Функциональное состояние системы перекисное окисление липидов – антиоксидантная защита у женщин с эндокринным бесплодием

На правах рукописи

Корнакова

Наталья Викторовна

Функциональное состояние системы «перекисное окисление липидов – антиоксидантная защита» у женщин с эндокринным бесплодием

14.00.16 – патологическая физиология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата биологических наук

Иркутск – 2008

Работа выполнена в ГУ «Научный центр медицинской экологии Восточно-Сибирского научного центра Сибирского отделения Российской академии медицинских наук»

Научные руководители:

доктор медицинских наук,

член-корреспондент РАМН,

профессор Колесникова Любовь Ильинична

доктор медицинских наук Шолохов Леонид Федорович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, Власов Борис Яковлевич

профессор

доктор медицинских наук, Корытов Леонид Иннокентьевич

профессор

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Сибирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию», г.Томск

Защита состоится «____» июня 2008 г. в _____ часов на заседании диссертационного совета Д.001.038.02 при ГУ «Научный центр медицинской экологии Восточно-Сибирского научного центра Сибирского отделения Российской академии медицинских наук» по адресу: 664003, г. Иркутск, ул. Тимирязева, 16.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ «Научный центр медицинской экологии Восточно-Сибирского научного центра Сибирского отделения Российской академии медицинских наук»

Автореферат разослан «_____» мая 2008 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета

доктор биологических наук Осипова Е.В.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

В последние годы в России увеличилось количество бесплодных браков, достигая 15%, а в некоторых регионах Сибири – 17,4% [Филиппов О.С., 1999; Кулаков В.И., Лопатина Т.В., 2005]. Исследования по эпидемиологической оценке женского бесплодия в Иркутской области показали, что его частота достигает 19,6% [Кузьменко Е.Т. и др., 2007]. Учитывая данные ВОЗ (1993), при частоте бесплодия 15% и выше, влияние его на демографические показатели значительно превышает таковое от невынашивания и перинатальных потерь.

Одной из ведущих причин бесплодия являются эндокринные нарушения, составляющие в структуре бесплодного брака до 30-40% [Филиппов О.С., Радионченко А.А., Болотова В.П. и др., 1997; Аншина М.Б., 2004; Назаренко Т.А., Дуринян Э.Р., Чечурова Т.Н. и др., 2005].

В настоящее время при изучении патогенетических механизмов различных нейроэндокринных заболеваний, в том числе гинекологических, наряду с исследованием гормонального статуса большое внимание уделяют оценке процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ). Это связано с тем, что изменение прооксидантно-антиоксидантного баланса может привести к развитию окислительного стресса [Дубинина Е.Е., 2001; Меньщикова Е.Б., Ланкин В.З., Зенков Н.К., 2006; Betteridge D.J., 2000], тем самым усугубляя нейроэндокринные нарушения при данных патологиях [Сутурина Л.В., Колесникова Л.И., 2001; Лабыгина А.В., 2004; Behrman H.R., Kodaman P.H., Preston S.L. et. al., 2001; Agarwal A., Allamaneni S.S., 2004; Yilmaz M. et al., 2005].

В связи с этим, не вызывает сомнения, что неспецифические механизмы реактивности организма при данных патологиях определяются и реализуются изменениями функционального состояния не только системы нейроэндокринной регуляции, но и процессов перекисного окисления липидов – антиоксидантной защиты.

Вместе с тем, до сих пор недостаточно четко определено в каких функциональных взаимоотношениях находятся гипофизарно-гонадальная-надпочечниковая система и процессы перекисного окисления липидов-антиоксидантной защиты (ПОЛ-АОЗ) у женщин с эндокринным бесплодием [Wang Y., Sharma R.K., Falcone T. et. al., 1997; Agarwal A., Gupta S., Sharma R.K., 2005]. Установление этого позволит разработать принципы патогенетически обоснованной коррекции нарушений в системе ПОЛ-АОЗ у женщин с различными формами эндокринного бесплодия.

Все вышеизложенное и определило основную цель работы, заключающуюся в установлении характера изменений липидного обмена, взаимоотношений гипофизарно-гонадальной-надпочечниковой системы и процессов перекисного окисления липидов – антиоксидантной защиты у женщин с различными формами эндокринного бесплодия.

Для реализации поставленной цели последовательно решались следующие задачи:

1. Оценить состояние липидного обмена у женщин с различными формами эндокринного бесплодия.

2. Определить характер изменений процессов перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты у пациенток с различными формами эндокринного бесплодия.

3. Установить взаимоотношения между показателями процессов перекисного окисления липидов – антиоксидантной защиты и гипофизарно-гонадальной-надпочечниковой системы у женщин с эндокринным бесплодием.

4. Разработать принципы патогенетически обоснованной коррекции нарушений процессов перекисного окисления липидов у женщин с различными формами эндокринного бесплодия.

Научная новизна

Новыми являются данные о характере изменения липидного обмена у женщин с различными формами эндокринного бесплодия, заключающиеся в дислипопротеидемии, ведущей к увеличению субстратного обеспечения процессов ПОЛ в группах пациенток с синдромом поликистозных яичников (СПКЯ), надпочечниковой гиперандрогенией, гиперпролактинемией.

Впервые, у женщин с различными формами эндокринного бесплодия установлены особенности течения процессов липопероксидации:

а) у пациенток с гиперпролактинемией выявлено повышение содержания субстратов с сопряженными двойными связями, диеновых конъюгатов, кетодиенов и сопряженных триенов;

б) у пациенток с синдромом поликистозных яичников повышено содержание субстратов с сопряженными двойными связями, кетодиенов и сопряженных триенов;

в) у пациенток с надпочечниковой гиперандрогенией повышено содержание субстратов с сопряженными двойными связями при неизменном уровне первичных и вторичных продуктов ПОЛ;

г) у пациенток с гипергонадотропным гипогонадизмом содержание субстратов и промежуточных продуктов ПОЛ оставалось на неизменном уровне.

