Фармако-токсикологическая оценка смг биотек и ее применение при гипотрофии поросят
На правах рукописи
Гусева Ольга Сергеевна
ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА
СМГ БИОТЕК И ЕЕ ПРИМЕНЕНИЕ ПРИ ГИПОТРОФИИ ПОРОСЯТ
06.02.03 - ветеринарная фармакология с токсикологией
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
кандидата ветеринарных наук
Краснодар - 2013
Работа выполнена в ГНУ Краснодарском научно-исследовательском ветеринарном институте Россельхозакадемии
Научные руководители: доктор ветеринарных наук
Семененко Марина Петровна
доктор ветеринарных наук
Савинков Алексей Владимирович
| Официальные оппоненты: | доктор ветеринарных наук, профессор кафедры биотехнологии, биохимии и биофизики факультета перерабатывающей промышленности ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» Жолобова Инна Сергеевна |
| кандидат ветеринарных наук, ведущий консультант отдела госветинспекции, ветнадзора и контроля Государственного управления ветеринарии Краснодарского края Басанкин Алексей Вадимович |
| Ведущая организация: | ФГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины» |
Защита диссертации состоится «19» декабря 2013 г. в 1200 часов, на заседании диссертационного совета Д 220.038.07 при ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» по адресу: 350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» (350044, г. Краснодар, ул. Калинина 13).
Автореферат размещен на официальном сайте ФГБОУ ВПО «Кубанский ГАУ» - http://www.kubsau.ru «18» ноября 2013 г. и официальном сайте ВАК РФ – http://www.vak.ed.gov.ru.
Автореферат разослан «18» ноября 2013 г.
Ученый секретарь диссертационного совета,
доктор ветеринарных наук Родин И. А.
- ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы. Система организации промышленных свиноводческих комплексов не всегда учитывает взаимоотношения животных с окружающей средой, сложившейся за многие тысячелетия. Нарушение физиологических законов приводит к ослаблению организма и болезням, которые носят массовый характер и наносят большой экономический ущерб. К самой большой группе риска относят животных молодого возраста (Аликаев В.А., 1967; Василенко М.Ф., 1975; Никитченко И.Н., 1988; Дж. Понд У., 1983; Пайтуц Б., 2000; Бабайлова Г.П., 2002).
Во многих свиноводческих хозяйствах до 15-25% народившихся поросят имеют слабое физиологическое развитие, отклонения функционального и анатомического характера со стороны различных органов и систем, что, в дальнейшем, приводит к нарушению роста животных и снижению их устойчивости к неблагоприятным факторам внешней среды (Мюллер Ф.Ф., 1956; Аликаев В.А., 1968; Курносов А.Н., 1968; Липатов А.М., 1983; Plonnait H., 1988; Сытько В.Н., 1989; Яблонская О.В., 2002; Горелов Ю.М., 2001).
Гипотрофия поросят - широко распространенное заболевание, характеризующиеся недостаточностью и пониженной иммунобиологической реактивностью новорожденных животных, которые чаще других страдают расстройствами желудочно-кишечного тракта, отстают в росте и развитии (Никольский В.В., 1978; Вель Л.П., 1980; Жаров А.В., 2003).
Многими отечественными и зарубежными исследователями доказана необходимость использования в ветеринарной практике препаратов пробиотического ряда (Тараканов Б.В., 1987, 2000; Каширская Н.Ю., 2000; Simon O., 2001). Исследования, посвященные изучению механизмов действия пробиотиков, позволили установить многообразие их воздействия на микрофлору желудочно-кишечного тракта, на обменные функции организма животных и способность к повышению иммунного ответа.
В настоящее время одними из многофункциональных и универсальных по своему назначению пробиотических препаратов являются сыворотки (молочные) гидролизованные, вырабатываемые путем гидролиза лактозы с использованием промышленных культур молочнокислых микроорганизмов. Их использование в свиноводстве при болезнях молодняка является перспективным направлением ветеринарной науки и практики.
В связи с этим, значительный научно-практический интерес представ-ляет изучение эффективности использования для профилактики и лечения гипотрофии поросят сыворотки молочной гидролизованная биотек (смг биотек).
Цель исследований. Целью нашего исследования явилось изучение фармако-токсикологических свойств смг биотек и оценка эффективности ее использования для лечения и профилактики гипотрофии поросят. Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:
- Изучить распространенность и основные факторы возникновения гипо-трофии поросят в животноводческих хозяйствах Самарской области;
- Определить физико-химические свойства смг биотек;
- Установить параметры общетоксического действия препарата на организм;
- Определить фармакологические свойства смг биотек;
- Изучить лечебно-профилактическую эффективность препарата при гипотрофии поросят;
Научная новизна работы. В результате проведенных исследований определены физико-химические и основные фармако-токсикологические характеристики сыворотки молочной гидролизованной биотек. Выявлено положительное влияние препарата на морфо-биохимический состав крови, неспецифическую резистентность, метаболический статус и продуктивные качества поросят. Определена его лечебно-профилактическая эффективность при гипотрофии поросят.
Практическая значимость работы. По результатам работы для практической ветеринарии и животноводства предложен новый препарат на основе молочной гидролизованной сыворотки для лечения и профилактики гипотрофии у поросят, нормализующий обменные процессы в организме и оказывающий ростостимулирующее действие, а также дано экономическое обоснование использования смг биотек в животноводстве.
Разработана временная инструкция по применению препарата смг биотек, утвержденная в установленном порядке Руководителем Департамента ветеринарии Самарской области.
Апробация работы. Результаты экспериментальных и клинических исследований, представляющие собой основу диссертации, доложены и об-суждены: на межрегиональной научно-практической конференции «Акту-альные проблемы ветеринарии и животноводства» (Самара, 2010); на региональной научно-практической конференции «Достижения современной науки и практики в области охраны здоровья животных и человека» (Самара, 2011); на международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы современной ветеринарии» (Краснодар, 2011); на региональной научно-практической конференции «Вклад молодых учёных в аграрную науку Самарской области» (Самара) 2011; на Международной научно-практической конференции «От теории – к практике: вопросы современной ветеринарии, биотехнологии и медицины» (Саратов, 2011); на региональной научно-практической конференции «Вклад молодых учёных в аграрную науку Самарской области» (Самара) 2012; на региональной научно-практической межвузовской конференции «Актуальные задачи ветеринарии, медицины и биотехнологии в современных условиях и способы их решения» (Самара, 2013).
