Комплексные мероприятия по профилактике сальмонеллеза птиц в племенных хозяйствах
На правах рукописи
Смирнов Дмитрий Дмитриевич
Комплексные мероприятия по профилактике сальмонеллеза
птиц в племенных хозяйствах
06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология,
микология с микотоксикологией и иммунология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени кандидата
ветеринарных наук
Санкт-Петербург-2011
Работа выполнена в отделе микробиологии Государственного научного учреждения «Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт птицеводства» Россельхозакадемии (ГНУ «ВНИВИП» Россельхозакадемии)
Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор
Придыбайло Николай Дмитриевич
Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор
Алиев Алаутдин Серажутдинович
кандидат ветеринарных наук,
старший научный сотрудник
Забровская Анна Владиленовна
Ведущая организация: ФГУ «Федеральный центр охраны
здоровья животных»
Защита диссертации состоится « 11 » мая 2011 г. в 13 часов на заседании
диссертационного совета Д 220.059.03 при ФГОУ ВПО «Санкт-
Петербургская Государственная академия ветеринарной медицины» по
адресу: 196084, Санкт-Петербург, ул. Черниговская д.5, тел/факс (812)
3883631.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Санкт-
Петербургская Государственная академия ветеринарной медицины»
Автореферат разослан « 09 »апреля 2011 г. и размещен на сайте академии
(http://spbgavm.ru ) «08 » апреля 2011 г.
Ученый секретарь Л. М. Белова
диссертационного совета
1. Общая характеристика работы
Актуальность темы. Среди инфекционных болезней птицы по данным Росптицесоюза за последние годы более 60% составляют болезни бактериальной этиологии. При этом отмечается возрастание роли микроорганизмов, являющихся возбудителями проблемных для птицехозяйств болезней: колибактериоза, сальмонеллеза, стафилококкоза и др. (Венгеренко Л.А.,2009).
Сальмонеллёз птиц независимо от сероварианта возбудителя, вызвавшего его, причиняет значительный социально-экономический ущерб. Он слагается из снижения яйценоскости кур-несушек, количества оплодотворенных яиц, высокой летальности эмбрионов, потери привесов молодняка, значительных затрат на диагностические и лечебно-профилактические мероприятия (Борисенкова А.Н. и др., 2008), а также возникновения пищевых токсикоинфекций у людей, часто с летальным исходом, особенно у детей и лиц престарелого возраста (Кафтырева Л.А. и др.2008).
Важным моментом в организации борьбы с сальмонеллёзной инфекцией на птицеводческом предприятии является систематический мониторинг бактериальных патогенов среди больной и павшей птицы, который позволяет регистрировать возможное заражение возбудителем сальмонеллёза у птицы, определять оптимальные схемы применения антимикробных средств, пробиотиков и бактериофагов, а также специфической профилактики и своевременно организовывать необходимые противоэпизоотические мероприятия в хозяйстве (Гусев В. и др.,2003; Афонюшкин В. и др., 2008; Рождественская Т.Н.,2009).
В связи с тем, что сальмонеллы обладают лекарственной устойчивостью ко многим антибиотикам, ВОЗ не рекомендует широко использовать их в борьбе с инфекцией, а в комплексе мер применять специфическую профилактику. Требования к вакцинным штаммам, изготовлению, валидации и испытанию эффективности вакцин изложены в Руководстве МЭБ по диагностическим тестам и вакцинам для сухопутных животных (млекопитающих, птиц и пчел). Вышеуказанным требованиям отвечает инактивированная бивалентная вакцина «СальмАбик» против сальмонеллеза птиц, производства «Абик биологические препараты, Лтд.», а с 2009 г. компании « Фибро» (США), зарегистрированной в Российской Федерации.
Цель и задачи исследований – профилактика с помощью инактивированной бивалентной вакцины против сальмонеллёза птиц, оценка её эффективности и разработка комплексных мероприятий по профилактике сальмонеллёза птиц в племенных хозяйствах БНПС «Смена».
Для достижения цели были поставлены следующие задачи:
- изучить обсемененность комбикормов, производственных объектов и готовой продукции Salmonella spp. в ФГУП ППЗ «Смена» РАСХН;
- провести оценку эффективности иммунизации птицепоголовья инактивированной бивалентной вакциной «СальмАбик» по сероконверсии;
- определить сроки устойчивости молодняка, полученного от привитых родителей инактивированной бивалентной вакциной, в экспериментах и производственных условиях;
- провести микробиологический мониторинг у павшей птицы, на объектах птицеводства и в готовой продукции после применения инактивированной бивалентной вакцины «СальмАбик»;
- разработать комплексные мероприятия по профилактике сальмонеллеза птиц в племенном птицезаводе.
Научная новизна и теоретическая значимость работы. Впервые в крупном племенном птицезаводе Российской Федерации для профилактики сальмонеллеза с положительным эффектом применяется инактивированная бивалентная вакцина «СальмАбик» против сальмонеллеза птиц, содержащая культуры S. enteritidis и S. typhimurium. Установлена специфичность и продолжительность гуморального иммунитета у привитой птицы.
В экспериментальных условиях изучена продолжительность трансовариального иммунитета у цыплят, создаваемого инактивированной бивалентной вакциной, при экспериментальном заражении патогенной культурой штамма S.enteritidis 92 Rif/R.
Для оценки эффективности инактивированной бивалентной вакцины «СальмАбик» против сальмонеллеза предлагается руководствоваться результатами проведенного микробиологического мониторинга у павшей птицы, в пробах с производственных объектов и полученной продукции птицеводства.
Установлена множественная резистентность выделенных в хозяйстве микроооганизмов к широко применяемым в птицеводстве антибиотикам, что не позволяет рекомендовать их в лечебно-профилактических целях при бактериальных болезнях птиц.
Теоретически обоснованы и разработаны комплексные мероприятия по профилактике сальмонеллёза в племенном птицезаводе, включающие применение средств специфической и неспецифической защиты.
