Клиническое значение иммунофенотипирования серозной аденокарциномы яичников
- На правах рукописи
Зуева Елена Владимировна
КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ
ИММУНОФЕНОТИПИРОВАНИЯ СЕРОЗНОЙ АДЕНОКАРЦИНОМЫ ЯИЧНИКОВ
14.01.12 – онкология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
кандидата медицинских наук
Москва – 2010 г.
Работа выполнена в Учреждении Российской академии медицинских наук Российском онкологическом научном центре имени Н.Н.Блохина РАМН (директор – академик РАН и РАМН, профессор М.И. Давыдов)
Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор Н.Н. Тупицын
доктор медицинских наук, С.О. Никогосян
Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор Б.В. Пинегин
доктор медицинских наук, профессор А.Н. Грицай
Ведущее учреждение: ФГУ «Российский научный центр рентгенорадиологии Роспотребнадзора».
Защита диссертации состоится « » 2010 года в часов на заседании диссертационного совета (Д.001.017.02) Учреждения Российской академии медицинских наук Российского онкологического научного центра имени Н.Н.Блохина РАМН (115478, Москва, Каширское шоссе, 24)
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Учреждения Российской академии медицинских наук Российского онкологического научного центра имени Н.Н.Блохина РАМН.
Автореферат разослан « » 2010 года
Ученый секретарь диссертационного совета
доктор медицинских наук, профессор Ю.А. Барсуков
Актуальность темы
Рак яичников является одним из актуальных разделов онкогинекологии. Данная патология занимает 4 место по частоте в структуре онкологических заболеваний женской репродуктивной системы, уступая лишь раку молочной железы, эндометрия, шейки матки, при этом имея самые высокие показатели смертности среди всех гинекологических заболеваний. Ежегодно в России выявляется более 11000 случаев рака яичников, летальность на первом году после установления диагноза составляет 35%, а пятилетний рубеж переживает лишь треть пациенток (Аксель Е.М., 2001). Низкая выживаемость больных раком яичников обусловлена несколькими причинами: бессимптомным течением и неэффективной диагностикой на ранних стадиях заболевания, обращением к гинекологу на том этапе развития процесса, когда опухоль выходит за пределы органа. Все это усложняет и лимитирует возможности современных методов лечения.
Течение заболевания, а также успех современных методов лечения зависят от ряда факторов, таких как стадия заболевания, гистологическое строение и степень дифференцировки, объем остаточной опухоли после циторедуктивной операции. На прогноз также оказывают влияние молекулярно – генетические и иммунологические факторы. Это, в первую очередь, уровень сывороточного опухолеассоциированного маркера СА-125. Вместе с тем значению механизмов иммунной защиты и эффекторных звеньев противоопухолевого иммунитета при раке яичников до настоящего времени уделялось недостаточно внимания.
Прогресс исследований в этом направлении связан с углубленным изучением субпопуляций лимфоцитов, присутствующих непосредственно в ткани опухоли (интратуморальные лимфоциты), выделением в их пределах особой группы тумор-пенетрирующих лимфоцитов (ТПЛ) и разработкой методов количественного учета последних (Tupitsyn N.N. et al., 1995). Наиболее важное значение придается исследованию субпопуляций зрелых Т-клеток (CD3+), Т-киллеров (CD8+), Т-хелперных/индукторных клеток (CD4+) и активированных Т-клеток (CD25+). Подобные работы проведены при раке желудка, а клиническая значимость инфильтрации опухоли CD8+-Т-лимфоцитами убедительно доказана при раке молочной железы (Артамонова Е.В., 2004). Активность Т-цитотоксических клеток в отношении опухоли зависит от ряда факторов, включая иммунофенотипические особенности клеток. Это обусловлено тем, что Т-лимфоциты распознают опухоль - ассоциированные антигены в контексте молекул гистосовместимости I и II классов. Утрата этих молекул часто наблюдается в процессе опухолевой прогрессии и ведет к неэффективному распознаванию опухолевых антигенов Т-клетками. Другой причиной неэффективности Т-цитотоксических клеток может являться супрессорное влияние, оказываемое на них Т-регуляторными клетками (CD4+CD25+), специфическим маркером которых является FOXP3.