Основные положения диссертации, выносимые на защиту:
- степень распространенности и основные факторы возникновения гипо-трофии поросят в животноводческих хозяйствах Самарской области;
- характеристика физико-химических свойств смг биотек;
- экспериментальные данные по изучению токсикологических свойств пре-парата;
- фармакологические свойства смг биотек;
- результаты применения смг биотек в качестве лечебно-профилакти-ческого средства при гипотрофии поросят.
Публикации. Основные материалы диссертации опубликованы в 11 научных статьях, из которых 3 - в изданиях, рецензируемых ВАК Минобразования РФ.
Объем и структура диссертации. Диссертация выполнена на 150 страницах стандартного компьютерного текста, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственного исследования, заключения, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Библиографический список включает 223 источников, в том числе – 43 зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 32 таблицами и 15 рисунками.
- МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Работа выполнена в 2010 - 2013 гг. в ГНУ Краснодарский научно-исследовательский ветеринарный институт Россельхозакадемии, на базе лаборатории фармакологии в соответствии с Государственными планами научных исследований РАСХН, и является частью задания 04.01.01. с № госрегистрации 01.9.80. 006905.
Научно-производственные и экспериментальные опыты проводились в соответствии с имеющимися требованиями к врачебно-биологическому эксперименту по подбору аналогов, постановке контроля, соблюдению равных условий по кормлению и содержанию животных за весь период проведения работы и дальнейшего учета результатов (Фролов И. Т., 1965).
При постановке опытов были применены физиологические, клинические, фармакологические, токсикологические, биохимические, морфологические, иммунологические и другие методы исследования.
В экспериментальных, лабораторных и научно-хозяйственных опытах использованы беспородные белые мыши (36), белые крысы (116), кролики породы «Шиншилла» (7), морские свинки (3) и поросята-отъемыши (76).
Клинические исследования проведены в условиях животноводческих хозяйств Самарской области - ООО «Русское подворье» Красноярского района и в СПК «Инвестиция» Кинельского района.
Объектом исследования явилась сыворотка молочная гидролизованная биотек.
В процессе проведения экспериментальной части работы изучали токсическое действие сыворотки молочной гидролизованной биотек на организм опытных животных при кратковременном и длительном введениях, раздражающее, аллергезирующее, тератогенное и эмбриотоксическое действие, влияние препарата на пищеварение и мочеотделение, обменные процессы и резистентность организма животных, а также терапевтическая и профилактическая эффективность при гипотрофии поросят-отьемышей.
Общетоксические свойства смг биотек оценивались в соответствии с «Методическими указаниями по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве», утвержденными ГУВ СССР и «Методическими рекомендациями по токсико-экологической оценке лекарственных средств, применяемых в ветеринарии», одобренными секцией отделения ветеринарной медицины РАСХН (1998).
Параметры острой токсичности препарата смг биотек определяли по методу Кербера (1931), аллергенность - с помощью коньюктивальной (по Трубецкой Г.П., 1976) и кожно-провокационной проб (по Алексеевой О.А., Дуевой Л.А., 1978).
Эмбриотоксическое и тератогенное действие определялось согласно «Методическим указаниям по изучению репродуктивной токсичности фармакологических веществ» (М., «Медицина», 2005, под ред. Р.У. Хабриева).
Токсикометрическую оценку препарата смг биотек проводили в остром опыте на лабораторных белых крысах и мышах путём однократного введения препарата в полость желудка с помощью атравматичного зонда в дозах от 5,0 до 25 мл/кг массы тела (мыши) и дозах от 10,0 до 30,0 мл/кг массы тела (крысы). Животным контрольной группы вводили дистиллированную воду в максимальном объеме. При этом объём вводимого раствора с растворенным в нем препаратом, для белых мышей не превышал 0,6 мл на животное, для белых крыс – 7,0 мл на животное (максимальный объем при введении в желудок).
Показателями определения острой токсичности служили: внешний вид исследуемых животных, состояние кожного покрова, поведение (возбуждение или угнетение, изменение походки, подвижность, реакции на внешние раздражения, выделения из рта и глаз, мышечные подергивания, судороги, тремор, парезы и параличи, и т.д.).
Параметры субхронической токсичности изучали по общепринятым методикам на белых крысах. Исследуемый препарат смг биотек оценивали при длительном оральном введении белым крысам в трех дозах - ориентировочно-терапевтической (2 мл/кг), 3-х и 5-ти кратной от ориентировочно-терапевтической в течение 30 дней.
Степень токсичности препарата определяли по общему клиническому состоянию белых крыс, аппетиту, поведенческим и двигательным реакциям, динамике массы тела, изменениям показателей периферической крови. Определение массы тела у всех животных проводилось до начала введения препарата и по окончанию опыта.
Убой крыс проводился после последнего (контрольного) взвешивания, после чего отбирались образцы органов и тканей для гистологического и морфологического исследований согласно «Курса патогистологической техники» (Меркулов Г. А., 1969).
Материалом для исследования лабораторных животных служили печень, почки, селезенка, тонкий отдел кишечника и желудок (по 3 пробы от крыс четырех опытных групп, по одной с каждого органа).
Материалом для исследования поросят-гипотрофиков служили тимус, селезенка, средостенные лимфатические узлы (от двух групп – контрольной (поросята-гипотрофики) и опытной (смг биотек). Органы отбирались непосредственно после убоя и фиксировались в 10%-ном растворе нейтрального формалина. Проводка материала осуществлялась общепринятыми в патоморфологии методами. Заливка материала осуществлялась в парафин, после чего при помощи санного микротома МС-2 готовились серийные парафиновые срезы толщиной 5-6 мкм, которые окрашивались гематоксилином и эозином. Всего было изготовлено и исследовано 76 микропрепаратов.
Анализ и фотосъемку полученных препаратов производили с помощью аппаратурного комплекса «Видеотест» с программным обеспечением «Морфология 5.2» (ООО «Видеотест», Санкт-Петербург, Россия).
Влияние смг биотек на активность пищеварительной системы и почек изучалось по результатам исследований физико-химических свойств фекалий и мочи интактных поросят 2-3-х месячного возраста. При этом проводили органолептическую оценку, обращая внимание на форму, консистенцию, запах, цвет, а также присутствие посторонних примесей. рН каловых масс изучали с помощью лакмусовой бумаги, наличие крови – бензидиновой пробой, билирубин – пробой Фуше, желчные пигменты – пробой Терквея, крахмал и жир– микроскопически с суданом III и раствором Люголя. Наличие в моче белков определяли кипячением с 20%-ной сульфосалициловой кислотой, кровяных и желчных пигментов - бензидиновой пробой Адлера пробой Фуше, углеводов – пробой Гайнеса.