Практическая значимость. Разработаны комплексные мероприятия по профилактике сальмонеллёза птиц, включающие применение специфических и неспецифических средств защиты: инактивированной бивалентной вакцины «СальмАбик», «Сальмофага», пробиотиков «Интестевит» и «Биокорм-Пионер».
На основании решения Совета БНПС «Смена» от №112 от 05. 04. 2008 г репродукторы 1-го порядка ГУП СО «Птицефабрика Рефтинская» в 2009 году и ООО «Равис- птицефабрика Сосновская» в 2010 году включили в комплексные мероприятия по защите предприятий от сальмонеллеза птиц инактивированную бивалентную вакцину «СальмАбик», провакцинировано в общей сложности более 1100 тыс. голов реммолодняка.
Апробация. Результаты исследований по теме диссертации доложены и одобрены на заседаниях Учёного совета ГНУ ВНИВИП РАСХН в 2010 и 2011 гг., научно-производственных конференциях, семинарах, Советах и Президиумах Советов директоров Бройлерной научно-производственной системы «Смена» в 2006 – 2011 гг.
Публикации результатов исследований. По материалам диссертации опубликованы 3 научные работы в изданиях, рекомендованных перечнем ВАК РФ.
Структура и объем работы. Диссертация изложена на 139 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка использованной литературы и приложений.
Работа иллюстрирована 27 таблицами и 2 рисунками. Список использованной литературы включает 186, в т.ч. 95 иностранных источников.
Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту:
- результаты применения в крупном племенном птицезаводе РФ инактивированной бивалентной вакцины «СальмАбик» против сальмонеллеза птиц, содержащей культуры S. enteritidis и S. typhimurium;
- оценка эффективности иммунизации птицепоголовья инактивированной бивалентной вакциной «СальмАбик» по приросту специфических антител;
-продолжительность защиты материнскими антителами, создаваемыми инактивированной бивалентной вакциной «СальмАбик», при экспериментально вызванном сальмонеллёзе;
- микробиологический мониторинг на фоне применения инактивированной бивалентной вакцины «СальмАбик»;
- теоретическое обоснование и разработка комплексных мероприятий по профилактике сальмонеллёза птиц в племптицезаводе.
2. Собственные исследования
2.1. Материалы и методы исследований
Диссертационная работа выполнена в 2003–2010 гг. в отделе микробиологии ГНУ «ВНИВИП» РАСХН и ФГУП ППЗ «Смена» РАСХН.
Микробиологический мониторинг проб кормов, патологического материала, взятого от птицы, смывов с технологических объектов и полученной продукции птицеводства, экспериментальное заражение цыплят раннего возраста S. enteritidis на фоне применения инактивированной вакцины против сальмонеллеза птиц проведены с участием сотрудников Федерального государственного учреждения науки Государственного научного центра прикладной микробиологии и биотехнологии (ФГУН ГНЦ ПМБ).
В комплексе мер борьбы с сальмонеллёзом с 2006 года и по настоящее время применяется следующая схема профилактики:
- аэрозольная обработка пробиотиком «Интестевит» (доза 5см3/м3) в выводном шкафу за 12 часов до выемки цыплят;
- выпаивание на 3-6 сутки сальмофага-энтеритидис по 0,25 дозы сухой вакцины и 0,5 дозы фага, двукратно;
-выпаивание пробиотика «Биокорм-пионер» на 10-60 сутки, курсом по 5-7 дней;
- в 80 и 110-суточном возрасте иммунизация инактивированной бивалентной вакциной «СальмАбик», изготовленной из культур Salmonella enteritidis (штаммы РТ В3 и РТ С8) и S. typhimurium (штамм РТ 2(4+), подкожно в области дорсальной поверхности груди (между крыльями) и объеме 0,5 см3 на голову.
Для оценки эффективности иммунизации использованы следующие показатели: клиническое состояние птицы, данные патологоанатомического вскрытия, показатель сохранности, результаты диагностических исследований и микробиологического мониторинга.
Из печени, селезенки и подвздошной кишки павшей или убитой птицы вырезали кусочки массой около 1 грамма, их гомогенизировали и готовили суспензию в изотоническом растворе хлорида натрия до разведения 10-5. Затем суспензию из разведений 100, 10-3 и 10-5 высевали в объеме 0,1 мл на чашки с селективной питательной средой - агар Эндо с добавлением рифампицина в концентрации 100 мкг/см3. Посевы выращивали в термостате при 37С в течение 48 часов. После окончания культивирования подсчитывали количество выросших колоний штамма S. enteritidis и рассчитывали обсеменённость внутренних органов в КОЕ/1г навески органа.
При наличии характерных для сальмонелл не менее 5 колоний проводили дальнейшее серологическое подтверждение принадлежности культур к бактериям рода Salmonella, предварительно пересевая их на поверхность среды, приготовленной из сухого питательного агара. Для серологической идентификации культур ставили РА на стекле с О-поливалентной, О- и Н-монорецепторными адсорбированными сальмонеллёзными сыворотками (ФГУП Санкт-Петербургский НИИ вакцин и сывороток).
Опыты по моделированию экспериментального сальмонеллёза цыплят проводили в виварии ФГУН ГНЦ ПМБ. Для заражения опытных (иммунных) и контрольных (неиммунных) цыплят использовали музейный штамм S.еnteritidis 92 Rif/R, устойчивый к рифампицину (МПК >200 мкг/см3), вирулентный для белых мышей (LD 50=500 КОЕ) и способный колонизировать кишечник, печень и селезенку бройлерной птицы в любом возрасте. В первом опыте заражающая доза для цыплят 2-суточного возраста составила 2,2х109 КОЕ/особь, 6-14-суточного возраста – 1,4-3,0х109 КОЕ/особь и 17-20-суточного возраста – 10,1х109 и 7,1х10 9КОЕ/особь, во втором - для 2- 16-суточных - 1-2 х109 КОЕ/особь и 18-30-суточных цыплят – 3- 5 х10 9 КОЕ/особь. Каждой особи вводили определенную дозу 18-24 часовой культуры, приготовленную на физиологическом растворе в объеме 0,2 см3.
