Клинико-патогенетический анализ значения повреждений структуры днк и апоптоза лейкоцитов периферической крови у больных острыми кишечными инфекциями в динамике заболевания
На правах рукописи
КРАСАВИНА
Эмилия Николаевна
КЛИНИКО-ПАТОГЕНЕТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ЗНАЧЕНИЯ ПОВРЕЖДЕНИЙ СТРУКТУРЫ ДНК И АПОПТОЗА ЛЕЙКОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ У БОЛЬНЫХ ОСТРЫМИ КИШЕЧНЫМИ ИНФЕКЦИЯМИ В ДИНАМИКЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ
14.00.10 – инфекционные болезни
А В Т О Р Е Ф Е Р А Т
диссертации на соискание учёной степени
кандидата медицинских наук
Москва – 2006
Работа выполнена в ГОУ ВПО Московской Медицинской Академии
им. И.М. Сеченова Росздрава
Научные руководители:
Доктор медицинских наук, профессор | Малов Валерий Анатольевич |
Доктор биологических наук, профессор | Белушкина Наталья Николаевна |
Официальные оппоненты:
Доктор медицинских наук, профессор | Беляева Наталья Михайловна |
Доктор медицинских наук, профессор | Токмалаев Анатолий Карпович |
Ведущая организация: Российский государственный медицинский университет
Защита диссертации состоится « » 2007 г. в часов.
на заседании диссертационного совета Д.208.040.05 в Московской Медицинской Академии им. И.М. Сеченова (119992, г. Москва, Трубецкая ул., дом 8, строение 2).
С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной медицинской библиотеке ГОУ ВПО Московской Медицинской академии им. И.М. Сеченова Росздрава (117998, г. Москва, Нахимовский проспект, дом 49).
Автореферат разослан «____»___________2006 г.
Учёный секретарь Диссертационного Совета доктор медицинских наук, профессор | Волчкова Елена Васильевна |
Актуальность исследования
Острые кишечные инфекции (ОКИ) остаются одной из актуальных проблем практического здравоохранения во всех без исключения странах мира в связи с высоким уровнем заболеваемости и возможностью развития осложнений [Ющук Н.Д. и соавт., 2002; Лобзин Ю.В. и соавт., 2001].
Общеизвестно, что у больных ОКИ, несмотря на полиэтиологичность, в патогенезе инфекционного процесса тяжесть состояния обуславливается совокупностью проявлений диарейного и интоксикационного синдромов [Пак С.Г и соавт. 1986; Покровский В.И. и соавт., 1983]. В клинической картине инфекционных болезней синдрому интоксикации (СИ) отводится первоочередное значение.
СИ является универсальным клиническим синдромокомплексом, развитие которого типично для большинства инфекционных заболеваний, а степень его выраженности определяет тяжесть и, соответственно, исход заболевания [Пак С.Г., 2005].
На сегодняшний день установлена ведущая роль эндогенных медиаторов (ЭМ) и в частности цитокинов в регуляции ответной реакции организма на бактериальную инвазию, однако механизмы, определяющие жизненный цикл регуляторных и эффекторных клеток организма все еще находятся на стадии активного изучения. Поэтому регуляция процесса клеточной гибели или апоптоза в норме и при патологии в настоящее время является одной из центральных проблем медико-биологической науки и интенсивно изучается во всем мире.
Появление новых методических возможностей позволило регистрировать биохимические показатели клеток, находящихся на самых ранних стадиях программированной гибели (ПГ). Так, по опубликованным данным [Змызгова А.В., Москалева Е.Ю., 1999] апоптоз лейкоцитов периферической крови при ряде заболеваний, в том числе и инфекционной природы, связан с накоплением повреждений структуры ДНК клеток, представленных преимущественно в виде однонитевых разрывов (ОР), являющихся ранними проявлениями этого процесса.
При инфекционной патологии апоптоз может играть ключевую роль в исходе системной воспалительной реакции, поскольку посредством ПГ угнетается локальная тканевая деструкция, уменьшаются дальнейшие воспалительные реакции, рекрутирование иммунных клеток, а также облегчается конечный этап формирования врожденного иммунного ответа, обусловленный ограничением провоспалительного ответа. В частности, регуляция апоптоза полиморфно-ядерных лейкоцитов (ПМЯЛ) устанавливает тонкий баланс между их эффективным функционированием в качестве одного из звеньев врожденного иммунитета и своевременным безопасным удалением этих потенциально опасных клеток [Maianski N.A.et al., 2003; Parker L.C. et al., 2005].
Целью настоящего исследования явился комплексный клинико-патогенетический анализ значения повреждений структуры ДНК, представленных в виде однонитевых разрывов, и апоптоза лейкоцитов периферической крови в развитии синдрома интоксикации у больных ОКИ в динамике инфекционного процесса.
В соответствии с поставленной целью были сформулированы следующие задачи исследования:
- Изучить динамику показателей ОР ДНК и апоптоза ПМЯЛ и лимфоцитов периферической крови в зависимости от тяжести и варианта течения ОКИ.
- Исследовать состояние показателей ОР ДНК и апоптоза ПМЯЛ, лимфоцитов периферической крови у больных гастроинтестинальной формой сальмонеллеза в динамике заболевания.
- Изучить динамику показателей ОР ДНК и апоптоза ПМЯЛ и лимфоцитов периферической крови у больных пищевой токсикоинфекцией неуточненной этиологии.
- Оценить динамику состояния показателей ОР ДНК и апоптоза ПМЯЛ и лимфоцитов периферической крови у больных острой дизентерией.
- Провести корреляционный анализ значений ОР ДНК и апоптоза лейкоцитов с клинико-лабораторными параметрами синдрома интоксикации в динамике ОКИ.
Научная новизна
Впервые проведено комплексное исследование показателей апоптоза и степени повреждения ДНК лимфоцитов и нейтрофилов периферической крови у больных ОКИ различной этиологии в динамике развития инфекционного процесса.
Впервые у больных ОКИ обнаружены закономерные изменения показателей повреждения ДНК, представленных в виде ОР, и апоптоза лейкоцитов периферической крови в зависимости от тяжести течения и периода заболевания.
Впервые показано, что у больных ОКИ различной этиологии во все периоды заболевания наблюдаются достоверно более высокие показатели повреждения структуры ДНК ПМЯЛ периферической крови по сравнению с контрольной группой.
