Иммунные дисфункции и их профилактика у высококвалифицированных спортсменов
На правах рукописи
МОКЕЕВА
Екатерина Геннадьевна
ИММУННЫЕ ДИСФУНКЦИИ И ИХ ПРОФИЛАКТИКА У ВЫСОКОКВАЛИФИЦИРОВАННЫХ СПОРТСМЕНОВ
14.00.36 - аллергология и иммунология
14.00.16. - патологическая физиология
А В Т О Р Е Ф Е Р А Т
диссертации на соискание ученой степени
доктора медицинских наук
САНКТ–ПЕТЕРБУРГ
2009
Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова» МО РФ
Научные консультанты:
доктор медицинских наук профессор Цыган Василий Николаевич,
доктор педагогических наук профессор Таймазов Владимир Александрович
Официальные оппоненты:
доктор медицинских наук профессор Москалев Александр Витальевич
доктор медицинских наук профессор Васильев Андрей Глебович
доктор медицинских наук Гумилевский Борис Юриевич
Ведущая организация: ГОУ ДПО Санкт-Петербургская медицинская академия последипломного образования
Защита диссертации состоится « » 2009 г. в часов на заседании диссертационного совета Д 215.002.08. Военно-медицинской академии им. С.М.Кирова (194044, Санкт-Петербург, ул. Академика Лебедева, 6).
С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке ФГОУ ВПО «Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова» МО РФ.
Автореферат разослан « » ______________ 2009 г.
Ученый секретарь диссертационного совета,
доктор медицинских наук профессор Ю.А. Митин
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность исследования. Изучение закономерностей функционирования иммунной системы, патогенетических механизмов ее нарушений при воздействии на человека различных негативных факторов, а также разработка средств и методов профилактики и коррекции этих нарушений относятся к приоритетным направлениям фундаментальной и практической медицины. Иммунная система, как одна из ключевых интегральных и регуляторных систем макроорганизма, находится в последние годы в сфере интересов специалистов самых различных областей медицины и смежных специальностей. Внимание к изменениям в системе иммунитета, которые в настоящее время переросли в глобальную медико-социальную проблему, обусловлено, несомненно, широким распространением этих нарушений [Стернин Ю.И., Кнорринг Г.Ю., 2008].
Повышенная напряженность тренировочно-соревновательного процесса в спорте высших достижений оказывает на организм спортсмена экстремальное психофизическое воздействие, которое может быть причиной возникновения серьезных нарушений деятельности ряда органов и систем [Джексон Р., 2003; Макарова Г.А., 2004]. К числу наиболее чувствительных к предельным спортивным нагрузкам относится единая регуляторная система организма, объединяющая воедино нервную, эндокринную и иммунную системы [Schwarz-Ottersbach E., 1989; Besedovsky H.O., 1992].
Под действием высоких психофизических нагрузок показатели системы иммунитета могут выходить за пределы физиологических границ и носить патологический характер, являясь причиной роста заболеваемости и снижения спортивной результативности [Суздальницкий Р.С., Левандо В.А., 2003; Футорный С.М., 2004].
В связи с этим не вызывает сомнения необходимость контроля за изменениями иммунологических показателей спортсменов. Как показали многочисленные исследования [Аронов Г.Е., Иванова Н.И., 1987; Суркина И.Д., Готовцева Е.П., 1991; Суздальницкий Р.С., Левандо В.А., 1998], контроль за состоянием иммунной системы у спортсменов в процессе тренировочно-соревновательной деятельности – объективный и чувствительный метод оценки состояния резистентности организма и степени адаптации его к спортивным нагрузкам.
Некоторые специалисты спортивной медицины [Соколовский В.С., Бажора Ю.И., 1992] считают необходимым создание «иммунного паспорта спортсмена» с целью широкого применения его в практической работе спортивных врачей. Однако специфика тренировочно-соревновательного процесса для разных спортивных специализаций и даже отдельных видов спорта отражается на характере изменений показателей иммунитета и усложняет решение поставленной задачи. Следовательно, необходимо изучение иммунного статуса спортсменов разных спортивных специализаций и создание «иммунного паспорта спортсмена» для каждого вида спорта.
Уже многие годы ведется изучение иммунных нарушений и, в целом, дезадаптации организма, возникающей на фоне экстремальных тренировочно-соревновательных нагрузок. Однако эти сведения недостаточно систематизированы по видам спорта и по периодам тренировочно-соревновательной деятельности. Лишь в некоторых работах [Першин Б.Б. и др., 2003] приводятся данные по исследованиям иммунного статуса спортсменов определенного вида спорта на протяжении отдельно взятого периода подготовки и тем более в рамках целого макроцикла. Часто, напротив, в иммунологических исследованиях совместно, не дифференцированно наблюдаются спортсмены разных видов спорта в различные по уровню напряженности периоды спортивных нагрузок. Такой подход неприемлем в спорте, тем более высших достижений, где в каждом виде спорта, на каждом этапе подготовки существуют свои характерные особенности.
Нередко в иммунологических исследованиях не учитывают и квалификацию спортсменов, однако очевидно, что реакции организма на нагрузку перворазрядника и мастера спорта будут существенно различаться.
На сегодняшний день известно, что в основе снижения иммунологической резистентности при напряженных психофизических нагрузках лежат нарушения нейроэндокринной регуляции, макро- и микронутриентная недостаточность, метаболические изменения внутренней среды, интоксикация из очагов хронической инфекции (при их наличии) [Олейник С.А. и др., 2008]. Однако эта проблема не изучена в полной мере, а сведения носят отрывочный характер. К примеру, остаются неясными реакция цитокинов на нагрузку, участие процессов апоптоза и другие не менее важные механизмы формирования иммунных нарушений. В то же время знание этих механизмов будет способствовать разработке адекватных и наиболее физиологичных способов профилактики иммунных дисфункций и недостаточности у спортсменов в периоды высоких нагрузок.
В настоящее время большое значение придают профилактике и коррекции иммунных нарушений у спортсменов [Таймазов В.А. и др., 2003], причем большинство исследований посвящено фармакологическим средствам [Кулиненков О.С., 2005, 2006]. Однако, учитывая преимущественно метаболический характер иммунных дисфункций у спортсменов, как нам представляется, приоритетным направлением в их профилактике может быть разработка полноценных сбалансированных рационов и создание продуктов повышенной биологической ценности (ППБЦ) иммуноориентированной направленности.
Цель работы: выявить механизмы формирования иммунных дисфункций и обосновать возможность их нутриционной профилактики у высококвалифицированных спортсменов.
Задачи исследования:
- Оценить показатели неспецифического, гуморального и клеточного звеньев иммунной системы высококвалифицированных спортсменов в условиях тренировочно-соревновательной деятельности.
- Выявить механизмы формирования иммунных дисфункций у спортсменов высших разрядов.
- Обосновать перспективность применения иммунозначимых нутриентов как средств профилактики иммунных дисфункций у высококвалифицированных спортсменов и на этой основе разработать комплексный продукт повышенной биологической ценности (ППБЦ) предназначенный для обеспечения нормального функционирования иммунной системы у спортсменов.
- Оценить влияние ППБЦ на показатели врожденного и адаптивного иммунитета и физическую работоспособность экспериментальных животных.
- Определить влияние ППБЦ на показатели неспецифического, гуморального и клеточного звеньев иммунной системы и соревновательную результативность высококвалифицированных биатлонистов.
Научная новизна. В ходе комплексного динамического исследования показателей врожденного и адаптивного иммунитета высококвалифицированных биатлонистов в рамках годичного макроцикла впервые выявлены характерные изменения иммунного статуса биатлонистов в различные периоды тренировочно-соревновательной деятельности, проявляющиеся формированием иммунных дисфункций в периоды высоких нагрузок и нормализацией иммунологических показателей в восстановительный период.
Впервые показано, что иммунные дисфункции у биатлонистов, формирующиеся в периоды напряженных спортивных нагрузок проявляются снижением неспецифической резистентности (уменьшение бактерицидной активности фагоцитов) и нарушениями в клеточном звене иммунной системы (увеличение цитотоксических Т-лимфоцитов и активированных Т- и В- лимфоцитов – CD3+25+, CD3+95+, CD19+95+), а также происходят изменения цитокиновой (повышение уровней про- и противовоспалительных цитокинов - TNF-, IL-1, IL-4, IL-10) и гормональной (повышение уровней адренокортикотропного гормона, кортизола, эндорфина, метэнкефалина) регуляции иммунитета.
Впервые установлено, что под воздействием высоких спортивных нагрузок происходит формирование иммунных дисфункций путем усиления процессов апоптоза.
Впервые при изучении макро- и микроэлементного состава биосубстратов у биатлонистов выявлено повышенное содержание свинца в волосах и крови, что можно рассматривать как дополнительный (наряду со спортивной нагрузкой) иммуносупрессивный фактор у представителей этого вида спорта.
Обоснован и разработан нутриционный подход к профилактике иммунных дисфункций у высококвалифицированных спортсменов в периоды напряженной тренировочно-соревновательной деятельности.
Практическая значимость. Совместно с Северо-западным центром оздоровительного питания создан, апробирован и предложен ППБЦ (белково-витаминно-минеральный напиток (БВМН) «Литораль») для поддержания функционального состояния иммунной системы и профилактики иммунозависимых заболеваний у высококвалифицированных спортсменов в периоды наиболее напряженных спортивных нагрузок.
Полученные в ходе исследования данные подтверждают необходимость разработки «иммунного паспорта биатлониста», что повысит эффективность профилактики иммунных нарушений у биатлонистов высших разрядов и улучшит качество медицинской помощи спортсменам в периоды наиболее напряженной тренировочно-соревновательной деятельности.
Рекомендовано включить в схему обследования спортсменов высокого класса оценку их макро- и особенно микроэлементного статуса, как основы для коррекции дефицитов эссенциальных минералов, формирующихся в процессе тренировочно-соревновательной деятельности. Для биатлонистов необходим систематический контроль содержания свинца, который можно с высокой степенью достоверности осуществлять и неинвазивным методом.
Основные положения, выносимые на защиту:
- У высококвалифицированных биатлонистов в ходе тренировочно-соревновательного макроцикла в периоды наиболее напряженных спортивных нагрузок формируются иммунные дисфункции.
- Формирование иммунных нарушений у высококвалифицированных спортсменов связано с нарушением нейро-эндокринной и цитокиновой регуляции иммунитета и дефицитом иммунозначимых нутриентов. Значимым фактором для развития иммунных дисфункций у спортсменов высших разрядов является усиление процессов апоптоза.
- Характерным иммуносупрессивным фактором для биатлонистов является хроническая интоксикация свинцом.
- Перспективным направлением профилактики иммунных нарушений у спортсменов высокого класса в периоды напряженных спортивных нагрузок являются ППБЦ иммуноориентированной направленности, применение которых позволяет путем оптимизации иммунного статуса повысить соревновательную результативность спортсменов.
Реализация работы. Результаты исследования внедрены в научную, учебную и лечебно-диагностическую работу научно-исследовательского центра Военно-медицинской академии, кафедры патологической физиологии Военно-медицинской академии, центральной научно-исследовательской лаборатории Башкирского государственного медицинского университета, кафедры физического воспитания Уфимского государственного авиационного технического университета.
На основании полученных данных изданы монография «Иммунореабилитация спортсменов» (2005) и учебно-методическое пособие «Средства восстановления в спортивной практике» (2007).
Исследование выполнялось в соответствии с плановой тематикой научно-исследовательских работ Военно-медицинской академии (темы НИР 4.06.186. п.12, 4.06.176. п.12, 2.05.180. п.12).
Апробация работы. Основные положения работы были представлены и обсуждены на втором международном конгрессе «Спорт и здоровье» (Санкт-Петербург, 2005), на четвертой межрегиональной научно-практической конференции «Питание здорового и больного человека» (Санкт-Петербург, 2006), на Всероссийской научно-практической конференции «Перспективы развития питания населения и военнослужащих» (Санкт-Петербург, 2006), на международном симпозиуме «Восток-Россия-Запад. Физическая культура и спорт, формирование здоровья и здоровьесберегающие технологии в системе образования: опыт, проблемы, исследования и перспективы» (Красноярск, 2006), на республиканской учебно-методической конференции «Средства восстановления в спортивной практике» (Уфа, 2007) на третьем международном конгрессе «Человек, спорт, здоровье» (Санкт-Петербург, 2007), на третьем съезде фармакологов России «Фармакология – практическому здравоохранению» (Санкт-Петербург, 2007), на международной научной конференции «СпортМед - 2007» (Москва, 2007), на IX Всероссийском конгрессе диетологов и нутрициологов «Питание и здоровье» (Москва, 2007), на всеармейской научно-практической конференции «Состояние и проблемы лечебного питания и основные направления его совершенствования в лечебных учреждениях МО РФ» (Санкт-Петербург, 2008), на международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы физической культуры, спорта и туризма» (Уфа, 2009), на четвертом международном конгрессе «Человек, спорт, здоровье» (Санкт-Петербург, 2009), на Всероссийской научно-практической конференции «Образование учащейся молодежи в сфере физической культуры и спорта» (Бирск, 2009).
