WWW.DISUS.RU

БЕСПЛАТНАЯ НАУЧНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

 

Основных фармакокинетических показателей препаратов рибавирина методом вэжх

На правах рукописи

НИСРИН АЗЗАМ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСНОВНЫХ ФАРМАКОКИНЕТИЧЕСКИХ

ПОКАЗАТЕЛЕЙ ПРЕПАРАТОВ РИБАВИРИНА

МЕТОДОМ ВЭЖХ

15.00.02 Фармацевтическая химия, фармакогнозия

14.00.25 Фармакология, клиническая фармакология

А в т о р е ф е р а т

диссертации на соискание ученой степени

кандидата фармацевтических наук

Москва 2009

Работа выполнена в ГОУ ВПО Московская Медицинская Академия

имени И.М. Сеченова

Научные руководители:

доктор фармацевтических наук,

профессор Раменская Галина Владиславовна

академик РАМН,

доктор медицинских наук

профессор Кукес Владимир Григорьевич

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук,

прфессор Жердев Владимир Павлович

доктор фармацевтических наук,

профессор Попков Владимир Андреевич

Ведущая организация: Центр по химии лекарственных средств – ЦХЛС - ВНИХФИ

Защита состоится «__» _________ 2009 г. в ____ часов на заседании Диссертационного Совета Д.208.040.09 при Московской Медицинской Академии им. И.М. Сеченова по адресу: 119019, Москва, Никитский бульвар, 13.

С диссертацией можно ознакомиться в Центральной Научной Медицинской Библиотеке ММА им. И.М. Сеченова по адресу: 117998, г. Москва, Нахимовский проспект, 49.

Автореферат разослан «__» ___________ 2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор фармацевтических наук,

профессор Наталья Петровна Садчикова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы.

В настоящее время рост заболеваемости ВИЧ-инфекции и гепатита С в мире является актуальной проблемой. Коинфекция вирусом гепатита С и вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ) достаточно распространена, главным образом потому, что вирусы имеют общие пути передачи. Высокая потребность в противовирусных препаратах, таких как рибавирин, повлияла на появление на фармацевтическом рынке воспроизведенных лекарственных средств. Появление в клинической практике эффективных и доступных лекарственных средств, возможно, осуществить с помощью генериков, то есть препаратов, содержащих одно и то же лекарственное вещество в одинаковой дозе и в той же лекарственной форме, что и соответствующее оригинальное лекарственное средство, но выпускаемыми на разных производствах. Доступность генерических лекарственных средств связана с упрощенной процедурой регистрации лекарственного средства, за счет отсутствия проведения ряда исследований, включая широкомасштабные клинические исследования. В связи с этим актуальной проблемой становится терапевтическая эквивалентность аналогов оригинальным препаратам. Оценка биоэквивалентности или фармакокинетической эквивалентности лекарственных средств, в настоящее время считается основным видом медико-биологического контроля качества генериковых препаратов. Эти исследования предполагают, что биоэквивалентные оригиналу генериковые препараты обеспечивают одинаковую биодоступность лекарственного вещества. Большинство исследований биоэквивалентности проводится с участием здоровых людей (Березовская И.В. с соавт. 2004 г.; Мет. уход. 2004).

В связи с предстоящим внедрением таблеток лекарственных средств-генериков рибавирина в лечебную практику представляется актуальным изучение их фармакокинетики и относительной биодоступности, для чего необходима постановка воспроизводимой, чувствительной методики определения рибавирина в биологических жидкостях.

Все выше изложенное определило цель и задачи настоящего исследования.

Цель исследования:

Разработать методику ВЭЖХ для определения рибавирина в плазме крови людей c последующим ее использованием для изучения фармакокинетических показателей препаратов рибавирина.

Задачи исследования:

  1. Исследовать хроматографическое поведение рибавирина методом ВЭЖХ, подобрать адекватные условия хроматографического анализа рибавирина в растворах и плазме крови.
  2. Определить фармакокинетические параметры рибавирина после однократного перорального приема таблеток Рибавирина различных российских производителей
  3. Определить фармакокинетические параметры рибавирина после однократного перорального приема капсул Арвирон.
  4. Провести сравнительное изучение фармакокинетики препаратов Рибавирин российских производителей и препарата Ребетол.
  5. Провести сравнительное изучение фармакокинетики препаратов Арвирон и Ребетол.
  6. Оценить относительную биодоступность генерических препаратов рибавирина.
  7. Сопоставить фармакокинетические параметры рибавирина, получаемые при сравнении разных лекарственных форм рибавирина, в виде таблеток и капсул.
  8. Изучить антиоксидантную активность рибавирина.

Научная новизна.

Подобраны условия для определения рибавирина в плазме крови методом ВЭЖХ.

Впервые изучены фармакокинетические параметры и биоэквивалентность пероральных форм рибавирина – Рибавирин (ЗАО «Канонфарма продакшн»), Рибавирин (ЗАО «Макиз-фарма») и капсул Арвирон.

Впервые проведен сравнительный анализ фармакокинетических показателей при исследовании биоэквивалентности препаратов рибавирина двух лекарственных форм-таблеток и капсул.

Впервые показано, что рибавирин обладает низкой антиоксидантной активностью по сравнению с антиоксидантными препаратами мексидол и гипоксен.

Практическая значимость.

На основании результатов изучения хроматографического поведения рибавирина выбраны оптимальные условия количественного определения рибавирина в плазме крови методом ВЭЖХ.

