолог. -2007.-№3.-С.30-32.(3/2).
20. Медведев, И.Н. Коррекция агрегации тромбоцитов и перекисного окисления их липидов у новорожденных телят с диспепсией Фосфопагом и Экосом / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Материалы научной конференции с международным участием «Научные исследования высшей школы по приоритетным направлениям науки и техники», 5-18 января 2007, Тайланд, Сингапур, Малайзия / Ж. «Современные наукоемкие технологии». -2007.-№4.-С. 99.(1/0,5).
21. *Медведев, И.Н. Оптимизация показателей гемостаза Фосфопагом у телят при диспепсии / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Ветеринария. -2007.-№4.-С.42-44.(3/2).
22. Медведев, И.Н. Применение сорбента «Экос» для коррекции тромбоцитарного гемостаза у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Материалы международной научно-практической конференции «Теоретические и прикладные проблемы социально-правовых, медико-биологических, технико-экономических сфер жизни общества». Курск, 26-27 марта 2007г.- Курск, 2007.-С.148-151.(4/2).
23. Медведев, И.Н. Нормативные значения первичного гемостаза у здоровых новорожденных телят в Курской области / И.Н. Медведев, Т.А. Белова, И.А. Горяинова // Материалы международной научно-практической конференции «Теоретические и прикладные проблемы социально-правовых, медико-биологических, технико-экономических сфер жизни общества» Курск, 26-27 марта 2007г. - Курск, 2007.- с.152-153.(2/0,9).
24. Медведев, И.Н. Формирование тромбоцитарных нарушений у новорожденных телят при развитии диспепсии / И.Н. Медведев, Т.А. Белова, И.А. Горяинова // Материалы международной научно-практической конференции «теоретические и прикладные проблемы социально-правовых, медико-биологических, технико-экономических сфер жизни общества». Курск, 26-27 марта 2007г.-Курск, 2007.-С.153-155.(3/1).
25. Медведев, И.Н. Возможности назначения энтеросорбентов при желудочно-кишечной патологии у новорожденных телят / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Материалы международной научно-практической конференции «Теоретические и прикладные проблемы социально-правовых, медико-биологических, технико-экономических сфер жизни общества». Курск, 26-27 марта 2007г.-Курск, 2007.- С.155-158.(4/2).
26. Медведев, И.Н. Методические подходы по исследованию тромбоцитарного звена гемостаза у новорожденных телят / И.Н. Медведев, Т.А. Белова, И.А. Горяинова // Материалы международной научно-практической конференции «Теоретические и прикладные проблемы социально-правовых, медико-биологических, технико-экономических сфер жизни общества» Курск, 26-27 марта 2007г.-Курск, 2007.- С.158-162.(5/2).
27. Медведев, И.Н. Эффективный способ коррекции тромбоцитарных дисфункций у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Материалы международной научно-практической конференции «Теоретические и прикладные проблемы социально-правовых, медико-биологических, технико-экономических сфер жизни общества» Курск, 26-27 марта 2007г.- Курск, 2007.- С.162-166.(5/2).
28. Медведев, И.Н. Дисфункция агрегационной способности тромбоцитов у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Материалы международной научно-практической конференции «Теоретические и прикладные проблемы социально-правовых, медико-биологических, технико-экономических сфер жизни общества». Курск, 26-27 марта 2007г.-Курск, 2007. - С.166-169.(4/2).
29. *Медведев, И.Н. Профилактика диспепсии и нарушений тромбоцитарного гемостаза у новорожденных телят / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова, Т.А. Белова // Международный вестник ветеринарии.-2007.-№3.-С.43-46 (4/2).
30. Медведев, И.Н. Механизмы развития тромбоцитарных нарушений у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Материалы XI международной научно-производственной конференции «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения» 14-18 мая 2007г. -Белгород, 2007.-С.106.(1/0,5).
31. Медведев, И.Н. Влияние «Биопага-Д» на агрегационную функцию и перекисное окисление липидов тромбоцитов у новорожденных телят, больных диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Материалы XI международной научно-производственной конференции «Проблемы сельскохозяйственного производства на современном этапе и пути их решения». Белгород, 14-18 мая 2007г. - Белгород, 2007.-С.107.(1/0,5).
32. Медведев, И.Н. Дисагрегационные аспекты нарушений тромбоцитарного гемостаза у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, Т.А. Белова, И.А. Горяинова // Материалы 19 Международной межвузовской научно-практической конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии». Санкт-Петербург, 23-24 мая 2007г. – Санкт-Петербург, 2007.-С.92-93. (2/0,8).
33. Медведев, И.Н. Высокоэффективная коррекция тромбоцитарного гемостаза у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Материалы 19 Международной межвузовской научно-практической конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии». Санкт-Петербург, 23-24 мая 2007г. – Санкт-Петербург, 2007.-С.14-15.(2/1).