По материалам диссертации опубликовано 47 печатных работ, в том числе 12 в центральных научных журналах, 1 монография и 1 учебно-методическое пособие.
Объем и структура диссертации: Диссертация изложена на 171 странице машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы. Работа иллюстрирована 5 рисунками и 38 таблицами. Список литературы включает 265 источников, из них 166 отечественных и 99 иностранных.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Для решения поставленных задач было обследовано 55 биатлонистов (30 мужчин и 25 женщин) в различные периоды тренировочно-соревновательной деятельности в рамках одного макроцикла. Возраст спортсменов находился в пределах от 19 до 24 лет. Спортсмены представляли сборную Ленинградской области по биатлону, имели высшие разряды, спортивный стаж в среднем 10 лет и тренировались по единой тренировочной программе.
Для проведения основной части исследования биатлонисты были разделены на 4 группы с одинаковым (по 10 человек) количеством испытуемых - 2 мужские и 2 женские. Комплектование групп осуществлялось путем подбора биатлонистов примерно равных по спортивной квалификации и уровню мастерства. Мужская и женская группы сравнения принимали в предсоревновательные периоды разработанный нами, совместно с Северо-западным центром оздоровительного питания, продукт повышенной биологической ценности (ППБЦ) для повышения иммунологической резистентности в виде сухой белковой, обогащенной витаминами и минералами смеси для приготовления напитка с условным названием «Литораль» (БВМН «Литораль»). Биатлонисты групп сравнения (мужской и женской) принимали БВМН «Литораль» по 25 г (перед употреблением смесь разводится в 200 мл прохладного молока или кефира) 3 раза в день (утром, днем, вечером) на протяжении всего подводящего этапа подготовки.
Таблица 1
Состав БВМН «Литораль» (1 порция = 25 г)
| Макронутриенты | Микронутриенты | ||
| витамины | минералы | ||
| Белок 10-15 г | Витамин С 20-21 мг | Кальций 160-240 мг | |
| Жиры 0,39-0,41 г | Витамин В1 0,26-0,51 мг | Магний 80-120 мг | |
| Углеводы 2,9-3,1 г | Витамин В2 0,3-0,6 мг | Фосфор 120-240 мг | |
| Витамин В5 0,75-1,5 мг | Железо 2,9-3,1 мг | ||
| Витамин В6 0,3-0,6 мг | Цинк 3,5-3,7 мг | ||
| Витамин В9 0,06-0,12 мг | Медь 0,29-0,31 мг | ||
| Витамин В12 0,45-0,9 мкг | Марганец 0,59-0,61 мг | ||
| Витамин РР 3-6 мг | Селен 20-21 мкг | ||
| Витамин Н 7,5-15 мкг | Йод 30-45 мкг | ||
| Витамин А 0,15-0,3 мг | |||
| Витамин Д 0,75-1,5 мкг | |||
| Витамин Е 1,8-3,6 мг | |||
| Вспомогательный функциональный компонент – остальное | |||
В состав данной смеси входят соевый и сывороточный белки, соевое масло, бурые морские водоросли ламинариевые и фукусы, полисахарид, получаемый из панциря камчатского краба, хитозан, витаминно-минеральный премикс и вспомогательный функциональный компонент (пищевые волокна (полисахариды сои, гуаровая камедь), мальтодекстрин, аспартам, вкусо-ароматические добавки).
Кроме того, проведено иммунологическое обследование 39 хоккеистов высших разрядов в возрасте от 17 до 34 лет, которые имели стаж занятий хоккеем от 11 до 28 лет. Обследование проводилось в подготовительный период однократно.
Контрольную группу в иммунологических исследованиях составили 14 практически здоровых молодых людей того же возраста, не занимающихся профессиональным спортом. Контрольную группу в серологических исследованиях составили 29 пациентов клиники кафедры факультетской терапии ВМедА.
Изучение количественного состава субпопуляций лимфоцитов в периферической крови выполнялось проточно-цитометрическим методом на проточном цитометре Facscan фирмы «Becton Dickinson» (США) с использованием тройных комбинаций прямых моноклональных антител (СD95/CD3/CD19, СD25/CD4/CD3, СD25/CD8/CD3, HLA-DR/СD4/СD3, HLA-DR/СD8/СD3, CD16+56/CD3) и изотипических контролей той же фирмы.
Таблица 2
Объем методов исследования
| Методы исследования | Количество исследований | |
| у спортсменов | в группе контроля | |
| Клинический осмотр Иммунологические показатели: - исследование субпопуляций лимфоцитов (CD3+, CD19+, CD3+CD4+, CD3+CD8+, CD3+CD25+, CD3+HLA-DR+, CD95+, CD3+CD95+, CD19+CD95+,CD3-CD16+56+, CD3+CD16+56+, CD3-CD8+) - цитокины (IFN-, IFN, IL-1, IL-4, IL-6, IL-10, TNF-) - иммуноглулины (M, G, A) - ЦИК (высоко-, средне- и низкомолекулярные) - ФП, ФЧ, ПЗФ - НСТ-тест (базаль. и стимулирован.), ЛКТ-тест Биохимическое исследование крови Определение гормонов Определение концентрации макро- и микроэлементов Определение персистентных герпесвирусных инфекций Оценка соревновательной деятельности | 55 1068 385+273 429+117 267+117 267+117 267+117 55 746 30 330+114 20+20 | 14 168 98 42 42 42 42 14 84 - 87 - |
Определение в сыворотке крови цитокинов проводили методом иммуноферментного анализа (ИФА). Для этого использовались отечественные тест-системы НПО «Протеиновый контур».
Для определения иммуноглобулинов классов M, G и A в сыворотке крови использовался стандартный метод простой радиальной иммунодиффузии по G.Mancini и др. (1965).
Уровень циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) определялся методом преципитации в полиэтиленгликоле (ПЭГ), предложенным Ю.А.Гриневичем и А.Н.Алферовым (1981).
Функциональную активность фагоцитов оценивали по НСТ-тесту [Виксман М.Е., Маянский А.Н., 1977], ЛКТ-тесту [Пигаревский В.Е., Мазинг Ю.А., 1981] и фагоцитозу. Параметры фагоцитарной реакции нейтрофилов крови определяли по методу Н.В. Васильева и др. (1972) в модификации В.Г. Морозова и В.Х. Хавинсона (1980). Поглотительную способность фагоцитов оценивали по фагоцитарному показателю (ФП) и фагоцитарному числу (ФЧ). Для оценки переваривающей функции определяли показатель завершенности фагоцитоза (ПЗФ).
Определение в крови персистентных герпесвирусных инфекций проводили методом ИФА. Для этого использовались диагностикумы фирмы Вектор-Бест (Новосибирск). Определяли антитела классов Ig G и Ig M к HSV1/2, CMV, EBV, HHV6, HHV7, HZV.
Исследование гормонов в крови (адренокортикотропный гормон, кортизол, -эндорфин, метэнкефалин, тироксин, трийодтиронин) проводили методом ИФА. Для этого использовались наборы реактивов «Hema» (Германия), а для определения -эндорфина - «Penisula» (Италия).
Для определения содержания макро- и микроэлементов в биосубстратах (кровь, волосы) использовали два метода анализа: атомно-эмиссионную спектрометрию с индуктивно связанной плазмой (прибор Optima 2000 DV, Perkin Elmer Corp.) и масс-спектроскопию с индуктивно связанной плазмой (прибор ELAN 9000, Perkin Elmer Corp.), а также систему микроволнового разложения (Multiwave 3000, Perkin Elmer A. Paar) [Скальная М.Г. и др., 2004].
Кроме того, было проведено два экспериментальных исследования в опытах на лабораторных животных. Первое – на самцах мышей межлинейных гибридов (СВА хС57BL6) F1 в возрасте 10-12 недель со средней массой тела 18-20 г. В каждом исследовании в группу входило по 10-12 мышей. Второе – на самцах беспородных белых крыс в возрасте 9-11 недель со средней массой тела 180-200 г. В каждом эксперименте в контрольную группу входило по 5, а в опытную по 10 крыс. В первом эксперименте - БВМН «Литораль», вводили ежедневно по 7 г/кг массы тела в молоке в объеме 200 мкл перорально. В качестве контроля служили мыши, которым аналогичным способом вводили молоко. При постановке отдельных реакций использовали также интактных мышей того же пола и возраста. Во втором эксперименте вводили БВМН «Литораль», смесь микроэлементов и их комбинацию крысам в течение 7 дней до начала стрессорного воздействия (для изучения профилактического эффекта веществ) и в течение 7 дней после окончания действия стресса (для анализа их лечебного действия). Вещества вводили перорально БВМН «Литораль» - 7 г/кг массы тела в объеме 500 мкл и смесь микроэлементов: аспарагинат цинка – 0,07 мг/кг, аспарагинат меди 0,02 мг/кг массы тела в объеме 500 мкл. В качестве плацебо использовали физиологический раствор. Сопоставление интенсивности перекисного окисления мембранных липидов (ПОЛ) и активности антиоксидантной системы (АОС) проводили с интактными животными того же пола и возраста. Длительность водоиммерсионного стрессорного воздействия составляла 6 часов однократно.
Экспериментальное исследование ППБЦ для повышения иммунологической резистентности в виде БВМН «Литораль» на лабораторных животных, проведено в соответствии с методическими указаниями по изучению иммунотропной активности фармакологических веществ, утверждёнными Фармакологическим Государственным Комитетом [Р.М. Хаитов и др., 2000].
Для оценки интенсивности ПОЛ в крови и ткани печени экспериментальных животных определяли содержание диеновых конъюгатов (ДК) [Стальная И.Д., 1977], гидроперекисей липидов (ГПЛ) [Доровских В.А. и др., 1989] и малонового диальдегида (МДА) [Андреева Л.И. и др., 1988], а состояние АОС оценивали по активности каталазы (Кат), глюкоза-6-фосфат-дегидрогеназы (Гл-6-ДГ) [Доровских В.А. и др., 1989]; супероксиддисмутазы (СОД) и глютатионредуктазы (ГР) [Макаренко Е.В., 1988].
Для исследования физической работоспособности лабораторных животных применяли тест принудительного плавания [Волчегорский И.А. и др., 2000] при температуре воды 18С с грузом, составляющим 10% от массы тела.
Исходные данные подвергались статистической обработке на персональном компьютере с помощью пакета прикладных программ Excel и Statistica 6.0 для Windows. При этом использовались следующие математико-статистические методы: описательная статистика количественных данных в группах; сравнение групп с помощью рангового непараметрического метода U-критерия Манна-Уитни и параметрического метода t-критерия Стьюдента; корреляционный анализ двух признаков непараметрическим методом Спирмена и параметрическим методом Пирсона.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Иммунный статус биатлонистов
Результаты исследования функционального состояния фагоцитарного звена иммунной системы выявили улучшение поглотительной и переваривающей способности фагоцитов у биатлонистов в сравнении со здоровыми, не занимающимися спортом лицами (увеличение ФЧ и ПЗФ) в пределах физиологической нормы.
Бактерицидная активность нейтрофилов по данным НСТ-теста у биатлонистов и лиц, не занимающихся спортом, не различалась и находилась в пределах физиологической нормы, что может свидетельствовать о нормальном функционировании кислород-зависимых антимикробных систем фагоцитоза. В свою очередь активность кислород-независимых систем бактерицидности фагоцитов у биатлонистов была ниже физиологической нормы и значений группы контроля во все периоды макроцикла, за исключением самого минимального по нагрузкам восстановительного периода.