Определены значения основных фармакокинетических параметров рибавирина после однократного приема генерических таблеток Рибавирин Российского производства и капсул Арвирон. Для решения вопроса о разрешении медицинского применения препаратов Рибавирин (ЗАО «Канонфарма продакшн»), Рибавирин (ЗАО «Макиз-фарма») и капсул Арвирон показана их биоэквивалентность по отношению к препарату Ребетол.

Внедрение в практику.

Методика анализа рибавирина в плазме крови внедрена в Филиале «Клиническая фармакология» НЦ Биомедицинских технологий РАМН и Институте клинической фармакологии ФГУ «НЦ ЭСМП» Росздравнадзора.

По результатам изучения фармакокинетики и биоэквивалентности таблеток Рибавирин (ЗАО «Канонфарма продакшн»), Рибавирин (ЗАО «Макиз-фарма») и капсул Арвирон по сравнению с препаратом Ребетол составлены итоговые отчеты, представленные на утверждение в Росздравнадзор, с целью разрешения медицинского применения препаратов Рибавирин (ЗАО «Канонфарма продакшн»), Рибавирин (ЗАО «Макиз-фарма») и капсул Арвирон.

Апробация работы.

Апробация работы проведена на совместной научно-практической конференции кафедр клинической фармакологии и пропедевтики внутренних болезней и фармацевтической химии с курсом токсикологической химии ММА имени И.М.Сеченова, Института клинической фармакологии НЦ ЭСМП, Филиала «Клиническая фармакология» НЦ Биомедицинских технологий РАМН.

Связь исследования с проблемным планом.

Диссертационная работа выполнена в соответствии с научным направлением кафедры клинической фармакологии и пропедевтики внутренних болезней «Оптимизация фармакотерапии заболеваний внутренних органов посредством разработки рациональных методов контроля клинически значимых параметров фармакокинетики лекарственных средств» (номер государственной регистрации – 01.206.110468).

Публикация результатов исследования.

По результатам исследований опубликовано 7 печатных работ (3 из них в изданиях, рекомендованных ВАК РФ по фармацевтическим наукам).

Основные положения, выносимые на защиту.

  1. Методика количественного определения рибавирина в растворах и плазме крови.

2. Результаты изучения фармакокинетики и относительной биодоступности таблеток Рибавирин (ЗАО «Канонфарма продакшн»).

3. Результаты изучения фармакокинетики и относительной биодоступности таблеток Рибавирин (ЗАО «Макиз-фарма»).

4. Результаты изучения фармакокинетики и относительной биодоступности капсул Арвирон.

5. Сравнение фармакокинетических параметров рибавирина при применении препарата в виде таблеток и капсул.

6. Сравнение антиоксидантной активности Рибавирина с антиоксидантными препаратами Мексидол и Гипоксен.

Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 140 странице машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, выводов, списка литературы из 125 названия (15 из которых российские). Работа иллюстрирована 16 рисунками и 28 таблицами.

Во введении раскрыта актуальность темы, определены цели и задачи исследования, научная новизна и практическая значимость.

В первой главе, на основании анализа литературных данных, рассмотрены особенности фармакокинетики и фармакологического действия рибавирина; представлены методы анализа рибавирина; дана характеристика новых генерических таблеток рибавирина Российского производства.

Вторая глава посвящена подбору хроматографических условий определения рибавирина, выбору условий изолирования рибавирина из плазмы людей, оценке воспроизводимости и пригодности разработанной методики.

В третьей главе представлены результаты динамики концентрации, фармакокинетических параметров и относительной биодоступности таблеток рибавирина Российского производства после однократного перорального применения по сравнению с препаратом Ребетол.

В четвертой главе представлены результаты фармакокинетичского исследования и относительной биодоступности препарата Арвирон у испытуемых по сравнению с препаратом Ребетол.

В пятой главе обсуждаются сопоставление полученных фармакокинетических параметров рибавирина при применении препарата в виде капсул и таблеток.

В шестой главе обсуждается изучение антиоксидантной активности рибавирина в виде субстанции и таблеток.

Результаты экспериментов обработаны статистически, обобщены в таблицах, проиллюстрированы графиками и рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

1. Количественный анализ рибавирина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

В работе использован высокоэффективный жидкостной хроматограф "Shimadzu" (Япония) с УФ-спектрофотометрическим детектором с переменной длиной волны, оборудованный петлей ввода на 100 мкл и оснащенный интегратором "Shimadzu" для обработки данных.

Подбор условий разделения на колонке Ultrasphere ODS 250*4,6 мм (5 мкм) включал в себя выбор оптимального состава подвижной фазы и скорости потока элюента. При выборе подвижной фазы использовали элюенты разного состава и соотношения: метанол - вода, ацетонотрил - фосфатный буфер, метанол – дигидрофосфатный буфер, ацетонитрл - дигидрофосфатный буфер.

Результаты исследования показали, что при использовании колонки Ultrasphere ODS 250*4,6 мм (5 мкм), оптимальное разделение исследуемых веществ наблюдается в подвижной фазе состава: ацетонитрил и 0,01 М раствор КН2РО4. Подвижную фазу перед использованием дегазировали под вакуумом. Разделение проводили при комнатной температуре.