Исследования последних 3 лет ознаменовались важными открытиями значения инфильтрации рака яичников зрелыми Т-клетками (CD3+) и Т-цитотоксическими клетками (CD8+) в прогнозе заболевания.
Zhang L. et al. (2003) провели проспективное исследование у 186 больных злокачественными эпителиальными опухолями яичников на свежих (криостатных) срезах опухолевой ткани. Выводом работы явилось установление независимой прогностической роли СD3+ тумор-пенетрирующих Т-клеток. Пациентки, в ткани опухолей которых были обнаружены тумор-пенетрирующие клетки, имели достоверно более высокие показатели общей выживаемости и выживаемости без прогрессирования. Общая 5-летняя выживаемость при наличии CD3+ ТПЛ была 38%, а при отсутствии таковых — 4,5%. При достижении полной ремиссии после циторедуктивной операции и химиотерапии с включением препаратов платины эти различия между группами были еще более впечатляющими (73,9% и 11,9% соответственно).
Работа Sato Е. et al. (2005) проведена на архивном материале 117 удаленных в ходе хирургического вмешательства злокачественных эпителиальных опухолей яичников. Доказана роль CD8+-лимфоцитов, инфильтрирующих зоны опухолевого роста, в прогнозе рака яичников. У больных с высокими значениями CD8+-ТПЛ в сравнении с группой с низкими показателями этих клеток отмечены большая продолжительность жизни (медианы 55 и 26 мес. соответственно, р = 0,0003).
Эти работы свидетельствуют о том, что в настоящее время стандартные клинические и морфологические факторы прогноза могут быть дополнены оценкой уровней инфильтрации опухоли зрелыми Т-клетками и, в частности, Т-киллерами. Это направление работ представляется весьма актуальным, так как может привести в перспективе не только к установлению дополнительных факторов прогноза (иммунологических), но и к модуляции действия цитотоксических клеток воздействием на экспрессию молекул HLA и Т-регуляторные лимфоциты.
ЦЕЛЬЮ НАСТОЯЩЕЙ РАБОТЫ явилось изучение иммунофенотипа серозной аденокарциномы яичников и субпопуляций интратуморальных лимфоцитов, оценка их клинического значения.
ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ:
1. Представить подробную иммунофенотипическую характеристику серозной аденокарциномы яичников на основе экспрессии эпителиальных и лейкоцитарных антигенов опухолевых клеток.
2. Изучить корреляцию между субпопуляционным составом интратуморальных иммунокомпетентных клеток и иммунофенотипом серозной аденокарциномы яичников.
3. Провести анализ взаимосвязи морфологической характеристики опухоли с ее иммунофенотипом и составом интратуморальных лимфоцитов.
4. Изучить взаимосвязь клинических показателей прогноза (стадия заболевания, объем циторедукции, эффективность комбинированного лечения, статус болезни на момент последней явки) с иммунофенотипической характеристикой и субпопуляциями интратуморальных лимфоцитов серозной аденокарциномы яичников.
Научная новизна
Впервые были изучены особенности местного иммунного ответа (субпопуляции интратуморальных лимфоцитов) и иммунофенотип серозной аденокарциномы яичников. Дана подробная иммунофенотипическая характеристика серозной аденокарциномы яичников на основе экспрессии эпителиальных и лейкоцитарных антигенов опухолевых клеток (Kl-1, MUC-1, HLA-I, HLA-DR, CD71, CD29, CD56-NCAM). Изучен состав субпопуляций интратуморальных Т-лимфоцитов иммунофлуоресцентным методом раздельно в строме и паренхиме опухоли (СD45+, CD7+, CD3+, CD8+, CD4+, CD20+, CD56+). Проанализирована взаимосвязь между субпопуляционным составом интратуморальных иммунокомпетентных клеток и иммунофенотипом серозной аденокарциномы яичников.
Выявлена взаимосвязь типа экспрессии молекул адгезии нервных клеток (CD56 - NCAM), рецептора трансферрина (CD71) и -цепи интегринов (CD29) со степенью распространенности серозной аденокарциномы яичников.