Таблица 3
Показатели неспецифического звена иммунной системы биатлонистов
| Группы обследованных | Показатели неспецифического звена иммунной системы | |||||
| ФП, % | ФЧ, абс. | ПЗФ, % | НСТ баз., у.е. | НСТ стим., у.е. | ЛКТ, у.е. | |
| Контроль | 85,06±1,35 | 14,88±0,64 | 30,56±1,51 | 0,14±0,01 | 1,02±0,04 | 1,55±0,01 |
| Биатлонисты | ||||||
| Декабрь 2006 | 66,6±1,63* | 16,5±0,93* | 51,8±2,32* | 0,13±0,005 | 0,96±0,07 | 1,38±0,04* |
| Февраль 2007 | 65,6±1,27* | 16,1±0,87* | 51,2±2,12* | 0,13±0,005 | 0,97±0,09 | 1,44±0,04* |
| Май 2007 | 66,6±1,45* | 16,2±0,76* | 52,0±1,89* | 0,14±0,004 | 0,90±0,04 | 1,62±0,03* |
| Сентябрь 2007 | 66,3±1,08* | 15,9±0,60* | 49,2±1,92* | 0,16±0,027 | 0,98±0,07 | 1,48±0,02* |
Примечание: * - р< 0,05 – достоверность между показателями контрольной группы и группы биатлонистов
Уровни высоко- и низкомолекулярных ЦИК были достоверно выше у биатлонистов в сравнении с контрольной группой.
Уровни иммуноглобулинов всех исследованных классов не выходили за пределы физиологической нормы. Концентрация Ig M, G и A у биатлонистов во все периоды, кроме восстановительного не отличалась от значений контрольной группы, а в восстановительном периоде были достоверно выше, чем у лиц, не занимающихся спортом.
Таблица 4
Уровни ЦИК у биатлонистов
| Группы обследованных | Уровни ЦИК, отн. ед. | ||
| Циркулирующие иммунные комплексы | |||
| высокомолекулярные | среднемолекулярные | низкомолекулярные | |
| Контроль | 20,44±1,9 | 76,08±4,48 | 156,21±7,4 |
| Биатлонисты | |||
| Декабрь 2006 | 54,7±2,78* | 77,7±3,68 | 205,6±8,39* |
| Февраль 2007 | 52,8±2,2* | 76,6±3,6 | 198,7±5,53* |
| Май 2007 | 53,3±2,27* | 72,4±4,25 | 177,9±6,91* |
| Сентябрь 2007 | 53,3±1,76* | 75,0±3,36 | 195,9±4,74* |
Примечание: * - р< 0,05 – достоверность между показателями контрольной группы и группы биатлонистов
Таблица 5
Уровни иммуноглобулинов у биатлонистов
| Уровень Ig, г/л | Месяц и год | Группы обследованных | ||
| Контроль | Биатлонисты | |||
| мужчины | женщины | |||
| Ig М | Декабрь 2006 | 1,13±0,06 | 1,0±0,14 | 1,1±0,17 |
| Февраль 2007 | 1,2±0,16 | 1,1±0,15 | ||
| Май 2007 | 1,9±0,17* | 2,2±0,16* | ||
| Сентябрь 2007 | 1,1±0,08 | 1,2±0,10 | ||
| Ig G | Декабрь 2006 | 11,68±0,23 | 8,2±0,39 | 8,6±0,75 |
| Февраль 2007 | 8,0±0,26 | 7,6±0,32 | ||
| Май 2007 | 13,8±0,28* | 13,0±0,38* | ||
| Сентябрь 2007 | 8,1±0,48 | 8,4±0,31 | ||
| Ig А | Декабрь 2006 | 1,79±0,07 | 1,7±0,28 | 1,3±0,19 |
| Февраль 2007 | 1,9±0,11 | 1,2±0,16 | ||
| Май 2007 | 2,5±0,18* | 2,8±0,19* | ||
| Сентябрь 2007 | 1,38±0,14 | 1,3±0,09 | ||
Примечание: * - р< 0,05 – достоверность между показателями контрольной группы и группы биатлонистов
Таблица 6
Показатели клеточного звена иммунной системы биатлонистов
| Группы обследован-ных | Показатели клеточного звена иммунной системы, % | |||||||||||
| CD3+ | CD 3+ CD 4+ | CD 3+ CD 8+ | CD 3+ CD 25+ | CD 3+ HLA DR+ | CD 3+ CD 95+ | CD 19+ | CD 19+ CD 95+ | CD 95+ | CD 3+ CD 16+ CD 56+ | CD 3- CD 16+ CD 56+ | CD 3- CD 8+ | |
| Контроль | 68,1±1,3 | 37,4±1,3 | 25,0±0,86 | 8,1±0,46 | 2,7±0,18 | 5,4±0,66 | 9,5±0,52 | 0,4±0,09 | 6,1±0,64 | 4,4±0,35 | 12,7±0,79 | 5,32±0,45 |
| Биатлонисты | ||||||||||||
| Декабрь 2006 | 71,6±1,11* | 40,6±0,99* | 31,2±1,62* | 14,9±0,79* | 3,5±0,23* | 8,8±0,19* | 8,5±0,54 | 0,8±0,02* | 7,9±0,09* | 4,0±0,38 | 14,9±1,39 | 8,6±0,33* |
| Февраль 2007 | 71,8±1,05* | 40,6±1,03* | 30,9±1,65* | 14,9±0,84* | 3,5±0,23* | 8,7±0,19* | 8,5±0,48 | 0,8±0,02* | 7,9±0,09* | 4,0±0,38 | 14,5±1,19 | 8,6±0,33* |
| Май 2007 | 72,5±1,09* | 40,6±1,03* | 31,9±1,59* | 14,7±0,70* | 3,9±0,06* | 5,4±0,26 | 8,4±0,56 | 0,5±0,05 | 7,8±0,09* | 3,9±0,37 | 13,5±1,29 | 8,6±0,32* |
| Сентябрь 2007 | 72,2±0,83* | 40,6±0,95* | 31,6±1,30* | 14,7±0,83* | 3,3±0,24* | 8,9±0,19* | 8,4±0,45 | 0,8±0,02* | 7,8±0,09* | 4,2±0,40 | 14,4±1,00 | 8,6±0,32* |
Примечание: * - р< 0,05 – достоверность между показателями контрольной группы и группы биатлонистов
Результаты исследования клеточного звена иммунной системы показало, что общее количество Т-лимфоцитов (CD3+) у биатлонистов было достоверно выше в сравнении с контрольной группой, но не выходило за пределы физиологической нормы.
Измерение популяций Т-лимфоцитов хелперов/индукторов (CD3+ CD4+) и цитотоксических (CD3+ CD8+) выявило увеличение их показателей у спортсменов в сравнении с группой контроля, причем средние значения CD3+CD8+ во все периоды превышали физиологическую норму.
Количество активированных Т-лимфоцитов CD3+CD25+, CD3+HLADR+ и CD3+CD95+ у биатлонистов в сравнении со здоровыми, не занимающимися спортом лицами было больше во все периоды тренировочно-соревновательной деятельности за исключением CD3+CD95+ в восстановительном периоде. Уровни CD3+CD25+ и CD3+CD95+ (кроме восстановительного периода) у спортсменов превышали значения физиологической нормы.
Общее количество В-лимфоцитов (CD19+) у биатлонистов во все периоды макроцикла не отличалось от собственного контроля и общепринятой физиологической нормы. Количество активированных В-лимфоцитов (CD19+CD95+) у биатлонистов в сравнении со здоровыми, не занимающимися спортом лицами было больше и превышало физиологическую норму, кроме их количества в восстановительном периоде.
Уровни истинных натуральных киллеров (CD3-CD16+CD56+) и Т-киллеров (CD3+CD16+CD56+) во все периоды макроцикла достоверно не отличались от аналогичных показателей группы контроля и не выходили за пределы физиологической нормы. В свою очередь величины показателя натуральных киллеров, экспрессирующих антиген CD8 (CD3-CD8+) во все периоды больше в сравнении с контрольной группой (не превышая физиологической нормы).
Уровни CD95+ - активированных Т-, В-лимфоцитов и NK-клеток, экспрессирующих APO-1 FAS антиген, опосредующий апоптоз, у биатлонистов во все периоды спортивной деятельности превышают значения CD95+ у здоровых лиц, не занимающихся спортом.
Таким образом, изменения в клеточном звене иммунной системы у спортсменов высших разрядов представлены повышением общего количества Т-лимфоцитов (CD3+) и их субпопуляций - Т хелперов/индукторов (CD3+CD4+) и Т цитотоксических (CD3+CD8+), увеличением численности активированных Т-лимфоцитов - CD3+CD25+, CD3+HLADR+ и CD3+CD95+, а также активированных В-лимфоцитов (CD19+CD95+).
Общее количество В-лимфоцитов, Т-киллеров и истинных натуральных киллеров не отличаются от значений здоровых, не занимающихся спортом лиц.
Исследование уровней цитокинов у биатлонистов в обеих группах выявило увеличение концентраций провоспалительных TNF-, IL-1 и противовоспалительных IL-4 и IL-10. Величины IFN-, IFN- и IL-6 не выходили за пределы физиологических норм. По уровням всех цитокинов обе группы биатлонистов достоверно отличались от контрольной группы здоровых, не занимающихся спортом, лиц, в отношении IFN- в сторону уменьшения его концентрации, а в отношении всех остальных в сторону их увеличения.
Таблица 7
Уровни цитокинов у высококвалифицированных спортсменов
| Группы обследо-ванных | Уровни цитокинов, пг/мл | ||||||
| TNF- | IL-1 | IL-4 | IL-6 | IL-10 | IFN- | IFN- | |
| Контроль | 3±0,55 | 11,1±0,91 | 10,3±1,74 | 9,4±0,97 | 17,8±1,88 | 10,8±0,94 | 8,3±0,96 |
| Биатлон. муж. | 132,6±3,36* | 62,2±1,81* | 173,8±2,04* | 35,8±1,19* | 869,4±27,06* | 6,7±0,17* | 26,1±0,35* |
| Биатлон. жен. | 127,4±2,26* | 53,6±1,03* | 174,3±2,50* | 36,6±0,74* | 938,3±22,29* | 7,4±0,32* | 27±0,38* |
Примечание: * - р< 0,05 – достоверность между показателями контрольной группы и группы биатлонистов
Иммунный статус хоккеистов
Результаты исследования функционального состояния фагоцитарного звена иммунной системы у хоккеистов в начале подготовительного периода выявили снижение поглотительной способности фагоцитов (6,81±0,25) при сохраненной переваривающей функции (42,82±0,98) в сравнении с контрольной группой. Ниже у хоккеистов была и бактерицидная активность по данным НСТ-теста (0,09±0,01 и 0,87±0,05). Однако показатель ЛКТ-теста (1,56±0,01) не отличался от аналогичного показателя здоровых, не занимающихся спортом лиц и не превышал физиологическую норму.
Уровни высокомолекулярных ЦИК (9,38±2,13) были достоверно ниже, а низкомолекулярных ЦИК (187,69±8,45) выше в сравнении с группой здоровых, не занимающихся спортом лиц.
Уровень Ig M у хоккеистов (1,14±0,05) не отличался от значений группы контроля, а концентрация Ig G (13,55±0,32) и Ig A (2,34±0,11) была достоверно выше в сравнении с контрольной группой.
Исследование уровня цитокинов у хоккеистов выявило в среднем по группе увеличение концентраций как провоспалительных (TNF-, IL-1, IL-6), так и противовоспалительных (IL-4, IL-10) цитокинов в сравнении с контрольной группой здоровых, не занимающихся спортом, лиц. При этом в пределах физиологической нормы у хоккеистов находилось только среднее значение IL-6. Средние групповые показатели IFN- и IFN- не выходили за пределы физиологических норм.
Результаты исследования иммунитета высококвалифицированных спортсменов (биатлонистов и хоккеистов) выявили, что под воздействием спортивных нагрузок почти у всех обследованных нами атлетов происходят изменения показателей неспецифического звена иммунной системы. Нарушения функционального состояния фагоцитарного звена проявляется как в снижении поглотительной способности фагоцитов (наблюдаемой нами у хоккеистов), так и в угнетении их бактерицидной активности (выявленной у спортсменов обеих групп).