Скорость потока мобильной фазы выбирали исходя из времени анализа и давления на хроматографической колонке, которое не должно превышать 3000 psi. Оптимальной по указанным параметрам была скорость потока элюента 0,8 мл/мин. Изолирование рибавирина из плазмы крови проводили методом жидкофазной экстракции. В качестве органического экстрагента использовали хлороформ.

Количественный анализ рибавирина проводили методом абсолютной калибровки. С этой целью строили калибровочный график зависимости площади хроматографического пика рибавирина от количества препарата в пробе. Уравнение регрессии имело вид: y = a + bx, где y – концентрация рибавирина (нг/мл), х – площадь хроматографического пика рибавирина.

Таким образом, были подобраны следующие условия анализа рибавирина в крови добровольцев.

Экстракция. К 0,5 мл плазмы крови добавляли 0,5 мл буферного раствора (рН 10,0) и 3,5 мл хлороформа. Экстрагировали 10 минут, центрифугировали 10 минут при 4500 об/мин, органический слой переносили в другие пробирки, добавляли 200 мкл 0,1 М H2SO4, встряхивали на vortex 30 секунд, центрифугировали 6 минут при 3000 об/мин. Аликвоту (100 мкл) вводили в хроматограф.

Хроматографический анализ. Анализ проводили на высокоэффективном жидкостном хроматографе "Shimadzu" с УФ-детектором при 210 нм. Использовалась хроматографическая колонка: Ultrasphere ODS 250*4,6 мм (5 мкм). Элюирование проводили подвижной фазой состоящей из 0,01 М КН2РО4. Подвижную фазу перед использованием дегазировали под вакуумом. Скорость элюирования составляла 0,8 мл/мин.

Количественное определение проводили методом абсолютной калибровки по высоте пиков. Калибровочная зависимость в диапазоне концентраций 50-1000 нг/мл носила линейный характер (у = -2,02708 + 2,159638 * х; r2 = 0,9987). Из полученного уравнения видно, что точка пересечения калибровочного графика с осью “y” практически совпадает с точкой “0”, а коэффициент корреляции близок к 1.

На рис. 1 приведен образец хроматограммы рибавирина.

Достоверность результатов количественного определения рибавирина оценивали, рассчитывая метрологические характеристики данной методики по результатам 6 параллельных измерений концентрации трех растворов рибавирина. Произведенные измерения и расчеты показали, что относительная погрешность среднего результата составляет не более 8,0 %. Разработанная методика количественного определения рибавирина свободна от систематических ошибок.

Таким образом, данная методика отвечает основным требованиям, предъявляемым к аналитическим методам.

 Хроматограмма: а - рибавирина -стандарта; б- образца плазмы крови. -0

Рис. 1. Хроматограмма: а - рибавирина -стандарта; б- образца плазмы крови.

2. Тактика ведения добровольцев, отбора проб крови и первичная пробоподготовка при проведении исследования

В качестве испытуемых привлекались мужчины и женщины, добровольно изъявившие желание участвовать в исследовании, прошедшие клинико-физиологическое обследование и отвечающие критериям включения и исключения.

Критериями включения в исследование являлись:

  • возраст 18 – 45 лет;
  • отсутствие патологии желудочно-кишечного тракта, печени, почек, сердечно-сосудистой системы (предварительно проведенные клинико-лабораторные и инструментальные исследования не выявили наличия каких-либо заболеваний);
  • отклонение массы тела добровольцев не более 20 % от "идеальной";

Критериями исключения являлись:

  • наличие в анамнезе лекарственной непереносимости, аллергических заболеваний, отека Квинке;
  • беременность или кормление грудью, планируемая беременность в течение полугода после исследования (для мужчин беременность партнерши);
  • психические, физические и прочие причины, не позволяющие адекватно оценивать свое поведение и правильно выполнять условия протокола исследования;
  • прием каких-либо лекарственных препаратов за 14 дней до начала исследования и на всем его протяжении;
  • донорская сдача крови менее чем за 30 дней до исследования;

Исследование проводили по перекрестной схеме, для чего 18 добровольцев методом простой рандомизации разделили на две равные группы. В случайном порядке 9 испытуемых принимали сначала тестируемый препарат, а затем, спустя 14 дней – препарат сравнения. Другая группа испытуемых принимала препараты в обратном порядке. Все добровольцы после подписания информированного согласия в период за 1-14 дней до исследования проходили углубленное врачебное исследование (сбор анамнеза, врачебный осмотр, биохимическое исследование крови, общий анализ крови и др.). На протяжении всего исследования добровольцы должны были соблюдать установленные требования.



Прием препаратов добровольцами осуществлялся per os в 8 часов утра в дозе 400 мг одного из препаратов в условиях стационара. Отбор крови осуществлялся из кубитальной вены в количестве 5 мл в стеклянные пробирки до приема препарата и спустя 0.5, 0.75, 1, 1.5, 2, 3, 4, 6, 8, 12 и 24 часа после приема препарата.

Пробы крови центрифугировали 10 минут при 3000 об/мин, отбирали 1,5 мл плазмы и хранили при -350С до анализа.

3. Расчёт фармакокинетических параметров и статистическая обработка полученных результатов.

Фармакокинетические параметры рибавирина, характеризующие его биодоступность были рассчитаны модельно-независимым методом статистических моментов с помощью программы M-IND для персонального компьютера.

Рассчитывали следующие внемодельные параметры: максимальную концентрацию рибавирина в плазме крови Cmax, время её достижения Tmax, площадь под фармакокинетической кривой AUC0-t. Рассчитывали также отношение максимальной концентрации к площади под фармакокинетической кривой Cmax/AUC0-t (как характеристику скорости всасывания).