34. Медведев, И.Н. Возможности сорбента «Экос» в коррекции тромбоцитарного гемостаза у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Биологический вестник.-2007.-т.11, №1.-С.76-78 (3/1,5).
35. *Медведев, И.Н. Способ лечения тромбоцитарных нарушений у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, Б.Д. Беспарточный, И.А. Горяинова. - Патент на изобретение №2324487, приоритет 12 июля 2006г. (3/2).
36. *Медведев, И.Н. Нормализация первичного гемостаза у новорожденных телят при диспепсии / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Ветеринария.- 2007.-№9.-С.41-44.(4/2).
37. *Медведев, И.Н. Функциональные нарушения первичного гемостаза у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова, Т.А. Белова // Ветеринарная практика.- 2007.-№3.-С.14-17.(4/1,5).
38. *Медведев, И.Н. Тромбоцитарные нарушения у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова, Т.А. Белова // Зоотехния.- 2007.-№11.-С.19-20.(2/0,8).
39. *Медведев, И.Н. Способ профилактики тромбоцитарных нарушений у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, Б.Д. Беспарточный, И.А. Горяинова. Патент на изобретение №2323731, приоритет от 27 ноября 2006г. (5/3).
40. *Медведев, И.Н. Способ профилактики развития тромбоцитопатии в первые часы диспепсии у новорожденных телят / И.Н. Медведев, Б.Д. Беспарточный, И.А. Горяинова. Патент на изобретение №2323730, приоритет 27 ноября 2006г. (3/2).
41. Медведев, И.Н. Незаразные болезни молодняка / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова, Т.А. Белова / В кн.: Агроветеринарная сфера жизни общества т.3, семитомного издания «Сферы социальной жизни Курского края». –М., 2007.-С.139-140.(2/0,8).
42. *Медведев, И.Н. Возможности фармакологической коррекции тромбоцитарных дисфункций у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова, Т.А. Белова // Вестник Оренбургского государственного университета, 2007.-№12.-С.124-127.(4/2,0).
43. Горяинова, И.А. Возможности монотерапии фосфопагом нарушений тромбоцитарного гемостаза у новорожденных телят с диспепсией / И.А, Горяинова, И.Н. Медведев, Т.А. Белова / Материалы Международной научно-практической конференции «Теоретические и прикладные проблемы социально-правовых, медико-биологических и технико-экономических сфер жизни общества. Курск, 20-21 марта 2008.-Курск, 2008.-С.120-122. (3/1).
44. Становление систем в постнатальный период онтогенеза у животных / С.Ю. Завалишина, И.А. Горяинова, И.Н. Медведев, Т.А. Белова / Материалы Международной научно-практической конференции «Теоретические и прикладные проблемы социально-правовых, медико-биологических и технико-экономических сфер жизни общества. Курск, 20-21 марта 2008.-Курск, 2008.-С.123-132. (10/3).
45. Медведев, И.Н. Возможности влияния современного полигексаметиленгуанидина на биохимические сдвига у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова, Т.А. Белова / Материалы Международной научно-практической конференции «Теоретические и прикладные проблемы социально-правовых, медико-биологических и технико-экономических сфер жизни общества. Курск, 20-21 марта 2008.-Курск, 2008.-С.135-138.(4/2).
46. Горяинова, И.А. Нормализация первичного гемостаза у новорожденных телят с диспепсией / И.А. Горяинова, Т.А. Белова, И.Н. Медведев // Материалы первого международного конгресса ветеринарных фармакологов «Эффективные и безопасные лекарственные средства» посвященного 200-летию высшего ветеринарного образования и Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины. -Санкт-Петербург, 2008.-С.40-41. (2/0,8).
47. Медведев, И.Н. Воздействие сорбента «Экос» на тромбоцитарные дисфункции у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова, Т.А. Белова / Материалы международного симпозиума, посвященного 80-летию академика РАМН Н.А. Агаджаняна «Адаптационная физиология и качество жизни: проблемы традиционной и инновационной медицины», Москва, 14-16 мая 2008.- М., 2008.-С.212-217. (5/2,5).
48. Горяинова, И.А. Возможности монотерапии фосфопагом нарушений тромбоцитарного гемостаза у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения / И.А. Горяинова И.А., И.Н. Медведев, Т.А. Белова / Материалы международного научно-практического симпозиума «Адаптивные реакции в социальной сфере, биологии и медицине», Курск, 21-22 марта 2008.-Курск, 2008.-С. 137-140. (4/2,0).
49. Функциональные особенности физиологически зрелых новорожденных поросят / С.Ю. Завалишина, И.Н. Медведев, И.А. Горяинова, Т.И. Карцева, Я.В. Киперман, Т.А. Белова / Материалы международного научно-практического симпозиума «Адаптивные реакции в социальной сфере, биологии и медицине», Курск, 21-22 марта 2008.-Курск, 2008.-С. 140-149. (10/2,0).