Аллергизирующее действие препарата смг биотек изучали на морских свинках путем накожных аппликаций и на кроликах методом коньюктивальных проб и эпитутанных аппликаций.
Влияние на эмбриональное развитие и генеративную функцию животных определяли согласно «Методическим указаниям по изучению репродуктивной токсичности фармакологических веществ» (М., «Медицина», 2005, под ред. Р.У. Хабриева) на белых половозрелых крысах-самках.
О качестве мяса судили по результатам ветеринарно-санитарной экспертизы убоя кроликов, которая включала в себя органолептическую и дегустационную оценку мяса, жира и бульона, а также биохимические исследования.
Исследования по фармакологической активности смг биотек проводили в условиях животноводческих комплексов, оценивая ее влияние на морфо-биохимические показатели крови и интенсивность роста.
Для изучения действия препарата в динамике у животных каждой группы в начале опыта, на 5, 15, 25, 35 дни отбиралась кровь для исследований, проводилась взвешивание и термометрия животных, а так же забор каловых масс для микробиологического анализа из прямой кишки. Забор крови осуществляли из краниальной полой вены стерильным шприцем системы «Luer». Забор каловых масс осуществлялся непосредственно из прямой кишки животного в стерильную посуду, в размере не менее 3 г.
Гематологические исследования включали в себя определение количества лейкоцитов и эритроцитов, содержание гемоглобина, гематокритной величины, скорость оседания эритроцитов (СОЭ), а так же состояние лейкоцитарной формулы. Эритроцитарные индексы - среднее содержание гемоглобина в эритроците, цветовой показатель (ЦП). Определяли СОЭ по методу Панченкова. Количество лейкоцитов и эритроцитов, содержание гемоглобина, гематокритную величину, среднее содержание гемоглобина в эритроците – определяли на геманализаторе AbacusJuniorVet. Подсчет лейкоформулы осуществляли микроскопическим способом по общепринятым методикам (Симонян Г.А., Хасамутдинов Ф.Ф., 1995), мазки предварительно окрашивали по методу Папенгейма.
При биохимических исследованиях сыворотки крови определяли содержание общего белка, мочевины, билирубина, креатинина, С – реактивного белка, концентрации общего кальция, неорганического фосфора, сывороточного железа, а также некоторых ферментов – трансаминаз (АлАт, АсАт). Уровень общего белка определяли биуретовым методом с помощью набора фирмы «КлиниТест-ОБ»; С – реактивный белок в реакции агглютинации латекса - с помощью набора фирмы «ЭКОлаб», содержание мочевины и активность транаминаз - с помощью наборов фирмы «БИО-LA-ТЕСТ»; содержание билирубина определяли методом Маллой-Эвелина, креатинина - методом, основанным на реакции Яффе с депротеинизацией, концентрацию общего кальция - турбидиметрическим методом без депротеинизации, количество глюкозы - глюкозооксидазным методом, уровень неорганического фосфора в сыворотке крови - молибдатным UV-методом, концентрацию железа - колориметрическим методом без депротеинизации с помощью наборов фирмы «ВИТАЛ».
Бактерицидную активность сыворотки крови определяли по методу О.В. Бухарина и В.А. Созыкина (1979) с использованием тест-культуры E. Colli, штамм 0111. Лизоцимную активность сыворотки крови устанавливали по методу О.В. Бухарина (1974) с применением суточной культуры Micrococys lisadecticus штамм 2665, ГКИ им. Л.А. Тарасевича. -литическую активность сыворотки крови определяли по методу О.В. Бухарина и соавт. (1972) с использованием тест-культуры B. Subtilis, штамм 83, ГКИ им.Л.А. Тарасевича. Фагоцитарную активность нейтрофилов - по методу А.И. Иванова и Б.А. Чухловича (1967), в качестве тест-культуры использовали E. Colli, штамм 0111.
При исследовании микрофлоры каловых масс материал предварительно взвешивали во флаконе, затем тщательно перемешивали проволочной петлей и отбирали около 1 грамма для исследования. Для определения анаэробных бактерий использовали изотонический раствор хлорида натрия. Первое разведение фекалий отстаивали на протяжении 10-15 минут, для осаждения крупных частиц. После этого пипеткой отбирали надосадочную жидкость и готовили 10-кратное разведение. Для выявления возбудителей кишечных инфекций из первого разведения производили высев по 0,5 мл на плотные питательные среды (Плоскирева), для определения энтеробактерий проводили высев по 0,5 мл на питательную среду Эндо, стафилококки определяли высевом 0,5 мл на молочно-солевой агар (МСА), грибы рода Candida выделялись на среде Сабуро высевом 0,5 мл, лактобактерии и бифидобактерии определяли, проведя высев по 1 мл на среды МРС-2 и Бифидум-среда соответственно. Инкубировали посевы при температуре 37°С от 1до 5 суток, в зависимости от использованной среды.
Определение биохимических свойств выделенных бактерий выполняли общепринятыми методами (Зыкин Л.Ф., Хапцев З.Ю., 2006). После определения микроорганизмов производили пересчет их количества на 1 г исследуемого материала.
Лечебно-профилактическое действие смг биотек изучали на поросятах в сравнении с пробиотиком лактобифадолом. Диагноз устанавливали комплексно, на основании полученных анамнестических данных, клинических признаков, патологоанатомических изменений и результатов бактериологического исследования материалов от павших животных.
Экономическую эффективность применения смг биотек рассчитывали по методу Ю.Е. Шатохина, И.Н. Никитини др. (1997).
Статистическую обработку экспериментальных данных проводили с использованием стандартных методов вариационной статистики PCMSI Micro-StarInt’lCo с помощью пакета Microsoft Office Word 2003, 2010, Excel 2003. Для оценки достоверности полученных результатов использовали критерий Стьюдента (Ланкин Г.Ф., 1980).
3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Распространение гипотрофии поросят в хозяйствах
Самарской области
По нашим данным, в ряде свиноводческих хозяйствах Самарской области с 2009 по 2012 гг. процент поросят-гипотрофиков среди общего количества молодняка варьировал в пределах от 1 до 8% при сохранности поголовья от данной патологии в 80-95%. Однако в объективной оценке этих сведений возникают сложности, поскольку гипотрофия не является самостоятельной патологией, а зачастую сопровождает различные заболевания, например, нарушение обмена веществ или воспалительно-инфекционные болезни с поражением различных органов и систем.
