Прогнозирование тяжести клинического течения острых гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области у детей с применением генетических маркеров

На правах рукописи

Викторов Сергей Витальевич

Прогнозирование тяжести клинического течения острых гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области у детей с применением генетических маркеров

14.01.14 - стоматология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

УФА-2012

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Научный руководитель:	доктор медицинских наук, профессор Чуйкин Сергей Васильевич
Научный консультант:	доктор биологических наук, профессор Хуснутдинова Эльза Камилевна
Официальные оппоненты:	Мирсаева Фания Зартдиновна доктор медицинских наук, профессор, ГБОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития России, кафедра хирургической стоматологии, заведующая кафедрой Топольницкий Орест Зиновьевич доктор медицинских наук, профессор ГБОУ ВПО «Московский государственный медико-стоматологический университет» Минздравсоцразвития России, кафедра хирургической стоматологии и челюстно-лицевой хирургии, заведующий кафедрой

Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Казанский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (420012, г. Казань, ул. Бутлерова, 49).

Защита диссертации состоится 25 июня 2012 г. в _______ часов на заседании Диссертационого совета Д 208.006.06 при Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации по адресу: 450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации по адресу: 450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3.

Автореферат разослан «____»____________ 2012 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета Валеев Марат Мазгарович

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Прогнозирование гнойно-воспалительных процессов челюстно-лицевой области является одной из актуальных проблем стоматологии вследствие высокой распространенности этих заболеваний, тяжести клинического течения и возможностью развития опасных для жизни осложнений. По оценкам ряда отечественных и зарубежных авторов удельный вес больных с острыми гнойно-воспалительными заболеваниями челюстно-лицевой области (ЧЛО) достигает 60% и более среди пациентов отделений челюстно-лицевой хирургии и имеет тенденцию к росту (Шаргородский А.Г., 2002; Рогинский В.В., 2004; Агапов с соавт., 2006; Козлов В.А., 2006; Робустова Т.Г. 2006; Харитонов Ю.М. и Громов А.П., 2011 и др.).

В последние годы отмечается увеличение числа больных с гнойно-воспалительными заболеваниями, которые часто приобретают тяжелое течение и сопровождаются опасными для жизни осложнениями (Робустова Т.Г., 2006; Коротких Н.Г. и Тобоев Г.В., 2010). Подобная тенденция особенно отчетливо прослеживается в экологически неблагополучных промышленных регионах, поскольку известно, что загрязнение окружающей среды и увеличение антропогенной нагрузки может приводить к выраженному угнетению функций иммунной системы организма человека и более высокой заболеваемости (Тобоев Г.В. и Коротких Н.Г., 2009; Чуйкин С.В., 2004; 2011).

Особую настороженность, в этой связи, вызывает проблема острых гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области у детей, для которых характерна их высокая распространенность и относительно тяжелое клиническое течение. Это связано с возрастными физиологическими и анатомическими особенностями детского организма, в частности, незрелостью центральной нервной системы, иммунной и нейро-эндокринной систем, а так же с особенностями кровоснабжения челюстно-лицевой области, анатомии мягких тканей и костей лицевого скелета (Агапов В.С. и соавт., 2006; Калмыкова А.С., 2011).

Учитывая, что в прогрессировании воспаления существенную роль играют изменения иммунологического статуса и генетический фон, выявление генетических маркеров, ассоциированных с острыми гнойно-воспалительными заболеваниями челюстно-лицевой области у детей является актуальной научно-практической задачей, решение которой направлено на прогнозирование тяжести клинического течения и исходов данной патологии. Разработка и внедрение в стоматологическую практику новых способов прогнозирования позволит своевременно назначать больным адекватную терапию, что приведет к более благоприятному клиническому течению заболеваний, сокращению продолжительности пребывания больного в стационаре, снижению частоты развития осложнений.

Цель работы: прогнозирование тяжести клинического течения острых гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области у детей с применением генетических маркеров.