Впервые выявлено, что у больных ОКИ нейтрофилы периферической крови в острый период заболевания в большей степени, чем лимфоциты подвержены апоптозу.
Установлено, что у пациентов выявляются однотипные изменения в показателях программированной гибели лейкоцитов периферической крови независимо от этиологии ОКИ.
У больных ОКИ в стадии реконвалесценции установлена достоверная корреляция между параметрами начальных и завершающих проявлений программированной гибели лейкоцитов периферической крови, что свидетельствует о наличии в циркуляторном русле как клеток в состоянии апоптоза, так и коммитированных к нему.
Впервые отмечено, что у больных ОКИ на высоте клинических проявлений интоксикации получена достоверная корреляция между начальными проявлениями программированной гибели (ОР ДНК) нейтрофилов и лейкоцитарным индексом интоксикации (ЛИИ).
Практическая ценность работы
На основании проведенных исследований выявлена взаимосвязь между показателями начальных проявлений апоптоза лейкоцитов периферической крови больных ОКИ различной этиологии в виде ОР ДНК и объективным критерием выраженности интоксикационного синдрома, представленным в виде интегрального показателя - ЛИИ.
Результаты исследования ОР ДНК и апоптоза лейкоцитов периферической крови больных ОКИ определили возможность их использования в качестве дополнительного критерия при оценке тяжести и длительности течения инфекционного процесса.
Полученные результаты позволяют расценивать регистрацию повреждений ДНК, представленных в виде ОР, в качестве доступного и адекватного теста для выявления клеток на ранних стадиях апоптоза у больных ОКИ.
Применение используемых нами методик может быть рекомендовано при изучении особенностей патогенеза СИ и при других инфекционных нозологиях, в качестве дополнительного инструмента, в том числе для определения роли и значения функциональной активности ПМЯЛ, как важнейшего показателя системы неспецифического иммунитета.
Положения, выносимые на защиту
У большинства больных независимо от этиологии ОКИ отмечалось возрастание показателей ОР ДНК нейтрофилов периферической крови в зависимости от периода заболевания.
У больных ОКИ отмечено снижение показателей апоптоза ПМЯЛ в период разгара заболевания по сравнению с показателями группы контроля. В период ранней реконвалесценции у пациентов ОКИ выявлено повышение показателей ОР ДНК и апоптоза ПМЯЛ не только по сравнению с показателями в группе контроля но, также в сопоставлении с начальными величинами.
Отмечено различие в регистрируемых показателях (ОР ДНК и апоптоза) ПМЯЛ в зависимости от тяжести инфекционного процесса у больных ОКИ.
В период ранней реконвалесценции, при купировании основных проявлений заболевания показатели апоптоза нейтрофилов периферической крови у больных ОКИ достигали своего пика, свидетельствуя о сохраняющихся патоморфологических реакциях.
Отмечено достоверно значимое увеличение значений апоптоза лимфоцитов периферической крови у пациентов ОКИ при среднетяжелом течении в период разгара заболевания, с последующим достоверным снижением в период реконвалесценции, но с сохраняющимся превышением этого показателя от группы контроля.
Определена взаимосвязь объективного интегрального показателя СИ – ЛИИ с показателями повреждения структуры ДНК нейтрофилов, в виде ОР у больных ОКИ.
Внедрение результатов работы
Результаты настоящего исследования используются в работе 11 инфекционного отделения ГКБ № 4. Материалы работы включены в учебный курс кафедры инфекционных болезней ММА им. И.М. Сеченова и используются в учебном процессе при преподавании данного раздела.
Апробация работы
Основные положения и результаты исследования представлены на юбилейной научно-практической конференции «Инфекционные и паразитарные болезни в современном обществе. Клинико-лабораторное обеспечение инфектологии», посвященной 80-летию образования кафедры инфекционных болезней ММА им. И.М. Сеченова (Москва 22-23 мая 2003г.); III Конференции молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины» (Москва, 20-24 января 2004г.); 1-ой Международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность» (Москва 26-28 октября 2004г.); VII Российском съезде инфекционистов «Новые технологии в диагностике и лечении инфекционных болезней» (Нижний Новгород, 25-27 октября 2006г.); Российском Медицинском Форуме «Фундаментальная наука и практика» (Москва 18-20 октября 2006г.), а также неоднократно обсуждались на научно-практических конференциях кафедры инфекционных болезней. Диссертация апробирована на совместном заседании кафедры инфекционных болезней, лаборатории по изучению токсических и септических состояний и кафедры биохимии ММА им. И.М. Сеченова 29 июня 2006г.
Публикации
По теме диссертации опубликовано 9 научных работ.
Объем и структура диссертации
Диссертационная работа изложена на 145 страницах машинописного текста и состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, 4 глав результатов собственных исследований, заключения, выводов, списка цитированной литературы, включающего 182 источника. Полученные результаты иллюстрированы 31 таблицей, 9 диаграммами и 12 рисунками, 6 выписками из историй болезни.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
Материалы и методы исследования
Клиническое обследование больных проводилось в период с 2003 по 2004 гг. включительно на базах кафедры инфекционных болезней ММА им. И.М. Сеченова (зав. кафедрой - д.м.н., профессор С.Г. Пак) в отделениях острых кишечных инфекций в КИБ № 2 (глав. врач – В.А. Мясников), в ГКБ № 4 (глав. врач – С.К. Романов). Исследование ОР ДНК и апоптоза лейкоцитов периферической крови больных проводилось в лаборатории молекулярной биологии и биохимии НИИ молекулярной медицины ММА им. И.М. Сеченова.
В соответствии с целью исследования под нашим наблюдением находился 81 пациент ОКИ: 43 женщины (53,1%) и 38 мужчин (46,9%). Все пациенты были в возрасте от 16 до 80 лет, из них в возрасте от 20 до 40 лет - 52 пациента (64,2%), до 20 лет - 11 больных (13,6%), от 40 до 65 лет - 12 больных (14,8%), лица старше 65 лет составили 7,4%. Средний возраст обследованного контингента составил 34 года.
Сопутствующие заболевания на основании анамнестических данных выявлялись у 28 больных (34,6%), из них у 23 пациентов обнаруживалась патология со стороны желудочно-кишечного тракта, вне стадии обострения.
Критериями исключения больных из исследования служили ВИЧ-инфекция, хронические вирусные гепатиты, сопутствующие терапевтические заболевания в стадии обострения, а также прием больными противовирусных, иммуномодулирующих и гормональных препаратов в течение последнего года.
