Направленный поиск и фармакологические свойства веществ с антиоксидантной активностью среди конденсированных и неконденсированных производных бензимидазола

На правах рукописи

ТИБИРЬКОВА ЕЛЕНА ВИКТОРОВНА

НАПРАВЛЕННЫЙ ПОИСК И ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ

СВОЙСТВА ВЕЩЕСТВ С АНТИОКСИДАНТНОЙ АКТИВНОСТЬЮ СРЕДИ КОНДЕНСИРОВАННЫХ И НЕКОНДЕНСИРОВАННЫХ ПРОИЗВОДНЫХ БЕНЗИМИДАЗОЛА

14.03.06 – фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

ВОЛГОГРАД – 2010

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет Росздрава»

Научный руководитель: Член-корреспондент РАМН,

Заслуженный деятель науки РФ,

доктор медицинских наук,

профессор

Спасов Александр Алексеевич

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук,

профессор

Островский Олег Владимирович

доктор медицинских наук,

профессор

Макляков Юрий Степанович

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Саратовский государственный

медицинский университет Росздрава»

Защита состоится «____»________________2010 г. в _____ ч. на заседании Диссертационного Совета Д 208.008.02 при ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет Росздрава» по адресу: 400131, г. Волгоград, пл. Павших борцов, 1

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет Росздрава»

Автореферат разослан «____»_________________ 2010 г.

Ученый секретарь

Диссертационного Совета,

доктор медицинских наук,

профессор А.Р. Бабаева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Свободнорадикальное окисление играет важную роль как в нормальной жизнедеятельности клеток, так и в развитии патологического процесса [Моругова Т.В., Лазарева Д.Н., 2000; Бульон В.В. и др., 2006]. Избыточная продукция свободных радикалов и (или) нарушение функционирования антиоксидантной системы рассматриваются в качестве одних из наиболее значимых факторов патогенеза старения [Голубев А.Г., 2003; Арутюнян А.В., Козина Л.С., 2009; Golden T.R. et al., 2002], сердечно-сосудистых заболеваний [Неверов И.В., 2001; Капелько В.И., 2003; Ланкин В.З. и др., 2004; Ковалева О.Н. и др., 2005; Tardif J.C., 2005], бронхолегочной патологии [Фархутдинов У.Р., Фархутдинов Р.Р., 2000; Камышников В.С., 2003], заболеваний печени [Девяткина Т.А. и др., 2003; Камышников В.С., 2003], нейродегенеративных заболеваний [Федин А.И., 2002; Дзюба А.Н., Сорокин Ю.Н., 2004; Катунина Е.А., 2005; Bonnefont-Rousselot D. et al., 2000; Buhmann C. et al., 2004], ишемии мозга и поражения нейронов [Зозуля Ю.А. и др., 2000; Спасов А.А. и др., 2003; Бизенкова М.Н. и др., 2006], сахарного диабета и его сосудистых осложнений [Балаболкин М.И., Клебанова Е.М., 2000; Бардымова Т.П. и др., 2006; Vincent A.M. et al., 2004] и т.д.

Важную роль в клинической практике играют антиоксидантные средства, способные поддерживать структурный гомеостаз организма в условиях патологии [Шанин Ю.Н., 2003; Меньщикова Е.Б. и др., 2008; Gutterjdge J.M.C., Halliwell B.H., 2000; Guerra E.J., 2001]. Однако, несмотря на широкий спектр препаратов для подавления реакций свободнорадикального окисления, возникают проблемы, связанные с использованием существующих средств, такие как токсичность некоторых фенольных антиоксидантов, вытеснение эндогенных антиоксидантов при использовании синтетических соединений и т.д. [Оковитый С.В., 2003; Шанин Ю.Н., 2003; Лукк М.В. и др., 2008]. В связи с этим является актуальным поиск новых антиоксидантных веществ, на основе которых могут быть созданы лекарственные препараты для лечения заболеваний, сопровождающихся избыточной активацией процессов пероксидации.

Производные бензимидазола имеют -электронноизбыточную структуру, что позволяет предполагать наличие у них антиоксидантной активности [Авдюнина Н.И., 1979; Пожарский А.Ф., 1985; Анисимова В.А. и др., 1996]. На протяжении ряда лет на кафедре фармакологии и в НИИ фармакологии Волгоградского государственного медицинского университета широко исследуются различные виды биологической активности данного класса соединений, в том числе показана их способность ингибировать свободнорадикальные реакции [Спасов А.А., 1983; Островский О.В., 1996; Косолапов В.А., 2005]. Учитывая вышесказанное, были проведены поиск новых высокоактивных антиоксидантных веществ среди конденсированных и неконденсированных производных бензимидазола и изучение их влияния на процессы пероксидации при различных патологических состояниях.

Диссертационная работа выполнена в рамках Федеральной целевой научно-технической программы «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития науки и техники гражданского назначения» (№ государственной регистрации 01200116045), является составной частью научно-исследовательской программы «Поиск, разработка и фармакологическое изучение веществ, проявляющих антиоксидантные свойства» (№ государственной регистрации 01200609434), включенной в план НИР Волгоградского государственного медицинского университета. Тема работы утверждена на заседании Учёного Совета Волгоградского государственного медицинского университета (протокол № 8 от 20.04.2007 г.).

Целью настоящего исследования являлся направленный поиск высокоактивных антиоксидантных соединений в ряду конденсированных и неконденсированных производных бензимидазола с последующим детальным изучением влияния наиболее активных веществ на процессы пероксидации и доклиническим исследованием их специфической активности на различных патологических моделях.

Для достижения указанной цели представлялось необходимым решить следующие задачи:

1. Провести прогноз наличия высокоактивных антиоксидантных веществ среди ранее неиспытанных соединений из ряда конденсированных и неконденсированных производных бензимидазола, а также изучить антиоксидантные и антирадикальные свойства веществ, отобранных при проведении прогноза, и препаратов сравнения на моделях in vitro.
2. Определить зависимость действия изучаемых соединений на свободнорадикальные процессы от их химических структур и физико-химических свойств.
3. Исследовать механизмы действия наиболее активных веществ и препаратов сравнения на различные звенья свободнорадикальных процессов на моделях in vitro.
4. Изучить острую токсичность наиболее активных соединений, рассчитать их терапевтический индекс и выбрать наиболее эффективные вещества для доклинического изучения их специфической активности.
5. Исследовать защитное действие наиболее активных соединений и препаратов сравнения на различных моделях острой гипоксии.
6. Изучить противоишемические свойства наиболее активных веществ и препаратов сравнения на модели ишемии головного мозга путем билатеральной окклюзии сонных артерий.
7. Исследовать влияние наиболее активных соединений и препаратов сравнения на процессы перекисного окисления липидов и активность ферментов антиоксидантной системы, а также их гемореологические свойства при билатеральной окклюзии сонных артерий с контролируемой гипотензией.
8. Изучить влияние наиболее активных веществ и препаратов сравнения на показатели перекисного окисления липидов и активность ферментов антиоксидантной системы, а также их защитное действие в отношении -клеток поджелудочной железы в условиях стрептозотоциновой интоксикации.