50. Медведев, И.Н. Коррекция реологических нарушений тромбоцитов у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова / Материалы международного научно-практического симпозиума «Адаптивные реакции в социальной сфере, биологии и медицине», Курск, 21-22 марта 2008.-Курск, 2008.-С. 183-186. (4/2).
51. Медведев, И.Н. Возможности сочетанного применения Фосфопага, Экоса и глюконата кальция в коррекции нарушений тромбоцитарного гемостаза у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова / Материалы международного научно-практического симпозиума «Адаптивные реакции в социальной сфере, биологии и медицине», Курск, 21-22 марта 2008.-Курск, 2008.-С.186-191. (6/3).
52. Нарушения агрегационной активности тромбоцитов у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова, С.Ю. Завалишина, Т.А. Белова / Материалы международного научно-практического симпозиума «Адаптивные реакции в социальной сфере, биологии и медицине», Курск, 21-22 марта 2008.-Курск, 2008.-С.191-195. (5/1,25).
53. Актуальные проблемы ветеринарии / И.Н. Медведев, С.Ю. Завалишина, И.А. Горяинова, Т.И. Карцева, Я.В. Киперман, Т.А. Белова / Материалы международного научно-практического симпозиума «Адаптивные реакции в социальной сфере, биологии и медицине», Курск, 21-22 марта 2008.-Курск, 2008.-С. 195-197. (3/1,0).
54. Механизмы формирования наклонности к тромбообразованию / И.Н. Медведев, С.Ю. Завалишина, И.А. Горяинова, Т.А. Белова, Т.А. / Материалы международного научно-практического симпозиума «Адаптивные реакции в социальной сфере, биологии и медицине», Курск, 21-22 марта 2008.-Курск, 2008.-С.197-199. (3/1).
55. *Медведев, И.Н. Фосфопаг и экос в коррекции тромбоцитарных дисфункций у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Аграрная наука.-2008.-№6.-С.33-35. (3/1,5).
56. Медведев, И.Н. Нормализация гемостаза у новорожденных поросят с анемией с помощью сочетания ферроглюкина и гамавита / Е.Г. Краснова, И.Н. Медведев // Современные проблемы адаптации. Материалы международной научной конференции. -Курск, 2008.-С.123-124. (2/1,5)
57. Медведев, И.Н. Состояние первичного гемостаза у новорожденных поросят с анемией / И.Н. Медведев, Е.Г. Краснова // Современные проблемы адаптации. Материалы международной научной конференции. - Курск, 2008.-С.124-125. (2/1,5).
58. Медведев, И.Н. Повышение агрегационной активности тромбоцитов у новорожденных поросят с анемией / И.Н. Медведев // Современные проблемы адаптации. Материалы международной научной конференции. - Курск, 2008.-С.125-126. (2/2).
59. Медведев, И.Н. Нарушения первичного гемостаза у новорожденных поросят с анемией / И.Н. Медведев // Современные проблемы адаптации. Материалы международной научной конференции. - Курск, 2008.-С.126-127. (2/2).
60. Медведев, И.Н. Возможности сочетания ферроглюкина и фоспренила в коррекции первичного гемостаза у новорожденных поросят с анемией / И.Н. Медведев // Современные проблемы адаптации. Материалы международной научной конференции. - Курск, 2008.-С.128. (1/1).
61. Медведев, И.Н. Проблема нарушений функций первичного гемостаза у новорожденных поросят с анемией / И.Н. Медведев, Е.Г. Краснова // Современные проблемы адаптации. Материалы международной научной конференции. - Курск, 2008.-С.129-130. (2/1,5).
62. Медведев, И.Н. Коррекция гемостаза у новорожденных поросят с анемией с помощью ферроглюкина и гамавита / И.Н. Медведев, С.Ю. Завалишина, Е.Г. Краснова // Современные проблемы адаптации. Материалы международной научной конференции. - Курск, 2008.-С.130-131. (2/1).
63. Медведев, И.Н. Возможности ферроглюкина и гамавита в коррекции агрегационной активности тромбоцитов у новорожденных поросят с анемией / И.Н. Медведев / Материалы V международной научной конференции «Проблемы агропромышленного комплекса», Паттайа (Тайланд), 20-28 февраля 2008г. Опубликовано в журнале «Фундаментальные исследования».-2008.-№1.-С.82. (1/1).
64. Медведев, И.Н.Первичный гемостаз у новорожденных поросят / И.Н. Медведев, Е.Г. Краснова.- М., 2008.- 150с. (150/110).