За экспериментальными цыплятами из опытной и контрольной групп наблюдали 14 суток. Павших и убитых в конце опыта цыплят вскрывали и внутренние органы (печень, селезенку, кишечник) исследовали на наличие штамма S. enteritidis 92 Rif/R
Микробиологический мониторинг на наличие у привитой вакциной «СальмАбик» птицы сальмонелл, эшерихий, стафилококков и других бактериальных патогенов проводили ежемесячно в 9 птичниках, в которых содержалась взрослая птица в возрасте 110 – 361 суток, и в 9 птичниках, в которых содержался молодняк в возрасте 5 – 36 суток.
Как правило, бактериологическому анализу в каждом птичнике от взрослой павшей и больной птицы подвергали печень, сердце и яичники, а от молодняка печень и сердце (не менее 50 особей из каждой возрастной группы). Кроме этого, исследовали пробы слепых отростков от 50 бройлеров, поступивших в убойный цех, и 30 – 35 проб фекалий от бройлеров 25 – 27-суточного возраста, а также не менее 30 эмбрионов-задохликов разного возраста.
Образцы патологического материала от павшей птицы исследовали на наличие Salmonella spp., Escherichia coli, Staphylococcus spp. Для этого их высевали на агаризованные дифференциально-диагностические питательные среды: висмут-сульфит агар, Эндо агар и мясо-пептонный агар (производство Hi Media, Индия). После 24-48 час. инкубирования посевов при 37С проводили учет результатов. Полученные чистые культуры микроорганизмов идентифицировали по основным биохимическим свойствам с использованием тест-систем «ENTEROtest 24» - для энтеробактерий и «STAPHYtest 16» - для стафилококков (обе Lachema, Чехия).
Чувствительность выделенных культур к антибактериальным препаратам определяли диско-диффузионным методом по Керби-Бауэр.
Для подтверждения принадлежности выделенных культур к определенному серовару вида Salmonella enterica дополнительно использовали ПЦР анализ ДНК этих изолятов. Реакцию амплификации ДНК проводили с праймерами на 4 гена (invA, sefA и iag-гены инвазивности, а также iap-ген, входящий в блок генов, отвечающих за патогенность сальмонелл), используя для этого комбинированные наборы праймеров: 1-я реакция inv+sef праймеры, 2-я – iap+iag праймеры.
Для статистической обработки полученных результатов исследований использовали общепринятые методы: оценка дисперсии, стандартного отклонения и доверительного интервала варьирующих переменных, устанавливали количественные показатели связи зависимых переменных в виде коэффициентов корреляции. Для соответствующих вычислений применили программу Microsoft Excel.
2.2. Результаты собственных исследований
2.2.1. Краткая характеристика ФГУП ППЗ «Смена» и БНПС «Смена»
В Российской Федерации значительная роль в повышении генетического потенциала, внедрении интенсивных технологий производства мяса и воспроизводства птицы, достижении высоких экономических показателей и рентабельности отрасли принадлежит ведущему селекционному центру среди отечественных племенных предприятий - ФГУП ППЗ «Смена» РАСХН и созданной в 1987 году на его основе Бройлерной научно-производственной системы «Смена» (БНПС «Смена»).
В состав БНПС «Смена» входят 2 репродуктора I порядка: ГУП СО «Птицефабрика Рефтинская» и ООО «Равис-птицефабрика Сосновская», 24 репродуктора II порядка и более 20 различных предприятий (ИПС, индивидуальные предприниматели, с/х. кооперативы и др.).
Поставка племпродукции в 2009 году производилась в 45 предприятий 32-х регионов Российской Федерации и занимала в структуре бройлерного производства 27%, а также экспортировалась за пределы страны – в республики Казахстан, Армения и Узбекистан.
Используемый генетический потенциал кросса «Смена 7» позволил 80-95% хозяйств добиться среднесуточных приростов живой массы - 48-55 г, при затратах корма 1,7-1,85 к.е./кг и получить сохранность 95-96%, что обеспечивает высокую рентабельность производства бройлеров. У племенной птицы яйценоскость составила 235-238 штук на несушку при затратах корма на производство 1000 штук яиц - 2,67 – 2,75 кг и сохранности взрослой птицы - 98,0 – 98,2%. В российских производственных условиях эти результаты не уступают показателям, получаемым с зарубежных кроссов «Росс», «Кобб» и «Хаббард».
2.2.2. Эпизоотическая ситуация в ФГУП ППЗ «Смена».
В целом эпизоотическая ситуация в племптицезаводе является стабильной, чему способствует строгое выполнение плана противоэпизоотических мероприятий, разрабатываемых ежегодно ветеринарной службой и утверждаемых директором хозяйства и Главным Государственным ветеринарным инспектором Сергиево-Посадского района Московской области. План включает в себя организационно-хозйственные, ветеринарно-санитарные, диагностические и лечебно-профилактические мероприятия.
Эпизоотическую ситуацию по сальмонеллезу в племзаводе в 2003-2005 гг. характеризуют также данные микробиологических исследований по выделению сальмонелл из разных объектов птицеводства и патматериала, полученного от эмбрионов, павших птиц и кормов, которые представлены в табл. 1.
Таблица 1.