К фактам, приводящим к рождению поросят-гипотрофиков можно отнести следующие: недостаточная энергетическая полноценность ингредиентов рациона как свиноматок, так и молодняка, токсичные корма, сниженный иммунитет свиноматок и, как следствие, новорожденных поросят, нарушение систем содержания - отсутствие моциона у матерей, загазованность помещений, сквозняки, недостаток естественного освещения, несоблюдение температурных режимов, приводящих к стрессам, снижению резистентности и возникновению патологий, осложненных сопутствующими заболеваниями - бронхопневмонией и энтероколитами неспецифической этиологии.
3.2. Клиническая картина и патоморфологические изменения
при гипотрофии поросят
При анализе состояния поросят-гипотрофиков установлено, что животные недоразвиты, истощены, имеют низкую массу тела и болезненный вид. При клинических исследованиях отмечается вялость, сонливость, плохой аппетит, слабое телосложение, угнетенность и малоподвижность. Передние и задние конечности истончены, с признаками искривления, костные бугры и ребра выступающие, мышцы плохо развиты. Шерстный покров чрезмерно развит и взъерошен, кожа грубая, анемично-синюшного цвета, эластичность снижена, ушные раковины на ощупь холодные. Слизистые оболочки ротовой и носовой полостей анемичные, без блеска, в ряде случаев наблюдалось слезотечение. Тоны сердца глухие и слабые, у некоторых животных отмечена аритмия. У многих поросят живот был вздут и увеличен, наблюдались признаки гастроэнтерита. Средний вес варьировал в пределах 5,6±0,16 кг, что в 1,9 раз меньше веса поросят-нормотрофиков.
При исследовании морфо-биохимических показателей крови поросят-гипотрофиков установлено снижение ряда показателей – гемоглобина – на 18,3%, гематокритной величины – на 32,9%, среднего содержания гемоглобина в эритроците - на 36,5%. Цветовой показатель был снижен (0,7). Концентрация сывороточного железа варьировала на уровне 15,1±1,78 мкмоль/л. То есть, поросята имели ряд гематологических признаков, указывающих на наличие алиментарной железодефицитной анемии.
Количество общего белка в сыворотке крови было снижено, в среднем, на 21,3-34,5%. Тогда как уровень неорганического фосфора был повышен и составил в среднем 2,7±0,11 ммоль/л, что могло быть связано с интенсивной деминерализацией костной ткани в результате нарушения минерального обмена в организме поросят.
Таким образом, у поросят-гипотрофиков обнаруживаются признаки алиментарной железодефицитной анемии, дефицит массы тела, нарушение Ca-P обмена, а так же низкий уровень развития.
На вскрытии трупов поросят-гипотрофиков во внутренних органах наблюдались дистрофические изменения (сердце, печень, селезенка, почки), анемия, в легких - бронхопневмония, в пищеварительном тракте - катаральное воспаление. Масса мышечной и костной ткани была в полтора раза ниже массы нормотрофиков. Жир в подкожном слое и других депо отсутствовал, соединительная ткань и мышцы гидремичны, скелетная мускулатура, костная ткань, зубы недостаточно развиты.
3.3. Состав и физико-химические свойства
сыворотки молочной гидролизованной биотек
Биотек – сыворотка молочная гидролизованная, сброженная закваской для творога. В 1 см3 сыворотки содержится не менее 1106 КОЕ (колониеобразующих единиц) мезофильного и термофильного молочнокислого стрептококка Lactococcus lactis, представляет собой густую жидкость, кремового цвета со специфическим запахом и кисло-соленого вкуса.
Кроме этого, сыворотка в своем составе содержит легкоусвояемые углеводы и обогащена промежуточными продуктами гидролиза белка (аминокислотами, ди-, три, олиго-, и полипептидами), которые легко перевариваются в желудочно-кишечном тракте животного, а также витамины А, В1, В6, В12, С, Р, макро- микроэлементы, и другие биологически активные вещества (таблица 1).
Таблица 1
Состав смг биотек (в 100 г продукта)
| Показатель | Значения | Показатель | Значения |
| Вода, мл | 55-60 | Микроэлементы, мкг: | |
| Белки, г | 5,6-6,3 | железо | 71-79 |
| Жиры, г | 1,0-1,4 | марганец | 8-24 |
| Углеводы, г: | кобальт | 0,1-0,76 | |
| глюкоза | 2,0-3,50 | никель | 0,5-9 |
| лактоза | 1,5-2 | хром | 3-9,4 |
| галактоза | 12-13 | селен | 4,91-5,0 |
| мальтоза | 0,17-0,25 | цинк | 530-1630 |
| Органические кислоты, г | 2,0-3,5 | медь | 14-25 |
| Зола, г | 11,2-14,5 | Витамины, мг: | |
| Макроэлементы, мг: | -каротин | 3,8-5,0 | |
| натрий | 700-2175 | В1 | 0,091-0,155 |
| калий | 900-973 | В2 | 0,485-0,970 |
| кальций | 110-360 | В6 | 0,12-0,22 |
| магний | 56-770 | РР | 0,60-0,68 |
| фосфор | 3,56-4,57 | С | 1,0-5,6 |
Препарат отличается пониженным содержанием лактозы, что исключает возможность возникновения заболеваний, связанных с лактозной непереносимостью. Стабильность смг биотек обусловлена высокой концентрацией осмотически активных компонентов – лактатов, которые полностью усваиваются организмом и обладают бактерицидными и бактериостатическими свойствами.
3.4 Токсикологическая оценка смг биотек
Целью токсикологических исследований препарата явилось установление характера и выраженности повреждающего действия на организм животных, как в остром опыте, так и при длительном применении и оценка его безопасности.
Изучение острой токсичности биотека определяли в двух сериях эксперимента на белых беспородных мышах с массой тела 22-15 г и белых крысах с массой тела 215-230 г при пероральном введении. Исследуемый препарат биотек предварительно растворяли в 2 мл дистиллированной воды и вводили животным внутрижелудочно в дозах от 5,0 до 25 мл/кг массы тела (мыши) и дозах от 10,0 до 30,0 мл/кг массы тела (крысы). Контрольным аналогам в аналогичных объемах вводили дистиллированную воду.
Результатами экспериментов гибели животных и клинических признаков интоксикации ни в одной из групп не зарегистрировано. Введение максимальных доз лабораторным животным вызывало некоторую заторможенность и снижение двигательной активности, а также обильное мочеотделение, проходящее через 3-4 часа. Подобная картина регистрировалась и у контрольных аналогов, которым внутрь вводилось максимальное количество дистиллированной воды.
На основании проведенных исследований среднесмертельную дозу (LD50) и дозу, вызывающую клиническую картину токсикоза для смг биотек установить не удалось, в связи с чем, препарат классифицируется как малотоксичный и по ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества» относится к 4-му классу опасности (малоопасные вещества).