Идентифицированы иммунологические маркеры, ассоциированные с клиническими факторами прогноза. Благоприятное влияние на прогноз серозной аденокарциномы яичников оказывают выраженная инфильтрация тумор-пенетрирующими CD8+-лимфоцитами, а так же высокие значения соотношения тумор-пенетрирующих CD8+/CD4+-лимфоцитов.
Практическая значимость
Практическое значение полученных в настоящем исследовании результатов заключается в том, что они могут быть применены в качестве дополнительных факторов прогноза у больных серозной аденокарциномой яичников. Это позволит выделить группу пациенток для более тщательного мониторинга заболевания и назначения наиболее интенсивного адъювантного лечения, а в дальнейшем - к индивидуализации применяемых схем химиотерапии согласно иммунофенотипическим особенностям опухоли.
Может быть рекомендован иммуноморфологический метод исследования на криостатных срезах для оценки инфильтрации опухоли тумор-пенетрирующими CD8+- и CD4+-лимфоцитами и расчета иммунорегуляторного индекса CD8+/CD4+ для ТПЛ.
Апробация работы состоялась 6 октября 2009 года на совместной научной конференции с участием сотрудников отделения гинекологического, лаборатории иммунологии гемопоэза, лаборатории клинической иммунологии опухолей, хирургического отделения опухолей женской репродуктивной системы, отделения патологической анатомии опухолей человека Учреждения Российской академии медицинских наук Российского онкологического научного центра им. Н.Н.Блохина РАМН.
Публикации
По теме диссертации опубликовано 6 печатных работ.
Объем и структура диссертации
Диссертационная работа изложена на 152 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, главы «Клиническая характеристика больных и методы исследования», трех глав собственных исследований, заключения, выводов и списка литературы. Иллюстрирована 53 таблицами и 2 рисунками. Указатель литературы содержит 114 источников, из которых 6 отечественных и 108 зарубежных.
Характеристика больных и методы исследования
В исследование включены 33 больные с впервые установленной серозной аденокарциномой яичников, проходившие обследование и лечение в отделении гинекологическом РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН в 2006-2009 годах включительно, которым на первом этапе проведено хирургическое лечение.
Возраст больных находился в пределах от 26 до 77 лет, медиана 50 лет. На момент установления диагноза находились в репродуктивном возрасте 48,5% и в периоде менопаузы - 51,5% пациенток.
Всем больным проведено стандартное обследование, включающее ультразвуковую томографию органов малого таза, брюшной полости и регионарных лимфатических узлов, допплерографию сосудов нижних конечностей, рентгенографию легких, маммографию, гастро- и колоноскопию. Определяли исходный уровень СА-125 в сыворотке крови, проводили клинический, биохимический анализы крови. По показаниям выполнялась диагностическая лапароскопия.
У всех пациенток диагноз серозной аденокарциномы яичников подтвержден гистологическим исследованием послеоперационного материала. У большинства больных серозной аденокарциномой яичников (72,7%) была диагностирована IIIC стадия заболевания, у 15,2% пациенток - IV стадия, у 9,1% – IC стадия, и лишь у 3% больных – IIC стадия опухолевого процесса (таблица 1).
Таблица 1
Распределение больных серозной аденокарциномой яичников по стадиям
| Стадия | Количество больных | Частота (%) |
| IC | 3 | 9,1 |
| IIC | 1 | 3,1 |
| IIIC | 22 | 72,7 |
| IV | 5 | 15,1 |
| Всего | 33 | 100,0 |
Преобладала низкая степень дифференцировки опухоли – в 66,7% (n=22), реже встречались умеренно- и высокодифференцированные опухоли в 24,2% (n=8) и 9,1% (n=3) соответственно.
Вне зависимости от стадии опухолевого процесса всем больным проведено комбинированное лечение, включающее хирургическое вмешательство различных объемов и химиотерапию по стандартным схемам с применением таксанов и препаратов платины; одна больная умерла от тромбоэмболии легочной артерии на 5 сутки после операции.
Длительность наблюдения составила от 3 до 27 месяцев, медиана 14 месяцев. Нами проведена оценка статуса заболевания на момент последней явки у 28 больных: одна больная находилась в процессе химиотерапии, у 3 больных статус на момент последней явки неизвестен. Статус заболевания оценивался по данным гинекологического осмотра, ультразвукового исследования малого таза, брюшной полости и зон регионарного метастазирования и определения уровня СА-125 в сыворотке крови. По показаниям выполнялись компьютерная томография малого таза, брюшной полости, позитронно- эмиссионная томография, а также диагностическая лапароскопия.