Задачи исследования

1. Изучить частоту острых гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области у детей.
2. Провести анализ частоты нозологических форм острых гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области у детей в зависимости от возраста.
3. Оценить влияние неблагоприятных экологических факторов окружающей среды на частоту острых гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области у детей в регионах с нефтехимической промышленностью.
4. Провести сравнительный анализ распределения частот аллелей, генотипов и гаплотипов полиморфных локусов генов цитокинов TNFА (-308G>A), LTA (252A>G), IL1RN(VNTR), IL8(-251T>A), IL10(-627C>A) у детей с тяжелым клиническим течением острых гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области и в контрольной группе.
5. Разработать алгоритм прогнозирования тяжести клинического течения острых гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области у детей с применением клинико-лабораторных и генетических маркеров.

Научная новизна

Впервые изучена частота нозологических форм острых гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области у детей в разных возрастных группах.

Впервые установлена взаимосвязь между неблагоприятными экологическими факторами окружающей среды с частотой развития острых гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области у детей в регионе с нефтехимической промышленностью.

Выявлены генетические маркеры полиморфных локусов генов цитокинов (генотип GG полиморфного локуса TNFА(-308G>A), генотип GG полиморфного локуса LTA (252A>G), гаплотип A-A по сцепленным локусам TNFА(-308G>A) и LTA (252A>G), генотип ТТ полиморфного локуса IL8 (-251Т>A)), ассоциированные с повышенным риском развития тяжелого клинического течения острых гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области у детей.

Разработан алгоритм прогнозирования тяжести клинического течения острых гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области у детей заключающийся в том, что при выявлении у больного генетических маркеров полиморфных локусов генов цитокинов TNFА(-308G>A), LTA(252A>G) и IL8(-251Т>A) прогнозируется тяжелое клиническое течение заболеваний.

Практическая значимость

Результаты исследования могут быть применены в клинической практике отделений челюстно-лицевой хирургии для прогнозирования тяжести клинического течения острых гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области у детей. Это позволит своевременно назначать адекватное лечение, приведет к более благоприятному течению заболевания и предупредит развитие тяжелых осложнений. Полученные результаты могут быть внедрены в учебный процесс для обучения студентов медицинских ВУЗов и курсантов института последипломного образования врачей.

Положения, выносимые на защиту

1. Установлена особенность частоты различных нозологических форм острых гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области у детей в разных возрастных группах.
2. Выявлена взаимосвязь между неблагоприятными экологическими факторами окружающей среды с частотой развития острых гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области у детей в регионе с нефтехимической промышленностью.
3. Выявлены генетические маркеры повышенного риска развития тяжелого клинического течения острых гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области у детей и изучена взаимосвязь генетических маркеров с различными нозологическими формами заболеваний.
4. Разработан алгоритм прогнозирования тяжести клинического течения острых гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области у детей заключающийся в том, что при выявлении у больного генетических маркеров полиморфных локусов генов цитокинов TNFА(-308G>A), LTA(252A>G) и IL8(-251Т>A) прогнозируется тяжелое клиническое течение заболеваний.

Внедрение результатов исследования в практику

Полученные результаты исследования используются в отделении челюстно-лицевой хирургии Республиканской детской клинической больницы г. Уфы, в больнице скорой медицинской помощи № 22 г. Уфы. Результаты исследования внедрены в образовательный процесс на кафедрах биологии, стоматологии детского возраста и ортодонтии ГБОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития России.

Апробация работы.

Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на заседании диссертационного совета Д 208.006.06 при ГБОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития России (Уфа, 2012); совместном заседании проблемной комиссии стоматологического факультета и межкафедральном заседании кафедр стоматологического профиля БГМУ, лаборатории молекулярной генетики человека Института биохимии и генетики УНЦ РАН (Уфа, 2012); заседании кафедры стоматологии детского возраста и ортодонтии ГБОУ ВПО БГМУ (Уфа, 2012); XII Международной конференции и III Международной онкологической конференции (Израиль, 2008), ХIV Международной научной конференции «Здоровье семьи XXI» (Италия, 2010), Республиканской конференции стоматологов «Профилактика основных стоматологических заболеваний» (Уфа, 2010; 2011), ежегодной Российской научной конференции студентов и молодых ученых «Вопросы теоретической и практической медицины» (Уфа, 2007-2012).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 8 печатных работ, в том числе 3 статьи в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Объем и структура диссертации

Диссертация построена по традиционному плану, изложена на 144 страницах машинописного текста, проиллюстрирована 13 таблицами и 33 рисунками, включает такие разделы, как введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты исследования и обсуждение, заключение, выводы и список литературы. В работе цитируется 216 литературных источников, в том числе 140 отечественных и 76 зарубежных авторов.

содержание работы

Материалы и методы исследования

С целью изучения распространенности острых гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области (ЧЛО) у детей и характеристики нозологических форм в разных возрастных группах был проведен ретроспективный анализ историй болезней 4717 пациентов, находившихся на лечении в отделении челюстно-лицевой хирургии Республиканской детской клинической больницы (главный врач Ахметшин Р.З., зав. отделением проф. Давлетшин Н.А.) за десятилетний период - с 2001 г. по 2010 г. с диагнозами абсцесс, флегмона, одонтогенный периостит, одонтогенный остеомиелит и лимфаденит ЧЛО. Диагноз устанавливался квалифицированными врачами отделения в соответствии с МКБ-10 на основании данных клинического обследования, результатов общего и биохимического анализов крови, дополнительных методов исследования. Критерием исключения больных из выборки было наличие других острых воспалительных заболеваний, а также врожденной, наследственной, хронической патологии и сопутствующих заболеваний.

Характеристика экологического состояния окружающей среды Республики Башкортостан основана на данных Государственных докладов «О состоянии природных ресурсов и окружающей среды Республики Башкортостан» за 2003-2010 годы. Наиболее высокий уровень атмосферного загрязнения ежегодно регистрируется в городе Уфе, однако, учитывая большую доступность специализированной медицинской помощи жителям Уфы (что, безусловно, отражается на повышенной частоте заболеваний), целесообразным было рассматривать данные по г. Уфе отдельно. Для сравнительной оценки частоты гнойно-воспалительных заболеваний ЧЛО в регионах с разным уровнем атмосферного загрязнения городов Салават и Стерлитамак были объединены в категорию регионов, характеризующихся очень высоким уровнем загрязнения воздуха, неблагоприятно действующим на здоровье человека - «Регионы с НХП». Все остальные города и районы республики рассматривались как регионы с низким уровнем атмосферного загрязнения - «Регионы с низким загрязнением».

Молекулярно-генетический анализ проведен 108 пациентам с тяжелым клиническим течением острых гнойно-воспалительных заболеваний ЧЛО (средний возраст - 11,6±1,42 лет) и 196 индивидам группы сравнения (контрольная группа), средний возраст которых составил 10,17±1,58 лет. Все обследованные являются жителями Республики Башкортостан. Материалом для молекулярно-генетического анализа служили образцы ДНК, выделенные из лимфоцитов периферической венозной крови стандартным методом фенольно-хлороформной экстракции с небольшими модификациями (микрометод) (Mathew C., 1984). Анализ полиморфных локусов генов TNFА(-308G>A), LTA (252A>G), IL1RN(VNTR), IL8(-251T>A), IL10(-627C>A) проводили методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК.