Этиология заболевания и клинический диагноз устанавливались на основании данных клинического наблюдения, эпидемиологического анамнеза, лабораторных исследований, включавших бактериологические и серологические (РНГА с шигеллёзными и сальмонеллёзными диагностикумами) анализы. Определение степени тяжести ОКИ проводили согласно разработанным клинико-диагностическим критериям в зависимости от установленной нозологии [Покровский В.И.,1978]. Нами было обследованы пациенты с легким и среднетяжелым течением ОКИ.
Распределение наблюдаемых больных по нозологическим формам, вариантам течения и тяжести заболевания ОКИ представлены в таблицах 1 и 2.
Таблица 1. Распределение наблюдаемых больных по тяжести течения заболевания.
Нозологическая форма | Варианты тяжести течения (абс/отн) | |
легкое | среднетяжелое | |
Сальмонеллез, гастроинтестинальная форма (ГФС), n=31 | 6 (19,4%) | 25 (80,6%) |
Пищевые токсикоинфекции (ПТИ), n=28 | 15 (53,6%) | 13 (46,4%) |
Острая дизентерия (ОД), n=22 | 7 (31,8%) | 15 (68,2%) |
Итого, n= 81 | 28 (34,6%) | 53 (65,4%) |
У обследованных нами больных было диагностировано три варианта течения ОКИ: гастроэнтеритический (ГЭ), гастроэнтероколитический (ГЭК) и колитический (таблица 2).
Таблица 2. Варианты течения ОКИ у наблюдаемых больных.
Нозологическая форма | Варианты течения (абс/отн) | ||
ГЭ | ГЭК | колитический | |
ГФС (n=31) | 14 (17,3%) | 17 (21,0%) | - |
ПТИ (n=28) | 20 (24,7%) | 8 (9,9%) | - |
ОД (n=22) | - | 12 (14,8%) | 10 (12,3%) |
Итого | 34 (42%) | 37 (45,7%) | 10 (12,3%) |
Лечение больных осуществляли в соответствии с общепринятыми рекомендациями [Бродов Л.Е., Ющук Н.Д., 1997].
Группа контроля, состоящая из 20 человек, была представлена практически здоровыми донорами, сопоставимыми по полу и возрасту с обследованными пациентами, в соответствии с критериями исключения.
Забор крови для выполняемых исследований осуществляли дважды: при поступлении больных в стационар, в период разгара заболевания (1-3 сутки от начала болезни) и в период ранней реконвалесценции (на 5-7 сутки заболевания), после проведенного лечения. Забор венозной крови у пациентов производился утром, натощак, до начала лечебно-диагностических процедур.
Выделение мононуклеарных и полиморфноядерных лейкоцитов из периферической крови больных ОКИ.
Лимфоциты выделяли из цельной венозной крови методом градиентного центрифугирования в растворе фиколла-пак (p=1,077 г/мл). Гранулоциты получали из фракции клеток, оседающих на дно пробирки, при центрифугировании в градиенте фиколла–пак. Гранулоциты очищали от эритроцитов методом осмотического шока в ледяной бане [Ferrate A., Thong Y.,1978].
Оценка степени повреждения ДНК лейкоцитов проводилась с помощью модифицированного прямого флуориметрического метода с бромистым этидием в качестве флюорофора [Birnboim H.C., 1981]. Измеряли интенсивность флуоресценции ДНК - лизатов проб: (Т) - не подвергшихся щелочной денатурации, (Р) - после ограниченного щелочного лизиса в стандартных условиях (1 час инкубации лизата клеток в щелочном растворе при температуре 15°С), а также (В) - фоновую флуоресценцию проб с полностью денатурированной ДНК.
В дальнейшем рассчитывали величину (Д), в %, соответствующую доле двунитевой ДНК в стандартных условиях лизиса, по формуле: Д = (Р-В)/(Т-В)х100%, где Т, Р и В – средние показатели интенсивности флуоресценции соответствующих проб. Повреждение структуры ДНК, представленное в виде однонитевых разрывов (ОР) ДНК, в % определяли по формуле: ОР=100-Д. Величина ОР использовалась в качестве непосредственного показателя для количественной оценки степени повреждения ДНК клеток; при этом (ОР1)- показатели однонитевых разрывов ДНК клеток периода разгара заболевания, (ОР2)- показатели однонитевых разрывов ДНК клеток периода реконвалесценции.
Регистрация апоптоза лейкоцитов осуществлялась с помощью проточной цитофлуориметрии после окрашивания ДНК йодистым пропидием в качестве флуорохрома и измерения процента клеток в состоянии апоптоза на цитофлуориметре Epics XL-2 [Gahon A.J. et al., 1995].
Клетки в концентрации 1 млн./мл фиксировали в 70% ледяном этаноле в течение 30-60 мин. при 4С. Затем клетки дважды отмывали от этанола в фосфатно-солевом буфере и ресуспендировали в 1 мл ДНК-окрашивающего реагента в течение 1 часа при комнатной температуре. Окрашенные клетки немедленно анализировали на проточном цитофлуориметре при длине волны возбуждения 488 нм и длине волны эмиссии 680 нм. Процент клеток в состоянии апоптоза (гиподиплоидных клеток со сниженной по сравнению с диплоидными флуоресценцией) подсчитывали по программе STAT PACK, анализируя флуоресценцию не менее 20 000 клеток в каждом образце.
Лейкоцитарный индекс интоксикации (ЛИИ) рассчитывали по формуле: ЛИИ = (4М+3Ю+2П+С) * (Пл + 1) / (Л+МО) * (Э+1) [Кальф-Калиф Я.Я., 1950] на основании результатов общего анализа крови. Где (М)-миелоциты, (Ю)-юные нейтрофилы, (П)-палочкоядерные нейтрофилы, (С)-сегментоядерные нейтрофилы, (МО)-моноциты, (Э)-эозинофилы, (Л)-лимфоциты, (Пл)-плазматические клетки.