У 14 женщин (50%) на момент последней явки диагностировано состояние полной или частичной ремиссии (отсутствие прогрессирования). Признаки прогрессирования болезни на момент последней явки отмечены у 14 (50%) больных.
Исследование криостатных срезов
Исследование иммунофенотипа опухоли было проведено на криостатных срезах 33 образцов серозной аденокарциномы яичников методом непрямой реакции флюоресценции. Замороженные срезы опухолей (толщина 4-6 мкм) помещали по три среза на поверхность обезжиренных предметных стекол. Перед окраской антителами срезы фиксировали в течение 10 минут в ацетоне при температуре 4 °С. Последующие этапы реакции проводили при комнатной температуре во влажной камере. Инкубировали срезы 10 минут в среде 199 рН 7,2-7,4. Моноклональные антитела наносили на 30 минут. Отмывали 10 минут в среде 199. На 30 минут наносили FITC – меченые F(ab)2 – фрагменты антисыворотки против глобулинов белой мыши на 30 минут. Отмывали 10 минут в среде 199. Клетки консервировали 50%-ным глицерином на физиологическом растворе. Срезы накрывали покровным стеклом и характеризовали антигенположительные клетки и структуры. Специфические реакции учитывали на микроскопе Axioplan (Германия) при увеличении х500.
При иммунофенотипировании иммунокомпетентных клеток на криостатных срезах опухоли проводили подсчет количества интратуморальных лимфоцитов (CD45+, CD7+, CD3+, CD4+, CD8+, CD56+, СD20+) на площади 0,34 кв. мм раздельно в строме и паренхиме опухоли. На практике измеряли площадь, соответствующую внутренней прямоугольной рамке для фотографирования, встроенной в окуляр. Ее размеры соответствовали 0,17 кв. мм при увеличении объектива 40, окуляра 12,5. При этом учитывали эпителиальные и стромальные поля с наиболее выраженной инфильтрацией. Подсчет производился независимо друг от друга двумя исследователями. Как результирующий показатель фиксировались средние арифметические по данным двух исследователей.
Все наблюдения были стратифицированы согласно тертильной градации (Sato E. et al, 2005). Случаи, когда количество иммунокомпетентных клеток на исследуемой площади находилось левее первого тертиля, расценены нами как слабая инфильтрация; умеренной и выраженной считалась инфильтрация, при которой число интратуморальных лимфоцитов располагалось правее первого тертиля.
Результаты реакции при иммунофенотипировании опухолевых клеток учитывали полуколичественным методом, предложенным G. L. Hammerling (1987г.). Выделяли три типа взаимодействия антител с опухолевыми клетками:
1. Отрицательная реакция (-): менее 10% антигенположительных опухолевых клеток).
2. Мозаичная реакция (+/-) : антиген присутствует на части (от 10% до 80%) опухолевых клеток.
3.Мономорфная реакция (+): антиген экспрессируется большинством (80%).
Основными реактивами, с помощью которых выполнялось исследование, являются отечественные и зарубежные моноклональные антитела. Специфичность использованных в работе моноклональных антител представлены в таблице 2.
Таблица 2.
Специфичность моноклональных антител
| Антиген/CD/МКА | Молекула |
| I. Антигены опухолевых клеток | |
| KL-1 / KL-1 | Цитокератины |
| MUC-1 / СD227/ICO-25 | Муцин-1 |
| HLA-I / ICO-53 | Молекулы гистосовместимости I класса |
| HLA-DR / ICO-I | Молекулы гистосовместимости II класса |
| VLA- / CD29 / K-20 | –цепь интегрина |
| CD71 / ICO-92 | Рецептор трансферрина |
| N-CAM / СD56/My-31 | Молекула адгезии нервных клеток |
| II. Антигены иммунокомпетентных клеток | |
| CD45 / ICO-58 | Лейкоциты |
| СD7 / ICO-87 | Т-клетки, субпопуляция натуральных киллеров |
| CD3 / ICO-90 | Зрелые Т-клетки |
| CD8 / ICO31 | Цитотоксические Т-лимфоциты, субпопуляция натуральных киллеров |
| CD4 / ICO-86 | Хелперные Т-лимфоциты, регуляторные Т-клетки |
| СD56 (N-CAM) / My31 | Натуральные киллеры |
| CD20 / L-26 | В-клетки |
Статистическая обработка результатов исследования
Статистическая обработка результатов исследования проводилась с применением программы SPSS: описательная статистика, корреляционный анализ, сравнение наблюдаемых изменений в группах с непараметрическими критериями (Mann-Whitney U-test и Kruskal-Wallis test), анализ по таблицам сопряженности признаков с расчетом точного критерия Фишера.