Доказано, что общим у пациенток с различными формами эндокринного бесплодия является снижение концентрации в сыворотке крови малонового диальдегида.

Приоритетными являются данные, что у всех пациенток выявлено напряжение в системе антиоксидантной защиты (АОЗ), о чем свидетельствует высокий уровень общей антиокислительной активности сыворотки крови при увеличении содержания окисленного глутатиона и снижении концентраций -токоферола, ретинола, а у бесплодных с СПКЯ, надпочечниковой гиперандрогенией, гиперпролактинемией и аскорбата.

Устанвлено изменение взаимосвязей между показателями гипофизарно-гонадальной-надпочечниковой системы и процессов ПОЛ-АОЗ у женщин с различными формами эндокринного бесплодия, свидетельствующие о переходе функционирования этих систем на иной уровень.

Теоретическая и практическая значимость работы

Полученные данные расширили представление о характере изменений функционального состояния системы ПОЛ-АОЗ у женщин с эндокринным бесплодием.

Полученные результаты позволяют патогенетически обосновать использование антиоксидантов в коррекции нарушений процессов ПОЛ при проведении комплекса лечебных мероприятий у женщин с эндокринным бесплодием. Женщинам с бесплодием и гипергонадотропным гипогонадизмом рекомендуется назначение глутатионов, -токоферола и ретинола; пациенткам с СПКЯ, надпочечниковой гиперандрогенией и гиперпролактинемией помимо вышеперечисленных антиоксидантов рекомендуется дополнительное назначение витамина С.

Результаты исследования внедрены в учебные процессы кафедр нормальной физиологии, патологической физиологии, акушерства и гинекологии ГОУ ВПО «Иркутский государственный медицинский университет Федерального агенства по здравоохранению и социальному развитию», включены в работу отделения гинекологической эндокринологии ГУ «Научный центр медицинской экологии Восточно-Сибирского научного центра Сибирского отделения Российской академии медицинских наук».

Основные положения, выносимые на защиту

1. Одним из важных звеньев патогенеза эндокринного бесплодия у женщин наряду с нарушением функционирования гипофизарно-гонадальной-надпочечниковой системы, является дислипопротеидемия, дисбаланс в процессах перекисного окисления липидов-антиоксидантной защиты и их взаимоотношений.

2. Информативными показателями в оценке изменений гипофизарно-гонадальной-надпочечниковой системы и процессов перекисного окисления липидов-антиоксидантной защиты у женщин с бесплодием и синдромом поликистозных яичников являются лютеинизирующий гормон, холестерин липопротеидов очень низкой плотности, малоновый диальдегид, ретинол, аскорбат; с надпочечниковой гиперандрогенией – 17-ОН-прогестерон, тестостерон, триглицериды, супероксиддисмутаза, ретинол, восстановленный глутатион; с гиперпролактинемией – кортизол, пролактин, общая антиокислительная активность, ретинол, -токоферол.

3. Патогенетически обоснованным в коррекции нарушений процессов перекисного окисления липидов у женщин с бесплодием и гипергонадотропным гипогонадизмом является применение глутатионов, -токоферола и ретинола; а у пациенток с синдромом поликистозных яичников, надпочечниковой гиперандрогенией, гиперпролактинемией и витамина С.

Апробация работы

Материалы диссертации представлены и обсуждены:

- на ХIV Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2007);

- на межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых, посвященных 20-летию ВСНЦ СО РАМН «Актуальные вопросы современной фундаментальной и клинической медицины» (Иркутск, 2007);

- на третьей Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Фундаментальные аспекты компенсаторно-приспособительных процессов» (Новосибирск, 2007);

- на 13–м Всемирном конгрессе по гинекологической эндокринологии (Флоренция, 2008).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 12 печатных работ: в журналах, рекомендованных ВАК Минобразования и науки РФ, - 8, в 4 тезисах докладов на съездах и конференциях всероссийского и международного уровней.

Структура диссертации

Диссертация изложена на 117 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, главы результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов, списка литературы (131 отечественных и 67 иностранных источников). Текст диссертации иллюстрирован 6 таблицами, 34 рисунками в виде диаграмм и концептуальной схемы.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Для решения поставленных задач обследовано 255 пациенток с диагнозом бесплодие, находившихся на лечении в центре инновационной медицины ГУ «Научный центр медицинской экологии Восточно-Сибирского научного центра СО РАМН» (директор - член-корреспондент РАМН, профессор Л.И.Колесникова). В работе с больными соблюдались этические принципы, предъявляемые Хельсинкской Декларацией Всемирной медицинской ассоциации (World Medical Association Declaration of Helsinki (1964, 2000 ред.)). Среди обследованных больных у 63% женщин выявлено эндокринное бесплодие, у 37% - бесплодие, обусловленное другими причинами. У пациенток с эндокринным бесплодием в 56% случаев отмечены сочетанные формы данной патологии, в 44% - изолированные формы. Возраст пациенток с изолированными формами эндокринного бесплодия составил от 22 до 40 лет.

В соответствии с задачами исследования пациентки с изолированными формами эндокринного бесплодия были разделены на 4 группы в зависимости от формы заболевания: с синдромом поликистозных яичников – 11% (n=18); с гипергонадотропным гипогонадизмом – 7% (n=12); с надпочечниковой гиперандрогенией – 14% (n=22); с гиперпролактинемией –12% (n=19). По длительности бесплодия группы были сопоставимы между собой.

Контрольную группу составили 30 соматически здоровых женщин в возрасте от 18 до 34 лет.