Статистический анализ
Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью компьютерной программы «Epi Info 5,0», с использованием метода дисперсионного анализа. Для протяженных переменных рассчитывали минимальное и максимальное значения, средние величины, их ошибки и выборочное среднеквадратичное (стандартное) отклонение. Полученные результаты представлены в диссертации в таблицах в виде средних значений (М) ± ошибка среднего, %. Достоверность различия средних значений оценивалась с помощью теста One Way ANOVA. Уровень значимости менее 0,05 рассматривался как статистически достоверный (вероятность критерия р более 95%). Взаимосвязь оцениваемых параметров характеризовалась с использованием коэффициента корреляции Пирсона (r), статистически значимыми считали значения при p<0,05.
Результаты исследования и их обсуждение
Установлено, что у всех обследованных больных ОКИ в период разгара заболевания на высоте проявлений СИ отмечалось статистически достоверное возрастание показателей ОР1 ДНК нейтрофилов, по сравнению с показателями ОР ДНК клеток группы контроля.
У больных при легком течении заболевания показатели ОР1 ДНК составили 15,31±1,21%, при среднетяжелом течении ОКИ - 21,24±1,13%, в группе контроля соответственно - 10,79±1,25%, p<0,05.
Одновременное исследование апоптоза нейтрофилов у пациентов ОКИ в 1-3 дни болезни выявило, что на высоте проявлений клинических симптомов заболевания показатели апоптоза у больных, как с легким (4,39±0,34%), так и среднетяжелым течением ОКИ (4,58±0,24%) оказывались на достоверно более низких значениях, чем в группе контроля (5,88±0,38%), p=0,039.
В динамике заболевания на 5-7 день болезни у реконвалесцентов ОКИ нами было отмечено дальнейшее увеличение значений ОР2 ДНК ПМЯЛ до 22,79±1,39% при легком течении и до 28,71±1,4% при среднетяжелом течении заболевания, с достоверным превышением показателей ОР ДНК группы контроля и значений начального периода в каждой из групп (p<0,001).
При этом показатели апоптоза ПМЯЛ у реконвалесцентов ОКИ также возрастали по сравнению с начальными значениями и величинами группы контроля (p<0,001). У больных ОКИ легкого течения эти показатели составили- 9,71±0,22%,тогда как при среднетяжелом течении заболевания отмечались максимальные значения ПМЯЛ в состоянии апоптоза - 14,12±0,18%.
При изучении ОР ДНК лимфоцитов пациентов получено, что величины ОР ДНК клеток и в период разгара заболевания и при ранней реконвалесценции независимо от тяжести течения ОКИ регистрировались практически на одних цифрах с контрольными значениями. Так при легком течении ОКИ ОР1 ДНК лимфоцитов составили 14,77±1,8%, ОР2 ДНК - 14,52±1,28%,; при среднетяжелом течении заболевания ОР1 ДНК лимфоцитов достигали 18,62±1,48%, ОР2 ДНК - 14,59±0,67, в контрольной группе - 14,22±1,48% (р=0,128).
При изучении показателей апоптоза лимфоцитов получено, что в начальном периоде ОКИ у пациентов и при легком, и при среднетяжелом течении заболевания отмечалось увеличение клеток в состоянии апоптоза (3,25± 0,52% и 5,11±0,62%, соответственно) по сравнению с показателями контрольной группы (1,03±0,15%), р=0,002. Интересно, что в динамике заболевания у реконвалесцентов ОКИ легкого течения средние значения показателей апоптоза лимфоцитов регистрировались практически на тех же цифрах (3,23±0,61), что и в 1-3 день болезни, тогда как у больных при среднетяжелом течении снижались до 2,51±0,38, однако превышали значения группы контроля в 2 раза.
На основании полученных данных можно предположить, что несмотря на выявляемую общую закономерность в изменении изучаемых показателей, у пациентов при среднетяжелом течении ОКИ отмечались достоверно более высокие показатели ОР ДНК ПМЯЛ, по сравнению с соответствующими значениями у больных ОКИ легкого течения как в период разгара, так и при ранней реконвалесценции. Следовательно, степень повреждений структуры ДНК ПМЯЛ может зависеть от интенсивности и длительности инфекционного процесса. Поскольку известно, что активные молекулы кислорода, эндогенно продуцируемые гранулоцитами и моноцитами, при воспалении могут вызывать повреждения ДНК клеток, приводя к образованию ОР ДНК.
Полученные результаты подтверждают литературные данные о том, что спонтанный апоптоз нейтрофилов при тяжелой инфекции снижается ниже показателей, регистрируемых у здоровых доноров [Keel M.U.,et al. 1997; Oberholzer C.A, et al., 2001]. Интересно, что фагоциты не только сами подвергаются повреждающему воздействию окислительного взрыва, но также способны индуцировать апоптоз лимфоцитов.
Таким образом, снижение апоптоза ПМЯЛ в период разгара инфекционного заболевания на высоте клинических проявлений СИ, может объясняться пролонгированием жизненного цикла нейтрофилов при действии ЭМ. Провоспалительные цитокины, секретируемые макрофагами и нейтрофилами при праймировании их ЛПС, могут содействовать ингибированию программированной гибели ПМЯЛ [Brannigan A.E. et al., 2000; Asensi E. et al., 2004]. Так, ингибирование апоптоза ПМЯЛ периферической крови пациентов ОКИ в 1-3 день болезни, по - видимому связано с действием ЭМ, в частности провоспалительных цитокинов, задерживающих спонтанный апоптоз нейтрофилов. Выявленное увеличение апоптоза нейтрофилов в период реконвалесценции у больных ОКИ может быть связано с увеличением в данные сроки заболевания ЭМ, в частности IL-10.
По данным литературы [Byrne A., Reen D.J., 2002], в условиях эксперимента, было установлено, что IL-10 является одним из основных регуляторов жизненного цикла нейтрофилов при воспалительном ответе и, в частности способствует индукции апоптоза в исходе воспаления.
В соответствии с проведенным анализом у всех больных с ГЭ и ГЭК, а также с колитическим вариантом ОКИ во все периоды заболевания отмечались однонаправленные изменения изучаемых показателей: увеличение значений ОР ДНК ПМЯЛ по сравнению со значениями группы контроля, как на высоте клинических проявлений, так и при ранней реконвалесценции (p=0,003). При этом статистически значимо показатели ОР ДНК между группами с различными клиническими вариантами ОКИ в соответствующие периоды заболевания не различались (p=0,384), что может свидетельствовать о едином механизме, приводящем к повреждению ДНК независимо от варианта течения ОКИ.