Результаты исследования и обсуждение
Изучен иммунофенотип серозной аденокарциномы яичников: все образцы опухолей экспрессировали цитокератины (KL-1) – 100% наблюдений; MUC-1 — 94% и CD29 — 94%; положительная реакция с МКА к HLA-I и HLA-DR зарегистрированы в 85% и 70% наблюдений соответственно. Реже визуализировались молекулы CD71 (57%) и CD56 (48% случаев). Полученные данные представлены в таблице 3.
Таблица 3.
Иммунофенотип серозной аденокарциномы яичников
| Маркер | Тип реакции | Всего | ||||||
| Отрицательный | Мозаичный | Мономорфный | ||||||
| n | % | n | % | n | % | n | % | |
| MUC-1 | 2 | 6,0 | 12 | 36,4 | 19 | 57,6 | 33 | 100 |
| HLA-1 | 5 | 15,2 | 17 | 51,5 | 11 | 33,3 | 33 | 100 |
| HLA-DR | 10 | 30,3 | 18 | 54,5 | 5 | 15,2 | 33 | 100 |
| CD29 | 2 | 6,0 | 13 | 39,4 | 18 | 54,6 | 33 | 100 |
| CD71 | 14 | 42,4 | 19 | 57,6 | 0 | 0 | 33 | 100 |
| CD56 | 17 | 51,5 | 12 | 36,4 | 4 | 12,1 | 33 | 100 |
Выявлены достоверные взаимосвязи экспрессии рецептора трансферрина (СD71) с некоторыми антигенными характеристиками серозной аденокарциномы яичников: прямая - с HLA-DR и обратная - с CD29.
При CD71- мозаичном фенотипе наиболее часто отмечена положительная реакция с МКА к HLA-DR – 84,2%, а отрицательная составила лишь 15,8% случаев. Отрицательный фенотип по CD71 одинаково часто (50,0%) сопровождался и отрицательной, и положительной реакцией c МКА к HLA-DR (р=0,03).
По нашим данным мономорфная экспрессия CD29 в превалирующем большинстве наблюдений (78,6%) встречалась при негативном фенотипе по CD71. Отрицательная и мозаичная реакция CD29 при негативном фенотипе по CD71 составили 14,3% и 7,1% соответственно. Мозаичный фенотип по CD71 лишь в 36,8% случаев сопровождался мономорфной экспрессией СD29, остальные наблюдения были мозаичными по CD29 – 63,2% (р=0,003).
Нами изучены особенности местного противоопухолевого иммунного ответа во всех образцах серозной аденокарциномы яичников (n=33) раздельно в строме и паренхиме опухоли.
Среди субпопуляций тумор-пенетрирующих лимфоцитов преобладали лейкоциты, Т-клетки, зрелые (CD3+), цитотоксические (CD8+) и NK (CD56+) лимфоциты. Уровни CD4-позитивных лимфоцитов были, как правило, низкими, а В-клетки (CD20+) в паренхиме опухоли практически не встречались (таблица 4).
Таблица 4.