По данным литературы, интенсивная тренировочная деятельность, как правило, сопровождается снижением активности фагоцитоза – ФИ, ФЧ, ПЗФ клеток крови [Волков В.Н. и др., 1995; Фомин Н.А., 1997; Афанасьева И.А., 2007], что частично согласуется с нашими данными у спортсменов-хоккеистов – снижение поглотительной способности фагоцитов (при сохраненной переваривающей функции). Однако у спортсменов-биатлонистов мы наблюдали противоположную картину – улучшение поглотительной и переваривающей способности фагоцитов. Возможно, такая разница показателей связана с различной направленностью тренировочного процесса спортсменов разных специализаций (в нашем случае – спортсменов игрового вида спорта и атлетов, тренирующихся с преимущественным развитием выносливости). Но более вероятно – с разной степенью адаптируемости иммунной системы и организма спортсменов в целом к спортивным нагрузкам. Мы не связываем эти различия с периодами тренировочно-соревновательной деятельности, т.к. не наблюдали достоверных различий между показателями поглотительной и переваривающей способности фагоцитов у биатлонистов в различные периоды макроцикла.
Разнонаправленные изменения бактерицидной активности нейтрофилов (НСТ- и ЛКТ-тесты) у хоккеистов и биатлонистов согласуются с противоречивыми данными других исследователей [Эберт Л.Я. и др., 1993; Фомин Н.А., 1997; Афанасьева И.А., 2007]. Очевидно, характер изменений бактерицидной активности нейтрофилов связан с объемом и интенсивностью тренировочно-соревновательных нагрузок, что подтверждается различиями в показателях ЛКТ-теста у биатлонистов в зависимости от периода макроцикла.
Нарушения в неспецифическом звене иммунной системы подавляющего большинства обследованных спортсменов в периоды напряженной тренировочно-соревновательной деятельности являются логичными, т.к. именно это ее звено является первой линией защиты организма.
Уровни низкомолекулярных ЦИК были выше в обеих группах спортсменов в сравнении с группой здоровых, не занимающихся спортом лиц. В настоящее время установлено, что нарушение элиминации низкомолекулярных ЦИК приводит к развитию воспаления, а также продемонстрирована достоверная взаимосвязь повышенного содержания низкомолекулярных ЦИК с возникновением аутоиммунных нарушений [Фрейдлин И.С., Кузнецова С.А., 1999]. Таким образом, повышенные уровни низкомолекулярных ЦИК у спортсменов могут указывать на опасность развития у них аутоиммунных процессов. Подтверждением такой угрозы (развития аутоиммунных нарушений) является обнаружение рядом исследователей [Левин М.Я. и др., 2006; Nieman D.C. et al., 1990] аутоантител к собственным тканям у спортсменов.
Повышенный уровень Ig G и Ig A в начале подготовительного периода у хоккеистов (т.е. в период постепенного увеличения нагрузок) и повышение уровней иммуноглобулинов всех классов в восстановительный период - период самых низких спортивных нагрузок за макроцикл - у биатлонистов (и мужчин и женщин) связаны с небольшими объемом и интенсивностью нагрузок в эти периоды, и как следствие со снижением потребности организма спортсменов в это время в белке. А снижение количества иммуноглобулинов на этапах высоких психофизических нагрузок соответственно является следствием не только сорбционного механизма, но и увеличения потребности в энергии и пластическом материале, при дефиците которого организм начинает использовать наиболее мобильные белки организма, в том числе иммуноглобулины.
Кроме того, повышение уровней иммуноглобулинов в начале подготовительного и особенно в восстановительный периоды может быть следствием повышения активности В-лимфоцитов в связи с минимизацией нагрузки и снижением ее супрессии на В-клетки.
Согласно большинству литературных данных высокие спортивные нагрузки угнетают Т-звено иммунной системы. Это выражается в уменьшении содержания Т-лимфоцитов периферической крови, снижении их пролиферативной активности и нарушении рецепторного аппарата [Nieman D.C., 1997; Nieman D.C. et al., 1997; Nieman D.C. et al., 1998; Олейник С.А. и др., 2008]. Наши исследования напротив продемонстрировали увеличение Т-лимфоцитов и их субпопуляций (CD3+CD4+ и CD3+CD8+), особенно превышающих физиологический порог Т-цитотоксических лимфоцитов. Мы предполагаем, что увеличение Т-лимфоцитов и их субпопуляций скорее всего компенсаторное, в ответ на снижение других защитных факторов у обследованных нами спортсменов. Однако это не исключает предположения об адаптируемости иммунной системы биатлонистов к спортивным нагрузкам макроцикла, в рамках которого проводилось исследование.
Содержание В-лимфоцитов у наблюдаемых атлетов во все периоды макроцикла оставалось стабильным и не превышало физиологической нормы, что полностью согласуется с подавляющим большинством данных литературы [Сморчков А.А. и др., 2005; Житнухин Ю.А. и др., 2006; Hedfors E. еt al., 1976].
При анализе лимфоцитов, экспрессирующих на своей поверхности маркеры активации мы обнаружили повышение уровней всех исследуемых клеток в сравнении со здоровыми, не занимающимися спортом, лицами - CD3+CD25+, CD3+HLADR+, CD95+, CD3+CD95+, CD19+CD95+, причем значительное увеличение Т- и В-лимфоцитов, экспрессирующих APO-1 FAS антиген, опосредующий апоптоз. Исследование лимфоцитов периферической крови показало [Mars M. et al., 1998], что после завершения интенсивной физической нагрузки в лимфоидных клетках развивается повреждение ДНК. Следовательно, ожидаемо и усиление апоптоза в этот период, что и показано авторами. В литературе почти не встречаются данные об исследованиях процессов апоптоза у спортсменов, несмотря на мнения специалистов о приоритетности таких исследований [Першин Б.Б.и др., 2003]. В единичных работах [Житнухин Ю.А. и др., 2006] указывается на выраженное повышение клеток, экспрессирующих маркер CD95+, что соответствует и полученным нами результатам. На наш взгляд, увеличение Т- и В-лимфоцитов, экспрессирующих APO-1 FAS антиген во все периоды напряженных спортивных нагрузок указывает на усиление процессов апоптоза и может рассматриваться как один из механизмов формирования иммунных нарушений (дисфункций и недостаточности) у высококвалифицированных спортсменов.
В уровнях исследуемых цитокинов между биатлонистами мужчинами и хоккеистами не было достоверных различий. В среднем по группам у биатлонистов и хоккеистов на фоне спортивной нагрузки увеличивается концентрация всех исследованных цитокинов (кроме IFN-). Причем уровни цитокинов TNF-, IL-1, IL-4 и IL-10 значительно превышают физиологические нормы.
Литературные данные по исследованию цитокинов у спортсменов [Bagby G.J. et al., 1996; Drenth J.P.H. et al., 1995, 1998; Drenth J.P.H., Van der Meer J.W.M., 1999], также как и полученные нами данные у хоккеистов и биатлонистов, констатируют, что спортивные нагрузки приводят к существенным изменениям в их количественном содержании. Ряд авторов [Bruunsgard H. Et al., 1997; Rohde T. Et al., 1997] связывают повышение уровня цитокинов с травматизацией мышц, сопровождающей любую спортивную нагрузку. Есть подтверждение гипотезы о взаимосвязи между уровнем цитокинов (IL-6) и концентрацией катехоламинов [De Rijk R.H. et al., 1994]. В наших исследованиях мы наблюдали параллельное возрастание уровней как про-, так и противовоспалительных цитокинов. В данной ситуации провоспалительная гиперцитокинемия неспецифична, а противовоспалительная – своего рода баланс биологических эффектов первой. Регуляторная биосистема может быть полноценной, когда одна ее составляющая уравновешена другой, противонаправленной. Сбои в работе систем могут привести к преобладанию или недостаточности одной из сторон. Тогда возникает угроза развития относительного или абсолютного преобладания одного из звеньев иммунной системы, что чревато развитием иммунных дисфункций и срывом адаптации.
Гормональный статус биатлонистов
Гормональный статус биатлонистов оценивали по уровню в крови адренокортикотропного гормона и кортизола - представителей гипоталамо-гипофизарно-адренокортикальной стресс-реализующей системы, -эндорфина и метэнкефалина, относящихся к стресс-лимитирующей системе опиоидных пептидов, а также концентрации гормонов щитовидной железы - тироксина и трийодтиронина.
Уровни адренокортикотропного гормона (АКТГ) и кортизола у биатлонистов, как мужчин, так и женщин достоверно отличаются от контрольной группы неспортсменов в сторону увеличения во все периоды тренировочно-соревновательной деятельности, за исключением восстановительного периода, самого минимального по уровню нагрузки. В этот период концентрации АКТГ и кортизола у спортсменов минимальные в сравнении с этими же показателями в другие периоды и не отличается от контрольной группы. Полученные нами данные согласуются с литературными [Виру А.А., Кырге П.К., 1981; Ерошенко Т.М., Лукьянова Л.Л., 1989].
Таблица 8
Концентрации гормонов гипоталамо-гипофизарно-адренокортикальной системы
| Гормоны | Месяц и год | Контрольная группа | Биатлонисты | ||
| АКТГ (пмоль/л) | мужчины | женщины | мужчины | женщины | |
| Декабрь 2006 | 9,7±0,19 | 9,6±0,27 | 18,0±0,43* | 18,6±0,37* | |
| Февраль 2007 | 25,7±0,90* | 24,5±0,95* | |||
| Май 2007 | 10,4±0,25 | 10,2±0,21 | |||
| Сентябрь 2007 | 15,5±0,31* | 15,2±0,29* | |||
| Кортизол (нмоль/л) | Декабрь 2006 | 369,5±2,72 | 371,9±2,23 | 469,9±11,59* | 509,1±16,19* |
| Февраль 2007 | 513,3±8,92* | 503,1±4,87* | |||
| Май 2007 | 376,5±3,85 | 377,1±4,22 | |||
| Сентябрь 2007 | 460,2±8,15* | 451,1±14,47* | |||
Примечание: * - р< 0,05 – достоверность между показателями контрольной группы и группы биатлонистов
Уровни -эндорфина и метэнкефалина у мужчин биатлонистов достоверно отличаются от контрольной группы здоровых неспортсменов в сторону повышения во все периоды тренировочно-соревновательной деятельности, за исключением уровней этих гормонов в сентябре. У женщин биатлонисток концентрация -эндорфина повышена в сравнении с контрольной группой в феврале, мае и декабре, а метэнкефалина - в феврале и декабре. Возможно, низкий уровень гормонов в сентябре у всех биатлонистов объясняется небольшой нагрузкой и отсутствием соревнований в этот период, при таких условиях организму спортсмена просто не требуется активное подключение стресс-лимитирующих систем. Повышенные уровни гормонов в восстановительный период могут говорить о более высоких концентрациях этих гормонов у спортсменов в состоянии относительного покоя, что соответствует литературным данным [Ерошенко Т.М., Лукьянова Л.Л., 1989], как проявление адаптации тренированного организма или снижение уровня гормонов происходит медленно и восстанавливается только к началу подготовительного периода следующего макроцикла. Самый высокий уровень опиоидных пептидов наблюдается в декабре и, особенно в феврале статистически достоверно различаясь в обеих группах спортсменов в сравнении с группой контроля. Аналогичные результаты характерны для АКТГ и кортизола, т.е. в ответ на активацию стресс-реализующей гипоталамо-гипофизарно-адренокортикальной системы активируется стресс-лимитирующая опиоидная система. Скорее всего, это связано с тем, что на этот период приходятся достаточно интенсивные тренировочные нагрузки и наиболее ответственные соревнования.
Таблица 9
Концентрации опиоидных пептидов
| Гормоны | Месяц и год | Контрольная группа | Биатлонисты | ||
| -эндорфин (нг/л) | мужчины | женщины | мужчины | женщины | |
| 10,8±0,5 | 11,1±0,5 | ||||
| Февраль 2006 | 19,6±0,9* | 17,5±0,7* | |||
| Май 2006 | 17,1±0,7* | 14,8±0,6* | |||
| Сентябрь 2006 | 11,4±0,3 | 10,9±0,3 | |||
| Декабрь 2006 | 14,2±0,4* | 13,9±0,4* | |||
| Мет-энкефалин (нг/л) | 18,1±0,7 | 20,6±0,7 | |||
| Февраль 2006 | 27,5±0,8* | 25,6±0,8* | |||
| Май 2006 | 22,5±0,5* | 22,3±1,3 | |||
| Сентябрь 2006 | 19,7±0,3 | 19,2±0,4 | |||
| Декабрь 2006 | 22,1±0,5* | 24,7±0,4* | |||
Примечание: * - р< 0,05 – достоверность между показателями контрольной группы и группы биатлонистов
Уровни тироксина у биатлонистов, как мужчин, так и женщин достоверно отличаются от контрольной группы неспортсменов в сторону увеличения во все периоды тренировочно-соревновательной деятельности, за исключением восстановительного периода, у мужчин. В этот период концентрация тироксина у спортсменов минимальная в сравнении с этими же показателями в другие периоды и не отличается от контрольной группы.