При всех вариантах ОКИ в период разгара заболевания было отмечено уменьшение нейтрофилов в состоянии апоптоза при ГЭ и ГЭК вариантах до 4,52±0,29% и 4,55±0,30% соответственно, при колитическом варианте до 4,35±0,61% в группе контроля - 5,88±0,38%, p=0,039.
В период ранней реконвалесценции у пациентов ОКИ отмечалось значительное увеличение апоптотических ПМЯЛ по сравнению с контрольными величинами и начальными значениям в соответствующих группах: при ГЭ варианте ОКИ до 12,22±0,29%, при ГЭК до 12,65±0,40%, у больных с колитическим вариантом ОКИ до 13,69±0,39%, р<0,05. Достоверных различий по показателям апоптоза между группами больных с различными вариантами ОКИ, как в период разгара заболевания, так и при ранней реконвалесценции выявлено не было (p>0,05).
Полученные данные свидетельствуют о том, что независимо от варианта течения заболевания, каждый из которых имеет свои клинические особенности, прослеживается единая тенденция изменения показателей ОР ДНК и апоптоза ПМЯЛ.
При анализе ОР ДНК лимфоцитов у пациентов с различными вариантами течения ОКИ в период разгара болезни и при регрессе основных клинических симптомов, к 5-7 дню болезни нами было установлено, что средние значения ОР ДНК лимфоцитов при всех вариантах течения заболевания оставались в пределах доверительных границ контрольной группы (р>0,05).
При анализе параметров апоптоза лимфоцитов у больных с различными вариантами ОКИ в период разгара заболевания обнаружено, что значения апоптоза лимфоцитов достоверно значимо превышали соответствующие показатели контрольной группы и составили: у больных с ГЭ вариантом ОКИ - 3,94±0,87%, у пациентов с ГЭК - 3,84±0,45%, с колитическим вариантом - 7,87±0,61%, в группе контроля соответственно -1,03±0,15%, р<0,001.
Нами отмечено, что на 5-7 день болезни показатели апоптоза лимфоцитов больных с колитическим вариантом ОКИ практически достигали величин группы контроля (1,99±0,45%), тогда как у больных ГЭ и ГЭК вариантами заболевания показатели апоптоза несколько снижались до 2,72±0,55% и 3,13±0,52% соответственно, но оставались повышенными статистически достоверно не различаясь с начальными значениями в соответствующих группах (р>0,05).
Исходя из полученных данных, можно заключить, что изменения показателей ОР ДНК нейтрофилов и лимфоцитов носили разнонаправленный характер, при этом выраженность изменений ряда показателей в большей степени зависела от тяжести течения заболевания, чем от клинического варианта ОКИ.
При корреляционном анализе показателей апоптоза и ОР ДНК ПМЯЛ у больных ОКИ в 1-3 сутки от начала заболевания полученная взаимосвязь между исследуемыми величинами оказалась статистически малозначимой, вне зависимости от тяжести заболевания (r=0,075, р=0,512).
Интересно, что на 5-7 сутки болезни у пациентов ОКИ доля ПМЯЛ в состоянии апоптоза с высокой значимостью коррелировала со степенью повреждения ДНК нейтрофилов, в соответствующий период заболевания (r=0,331, р=0,003). Таким образом, нами было установлено, что в период ранней реконвалесценции у больных ОКИ вместе с высокими показателями апоптоза ПМЯЛ регистрировались и более высокие значения повреждений структуры ДНК клеток. Взаимосвязь исследуемых показателей (ОР ДНК и апоптоза клеток) подтверждается литературными данными [Буеверов А.О. и соавт., 2000] о том, что накопление ОР ДНК пря ряде заболеваний свидетельствует о начальных проявлениях апоптоза клеток.
При изучении взаимосвязи показателей ОР ДНК и апоптоза лимфоцитов у больных ОКИ с различной тяжестью течения заболевания нами было установлено, что у реконвалесцентов ОКИ (5-7 день болезни) доля лимфоцитов в состоянии апоптоза оказывалась пропорциональна показателям ОР2 ДНК в соответствующий период заболевания.
Регистрируемые показатели апоптоза и ОР ДНК лимфоцитов реконвалесцентов, были достоверно взаимосвязаны: у больных с высокими значениями апоптоза лимфоцитов выявлялись и большие значения ОР2 ДНК (r=0,440, р<0,001).
Из полученных результатов следует то, что в остром периоде заболевания у больных ОКИ ПГ лейкоцитов может регулироваться при лиганд - рецепторном взаимодействии и внутренний путь индукции апоптоза, обусловленный накоплением ОР ДНК, не всегда играет ведущую роль в качестве пускового механизма при реализации программы гибели клеток.
При динамическом изучении ОР ДНК и апоптоза клеток в зависимости от этиологии ОКИ были получены следующие результаты.
Гастроинтестинальная форма сальмонеллёза (ГФС) была диагностирована у 31 пациента, находившегося под нашим наблюдением: у 16 мужчин и 15 женщин. Диагноз ГФС устанавливался на основании клинико-анамнестических данных и во всех случаях сопровождался бактериологическим подтверждением. В 71,0% случаев в качестве этиологического штамма высевалась культура S.enteritidis группы D.
У больных ГФС, как при легком, так и при среднетяжелом течении заболевания на высоте клинических проявлений СИ нами было отмечено повышение ОР1 ДНК нейтрофилов. В период разгара заболевания отмечалось достоверно значимое возрастание показателя ОР1 ДНК ПМЯЛ при легком течении ГФС в 1,6 раза, при среднетяжелом в 1,9 раза по сравнению с показателями группы контроля (р<0,001). Несмотря на отчетливую тенденцию к более высоким значениям ОР1 ДНК ПМЯЛ у больных ГФС среднетяжелого течения (24,34±1,68%), достоверных различий по данному показателю с соответствующими значениями ОР1 ДНК ПМЯЛ пациентов с легким течением заболевания (17,67±2,47%) получено не было, р=0,074. Необходимо отметить, что показатели апоптоза на высоте клинических проявлений у больных ГФС легкого течения (4,30±0,81%) и среднетяжелого течения (4,63±0,32%) оставались в пределах доверительных границ контрольной группы (5,88±0,38%, соответственно, р>0,05).