Статистическая обработка результатов исследования

Математическую обработку результатов исследования проводили на IBM Pentium III с использованием статистических программ Statistica v.6.0, BIOSIS-2, BIOSTAT (Primer of Biostatistics version 4.03), Haploview v.4.2. (Barrett et al., 2005), а также в программах Microsoft Excel и Microsoft Access. Для изучаемых показателей рассчитывались среднее значение (М) и ошибка среднего (m). Разницу в распределении частот аллелей и генотипов между группами рассчитывали с использованием критерия 2 с поправкой Йетса на непрерывность (при числе наблюдений менее 10). Попарное сравнение частот проводили с использованием точного двухстороннего теста Фишера. Проводилась оценка соответствия распределения частот генотипов равновесию Харди-Вайнберга (2). Силу ассоциаций маркеров с риском развития тяжелого клинического течения острых гнойно-воспалительных заболеваний ЧЛО, а также клиническими особенностями острых гнойно-воспалительных заболеваний ЧЛО оценивали по значениям показателя отношения шансов (odds ratio, OR) по формуле (Schlesselman J., 1982).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Анализ частоты, структуры нозологических форм в разных возрастных группах и тяжести клинического течения острых гнойно-воспалительных заболеваний ЧЛО у детей, проживающих в Республике Башкортостан

По данным ретроспективного анализа проведено изучение частоты, нозологических формы и особенностей клинического течения острых гнойно-воспалительных заболеваний ЧЛО у детей. Установлено, что среди госпитализированных детей с острыми гнойно-воспалительными заболеваниями челюстно-лицевой области наиболее часто встречались одонтогенные периоститы челюстных костей (63,39%), лимфаденит челюстно-лицевой области диагностировался в 13,34%, одонтогенные абсцессы составили 11,15%, одонтогенные остеомиелиты челюстных костей - 8,73%, одонтогенные флегмоны встречались у 2,80% госпитализированных детей (рис. 1).

Рис. 1. Частота нозологических форм острых гнойно-воспалительных заболеваний ЧЛО у детей.

Выявлена зависимость частоты нозологических форм острых гнойно-воспалительных заболеваний ЧЛО у детей от возраста пациентов (рис. 2): в возрастной группе от 0 до 4-х лет с наиболее высокой частотой регистрировались лимфадениты (46,1%); у детей 5-7 лет – одонтогенные периоститы (35,4%); в возрасте от 8 до 12 лет в сменном прикусе - флегмоны (31,5%) и одонтогенные остеомиелиты (32,5%); среди детей 13-15 лет в постоянном прикусе – абсцессы ЧЛО (34,4%).

Известно, что в детском возрасте воспалительный процесс протекает с более высокой склонностью к генерализации по сравнению со взрослыми, а также имеет место возрастная морфологическая незрелость лимфоидной ткани. Этим можно объяснить более высокую частоту острых лимфаденитов ЧЛО у детей ясельного возраста.

Согласно данным литературы развитию периоститов у детей в возрасте 5-7 лет, находящихся в сменном прикусе, способствует низкая минерализация костной ткани челюстей, широкие и короткие каналы остеона, особенности корневых каналов временных зубов (Бажанов Н.Н., 2002).

Рис. 2. Частота нозологических форм острых гнойно-воспалительных заболеваний ЧЛО в разных возрастных группах пациентов.

Эти анатомо-физиологические особенности детского организма с одной стороны, являются благоприятными условиями для развития и распространения инфекции в костную ткань, с другой – при адекватной реактивности детского организма - способствуют дренированию оттока инфильтрации.

Взаимосвязь неблагоприятных экологических факторов окружающей среды с частотой острых гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области у детей в регионе с нефтехимической промышленностью

Для оценки влияния неблагоприятных экологических факторов окружающей среды на частоту острых гнойно-воспалительных заболеваний ЧЛО у детей проведен анализ заболеваемости в зависимости от степени загрязнения атмосферного воздуха в районах проживания детей. Количественные оценки влияния качества окружающей среды на частоту острых гнойно-воспалительных заболеваний ЧЛО у детей были получены при сравнении заболеваемости данной патологией в разных районах республики, ранжированных по уровню техногенного загрязнения, за период с 2003-2010 гг.

Наиболее высокий уровень атмосферного загрязнения ежегодно регистрируется в городе Уфе, где проживает более 25% населения Республики Башкортостан. Согласно полученным результатам частота острых гнойно-воспалительных заболеваний ЧЛО у детей г. Уфы в расчете на 1000 детского населения варьировала от 0,701 в 2003 г. до 1,293 в 2005 г. при среднем значении 1,011.