Изучение субхронической токсичности проводили на белых беспородных крысах с начальной средней массой тела 212-220 г. Так как в остром опыте среднесмертельная доза (LD50) не была установлена, первая группа животных получала сыворотку в ориентировочно-терапевтической дозе – 2,0 мл/кг. Вторая и третья опытные группы получали смг биотек в 3-х и 5-ти кратной от ориентировочно-терапевтической дозах – 6,0 мл/кг и 10,0 мл/кг в течении 30 дней.
Проведенные исследования не выявили токсического влияния смг биотек при длительном применении на организм лабораторных животных. Отклонений от нормы в поведении, общем состоянии и аппетите опытных крыс не регистрировали. Расстройств пищеварения и мочеиспускания от применения препарата не установлено.
При этом установлено стимулирующее действие препарата на показатели красной крови лабораторных животных, уровень эритроцитов у которых через 30 дней экспериментального периода превышал фоновые значения на 7,2%, гемоглобина – на 4,5% соответственно. Количество белка увеличилось на 27,4%, глюкозы - на 6,3%.
Длительное применение различных доз смг биотек оказывает влияние на ростовые характеристики организма, стимулируя рост крыс, в среднем, на 14,6-32,0% в сравнении с интактными животными.
Влияние смг биотек на патоморфологию внутренних органов животных при длительном введении. При патоморфологических исследованиях внутренних органов крыс подопытных групп были установлены незначительные нарушения в микроциркуляторном русле печени, характеризующиеся единичными дистрофическими изменениями в гепатоцитах и гиперемией междольковых артерий. Однако и в контрольной группе отмечены аналогичные изменения, что вероятнее всего, связано с погрешностями кормления животных, а не с токсической нагрузкой на печень.
Влияния смг биотек на пищеварение и мочеотделение Биотек в терапевтических дозах при длительном назначении не влияет отрицательно на процессы пищеварения и на функции органов мочеотделения, что подтверждалось комплексом физико-химических показателей мочи и фекалий подопытных животных.
Изучение аллергизирующего и раздражающего действия препарата не выявило местного токсического влияния на организм животных в местах нанесения препарата. Эластичность, подвижность и упругость кожи морских свинок оставалась неизменной. Болевой реакции, отека кожи, трещин и геморрагий не установлено. Изучение раздражающего действия препарата смг биотек на слизистую глаза кроликов показало, что его влияние на слизистые оболочки глаз выражалось незначительной гиперемией конъюнктивы, а также слезотечением, которое проходило в течение 3-5 минут. Изъязвления конъюнктивы, рубцовых изменений век, помутнения роговицы не регистрировали.
Изучением эмбриотических и тератогенных свойств биотека установлено, что препарат в дозе 10 г/кг массы тела не влияет отрицательно на течение беременности и роды лабораторных животных и общее состояние новорожденных крысят, не вызывает аномалий в развитии внутренних органов, уродств, отклонений в росте и поведении молодняка.
При ветеринарно-санитарной оценке продуктов убоя животных после скармливания препарата, отрицательного воздействия на качество и вкусовые свойства мяса установлено не было.
3.4 Фармакологическая оценка препарата смг биотек
3.4.1 Влияние на микрофлору кишечника поросят
Изучение влияния смг биотек на микрофлору кишечника показало, что на 25 день применения препарата поросятам-отъемышам уровень лактобактерий повысился относительно контроля на 14,6%, молочных стрептококков – на 8,0%. В отношении эшерихий, ферментирующих лактозу, с начала опыта
данный показатель на протяжение всего опыта находился без изменений, не снижался, находясь в пределах 9,08-9,94 lg КОЕ, тогда как в группах, не принимающих биотек, происходило их снижение.
При этом уровень золотистого стафилококка под влиянием препарата на 5-й день снизился относительно группы контрольных животных на 31,8%, а с 15-го дня выявлено его полное отсутствие; прочие стафилококки и дрожжеподобные грибы снизились на 10% в сравнении с фоном.
Таким образом, применение смг биотек способствует нормализации микробиального состава кишечника, увеличению количества симбионтных микроорганизмов (или их стабильному составу) и снижению уровня условно-патогенных форм.
3.4.2 Влияние на обменные процессы организма поросят
Влияние смг биотек на обменные процессы организма проводили на здоровых поросятах 28-дневного возраста, сформированных в две группы по 10 животных в каждой. Поросята I-й группы (негативный контроль), содержалась на основном рационе, животным II-й группы дополнительно задавался препарат смг биотек из расчета 2 мл на кг массы тела один раз в сутки в течение 30 дней.
Установлено, что испытуемый препарат оказал существенное влияние на клеточный состав крови поросят – на 30-й день исследования уровень эритроцитов повысился на 11,8% относительно фоновых значений, лейкоцитов – на 6,5%. При этом, повышение форменных элементов крови происходило в пределах границ возрастной нормы поросят. Уровень гемоглобина в опытной группе через 15 дней вырос на 21,6% (р0,05) против 12,8% контроля или в 1,7 раза, а к концу опытного периода – еще на 3,6% (р0,05). Гематокритная величина и среднее содержание гемоглобина в эритроците в опытной группе были выше показателей группы контроля на 6,5% и 22,8% (р0,001) соответственно.
Биохимическими исследованиями установлено, что добавление молочной сыворотки в рационы поросят оказало существенное влияние на ряд показателей. Так, уровень общего белка к 30-му дню эксперимента превышал данный показатель контрольных животных на 21,9% (р0,001). Концентрация мочевины выросла на 22,9% (р0,01), что напрямую коррелирует с увеличением концентрации общего белка у опытных поросят и свидетельствует о хорошем уровне усвоения кормовых белков из рациона и полноценной мочевинообразовательной функции печени. А стабильный уровень креатинина при этом исключает почечную задержку. Концентрация общего кальция к концу эксперимента в опытной группе выросла на 28,0%, превысив показатели контрольной группы поросят на 23,8%.
Использование в рационе животных смг биотек оказало влияние не только на обменные процессы, но и на стимуляцию активности факторов неспецифической резистентности организма поросят. Под влиянием молочной сыворотки уровень бактерицидной активности в опытной группе повысился более, чем в 2 раза, лизоцимной активности – на 19,5% относительно фоновых показателей и на 37,2% относительно контрольных аналогов. -литическая активность сыворотки крови выросла на 33,9% относительно фона и в 1,62 раза относительно контроля.
Среднесуточные приросты массы тела поросят, получающих молочную сыворотку, были на 13,9% выше, чем у поросят контрольной группы. Преимущество в росте и развитии отмечалось у них на протяжении всего опыта, составляя 7,4% в пользу опытных животных.