В стадии реконвалесценции у больных при среднетяжелом течении ГФС были диагностированы максимальные значения ОР2 ДНК ПМЯЛ - 29,71±2,04%, в 1,4 раза превышавшие соответствующие значения (20,58±2,69%) больных с легким течением ГФС, р=0,044. При этом в период ранней реконвалесценции у больных ГФС было также документировано увеличение показателей апоптоза ПМЯЛ, в зависимости от тяжести течения заболевания (р<0,001). На 5-7 день болезни наибольшие значения апоптоза гранулоцитов (14,35±0,25%) регистрировались у больных ГФС среднетяжелого течения.
Таким образом, результаты настоящего исследования показывают, что у больных и при легком, и при среднетяжелом течении ГФС на высоте клинических проявлений СИ отмечается возрастание показателей ОР ДНК при близких к контрольным значениях апоптоза ПМЯЛ, тогда как в период реконвалесценции выявляется увеличение количества нейтрофилов в состоянии апоптоза при высоких значениях ОР ДНК (в соответствии с тяжестью течения инфекционного процесса).
Нами отмечено, что у больных ГФС мы не получили статистически значимой корреляции между показателями ОР ДНК и апоптоза ПМЯЛ, как в период разгара заболевания (r=0,204, р=0,280), так и при ранней реконвалесценции (r=0,310, р=0,096).
При изучении ОР ДНК лимфоцитов у больных ГФС в острый период заболевания отчетливо выявлялись различия по данному показателю в зависимости от тяжести течения заболевания. При легком течении ГФС нами отмечался несущественный процент повреждений ОР1 ДНК лимфоцитов (7,46±1,54%), тогда как при среднетяжелом течении ГФС в период разгара заболевания регистрировалось статистически значимое увеличение ОР1 ДНК до 21,48±1,88%, что уже в 1,5 раза превышало контрольные значения (14,22±1,48%), р<0,05. Показатели апоптоза лимфоцитов больных ГФС в 1-3 день болезни возрастали независимо от тяжести течения заболевания.
У реконвалесцентов ГФС показатели ОР2 ДНК лимфоцитов оказывались в пределах доверительных границ контрольной группы, тогда как показатели апоптоза зависели от тяжести течения ГФС.
Интересно, что у реконвалесцентов с легким течением ГФС значения апоптоза лимфоцитов регистрировались на более высоких цифрах (5,74±2,47%), чем у больных при среднетяжелом течении заболевания (2,21±0,42%), p<0,05.
Среди обследованных больных, с диагнозом пищевая токсикоинфекция (ПТИ) неуточненной этиологии наблюдались 13 мужчин (46,4%) и 15 женщин (53,6%), диагноз у которых устанавливался на основании клинико-анамнестических данных и подтверждался отрицательными бактериологическими и серологическими анализами.
По полученным данным, показатели ОР1 ДНК ПМЯЛ у больных ПТИ в 1-3 сутки от начала заболевания статистически значимо превышали значения контрольной группы и составляли при легком - 16,53±1,52% и при среднетяжелом - 21,97±2,28%, в группе контроля 10,79±1,25% соответственно, р<0,001. При этом величины ОР1 ДНК нейтрофилов больных со среднетяжелым течением ПТИ, достигая максимальных значений, достоверно превышали соответствующие показатели в группе больных с легким течением ПТИ в этот период заболевания (р<0,001).
На пике проявлений СИ у больных ПТИ легкого течения высокий процент повреждений ДНК ПМЯЛ (16,53±1,52%) регистрировался при «нормальных» значениях апоптоза нейтрофилов (4,88±0,51%), тогда как у больных ПТИ среднетяжелого течения в период разгара заболевания при высоком среднем показателе ОР1 ДНК (21,97±2,28%) значения апоптоза клеток статистически достоверно снижались до 3,89±0,36%, по сравнению с контрольными величинами (р=0,013).
В динамике заболевания нами было документировано увеличение показателей ОР2 ДНК нейтрофилов у больных как с легким, так и среднетяжелым течением ПТИ по сравнению с контрольными величинами в 2,1 и 2,6 раза соответственно, также с одновременным увеличением ПМЯЛ в состоянии апоптоза.
Так в группе больных с легким течением заболевания значения апоптоза ПМЯЛ превысили контрольные в 1,6 раза и составили 9,68±0,37%, тогда как у пациентов ПТИ среднетяжелого течения эти значения (13,78±0,36%) превышали контрольные уже в 2,3 раза, р<0,001.
При анализе динамики изучаемых показателей лимфоцитов пациентов ПТИ неуточненной этиологии мы обнаружили, что величины ОР ДНК лимфоцитов, как при легком, так и при среднетяжелом течении ПТИ в 1-3 дни болезни, а также в период ранней реконвалесценции статистически достоверно не различались с показателями группы контроля (р>0,05). Тогда как при регистрации апоптоза лимфоцитов у больных с различной тяжестью течения ПТИ нами получена иная динамика исследуемых величин: у больных ПТИ легкого течения на высоте клинических проявлений заболевания отмечалось увеличение количества апоптотических лимфоцитов до 4,20±0,90% по сравнению с показателями группы контроля - 1,03±0,15%, р=0,011. У больных при среднетяжелом течении заболевания нами наблюдалась аналогичная тенденция, но показатели апоптоза лимфоцитов достигали более высоких значений 6,55±2,21%, по сравнению с контрольными величинами, р<0,05.
В периоде ранней реконвалесценции на 5-7 день болезни мы отметили снижение показателей апоптоза лимфоцитов в обеих группах: с легким течением ПТИ до 2,48±0,64%, со среднетяжелым до 3,96±1,58%. Таким образом, показатели апоптоза реконвалесцентов снижались, но оставались повышенными по сравнению со значениями контрольной группы (p=0,078).
При проведении корреляционного анализа у больных ПТИ отмечалась взаимосвязь между показателями ОР2 ДНК лимфоцитов и показателями апоптоза лимфоцитов периода реконвалесценции (r=0,710, p=0,001), так у пациентов с высоким процентом повреждений ДНК (в виде ОР) выявлялись и большие значения апоптотических лимфоцитов.
Острая дизентерия (ОД) была диагностирована у 9 мужчин и 13 женщин. Диагноз ОД устанавливался на основании клинико-анамнестических данных и во всех случаях сопровождался бактериологическим подтверждением: в 86,3% случаев в качестве этиологического штамма высевалась культура Shigella sonnei.
В остром периоде заболевания показатели ОР1 ДНК ПМЯЛ у больных зависели от тяжести течения ОД.