При изучении частоты острых гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области у детей города Уфы показано, что наибольшее количество случаев в расчете на одного ребенка выявлено в Демском районе (2,94%). В то же время в Калининском и Орджоникидзевском районах, где сконцентрировано наибольшее число нефтехимических предприятий, частота заболеваний оказалась ниже - 2,16 и 2,57%, соответственно. Самая низкая частота больных с острыми гнойно-воспалительными заболеваниями отмечалась в Октябрьском (1,56%) и Ленинском (1,83%) районах города. На наш взгляд, отсутствие прямой зависимости частоты заболеваний от степени насыщенности районов промышленными предприятиями может объясняться территориальной близостью всех районов города, особенностями топографии местности и направлением розы ветров.

Установлено, что в регионах с наиболее высоким уровнем атмосферного загрязнения средняя частота острых гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области у детей составила 0,266 на 1000 детского населения, что существенно выше, чем в регионах с низким уровнем загрязнения (0,088 на 1000 детского населения), (рис. 3).

Рис. 3. Частота острых гнойно-воспалительных заболеваний ЧЛО по данным ретроспективного анализа за 2003-2010 гг. в регионах Республики Башкортостан с разным уровнем атмосферного загрязнения.

Полученные результаты, на наш взгляд, свидетельствует о взаимосвязи неблагоприятных экологических факторов окружающей среды в регионах с нефтехимической промышленностью с частотой острых гнойно-воспалительных заболеваний ЧЛО у детей. Изменения в организме детей, проживающих в промышленном районе, регистрируемые как неспецифические физиологические и цитохимические сдвиги, свидетельствуют о снижении резистентности организма и предпатологическом состоянии их здоровья.

Отрицательное воздействие химических факторов промышленных предприятий на состояние здоровья детского организма проявляется в рождении более слабого потомства, возрастании частоты врожденных пороков развития и соматической патологии среди детского населения, увеличении удельного веса мертворожденных и недоношенных детей, в высокой детской и ранней неонатальной смертности (Исаева Р.Б., 2007; Кучма В.Р., 2010). Так, согласно литературным данным, у детей, проживающих в городах с концентрацией загрязняющих веществ в 1,5-3 раза превышающих ПДК, наблюдалось увеличение частоты врожденных аномалий развития в 1,6 раз (Исаева Р.Б., 2007). Полученные нами данные согласуются с данными Чуйкина С.В., Баймухаметова А.Р., Аверьянова С.В. и других авторов (2007-2011), показавших возрастание частоты соматической, врожденной, а также хронической и острой стоматологической патологии у детей, проживающих в промышленных регионах Республики Башкортостан с наиболее неблагоприятной экологической ситуацией и максимальными показателями загрязненности атмосферного воздуха.

Анализ полиморфных локусов генов цитокинов у детей с тяжелым клиническим течением острых гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области

Для выявления генетических маркеров предрасположенности к тяжелому течению острых гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области у детей проведен сравнительный анализ распределения частот аллелей, генотипов и гаплотипов полиморфных локусов генов цитокинов TNFА (-308G>A), LTA (252A>G), IL1RN(VNTR), IL8(-251T>A), IL10(-627C>A).

При анализе полиморфного локуса -308G>A гена TNFA между сравниваемыми группами выявлены достоверные различия по частотам генотипов (табл. 1).

Таблица 1

Сравнительный анализ частот генотипов полиморфного локуса TNFА(-308G>A) у детей с тяжелым клиническим течением острых гнойно-воспалительных заболеваний ЧЛО

TNFA	Основная группа		Контрольная группа		2	p	OR	CI (95%)
	Абс.	Частота (%)	Абс.	Частота (%)
Генотипы
GG	80	79,21*	127	64,80	5,89	0,016	2,07	1,18-3,64
GA	20	19,80*	64	32,65	4,81	0,029	0,51	0,29-0,90
AA	1	0,99	5	2,55	0,22	0,638	0,38	0,04-3,32
Всего	101	100	196	100	-	-	-	-

Примечание здесь и в других таблицах:

* - различия между группами статистически достоверны при р<0,05.