Для изучения сравнительной биодоступности (биоэквивалентности) препаратов рассчитывали достоверность различий между значениями Tmax для тестируемого препарата и препарата сравнения, относительную степень всасывания f’, а также f’’.

Относительную степень всасывания препарата рассчитывали по формуле:

f’=AUC0-t (T) /AUC0-t (Ср) * 100%, где

AUC0-t (T) – площадь под фармакокинетической кривой для тестируемого препарата – Рибавирин;

AUC0-t (Ср) – площадь под фармакокинетической кривой для препарата сравнения – Ребетол.

f'’=Cmax (T) /Cmax (Ср)*100%, где

Cmax (T) – максимальная концентрация тестируемого препарата – Рибавирин;

Cmax (Ср) – максимальная концентрация препарата сравнения - Ребетол.

Статистическую обработку полученных результатов проводили с помощью программы ”Systat w5” для персонального компьютера, рассчитывая среднее арифметическое значение (Mean), среднее геометрическое значение (Geom Mean), стандартное отклонение среднего результата (SD), медиану (Median). Оценку достоверности различий между парными и независимыми выборками проводили с использованием t-критерия Стьюдента с помощью программы EXCEL. Различия считались достоверными при р<0,05. Оценку относительной биодоступности препарата проводили в соответствии с Методическими указаниями МЗиСР РФ «Проведение качественных исследований биоэквивалентности лекарственных средств» (Москва, 2004 г.)

4. Фармакокинетика и относительная биодоступность рибавирина после однократного перорального применения таблеток Рибавирин российского производства у добровольцев.

Была изучена фармакокинетика и относительная биодоступность таблеток Рибавирин, содержащих 200 мг рибавирина производства ЗАО «Канонфарма продакшн», Россия, после однократного перорального применения в дозе 400 мг, а также Рибавирин, содержащих 200 мг рибавирина производства ЗАО «Макиз-фарма», Россия. В качестве препарата сравнения использовали зарегистрированные в РФ капсулы рибавирина под названием Ребетол производства «Шеринг-Плау Лабо Н.В.», Бельгия.

При проведении исследования препарата Рибавирин (ЗАО «Канонфарма продакшн) участие принимали 5 мужчин 13 женщин, средний возраст составлял 32 года, вес 71 кг, рост 169 см. При проведении исследования таблеток Рибавирин (ЗАО «Макиз-фарма») приняли участие 6 мужчин и 12 женщин, средний возраст составлял 24 года, вес 67, рост 173 см.

Фармакокинетический профиль концентрации рибавирина в плазме крови после однократного перорального применения таблеток Рибавирин (ЗАО “Канонфарма продакшн”, Россия) в дозе 400 мг представлена на рис. 2.

 Усредненная динамика концентрации рибавирина у испытуемых после-1

Рис. 2. Усредненная динамика концентрации рибавирина у испытуемых после применения изучаемых препаратов в дозе 400 мг, нг/мл (в линейных координатах).

Из приведенных данных следует, что пик концентрации рибавирина (584,4 нг/мл) достигался через 1,5 часа после приёма препарата.

Усредненные фармакокинетические параметры рибавирина после однократного перорального применения таблеток Рибавирин представлены ниже (табл. 1).

Таблица 1

Фармакокинетические параметры рибавирина после приема

Рибавирин (Канонфарма продакшн)

Cmax, нг/мл Tmax, час AUC0-t, нг*ч/мл Cmax /AUC0-t
Mean 625,3 1,6 7258,2 0,085
GMean 593,5 1,5 7078,3 0,084
S.D. 201,3 0,3 1617,8 0,014
Median 597,5 1,5 7168,4 0,084
L-95% 525,2 1,4 6453,6 0,078
Up-95% 693,3 1,7 8062,8 0,092

Фармакокинетические параметры рибавирина после однократного приёма капсул Ребетола (400 мг) представлены в табл. 2.

Таблица 2

Фармакокинетические параметры рибавирина после приема Ребетола

Cmax, нг/мл Tmax, час AUC0-t, нг*ч/мл Cmax /AUC0-t
Mean 644,3 1,5 7498,6 0,084
GMean 611,7 1,5 7311,6 0,084
S.D. 213,7 0,5 1691,0 0,012
Median 577,5 1,5 7738,9 0,080
L-95% 538,0 1,3 6657,6 0,078
Up-95% 750,6 1,8 8339,6 0,091

Значения отношений максимальной концентрации к площади под фармакокинетической кривой Cmax/AUC0-t для препаратов Рибавирин и Ребетол статистически достоверно не различаются и составляют в среднем 0,085+0,014 и 0,084+0,012 соответственно. Значения Tmax для тестируемого препарата и препарата сравнения также статистически достоверно не различаются. Приведённые данные свидетельствуют о том, что скорости всасывания рибавирина из таблеток Рибавирин и капсул Ребетол статистически достоверно не различаются.

Параметры относительной биодоступности рибавирина в лекарственных формах Рибавирин (ЗАО «Канонфарма продакшн») и Ребетол, содержащих 200 мг препарата, представлены в табл. 3.