Научная новизна. Впервые для новых оригинальных химических соединений из ряда конденсированных и неконденсированных производных бензимидазола был проведен прогноз уровня антиоксидантной активности в программном комплексе «Микрокосм» 4.2 с последующим экспериментальным изучением антиоксидантных и антирадикальных свойств веществ, выбранных на основе прогноза. Обнаружено, что наиболее активными являются производные N1-замещенных пирроло[1,2-]бензимидазолов, а также N9-пиперидиноэтильные производные имидазо[1,2-]бензимидазолов, имеющие в качестве радикала R2 фенил, замещенный фенил (п-оксифенил, 4-фторфенил, 3,4-дихлорфенил) или -нафтил. В ходе выявления взаимосвязи между действием изучаемых веществ на свободнорадикальные процессы и их физико-химическими свойствами были установлены параметры, детерминирующие наличие выраженных антиоксидантных свойств у производных бензимидазола, что позволило дать рекомендации по направленному синтезу высокоактивных антиоксидантных соединений. Были исследованы механизмы действия наиболее активных веществ, относящихся к ряду производных пирроло[1,2-]бензимидазолов, под лабораторными шифрами РУ-642 и РУ-643 на различные звенья свободнорадикальных процессов in vitro и установлена их наибольшая эффективность в отношении липопероксильного радикала и (в высоких концентрациях) стабильного свободного радикала 2,2-дифенил-1-пикрилгидразил. Впервые были обнаружены противогипоксические и противоишемические свойства у нового высокоактивного и умеренно токсичного антиоксидантного вещества РУ-642, а также его способность нормализовать гемореологический статус организма при ишемии головного мозга с последующей реперфузией и проявлять защитное действие в отношении -клеток поджелудочной железы при интоксикации стрептозотоцином. Доказано, что в основе эффективности исследуемого соединения в условиях данных патологий лежит антиоксидантный механизм его действия.

Научно-практическая значимость работы. Прогноз уровня антиоксидантной активности в программном комплексе «Микрокосм» 4.2 с последующей экспериментальной проверкой может быть эффективно использован для целенаправленного поиска новых гетероциклических производных с высокой антиоксидантной активностью. Полученные данные свидетельствуют о целесообразности поиска ингибиторов перекисного окисления липидов среди производных пирроло[1,2-]бензимидазолов. На основании выявленной зависимости антиоксидантной активности изучаемых соединений от их физико-химических параметров были даны рекомендации по оптимизации поиска субстанций в аналогичных рядах веществ и направленному синтезу эффективных антиоксидантных соединений. Получены данные о наличии у вещества РУ-642 противогипоксических и противоишемических свойств, обнаружена его способность снижать количество продуктов перекисного окисления липидов, повышать активность ферментов антиоксидантной системы и улучшать реологические параметры крови при ишемии головного мозга с последующей его реперфузией, а также уменьшать образование продуктов перекисного окисления липидов, увеличивать активность антиоксидантных ферментов и проявлять протекторное действие в отношении -клеток поджелудочной железы в условиях интоксикации стрептозотоцином. Выраженное защитное действие соединения РУ-642 при различных патологических состояниях, сопровождающихся активацией свободнорадикальных процессов, определяет перспективность проведения дальнейших фармакологических и токсикологических исследований данного вещества.

Реализация результатов исследования. Прогноз уровня антиоксидантной активности в программном комплексе «Микрокосм» 4.2 с последующей экспериментальной проверкой используется на кафедре фармакологии и в НИИ фармакологии Волгоградского государственного медицинского университета для целенаправленного поиска высокоактивных антиоксидантных веществ среди новых конденсированных и неконденсированных производных бензимидазола. Выявленные закономерности между химическими структурами изученных производных бензимидазола и их способностью ингибировать процессы перекисного окисления липидов принимаются во внимание при синтезе новых антиоксидантных соединений в НИИ физической и органической химии Южного федерального университета, а также в экспериментальной работе лаборатории органического синтеза НИИ фармакологии Волгоградского государственного медицинского университета. Результаты работы используются в лекционных курсах на кафедрах фармакологии, химии, фармакологии и биофармации ФУВ Волгоградского государственного медицинского университета, на кафедре фармакологии Ростовского государственного медицинского университета.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Производные N1-замещенных пирроло[1,2-]бензимидазолов являются перспективным классом соединений в плане поиска новых веществ, способных ингибировать процессы перекисного окисления липидов.
2. Прогноз уровня антиоксидантной активности производных бензимидазола в программном комплексе «Микрокосм» 4.2 с последующей экспериментальной проверкой позволяет оптимизировать поиск высокоактивных антиоксидантных соединений среди веществ данного ряда.
3. Наиболее выраженную антиоксидантную активность среди новых конденсированных и неконденсированных производных бензимидазола проявляют производные N1-замещенных пирроло[1,2-]бензимидазолов, а также N9-пиперидиноэтильные производные имидазо[1,2-]бензимидазолов, имеющие в качестве радикала R2 фенил, замещенный фенил (п-оксифенил, 4-фторфенил, 3,4-дихлорфенил) или -нафтил. К физико-химическим параметрам, детерминирующим наличие выраженных антиоксидантных свойств у производных бензимидазола, относятся: молекулярная рефракция ароматического цикла молекулы вещества 45,90; 22,48 молекулярная рефракция радикала R3 < 30,83; липофильность ароматического цикла молекулы вещества 2,47; 1,41 липофильность радикала R3 < 2,20; суммарный заряд радикала R1 0,076; -0,062 суммарный заряд радикала R3 < -0,004.
4. Производное N1-замещенных пирроло[1,2-]бензимидазолов соединение РУ-642 превосходит по условному терапевтическому индексу антиоксидантной активности, полученной на модели аскорбат-зависимого перекисного окисления липидов, остальные исследуемые производные бензимидазола, а также препараты сравнения тролокс, дибунол и мексидол. Вещество РУ-642 эффективнее мексидола на различных моделях острой гипоксии; не уступает ему по выраженности противоишемических свойств; оказывает большее, чем препарат сравнения липоевая кислота, защитное действие при интоксикации стрептозотоцином, что является предпосылкой для дальнейших расширенных фармакологических исследований данного соединения.