Установлена ассоциация генотипа GG (OR=2,07) с повышенным риском развития тяжелого клинического течения острых гнойно-воспалительных заболеваний у детей. Этот генотип оказался самым распространенным при всех нозологических формах, частота его варьировала от 73,68% у детей с лимфаденитами до 90% при наличии флегмон. Несмотря на малочисленность выборок, наблюдаемая общая тенденция к повышению распространенности генотипа GG у всех больных с тяжелым клиническим течением острых гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области очевидна. Полученные результаты подтверждают заключение о высокой рисковой значимости генотипа GG полиморфного локуса -308G>A гена TNFА в отношении развития тяжелого клинического течения всех нозологических форм острых гнойно-воспалительных заболеваний ЧЛО у детей.

Хотя единой точки зрения на взаимосвязь полиморфных вариантов локуса -308G>A гена TNFА с характером экспрессии гена и уровнем цитокина нет, мы склонны придерживаться позиции авторов, высказывающихся о снижении содержания TNFА при наличии генотипа GG, что, возможно, приводит к прогрессированию воспаления (Wilson A.G. et al., 1997; Uglialoro A. et al., 1998; Posch et al., 2003). Эта точка зрения согласуется с полученными нами данными об ассоциации генотипа GG с развитием тяжелого клинического течения острых гнойно-воспалительных заболеваний ЧЛО у детей.

При исследовании полиморфного локуса 252A>G гена LTA выявлена ассоциация генотипа GG с повышенным риском развития тяжелого клинического течения острых гнойно-воспалительных заболеваний у детей (OR=3,54). Полученные данные представлены в табл. 2.

Таблица 2

Сравнительный анализ частот генотипов полиморфного локуса LTA(252A>G) у детей с тяжелым клиническим течением острых гнойно-воспалительных заболеваний ЧЛО

LTA	Основная группа		Контрольная группа		2	p	OR	CI (95%)
	Абс.	Частота (%)	Абс.	Частота (%)
Генотипы
AA	53	55,79	106	54,55	0,01	0,939	1,05	0,65-1,71
AG	33	34,74	86	42,58	1,36	0,244	0,72	0,43-1,19
GG	9	9,47*	4	2,87	4,74	0,030	3,54	1,22-10,26
Всего	95	100	196	100	-	-	-	-

Показана ассоциация генотипа GG с острыми одонтогенными остеомиелитами и лимфаденитами. В работах Целоусовой (2011) установлена ассоциация генотипа GG с хроническими заболеваниями органов дыхания у больных, проживающих в РБ, что согласуется с нашими результатами.

Поскольку полиморфные локусы TNFА(-308G>A), LTA (252A>G) находятся на одной хромосоме и тесно сцеплены был проведен анализ гаплотипов (рис. 4).

Рис. 4. Частота гаплотипов полиморфных локусов генов факторов некроза опухолей TNFА -308G>A и LTA 252A>G у детей с тяжелым клиническим течением острых гнойно-воспалительных заболеваний ЧЛО.

В целом между группами больных и контролем выявлены статистически значимые различия по распределению редкого гаплотипа А-А, который встречался с частотой 11,84% у детей с тяжелым клиническим течением острых гнойно-воспалительных заболеваний ЧЛО и с частотой 1,94% в группе контроля (2=22,37, р=0,001). Соответственно, показатель отношения шансов в целом для группы детей с тяжелым клиническим течением острых гнойно-воспалительных заболеваний ЧЛО составил 6,79 (OR=6,79; 95% CI 1,45-31,83), указывая на высокий риск. Сравнительный анализ встречаемости гаплотипов TNF-LTA у детей с различными нозологическими формами острых гнойно-воспалительных заболеваний ЧЛО выявил существенное увеличение частоты гаплотипа А-А у больных при всех нозологических формах (за исключением абсцессов) от 8,33% при острых одонтогенных периоститах до 16,67% при остеомиелитах ЧЛО по сравнению с контролем (1,94%).