Субпопуляции тумор-пенетрирующих лимфоцитов серозной аденокарциномы яичников
| Маркер | Степень выраженности инфильтрации | Всего | ||||
| слабая | умеренная/выраженная | |||||
| n | % | n | % | n | % | |
| CD45 | 6 | 18,2 | 27 | 81,8 | 33 | 100 |
| CD7 | 17 | 51,5 | 16 | 48,5 | 33 | 100 |
| CD3 | 21 | 63,6 | 12 | 36,4 | 33 | 100 |
| CD8 | 21 | 63,6 | 12 | 36,4 | 33 | 100 |
| CD4 | 26 | 78,8 | 7 | 21,2 | 33 | 100 |
| CD56 | 11 | 64,8 | 6 | 35,2 | 17 | 100 |
Установлено существование взаимосвязи иммунофенотипических характеристик опухоли и ее инфильтрации лимфоцитами как в строме, так и в паренхиме серозной аденокарциномы яичников. Так, экспрессия рецептора трансферрина опухолевыми клетками в 63,2% наблюдений сопровождалась умеренной и выраженной пенетрацией T-лимфоцитов (CD7+) в опухолевые зоны, а в группе сравнения (CD71-) — лишь в 28,6 (р = 0,05). Достоверной была и взаимосвязь с умеренной и выраженной инфильтрацией паренхимы опухоли лейкоцитами (CD45+), составив в CD71-позитивной и CD71-негативной группах 50,0% и 84,2% соответственно (р=0,04).
При СD-71-позитивном фенотипе серозной аденокарциномы яичников чаще отмечена умеренная и выраженная стромальная инфильтрация лейкоцитами (84,2%), р=0,006; Т-клетками (68,4%), р=0,027 и цитотоксическими лимфоцитами (57,9%), р=0,013, а в группе сравнения лишь в 35,7%, 28,6% и 14,3% наблюдений соответственно.
Исходный уровень СА-125 был выше при умеренной и выраженной инфильтрации CD8+-ТПЛ, чем при слабой инфильтрации, в среднем составив 3419,8 ± 1098,14 МЕ/мл и 884,38±186,13 МЕ/мл соответственно (р=0,05). Также исходный уровень СА-125 был достоверно более высоким при умеренной и выраженной инфильтрации CD45+-ТПЛ, чем при слабой инфильтрации, в среднем составив 2374,1±624,26 МЕ/мл и 500,5±113,7 МЕ/мл соответственно (р=0,028).
Особенности иммунофенотипа серозной аденокарциномы яичников и субпопуляций интратуморальных лимфоцитов были взаимосвязаны с некоторыми клиническими и морфологическими характеристиками опухоли. Уровень инфильтрации CD7+-ТПЛ был достоверно взаимосвязан со стадией заболевания: на начальных стадиях (IC и IIC) во всех случаях Т-клеточная инфильтрация была умеренной и выраженной (100,0%), при IIIC — 45,8%, и при на IV — только в 20% (р=0,05).
Только один из исследуемых иммунологических показателей высоко достоверно коррелировал с изменением степени дифференцировки опухоли — это инфильтрация стромы серозной аденокарциномы яичников зрелыми Т-клетками (CD3+). Так, строма высокодифференцированных образцов серозной аденокарциномы яичников во всех случаях (100%) была слабо инфильтрирована зрелыми Т-клетками (CD3+). По мере снижения степени дифференцировки опухоли возрастала частота умеренной и выраженной инфильтрации стромы зрелыми Т-клетками (CD3+), составив соответственно при умеренной и низкой степенях дифференцировки новообразования 25% и 68,2% наблюдений (р=0,01).
Интересным с нашей точки зрения можно считать влияние экспрессии молекул адгезии нервных клеток (СD56) на клинические особенности опухолевого процесса. CD56-позитивные образцы серозной аденокарциномы яичников отличались солидным строением (отсутствием во всех случаях кистозного компонента), меньшими размерами первичной опухоли. Вместе с тем, при данном иммунофенотипе отмечены более крупные диссеминаты по брюшине, остаточная опухоль после хирургического вмешательства, как правило, была большего размера. Эти особенности можно объяснить тем, что экспрессия молекул CD56 (NCAM) при серозной аденокарциноме способствует адгезии клеток опухоли между собой (гомофильная адгезия) и не влияет на их способность прикрепления к мезотелию (таблица 5).