Биохимические исследования

Проведение биохимических исследований осуществлялось в лаборатории патофизиологии репродукции ГУ «Научный центр медицинской экологии Восточно-Сибирского научного центра СО РАМН» (зав. лабораторией член-корреспондент РАМН, профессор Л.И.Колесникова). Забор крови у женщин с эндокринным бесплодием проводили из локтевой вены, натощак, с 8 до 9 часов утра в соответствии с общепринятыми требованиями. В качестве материала для биохимических исследований использовали сыворотку, плазму крови и гемолизат, приготовленный из эритроцитов.

На спектрофлюорофотометре Shimadzu RT=5000 (Япония) измеряли содержание малонового диальдегида (МДА, мкмоль/л) по методу В.Б. Гаврилова с соавт. (1987); измерение активности супероксиддисмутазы (СОД, усл. ед.) методом H.P. Misra, I.Fridovich (1972); определение концентраций -токоферола и ретинола (мкмоль/л) методом Р.Ч. Черняускене с соавт. (1984); уровни восстановленного и окисленного глутатиона (GSH, GSSG, мкмоль/л) методом P.Y. Hissin, R. Hilf (1976).

Спектрофотометрическими методами определяли содержание в сыворотке крови общих липидов (ОЛ, г/л) с помощью набора реагентов PLIVA-Lachema, Чешская Республика; общего холестерина (ОХС, ммоль/л), липопротеидов высокой плотности (ХСЛПВП, ммоль/л) и триглицеридов (ТГ, ммоль/л) с использованием коммерческих наборов Bio Systems (Испания). Измерения производили на биохимическом анализаторе BTS-330 (Испания). Содержание субстратов с сопряженными двойными связями (Дв.св.) регистрировали по методу И.А. Волчегорского с соавт. (1989). Диеновые коньюгаты (ДК), кетодиены и сопряженные триены (КД-СТ) определяли тем же методом, основанном на интенсивном поглощении конъюгированных диеновых структур гидроперекисей липидов в области 220 (Дв.св), 232 (ДК) и 278 (КД-СТ) нм. Содержание Дв.cв., КД-СТ, ДК выражали в усл. ед. и в мкмоль/л (ДК). Оценку общей антиокислительной активности крови (АОА, усл.ед.) проводили по методу Г.И. Клебанова с соавт. (1988). Определение аскорбиновой кислоты (мкмоль/л) проводили колориметрическим методом (Н.И. Портяная с соавт., 1990).

Гормональные исследования

Проведение гормональных исследований осуществлялось в лаборатории физиологии и патологии эндокринной системы ГУ «Научный центр медицинской экологии Восточно-Сибирского научного центра СО РАМН» (зав. лабораторией д.м.н. Л.Ф. Шолохов). Определение концентраций пролактина (ПРЛ), лютеинизирующего гормона (ЛГ), фолликулостимулирующего гормона (ФСГ) проводилось радиоиммунологическим методом с использованием наборов ООО «Диас» (Россия) и анализатора «Иммунотест». Иммуноферментным методом с использованием анализатора «Cobos» проводилось определение уровней кортизола (Корт), тестостерона (Тс) (наборы «Алкор Био», Россия), 17-ОН-прогестерона, дегидроэпиандростерон-сульфата (ДГЭА-С) (наборы «DRG ELISAS», USA). Концентрацию гормонов ПРЛ, ЛГ, ФСГ выражали в мЕД/мл, тестостерона, кортизола, 17-ОН-прогестерона - в нмоль/л, ДГЭА-С – в мкмоль/л.

Статистический анализ

Статистический анализ проводили с помощью современных статистических и прикладных программ различными методами параметрической и непараметрической статистики. Расчеты проведены на кафедре информатики и компьютерных технологий ГОУ ВПО «Иркутский Государственный институт усовершенствования врачей» (зав. кафедрой к. г.-м.н., доцент И.М. Михалевич) и в лаборатории системного анализа ГУ «Научный центр медицинской экологии Восточно-Сибирского научного центра СО РАМН» (зав. лабораторией д.б.н., профессор В.П. Ильин).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Исследование липидного обмена и процессов перекисного окисления липидов – антиоксидантной защиты у пациенток с эндокринным бесплодием

При рассмотрении показателей липидного обмена и процессов ПОЛ-АОЗ в группе женщин с эндокринным бесплодием нами была проведена оценка частоты встречаемости пациенток с тем или иным содержанием в крови субстратов, продуктов ПОЛ, компонентов системы АОЗ, а также уровнем общей АОА сыворотки крови. Результаты представлены в табл. 1.

У большинства пациенток с эндокринным бесплодием снижено

Таблица 1.

Частота встречаемости пациенток с эндокринным бесплодием с различным содержанием в крови субстратов, продуктов ПОЛ и общей АОА крови

показатель	довери- тельный интервал	выше дове- рительного интервала	соответствует доверитель- ному интервалу	ниже до- веритель- ного интервала	уровень значимос- ти по сравнению с контролем
ОЛ	6,40-7,15	19,72%	14,08%	66,20%	<0,05
ОХС	3,99-4,43	36,62%	21,13%	42,25%	>0,05
ХСЛПВП	1,38-1,58	12,68%	11,27%	76,06%	<0,05
ХСЛПНП	2,06-2,43	63,38%	19,72%	16,90%	<0,05
ХСЛПОНП	0,44-0,52	5,63%	1,41%	92,96%	<0,05
ТГ	0,96-1,07	5,63%	0,00%	94,37%	<0,05
КА	1,71-2,07	71,83%	16,90%	11,27%	<0,05
субстраты с Дв.Св.	1,63-1,90	71,83%	15,49%	12,68%	<0,05
ДК	1,11-1,37	39,44%	26,76%	33,80%	>0,05
КД-СТ	0,22-0,37	40,85%	29,58%	29,58%	>0,05
МДА	1,56-1,86	11,27%	5,63%	83,10%	<0,05
общая АОА	10,36-11,82	91,55%	4,23%	4,23%	<0,05
СОД	1,60-1,66	60,00%	2%	38%	>0,05
GSH	2,21-2,47	11%	29%	60%	<0,05
GSSG	1,67-1,85	72%	22%	6%	<0,05
-токоферол	10,82-11,76	20%	2%	78%	<0,05
ретинол	1,80-1,97	0%	0%	100%	<0,05
аскорбат	64,69-68,29	34%	3%	63%	<0,05