65. Медведев, И.Н. Влияние ферроглюкина на состояние гемостаза у продуктивных животных с анемией в фазу новорожденности / И.Н. Медведев // Современные проблемы адаптации. Материалы международной научной конференции. - Курск, 2008.-С.131-132.(2/2).
66. Проблемы анемии в современном животноводстве / С.Ю. Завалишина, И.Н. Медведев, Е.Г. Краснова, Я.В. Киперман, Т.И. Карцева // Теоретические и прикладные проблемы социально-правовых, медико-биологических и технико-экономических сфер жизни общества. Материалы международной научно-практической конференции, Курск, 20-21 марта 2008.-Курск, 2008.-С.122-123. (2/1).
67. Медведев, И.Н. Ферроглюкин и гамавит в коррекции гемостаза у продуктивных животных с анемией в фазу новорожденности / И.Н. Медведев // Современные проблемы адаптации. Материалы международной научной конференции. - Курск, 2008.-С.132-137. (6/6).
68. Максимов, В.И. Подходы к коррекции анемии у поросят / В.И. Максимов, И.Н. Медведев // Материалы международного научно-практического симпозиума «Адаптивные реакции в социальной сфере биологии и медицине», Курск, 21-22 марта 2008.-Курск, 2008.-С.245-249. (5/4).
69. *Максимов, В.И. Сравнительная оценка тромбоцитарных функций в раннем онтогенезе у телят и поросят / В.И. Максимов, И.Н. Медведев // Ветеринария.-2008.-№11.-С.50-54. (5/4).
70. *Медведев, И.Н. Динамика тромбоцитарной активности в раннем онтогенезе поросят / И.Н. Медведев // Зоотехния.-2008.-№9.-С.27-28. (2/2).
71. *Медведев, И.Н. Профилактика тромбоцитарных дисфункций у новорожденных телят / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Аграрная наука.-2008.-№7.-С.28-30.(3/2).
72. *Медведев, И.Н. Становление тромбоцитарной активности у телят в раннем онтогенезе / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Аграрная наука.-2008.-№8. – С.38-40. (3/2).
73. *Медведев, И.Н. Высокоэффективная коррекция нарушений тромбоцитарных дисфункций у новорожденных телят с функциональными нарушениями пищеварения / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова // Технологии живых систем.-2008.- №4.- С.74-77. (4/3).
74. *Медведев, И.Н. Способ предотвращения тромбоцитарных нарушений при диспепсии у новорожденных телят / И.Н. Медведев, Б.Д. Беспарточный.- Патент на изобретение №2327466, приоритет 20 октября 2006г. (6/4).
75. *Медведев, И.Н. Способ лечения диспепсии у новорожденных телят / И.Н. Медведев, Б.Д. Беспарточный.- Патент на изобретение №2327467, приоритет 20 октября 2006г. (6/4).
76. *Медведев, И.Н. Способ профилактики развития тромбоцитарных нарушений при диспепсии у новорожденных телят / И.Н. Медведев, Б.Д. Беспарточный.- Патент на изобретение №2328290, приоритет 20 октября 2006г. (4/3).
77. *Медведев, И.Н. Способ лечения диспепсии новорожденных телят / И.Н. Медведев, Б.Д. Беспарточный, И.А. Горяинова.- Патент на изобретение №2329812, приоритет 20 ноября 2006г. (4/3).
78. *Медведев, И.Н. Способ раннего выявления риска формирования тромбоцитарных нарушений у животных / И.Н. Медведев, И.А. Горяинова, Т.А. Белова, Б.Д. Беспарточный.- Патент на изобретение №2316767, приоритет 10 января 2006г. (9/6).
79. *Медведев, И.Н. Способ лечения диспепсии новорожденных телят / И.Н. Медведев, Б.Д. Беспарточный.- Патент на изобретение №2327468, приоритет 20 октября 2006г.(3/2).
80. *Медведев, И.Н. Способ лечения тромбоцитарных нарушений у новорожденных телят с диспепсией / И.Н. Медведев, Б.Д. Беспарточный, И.А. Горяинова.- Патент на изобретение №2333749, приоритет 27 ноября 2006г. (8/6).
81. *Медведев, И.Н. Способ нормализации содержания липидов в мембранах тромбоцитов у новорожденных поросят с анемией / И.Н. Медведев, Е.Г. Краснова, Б.Д. Беспарточный.- Решение о выдаче патента по заявке на изобретение №2007140161 от 25.08.2008г., приоритет 29 октября 2007г. (5/3).
82.*.Медведев, И.Н. Способ ускоренной нормализации тромбопластинообразования у новорожденных поросят с анемией / И.Н. Медведев, Е.Г. Краснова, Б.Д. Беспарточный.- Решение о выдаче патента по заявке на изобретение №2007139532 от 25.08.2008г., приоритет 24 октября 2007г. (7/5).
* - публикации в рецензируемых изданиях, рекомендуемых ВАК РФ.