У больных с легким течением ОД значения ОР1 ДНК ПМЯЛ в 1-3 день болезни регистрировались практически на тех же цифрах (10,69±2,39 %), что и в контрольной группе (10,79±1,25%, соответственно р>0,05), а при среднетяжелом течении заболевания у пациентов выявлялись достоверно более высокие показатели ОР1 ДНК (15,73±1,19%) по сравнению с величинами группы контроля (р<0,05).
Также у больных с легким течением ОД в период разгара заболевания было обнаружено уменьшение количества гранулоцитов в состоянии апоптоза до 3,43±0,28% по сравнению со значениями контрольной группы (р<0,05). Тогда как в группе больных ОД среднетяжелого течения апоптоз нейтрофилов регистрировался практически на тех же цифрах (5,09±0,59%), что в контрольной группе (5,88±0,38%), соответственно р>0,05.
В динамике инфекционного процесса, на 5-7 сутки при купировании основных клинических проявлений ОД, у наблюдавшихся пациентов обеих групп были отмечены высокие показатели ОР2 ДНК ПМЯЛ по сравнению с начальными и контрольными значениями. В частности, при легком течении ОД эти показатели составили 24,63±2,31%, при среднетяжелом течении ОД - 27,66±2,17% (р<0,001). Также у реконвалесцентов ОД регистрировалось существенное увеличение количества нейтрофилов в состоянии апоптоза в соответствии с тяжестью течения заболевания по сравнению, как с контрольными, так и начальными значениями в группах. При легком течении ОД апоптоз нейтрофилов реконвалесцентов достигал показателей 10,18±0,30%, при среднетяжелом 14,03±0,35%, р<0,001.
При анализе значений ОР ДНК лимфоцитов больных ОД нами были документированы следующие изменения: у больных с легким течением ОД в 1-3 день болезни отмечалась тенденция к увеличению ОР1 ДНК лимфоцитов, хотя статистически достоверно эти показатели у больных как с легким, так и среднетяжелым течением заболевания не превышали значений группы контроля, р>0,05.
Нами выявлено, что при легком течении ОД апоптоз лимфоцитов в начальный период заболевания незначительно увеличивался до 1,80±0,28%, а при среднетяжелом возрастал до 7,21±0,52%, значимо превышая контрольные значения (1,03±0,15%) и показатели апоптоза лимфоцитов больных с легким течением ОД, р<0,001.
В динамике заболевания на 5-7 день болезни, у реконвалесцентов ОД показатели ОР2 ДНК лимфоцитов оказывались сопоставимыми со значениями группы контроля независимо от тяжести течения заболевания, тогда как апоптоз лимфоцитов у больных с легким течением ОД составил 2,92±0,24%, а при среднетяжелом течении ОД - 2,12±0,35%, достоверно превышая контрольные величины (p<0,05).
Нами проводился корреляционный анализ лейкоцитарного индекса интоксикации с показателями апоптоза и ОР ДНК лейкоцитов больных ОКИ, поскольку, на наш взгляд ЛИИ является наиболее универсальным интегральным параметром, отражающим своеобразие системных проявлений синдрома интоксикации. По данным литературы увеличение ЛИИ зависит от тяжести и длительности инфекционного процесса [Лобзин Ю.В. и соавт., 2005].
Нами выявлена достоверно значимая положительная корреляция между ЛИИ и показателем ОР1 ДНК нейтрофилов у больных ОКИ. Так, у пациентов с высокими значениями ЛИИ (при среднетяжелом течении заболевания) в период разгара ОКИ регистрировались и более высокие показатели однонитевых разрывов ОР1 ДНК ПМЯЛ (r=0,253, р=0,025).
Таким образом, в группе больных ОКИ различной этиологии при максимальных проявлениях СИ отмечается большая степень повреждения ДНК ПМЯЛ, что может приводить к увеличению их апоптоза в период реконвалесценции и сказываться на функциональной активности этого типа клеток.
Интересно отметить взаимосвязь ЛИИ с параметрами периода реконвалесценции у больных ПТИ. Так у пациентов ПТИ с более высокими значениями ЛИИ в 1-3 день болезни, в период ранней реконвалесценции отмечался больший процент повреждений ОР2 ДНК ПМЯЛ (r=0,640, p<0,001), а также большие значения апоптоза нейтрофилов в период реконвалесценции (r=0,441, p=0,019).
В динамике заболевания у пациентов с высокими значениями ЛИИ регистрировались высокие показатели лимфоцитов в состоянии апоптоза (r=0,635, р=0,002).
Положительная статистически значимая корреляция была нами отмечена между ЛИИ и ОР1 ДНК ПМЯЛ больных ОД на высоте клинических проявлений СИ (r=0,638, р=0,001), так больший процент повреждений ДНК сопровождался высокими значениями ЛИИ.
Полученные нами данные позволяют расценивать динамические изменения апоптоза нейтрофилов как естественный и высокорегулирующийся феномен, отражающий закономерности развития и исхода инфекционного процесса, что соответствует литературным данным [Simon H.U., 2004; Зигангирова Н.А., Гинцбург А.Л., 2004].
Известно, что сложный механизм регуляции апоптоза Т-лимфоцитов при системном воспалительном ответе необходим для предотвращения неконтролируемой активации лимфоцитов [Roth G. et. al., 2003]; однако, апоптоз этих клеток, индуцированный на поздних стадиях заболевания, наблюдаемый у наших пациентов приводит к ослаблению иммунного ответа, что соответствует клиническому выздоровлению на фоне сохраняющихся патоморфологических реакций.
ВЫВОДЫ
- Комплексное применение в динамике заболевания у больных ОКИ прямого флуориметрического метода и проточной цитофлуориметрии с определением показателей однонитевых разрывов ДНК и апоптоза позволяет регистрировать процесс программированной гибели клеток на разных стадиях развития.
- Установлено, что показатели программированной гибели клеток у больных ОКИ зависят от тяжести заболевания, тогда как этиология и клинический вариант течения не оказывают существенного влияния на значения изучаемых параметров.
- Изменения параметров программированной гибели полиморфно-ядерных лейкоцитов и лимфоцитов периферической крови в динамике ОКИ определяются типом клеток и зависят от тяжести инфекционного процесса.
- Изучение показателей программированной гибели полиморфно-ядерных лейкоцитов у больных ОКИ показало, что в острый период заболевания на высоте интоксикации регистрируется статистически значимое накопления однонитевых разрывов ДНК, тогда как показатели апоптоза определяются на значениях достоверно более низких, чем в контрольной группе.