При изучении VNTR-полиморфизма гена IL1RN (rs71941886) установлена существенная разница в распределении генотипов между всеми формами острых гнойно-воспалительных заболеваний ЧЛО. Так, при острых одонтогенных абсцессах, периоститах и остеомиелитах наиболее часто встречался генотип А1А1, на долю которого при этих формах приходилось от 70,00 до 87,50%. Генотип А1А2 не встречался ни у одного больного с острыми одонтогенными абсцессами, тогда как у больных с флегмонами частота данного варианта составила 42,86%, а при лимфаденитах – 47,35%. У детей с острыми одонтогенными остеомиелитами мы не обнаружили генотип А2А2, тогда как при острых одонтогенных абсцессах и флегмонах его частота превышала 20,00%. Вопрос о функциональной значимости минисателлитного полиморфизма гена IL1RN остается дискуссионным. В ряде работ при изучении VNTR-полиморфизма гена IL1RN выявлена ассоциация определенных генотипов и аллелей с риском развития острых и хронических воспалительных заболеваний (Wilkinson, 1999; Arnalich et al., 2002; Reiner et al., 2008; Целоусова, 2011).

При анализе полиморфных вариантов –251T>A гена IL8 выявлена ассоциация генотипа ТТ (OR=1,88) с повышенной вероятностью развития тяжелого клинического течения острых гнойно-воспалительных заболеваний (табл. 3).

Таблица 3

Сравнительный анализ частот генотипов полиморфного локуса -251Т>A гена IL8 у детей с тяжелым клиническим течением острых гнойно-воспалительных заболеваний ЧЛО

IL8	Основная группа		Контрольная группа		2	p	OR	CI (95%)
	Абс.	Частота (%)	Абс.	Частота (%)
Генотипы
TT	51	49,50*	34	34,30	4,165	0,041	1,876	1,06-3,31
TA	46	44,70	55	55,60	1,981	0,160	0,646	0,37-1,13
AA	6	5,80	10	10,10	0,747	0,388	0,551	0,19-1,58
Всего	103	100	99	100	-	-	-	-

При исследовании ассоциации полиморфных вариантов данного локуса с различными нозологическими формами острых гнойно-воспалительных заболеваний ЧЛО у детей отмечено, что генотип ТТ с высокой частотой встречался при всех нозологических формах заболевания с вариацией от 41,67% при острых одонтогенных периоститах до 66,67% при абсцессах и флегмонах ЧЛО.

Молекулярно-генетический анализ полиморфного локуса -627С>A гена IL10 показал отсутствие статистически значимых различий между группами.

Результаты проведенного исследования легли в основу разработки алгоритма прогнозирования тяжести клинического течения острых гнойно-воспалительных заболеваний ЧЛО у детей, позволяющего при выявлении у больного генетических маркеров повышенного риска прогнозировать повышенный риск развития тяжелого клинического течения заболеваний.

Алгоритм прогнозирования тяжести клинического течения острых гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области у детей включает два этапа:

I этап – клинико-анамнестическое обследование пациентов при первом обращении за медицинской помощью в условиях поликлиники по месту жительства.

- беседа с больным, анализ жалоб;

- сбор анамнестических данных;

- объективное обследование;

Результаты этапа:

1. Установление клинического диагноза, назначение лечения.
2. Установление предварительного диагноза, направление для дальнейшего обследования в специализированное отделение.

II этап – клинико-лабораторное обследование пациента в условиях специализированного отделения.

Результаты этапа:

1. При отсутствии генетических маркеров повышенного риска – установка окончательного диагноза, назначение стандартного лечения.
2. При выявлении маркеров прогнозирования повышенного вероятности развития тяжелого клинического течения заболевания – своевременная коррекция стандартной схемы лечения.