содержание в крови ХСЛПОНП, ТГ и повышено содержание ХСЛПНП, субстратов с сопряженными Дв.Св., а также коэффициент атерогенности (КА). Содержание первичных и вторичных продуктов ПОЛ у женщин с эндокринным бесплодием не отличается от контрольных значений, однако уровень МДА значимо снижен. В отношении системы АОЗ отмечено повышение уровня общей АОА сыворотки крови, которое происходит за счет снижения содержания в крови GSH, ретинола, -токоферола, аскорбата при накоплении GSSG.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что у женщин с эндокринным бесплодием развивается дислипопротеидемия и снижается интенсивность процессов ПОЛ.

Исследование состояния липидного обмена и процессов перекисного окисления липидов – антиоксидантной защиты у пациенток с различными формами эндокринного бесплодия

Результаты исследования состояния липидного обмена у пациенток в зависимости от формы эндокринного бесплодия представлены в табл.2.

В группе бесплодных женщин с СПКЯ по сравнению с группой контроля отмечено снижение в сыворотке крови концентраций ХСЛПВП в 1,2 раза (р<0,05), ХСЛПОНП в 1,7 раза (р<0,05) и ТГ в 1,6 раза (р<0,05). При этом увеличивается уровень ХСЛПНП в 1,3 раза (р<0,05) и повышается КА в 1,4 раза (р<0,05).

В сыворотке крови бесплодных женщин с гипергонадотропным гипогонадизмом отмечено снижение содержания ХСЛПВП в 1,2 раза (р<0,05), ХСЛПОНП в 2,4 раза (р<0,05) и ТГ в 2,3 раза (р<0,05) и увеличение содержания ХСЛПНП в 1,3 раза (р<0,05), а также повышение КА в 1,5 раза (р<0,05).

В группе бесплодных пациенток с надпочечниковой гиперандрогенией регистрировалось снижение содержания в сыворотке крови ОЛ в 1,2 раза (р<0,05), ХСЛПВП в 1,2 раза (р<0,05), ХСЛПОНП в 2,2 раза (р<0,05) и ТГ в

Таблица 2.

Показатели липидного спектра у женщин контрольной группы и пациенток с разными формами эндокринного бесплодия (M±)

показатель	Группа контроля n=30	бесплодие
		СПКЯ, n=18	гипергонадо тропный гипогонадизм, n=12	надпочечни ковая гиперандро гения, n=22	гиперпролактинемия, n=19
ОЛ, г/л	6,78±1,01	6,32±1,14	6,23±1,51	5,86±1,17*	5,74±1,42*
ТГ,ммоль/л	1,02±0,14	0,63±0,49*	0,44±0,20*	0,47±0,14*	0,56±0,21*
ОХС,ммоль/л	4,21±0,58	4,34±0,78	4,41±1,44	4,24±0,81	4,13±0,86
ХСЛПВП, ммоль/л	1,48±0,27	1,24±0,28*	1,19±0,43*	1,20±0,27*	1,18±0,33*
ХСЛПНП, ммоль/л	2,25±0,49	2,81±0,82*	2,81±0,49*	2,82±0,80*	2,71±0,87*
ХСЛПОНП, ммоль/л	0,48±0,10	0,29±0,22*	0,20±0,09*	0,22±0,10*	0,25±0,10*
КА	1,89±0,47	2,73±1,45*	2,87±0,89*	2,67±0,95*	2,73±1,17*

Примечание. * - при р < 0,05 по отношению к контролю

2,2 раза (р<0,05) при увеличении содержания ХСЛПНП в 1,3 раза (р<0,05) и повышении КА в 1,4 раза (р<0,05).

В группе бесплодных женщин с гиперпролактинемией выявлено снижение содержания ОЛ в 1,2 раза (р<0,05), ХСЛПВП в 1,3 раза (р<0,05), ХСЛПОНП в 1,9 раз (р<0,05) и ТГ в 1,8 раз (р<0,05). При этом увеличивается содержание ХСЛПНП в 1,2 раза (р<0,05) и, соответственно, возрастает КА в 1,4 раза (р<0,05).

Таким образом, проведенное нами исследование состояния липидного обмена у женщин с разными формами эндокринного бесплодия показало, что независимо от фактора бесплодия происходит повышение концентраций атерогенных и снижение уровня антиатерогенных липопротеидов, что свидетельствует о развитии дислипопротеидемии.

Далее нами были рассмотрены процессы ПОЛ-АОЗ у больных женщин в зависимости от фактора эндокринного бесплодия. Результаты представлены в табл.3 и табл. 4.

Таблица 3.

Содержание субстратов и продуктов ПОЛ в сыворотке крови женщин контрольной группы и пациенток с разными формами эндокринного бесплодия (M±)

показатель	Группа контроля, n=30	бесплодие
		СПКЯ, n=18	гиперго-надотропный гипогонадиз, n=12	надпочечниковая гиперандрогения, n=22	гиперпролактинемия, n=19
Субстраты с Дв. Св., усл. ед.	1,77±0,37	2,36±0,83*	2,10±0,79	2,21±0,57*	2,35±0,59*
ДК, мкмоль/л	1,24±0,35	1,40±0,41	1,19±0,40	1,23±0,60	1,58±0,61*
КД-СТ, усл. ед.	0,29±0,19	0,52±0,42*	0,30±0,16	0,28±0,28	0,61±0,36*
МДА, мкмоль/л	1,71±0,40	1,15±0,74*	0,94±0,63*	1,04±0,53*	0,95±0,47*

Примечание. * - при р < 0,05 по отношению к контролю

Таблица 4.