Таблица 3

Относительная биодоступность препарата Рибавирина

(Канонфарма продакшн)

№ п/п f, % fII, %
Mean 98 100
SD 15 24
CV 15 24
Доверительный интервал 90 105 88 111

Среднее значение f'' препарата Рибавирин по отношению к препарату Ребетол составляет 100 + 24 %, то есть находится в допустимом интервале (85-115%).

Дисперсионный анализ значений AUC0-t, Cmax, Cmax/AUC0-t, проведенный после их логарифмического преобразования не выявил статистически значимых различий между препаратами (табл. 4).

Таблица 4

Результаты дисперсионного анализа фармакокинетических параметров

Параметр Факторы вариаций df SS MS F p
AUC0-t Испытуемые 17 1,6925 0,0996 9,58 0,0000
Периоды 1 0,0212 0,0212 2,04 0,172
Препараты 1 0,0095 0,0095 0,91 0,354
Cmax Испытуемые 17 3,3834 0,1990 7,29 0,000
Периоды 1 0,0233 0,0233 0,85 0,369
Препараты 1 0,0081 0,0081 0,30 0,593
Cmax/AUC0-t Испытуемые 17 0,6136 0,0361 3,61 0,007
Периоды 1 0,0000 0,0000 0,005 0,945
Препараты 1 0,0000 0,0000 0,005 0,944

Таким образом, из результатов настоящего исследования относительной биологической доступности двух препаратов, показано, что испытуемый препарат таблетки Рибавирин производства ЗАО "Канонфарма продакшн", Россия, содержащие 200 мг рибавирина в одной таблетке, является биоэквивалентным препарату сравнения капсулам Ребетол «Шеринг-Плау Лабо Н.В.», Бельгия, содержащему 200 мг рибавирина.

Усреднённая фармакокинетическая кривая концентрации рибавирина в плазме крови после однократного перорального применения таблеток Рибавирин (ЗАО “Макиз-фарма”, Россия) в дозе 400 мг представлена на рис. 3.

 Усредненная динамика концентрации рибавирина у испытуемых после-2

Рис. 3. Усредненная динамика концентрации рибавирина у испытуемых после применения изучаемых препаратов в дозе 400 мг, нг/мл.

Фармакокинетические параметры рибавирина после приема Рибавирин-Макиз-Фарма представлены в табл. 5.

Таблица 5

Фармакокинетические параметры рибавирина после приема Рибавирин (Макиз-Фарма)

Cmax, нг/мл Tmax, час AUC0-t, нг*ч/мл Cmax /AUC0-t
Mean 654,7 1,4 7892,7 0,083
GMean 608,2 1,4 7438,5 0,082
S.D. 245,3 0,5 2668,1 0,014
Median 639,5 1,5 7786,5 0,082
L-95% 532,7 1,2 6565,8 0,076
Up-95% 733,8 1,7 9219,6 0,090

Фармакокинетические параметры рибавирина после однократного приёма капсул Ребетола (400 мг) представлены в табл. 6.

Таблица 6

Фармакокинетические параметры рибавирина после приема Ребетол

Cmax, нг/мл Tmax, час AUC0-t, нг*ч/мл Cmax /AUC0-t
Mean 674,9 1,4 7675,5 0,086
GMean 619,2 1,3 7339,7 0,084
S.D. 310,1 0,3 2354,0 0,016
Median 600,5 1,5 7419,2 0,083
L-95% 520,7 1,2 6504,8 0,078
Up-95% 829,1 1,5 8846,2 0,094

Значения отношений максимальной концентрации к площади под фармакокинетической кривой Cmax/AUC0-t для препаратов Рибавирин и Рибетол статистически достоверно не различаются и составляют в среднем 0,083+0,014 и 0,086+0,016 соответственно. Значения Tmax для тестируемого препарата и препарата сравнения также статистически достоверно не различаются. Приведённые данные свидетельствуют о том, что скорости всасывания рибавирина из таблеток Рибавирин и капсул Ребетол статистически достоверно не различаются.

Параметры относительной биодоступности рибавирина после однократного применения 400 мг рибавирина в лекарственных формах Рибавирин (ЗАО «Макиз-фарма») и Ребетол, содержащих 200 мг препарата, представлены в табл. 7.

Таблица 7

Относительная биодоступность препарата Рибавирин (Макиз-Фарма)

№ п/п f, % fII, %
Mean 103 100
SD 16 20
CV 16 20
Доверительный интервал 95 110 90 11 0

Из приведенных данных видно, что индивидуальные значения относительной степени всасывания (f’) препарата Рибавирин по сравнению с препаратом Ребетол у всех испытуемых колеблются в диапазоне 80-129 %. Среднее значение относительной биодоступности препарата Рибавирин по отношению к препарату Ребетол cоставляет 103 + 16 %, то есть находится в допустимом интервале (90-110%). Среднее значение f'' препарата Рибавирин (ЗАО «Макиз-фарма») по отношению к препарату Ребетол составляет 100 + 20 %, то есть находится в допустимом интервале (85-115%).

Дисперсионный анализ значений AUC0-t, Cmax, Cmax/AUC0-t, проведенный после их логарифмического преобразования не выявил статистически значимых различий между препаратами (табл. 8).