- Изучение показателей программированной гибели полиморфно-ядерных лейкоцитов в периоде ранней реконвалесценции, показало, что на фоне продолжающегося накопления однонитевых разрывов ДНК клеток происходит достоверно значимое увеличение количества клеток, подвергшихся апоптозу.
- На высоте клинических проявлений синдрома интоксикации и в периоде ранней реконвалесценции у больных ОКИ показатели однонитевых разрывов ДНК лимфоцитов не отличались от контрольных значений, тогда как параметры апоптоза достоверно возрастали в острый период, имея лишь тенденцию к снижению на 5-7 дни болезни.
- В периоде разгара ОКИ независимо от этиологии больший процент однонитевых разрывов ДНК полиморфно-ядерных лейкоцитов определялся у пациентов с высокими значениями лейкоцитарного индекса интоксикации
Практические рекомендации
Определение однонитевых разрывов ДНК полиморфно-ядерных лейкоцитов периферической крови, может быть рекомендовано для использования в практическом здравоохранении, в качестве дополнительного критерия объективной оценки тяжести течения ОКИ различной этиологии.
Учитывая универсальность механизмов развития синдрома интоксикации у больных с бактериальными инфекциями, определение апоптоза нейтрофилов и лимфоцитов периферичеcкой крови в стадии реконвалесценции может использоваться для определения полноты клинико-патоморфологического выздоровления пациентов.
Метод регистрации апоптоза нейтрофилов с помощью проточной цитофлуориметрии может быть использован с целью выявления пациентов с латентно протекающей кишечной инфекцией.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Красавина Э.Н., Белушкина Н.Н., Полуэктова В.Б., Дмитриева Е.В., Замаева Н.Ю., Пак С.Г. Апоптоз и повреждение ДНК лейкоцитов периферической крови у больных гастроинтестинальной формой сальмонеллеза // В кн.: «VI российский съезд врачей инфекционистов». Материалы съезда (29-30 октября 2003 года). СпБ, 2003.- С. 188-189.
2. Красавина Э.Н., Мартынова Н.Н., Пак С.Г. Апоптоз лейкоцитов периферической крови у больных пищевой токсикоинфекцией // В кн.: «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины». Тезисы докладов III конференции молодых ученых России с международным участием, посвященных 60-летию Российской Академии Медицинских наук (20-24 января 2004 года). М., 2004. С. 117.
3. Красавина Э.Н., Белушкина Н.Н., Замаева Н.Ю, Полуэктова В.Б., Пак С.Г. Роль апоптоза лейкоцитов периферической крови в патогенезе пищевых токсикоинфекций // В кн.: «I Международная конференция молекулярная медицина и биобезопасность». Материалы научно-практической конференции с международным участием. (Москва, 26-28 октября 2004 г.), С. 109-110.
4. Красавина Э.Н., Пак С.Г., Белушкина Н.Н., Малов В.А., Полуэктова В.Б., Горобченко А.Н., Дмитриева Л.Н. Изменение структуры ДНК нейтрофилов периферической крови у больных острым шигеллёзом // В кн.: «Инфекционные болезни: проблемы здравоохранения и военной медицины». Тезисы докладов юбилейной научно-практической конференции, посвященной 110-летию кафедры инфекционных болезней Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова (22-24 марта 2006 года), Санкт-Петербург, 2006.- С.171.
5. Красавина Э.Н., Пак С.Г., Белушкина Н.Н., Малов В.А., Замаева Н.Ю., Дмитриева Л.Н., Фадеева О.А. Показатели апоптоза полиморфноядерных лейкоцитов периферической крови у больных острым шигеллёзом // В кн.: «Инфекционные болезни: проблемы здравоохранения и военной медицины». Тезисы докладов юбилейной научно-практической конференции, посвященной 110-летию кафедры инфекционных болезней Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова (22-24 марта 2006 года), Санкт-Петербург, 2006.- С. 170-171.
6. Красавина Э.Н., Серебряков М.Ю., Воронов А.В., Белушкина Н.Н., Малов В.А., Пак С.Г., Полуэктова В.Б., Дмитриева Л.Н., Нечаева И.П., Цинцадзе А.А. Апоптоз гранулоциов периферической крови при острых кишечных инфекциях // Сборник трудов сотрудников Медицинского центра Российского государственного медицинского университета. Москва 2006. С. 276-280.
7. Пак С.Г., Малов В.А., Красавина Э.Н., Белушкина Н.Н. Особенности изменения структуры ДНК гранулоцитов периферической крови у больных острыми кишечными инфекциями // Российский Медицинский Форум «Фундаментальная наука и практика», 18-20 октября 2006. С. 110.
8. Красавина Э.Н., Пак С.Г., Малов В.А., Белушкина Н.Н., Горобченко А.Н., Полуэктова В.Б. Повреждение структуры ДНК нейтрофилов как критерий тяжести у больных острыми кишечными инфекциями // Ремедиум. Спец. выпуск: «Новые технологии в диагностике и лечении инфекционных болезней». (Материалы VII Российского съезда инфекционистов, Нижний Новгород 25-27 октября 2006г.) С. 254.
9. Красавина Э.Н., Пак С.Г., Белушкина Н.Н., Полуэктова В.Б., Мартынова Н.Н., Городнова Е.А., Айвазян С.Р., Дмитриева Л.Н., Малов В.А. Апоптоз полиморфноядерных лейкоцитов периферической крови и его начальные проявления у больных при заболеваниях, вызванных энтеропатогенными бактериями. // Вопросы биологической медицинской и фармацевтической химии. -2006. - № 4. – С 42-45.
Перечень сокращений
ГЭ | гастроэнтеритический |
ГЭК | гастроэнтероколитический |
ДНК | дезоксирибонуклеиновая кислота |
ЛИИ | лейкоцитарный индекс интоксикации |
ОД | острая дизентерия |
ОР | однонитевые разрывы ДНК клеток |
ОР1 | показатели однонитевых разрывов ДНК клеток периода разгара заболевания |
ОР2 | показатели однонитевых разрывов ДНК клеток периода ранней реконвалесценции |
ОКИ | острые кишечные инфекции |
ПГ | программированная гибель |
ПМЯЛ | полиморфно-ядерные лейкоциты |
ПТИ | пищевая токсикоинфекция |
ЭМ | эндогенные медиаторы |