Динамика выделения сальмонелл из разных объектов птицеводства и патматериала от птиц
| Объект исследования | 2003 г. | 2004 г. | 2005 г. | ||||||
| Кол- во проб | Поло житель ных | % | Кол во про | Поло житель ных | % | Кол-во Проб | Поло житель ных | % | |
| Убойный цех, цех разделки, переработки | 240 | 19 | 7,9 | 265 | 22 | 8,3 | 286 | 26 | 9,1 |
| Готовая продукция | 133 | 23 | 17 | 146 | 25 | 17,1 | 154 | 21 | 13,6 |
| Яйцесклад | 640 | 0 | 0 | 550 | 0 | 0 | 530 | 0 | 0 |
| Инкубатор №1 | 580 | 24 | 4,1 | 580 | 15 | 2,6 | 510 | 10 | 1,9 |
| Инкубатор №2 | 580 | 10 | 1,7 | 630 | 13 | 2,06 | 550 | 8 | 1,5 |
| Патматериал | 396 | 32 | 8,0 | 515 | 36 | 6,9 | 998 | 70 | 7,01 |
| Кормовые ингредиенты | 291 | 8 | 2,7 | 269 | 22 | 8,2 | 272 | 37 | 13,6 |
Как видно из данных, представленных в табл. 1, в пробах смывов, взятых с различных производственных объектов - убойного цеха, цеха разделки и переработки, инкубаторов № 1 и 2, а также в готовой продукции, кормовых ингредиентах, патматериале обнаружены сальмонеллы в количестве от 0,9 до 17,1%. Особенно высокий их уровень был в убойном цехе, готовой продукции и в патматериале. Единственный объектом, в смывах которого за все время исследований не было выделено сальмонелл, был яйцесклад.
В 2006 году в связи с предстоящей регистрацией в Российской Федерации инактивированной бивалентной вацины «СальмАбик» (производства фирмы «Абик биологические лаборатории Лтд.», Израиль) по разрешению Главного Государственного инспектора Сергиево-Посадского района Московской области в племптицезаводе проведён производственный опыт по изучению влияния вакцины на формирование иммунитета у птицы против сальмонелла-энтеритидис и сальмонелла-тифимуриум инфекции. В связи с чем план борьбы с сальмонеллезной инфекцией был скорректирован (табл. 2).
Таблица 2.
Схема профилактики сальмонеллезной инфекции в условиях ФГУП ППЗ «Смена»
| Мероприятие | Возраст птицы, сут | Применяемый препарат, производство | Метод введения | |||
| Аэрозольная Обработка | За 12 час. до выемки цыплят в выводном шкафу | Пробиотик «Интестевит»,произ- водство НПО ЦМВЭИ | Ингаляция генераторами САГ-2М (дисп. 5 мкм), 5 см3/м3 | |||
| Вакцинация | 3-6 | Сальмофаг- энтеритидис, произв-одство ФГУП «Ставропольская биофабрика» | Выпойка, двукратно по 0,25 вакцинной дозы и 0,5 дозы фага | |||
| Обработка пробиотиками | 10 – 60 | Пробиотик «Биокорм-пионер», Производство НПО ЦМВЭИ | Выпойка через медикатор, курсами по 5-7 дней | |||
| Исследования в ККРНГА | 50 – 55 | Пуллорный эритроцитарный антиген,производства «Щелковский б/к»- фирма «Биок» | Реакция на стекле | |||
| Вакцинация | 80 | Инактивированная вакцина «Сальм Абик», производство АБИК биол. лаб. Лтд, Израиль | Подкожно по 0,5 см3. | |||
| Ревакцинация | 110 | Инактивированная вакцина «Сальм Абик», производство АБИК биол. лаб. Лтд, Израиль | Подкожно по 0,5 см3. | |||
Как видно из данных табл. 2, план предусматривает стратегию предотвращения вертикальной передачи возбудителя болезни в условиях ФГУП ППЗ «Смена» РАСХН путем применения живой и инактивированной вакцин против сальмонеллёза птиц в комбинации с препаратами конкурентной микрофлоры.
2.2.3. Результаты применения специфической профилактики сальмонеллезной инфекции у птиц инактивированной бивалентной вакциной «Сальм Абик».
Всего за период 2006-2010 гг. привито 1 201 тыс. птицы исходных линий, прародителей и родителей, в том числе в 2006 г. – 183 000, 2007 г – 288 000, 2008 г. – 250 000, 2009 г. – 210 000 и 2010 г. – 270 000 головы.
При проведении оценки эффективности вакцины учитывали следующие показатели: клиническое состояние птицы, напряженность иммунитета и данные микробиологических исследований.
За все годы (2006 - 2010 гг.) применения в хозяйстве вакцины «СальмАбик» клинических изменений в состоянии птицы не отмечено.
После двукратной иммунизации инактивированной вакциной «СальмАбик» против сальмонеллеза на 85, 115, 145, 175, 255, 300, 350 и 380 сутки совместно с центром ФГУН ГНЦ ПМБ провели серологический контроль напряженности поствакцинального иммунитета в развернутой реакции непрямой гемагглютинации (РНГА). Результаты исследований представлены в табл. 3.
Таблица 3.
Динамика титров антител у привитой птицы против сальмонеллеза (n= 25)
| Вакцинация | 1-я | 2-я | ||||||
| Возраст птицы,сут. | 85 | 115 | 145 | 175 | 255 | 300 | 350 | 380 |
| Средний титр антител | 0 | 372,0 + 25,0 | 1022,4 + 80.0 | 682,7 + 59,5 | 150,0 + 13.7 | 64,1 +5,9 | 22,4 + 3,2 | 38,4 + 3,7 |
Из приведенных в табл. 3 данных видно, что протективный уровень антител (1:40) был отмечен у птицы в 115-суточном возрасте. Максимума он достиг на 145 сутки (1:1022,4 +80,0), а затем снизился к 300 суткам к минимуму (1: 64,1+ 5,9). Таким образом, полученные данные указывают на высокую степень выработки антител у иммунизированной птицы до 300 суточного возраста (Р< 0,05).