Таблица 5
Клинические особенности CD56-позитивных опухолей яичников
| Макроскопические характеристики опухоли | Тип экспрессии CD56 (NCAM) | р p | ||
| мономорфный | мозаичный | отрицательный | ||
| Кистозно-солидные/солидные,% | 0/100 | 83,3/16,7 | 58,8/41,2 | 0,012 |
| Размер опухоли, см | 5,2±0,6 | 7,9±0,8 | 10,3±1,5 | 0,05 |
| Размер диссеминатов по брюшине, cм | 4,2±1,1 | 2,7±0,5 | 0,05 | |
| Размер остаточной опухоли, см | 3,4±0,6 | 6,8±1,3 | 6,0±0,6 | 0,018 |
Выявление CD71 на клетках серозной аденокарциномы яичников было зарегистрировано у всех больных (100%) в случае интактного большого сальника, а при его метастатическом поражении частота экспрессии СD71 снижалась до 48,1% (р=0,02).
Для реализации метастатического потенциала клеток серозной аденокарциномы яичников необходимым условием является мономорфная экспрессия CD29. На это указывают наши данные о распространении опухоли на различные отделы кишечника, что во всех случаях (100%) происходило тогда, когда клетки новообразования превалирующим большинством экспрессировали CD29. При отсутствии опухолевого поражения кишечника мономорфный фенотип по CD29 отмечен лишь в 48,3% случаев (р =0,05).
При интактной брюшине умеренная и выраженная пенетрация опухоли CD8+-лимфоцитами практически не наблюдалась (9,1%), а в случаях канцероматоза – определялась в половине (50%) случаев, различия достоверны (р =0,02).
Нами выявлено влияние интенсивности инфильтрации опухоли тумор-пенетрирующими лимфоцитами на прогноз больных серозной аденокарциномой яичников. Так, при отсутствии пенетрации в опухолевые зоны CD8+Т-киллеров прогрессирование заболевания на момент последней явки наблюдалось у 67% больных, а при наличии пенетрации – лишь в 33,3%, различия высоко достоверны (р=0,02), что наглядно продемонстрировано на рисунке 1.
Рисунок 1.
Инфильтрация тумор-пенетрирующими CD8+- лимфоцитами и прогрессирование серозной аденокарциномы яичников.
Высокое отношение CD8+ к CD4+ среди пенетрирующих лимфоцитов наиболее часто отмечено у больных без явлений прогрессирования, что при прогрессировании болезни не наблюдалось (рисунок 2).
Рисунок 2.
Соотношение CD8+/CD4+ в опухоли и прогноз серозной аденокарциномы яичников (n=28).
Таким образом, особенности иммунофенотипа серозной аденокарциномы яичников оказывают влияние на формирование местного иммунного ответа и взаимосвязаны с распространенностью опухолевого процесса. Прогноз серозной аденокарциномы яичников более всего связан с количеством тумор-пенетрирующих CD8+-лимфоцитов.
Выводы
- Серозная аденокарцинома яичников мономорфна по цитокератинам (KL-1) и гетерогенна по другим изученным маркерам: MUC- 1, CD29 – 94%, HLA-I – 85%, HLA-DR-70%, CD71 – 57%, CD56(NCAM) – 48%. Наличие рецептора трансферрина взаимосвязано с молекулами гистосовместимости HLA- DR и интегринами CD29.
- Субпопуляции тумор – инфильтрирующих лимфоцитов серозной аденокарциномы яичников представлены зрелыми Т-(CD3+, CD8+) и NK-клетками (CD56), количественная оценка которых в паренхиме опухоли наиболее точно отражает противоопухолевую иммунореактивность организма и имеет выраженное клиническое (прогностическое) значение.
- Интенсивность стромальной инфильтрации и пенетрации Т-клеток (CD45+CD7+CD8±) в зоны сплошного опухолевого роста серозной аденокарциномы яичников напрямую взаимосвязана с иммунофенотипом опухоли: нарастает по мере увеличения экспрессии рецептора трансферрина (р<0,05) и снижается при полной утрате молекул адгезии CD29. Соотношения интратуморальных Т-киллеров к зрелым CD4+ - Т-лимфоцитам достоверно более высокие в CD71 позитивных опухолях (р=0,02).
- Частота стромальной инфильтрации серозной аденокарциномы яичников зрелыми Т-лимфоцитами (CD3+) нарастает по мере дедифференцировки опухоли: высокодифференцированная - 0%, умереннодифференцированная - 25%, низкодифференцированная - 68% (р=0,01).