Апробация работы. Материалы диссертации докладывались и обсуждались на XII-XIII Региональных конференциях молодых исследователей Волгоградской области (Волгоград, 2007-2008 гг.); 65-67-й итоговых научных конференциях студентов и молодых ученых Волгоградского государственного медицинского университета (Волгоград, 2007-2009 гг.); Пятой Российской конференции «Гипоксия: механизмы, адаптация, коррекция» (Москва, 2008 г.).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 17 работ (из них две – в центральной печати).

Объем и структура работы

Диссертация изложена на 213 страницах машинописного текста, иллюстрирована 40 рисунками и 50 таблицами. Состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части (главы 2-4), обсуждения результатов, выводов, списка литературы, включающего 159 отечественных и 46 зарубежных источников.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Эксперименты выполнены на 130 белых неинбредных крысах обоего пола массой 200-400 г. и 263 белых неинбредных мышах обоего пола массой 17-36 г., содержащихся в условиях вивария с естественным световым режимом на стандартной диете (ГОСТ Р 50258-92), согласно методическим руководствам и нормативным документам – ГОСТ З 51000.3-96 и 51000.4-96; правила и Международные рекомендации Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых при экспериментальных исследованиях (1997); правила лабораторной практики (GLP) в РФ, утвержденные приказом Минздрава РФ от 19 июня 2003 г. №267. Острую токсичность соединений исследовали в соответствии с требованиями и инструкциями Федеральной службы по надзору в сфере здравоохранения и социального развития [Хабриев Р.У., 2005].

В работе изучены 27 веществ под лабораторными шифрами «РУ», синтезированные в НИИ физической и органической химии Южного федерального университета^[1]. Из них 21 соединение относится к производным N9-замещенных имидазо[1,2-]бензимидазолов, 6 соединений – к производным N1-замещенных пирроло[1,2-]бензимидазолов. В качестве препаратов сравнения использовали тролокс (Fluka, Швейцария), дибунол (Merck, Германия), мексидол (НИИ фармакологии РАМН, Россия), липоевую кислоту (ICN Марбиофарм, Россия).

Прогноз антиоксидантной активности у 100 новых конденсированных и неконденсированных производных бензимидазола из компьютерной базы данных Волгоградского государственного медицинского университета проводили в программном комплексе «Микрокосм» 4.2^[2].

Антиоксидантную активность отобранных при прогнозе веществ изучали в экспериментах in vitro на модели аскорбат-зависимого перекисного окисления липидов (ПОЛ) [Ланкин В.З. и др., 1975]. Антирадикальные свойства соединений оценивали по их способности инактивировать стабильный свободный радикал 2,2-дифенил-1-пикрил-гидразил (ДФПГ) (Sigma, США) [Glavind J., 1963].

Для выявления взаимосвязи между антиоксидантной активностью и физико-химическими свойствами изучаемых веществ использовали подструктурный анализ [Васильев П.М., 1983]. Предварительно рассчитывали стерические [Arup K.G., Gordon M.C., 1987], липофильные [Vellarkad N.V. et al., 1989] и электронные [Кларк Т., 1990] параметры, используя квантово-химические методы, реализованные в программном обеспечении CS Chem3D® 8.0.

Влияние наиболее активных веществ на процессы хемилюминесценции (ХЛ) изучали на хемилюминометре «ХЛ-003» (Уфа, Россия). Фиксировали показатель суммарной светимости в условных единицах. Для исследования антиоксидантной активности соединений использовали метод Fe2+-индуцированной ХЛ липидов [Фархутдинов Р.Р., Лиховских В.А., 1995]. Антирадикальные свойства веществ изучали с помощью метода люминол-зависимой ХЛ [Фархутдинов Р.Р., Лиховских В.А., 1995] и системы с генерацией пероксильного радикала (ROO•) в ходе термического разложения 2,2'-азобис(2-метилпропионамидин)дигидрохлорида (АБАП) [Клебанов Г.И., 2001]. Антирадикальную активность оценивали также по способности соединений подавлять окисление 2,2'-азино-бис-(3-этилбензтиазолин)-6-сульфоновой кислоты (АБТС) [Rice-Evans С., 1994]. Ингибирующую концентрацию ИК50 рассчитывали методом регрессионных уравнений в программе Statistica 6.0 (StatSoft, США).

О влиянии веществ на процессы ПОЛ in vivo судили по концентрации малонового диальдегида (МДА) в плазме крови [Андреева Л.И., Кожемякин Л.А., 1988] и гомогенатах тканей [Гаврилов В.Б. и др., 1987]. Активность супер­оксиддисмутазы (СОД) определяли по методу В.А. Костюка и др. [1990], глутатионпероксидазы (ГП) – по методу В.М. Моина [1986].

Оптическую плотность измеряли на спектрофотометре PD-303 UV (APEL, Япония) в кюветах с длиной оптического пути 1 см.

Измерение вязкости крови проводили на анализаторе крови реологическом АКР-2 (Россия). Вязкость крови определяли при скоростях сдвига 300, 200, 100, 50 и 20 с-1 [Добровольский Н.А., 1998]. Влияние веществ на агрегацию тромбоцитов оценивали на двухканальном лазерном анализаторе агрегации тромбоцитов (модель 220 LA) («Биола», Москва) по методу G. Born [1962] в модификации З.А. Габбасова [1989]. Исследовали богатую тромбоцитами плазму [Люсов В.А., Белоусов Ю.Б., 1971].

Противогипоксическую активность соединений изучали согласно методическим рекомендациям под редакцией Л.Д. Лукьяновой [1990]. Острую гипобарическую гипоксию (ОГБГ) моделировали в проточной барокамере «Биоконт-Б» («Парус», Москва). Мышей помещали в условия, соответствующие подъему на высоту 11 000 м. Оценивали время их жизни до второго агонального вдоха или летального исхода. ЕД50 (дозу, в которой вещество повышает время жизни на 50%) рассчитывали методом регрессионных уравнений в программе Statistica 6.0 (StatSoft, США). Острую гемическую гипоксию (ОГеГ) создавали путем однократного внутрибрюшинного введения натрия нитрита в дозе 225 мг/кг. Острую гистотоксическую гипоксию (ОГТГ) вызывали однократным внутрибрюшинным введением натрия нитропруссида в дозе 20 мг/кг. Регистрировали продолжительность жизни мышей от момента введения до гибели. Для воспроизведения гипоксии с гиперкапнией в гермообъеме животных поодиночке помещали в стеклянные банки объемом 200 мл, которые герметически закрывали. Фиксировали время жизни мышей до второго агонального вдоха.