Динамика содержания тироксина в крови спортсменов в ходе нагрузок макроцикла согласуется с данными литературы [Виру А.А., Кырге П.К., 1983]. Напряженная спортивная деятельность вызывает повышение уровня тироксина, умеренная – не изменяет его концентрацию.
Таблица 10
Концентрации гормонов щитовидной железы
| Гормоны | Месяц и год | Контрольная группа | Биатлонисты | ||
| Тироксин (нмоль/л) | мужчины | женщины | мужчины | женщины | |
| Декабрь 2006 | 101,5±1,02 | 100,3±0,89 | 156,0±3,21* | 158,7±2,96* | |
| Февраль 2007 | 165,8±2,71* | 142,9±9,81* | |||
| Май 2007 | 107,2±1,58 | 107,9±1,97* | |||
| Сентябрь 2007 | 136,8±1,89* | 135,6±1,82* | |||
| Трийод- тиронин (нмоль/л) | Декабрь 2006 | 1,6±0,03 | 1,6±0,03 | 1,2±0,02* | 1,2±0,02* |
| Февраль 2007 | 1,0±0,04* | 1,1±0,01* | |||
| Май 2007 | 1,7±0,03* | 1,8±0,02* | |||
| Сентябрь 2007 | 1,5±0,03* | 1,7±0,03* | |||
Примечание: * - р< 0,05 – достоверность между показателями контрольной группы и группы биатлонистов
В период минимальных нагрузок (в восстановительный период) концентрация трийодтиронина у биатлонистов выше, чем у не занимающихся спортом лиц, а в периоды высоких нагрузок его уровень ниже, чем у неспортсменов скорее всего за счет снижения инактивного трийодтиронина [Виру А.А., Кырге П.К., 1983].
Макро- и микроэлементный статус биатлонистов
Исследование макро- и микроэлементного статуса биатлонистов выявило: повышение свинца в волосах (4,5±1,1), значительно превышающее физиологическую норму и содержание этого элемента в крови максимально приближенное к верхней границе физиологической нормы (0,018±0,001). Эти данные указывают на хроническую интоксикацию свинцом у биатлонистов, связанную с их тесным контактом с оружием.
При проведении корреляционного анализа между содержанием свинца в крови и в волосах выявлена положительная средняя корреляционная связь (r=0,34), что позволяет нам, проводя неинвазивную систематическую проверку уровня свинца в волосах судить о его концентрации в крови.
Корреляционный анализ между содержанием в крови свинца и других макро- и микроэлементов обнаружил положительную среднюю корреляционную связь с кальцием (r=0,46), с магнием (r=0,65), с фосфором (r=0,5), с железом (r=0,5) и с цинком (r=0,31).
У биатлонистов сниженными оказались также уровни фосфора, меди и марганца в крови, остальные макро- и микроэлементы находились в пределах физиологической нормы.
Дефицит фосфора может быть связан с недостаточным потреблением белка или его повышенным расходом. Низкие концентрации в крови меди и марганца, возможно, отражают усиление работы фермента антиоксидантной системы супероксиддисмутазы в условиях активации ПОЛ в период напряженной тренировочно-соревновательной деятельности.
Заболеваемость биатлонистов
Структура заболеваемости биатлонистов за год представлена следующими нозологиями – ОРВИ, в том числе и грипп, ангины, травмы и заболевания опорно-двигательного аппарата (в основном растяжения связок и мышц) и физическое перенапряжение. Первое место по частоте занимают ОРВИ, на втором месте травмы и заболевания ОДА, на третьем – ангины и на четвертом – у трех спортсменов – физическое перенапряжение.
Пик заболеваемости ОРВИ среди биатлонистов приходился на январь, февраль и март – период, наиболее насыщенный ответственными соревнованиями, а самые низкие показатели заболеваемости отмечались в мае, июне и июле, что связано с существенным снижением спортивных нагрузок в эти месяцы и сезонностью самой патологии. Травмы и заболевания ОДА встречались во все периоды спортивного сезона, за исключением минимального по нагрузкам восстановительного периода, который приходился на май и июнь. Физическое перенапряжение за весь год наблюдалось только у 3 спортсменов из 55, что может свидетельствовать о рациональном построении тренировочного процесса тренерским корпусом.
Инфицированность спортсменов персистентными вирусными инфекциями
Инфицированность контрольной группы (пациентов клиники кафедры ФТ ВМедА) персистирующими герпесвирусами (HSV1/2, CMV и EBV) составила 79-86%. В группе не было пациентов, серонегативных ко всем трем исследуемым вирусам. Маркеры активации персистирующих герпесвирусов выявлялись с частотой от 16% до 25%. В целом, активацию герпесвирусов зафиксировали у 11 из 29 (38%) пациентов.
Обследование хоккеистов на персистентные герпесвирусные инфекции дало эпидемиологически ожидаемые результаты. Их инфицированность составила для HSV 1-2 типов 89%, для CMV – 61%, для EBV – 95%. Среди обследованных не было ни одного серонегативного ко всем трем исследованным герпесвирусам. Активная фаза персистентной HSV-инфекции наблюдалась у 1 из 34, а EBV-инфекции – у 2 из 36 серопозитивных к соответствующему вирусу.
Инфицированность биатлонистов герпесвирусами составила для HSV 1-2 типов 18%, для HНV 6 типа 5,5%, для HНV 7 типа 3,6%, для HZV 9,1%, для CMV – 7,3%, для EBV – 14,5%. Среди обследованных было 28 спортсменов серонегативных ко всем исследованным герпесвирусам, что существенно отличается от картины которая наблюдалась у хоккеистов и пациентов клиники кафедры ФТ ВМедА. Специфические иммуноглобулины класса М обнаружили всего в 3 случаях: IgM-HSV – у одного, IgM-EBV – у двоих других. К CMV Ig M не были обнаружены ни у одного спортсмена. Это соответствует данным, полученным при обследовании хоккеистов.
Таким образом, инфицированность контрольной группы персистирующими герпесвирусами была практически столь же высокой, как и у хоккеистов. Ни среди тех, ни среди других не было лиц, серонегативных ко всем исследованным герпесвирусам. Биатлонисты выгодно отличаются от обеих указанных выше групп невысоким процентом инфицированности на все исследованные вирусы. Возможно, это связано с условиями тренировочно-соревновательной деятельности биатлонистов. Тренировки и соревнования биатлонистов, как правило, проходят на открытом воздухе в отличие от хоккеистов, которые в большей степени тренируются в помещении и тесно контактируют друг с другом. Ig М к этим герпесвирусам встречались значительно чаще у пациентов, чем у спортсменов. Это представляется вполне объяснимым. Иммуносупрессия, вызванная различными заболеваниями у пациентов закономерно сопровождается активацией персистирующих герпесвирусов.
Анализ исследований ученых в области спортивной иммунологии (по данным литературы) и собственные исследования позволили нам выявить механизмы формирования иммунных дисфункций у высококвалифицированных спортсменов. К ним относятся:
1. Нарушение нейроэндокринной и цитокиновой регуляции. В наших исследованиях это подтверждается гиперактивацией стресс-реализующей гипофизарно-адренокортикальной системы (АКТГ, кортизол) и увеличением провоспалительных цитокинов (TNF-, IL-1). А также ответным, компенсаторным усилением работы стресс-лимитирующей системы опиоидных пептидов (-эндорфин, метэнкефалин) и повышением противовоспалительых цитокинов (IL-4, IL-10).
2. Интенсификация процессов апоптоза, на которую указывает существенное повышение клеток, на которых экспрессируется CD 95 (CD95+, CD3+95+, CD19+95+). Усиление апоптоза может играть и защитную роль, предохраняя организм от более серьезных поломок, например развития аутоиммунных заболеваний.
3. Недостаточность иммунозначимых макро- и микронутриентов и как следствие нарушение энергетического и пластического обеспечения иммунной системы и организма в целом [Суздальницкий Р.С., Левандо В.А., 2003].
4. В результате анализа минерального состава биологических субстратов – волос и крови биатлонистов нами обнаружено значительное превышение нормы свинца в волосах. В крови (в среднем по группе) концентрация свинца находится на верхней границе физиологической нормы. Это дает нам основание говорить о хронической интоксикации свинцом [Цыган В.Н. и др., 2005], связанной с тесным контактом представителей этого вида спорта с оружием. Таким образом, в формировании иммунных дисфункций у биатлонистов важную роль играет характерное для этого вида спорта хроническое отравление свинцом легкой степени.
Не менее существенным может быть инфицированность спортсменов персистирующими герпесвирусами. Все обследуемые нами хоккеисты и половина биатлонистов (27 человек) была серопозитивна к одному или двум вирусам.
Нельзя исключать и генетические особенности конкретного организма [Сергиенко Л.П., 1990; Сологуб Е.Б., Таймазов В.А., 2000].
Создание ППБЦ иммуноориентированной направленности
Из всех выявленных нами механизмов формирования иммунных нарушений у высококвалифицированных спортсменов наиболее физиологичным способом мы можем влиять на восстановление энергетического и пластического обеспечения иммунной системы путем восполнения дефицита необходимых ей пищевых веществ.
На основании анализа литературного материала по данной проблеме мы выявили наиболее важные для иммунной системы пищевые вещества – полноценный по аминокислотному составу белок, полиненасыщенные жирные кислоты, витамины (С, группы В, А, Е) и минералы (кальций, магний, железо, цинк, медь, марганец, селен) [Дидур М.Д. и др., 2002; Вологжанин Д.А., 2005; Скальный А.В. и др., 2005].
Совместно с Северо-западным центром оздоровительного питания мы создали ППБЦ иммуноориентированной направленности в виде сухой белковой, обогащенной витаминами и минералами смеси для приготовления напитка (БВМН) с условным названием «Литораль». В состав нашей комбинации были включены белки, полиненасыщенные жирные кислоты, углеводы в виде пищевых волокон и хитозана, витамины (С, группы В, РР, Н, А, Д, Е) и макро- и микроэлементы (кальций, магний, фосфор, железо, цинк, медь, марганец, селен и йод).
Кроме того, при разработке БВМН «Литораль» учитывались следующие дополнительные требования - полная безопасность для здоровья спортсмена и отсутствие в их составе веществ, относящиеся к запрещенным в спорте.
Экспериментальные исследования
В первом эксперименте изучено влияние БВМН «Литораль» на факторы врожденного (фагоцитоз, бактерицидная активность, естественные киллеры) и адаптивного (клеточный и гуморальный) иммунитета экспериментальных животных.
Под действием БВМН (во всех концентрациях – 1%, 5% и 10%) величины показателя поглотительной активности перитонеальных макрофагов мышей увеличились в сравнении с контролем соответственно на 13,4, 20,5 и 6,3 %, а величины показателя их бактерицидной активности повысились в сравнении с контрольной группой на 33, 36,4 и 8,2 % соответственно.
Под влиянием БВМН в концентрациях 5% и 10% отмечается тенденция к повышению количества АОК, как на селезенку, так и на миллион ЯСК-клеток селезенки мышей в сравнении с контролем, получавшим ФР. Количество АОК при 1% концентрации продукта было меньше в сравнении с контрольной группой животных.
Под действием БВМН в 1% концентрации наблюдается тенденция к повышению индекса реакции ГЗТ к эритроцитам барана в сравнении с контролем. Индекс реакции при 5% и 10% концентрациях продукта уменьшается в сравнении с животными группы контроля.
Под влиянием БВМН величина показателя функционального состояния лейкоцитов периферической крови мышей в тесте спонтанной хемилюминесценции была ниже контроля в первом опыте и незначительно увеличилась во втором опыте при концентрации продукта 1% и 10%. В тесте индуцированной хемилюминесценции зимозаном и ФМА величина показателя была ниже контроля, кроме второго опыта с зимозаном при 10% концентрации продукта.
Под действием БВМН величина показателя функционального состояния спленоцитов мышей в тесте спонтанной хемилюминесценции была выше контроля при 1% концентрации продукта в первом опыте и его 5% и 10% концентрациях во втором опыте (соответственно индекс хемилюминесценции был равен – 1,08; 1,16; 1,02). В тесте индуцированной хемилюминесценции зимозаном индекс хемилюминесценции был больше, чем в контрольной группе животных в обоих опытах во всех концентрациях продукта, а в тесте индуцированной хемилюминесценции ФМА индекс хемилюминесценции был выше, чем в контроле в первом опыте при 5% и 10% концентрациях продукта, а во втором – при 1% и 5%.