Общая АОА и содержание антиоксидантов в сыворотке крови женщин контрольной группы и пациенток с разными формами эндокринного бесплодия (M±)

показатель	Группа контроля, n=30	бесплодие
		СПКЯ, n=18	гипергонадо- тропный гипогонадизм, n=12	надпочечниковая гиперандрогения, n=22	Гиперпро лактинемия, n=19
АОА, усл. ед.	11,09±1,96	19,69±7,18*	20,65±7,20*	19,28±6,85*	20,57±4,56*
СОД, усл.ед.	1,63±0,07	1,76±0,17	1,65±0,19	1,59±0,26	1,66±0,22
GSH, мкмол/л	2,34±0,34	2,09±0,57	2,28±0,34	2,19±0,23	2,17±0,22
GSSG, мкмоль/л	1,76±0,24	2,05±0,27*	2,04±0,25*	1,99±0,23	1,94±0,25
-токоферол, мкмоль/л	11,29±1,26	9,01±4,54*	8,08±2,28*	8,98±4,30*	9,11±3,22*
ретинол, мкмоль/л	1,88±0,23	0,65±0,28*	0,60±0,17*	0,70±0,27*	0,65±0,20*
аскорбат, мкмоль/л	66,49±4,82	55,68±16,70*	68,48±13,48	54,52±17,21*	56,27±19,68*

Примечание. * - при р < 0,05 по отношению к контролю

У бесплодных женщин с СПКЯ повышено содержание в сыворотке крови субстратов с сопряженными Дв. Св. в 1,3 раза (р<0,05). При этом уровень первичных продуктов ПОЛ – ДК в обеих группах значимо не отличается, но происходит накопление КД-СТ, содержание которых увеличивается в 1,8 раз (р<0,05). В то же время, концентрация МДА у этих пациенток снижена в 1,5 раза (р<0,05). При рассмотрении компонентов системы АОЗ у пациенток данной группы нами отмечено увеличение содержания в сыворотке крови окисленного глутатиона в 1,2 раза (р<0,05) при снижении содержания -токоферола на 20% (р<0,05), ретинола на 65%

(р<0,05) и аскорбата на 16% (р<0,05). Уровень общей АОА сыворотки крови увеличен в 1,8 раза (р<0,05).

У бесплодных женщин с гипергонадотропным гипогонадизмом уровни субстратов с сопряженными Дв. Св., а также первичных и вторичных продуктов ПОЛ не отличались от контрольных значений. Вместе с этим у этих пациенток содержание в сыворотке крови МДА уменьшалось в 1,8 раза (р<0,05). При рассмотрении компонентов системы АОЗ, выявлено, что у пациенток данной группы увеличено содержание окисленного глутатиона в 1,2 раза (р<0,05) и снижено содержание -токоферола на 28% (р<0,05) и ретинола на 68% (р<0,05). При этом общая АОА сыворотки крови увеличена в 1,9 раз (р<0,05).

У пациенток с надпочечниковой гиперандрогенией повышено содержание в сыворотке крови субстратов с сопряженными Дв. Св. в 1,3 раза (р<0,05) при снижении уровня МДА в 1,6 раз (р<0,05). Уровни первичных и вторичных продуктов липопероксидации у этих пациенток соответствовали контрольным значениям. В отношении компонентов АОЗ в группе больных женщин отмечено снижение содержания в сыворотке крови: -токоферола на 20% (р<0,05), ретинола на 63% (р<0,05) и аскорбата на 18% (р<0,05). Общая АОА сыворотки крови этих пациенток повышена в 1,7 раз (р<0,05).

В группе пациенток с гиперпролактинемией возрастает содержание в крови субстратов с сопряженными Дв. Св. в 1,3 раза (р<0,05), ДК в 1,3 раза (р<0,05) и КД-СТ в 2,1 раза (р<0,05) при снижении концентрации МДА в 1,8 раз (р<0,05). В системе АОЗ отмечено: увеличение уровня общей АОА сыворотки крови в 1,9 раза (р<0,05), снижение содержания -токоферола на 19% (р<0,05), ретинола на 65% (р<0,05) и аскорбата на 15% (р<0,05).

На основе вышеизложенного доказано, что у женщин с разными формами эндокринного бесплодия имеются значительные изменения процессов ПОЛ, более выраженные у пациенток с гиперпролактинемией. В ситеме АОЗ отмечено возрастание уровня общей АОА сыворотки крови за счет повышенной активности неферментативного звена.

Исследование состояния гипофизарно-гонадальной и гипофизарно-надпочечниковой систем у женщин контрольной группы и пациенток с эндокринным бесплодием

Результаты исследования, характеризующие состояние гипофизарно-гонадной и гипофизарно-надпочечниковой систем у пациенток с разными формами эндокринного бесплодия представлены в табл. 5.

Таблица 5.

Содержание гормонов в сыворотке крови обследованных женщин (M±)

Гормональный показатель	Контроль, n=30	бесплодие
		СПКЯ, n=18	гипергонадотропный гипогонадизм, n=12	надпочечниковая гиперандрогения, n=22	гипер- пролактинемия, n=19
ПРЛ, мЕД/мл	307,63±112,49	354,17±127,79	448,50±185,94*	357,09±102,19	905,16±324,00*
ЛГ, мЕД/мл	3,35±1,22	12,25±4,95*	16,49±14,92*	3,87±1,37	3,93±2,06
ФСГ, мЕД/мл	4,57±2,45	5,17±2,19	27,68±22,44*	5,93±1,90*	5,13±1,87
Тс, нмоль/л	2,11±0,82	4,46±0,98*	2,53±1,22	2,58±0,98	2,58±1,04
Корт, нмоль/л	455,5±114,50	465,44±214,44	621,83±310,58*	459,68±163,35	605,68±173,53*
17-ОН-пр, нмоль/л	1,62±0,41	1,61±0,74	1,40±0,58	3,31±0,71*	1,57±0,73

Примечание. * - при р < 0,05 по отношению к контролю

В сыворотке крови бесплодных женщин с СПКЯ увеличены концентрации ЛГ в 3,7 раза (р<0,05) и тестостерона в 2,1 раза (р<0,05).