Ишемию головного мозга создавали под наркозом хлоралгидратом (400 мг/кг, внутрибрюшинно) окклюзией общих сонных артерий [Мирзоян Р.С. и др., 2000]. В течение 3-х суток после операции оценивали выживаемость крыс, локомоторную активность в актометре («Ugo Basile», Италия), поведение в тесте «открытое поле», сохранность рефлексов [Буреш Я., Бурешова О., 1991]. Неврологический дефицит определяли по шкале Stroke-index McGrow в модификации И.В. Ганнушкиной [1977]. Ишемически-реперфузионное повреждение головного мозга моделировали под наркозом хлоралгидратом (400 мг/кг, внутрибрюшинно) окклюзией общих сонных артерий в течение 30 минут с последующей реперфузией [Мирзоян Р.С., 2006]. Операцию проводили под контролем артериального давления (80/60 мм.рт.ст.). Через 30 минут реперфузии забирали кровь из брюшной аорты, а после эвтаназии крыс методом декапитации – мозговую ткань. В плазме крови и мозге определяли содержание МДА, активность СОД и ГП. В отдельной серии экспериментов изучали влияние веществ на вязкость крови и АДФ-индуцированную агрегацию тромбоцитов.

Стрептозотоциновую интоксикацию моделировали путем однократного внутривенного введения раствора стрептозотоцина (Sigma, США) в 1 моль/л цитратном буфере pH 4,5 в дозе 50 мг/кг [Srinivasan K., Ramarao P., 2007]. Оценивали потребление животными воды и корма, их вес. Через 72 часа после введения стрептозотоцина [Akbarzadeh A. et al., 2007] регистрировали выживаемость крыс, определяли уровень глюкозы в плазме крови и моче с помощью набора «Глюкоза-ФКД» (Россия), а также содержание кетоновых тел в моче с использованием диагностических полосок «Кетофан» (PLIVA-Lachema Diagnostika, Чехия). После забора крови из брюшной аорты у наркотизированных хлороформом животных осуществляли их эвтаназию методом декапитации и извлекали поджелудочную железу, сердце, почки [Dincer Y. et al., 2002; Maritim AC et al., 2003]. В плазме крови и гомогенатах органов изучали процессы ПОЛ по накоплению МДА, оценивали активность СОД и ГП. Островковый аппарат селезеночного отдела поджелудочной железы исследовали морфологически^[3]. Морфометрический анализ проводили с помощью компьютерной системы «ВидеоТестМорфо-4». Определяли процентное соотношение площади, занимаемой -эндокриноцитами, к общей площади островка, которую принимали за 100%.

Острую токсичность соединений изучали на мышах при внутрибрюшинном введении. Величину LD50 определяли по методу Личфилда-Вилкоксона. Для расчета показателя условной широты терапевтического действия выводили условный терапевтический индекс (УТИ).

Статистическую обработку данных проводили с использованием пакета программ Statistica 6.0 (StatSoft, США) и Excel 2007 (MS Office 2007, США) с применением парного критерия Стьюдента (t) и точного метода Фишера.

Результаты исследования и их обсуждение

В ходе прогноза антиоксидантной активности у новых производных бензимидазола из 100 неиспытанных соединений, содержащихся в компьютерной базе данных Волгоградского государственного медицинского университета, отобрано 27 веществ с достоверными расчетными оценками наличия выраженных антиоксидантных свойств. При изучении их антиоксидантной активности установлено, что в ряду производных N1-замещенных пирроло[1,2-]бензимидазолов все соединения (6/6) проявляют высокую активность, в то время как среди производных N9-замещенных имидазо[1,2-]бензимидазолов доля высокоактивных веществ составляет 33,3% (7/21). Таким образом, антиоксидантные свойства бензимидазольных соединений усиливаются при наличии в их структуре пиррольного кольца, что согласуется с представлениями о значении определенной -избыточности для проявления веществами антиоксидантной активности. Отдельные радикалы в различных положениях гетероцикла могут усиливать донорно-акцепторные свойства производных бензимидазола. Так, присутствие пиперидиноэтильного радикала в положении N9 гетероциклического кольца производных имидазо[1,2-]бензимидазолов в сочетании с фенилом, замещенным фенилом (п-оксифенилом, 4-фторфенилом, 3,4-дихлорфенилом) или -нафтилом в качестве радикала R2 приводит к появлению высокой антиоксидантной активности у соединений данного класса.

При изучении зависимости антиоксидантных свойств исследуемых веществ от их физико-химических параметров методом подструктурного анализа были выявлены признаки, детерминирующие высокую антиоксидантную активность у данного ряда соединений: молекулярная рефракция ароматического цикла молекулы вещества 45,90; 22,48 молекулярная рефракция радикала R3 < 30,83; липофильность ароматического цикла молекулы вещества 2,47; 1,41 липофильность радикала R3 < 2,20; суммарный заряд радикала R1 0,076; -0,062 суммарный заряд радикала R3 < -0,004. Данные факты могут учитываться при направленном синтезе высокоактивных бензимидазольных соединений.

По результатам прогноза и экспериментального изучения антиоксидантной активности у новых производных бензимидазола для детального исследования антиоксидантных и антирадикальных свойств in vitro были выбраны наиболее активные вещества под лабораторными шифрами РУ-642 и РУ-643, относящиеся к производным N1-замещенных пирроло[1,2-]бензимидазолов. При изучении механизмов их действия на свободнорадикальные процессы обнаружено, что данные соединения проявляют высокую эффективность в отношении липопероксильного радикала, ингибируя Fe2+-индуцированную ХЛ липидов, менее активны в отношении радикалов люминола и супероксида в системе с аутоокислением люминола, а также АБТС• в методе окисления АБТС (рис. 1). В высоких концентрациях оба вещества подавляют образование ROO• в ходе термического разложения АБАП и полностью обесцвечивают раствор ДФПГ•.

А.	Б.

Рис. 1. Активность веществ РУ-642 (А) и РУ-643 (Б) в концентрации 1 мкмоль/л на моделях изучения антиоксидантных и антирадикальных свойств, % ингибирования реакции

Обозначения: * – данные статистически значимы (t) по отношению к контролю, р0,05.

Наиболее позитивные характеристики по показателям антиоксидантной и антирадикальной активности, а также острой токсичности имеет вещество РУ-642 (табл. 1), которое и было выбрано для доклинического исследования его специфической активности на патологических моделях, сопровождающихся активацией свободнорадикальных процессов.

Таблица 1

Показатели антиоксидантной и антирадикальной активности (ИК50), острой токсичности (LD50), условного терапевтического индекса веществ РУ-642, РУ-643 и препаратов сравнения

№	Шифр вещества	LD50, мг/кг	Аскорбат-зависимое ПОЛ		Fe2+-индуцированная ХЛ липидов		Взаимодействие с ДФПГ
			ИК50, мкмоль/л	УТИ	ИК50, мкмоль/л	УТИ	ИК50, мкмоль/л	УТИ
1.	РУ-642	792	0,32	4517,5	3,26	442,3	9,83	146,6
2.	РУ-643	262	0,32	1534,9	1,09	444,2	7,28	66,7
3.	Тролокс	17001	2,76	2457,3	1,13	6026,5	6,78	1002,4
4.	Дибунол	490	3,16	701,0	0,48	4628,8	15,56	142,5
5.	Мексидол	4752	480,0	3,9	192,13	9,7	20,94	89,0

Примечание:

1 – Cort W.M. et al., 1975; 2 – Воронина Т.А., 2005; 3 – Косолапов В.А. и др., 2005.