На фоне введения БВМН уровень цитокина интерлейкина-12 увеличивается в сравнении с контролем при концентрации продукта 5% во втором опыте (640,9 пкг/мл) и 10% в обоих опытах (соответственно 645,7 и 640,1 пкг/мл).
На основании результатов проведенного эксперимента можно констатировать, что разработанный нами ППБЦ иммуноориентированной направленности в виде БВМН «Литораль» повышает неспецифическую резистентность экспериментальных животных за счет стимулирующего влияния на поглотительную и бактерицидную активность перитонеальных макрофагов мышей, в 5% и 10% концентрациях положительно влияет на гуморальный, а в 1% концентрации - на клеточный иммунный ответ. Полученные результаты в оценке гуморального и клеточного иммунного ответа подтверждают известный в иммунологии факт о конкуренции между гуморальным и клеточным ответом. БВМН оказывает стимулирующее влияние на функциональное состояние спленоцитов экспериментальных животных. Высокая активность выявлена для спленоцитов мышей при всех концентрациях продукта, как в тесте спонтанной, так и индуцированной зимозаном и ФМА хемилюминесценции. Также в 5% и 10% концентрациях БВМН повышает содержание IL-12 в сыворотке крови экспериментальных животных, что подтверждает иммуноориентированную направленность данного продукта.
Таким образом, данные, полученные нами в эксперименте, свидетельствуют о том, что БВМН «Литораль» воздействует на обмен веществ иммунокомпетентных клеток и его можно отнести к группе продуктов, обладающих умеренной иммуностимулирующей активностью.
Кроме того, дополнительное введение ППБЦ иммуноориентированной направленности экспериментальным животным существенно повышает их физическую работоспособность.
Иммуноориентированная направленность БВМН «Литораль» и положительное влияние на физическую работоспособность лабораторных животных говорили об оправданности назначения иммуноориентированного ППБЦ высококвалифицированным спортсменам в периоды высокого риска развития вторичной иммунной дисфункции или недостаточности на фоне напряженных психофизических нагрузок.
Во втором эксперименте изучено влияние БВМН «Литораль», а также смеси микроэлементов (аспарагинат цинка + аспарагинат меди) и их сочетанного применения на интенсивность ПОЛ и активность АОС экспериментальных животных.
Дополнительное изучение влияния на ПОЛ и АОС лабораторных животных комбинации цинка и меди и их сочетанного действия с БВМН «Литораль» связана с участием этих микроэлементов в работе одного из основных антиоксидантных ферментов – супероксиддисмутазы и их конкурентными взаимоотношениями. Кроме того, эти микроэлементы важны для жизнедеятельности биатлонистов в связи с выявленными повышенным уровнем свинца и пониженной концентрацией меди в организме всех без исключения обследованных нами спортсменов-биатлонистов.
Результаты проведенного исследования показали, что БВМН и смесь микроэлементов в изученных дозах не предупреждали активацию ПОЛ, подвергнутых водоиммерсионному стрессу животных, однако оказывали лечебное действие при стрессе, поддерживая уровень МДА в печени в пределах нормы при сохраненной активности ферментов антиоксидантной системы.
В ходе изучения влияния совместного применения БВМН и микроэлементов было установлено их защитное влияние на стресс, вызывающее снижение процессов пероксидации в крови и гепатоцитах, а также стабилизацию и повышение активности антиоксидантной системы в эритроцитах и ткани печени. Т.е. дополнительное введение с БВМН «Литораль» меди и цинка (повышение дозы этих микроэлементов) способствует более выраженному стресспротекторному эффекту.
Физическая работоспособность интактных экспериментальных животных не имела статистически достоверной разницы с физической работоспособностью стрессированных крыс, которые получали комбинацию БВМН и микроэлементов, как с профилактической целью, так и по окончании лечебного курса. Кроме того, профилактическое введение БВМН, смеси микроэлементов и их комбинации приводило к повышению физической работоспособности экспериментальных животных в сравнении с группой, получавшей плацебо. Повышение физической работоспособности крыс также происходило на фоне лечебного курса во всех экспериментальных группах в сравнении с контрольной, животным которой вводили плацебо.
Таким образом, по результатам экспериментальных исследований разработанный нами ППБЦ иммуноориентированной направленности обладает умеренной иммуностимулирующей активностью и повышает физическую работоспособность экспериментальных животных. Дополнительное введение к БВМН «Литораль» смеси микроэлементов (медь+цинк) способствует снижению уровня ПОЛ усиливая стресспротекторный эффект на фоне повышения физической работоспособности лабораторных животных.
Положительные результаты экспериментальных исследований позволили нам изучить влияние БВМН «Литораль» на иммунный статус спортсменов-биатлонистов с целью разработки эффективного и наиболее физиологичного способа профилактики иммунных дисфункций в периоды напряженных спортивных нагрузок.
Влияние ППБЦ иммуноориентированной направленности на иммунный статус высококвалифицированных биатлонистов
При сравнительной оценке показателей неспецифической резистентности биатлонистов контрольной и опытной групп выявлено улучшение поглотительной способности фагоцитов у биатлонистов опытной группы (ФЧ) в период наиболее напряженной тренировочно-соревновательной деятельности (в феврале). Отличий в показателях переваривающей способности фагоцитов у биатлонистов не наблюдалось. Бактерицидная активность по данным НСТ-теста также улучшалась у биатлонистов опытной группы в сравнении с контрольной в период ответственных соревнований (в феврале). Показатели ЛКТ-теста у спортсменов опытной группы (в отличие от контрольной) соответствовали физиологической норме и были выше во все периоды, кроме восстановительного. В восстановительный период показатели ЛКТ-теста контрольной и опытной групп не отличались друг от друга.
Таблица 11
Влияние БВМН «Литораль» на показатели неспецифического звена иммунной системы биатлонистов
| Месяц и год | Показатели неспецифического звена иммунной системы | |||||
| ФЧ, абс. | НСТ, у.е. | ЛКТ, у.е. | ||||
| Контр. гр. | Опыт. гр. | Контр. гр. | Опыт. гр. | Контр. гр. | Опыт. гр. | |
| Декабрь 2006 | 16,5±0,93 | 15,4±1,40 | 0,96±0,07 | 0,98±0,06 | 1,38±0,04 | 1,51±0,015* |
| Февраль 2007 | 16,1±0,87 | 20,8±1,07* | 0,97±0,09 | 1,23±0,03* | 1,44±0,04 | 1,52±0,008 |
| Май 2007 | 16,2±0,76 | 16,9±1,10 | 0,90±0,04 | 0,91±0,04 | 1,62±0,03 | 1,61±0,023 |
| Сентябрь 2007 | 15,9±0,60 | 17,0±0,89 | 0,98±0,07 | 1,15±0,07 | 1,48±0,02 | 1,52±0,019 |
Примечание: * - р< 0,05 – достоверность между показателями контрольной и опытной групп биатлонистов
Уровни высокомолекулярных и низкомолекулярных ЦИК биатлонистов опытной группы в периоды наиболее напряженных спортивных нагрузок - декабрь, февраль - были достоверно ниже аналогичных показателей у спортсменов контрольной группы. В два других временных промежутка уровни ЦИК не отличались у биатлонистов обеих групп и не превышали физиологических норм.
Концентрация IgM у биатлонистов опытной группы была выше в декабре и имела тенденцию к повышению в феврале, а у биатлонисток опытной группы была достоверно выше во все периоды, кроме восстановительного в отличие от контрольных групп спортсменов. Концентрация IgG у биатлонистов опытных групп превосходила величину этого показателя в контрольных группах у мужчин в декабре и феврале, у женщин - во все периоды, кроме восстановительного. Концентрация IgА была достоверно выше у мужчин биатлонистов опытной группы по сравнению с контрольной во все периоды, а у женщин биатлонисток опытной группы по сравнению с контрольной в феврале и в сентябре. В декабре и мае различий в группах женщин биатлонисток не обнаружено. В восстановительном периоде уровни всех исследованных иммуноглобулинов у спортсменов (и мужчин, и женщин) существенно не отличались между контрольной и опытной группами.
Таблица 12
Влияние БВМН «Литораль» на уровни иммуноглобулинов у биатлонистов
| Уровень Ig, г/л | Месяц и год | Биатлонисты (контр. гр.) | Биатлонисты (опыт. гр.) | ||
| Ig М | мужчины | женщины | мужчины | женщины | |
| Декабрь 2006 | 1,0±0,14 | 1,1±0,17 | 1,8±0,13* | 1,8±0,14* | |
| Февраль 2007 | 1,2±0,16 | 1,1±0,15 | 1,6±0,11 | 1,8±0,17* | |
| Май 2007 | 1,9±0,17 х | 2,2±0,16 х | 2,2±0,12 х | 1,9±0,19 | |
| Сентябрь 2007 | 1,1±0,08 | 1,2±0,10 | 1,5±0,21 | 2,1±0,08* | |
| Ig G | Декабрь 2006 | 8,2±0,39 | 8,6±0,75 | 11,7±0,36* | 12,3±0,73* |
| Февраль 2007 | 8,0±0,26 | 7,6±0,32 | 13,0±0,59* | 12,8±0,39* | |
| Май 2007 | 13,8±0,28 х | 13,0±0,38 х | 12,8±0,19* х | 12,7±0,38 | |
| Сентябрь 2007 | 8,1±0,48 | 8,4±0,31 | 7,8±0,51 х | 11,2±0,72* | |
| Ig А | Декабрь 2006 | 1,7±0,28 | 1,3±0,19 | 2,5±0,17* | 1,2±0,09 |
| Февраль 2007 | 1,9±0,11 | 1,2±0,16 | 2,5±0,15* | 1,9±0,25* х | |
| Май 2007 | 2,5±0,18 | 2,8±0,19 х | 3,0±0,12* х | 2,6±0,16 х | |
| Сентябрь 2007 | 1,38±0,14 х | 1,3±0,09 | 1,72±0,09 х | 2,4±0,18* х | |
Примечание: * - р< 0,05 – достоверность между показателями контрольной и опытной групп биатлонистов; х - р< 0,05 – достоверность между показателями спортсменов внутри групп
Достоверных различий между опытной и контрольной группами биатлонистов по количеству CD3+, CD3+ CD4+, CD3+ CD8+, CD3+ CD16+ CD56+, CD3- CD16+ CD56+, CD3- CD8+, CD3+ CD25+, CD3+ HLA DR+, CD95+, CD19+ CD95+ не обнаружено. Количество CD 19+ имеет тенденцию к увеличению в декабре, феврале и мае и статистически достоверное повышение в сентябре у спортсменов опытной группы в сравнении с контрольной. Уровень Т-лимфоцитов, экспрессирующих APO-1 FAS антиген, опосредующий апоптоз (CD 3+ CD 95+) достоверно снижается в опытной группе биатлонистов в периоды наиболее напряженной тренировочно-соревновательной деятельности - в декабре и в феврале.
При сравнительном анализе исследованных цитокинов у биатлонистов выявлено: уровни провоспалительных (TNF-, IL-1, IL-6) и противовоспалительных (IFN-, IL-4, IL-10) цитокинов у мужчин биатлонистов и уровни TNF-, IL-1, IL-6, IFN-, IL-4 у женщин биатлонисток опытных групп были статистически достоверно меньше в сравнении с контрольными группами. Уровень IFN- у биатлонистов мужчин опытной группы был достоверно выше группы контроля, а биатлонисток женщин опытной группы не отличался от контрольной.