3.4.2. Влияние на морфологические структуры органов
иммунной системы при гипотрофии поросят
При гистологическом анализе иммунных органов поросят-гипотрофи-ков (селезенки, тимуса, средостенных лимфоузлов) установлено, что исследуемые органы поросят опытной группы были наименее подвержены патологическому процессу, в сравнении с контрольной группой.
Наблюдаемые в селезенке контрольных поросят признаки гипотрофии (уменьшение размеров и числа фолликулов и отсутствием в них герминативных центров, отсутствие клеток гладкой мускулатуры в составе фиброзной оболочки, склероз стенок центральных артерий, трабекулярный и капсулярный фиброз), у поросят опытной группы были выражены слабее и характеризовались только уменьшением размеров фолликулов, а мантийная зона была представлена тонким ободком.
У поросят контрольной группы в тимусе выявлены атрофические изменения органа на фоне имеющихся диспластических процессов (разновеликость долек органа, увеличение доли междольковых соединительно-тканных структур с их отеком, сглаженность деления на корковый и мозговой слои, выраженная дистрофией телец Гассаля с изменение их формы, размеров, количества). В тимусе опытных поросят подобные изменения носили единичный характер и были менее выражены.
В фолликулах лимфоузлов поросят опытной группы мантийная зона была широкой, реактивные центры четко определены, имелись вторичные фолликулы. В контрольной - узкий ободок или полное отсутствие мантийной зоны, реактивные центры были слабо выражены и выделены лишь в единичных фолликулах, а вторичные фолликулы отсутствовали.
Таким образом, у опытных поросят наблюдались выраженные улучшения микроструктуры органов, что говорит о положительном влиянии сыворотки биотек на органы иммунного ответа поросят-гипотрофиков.
3.5. Лечебно-профилактическая эффективность смг биотек
Изучение эффективности смг биотек проводились на 40 поросятах – отъемышах 28-ми-дневного возраста, из которых у 30-ти присутствовали признаки гипотрофии (низкая масса тела, чрезмерно развитый шерстный покров, выступающие костные бугры и ребра, плохой аппетит, анемичные слизистые, анемично-синюшная кожа, угнетенное состояние).
Опыт проводился по следующей схеме (таблица 2). Препараты задавались один раз в сутки в течение 35 дней.
В ходе эксперимента оценивался ряд гематологических и морфо-биохимических показателей крови, характеризующих физиологическое состояние животных и изменения, происходящие под действием применяемых препаратов.
Таблица 2
Схема научно-хозяйственного опыта (n=10)
| Группы/препараты | Количество животных | Условия кормления |
| I – контрольная (нормотрофики) | 10 | Основной рацион (ОР) |
| II – контрольная (гипотрофики) | 10 | Основной рацион (ОР) |
| III – опытная (гипотрофики) | 10 | ОР + смг биотек в дозе 2,0 мл/кг |
| IV – опытная (гипотрофики) | 10 | ОР +лактобифидол в дозе 1 г/кг |
Установлено, что испытуемые средства оказали существенное влияние на гомеостаз крови поросят, однако, характер изменений во многом зависел от вводимого препарата.
Оценивая динамику клеток крови животных, участвующих в эксперименте, установили, что в опытных группах (III и IV), получающих дополнительно к кормовому рациону пробиотические препараты, уровень эритроцитов повысился относительно контрольных поросят-гипотрофиков на 8,6% и 4,3%. И только в группе с применением смг биотек количество эритроцитов достигло значений данного показателя нормально развитых поросят.
Динамика лейкоцитов во всех группах была относительно стабильна на протяжении всего экспериментального периода, не выходя за пределы нормативных значений (в среднем 45,3-15,4х109/л).
По уровню гемоглобина прослеживалась следующая тенденция: в первой контрольной группе увеличение к концу исследований составило 22,1%, во второй – 6,2%, в опытных группах – 33,1% и 28,3% (р0,001) соответственно. То есть, в группах поросят, получающих препараты уровень гемоглобина в сравнении с контрольными нормотрофиками вырос на 11,0% и 6,2% и в сравнении с гипотрофиками – на 26,9% и 22,1% соответственно. Различия между опытными группами составили 4,8% (р0,05) в пользу поросят, принимающих биотек.
Анализом биохимических показателей крови установлена положительная динамика содержания общего белка в сыворотке поросят, получающих препараты.
Низкий уровень белка (50,2-52,6 г/л), зарегистрированный в начале эксперимента, к 35-му дню исследований в III группе вырос до 65,9±4,27 (р 0,001) г/л или на 31,0%. Тогда как в IV группе повышение составило лишь 15,5% при высокой степени достоверности. Различия по опытным группам составили 20,1% в пользу молочной сыворотки. Относительно контрольных поросят-гипотрофиков разница по общему белку в пользу опытных групп животных была 24,1% (р0,001) и 4,0% при высокой степени достоверности у поросят III группы.
При исследовании динамики мочевины было установлено ее повышение в крови опытных животных, принимавших препараты смг биотек и лактобифадол в 1,6-1,3 раза относительно показателей контрольных групп (р0,01).
К концу экспериментального периода концентрация общего билирубина по всем группам существенно повысилась (в 2,0-2,3 раза), оставаясь, тем не менее, в границах нормальных значений. При этом минимальное повышение - 4,6±1,20 мкмоль/л отмечено только в группе поросят, принимавших смг биотек.
На уровень трансфераз препараты влияния не оказали. Активность АлАт и АсАт на протяжении опытного периода во всех группах поросят находилась в границах физиологической нормы, все различия между показателями носили случайный характер и диагностического значения не имели.
Применение фармакотерапии оказало нормализующее влияние на показатели минерального обмена опытных поросят, получающих молочную сыворотку, повысив концентрацию общего кальция в крови на 26,1% относительно поросят-нормотрофиков и на 45,0% относительно поросят-гипо-трофиков. Тогда как у животных, получающих лактобифадол уровень кальция хотя и повысился, тем не менее, сохранялся в значениях, близких к I контрольной группе. То есть, повышение уровня кальция в сыворотке крови поросят III опытной группы связано с позитивным влиянием смг биотек на усвоение минеральных составляющих корма и качество обмена веществ.
Концентрация неорганического фосфора во всех подопытных группах была высокой, однако в опытных группах отмечалась тенденции к снижению (относительно поросят-гипотрофиков) на уровне 28,6%-35,7%.