При изучении антигипоксических свойств соединения РУ-642 установлено, что исследуемое вещество в дозе 0,176 мг/кг увеличивает продолжительность жизни животных на 160,27 (p0,05); 74,13; 73,88 (p0,05) и 26,96 (p0,05) % по отношению к контролю при ОГБГ, ОГеГ, ОГТГ и гипоксии с гиперкапнией в гермообъеме соответственно (рис. 2). Мексидол в дозе 122,4 мг/кг повышает время жизни мышей на 182,14 (p0,05); 17,30; 48,40 (p0,05) и 21,86% в тех же условиях. Десяти- и стократное увеличение дозы соединения РУ-642 на модели ОГБГ привело к возрастанию его противогипоксического эффекта. При расчете величины ЕД50 было выявлено значительное превосходство исследуемого вещества (ЕД50=0,055 мг/кг) над мексидолом (ЕД50=14,22 мг/кг) на данной модели. Наиболее вероятно, что в основе обусловленного соединением РУ-642 повышения резистентности организма животных к острой гипоксии лежит торможение свободнорадикальных процессов.

А.		Б.
В.		Г.

Рис. 2. Влияние вещества РУ-642 и мексидола на время жизни мышей при острых гипобарической (А), гемической (Б), гистотоксической (В) и гиперкапнической в гермообъеме (Г) гипоксиях

Обозначения: по оси абсцисс – доза вещества, мг/кг; по оси ординат – время жизни животных по отношению к контролю, %; * – данные статистически значимы (t) относительно контроля, p0,05.

При изучении противоишемических свойств вещества РУ-642 на модели билатеральной окклюзии сонных артерий была обнаружена тенденция к повышению выживаемости животных на 12,5% относительно ишемии в течение всего опыта. В то же время мексидол проявил сходный эффект только на 2-е и 3-и сутки после операции. Наиболее выраженное защитное действие соединение РУ-642 оказывало в 1-е сутки после перевязки сонных артерий: статистически значимо увеличивало локомоторную активность животных в 6,3 раза по отношению к ишемии, повышало их горизонтальную активность в тесте «открытое поле» на 80,69%, а также снижало выраженность неврологических нарушений (по шкале Stroke-index McGrow) на 57,65% относительно ишемии (табл. 2). Мексидол несколько превосходил исследуемое вещество по влиянию на горизонтальную активность, но данные являлись статистически незначимыми.

Таблица 2

Влияние вещества РУ-642 и мексидола на локомоторную (в актометре), горизонтальную (в тесте «открытое поле») активности и неврологический статус (по шкале McGrow) животных в первые сутки после билатеральной окклюзии сонных артерий (M±m)

Группа животных	Доза вещества, мг/кг	Локомоторная активность, усл.ед.	Горизонтальная активность, количество пересеченных квадратов	Неврологический статус, баллы
Контроль	–	33,78 ± 9,98	32,44 ± 4,77	0,06 ± 0,06
Ишемия	–	1,38 ± 0,94*	16,88 ± 4,45*	4,72 ± 1,18*
Ишемия + РУ-642	0,176	8,63 ± 2,78*,**	30,50 ± 3,03**	2,00 ± 0,33*,**
Ишемия +Мексидол	122,4	4,33 ± 3,84*	34,67 ± 10,28	3,31 ± 1,47

Примечание: * – данные статистически значимы (t) относительно группы ложнооперированных крыс, p0,05; ** – данные статистически значимы (t) относительно группы крыс с ишемией, p0,05.

С целью выяснения механизма противоишемического действия соединения РУ-642 была использована модель ишемии головного мозга с последующей его реперфузией. При этом у крыс с патологией, получавших исследуемое вещество, содержание МДА в плазме крови и мозговой ткани снижалось на 34,88 и 26,77 (p0,05) % по отношению к ишемии соответственно (рис. 3). Мексидол продемонстрировал сходную активность, уменьшая данный показатель на 31,61% в плазме крови и на 27,01% (p0,05) относительно ишемии в мозге.

Рис. 3. Влияние вещества РУ-642 и мексидола в дозах 0,176 и 122,4 мг/кг соответственно на содержание малонового диальдегида в плазме крови и мозге при ишемии-реперфузии головного мозга

Обозначения: по оси абсцисс – группа животных; по оси ординат – дельта к ложнооперированному контролю, %; * – данные статистически значимы (t) относительно группы ложнооперированных крыс, p0,05; ** – данные статистически значимы (t) относительно группы крыс с ишемией, p0,05.

Вещество РУ-642 повышало активность СОД на 52,35 и 32,68% (p0,05) по отношению к ишемии в плазме крови и головном мозге соответственно (рис. 4). Мексидол был менее эффективен и в плазме крови увеличивал активность фермента на 47,41% (p0,05), в мозге – на 27,87% относительно ишемии.

Рис. 4. Влияние вещества РУ-642 и мексидола в дозах 0,176 и 122,4 мг/кг соответственно на активность супероксиддисмутазы в плазме крови и мозге при ишемии-реперфузии головного мозга

Обозначения: по оси абсцисс – группа животных; по оси ординат – дельта к ложнооперированному контролю, %; * – данные статистически значимы (t) относительно группы ложнооперированных крыс, p0,05; ** – данные статистически значимы (t) относительно группы крыс с ишемией, p0,05.

При введении соединения РУ-642 наблюдалась тенденция к повышению активности ГП на 21,43 и 86,87% по отношению к ишемии в плазме крови и мозге соответственно. Мексидол не влиял на активность фермента в плазме крови, но увеличивал ее в мозге на 47,86% относительно ишемии.

В ходе изучения гемореологической активности вещества РУ-642 при ишемии-реперфузии головного мозга была обнаружена его способность статистически значимо снижать вязкость крови на 8,80; 9,47; 10,72; 12,24 и 16,26% по отношению к ишемии при скоростях сдвига 300; 200; 100; 50 и 20 с-1 соответственно, что свидетельствует о нормализации способности эритроцитов к деформации и их агрегационной способности. Мексидол уменьшал показатели вязкости крови при скорости сдвига 300 с-1 на 12,00%, 200 с-1 – на 12,59%, 100 с-1 – на 13,65%, 50 с-1 – на 15,02% и 20 с-1 – на 18,84% относительно ишемии. Изучаемое соединение продемонстрировало значительный антиагрегантный эффект, снижая индекс агрегации тромбоцитов и максимальный наклон агрегатограммы на 33,13 и 80,11% (p0,05) относительно ишемии соответственно. Мексидол также уменьшал функциональную активность тромбоцитов, но данные были статистически незначимыми. Учитывая роль активации свободнорадикальных процессов в гемореологических нарушениях, можно предположить, что полученный эффект соединения РУ-642 обусловлен его антиоксидантными свойствами.