Для микробиологических исследований брали смывы с производственных объектов (пола, гнезд, стен, подсобных помещений инкубатория, столов сортировки, лотков, ящиков и технологического оборудования), с инкубационных яиц, из клоаки у ослабленной птицы; образцы помета и патматериала (яичные фолликулы, печень, селезенка, костный мозг) от павшей птицы и замерших эмбрионов. Пробы отбирали не реже одного раза в месяц.
Результаты микробиологического мониторинга за период применения вакцины «СальмАбик» представлены в табл.4.
Таблица 4.
Выделение S.enteritidis с производственных объектов и от павшей птицы, привитой вакциной «СальмАбик»
| Объект исследования | Количество исследований | Количество случаев выделения S.enteritidis, % | |||||||||||
| 2006 г | 2007 г | 2008 г | 2006 г. | 2007 г. | 2008 г. | ||||||||
| Убойный цех, цех разделки и полуфабрикатов | 302 | 489 | 495 | 7 | 2,3 | 1 | 0,2 | 1 | 0,2 | ||||
| Готовая продукция | 162 | 200 | 225 | 20 | 12,3 | 4 | 2,0 | 0 | 0 | ||||
| Яйцесклад | 45 | 45 | 45 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | ||||
| Инкубатор №2 | 58 | 56 | 25 | 1 | 1,7 | 0 | 0 | 0 | 0 | ||||
| Инкубатор №3 | - | - | 12 - | - | 0 | 0 | |||||||
| Патматериал | 602 | 382 | 388 | 90 | 15,0 | 8 | 2,1 | 2 | 0,5 | ||||
Как следует из данных, представленных в табл. 4, применение вакцины инактивированной бивалентной «СальмАбик» против сальмонеллеза в течение 2006-2008 гг. способствовало многократному снижению выявления S.enteritidis в пробах, взятых с объектов птицеводства и от павшей птицы. Особенно это проявилось после первого года. Так, если в 2006 году количество случаев обнаружения сальмонелл составило 1,7 – 15,0%, что значительно ниже аналогичных показателей, чем до применения вакцины в 2003-2005 гг. (см. табл. 1), то уже в 2007 г. выявлено всего 15 (0,2-2,1%), а в 2008 г. 4 случая (0-0,5%).
2.2.4. Изучение эффективности трансовариального иммунитета на модели экспериментального сальмонеллеза у цыплят раннего возраста
Опыт проведён на 145 цыплятах кросса «Смена-7» (2-30 суточного возраста). В день привоза цыплят разделили на две группы: первая(75 голов) - опытная, родители которых были двукратно привиты инактивированной бивалентной вакциной «Сальм Абик», и вторая (70 голов) - контрольная, полученная от не иммунизированных родителей.
Исследование 5 образцов комбикорма, доставленного из хозяйства для проведения опыта, не выявило его инфицирования микроорганизмами.
Для моделирования экспериментального сальмонеллёза у цыплят использовали микробную культуру штамма S. enteritidis 92 Rif/R. За зараженными цыплятами из подопытной и контрольной групп наблюдали в течение 14 суток. В течение этого времени регистрировали данные по состоянию птицы (внешний вид, аппетит, подвижность). Павших цыплят вскрывали, их внутренние органы (печень и кишечник) исследовали на наличие культуры штамма S. enteritidis 92 Rif/R. Птицу, оставшуюся в живых, по истечении срока наблюдения убивали и исследовали на наличие культуры штамма S. enteritidis 92 Rif/R.
Обобщенные сравнительные данные о выделени культуры S. enteritidis 92 Rif/R от цыплят опытной (иммунной) и контрольной (неиммунной) групп спустя 14 дней после заражения представлены в табл. 5.
Таблица 5
Сравнительные данные о выделении S. enteritidis 92 Rif/R от цыплят опытной (иммунной) и контрольной (неиммунной) групп
| Под-груп-пы | Кол-во цыплят в группе | Воз-раст цыплят в день заражения (сутки) | Отношение павшие/ общее кол-во | Отношение носители/ общее кол-во | Средняя обсемененность павшего или носителя сальмонеллой КОЕ/г | ||||
| печень | кишечник | ||||||||
| Опытная группа | |||||||||
| Оп-1 | 10 | 2 | 2/10 | 0/8 | 5,07 х105 | 1,92 х105 | |||
| Оп-2 | 10 | 6 | 0/10 | 0/10 | 0 | 0 | |||
| Оп-3 | 10 | 11 | 1/10 | 0/9 | 3.33х104 | 3,79х104 | |||
| Оп-4 | 10 | 15 | 0/10 | 1/10 | 2,42х102 | 1,08 х102 | |||
| Оп-5/1 | 5 | 18 | 0/5 | 5/5 | 1,84 х103 | 9,71 х102 | |||
| Оп-5/2 | 5 | 21 | 0/5 | 5/5 | 2,90 х103 | 2,95 х103 | |||
| Оп-5/3 | 5 | 24 | 0/5 | 5/5 | 3,36 х103 | 3,39 х103 | |||
| Оп-6 | 10 | 28 | 0/10 | 10/10 | 5,75х103 | 2,70х103 | |||
| Оп-7 | 10 | 30 | 0/10 | 10/10 | 2,27х103 | 1,65х103 | |||
| Контрольная группа | |||||||||
| К-1 | 10 | 9 | 0/10 | 10/10 | 1,93х104 | 9,95х103 | |||
| К-2 | 10 | 15 | 0/10 | 10/10 | 1,79х104 | 6,58х103 | |||
| К-3 | 10 | 17 | 0/10 | 10/10 | 2,47х104 | 9,35х103 | |||
| К-4 | 10- | 20 | 0/10 | 10/10 | 5,53х103 | 1,32х103 | |||
| К-5 | 10 | 22 | 0/10 | 10/10 | 2,25х103 | 5,32х102 | |||
| К-6 | 10 | 24 | 0/10 | 9/10 | 6,07х103 | 1,57х103 | |||
| К-7 | 10 | 27 | 0/10 | 9/10 | 3,18х103 | 8,29 х102 | |||
Как следует из данных, приведенных в табл. 5, при экспериментальном заражении цыплят, полученных от родительского стада, иммунизированного инактивированной сальмонеллезной вакциной, напряженный протективный иммунитет сохраняется у подавляющего большинства птицы подгрупп ОП-1 – ОП-4 (90-100%) до 15- суточного возраста. С 18-суточного возраста напряженность иммунитета, по всей вероятности, у цыплят существенно снижается (ОП-5/1-3–ОП-7) и они становятся восприимчивыми к сальмонеллезной инфекции (S. enteritidis).