Таблица 8

Результаты дисперсионного анализа фармакокинетических параметров

Параметр Факторы вариаций df SS MS F p
AUC0-t Испытуемые 17 3,6998 0,2176 21,63 0,000000<0,001
Периоды 1 0,0457 0,0457 4,55 > 0,1
Препараты 1 0,0016 0,0016 0,16 > 0,5
Cmax Испытуемые 17 5,5754 0,3280 17,42 0,00000<0,001
Периоды 1 0,0120 0,0120 0,64 > 0,3
Препараты 1 0,0029 0,0029 0,15 > 0,5
Cmax/AUC0-t Испытуемые 17 0,7566 0,0445 3,32 0,0102 < 0,05
Периоды 1 0,0108 0,0108 0,81 > 0,3
Препараты 1 0,0088 0,0088 0,66 > 0,3

Таким образом, из результатов настоящего исследования относительной биологической доступности двух препаратов, показано, что испытуемый препарат таблетки Рибавирин производства ЗАО "Макиз-фарма", Россия, содержащие 200 мг рибавирина в одной таблетке, является биоэквивалентным препарату сравнения капсулам Ребетол «Шеринг-Плау Лабо Н.В.», Бельгия, содержащему 200 мг рибавирина.

По результатам исследования был составлен отчет для решения вопроса о разрешении медицинского применения таблеток Рибавирин в РФ.

5. Фармакокинетика и относительная биодоступность рибавирина после однократного перорального применения капсул Рибавирина российского производства у добровольцев.

Была изучена фармакокинетика и относительная биодоступность капсул Арвирона, содержащих 200 мг рибавирина производства Экспериментальное производство медико-биологических препаратов ГУ "Российский кардиологический НПК МЗ РФ", Россия, после однократного перорального применения 400 мг. В качестве препарата сравнения использовали зарегистрированные в РФ капсулы рибавирина под названием Ребетол производства «Шеринг-Плау Лабо Н.В.», Бельгия.

При проведении исследования препарата Арвирон участвовало 8 мужчин и 10 женщин, средний возраст составлял 24 года, вес 66 кг, рост 173 см.

Усреднённая фармакокинетическая кривая после однократного перорального применения капсул Арвирон в дозе 400 мг на рис. 4.

 Усредненная динамика концентрации рибавирина у испытуемых после-3

Рис. 4. Усредненная динамика концентрации рибавирина у испытуемых после перорального применения капсул препарата в дозе 400 мг (в линейных координатах).

Фармакокинетические параметры рибавирина после однократного перорального применения капсул Арвирон представлены в табл. 9.

Таблица 9

Фармакокинетические параметры рибавирина после приема Арвирон

Cmax, нг/мл Tmax, час AUC0-t, нг*ч/мл Cmax /AUC0-t
Mean 650,2 1,4 7461,2 0,088
GMean 604,1 1,4 7058,2 0,086
S.D. 261,1 0,3 2585,2 0,019
Median 600,0 1,5 6872,6 0,091
L-95% 520,4 1,3 6175,5 0,078
Up-95% 735,0 1,6 8746,9 0,097

Фармакокинетические параметры рибавирина после однократного приёма капсул Ребетола (400 мг) представлены в табл. 10.

Таблица 10

Фармакокинетические параметры рибавирина после приема

препарата Ребетол

Cmax, нг/мл Tmax, час AUC0-t, нг*ч/мл Cmax /AUC0-t
Mean 643,7 1,4 7259,1 0,088
GMean 610,3 1,4 7051,3 0,087
S.D. 212,0 0,2 1821,9 0,016
Median 611,5 1,5 6595,0 0,086
L-95% 538,2 1,3 6353,1 0,080
Up-95% 749,1 1,5 8165,2 0,096

Значения отношений максимальной концентрации к площади под фармакокинетической кривой Cmax/AUC0-t для препаратов Рибавирин и Рибетол статистически достоверно не различаются и составляют в среднем 0,088+0,019 и 0,088+0,016 соответственно. Значения Tmax для тестируемого препарата и препарата сравнения также статистически достоверно не различаются. Приведённые данные свидетельствуют о том, что скорости всасывания рибавирина из капсул Арвирон и капсул Ребетол статистически достоверно не различаются.

Параметры относительной биодоступности рибавирина представлены в табл. 11.

Таблица 11

Относительная биодоступность препарата Арвирон

№ п/п f, % fII, %
Mean 101 100
SD 15 013
Доверительный интервал 94 109 94 105

Из приведенных данных видно, что индивидуальные значения относительной степени всасывания (f’) препарата Арвирон по сравнению с препаратом Ребетол у всех испытуемых колеблются в диапазоне 77-124 %. Среднее значение относительной биодоступности препарата Арвирон по отношению к препарату Ребетол cоставляет 101 + 15 %, то есть находится в допустимом интервале (90-110%). Среднее значение f'' препарата Арвирон по отношению к препарату Ребетол составляет 100 + 13 %, то есть находится в допустимом интервале (85-115%).

Дисперсионный анализ значений AUC0-t, Cmax, Cmax/AUC0-t, проведенный после их логарифмического преобразования не выявил статистически значимых различий между препаратами (табл. 12).

Таблица 12

Результаты дисперсионного анализа фармакокинетических параметров

Параметр Факторы вариаций df SS MS F p
AUC0-t Испытуемые 17 2,8164 0,1657 15,22 0,000000<0,001
Периоды 1 0,0282 0,0282 2,59 0,1268 > 0,1
Препараты 1 0,000008 0,000008 0,0008 0,9779 > 0,1
Cmax Испытуемые 17 4,5059 0,2651 73,97 0,000000<0,001
Периоды 1 0,0611 0,0611 17,05 0,1786 > 0,1
Препараты 1 0,0009 0,0009 0,27 0,6132 > 0,1
Cmax/AUC0-t Испытуемые 17 1,2992 0,0764 8,17 0,0000<0,001
Периоды 1 0,0063 0,0063 0,67 0,4254 > 0,1
Препараты 1 0,0011 0,0011 0,12 0,7314 > 0,1

Таким образом, из результатов настоящего исследования относительной биологической доступности двух препаратов, показано, что испытуемый препарат Арвирон является биоэквивалентным препарату сравнения капсулам Ребетол «Шеринг-Плау Лабо Н.В.», Бельгия, содержащему 200 мг рибавирина.