Гормональный статус пациенток с бесплодием и гипергонадотропным гипогонадизмом характеризуется повышением в сыворотке крови концентраций ЛГ в 4,9 раза (р<0,05), ФСГ в 6,1 раза (р<0,05), пролактина в 1,5 раза (р<0,05) и кортизола в 1,4 раза (р<0,05).

В сыворотке крови бесплодных женщин с надпочечниковой гиперандрогенией повышены концентрации 17-ОН-прогестерона в 2 раза (р<0,05) и ФСГ в 1,3 раза (р<0,05). Концентрации ДГЭА-С соответствовали нормативным значениям (4,89±0,49 мкмоль/л).

Группа пациенток с бесплодием и гиперпролактинемией характеризуется повышенными концентрациями в сыворотке крови пролактина в 2,9 раза (р<0,05) и кортизола в 1,3 раза (р<0,05).

Таким образом, у женщин с эндокринным бесплодием установлены закономерные изменения гормонального статуса, характерные для каждой формы данного патологического состояния.

Сравнительный анализ изменения функциональных связей показателей процессов ПОЛ-АОЗ и уровнем гормонов у женщин контрольной группы и пациенток с разными формами эндокринного бесплодия

Для анализа внутри- и межсистемных отношений в группах здоровых женщин и пациенток с разными формами эндокринного бесплодия был проведен корреляционный анализ. Проведенные исследования показали, что в группах пациенток с разными формами эндокринного бесплодия межсистемные взаимосвязи претерпевают значительные изменения (табл.6).

Так, в группе бесплодных пациенток с СПКЯ появляются новые корреляционные связи, большинство из которых имеет -токоферол (с ФСГ (r=+0,53, p<0,025); с Прл (r=+0,55, p<0,017); с ДК (r=+0,56, p<0,015); с КД-СТ (r=+0,70, p<0,001); с GSSG (r=+0,53; р<0,025)).

Таблица 6.

Корреляционные взаимосвязи между показателями гипофизарно-гонадальной-надпочечниковой системы и ПОЛ-АОЗ у женщин контрольной группы и пациенток с разными формами эндокринного бесплодия

корреляционная связь	контроль	бесплодие
		СПКЯ	гипергонадо-тропный гипогонадизм	надпочечни-ковая гиперандро-гения	гиперпролак-тинемия
Дв.Св. – ДК	+0,77	+0,69	+0,82		+0,84
Дв.Св. – КД-СТ	+0,57				+0,56
ДК – КД-СТ	+0,67		+0,62	+0,65	+0,65
МДА – ФСГ	-0,63
Дв.Св. – Корт		+0,76
-ток. – ДК		+0,56
-ток. – КД-СТ		+0,70
-ток. – GSSG		+0,53
-ток. – ПРЛ		+0,55
-ток. – ФСГ		+0,53
КД-СТ – GSH		+0,55
GSSG– ретинол		+0,52
GSSG – ПРЛ		+0,60
ДК – ретинол			+0,65
Ретинол–ДГЭАС			-0,64
GSH – Корт			-0,63
СОД – 17-ОН			-0,66
АОА – 17-ОН			-0,69
КД-СТ – МДА				+0,63
Дв.Св. – GSSG				+0,54
GSSG – ФСГ				-0,61
СОД – Тс				+0,50
КД-СТ – ФСГ					+0,56
GSSG – 17-ОН					+0,56
СОД - GSSG					+0,59

В группе бесплодных женщин с гипергонадотропным гипогонадизмом отмечены отрицательные корреляционные взаимосвязи между компонентами АОЗ и показателями гипоталамо-гипофизарно-

надпочечниковой системы: АОА – 17-ОН-прогестерон (r= –0,69, p<0,012), СОД – 17-ОН-прогестерон (r= –0,66, p<0,019), ретинол – ДГЭАС (r= –0,64, p<0,026) и GSH – кортизол (r= –0,63, p<0,027), а также между ДК и ретинолом (r= +0,65, p<0,022).

В группе бесплодных пациенток с надпочечниковой гиперандрогенией увеличение концентрации в крови Тс сопровождается повышением активности СОД, на что указывает взаимосвязь между этими показателями (r= +0,50, p<0,018). Отмечены разнонаправленные связи GSSG с ФСГ (r= –0,61, p<0,002) и Дв.Св (r= +0,54, p<0,010), КД-СТ – МДА (r= +0,63, p<0,002).

В группе бесплодных женщин с гиперпролактинемией отмечено появление взаимосвязей между ФСГ и КД-СТ (r= +0,56, p<0,012), 17-ОН-прогестерон – аскорбат (r= +0,56, p<0,013), СОД – GSSG (r= +0,59, p<0,008).

Таким образом, в группах пациенток с эндокринным бесплодием происходит потеря межсистемных взаимосвязей между показателями гипофизарно-гонадальной-надпочечниковой системы и процессов ПОЛ-АОЗ, характерных для группы контроля и возникновение дополнительных корреляционных связей, свидетельствующих о переходе функционирования этих систем на иной уровень.

Для определения наиболее значимых показателей гипофизарно-гонадальной-надпочечниковой системы и процессов ПОЛ-АОЗ у пациенток с разными формами эндокринного бесплодия был проведен дискриминантный анализ. Его результаты представлены в табл.7.

Информативными признаками для группы бесплодных женщин с СПКЯ являются ЛГ (F=25,9; Р=0,000), ретинол (F=74,0; Р=0,000), аскорбат (F=4,6; Р=0,037), МДА (F=3,9; Р=0,053) и ХСЛПОНП (F=7,7; Р=0,008).