Выраженное позитивное влияние на состояние крыс со стрептозотоциновой интоксикацией вещество РУ-642 оказывало в дозе 26,6 мг/кг: повышало выживаемость до 100% (p0,05); уменьшало потребление воды на 65,31% (p0,05); увеличивало потребление корма и массу тела на 40,74 (p0,05) и 10,48% соответственно; проявляло тенденцию к снижению уровня глюкозы в плазме крови и моче на 20,54 и 22,28% соответственно, а также кетоновых тел в моче – на 52,22% по отношению к патологии. Липоевая кислота в дозе 10 мг/кг была менее эффективна: повышала выживаемость на 25%, снижала потребление воды на 7,14% (p0,05), увеличивала потребление корма на 20,16% (p0,05), уменьшала содержание кетоновых тел в моче на 11,11% относительно группы животных с интоксикацией стрептозотоцином.

В ходе изучения механизма защитного действия соединения РУ-642 при стрептозотоциновой интоксикации установлено, что исследуемое вещество статистически значимо снижало уровень МДА: в плазме крови – на 25,59; 26,35; 26,47 и 46,75% в дозах 0,176; 1,76; 8,8 и 26,6 мг/кг соответственно; в поджелудочной железе – на 59,50; 62,92 и 69,49% в дозах 1,76; 8,8 и 26,6 мг/кг соответственно; в сердце – на 45,66% в дозе 26,6 мг/кг; в почках – на 33,62 и 35,39% по отношению к патологии в дозах 8,8 и 26,6 мг/кг соответственно (рис. 5). Липоевая кислота уменьшала содержание МДА в плазме крови и поджелудочной железе на 40,25 и 24,52% (p0,05) относительно патологии соответственно.

Рис. 5. Влияние вещества РУ-642 и липоевой кислоты (10 мг/кг) на содержание малонового диальдегида в плазме крови и гомогенатах органов крыс с интоксикацией стрептозотоцином

Обозначения: по оси абсцисс – исследуемый материал; по оси ординат – дельта к интактному контролю, %; * – данные статистически значимы (t) относительно группы интактных крыс, p0,05; ** – данные статистически значимы (t) относительно группы крыс с патологией, p0,05.

Под действием соединения РУ-642 в дозах 1,76; 8,8 и 26,6 мг/кг активность СОД в плазме крови повышалась на 27,95; 28,85 и 36,11% (p0,05) по отношению к патологии соответственно. В поджелудочной железе отмечалось увеличение активности фермента на 41,94% (p0,05) при введении изучаемого вещества в дозах 0,176 и 1,76 мг/кг и на 51,15 и 62,21% (p0,05) при использовании доз 8,8 и 26,6 мг/кг соответственно. Повышение активности СОД в сердце на 47,03% (p0,05) относительно патологии наблюдалось под влиянием соединения РУ-642 в дозе 26,6 мг/кг. Липоевая кислота существенно увеличивала активность фермента в плазме крови и поджелудочной железе на 31,78 и 36,41% (p0,05) соответственно.

Рис. 6. Влияние вещества РУ-642 и липоевой кислоты (10 мг/кг) на активность супероксиддисмутазы в плазме крови и гомогенатах органов крыс при интоксикации стрептозотоцином

Обозначения: по оси абсцисс – исследуемый материал; по оси ординат – дельта к интактному контролю, %; * – данные статистически значимы (t) относительно группы интактных крыс, p0,05; ** – данные статистически значимы (t) относительно группы крыс с патологией, p0,05.

При введении вещества РУ-642 во всех изучаемых дозах наблюдалась тенденция к повышению активности ГП в плазме крови и исследуемых органах, в то время как под действием липоевой кислоты активность фермента в плазме крови и почках оставалась без изменений.

Морфологическое исследование островкового аппарата поджелудочной железы крыс, получавших соединение РУ-642 в дозе 26,6 мг/кг, выявило умеренные признаки воспаления и деструкции. По результатам морфометрического анализа процентное соотношение площади, занимаемой -клетками, к общей площади панкреатического островка увеличилось в 4,6 и 19,7 раз (p0,05) относительно патологии при введении доз 8,8 и 26,6 мг/кг соответственно (табл. 3). Липоевая кислота оказывала менее выраженное защитное действие в отношении -клеток поджелудочной железы при интоксикации стрептозотоцином.

Таблица 3

Влияние вещества РУ-642 и липоевой кислоты на распределение -клеток в панкреатических островках при стрептозотоциновой интоксикации (M±m)

Группа животных	Доза вещества, мг/кг	-клетки, %
Интактный контроль	–	85,58 ± 5,72
Стрептозотоциновая интоксикация	–	3,03 ± 1,48*
Стрептозотоциновая интоксикация + РУ-642	0,176	9,33 ± 4,28
	1,76	9,02 ± 4,59
	8,8	13,98 ± 4,19**
	26,6	59,17 ± 9,64**
Стрептозотоциновая интоксикация + Липоевая кислота	10,0	9,11 ± 5,11

Примечание: * – данные статистически значимы (t) относительно группы интактных крыс, p0,05; ** – данные статистически значимы (t) относительно группы крыс с патологией, p0,05.

Таким образом, в результате прогноза уровня антиоксидантной активности у новых производных бензимидазола в программном комплексе «Микрокосм» 4.2 с последующей экспериментальной проверкой было установлено, что производные N1-замещенных пирроло[1,2-]бензимидазолов, а также N9-пиперидиноэтильные производные имидазо[1,2-]бензимидазолов, имеющие в качестве радикала R2 фенил, замещенный фенил (п-оксифенил, 4-фторфенил, 3,4-дихлорфенил) или -нафтил, обладают выраженными антиоксидантными свойствами. Наиболее активные вещества под лабораторными шифрами РУ-642 и РУ-643, относящиеся к производным N1-замещенных пирроло[1,2-]бензимидазолов, особенно эффективны в отношении липопероксильного радикала и (в высоких концентрациях) стабильного свободного радикала ДФПГ. При исследовании фармакологического действия вещества РУ-642 установлено наличие у данного соединения противогипоксических и противоишемических свойств, а также гемореологической активности, выраженность которых сопоставима с таковыми у мексидола. При интоксикации стрептозотоцином исследуемое соединение оказывает защитное действие в отношении -клеток поджелудочной железы и превосходит по эффективности липоевую кислоту. Снижение количества продуктов перекисного окисления липидов и увеличение активности антиоксидантных ферментов под действием вещества РУ-642 позволяют объяснить его эффективность в условиях данных патологий. Учитывая вышесказанное, можно считать перспективным дальнейшее изучение фармакологических и токсикологических свойств соединения РУ-642.