Анализ динамики сывороточного железа показал, что применение сыворотки способствовало увеличению уровня железа относительно гипотрофиков II группы – на 30,4%, относительно группы поросят, получавшей лактобифадол – на 40,8%. Однако фармакокоррекция смг биотек хотя и способствовала увеличению концентрации железа до нижних границ возрастной нормы у подопытных поросят, все же не позволила достигнуть значений данного показателя в сравнении с поросятами-нормотрофиками. Различия по железу между группами были высокими (в 1,8 раза) в пользу поросят с нормальным физиологическим развитием.
Клеточные и гуморальные факторы естественной защиты в значительной степени определяют адаптационные механизмы животных и приспособляемость их к чрезвычайно разнообразным воздействиям внешней среды.
Оценивая влияние препаратов на изменение активности монофакторов неспецифической резистентности – лизоцима и бета-лизина сыворотки крови, установленное в процессе эксперимента, установили, что уровень бактерицидной активности по опытным группам повысился относительно фоновых значений на 46,9% (р0,01) и 23,3%. Во II группе поросят-гипотрофиков повышение было незначительным (3,9%) и недостоверным. Различия с поросятами этой группы составили 41,4% и 18,6% соответственно в пользу опытных поросят.
Показатель лизоцимной активности сыворотки крови (ЛАСК) при фоновых исследованиях у контрольной группы животных был на 33,1% выше, чем в опытных группах. Однако по окончанию эксперимента отмечено его снижение на 23,1% (р0,05). Тогда как в группе, получавшей молочную сыворотку, уровень ЛАСК повысился относительно фона на 18,4%, относительно контрольных нормотрофиков – на 15,1%, контрольных гипотрофиков – на 30,2% соответственно. В опытной группе, где применялся препарат лактобифадол, значения лизоцимной активности, напротив, снизились на 5,8% относительно фоновых показателей и на 8,5% относительно нормально развитых поросят.
Бета-литическая активность по опытным группам повысилась соответственно на 17,6% и 6,8% в пользу поросят, получающих биотек. Причем, в этой группе животных повышение отмечалось уже с первой недели скармливания препарата и оставалось стабильно высоким на протяжении всего экспериментального периода. По группе поросят, получающих лактобифадол, в процессе исследования выявлялись значительные колебания по уровню – лизина, как в сторону снижения, так и повышения (на 5-й и 25-й дни). Изменения бета-литической активности у контрольных аналогов I группы отмечены не были.
Таким образом, при сравнительном изучении препаратов смг биотек и лактобифадола установлено, что использование пробиотических препаратов оказывает выраженное позитивное влияние на морфо-биохимические и иммунологические показатели крови поросят при определенном приоритете исследуемых показателей у животных, получающих молочную гидролизованную сыворотку.
Клиническими исследованиями установлено, что поросята опытных групп отличались более высокой подвижностью, здоровым цветом кожи и хорошим тонусом скелетной мускулатуры. Все задаваемые корма съедали полностью. У поросят II-й контрольной группы более отчетливо были выражены признаки, характерные для поросят - гипотрофиков. Кожа анемично-синюшная, шерстный покров чрезмерно развит. Скелетная мускулатура гипотонична, слизистые анемичны, костные бугры и ребра выступающие. У поросят отмечался неудовлетворительный аппетит.
Использование молочной сыворотки оказало влияние на энергию роста животных. При средней массе тела по группе 14,3 кг на конец эксперимента в III-ей опытной группе в 60% случаев (у 6 поросят) средняя масса тела составила 16,9 кг с колебаниями 14-19,8 кг. Эти поросята составляли доминирующее число группы, были крупнее и активнее, имели минимальный набор симптомов, указывающих на наличие гипотрофии. Остальные 40% поросят имели среднюю массу тела 11 кг (10,4-13,6 кг) и более заметные проявления заболевания.
В IV опытной группе средняя масса тела составила 16,2 кг с колебаниями 13,7-18,6 кг. Но таких поросят в группе было 50%.
Результаты опытов показали, что смг биотек обладает выраженным лечебным действием при гипотрофии поросят, позволяющим сократить сроки лечения (таблица 3).
Таблица 3
Терапевтическая эффективность применения смг биотек
при гипотрофии поросят (n=10)
| Препарат | Кол-во поросят | Кол-во выздоровевших поросят по дням / % выздоровления | Затрачено дней на лечение | ||||||
| 5 дн | 10дн | 15 дн | 20 дн | 25 дн | 30 дн | 35 дн | |||
| смг биотек | 10 | - | - | 2/20 | 2/20 | 4/40 | 2/20 | - | 30 |
| лактобифадол | 10 | - | - | - | 2/20 | 2/20 | 3/60 | 3/60 | 35 |
Улучшение клинического состояния животных в первой опытной группе наступало на 15-й день исследований и было меньше на 5 дней по сравнению с лактобифадолом. При этом препарат смг биотек начал давать наилучшие результаты на 25-й день с динамикой на улучшение.
Обобщая полученные результаты, следует отметить, что использование сыворотки молочной гидролизованной при гипотрофии поросят послеотъемного периода, оказывает благоприятное влияние на клинико-физиоло-гический статус поросят, способствуют нормализации морфо-функцио-нальных и биохимических показателей крови, активизируют обменные процессы в организме, а также проявляеют стимулирующий эффект на комплекс факторов неспецифической защиты иммунитета.
ВЫВОДЫ
1. Процент поросят-гипотрофиков среди общего количества молодняка в ряде свиноводческих хозяйств Самарской области варьирует в пределах от 1 до 8% при сохранности поголовья от данной патологии в 80-95%. Основными факторами возникновения гипотрофии является недостаточная энергетическая полноценность ингредиентов рациона свиней, токсичные корма, сниженный иммунитет свиноматок, нарушение систем содержания - отсутствие моциона у матерей, загазованность помещений, сквозняки, недостаток естественного освещения, несоблюдение температурных режимов, приводящих к стрессам и снижению резистентности поросят.
2. Препарат смг биотек - сыворотка молочная гидролизованная, сброженная закваской для творога, представляет собой густую жидкость, кремового цвета со специфическим запахом и кисло-соленого вкуса.
В 1 см3 сыворотки содержится не менее 1106 КОЕ (колониеобразующих единиц) мезофильного и термофильного молочнокислого стрептококка Lactococcus lactis. Кроме этого, в ней содержатся легкоусвояемые углеводы и промежуточные продукты гидролиза белка (аминокислотами, ди-, три, олиго-, и полипептидами), а также витамины А, В1, В6, В12, С, Р, макро- микроэлементы, и другие биологически активные вещества.