Следует акцентировать внимание на факте, важном с нашей точки зрения для борьбы с сальмонеллезом: в проведенном эксперименте 4 из 40, т. е. 10% цыплят до 15 дневного возраста оказались незащищенными от экспериментального сальмонеллеза (3 из них погибли от септического сальмонеллеза, 1 был сальмонеллоносителем). Следовательно, среди цыплят, полученных от вакцинированного инактивированной корпускулярной вакциной маточного поголовья, всегда может находиться небольшой процент восприимчивого (неиммунного) к S. enteritidis поголовья, которое может быть опасным источником инфекции в стаде.
Невакцинированная (контрольная) птица оказалась весьма восприимчивой к заражению S. enteritidis: все цыплята контрольных групп, начиная с 9 -суточного возраста (цыплят более раннего возраста в опыте не было), были обсеменены возбудителем и явились его носителем. Следовательно, вакцинация птицы против сальмонеллеза является существенным звеном в противоэпидемических мероприятиях, направленных на борьбу с этой инфекцией.
Второй опыт по изучению протективных свойств вакцины «СальмАбик» провели на 72 цыплятах-бройлерах суточного возраста, полученных от иммунизированных кур-несушек, которые были доставлены в ФГУН ГНЦ ПМБ и методом случайной выборки разделены на шесть подгрупп по 12 особей в каждой. Первая группа была заражена культурой штамма S.еnteritidis 92 Rif/R в 2-суточном, вторая – 6, третья – 10, четвертая – 14, пятая – 17 и шестая – 20-суточном возрасте.
Ввиду отсутствия в племптицезаводе птицы, не привитой против сальмонеллеза, в качестве контроля в эксперимент были взяты две группы цыплят-бройлеров однодневного возраста, полученных от не- иммунизированного родительского стада кур-несушек ЗАО «Юрьевская птицефабрика» (Владимирская область).
Первую группу в количестве 72 голов (контроль заражения) разделили на 6 подгрупп, по 12 голов в каждой. Их заражали аналогично опытной группе. Вторую контрольную группу цыплят в количестве 30 голов также разделили на 6 подгрупп, но по 5 голов в каждой. Их не вакцинировали и не заражали. В период всего эксперимента для предотвращения инфицирования сальмонеллами цыплят этой группы содержали в отдельном изоляторе.
Предварительное исследование 3 проб используемого в кормлении цыплят комбикорма не выявило в нем контаминации микроорганизмами.
Перед заражением из каждой опытной и контрольной подгрупп убивали по 2 цыпленка, отбирали пробы внутренних органов и фекалий, после чего исследовали их на обсемененность сальмонеллами прямым высевом на чашки Петри со средой Эндо или методом неселективного и селективного обогащения.
Для заражения цыплят опытных и контрольных групп использовали музейный штамм S.еnteritidis 92 Rif/R. Каждой особи вводили 0,2 см3 18-24 часовой культуры, приготовленную на физиологическом растворе.
В результате изучения обсеменённости объединённых проб внутренних органов (печень, селезенка и кишечник) и фекалий двух убитых цыплят из каждой опытной (иммунной) подгруппы до их заражения штаммом S.еnteritidis 92 Rif/R было установлено, что они не были инфицированы бактериями рода Salmonella spp. Аналогичные результаты получены у цыплят контрольных (неиммунных) подгрупп.
Результаты исследования уровня инфицированности (P,%) штаммом S.еnteritidis 92 Rif/R печени, селезенки и кишечника цыплят, родители которых были иммунизированы вакциной «СальмАбик», и контрольных (не- иммунизированных) цыплят, представлены в динамике на рис. 1.
Рисунок 1. Зависимость уровня инфицированности
печени,селезенки и кишечника цыплят от сроков заражения
штаммом S.еnteritidis 92 Rif/R
Из представленных данных на рис.1 видно, что при заражении цыплят 1 и 2-й подгрупп (2-6-суточного возраста) инфицирование печени, селезенки и кишечника не установлено, за исключением 1 пробы из 10-и, взятых из кишечника. В 3 и 4-й подгруппах инфицированность всех органов составляет 20-40%, 5-й – 70% и в 6-й подгруппе достигает 100%, что равно показателям контрольной группы.
У всех зараженных цыплят контрольных подгрупп из внутренних органов: печени, селезенки и кишечника- был выделен штамм S.еnteritidis 92 Rif/R. Самые высокие концентрации бактерии ( 1х10х105 – 1-10х107 КОЕ/г в исследуемом образце ) достигнуты во внутренних органах цыплят 1 и 2-й подгруппы и, напротив, в пробах фекалий у цыплят этих подгрупп они были более низкими (2,18-1,40х109 КОЕ/особь) по сравнению с цыплятами старших возрастов (4-6 подгрупп).
Количество возбудителя сальмонеллеза, выделенное из внутренних органов зараженных цыплят иммунной группы, было приблизительно на один порядок выше, чем у цыплят контрольной зараженной группы. В пробах фекалий от цыплят обеих групп эта разница не проведён существенна.