Таблица 13
Состояние цитокинового статуса у биатлонистов
| Группы спортсменов | Уровень цитокинов, пг/мл | ||||||
| TNF- | IL-1 | IL-4 | IL-6 | IL-10 | IFN- | IFN- | |
| Биатлон. муж. к. | 132,6±3,36 | 62,2±1,81 | 173,8±2,04 | 35,8±1,19 | 869,4±27,06 | 6,7±0,17 | 26,1±0,35 |
| Биатлон. муж. оп. | 120±1,15* | 46,6±0,94* | 159,1±2,91* | 31,1±0,75* | 671,8±17,08* | 7,5±0,17* | 23,4±0,34* |
| Биатлон. жен. к. | 127,4±2,26 | 53,6±1,03 | 174,3±2,50 | 36,6±0,74 | 938,3±22,29 | 7,4±0,32 | 27±0,38 |
| Биатлон. жен. оп. | 109,5±2,46* | 46,8±0,90* | 158,2±3,48* | 33,9±0,72* | 905,0±9,04 | 7,5±0,24 | 23,3±0,75* |
Примечание: * - р< 0,05 – достоверность между показателями контрольной и опытной групп биатлонистов
Результаты исследования влияния ППБЦ иммуноориентированной направленности (в виде БВМН «Литораль») на иммунный статус спортсменов-биатлонистов выявили: улучшение поглотительной способности фагоцитов и их бактерицидной активности в периоды наиболее напряженной тренировочно-соревновательной деятельности (декабрь, февраль); снижение уровней высоко- и низкомолекулярных ЦИК и повышение концентрации всех классов иммуноглобулинов (А, G, М) в те же периоды (не превышая границ физиологической нормы). В меньшей степени нутриционная поддержка влияла на клеточное звено иммунной системы – наблюдалось повышение CD 19+ и достоверное снижение CD 3+95+ в периоды наиболее напряженной тренировочно-соревновательной деятельности. Кроме того, комбинация иммунозначимых нутриентов улучшала цитокиновую регуляцию у биатлонистов.
Таким образом, прием иммуноориентированного ППБЦ повышает иммунорезистентность биатлонистов в периоды напряженной спортивной деятельности и может быть использован (в эти периоды) с целью профилактики вторичных иммунных дисфункций, как наиболее физиологичный способ и как альтернатива фармакологическим средствам иммунопрофилактики.
Соревновательная результативность биатлонистов
Биатлонистам всех наблюдаемых групп в базовом (первом) этапе подготовительного периода был заложен хороший фундамент специальной физической подготовленности, обеспечивающий в дальнейшем выполнение спортсменами нагрузок, моделирующих соревновательную деятельность. В дальнейшем (второй этап подготовительного периода) процесс подготовки стал более специализированным, а, следовательно, и более интенсивным. Как показали результаты выступлений биатлонистов и биатлонисток как контрольных, так и опытных групп в соревнованиях, тренировочный процесс в рамках подготовительного периода был для них организован и проведен успешно. Об этом свидетельствуют достаточно высокие результаты выступления в соревнованиях, показываемые спортсменами всех четырех групп в течение 5 месяцев (с ноября по март).
Разница в результатах соревнований у биатлонистов опытных и контрольных групп (согласно проведенного рейтинга учитывалась средняя величина значений всех занятых мест) была в пользу спортсменов принимавших ППБЦ иммуноориентированной направленности, но эти отличия были не очень большими (одно рейтинговое место, как между мужскими, так и между женскими группами). Это можно объяснить тем, что уровень общей и специальной готовности, достигнутый атлетами всех групп в подготовительный период был весьма высоким, в связи с этим достичь более значительных соревновательных результатов даже на фоне применения биатлонистами опытных групп БВМН «Литораль» достаточно сложно. Однако были отмечены следующие факты (факторы), которые подтверждают несомненный положительный эффект отмеченный у спортсменов применявших ППБЦ иммуноориентированной направленности. В частности, первое – более легкая степень переносимости интенсивных спортивных нагрузок и ускоренное восстановление после их реализации биатлонистами и биатлонистками опытных групп (в педагогических наблюдениях); второе – высокая самооценка своих субъективных ощущений в ходе тренировочного процесса и соревнований у спортсменов тех же групп; третье – улучшение их техники передвижения на лыжах (в педагогических наблюдениях); четвертое – отсутствие у них жалоб, указывающих на переутомление и перенапряжение, а также низкий процент инфекционной заболеваемости у атлетов как мужской, так и женской опытных групп.
Спортсмены контрольных групп, получавших плацебо, напротив, с большим напряжением переносили тренировочно-соревновательные нагрузки, более продолжительными были у них восстановительные паузы, нередко наблюдалось отсутствие психической свежести и желание интенсивно тренироваться, они чаще и продолжительнее болели. Невысокой была и оценка спортсменами этих групп своих субъективных ощущений.
Все это дает основание говорить о выраженном положительном эффекте БВМН «Литораль» и необходимости его применения в тренировочно-соревновательной деятельности биатлонистов.
В результате проведенного комплексного динамического исследования иммунного статуса высококвалифицированных биатлонистов выявлены характерные изменения иммунологических показателей в различные периоды годичного макроцикла. Обнаружено, что наиболее характерные отличия в иммунном статусе биатлонистов на протяжении всего макроцикла выявлены в восстановительном периоде. В этот период остается сниженной только поглотительная способность фагоцитов и повышенными уровни высоко- и низкомолекулярных ЦИК в сравнении с контрольной группой здоровых, не занимающихся спортом лиц. Все остальные изученные нами показатели неспецифического звена не отличались от значений группы контроля. Концентрации иммуноглобулинов всех исследованных классов были статистически достоверно выше в сравнении со здоровыми, не занимающимися спортом лицами. В клеточном звене уровни субпопуляций CD3+95+ и CD19+95+ значительно повышенные и превышающие физиологические нормы во все остальные периоды, в восстановительном находятся в диапазонах контрольной группы. Можно констатировать, что значения иммунологических показателей в восстановительный период являются их нормами для высококвалифицированных биатлонистов.
В целом в ходе макроцикла наблюдаемые нами изменения иммунного статуса спортсменов в периоды напряженных спортивных нагрузок характеризовались формированием иммунных дисфункций, которые можно рассматривать как начальные признаки общей дезадаптации организма спортсменов.
При однократной напряженной нагрузке (приближенной к соревновательной – кросс 50 км у биатлонистов-мужчин) еще более (в сравнении с изменениями иммунологических показателей у биатлонистов, наблюдаемых на протяжении макроцикла) ухудшаются показатели неспецифического звена иммунной системы (фагоцитарная и бактерицидная активность), увеличиваются уровни высоко- и низкомолекулярных ЦИК, снижается количество В-лимфоцитов (CD19+) и усиливаются процессы апоптоза (повышение CD19+95+ и CD3+95+).
На основании анализа исследований ученых в области спортивной иммунологии (по данным литературы) и собственных исследований нами выделены основные механизмы формирования иммунных нарушений у биатлонистов высших разрядов. Это: нарушение нейроэндокринной и цитокиновой регуляции, повышение процессов апоптоза, недостаточность иммунозначимых макро- и микронутриентов, а также хроническая интоксикация свинцом и инфицированность персистирующими герпесвирусами.
Учитывая преимущественно метаболический характер иммунных нарушений у высококвалифицированных спортсменов и специфику спортивной деятельности разработана и обоснована концепция избирательной нутриционной поддержки функционального состояния иммунной системы спортсменов-биатлонистов в периоды напряженных психофизических нагрузок.
ВЫВОДЫ
- У высококвалифицированных биатлонистов в процессе тренировочно-соревновательной деятельности наблюдаются изменения иммунологических показателей, характер и выраженность которых зависят от периода подготовки.
- В ходе тренировочно-соревновательного макроцикла в периоды наиболее напряженных психофизических нагрузок у биатлонистов высших разрядов формируются иммунные дисфункции, которые проявляются снижением бактерицидной активности фагоцитов, повышением уровней низкомолекулярных ЦИК, увеличением количества цитотоксических Т- лимфоцитов и активированных Т- и В-лимфоцитов - CD3+25+, CD3+95+, CD19+95+.
- Однократная напряженная нагрузка соревновательного характера в рамках тренировочно-соревновательного макроцикла у биатлонистов приводит к углублению иммунных нарушений и усилению процессов апоптоза.
- Иммунные нарушения у высококвалифицированных спортсменов имеют свои особенности для каждого вида спорта, что показал сравнительный анализ иммунного статуса биатлонистов и хоккеистов в подготовительный период тренировочно-соревновательной деятельности.
- Основными механизмами формирования иммунных дисфункций у спортсменов высокого класса являются нарушения эндокринной и цитокиновой регуляции иммунитета, усиление процессов апоптоза и дефицит иммунозначимых нутриентов.
- Изменения концентраций иммуноглобулинов (А, М, G) у высококвалифицированных спортсменов напрямую зависят от уровня напряженности спортивных нагрузок и связано, в том числе с обеспеченностью организма спортсмена белком.
- Характерным иммуносупрессивным фактором у биатлонистов является хроническая интоксикация свинцом.
- ППБЦ иммуноориентированной направленности оказывает иммуностимулирующее действие, усиливает антиоксидантную активность и повышает физическую работоспособность экспериментальных животных.
9. Дополнительная к основному рациону нутриционная поддержка высококвалифицированных биатлонистов ППБЦ иммуноориентированной направленности оказывает положительное влияние на иммунорегуляторные и иммуноэффекторные характеристики в периоды высоких тренировочно-соревновательных нагрузок и улучшает соревновательную результативность спортсменов.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
- Для эффективного контроля за состоянием иммунного статуса высококвалифицированных спортсменов на протяжении тренировочно-соревновательного макроцикла необходимо создание «иммунологического паспорта» для каждого вида спорта с учетом периода подготовки.
- Принимая во внимание наличие дополнительного (наряду со спортивной нагрузкой) иммуносупрессивного фактора у биатлонистов – повышенного содержания свинца в организме, целесообразно контролировать его уровень в крови и в волосах для своевременной коррекции.
3. Для профилактики нарушений функционального состояния иммунной системы и снижения иммунозависимых заболеваний у высококвалифицированных спортсменов целесообразно применение ППБЦ для повышения иммунологической резистентности в наиболее напряженные периоды тренировочно-соревновательной деятельности.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
- Шабанов П.Д. Трекрезан как метаболический активатор, обладающий свойствами метеоадаптогена, психоэнергизатора и иммуномодулятора / П.Д. Шабанов, В.П. Ганапольский, А.Б. Жумашева, А.А. Елистратов, Е.Г. Мокеева, Д.А. Кудлай // Вестн. Рос. воен.-мед. акад. – 2006. – № 1 (15). – С. 53-57.
- Цыган В.Н. Молекулярная медицина / В.Н. Цыган, А.М. Иванов, Т.А. Камилова, Е.Г. Мокеева // Вестн. Рос. воен.-мед. акад. – 2007. – № 2 (18). – С. 127-133.
- Ганапольский В.П. Метеоадаптогенные свойства ноотропных препаратов / В.П. Ганапольский, А.А. Елистратов, П.В. Александров, П.Д. Шабанов, Е.Г. Мокеева, Е.А. Митин, В.И. Круглов // Вестн. Рос. воен.-мед. акад. – 2007. – № 4 (20). – С. 61-66.
- Дергунов А.В. Нейроэндокринный статус у спортсменов в процессе высокогорной адаптации / А.В. Дергунов, А.Н. Идирисов, Е.Г. Мокеева // Медико-биологические и социально-психологические проблемы безопасности в чрезвычайных ситуациях. – 2008. – № 3. – С. 41-46.
- Мокеева Е.Г. О связи химического элементного статуса человека с его физиологическими и антропометрическими показателями / Е.Г. Мокеева, О.С. Нотов, А.В. Скальный // Вестн. Рос. воен.-мед. акад. – 2008. – № 4 (24). – С. 117-119.
- Панкова Н.Б. Изменение показателей сердечно-сосудистой системы и системы нейровегетативной регуляции на фоне индивидуальной коррекции элементного статуса человека / Н.Б. Панкова, Р.М. Дубовой, А.В. Скальный, М.Ю. Карганов, Е.Г. Мокеева // Вестн. восстановительной медицины. – 2008. – № 5а (28). – С. 50-53.
- Мокеева Е.Г. Иммунокоррекция у спортсменов / Е.Г. Мокеева, В.Н. Цыган, В.А. Таймазов, С.Е. Бакулев // Ученые записки университета им. П.Ф. Лесгафта. – 2006. – № 22. – С. 42-46.
- Мокеева Е.Г. Нейроэндокринные и иммунные компоненты синдрома хронической усталости / Е.Г. Мокеева, В.Н. Цыган, В.В. Соркин, В.М. Федосеев, Ф.А. Овсянников, Н.С. Котик, А.В. Цыган, А.Ф. Ким // Вестн. Рос. воен.-мед. акад. Приложение. – 2006. – № 1 (15). – С. 305-306.
- Цыган В.Н. Соотношение понятий предболезнь, здоровье, адаптация, болезнь / В.Н. Цыган, Е.Г. Мокеева, В.В. Соркин, Н.В. Цыган, В.М. Федосеев, Н.С. Котик, Ф.А. Овсянников // Вестн. Рос. воен.-мед. акад. Приложение. – 2006. – № 1 (15). – С. 311.