3. По степени токсичности смг биотек относится к IV классу опасности - малоопасные вещества (ГОСТ 12.1.007-76). Введение препарата в дозе до 30000,0 мл/кг массы тела не вызывает гибели и острой интоксикации животных, не влияет отрицательно на их общее состояние и поведение. Длительное применение молочной сыворотки не оказывает отрицательного влияния на внутренние органы и ткани животных и их структуру, не изменяет морфо-биохимический состав крови и основные обменные процессы. Препарат не обладает местно-раздражающим действием, его применение не изменяет качества и вкусовых свойств мяса.
4. Смг биотек оказывает выраженное влияние на клеточный состав крови поросят за счет повышения в пределах физиологических границ нормы эритроцитов – на 11,8%, лейкоцитов – на 6,5%. Он проявляет стимулирующее влияние на гемопоэз, увеличивая уровень гемоглобина на 21,6-25,5%. Фармакодинамика смг биотек характеризуется разносторонним воздействием на организм животных, что проявляется повышением уровня общего белка и мочевины на 21,9% и 22,9%, общего кальция – на 28,0%, сывороточного железа – на 30,4%. Факторы неспецифической резистентности организма поросят – бактерицидная, лизоцимная и -литическая активность, повышаются на 56,4%, 37,2% и 62,1% соответственно. Использование молочной сыворотки увеличивает приросты массы тела на 13,9%.
5. Изучением влияния смг биотек на микрофлору кишечника поросят установлено, что симбионтные бактерии имеют устойчивую тенденцию к увеличению показателей по сравнению с контрольными группами или не изменяются в меньшую сторону лактобациллы повышаются на 14,6%; молочнокислый стрептококк увеличивается на 8,0%, к фону; эшерихии ферментирующие лактозу находятся на стабильном уровне 9,08-9,94 lg КОЕ.
При этом уровень золотистого стафилококка под влиянием препарата на 5-й день снизился относительно группы контрольных животных на 31,8%, а с 15-го дня выявлено его полное отсутствие; прочие стафилококки и дрожжеподобные грибы снизились на 10% в сравнении с фоном.
6. Препарат обладает выраженной лечебно-профилактической эффективностью при гипотрофии поросят, что проявляется снижением продолжительности болезни на 5 дней в сравнении с аналоговым препаратом, ослаблением клинических признаков заболевания, повышением массы тела на 6,4%-13,2%.
7. Экономическая эффективность от применения смг биотек поросятам-гипотрофикам на один рубль затрат составляет 3,8 рублей.
ПРЕДЛОЖЕНИЯ
Для практической ветеринарии и животноводства предложен новый препарат на основе молочной гидролизованной сыворотки для лечения и профилактики гипотрофии у поросят, нормализующий обменные процессы в организме и оказывающий ростостимулирующее действие.
Разработана нормативная документация (временная инструкция по применению), определяющая условия применения препарата, требования к качеству и методам контроля, утвержденная в установленном порядке вышестоящими структурами.
Производство препарата освоено в ООО «Профессиональные Биотехнологии» (г. Самара).
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ
ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
- Гусева, О.С. Сопоставительный анализ влияния пробиотических средств различных групп на факторы неспецифической резистентности поросят / О.С. Гусева, А.В. Савинков // Материалы межрегиональной конференции ГНУ Самарская НИВС Россельхозакадемии: Актуальные проблемы ветеринарии и животноводства.- Самара, 2010. – С. 123-126.
- Гусева, О.С. Влияние пробиотических препаратов на уровень привесов поросят гипотрофиков / О.С. Гусева, А.В. Савинков // Материалы региональной научно-практической межвузовской конференции ГНУ Самарская НИВС Россельхозакадемии: Достижения современной науки и практики в области охраны здоровья животных и человека.- Самара. 2011. – С. 76-79.
- Гусева, О.С. Влияние пробиотического препарата лактобифадол на динамику красной крови поросят-гипотрофиков / О.С. Гусева, А.В. Савинков // Сборник научных трудов: Вклад молодых учёных в аграрную науку Самарской области.– Самара, 2011. – С. 74 – 76.
- Гусева, О.С. Влияние пробиотического препарата биотек на динамику красной крови поросят-гипотрофиков / О.С. Гусева, А.В. Савинков // Материалы междунар. научно-практ. конф., посвящ. 65-летию ветеринарной науки Кубани: Актуальные проблемы современной ветеринарии, часть 1. – Краснодар, 2011. - С. 37-40.
- Гусева, О.С. Влияние молочной сыворотки биотек на биохимические показатели крови при рахите у телят / О.С. Гусева, А.В. Савинков, К.М. Садов // Материалы международной научно-практической конференции ГНУ СНИВИ РАСХН: От теории – к практике: вопросы современной ветеринарии, биотехнологии и медицины. – Саратов, 2011. – С. 252-255.
- Гусева, О.С. Влияние пробиотического препарата биотек на показатели белкового обмена поросят-гипотрофиков / О.С. Гусева, А.В. Савинков, В.Н. Скира // Сборник научных трудов: Вклад молодых учёных в аграрную науку Самарской области.– Самара, 2012. – С. 8-13.
- Гусева, О.С. Показатели естественной резистентности организма поросят-гипотрофиков при включении в их рацион пробиотических препаратов биотек и лактобифадол / О.С. Гусева, А.В. Савинков // Известия Самарской ГСХА. – 2012. - Вып.1. – С. 23-28.
- Гусева, О.С. Влияние пробиотических препаратов различного ряда на морфологические показатели крови поросят при гипотрофии в период отъема / О.С. Гусева, А.В. Савинков, М.П. Семененко // Ветеринарная патология. – 2013. - №1. – С. 104-106.
- Гусева, О.С. Влияние пробиотических препаратов молочной сыворотки биотек и лактобифадол на динамику минерального обмена поросят-гипотрофиков / О.С. Гусева // Материалы Региональной научно-практической межвузовской конференции/ ГНУ Самарская НИВС Россельхозакадемии: Актуальные задачи ветеринарии, медицины и биотехнологии в современных условиях и способы их решения. - Самара, 2013. – С. 83-87.
- Гусева, О.С. Влияние сыворотки молочной гидролизированной биотек на рост и развитие поросят гипотрофтков / О.С. Гусева, А.В. Савинков // Материалы Региональной научно-практической межвузовской конференции ГНУ Самарская НИВС Россельхозакадемии: Актуальные задачи ветеринарии, медицины и биотехнологии в современных условиях и способы их решения. - Самара, 2013. – С. 88-91.
- Гусева, О.С. Влияние пробиотических препаратов различного ряда на уровень фагоцитарной активности поросят-гипотрофиков в период отъема / О.С. Гусева, А.В. Савинков, М.П. Семененко // Ветеринария и кормление. – 2013. - №3. – С. 20-21.