Таким образом, полученные в экспериментах данные свидетельствуют о высокой протективной эффективности вакцины «СальмАбик», которая обеспечивает в достаточной степени защиту бройлерных цыплят до двухнедельного возраста, наиболее критичного для заражения птицы сальмонеллами вида S.еnteritidis, основного возбудителя пищевой инфекции у человека. В наших экспериментах для заражения цыплят использовали S.еnteritidis в высоких дозах. В производственных условиях степень микробного давления значительно ниже, и это даёт основание считать применение инактивированной вакцины гарантией профилактики болезни.
2.2.5. Микробиологический мониторинг на фоне применения
инактивированной вакцины против сальмонелл.
Угроза, которую для ФГУП ППЗ «Смена» РАСХН и БНПС «Смена» представляют бактериальные болезни, определила задачу проведения микробиологического мониторинга.
Результаты микробиологического мониторинга проб патологического материала, взятых от птиц разного возраста, представлены в табл. 6.
Таблица 6.
Обнаружение Salmonella spp, E. coli, Staphylococcus spp., Proteus spp.
в патматериале птицы, привитой против сальмонеллеза
| № птичника | Возраст птицы (дней) | Выделен –ная культура | Количество колоний (*) | Бактериологче-ский диагноз |
| Взрослая птица | ||||
| 22 | 194 | - | - | - |
| 26 | 361 | Е. coli, Proteus | +++ | Колисептицемия |
| 29 | 201 | Е. coli | +++ | Колисептицемия |
| 1 | 292 | Е. coli | ++ | Колисептицемия |
| 7 | 222 | Е. coli | +++ | Колисептицемия |
| 9 | 233 | Е. coli | ++ | Колисептицемия |
| 15 | 136 | Е. coli. Proteus | +++ | Колисептицемия |
| 19 | 139 | Staphylococcus aureus | ++ | Стафилококкоз |
| 17 | 110 | E. coli | ++ | Колисептицемия |
| Молодняк | ||||
| 52 | 36 | E. coli, Proteus | ++ | Колисептицемия |
| 55 | 27 | Staphylococcus aureus | + | Стафилококкоз |
| 47 | 17 | E. coli | +++ | Колисептицемия |
| 32 | 40 | E. coli, Proteus | +++ | Колисептицемия |
| 54 | 25 | E. coli | ++ | Колисептицемия |
| 50 | 25 | E. coli, Proteus | +++ | Колисептицемия |
| 53 | 11 | Staphylococcus aureus | ++ | Стафилококкоз |
| 31 | 5 | E. coli, Proteus | +++ | Колисептицемия |
| 45 | 9 | E. coli | Колисептицемия | |
+++ - сплошной рост культуры
+ + - сотни колоний
+ - десятки колоний
Как следует из данных, представленных в табл. 6, из трупов взрослой птицы культура сальмонелл ни в одном случае не была выделена. В 7 пробах патологического материала, отобранных от взрослой птицы, выделены культуры E.coli, в двух из них в сочетании с Proteus spp., в одной пробе - культура Staphylococcus aureus, а из одной пробы бактериальные культуры выделены не были. У молодняка E. coli выделена в одной прбе, E. coli в сочетании с Proteus spp. – 4 пробах и St. aureus – в одной пробе.
Следующим этапом исследований было определение чувствительности выделенных культур - 7 Е. coli, 1 Staphylococcus aureus и 2 Proteus spp к антибиотикам. Из 13 исследованных антибактериальных препаратов выделенные культуры E. coli обладают выраженной резистентностью к доксициклину, левомицетину, фурадонину, ванкомицину, полимиксину и карбенициллину, и были чувствительны только к двум из испытанных антибиотиков - цефотаксиму и цефтриаксону (цефалоспоринам 3 поколения).
Изоляты культур Proteus (птичник №32) чувствительны к гентамицину, офлоксацину, ципрофлоксацину, цефтриаксону и цефотаксиму, тогда как
культура Proteus (птичник №26) к перечисленным антибиотикам была слабочувствительна, а характеризуется чувствительностью только к гентамицину. Выделенная из птичника № 55 культура Staphylococcus aureus характеризуется чувствительностью к гентамицину, цефтриаксону, цефотаксиму, стрептомицину, левомицетину, карбенициллину, оксациллину и устойчивостью к доксициклину, офлоксацину, ципрофлоксацину, фурадонину, ванкомицину и полимиксину.
Серологические исследования выделенных культур E. coli проводили в реакции агглютинации на стекле согласно «Инструкции» изготовителя (ОАО «Биомед»), используя следующие эшерихиозные О-cыворотки: 01, 02, 04, 08, 09, 018, 019, 020, 026, 055, 086, 0103, 0111, 0113, 0117 и 0127. Результаты её представлены в табл.7.
Таблица 7.
Серологическая идентификация культур Е. coli
| Название культуры | № птичника | Возраст птицы (дней) | Серогруппа |
| Е. coli | 52 | 36 | 0117 |
| Е. coli | 15 | 136 | Серотип не установлен |
| Е. coli | 54 | 25 | 0117 |
| Е. coli | 17 | 110 | Серотип не установлен |
| Е. coli | 1 | 292 | 0117 |
| Е. coli | 47 | 17 | Серотип не установлен |
| Е. coli | 29 | 201 | 09 |
Как следует из данных табл.7, выделенные от молодой птицы 3 изолята E. coli (птичники № 1, 52, 54) относятся к серогруппе О117, а один от взрослой птицы (птичник № 29) – к серогруппе 09. Другие изоляты серотипировать не удалось.
Результаты бактериологического исследования образцов слепых отростков на наличие Salmonella представлены в табл. 8.
Таблица 8.
Наличие бактерий рода Salmonella в пробах слепых отростков.
| № проб слепыхотрост- ков | Рост на дифференциально- диагностических средах | |
| Среда Эндо | Висмут-сульфит агар | |
| 13, 19, 20, 21, 30 | Колонии круглые, бесцветные, прозрачные | Колонии черные, с характерным металлическим блеском |
Как следует из данных, представленных в табл. 8, из 50 образцов слепых отростков, взятых от бройлеров в цехе убоя, в 5 пробах (10%) - № 13,19, 20, 21. 30 на среде Эндо и висмут-сульфит агаре выделены изоляты, которые по культурально-морфологическим свойствам предварительно отнесены к виду S. entericа, серовару S.typhimurium. Для их окончательной идентификации нами проведено биохимическое, серологическое и ПЦР тестирование.