- Мокеева Е.Г. Метаболический профиль спортсмена / Е.Г. Мокеева, В.Н. Цыган, В.Н. Егоров, И.В. Пельцер // Вестн. Санкт-Петербургской медицинской академии им. И.И. Мечникова. Приложение. – 2007. – №2 (2). – С. 115-116.
- Мокеева Е.Г. Необходимость дополнительного иммуноориентированного питания для спортсменов / Е.Г. Мокеева, В.Н. Цыган, Т.А. Егорова // Вестн. Рос. воен.-мед. акад. Приложение. – 2007. – № 4 (20). – С. 60.
- Мишин В.Г. Иммунная составляющая спортивной адаптации / В.Г. Мишин, М.Е. Мешкова, В.Ю. Никитин, И.А. Сухина, Е.Г. Мокеева, Е.А. Малахова // Мед. иммунология. – 2009. – Т. 11, № 4-5. – С. 449-450.
- Цыган В.Н. Иммунореабилитация спортсменов / В.Н. Цыган, А.В. Степанов, Е.Г. Мокеева, И.В. Князькин, А.Ф. Ким, Э.К. Акперов. – СПб.: СпецЛит, 2005. – 63 с.
- Мокеева Е.Г. Средства восстановления в спортивной практике: учебно-методическое пособие. / Е.Г. Мокеева, В.А. Таймазов, В.Н. Цыган, Г.И. Мокеев – СПб.: Олимп, 2007. – 232 с.
- Цыган В.Н. Сравнение показателей основного обмена и кровообращения у спортсменов / В.Н. Цыган, Е.Г. Мокеева // Физическая культура, спорт, туризм: наука, образование, технологии: материалы Всерос. науч.-метод. конф. – Чайковский, 2004. – Ч. 1. – С. 89.
- Цыган В.Н. Перспективы применения биологически активных добавок к пище у спортсменов / В.Н. Цыган, О.Г. Шинкарева, В.Г. Мишин, Е.Г. Мокеева, М.И. Елисеева // Питание здорового и больного человека: материалы второй межрегиональной науч.-практ. конф. – СПб., 2004. – С. 201-202.
- Мишин В.Г. Белково-витаминные дисфункции и иммунитет у спортсменов / В.Г. Мишин, В.Н. Цыган, О.Г. Шинкарева, Е.Г. Мокеева, А.М. Сокурова // Питание здорового и больного человека: материалы второй межрегиональной науч.-практ. конф. – СПб., 2004. – С. 144-145.
- Мокеева Е.Г. Иммунокоррекция в спорте / Е.Г. Мокеева, В.Н. Цыган, В.В. Сперанский // Компенсаторно-приспособительные процессы: фундаментальные, экологические и клинические аспекты: материалы Всерос. конф. – Новосибирск, 2004. – С. 371-372.
- Цыган В.Н. Иммунокоррекция спортивной деятельности / В.Н. Цыган, Е.Г. Мокеева // Спорт и здоровье: материалы второго международного конгресса – СПб., 2005. – С. 314.
- Мокеева Е.Г. Питание, как важный компонент в адекватном снижении массы тела спортсмена / Е.Г. Мокеева // Питание здорового и больного человека: материалы четвертой межрегиональной науч.-практ. конф. – СПб., 2006. – С. 131-133.
- Цыган В.Н. О взаимосвязи рациона питания и спортивной специализации / В.Н. Цыган, В.А. Таймазов, Е.Г. Мокеева // Питание здорового и больного человека: материалы четвертой межрегиональной науч.-практ. конф. – СПб., 2006. – С. 212-214.
- Цыган В.Н. Необходимость иммунологического контроля высококвалифицированных спортсменов / В.Н. Цыган, В.А. Таймазов, Е.Г. Мокеева // Питание здорового и больного человека: материалы четвертой межрегиональной науч.-практ. конф. – СПб., 2006. – С. 211-212.
- Цыган В.Н. Витаминная недостаточность у спортсменов / В.Н. Цыган, В.Г. Мишин, Е.Г. Мокеева // Питание здорового и больного человека: материалы четвертой межрегиональной науч.-практ. конф. – СПб., 2006. – С. 208-209.
- Цыган В.Н. Дефицит белка и вторичная иммунная недостаточность у спортсменов / В.Н. Цыган, В.Г. Мишин, Е.Г. Мокеева // Питание здорового и больного человека: материалы четвертой межрегиональной науч.-практ. конф. – СПб., 2006. – С. 210-211.
- Цыган В.Н. Цитамины в коррекции синдрома иммунной дисфункции у спортсменов высшего мастерства / В.Н. Цыган, Е.Г. Мокеева, В.В. Соркин, В.М. Федосеев, Н.С. Котик, Ф.А. Овсянников // Terra Medica. – 2006. – № 3. – С. 24-28.
- Мишин В.Г. Роль белково-аминокислотных компонент в патогенезе иммунных дисфункций / В.Г. Мишин, В.А. Бубнов, В.Н. Цыган, Е.Г. Мокеева, Ю.А. Сухонос, В.В. Соркин, В.М. Федосеев, Ф.А. Овсянников, Н.С. Котик // Перспективы развития питания населения и военнослужащих: материалы Всерос. науч.-практ. конф. / под общ. ред. Ю.В. Лобзина – СПб: ВМедА, 2006. – С. 93-94.
- Мокеева Е.Г. Дисбаланс между питанием и физическими нагрузками – причина вторичных иммунодефицитов / Е.Г. Мокеева, В.Г. Мишин, В.А. Бубнов, В.Н. Цыган, Ю.А. Сухонос, В.В. Соркин, Ф.А. Овсянников, В.М. Федосеев // Перспективы развития питания населения и военнослужащих: материалы Всерос. науч.-практ. конф. / под общ. ред. Ю.В. Лобзина – СПб: ВМедА, 2006. – С. 95-96.
- Цыган В.Н. Концепция роли пептидов в нутрициологии и здоровье человека / В.Н. Цыган, М.М. Дьяконов, Е.Г. Мокеева // Перспективы развития питания населения и военнослужащих: материалы Всерос. науч.-практ. конф. / под общ. ред. Ю.В. Лобзина – СПб: ВМедА, 2006. – С. 180-181.
- Мокеева Е.Г. Фармакологическая иммунокоррекция в спорте / Е.Г. Мокеева, В.Н. Цыган, Г.И. Мокеев // Восток-Россия-Запад. Физическая культура и спорт, формирование здоровья и здоровьесберегающие технологии в системе образования: опыт, проблемы, исследования и перспективы: материалы международного симпозиума – Красноярск: РИО КрасГУ, 2006. – С. 137-140.
- Мокеева Е.Г. Особенности питания спортсменов / Е.Г. Мокеева, В.Н. Цыган // Средства восстановления в спортивной практике: материалы республиканской учебно-методической конф. – Уфа: УГАТУ, 2007. – С. 45-48.
- Мокеева Е.Г. Фармакология спорта / Е.Г. Мокеева, А.У. Киньябулатов, Н.В. Тютюкова // Средства восстановления в спортивной практике: материалы республиканской учебно-методической конф. – Уфа: УГАТУ, 2007. – С. 59-62.
- Мокеева Е.Г. Макро- и микроэлементы в патогенезе иммунных дисфункций / Е.Г. Мокеева, В.А. Бубнов, В.Н. Цыган, В.Г. Мишин // Человек, спорт, здоровье: материалы третьего международного конгресса – СПб., 2007. – С. 112.
- Козлов В.К. Иммуноактивные препараты в восстановлении и реабилитации спортсменов/ В.К. Козлов, Е.Г. Мокеева, В.Н. Цыган // Фармакология – практическому здравоохранению: материалы третьего съезда фармакологов России – СПб., 2007. – С. 1-1733-1-1734.
- Мокеева Е.Г. Основные составляющие питания спортсменов зимних видов спорта с преимущественным развитием выносливости / Е.Г. Мокеева, В.Н. Цыган // СпортМед – 2007: материалы международной науч. конф. – М., 2007. – С. 145-146.
- Мокеева Е.Г. Дополнительное иммуноориентированное питание в спорте / Е.Г. Мокеева, В.Н. Цыган, Т.А. Егорова // Питание и здоровье: материалы IX Всерос. конгресса диетологов и нутрициологов – М., 2007. – С. 62.
- Цыган В.Н. Особенности питания спортсменов зимних видов спорта с преимущественным развитием выносливости / В.Н. Цыган, Е.Г. Мокеева, Т.А. Егорова, И.В. Пельцер // Питание и здоровье: материалы IX Всерос. конгресса диетологов и нутрициологов – М., 2007. – С. 91.
- Цыган В.Н. Сравнительный анализ некоторых показателей иммунологического статуса хоккеистов-профессионалов / В.Н. Цыган, Е.Г. Мокеева, В.Г. Мишин, В.Ю. Никитин, Е.Д. Соколова, И.А. Сухина // Актуальные вопросы профилактической медицины: труды научно-исследовательского центра ВМедА им. С.М. Кирова. Вып. 2. – СПб.: ВМедА, 2008. – С. 46-56.
- Мокеева Е.Г. Иммунитет и питание спортсменов / Е.Г. Мокеева, В.Н. Цыган // Состояние и проблемы лечебного питания и основные направления его совершенствования в лечебных учреждениях МО РФ: материалы всеармейской науч.-практ. конф. – СПб.: ООО Изд-во «Семаргл», 2008. – С. 95.
- Цыган В.Н. Воздействие новой белково-витамино-минеральной смеси на иммунитет лабораторных животных в эксперименте / В.Н. Цыган, Е.Г. Мокеева, Т.А. Егорова // Состояние и проблемы лечебного питания и основные направления его совершенствования в лечебных учреждениях МО РФ: материалы всеармейской науч.-практ. конф. – СПб.: ООО Изд-во «Семаргл», 2008. – С. 102-103.
- Цыган В.Н. Возможные направления использования новой белково-витамино-минеральной смеси // В.Н. Цыган, Е.Г. Мокеева // Состояние и проблемы лечебного питания и основные направления его совершенствования в лечебных учреждениях МО РФ: материалы всеармейской науч.-практ. конф. – СПб.: ООО Изд-во «Семаргл», 2008. – С. 103-104.
- Михалев С.М. О рациональном питании хоккеистов / С.М. Михалев, Е.Г. Мокеева, Г.И. Мокеев, А.У. Киньябулатов, В.Ф. Усманов // Актуальные проблемы физической культуры, спорта и туризма: материалы международной науч.-практ. конф. – Уфа: УГАТУ, 2009. – С. 178-180.
- Мокеева Е.Г. Гормональный статус биатлонистов / Е.Г. Мокеева, В.Н. Цыган // Актуальные проблемы физической культуры, спорта и туризма: материалы международной науч.-практ. конф. – Уфа: УГАТУ, 2009. – С. 182.
- Мокеева Е.Г. Анализ заболеваемости биатлонистов за макроцикл / Е.Г. Мокеева, В.Н. Цыган // Актуальные проблемы физической культуры, спорта и туризма: материалы международной науч.-практ. конф. – Уфа: УГАТУ, 2009. – С. 181.
- Мокеева Е.Г. Отдельные рекомендации по рациональному питанию / Е.Г. Мокеева, А.У. Киньябулатов, С.М. Михалев, В.Ф. Усманов// Актуальные проблемы физической культуры, спорта и туризма: материалы международной науч.-практ. конф. – Уфа: УГАТУ, 2009. – С. 183.
- Цыган В.Н. Анализ инфицированности персистирующими вирусами высококвалифицированных спортсменов / В.Н. Цыган, Е.Г. Мокеева // Актуальные проблемы физической культуры, спорта и туризма: материалы международной науч.-практ. конф. – Уфа: УГАТУ, 2009. – С. 190-191.
- Мишин В.Г. Исследование цитокинового звена иммунной системы у профессиональных спортсменов / В.Г. Мишин, В.Ю. Никитин, И.А. Сухина, М.Е. Мешкова, Е.Г. Мокеева, А.М. Иванов, Е.А. Малахова // Человек, спорт, здоровье: материалы четвертого международного конгресса – СПб., 2009. – С. 35-36.
- Мокеева Е.Г. Макро- и микроэлементный статус высококвалифицированных биатлонистов / Е.Г. Мокеева, В.Н. Цыган // Образование учащейся молодежи в сфере физической культуры и спорта: материалы Всерос. науч.-практ. конф. – Бирск: Бирск. гос. соц.-пед. акад., 2009. – С. 54-56.