ВЫВОДЫ

1. Производные N1-замещенных пирроло[1,2-]бензимидазолов являются перспективным классом веществ в плане поиска новых соединений, способных ингибировать процессы перекисного окисления липидов. В ходе изучения антиоксидантной активности новых бензимидазольных веществ в ряду производных N1-замещенных пирроло[1,2-]бензимидазолов все соединения (6/6) оказались высокоактивными. При этом 33,3% веществ (2/6) превосходили по активности тролокс, дибунол и мексидол, 16,7% веществ (1/6) – дибунол и мексидол, 50% веществ (3/6) – мексидол. Среди производных N9-замещенных имидазо[1,2-]бензимидазолов доля высокоактивных соединений составила 33,3% (7/21). При этом 9,5% веществ (2/21) превосходили по антиоксидантным свойствам дибунол и мексидол, 61,9% веществ (13/21) – мексидол.
2. Прогноз уровня антиоксидантной активности у новых конденсированных и неконденсированных производных бензимидазола с помощью программного комплекса «Микрокосм» 4.2 с последующей экспериментальной проверкой позволил оптимизировать поиск высокоактивных антиоксидантных соединений среди веществ данного ряда.
3. Антиоксидантные свойства бензимидазольных соединений усиливаются при наличии в их структуре пиррольного кольца. Присутствие пиперидиноэтильного радикала в положении N9 гетероцикла производных имидазо[1,2-]бензимидазолов в сочетании с фенилом, замещенным фенилом (п-оксифенилом, 4-фторфенилом, 3,4-дихлорфенилом) или -нафтилом в качестве R2 приводит к появлению высокой антиоксидантной активности у веществ данного ряда. Изучение зависимости антиоксидантных свойств исследуемых соединений от их физико-химических параметров методом подструктурного анализа позволило выявить признаки, детерминирующие высокую антиоксидантную активность у данного класса веществ.
4. Наиболее высокую антиоксидантную активность проявили производные N1-замещенных пирроло[1,2-]бензимидазолов вещества РУ-642 и РУ-643, относящиеся к классу умеренно токсичных соединений (3 класс). Вещество РУ-642 с условным терапевтическим индексом антиоксидантной активности, полученной на модели аскорбат-зависимого перекисного окисления липидов, 4517,5 превосходило по данному параметру препараты сравнения тролокс (2457,3), дибунол (701,0) и мексидол (3,9).
5. Вещество РУ-642 проявило выраженные защитные свойства в условиях острой гипобарической гипоксии, превосходя по величине ЕД50 (0,055 мг/кг) препарат сравнения мексидол (14,22 мг/кг). При гемической, гистотоксической и гиперкапнической в гермообъеме острых гипоксиях соединение РУ-642 в дозе 0,176 мг/кг увеличивало продолжительность жизни животных на 74,1; 73,9 и 27,0% по отношению к контролю соответственно и было эффективнее мексидола в дозе 122,4 мг/кг (17,3; 48,4 и 21,9%).
6. Вещество РУ-642 (0,176 мг/кг) в условиях ишемии головного мозга, вызванной перевязкой сонных артерий, повышало выживаемость животных на 12,5% в течение всего опыта (мексидол в дозе 122,4 мг/кг проявил сходный эффект на 2-е и 3-и сутки после операции); увеличивало двигательную активность крыс в актометре, превосходя по эффективности мексидол, а также горизонтальную и поисковую активности в тесте «открытое поле», несколько уступая препарату сравнения по влиянию на горизонтальную активность; снижало, также как и мексидол, выраженность неврологических нарушений.
7. На модели ишемии головного мозга с последующей его реперфузией соединение РУ-642 снижало содержание малонового диальдегида в плазме крови и мозговой ткани на 34,9 и 26,8% соответственно, не уступая мексидолу (31,6 и 27,0%), а также повышало активность супероксиддисмутазы на 52,4 и 32,7% по отношению к ишемии в плазме крови и мозге соответственно, превосходя по эффективности препарат сравнения (47,4 и 27,9%). Исследуемое вещество уменьшало индекс агрегации эритроцитов на 7,0% относительно ишемии, незначительно превосходя по гемореологическим свойствам мексидол (6,6%), а также индекс агрегации тромбоцитов и максимальный наклон агрегатограммы на 33,1 и 80,1% соответственно (мексидол – на 28,2 и 71,0%).
8. При интоксикации стрептозотоцином вещество РУ-642 в дозе 26,6 мг/кг оказывало выраженное позитивное влияние на состояние крыс в виде повышения выживаемости до 100%, уменьшения потребления воды, увеличения потребления корма и массы тела, тенденции к снижению уровня глюкозы в плазме крови и моче, а также кетоновых тел в моче. Липоевая кислота (10 мг/кг) была менее эффективна по влиянию на данные показатели. В указанной дозе исследуемое соединение снижало уровень малонового диальдегида на 46,8; 69,5; 45,7 и 35,4% в плазме крови, поджелудочной железе, сердце и почках соответственно, а также увеличивало активность супероксиддисмутазы в плазме крови, поджелудочной железе и сердце на 36,1; 62,2 и 47,0% относительно стрептозотоциновой интоксикации соответственно. Липоевая кислота в дозе 10 мг/кг была менее эффективна и уменьшала содержание малонового диальдегида на 40,3 и 24,5%, а также повышала активность супероксиддисмутазы на 31,8 и 36,4% в плазме крови и поджелудочной железе соответственно.
9. При интоксикации стрептозотоцином вещество РУ-642 в дозе 26,6 мг/кг увеличивало процентное соотношение площади, занимаемой -клетками, к общей площади панкреатического островка с 3,0±1,5 до 59,2±9,6, тогда как препарат сравнения (10 мг/кг) оказывал менее выраженное протекторное действие в отношении -клеток поджелудочной железы.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Тибирькова, Е.В. Антиоксидантные свойства тролокса / Е.В. Тибирькова, В.А. Косолапов // Материалы 4-ой Международной конференции «Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам». 13-16 марта 2006 г. д/о «Подмосковье». Москва: ГУ НИИ фармакологии им. В.В. Закусова РАМН. 2006. с. 71-72 [русский], с. 141 [английский].
2. Тибирькова, Е.В. Исследование антиоксидантной активности новых конденсированных и неконденсированных производных бензимидазола / Е.В. Тибирькова // Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины: материалы 65-й открытой итоговой научной конференции молодых ученых и студентов / Под общей ред. акад. В.И. Петрова. – Волгоград: Изд-во ВолГМУ, 2007. – С. 152.