В результате проведенного биохимического и серологического тестирования установлено: все 5 культур, выделенных из проб слепых отростков цыплят 27-сут. возраста, родители которых были привиты инактивированной вакциной «СальмАбик» (№13, 19, 20, 21, 30), были отнесены к серотипу S. typhimurium.
По результатам ПЦР тестирования установлено, что 5 изолятов из 6 также принадлежат к виду S. enterica (наличие генов inv и iag), серовару S. typhimurium (отсутствие гена sef). Изолят под №3 (21-2) по данным ПЦР
не принадлежит к роду Salmonella.
Все исследованные изоляты S. typhimurium чувствительны к достаточно широкому кругу препаратов: гентамицину. офлоксацину, ципрофлоксацину, норфлоксацину, цефотаксиму, цефтриаксону, левомицетину, сизомицину, слабо чувствительны к карбенициллину и тобрамицину, но в то же время обладают выраженной резистентностью к доксициклину, стрептомицину, фурадонину, ванкомицину, полимиксину, налидиксовой кислоте и амикаиину. Выделенные изоляты S. typhimurium по спектру чувствительности к антибиотикам оказались одинаковыми, что свидетельствует, по-видимому, о том, что они являются одним штаммом.
В результате бактериологического исследования помета от 35 цыплят 27- суточного возраста и 30 эмбрионов-задохликов разного возраста Salmonella spp. и другие микроорганизмы не выявлены ни в одном случае.
Таким образом, разработана комплексная система профилактики сальмонеллёза в племенном птицезаводе, которая включает применение сальмофага, инактивированной бивалентной вакцины «СальмАбик», пробиотиков «Интестевит» и «Биокорм-Пионер», в сочетании с ветеринарно-санитарными мероприятиями обеспечивает предотвращение заноса инфекции в племптицезавод.
3. В ы в о д ы
1. Применение в племптицезаводе мясного направления с 2006 по 2010 г. инактивированной бивалентной вакцины «СальмАбик» против сальмонеллеза птиц способствовало многократному снижению выявления S.enteritidis в пробах, взятых от павшей птицы, с объектов птицеводства и в птицеводческой продукции.
2. Вакцина «СальмАбик» за счет передачи пассивных материнских антител от привитых родителей к 1-14 - суточным цыплятам защищает их от заражения высокими дозами вирулентного штамма S.еnteritidis 92 Rif/R.
3. С увеличением возраста уровень защищенности иммунных цыплят от заражения штаммом S.еnteritidis 92 Rif/R достоверно снижается. Однако резистентность к заражению у иммунных бройлеров в возрасте 20 суток остается выше, чем у контрольных, неиммунных цыплят. Об этом свидетельствуют более низкая обсемененность (на 50%) сальмонеллами органов иммунных цыплят по сравнению с контрольными цыплятами.
4. Интактные цыплята-бройлеры чувствительны к патогенному штамму S.еnteritidis 92 Rif/R, начиная с 2-суточного возраста, были восприимчивы к инфекции, а уже в 9-суточном возрасте отмечали повышенный отход, и их внутренние органы (печень,селезенка, кишечник) обсеменялись возбудителем инфекции.
5. Результаты микробиологического мониторинга проб, взятых у павшей птицы, с объектов птицеводства и полученной продукции, могут использоваться для оценки эффективности применения инактивированной бивалентной вакцины «СальмАбик» против сальмонеллеза.
6. Установлена множественная резистентность выделенных в хозяйстве микроорганизмов к широко применяемым в птицеводстве антибиотикам, что не позволяет рекомендовать их в лечебно-профилактических целях при бактериальных болезнях птиц.
7. Вакцинация птицы против сальмонеллеза сальмофагом и инактивированной бивалентной вакциной в сочетании с пробиотиками является важным звеном в противоэпизоотических мероприятиях, направленных на борьбу с этой инфекцией.
4.Предложения для практики.
1. Разработаны комплексные мероприятия по профилактике сальмонеллеза птиц, включающие применение специфических и неспецифических средств защиты - инактивированной бивалентной вакцины «СальмАбик», «Сальмофага», пробиотиков «Интестевит» и «Биокорм-Пионер».
2. На основании решения Совета БНПС «Смена» от №112 от 05. 04. 2008 г. репродукторы 1-го порядка ГУП СО «Птицефабрика Рефтинская» в 2009 году и ООО «Равис- птицефабрика Сосновская» в 2010 году включили в комплексные мероприятия по защите предприятий от сальмонеллеза птиц инактивированную вакцину «СальмАбик». Подвергнуто вакцинации 1060 тыс. голов ремонтного молодняка.
5. Список работ, опубликованных по теме диссертации
Статьи в изданиях, рекомендованных ВАК Минобразования и науки РФ
1.Смирнов Д.Д. Опыт применения специфической профилактики сальмонелло-энтеритидис инфекции у птиц /Д.Д.Смирнов, С.М.Салгереев// Ветпатология.- 2010.-№2 (33).- С.75-77.
2. Салгереев С.М. Эффективность специфической профилактики сальмонеллеза в племенном птицезаводе /С.М.Салгереев, Э.А.Светоч, Д.Д.Смирнов //Международный ветеринарный вестник.-2010.-№4.-С.25-28.
3. Тучемский Л.И. Микробиологический мониторинг в племенном птицезаводе на фоне применения инактивированной вакцины против сальмонеллёза / Л.И.Тучемский, Д.Д.Смирнов, Э.А.Светоч // Аграрная наука.-2010.-№10.-С.31-32.