Уравнение линейной классификационной функции (для отнесения обследуемой женщины к группе бесплодных с СПКЯ или к группе контроля) имеет следующий вид:

F1 = –11,71 + 10,62*А – 6,26*ЛГ + 2,36*ХСЛПОНП + 2,23*С + 1,80*МДА

Таблица 7.

Наиболее информативные показатели гипофизарно-гонадальной-надпочечниковой системы и процессов ПОЛ-АОЗ у пациенток с разными формами эндокринного бесплодия в сравнении с группой контроля

Сравниваемые группы	Показатели гипофизарно-гонадальной-надпочечниковой системы и ПОЛ-АОЗ
Бесплодие с СПКЯ в сравнении с контролем	ЛГ, ХСЛПОНП, МДА,ретинол, аскорбат
Бесплодие с надпочечниковой гиперандрогенией в сравнении с контролем	17-ОН-прогестерон, тестостерон, ТГ, СОД, ретинол, GSH
Бесплодие с гиперпролактинемией в сравнении с контролем	Пролактин, кортизол, общая АОА, ретинол, -токоферол

F2 = –5,10 – 5,14*А + 5,92*ЛГ – 1,15*ХСЛПОНП – 1,37*С – 0,87*МДА

Информативными признаками для группы бесплодных женщин с надпочечниковой гиперандрогенией являются 17-ОН-прогестерон (F=19,1; Р=0,000), тестостерон (F=3,4; Р=0,071), ретинол (F=39,4; Р=0,000), СОД (F=10,6; Р=0,002), GSH (F=5,9; Р=0,019) и ТГ (F=39,4; Р=0,000).

Уравнение линейной классификационной функции (для отнесения обследуемой женщины к группе бесплодных с надпочечниковой гиперандрогенией или к группе контроля) имеет следующий вид:

F1 = – 14,81 + 11,62*А + 9,70*ТГ – 3,29*17-ОН-прогестерон + 3,14*СОД + 2,82*GSH – 1,76*Тс

F2 = – 9,40 – 5,57*А – 7,68*ТГ + 5,90*17-ОН-прогестерон – 2,20*СОД – 1,36*GSH + 1,29*Тс

Информативными признаками для группы бесплодных женщин с гиперпролактинемией являются пролактин (F=5,3; Р=0,027), кортизол (F=4,9; Р=0,033), ретинол (F=107,0; Р=0,000), общая АОА (F=18,5; Р=0,000) и -токоферол (F=6,1; Р=0,018).

Уравнение линейной классификационной функции (для отнесения обследуемой женщины к группе бесплодных с гиперпролактинемией или к группе контроля) имеет следующий вид:

F1 = – 14,68 + 13,91*А – 6,79*АОА – 2,07*Корт + 3,04*Е – 1,12*ПРЛ

F2 = – 5,42 – 6,79*А + 3,33*АОА + 1,90*Корт – 1,92*Е + 1,52*ПРЛ

Таким образом, по результатам дискриминантного анализа для каждой группы женщин с эндокринным бесплодием характерен определенный набор показателей систем гипофизарно-гонадальной-надпочечниковой и ПОЛ-АОЗ, который позволяет четко дифференцировать их либо в группу больных женщин, либо в контрольную группу.

Итак, на основании вышеизложенного была сформулирована концептуальная схема изменения состояния липидного обмена, активности гипофизарно-гонадальной-надпочечниковой системы и процессов ПОЛ-АОЗ у женщин с различными формами эндокринного бесплодия, отражающая некоторые стороны патогенеза данного патологического состояния.

Установлена активизация гипофизарно-гонадальной-надпочечниковой системы, заключающаяся в повышении характерных для каждой формы эндокринного бесплодия гормонов. Независимо от фактора эндокринного бесплодия отмечаются нарушения в состоянии липидного обмена, а именно снижение содержания в крови ХСЛПВП, ХСЛПОНП, ТГ и повышение содержания ХСЛПНП при увеличении КА. При изучении процессов липопероксидации отмечено, что у женщин с разными формами эндокринного бесплодия процессы ПОЛ имеют значительные различия, которые наиболее выражены у пациенток с гиперпролактинемией. При оценке состояния системы АОЗ отмечено повышение уровня общей АОА сыворотки крови у всех больных, при повышенном содержании в крови окисленной формы глутатиона и сниженном содержании -токоферола и ретинола. Низкий уровень аскорбата выявлен во всех группах больных, кроме пациенток с гипергонадотропным гипогонадизмом. В связи с чем предлагается патогенетически обоснованное назначение различного комплекса антиоксидантов для коррекции нарушений процессов ПОЛ у женщин с разными формами эндокринного бесплодия.

Женщины с эндокринным бесплодием

Рис. 1. Концептуальная схема изменения состояния липидного обмена, активности гипофизарно-гонадальной-надпочечниковой систем и процессов ПОЛ-АОЗ у женщин с различными формами эндокринного бесплодия