- Иммунофентипические особенности и уровни лимфоидной инфильтрации серозной аденокарциномы яичников взаимосвязаны с распространенностью опухолевого процесса:
- поражение большого сальника достоверно чаще отмечается при CD71-негативных опухолях (р=0,002), поражение кишечника - при сохранности на опухолевых клетках молекул адгезии CD29 (p=0,05);
- CD56 -позитивные опухоли характеризовались меньшими размерами, составив 5,2±0,6 см, 7,9±0,8 см и 10,3±1,5 см при мономорфном, мозаичном и отрицательном фенотипах соответственно (р=0,05); отсутствием кистозного компонента (р=0,012), более крупными диссеминатами по брюшине (4,2±1,1 и 2,7±0,5 см; р=0,05) и большим объемом остаточной опухоли (р=0,018) после хирургического вмешательства.
- увеличение стадии опухолевого процесса сопровождается снижением инфильтрации паренхимы опухоли NK-клетками (CD7+CD56+);
- распространение опухоли по брюшине и нарастание сывороточных уровней CA-125 коррелирует с выраженностью инфильтрации первичной опухоли Т-цитотоксическими лимфоцитами СD45+CD8+ (p=0,02).
6. Умеренная и выраженная инфильтрация паренхимы опухоли CD8+ цитотоксическими и, в особенности, высокое соотношение CD8+/CD4+ тумор-пенетрирующих лимфоцитов являются факторами прогноза при серозной аденокарциноме яичников вследствие низкой частоты прогрессирования у этих больных (18,2% и 72,2%, р=0,005) при сроках наблюдения от 3 до 27 месяцев.
Список опубликованных работ по теме диссертации:
1. Зуева, Е.В. Иммунофенотипическая и проточно-цитометрическая характеристика субпопуляционного состава интратуморальных лимфоцитов при серозной аденокарциноме яичников/ Зуева Е.В., Никогосян С.О., Кузнецов В.В., Моженкова А.В., Кокосадзе Н.В., Тимошенко В.В., Каирбаева М.Ж., Тупицын Н.Н.// Опухоли женской репродуктивной системы. —2009. — №3–4. — С. 117–121.
2. Зуева, Е.В. Иммунобиологические особенности СD56-позитивной серозной аденокарциномы яичников/ Зуева Е.В., Каирбаева М.Ж., Никогосян С.О., Моженкова А.В., Дигаева М.А., Тережкина И.В., Тупицын Н.Н.// Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. — 2010. —Т. 148, №5. — С. 538–542.
3. Зуева, Е.В. Иммунофенотип серозной аденокарциномы яичников и его клиническое значение/ Зуева Е.В., Каирбаева М.Ж., Моженкова А.В., Никогосян С.О., Тупицын Н.Н.// Иммунология гемопоэза.— 2009. — №2. —С. 55–68.
4. Зуева, Е.В. СD4-позитивные Т-лимфоциты в опухолевой ткани больных раком яичников/ Зуева Е.В., Каирбаева М.Ж., Никогосян С.О., Тупицын Н.Н., Моженкова А.В.// Здоровье и болезнь, Казахстан. —2009. —Т. 6, №82.— С.71–75.
5. Каирбаева, М.Ж. Субпопуляции опухоль-инфильтрирующих лимфоцитов серозной аденокарциномы яичников/ Каирбаева М.Ж., Зуева Е.В., Моженкова А.В., Кокосадзе Н.В., Никогосян С.О., Тупицын Н.Н.// Доклады Академии наук. — 2009. — Т. 429, №1. — С. 115–119.
6. Kairbayeva, M.Z. Subpopulations of Tumor_Infiltrating Lymphocytes in Ovarian Serous Adenocarcinoma/ Kairbayeva M.Z., Zueva E.V., Mozhenkova A.V., Kokosadze N.V., Nikogosyan S.O., Tupitsyn N.N. Doklady Biochemistry and Biophysics. — 2009. — Vol. 429. — Р. 289–292.
Подписано в печать 30.09.2010. Формат 60Х84/16
Бумага офисная «SvetoCopy». Тираж 100 экз. Заказ №
Отпечатано на УМТ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН
115478, Москва, Каширское ш., 24