3. Косолапов, В.А. Экспериментальная проверка точности компьютерного прогноза антиоксидантной активности новых гетероциклических соединений / В.А. Косолапов, П.М. Васильев, Е.В. Тибирькова и др. // Фармакология – практическому здравоохранению: Материалы III съезда фармакологов России / Психофармакол. биол. наркол. – 2007. – Т. 7, спец. вып. (сентябрь). – Ч. 1. – С. 1743.
4. Косолапов, В.А. Антиоксиданты как средства коррекции ишемических нарушений головного мозга / В.А. Косолапов, Л.В. Ельцова, Е.В. Тибирькова, В.А. Анисимова // Фармакология – практическому здравоохранению: Материалы III съезда фармакологов России / Психофармакол. биол. наркол. – 2007. – Т. 7, спец. вып. (сентябрь). – Ч. 1. – С. 1743-1744.
5. Косолапов, В.А. Компьютерный прогноз и экспериментальная проверка антиоксидантной активности азотсодержащих гетероциклических соединений / В.А. Косолапов, П.М. Васильев, Е.В. Тибирькова, В.А. Анисимова // XIV Российский национальный конгресс «Человек и лекарство»: Сборник материалов конгресса. – М., 2007. – С. 294-295.
6. Косолапов, В.А. Антиоксидантные вещества – как основа для создания средств коррекции ишемии головного мозга / В.А. Косолапов, А.А. Спасов, Л.В. Ельцова, Е.В. Тибирькова, В.А. Анисимова // Лекарственные средства и биологически активные соединения: Материалы конф. / Международная научная конференция, посвященная 40-летию НПЦ «Институт фармакологии и биохимии НАН Беларуси». Гродно, 2007. – С. 82-83.
7. Тибирькова, Е.В. Изучение антиоксидантных и антирадикальных свойств новых производных бензимидазола методами хемилюминесценции / Е.В. Тибирькова // XII Региональная конференция молодых исследователей Волгоградской области: Тезисы докладов / Под общей ред. акад. В.И. Петрова. – Волгоград: Изд-во ВолГМУ, 2007. – С. 47-49.
8. Тибирькова, Е.В. Противогипоксические свойства нового производного пирролобензимидазола / Е.В. Тибирькова // Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины: материалы 66-й открытой итоговой научно-практической конференции молодых ученых и студентов с международным участием / Под ред. акад. РАМН В.И. Петрова. – Волгоград: Изд-во ВолГМУ, 2008. – С. 161-162.
9. Тибирькова, Е.В. Противогипоксическая активность нового производного пирролобензимидазола на модели острой гипобарической гипоксии / Е.В. Тибирькова, И.Е. Толпыгин // Тезисы V Конференции молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины». – М., 2008. – С. 431-432.
10. Тибирькова, Е.В. Изучение противогипоксической активности нового производного пирролобензимидазола / Е.В. Тибирькова, В.А. Косолапов, А.А. Спасов // Пятая Российская конференция «Гипоксия: механизмы, адаптация, коррекция» / Патогенез. – 2008. – Т. 6, № 3. – С. 88-89.
11. Тибирькова, Е.В. Противогипоксическая активность нового производного пирролобензимидазола / Е.В. Тибирькова // XIII Региональная конференция молодых исследователей Волгоградской области. Волгоград, 11-14 ноября 2008 г. [Направления: 17. Актуальные проблемы экспериментальной медицины. 18. Клинические аспекты медицины]: Тез. докл. / Под общ. ред. В.И. Петрова. – Волгоград: Изд-во ВолГМУ, 2008. – С. 101-105.
12. Косолапов, В.А. Поиск новых веществ с антиоксидантными и церебропротекторными свойствами среди привилегированных молекул / В.А. Косолапов, Л.В. Ельцова, Е.В. Тибирькова, А.А. Спасов // 55-я юбилейная региональная научная конференция профессорско-преподавательского коллектива Волгоградского государственного медицинского университета «Современная инновационная медицина – населению Волгоградской области» / Под ред. акад. РАМН В.И. Петрова. – Волгоград: Изд-во ВолГМУ, 2008. – С. 147-148.
13. Тибирькова, Е.В. Антиоксидантные и мембранопротекторные свойства тролокса / Е.В. Тибирькова, В.А. Косолапов, А.А. Спасов // Экспериментальная и клиническая фармакология. – 2009. – Т. 72, №2. – С. 47-50.
14. Тибирькова, Е.В. Противоишемические свойства нового производного пирролобензимидазола / Е.В. Тибирькова // Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины: Материалы 67-й открытой научно-практической конференции молодых ученых и студентов с международным участием / Под ред. акад. РАМН В.И. Петрова. – Волгоград: Изд-во ВолГМУ, 2009. – С. 183-184.
15. Анисимова, В.А. Синтез и фармакологическая активность дигидрохлоридов 3-(2,2,2-трихлор-1-гидроксиэтил)имидазо[1,2-а]бензимидазола / В.А. Анисимова, А.А. Спасов, В.А. Косолапов, И.Е. Толпыгин, В.И. Поротиков, А.Ф. Кучерявенко, В.А. Сысоева, Е.В. Тибирькова, Л.В. Ельцова // Химико-фармацевтический журнал. – 2009. – Т. 43, №9. – С. 9-12.
16. Макаренко, В.И. Изучение противоишемической активности нового производного пирроло[1,2-а]бензимидазола РУ-642, с выраженными антиоксидантными свойствами / В.И. Макаренко, Е.В. Тибирькова // Кислород и антиоксиданты. – 2009. – Выпуск 1. – С. 85-86.
17. Косолапов, В.А. Отбор антиоксидантных веществ с церебропротекторными свойствами среди привилегированных молекул / В.А. Косолапов, А.А. Спасов, Л.В. Ельцова, Е.В. Тибирькова, В.А. Анисимова // Тезисы докладов V международной Крымской конференции «Окислительный стресс и свободнорадикальные патологии». – Судак, Крым, Украина, 21-30 сентября 2009. – С. 33.

---

^[1] Выражаем глубокую признательность ведущему научному сотруднику НИИ физической и органической химии Южного федерального университета, к.х.н. В.А. Анисимовой за синтез и предоставление субстанций веществ для данной работы.

^[2] Выражаем глубокую признательность старшему научному сотруднику лаборатории лекарственной безопасности НИИ фармакологии Волгоградского государственного медицинского университета, к.б.н., с.н.с. П.М. Васильеву за содействие при исполнении данной работы.

^[3] Выражаем глубокую признательность доценту кафедры патологической анатомии Волгоградского государственного медицинского университета, к.м.н. Г.Л. Снигуру за содействие в проведении исследований.