По результатам исследования был составлен отчет для решения вопроса о разрешении медицинского применения таблеток Рибавирин в РФ.

6. Сравнение фармакокинетических параметров при применении разных лекарственных форм рибавирина у добровольцев.

В исследовании было изучены лекарственные формы таблетки и капсулы, содержащие 200 мг рибавирина. Динамика средних значений концентрации рибавирина в плазме крови после однократного перорального применения таблеток и капсул, содержащих рибавирин, представлена на рис. 5. На рисунке наглядно показано, что фармакокинетические кривые сравниваемых таблеток и капсул практически совпадают, средние значения концентрации рибавирина в плазме крови испытуемых для каждого момента времени статистически значимо не различаются.

 Усредненная динамика концентрации рибавирина у испытуемых после-4

Рис. 5. Усредненная динамика концентрации рибавирина у испытуемых после перорального применения капсул и таблеток препарата в дозе 400 мг (в линейных координатах).

Результаты расчётов фармакокинетических параметров препаратов рибавирина показали, что значения фармакокинетических параметров изучаемых препаратов статистически значимо не различаются (табл. 13).

Таблица 13

Сводная таблица результатов фармакокинетических параметров рибавирина после приема таблеток и капсул, содержащих рибавирин.

п/п Cmax, нг/мл Tmax, час AUC0-t, нг*ч/мл Cmax /AUC0-t
Рибавирин-Канонфарма продакшн 625,3+201,3 1,6+0,3 7258,2+1617,8 0,085+0,014
Ребетол 644,3+213,7 1,5+0,5 7498,6+1691,0 0,084+0,012
Рибавирин-Макиз-Фарма 654,7+245,3 1,4+0,5 7892,7+2668,1 0,083+0,014
Ребетол 674,9+310,1 1,4+0,3 7675,5+2354,0 0,086+0,016
Арвирон 650,2+261,1 1,4+0,3 7461,2+2585,2 0,088+0,019
Ребетол 643,7+212,0 1,4+0,2 7259,1+1821,9 0,088+0,016

Таким образом, можно сказать, что при проведении исследования и сопоставлении полученных результатов динамики концентрации рибавирина у людей между исследуемыми лекарственными формами (капсулы и таблетки) у людей отмечено, что на профиль концентрации рибавирина и фармакокинетические параметры, форма сравниваемых лекарственных средств не влияет.

7. Антиоксидантная активность рибавирина.

Было изучено сравнение антиоксидантной активности лекарственного средства Рибавирин (ЗАО «Макиз-Фарма», Россия) и лекарственной субстанции рибавирин по сравнению с препаратами Мексидол (таблетки) ООО НПК «Фармасофт», Гипоксен (капсулы) ЗАО «Корпорация Олифен» и их субстанциями.

Антиоксидантную активность измеряли амперометрическим методом на приборе «ЦветЯуза 01-АА», созданном НПО «Химавтоматика». Оценка антиоксидантной активности проводилась по калибровочному графику стандарта кверцетина.

Количественная оценка антиоксидантной активности исследуемых препаратов представлена в табл. 14.

Таблица 14

Результаты оценки антиоксидантной активности препаратов

Исследуемые препараты Содержание действующего вещества в препарате, мг Антиоксидантная активность, мг/г в пересчете на кверцетин
Рибавирин (таблетки) 200 0,47
Мексидол (таблетки) 125 825,84
Гипоксен (капсулы) 250 42,90

Антиоксидантную активность препаратов рассчитывали исходя из содержания антиоксидантов в миллиграммах на грамм таблеточной массы (Рибавирин, Мексидол) и на содержимое капсулы (Гипоксен). В результате эксперимента установлено, что наибольшей антиоксидантной активностью среди исследуемых препаратов обладает Мексидол. Антиоксидантная активность Гипоксена значительно уступает Мексидолу, а активность Рибавирина настолько низка, что его нельзя отнести к антиоксидантным препаратам.

Таким образом, антиоксидантная активность препаратов ниже, чем у субстанций (табл. 15), поскольку зависит от содержания действующего вещества в таблетке. Вспомогательные вещества в исследуемых таблетках практически не растворимы в воде и вероятно незначительно влияют на величину антиоксидантную активность.

Таблица 15

Величина антиоксидантной активности субстанций

Исследуемая субстанция Фармакологическое действие АОА, мг/г в пересчете на кверцетин
Рибавирин Противовирусное 0,66
Мексидол Антиоксиднтное, антигипоксическое, мембраностабилизирующее, ноотропное, анксиолитическое 1690,00
Гипоксен Антиоксиднтное, антигипоксическое 43,10

Таким образом, полученные данные показывают, что субстанция рибавирина и таблетки Рибавирин обладают низкой антиоксидантной активностью по сравнению с антиоксидантными препаратами Мексидол и Гипоксен. Поэтому при назначении антивирусной терапии при вирусных гепатитах целесообразно параллельно назначать антиоксидантную терапию, либо создавать противовирусные препараты, обладающие также и высокой антиоксидантной активностью.