ВЫВОДЫ

1. У пациенток с эндокринным бесплодием установлена дислипопротеидемия, которая характеризовалась повышением содержания в сыворотке крови ХСЛПНП в 1,2 раза, снижением содержания ХСЛПВП, ХСЛПОНП, ТГ в 1,2, 2 и 2 раза соответственно и увеличением коэффициента атерогенности в 1,5 раза.
2. У женщин с бесплодием и гиперпролактинемией в сыворотке крови повышено содержание субстратов с сопряженными Дв.Св. в 1,3 раза, ДК в 1,3 раза, КД-СТ в 2,1 раза и снижен уровень МДА в 1,8 раза.
3. У пациенток с бесплодием и синдромом поликистозных яичников в сыворотке крови увеличено содержание субстратов с сопряженными Дв.Св. в 1,3 раза, КД-СТ в 1,8 раз и снижен уровень МДА в 1,5 раза.
4. У женщин с бесплодием и надпочечниковой гиперандрогенией отмечено повышение содержания субстратов с сопряженными Дв.Св. в 1,3 раза при неизменном уровне первичных и вторичных продуктов ПОЛ и снижение уровня МДА в 1,6 раза.
5. У пациенток с бесплодием и гипергонадотропном гипогонадизмом содержание субстратов и промежуточных продуктов ПОЛ оставалось на неизменном уровне при снижении содержания МДА в 1,8 раза.
6. У всех пациенток с эндокринным бесплодием высокий уровень общей АОА сыворотки крови в 1,8 раза сохранялся за счет повышенного расхода -токоферола в 1,3 раза, ретинола в 2,9 раза, а также аскорбата в 1,2 раза во всех группах больных женщин за исключением пациенток с гипергонадотропным гипогонадизмом.
7. В группах пациенток с различными формами эндокринного бесплодия установлено увеличение количества корреляционных взаимосвязей между показателями гипофизарно-гонадальной-надпочечниковой системы, АОЗ и продуктами ПОЛ, свидетельствующие о переходе функционирования этих систем на иной уровень.

Список научных работ, опубликованных по теме диссертации

1. Состояние репродуктивного здоровья, процессов перекисного окисления липидов и антиоксидантной системы у подростков, проживающих в крупном промышленном центре Ангарск / Л.И. Колесникова, Л.В. Сутурина, А.В. Лабыгина и др. // Бюл. ВСНЦ СО РАМН. – 2005. - №5(43). – С. 42-47.
2. Особенности становления репродуктивной функции и состояние антиоксидантных систем у девушек, родители которых работают на химическом производстве / Л.И. Колесникова, Л.В. Сутурина, О.Я. Лещенко и др. // Бюл. ВСНЦ СО РАМН. – 2006. - №1(47). – С. 145.
3. Особенности процессов перекисного окисления липидов – антиоксидантной защиты у женщин с эндометриоз-ассоциированным бесплодием / Л.И. Колесникова, В.А. Петрова, А.В. Лабыгина и др. // Сибирь-Восток. – 2006. - №12. – С. 10-12.
4. Особенности процессов перекисного окисления липидов – антиоксидантной защиты у женщин с бесплодием гиперандрогенного генеза / Н.В. Корнакова, М.А. Даренская, А.В. Лабыгина и др. // Бюл. ВСНЦ СО РАМН. – 2007. - №1(53). – С. 75-77.
5. Характеристика процессов перекисного окисления липидов – антиоксидантной защиты у женщин с бесплодием на фоне гиперпролактинемии / Н.В. Корнакова, Л.И. Колесникова, А.В. Лабыгина и др. // Бюл. ВСНЦ СО РАМН. – 2007. - №1(53). – С. 78-80.
6. Корнакова Н.В. Процессы свободно-радикального окисления и оценка системы антиоксидантной защиты у женщин с различными факторами эндокринного бесплодия / Н.В. Корнакова, А.В. Лабыгина // Бюл. ВСНЦ СО РАМН. – 2007. - №1(53). – С. 147-148.
7. Особенности свободно-радикального окисления и антиоксидантной защиты у женщин с диффузной мастопатией / Л.А. Гребенкина, Л.И. Колесникова, Е.В. Гальченко и др. // XII Российский национальный конгресс «Человек и лекарство», Москва, 16-20 апреля 2007. – С.82.
8. Обеспеченность -токоферолом женщин с эндокринным бесплодием / Л.И. Колесникова, В.А. Петрова, Н.В. Корнакова и др. // XII Российский национальный конгресс «Человек и лекарство», Москва, 16-20 апреля 2007. – С.118.
9. Гормонально-метаболические показатели в компенсаторно-приспособительных реакциях у женщин с бесплодием на фоне надпочечниковой гиперандрогении / Н.В. Корнакова, В.А. Петрова, Л.Ф. Шолохов и др. // Сибирский консилиум. – 2007. - №7(62). – С.113-114.
10. Пероксидация липидов и система антиоксидантной защиты у женщин с эндокринными факторами бесплодия / Л.И. Колесникова, В.А. Петрова, Н.В. Корнакова и др. // Журнал акушерства и женских болезней. – 2008. – Вып. 1. – С. 26-31.
11. Состояние гормонально-метаболических процессов у женщин с поликистозом яичников и бесплодием / Л.И. Колесникова, Н.В. Корнакова, А.В. Лабыгина и др. // Бюл. СО РАМН. – 2008. - №1(129). – С. 21-25.
12. Processes of lipid peroxidation and antioxidant defense in women with some endocrine factors of sterility / L. Suturina, L. Kolesnikova, V. Petrova et al. // Presented at the 13th World Congress of Gynecological Endocrinology. – Florence, Italia, February 28 – March 2, 2008. – P. 185-186.

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

АОА - антиокислительная активность

АОЗ - антиоксидантная защита

Дв.Cв. - двойные связи

ДГЭА-С - дегидроэпиандростерон-сульфат

ДК - диеновые коньюгаты

КА - коэффициент атерогенности

КД-СТ - кетодиены и сопряженные триены

Корт - кортизол

ЛГ - лютеинизирующий гормон

МДА - малоновый диальдегид

ОЛ - общие липиды

ОХС - общий холестерин

ПОЛ - перекисное окисление липидов

ПРЛ - пролактин

СОД - супероксиддисмутаза

СПКЯ - синдром поликистозных яичников

ТГ - триглицериды

Тс - тестостерон

GSH - глутатион восстановленный

GSSG - глутатион окисленный

ФСГ - фолликулостимулирующий гормон

ХСЛПВП - холестерин липопротеидов высокой плотности

ХСЛПНП - холестерин липопротеидов низкой плотности

ХСЛПОНП- холестерин липопротеидов очень низкой плотности