ВЫВОДЫ

  1. Предложена методика количественного определения рибавирина в плазме крови методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с УФ-детектированием. В качестве экстрагента предложен хлороформ.
  2. Определены фармакокинетические параметры рибавирина после однократного перорального применения 400 мг рибавирина в виде таблеток Рибавирин (ЗАО «Канонфарма продакшн») у людей (Сmax = 625,3+201,3 нг/мл, Tmax =1,6+0,3 ч, AUC0-t = 7258,2+1617,8 нг*ч/мл).
  3. Определены фармакокинетические параметры рибавирина после однократного перорального применения 400 мг рибавирина в виде таблеток Рибавирин (ЗАО «Макиз-фарма») у людей (Сmax = 654,7+245,3 нг/мл, Tmax =1,4+0,5 ч, AUC0-t = 7892,7+2668,1 нг*ч/мл).
  4. Определены фармакокинетические параметры рибавирина после однократного перорального применения 200 мг рибавирина в виде капсул Арвирон у людей (Сmax= 650,2+261,1 нг/мл, Tmax =1,4+0,3 ч, AUC0-t = 7461,2 + 2585,2 нг*ч/мл).
  5. Проведено сравнительное изучение фармакокинетики препаратов Рибавирин и Ребетол. Не выявлено статистически достоверных различий в процессе всасывания (как по полноте, так и по скорости) рибавирина у людей после приема таблеток Рибавирин (ЗАО «Канонфарма продакшн») и капсул Ребетол.
  6. Проведено сравнительное изучение фармакокинетики препаратов Рибавирин и Ребетол. Не выявлено статистически достоверных различий в процессе всасывания (как по полноте, так и по скорости) рибавирина у людей после приема таблеток Рибавирин (ЗАО «Макиз-фарма») и капсул Ребетол.
  7. Проведено сравнительное изучение фармакокинетики препаратов Арвирон и Ребетол. Не выявлено статистически достоверных различий в процессе всасывания (как по полноте, так и по скорости) рибавирина после приема капсул Арвирон и Ребетол.
  8. Среднее значение относительной биодоступности препарата Рибавирин (ЗАО «Канонфарма продакшн») по отношению к препарату Ребетол составило 0,98 + 0,15. Среднее значение отношений максимальных концентраций составило 1,00 + 0,24. Среднее значение относительной биодоступности препарата Рибавирин (ЗАО «Макиз-фарма») по отношению к препарату Ребетол составило 1,03 + 0,16. Среднее значение отношений максимальных концентраций составило 1,00 + 0,20. Среднее значение относительной биодоступности препарата Арвирон по отношению к препарату Ребетол составило 1,01 + 0,15. Среднее значение отношений максимальных концентраций составило 1,00 + 0,13.
  9. При сопоставлении полученных результатов динамики концентрации рибавирина у людей после приема изучаемых препаратов в виде капсул и таблеток отмечено, что профиль концентрации рибавирина и фармакокинетические параметры статистически достоверно не различаются.
  10. Величина антиоксидантной активности препарата Рибавирин составляет 0,47 мг/г, Мексидол 825,84 мг/г, Гипоксен 42,90 мг/г, из чего следует, что Рибавирин не оказывает антиоксидантного эффекта.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

  1. Аззам Нисрин, Писарев В.В., Смирнова Л.Б., Савченко А.Ю «Оценка сравнительной фармакокинетики воспроизведенных лекарственных средств, содержащих рибавирин» // Антибиотики и химиотерапия. – 2008. - т.3. - №3-4. - С.23-25.
  2. Аззам Нисрин, Горошко О.А., Раменская Г.В., Кукес В.Г. «Антиоксидантная активность противовирусного препарата Рибапег»// Фармация. - 2009. - №3. – С. 9-10.
  3. Аззам Нисрин, Кукес В.Г., Раменская Г.В. «Оптимальные подходы к исследованию содержания и идентификации рибавирина в плазме крови методом высокоэффективной жидкостной хроматографии» // Фармация. – 2009. - № 4.- С. 12-13.
  4. Азаам Нисрин «Сравнительное исследование биоэквивалентности препаратов Рибавирин, Арвирон и Ребетол»// XVI Российский национальный конгресс «Человек и лекарство»: Тезисы докладов. – М., 2009. - С. 17.
  5. Горошко О.А., Аззам Нисрин, Пахомов В.П., Раменская Г.В., Кукес В.Г. «Антиоксидантная активность лекарственных субстанций и биологически активных веществ» // Традиционная медицина. - 2009. - т.16. - №1. - С. 35-38.
  6. Горошко О.А., Аззам Нисрин, Раменская Г.В., В.Г.Кукес. «Сравнительная оценка антиоксидантной активности противовирусных и антиоксидантных лекарственных препаратов» // XVI Российский национальный конгресс «Человек и лекарство»: Тезисы докладов. - М., 2009. - С. 75.
  7. Раменская Г.В., Аззам Нисрин, Кукес В.Г. «Количественное определение препарата Рибавирин методом ВЭЖХ»// XVI Российский национальный конгресс «Человек и лекарство»: Тезисы докладов. – М., 2009. - С. 605.


 



<
 
2013 www.disus.ru - «Бесплатная научная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.