* * *

Результаты проведенного исследования являются оценкой информативности генетических систем в прогнозировании тяжелого клинического течения острых гнойно-воспалительных заболеваний ЧЛО у детей. Полученные данные служат важным шагом к пониманию молекулярно-генетических основ заболевания и могут использоваться в практической работе для прогнозирования тяжести клинического течения острых гнойно-воспалительных заболеваний ЧЛО у детей.

Выводы

1. Установлено, что среди госпитализированных детей с острыми гнойно-воспалительными заболеваниями челюстно-лицевой области наиболее часто встречались одонтогенные периоститы челюстных костей (63,39%), лимфаденит челюстно-лицевой области диагностировался в 13,34%, одонтогенные абсцессы составили 11,15%, одонтогенные остеомиелиты челюстных костей - 8,73%, одонтогенные флегмоны встречались у 2,80% детей.
2. Выявлена взаимосвязь частоты нозологических форм острых гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области у детей с возрастом пациентов: в возрастной группе от 0 до 4-х лет с наиболее высокой частотой регистрировались лимфадениты (46,1%); у детей 5-7 лет – одонтогенные периоститы (35,4%); в возрасте от 8 до 12 лет в сменном прикусе - флегмоны (31,5%) и одонтогенные остеомиелиты (32,5%); среди детей 13-15 лет в постоянном прикусе – абсцессы (34,4%).
3. Установлено, что в регионах с нефтехимической промышленностью Республики Башкортостан с повышенным и высоким уровнем загрязнения атмосферного воздуха средняя частота острых гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области у детей составила 0,266 на 1000 детского населения, что существенно выше, чем в регионах с низким уровнем загрязнения (0,088 на 1000 детского населения).
4. Выявлены генетические маркеры повышенного риска развития тяжелого клинического течения острых гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области у детей являются генотип GG полиморфного локуса -308G>A гена TNFА (OR=2,07); генотип GG полиморфного локуса 252A>G гена LTA (OR=3,54); гаплотип TNF*А-LTA*А (A-A) (OR=6,79); генотип ТТ полиморфного локуса -251Т>A гена IL8 (OR=1,88). Выявлена ассоциация вариантов генетического полиморфизма генов цитокинов с различными нозологическими формами острых гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области у детей.
5. Разработан алгоритм прогнозирования тяжести клинического течения острых гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области у детей, заключающийся в том, что при выявлении у больного генетических маркеров полиморфных локусов генов цитокинов TNFА(-308G>A), LTA(252A>G) и IL8(-251Т>A) прогнозируется тяжелое клиническое течение заболеваний.

Практические рекомендации

1. Для практического здравоохранения целесообразно использование полученных данных по прогнозированию тяжести клинического течения острых гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области у детей в отделениях челюстно-лицевой хирургии.
2. С целью прогнозирования тяжелого клинического течения острых гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области у детей применяются результаты генотипирования. При выявлении генетических маркеров повышенного риска - генотипа GG полиморфного локуса TNFА(-308G>A), генотипа GG полиморфного локуса LTA(252A>G), гаплотипа A-A по сцепленным локусам TNFА(-308G>A) и LTA (252A>G), генотипа ТТ полиморфного локуса IL8(-251Т>A - прогнозируется тяжелое клиническое течение острых гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области у детей.

Список публикаций по теме диссертации

В изданиях, входящих в перечень ВАК РФ:

1. Викторов С.В., Чуйкин С.В., Каримов Д.О., Данилко К.В., Хуснутдинова Э.К. Полиморфизм генов цитокиновой сети у детей с воспалительными заболеваниями челюстно-лицевой области // Медицинский вестник Башкортостана. – 2010. - №3. – С. 72-75.

2. Чуйкин С.В., Викторов С.В., Хуснутдинова Э.К. Анализ полиморфных вариантов генов TNFA, IL1RN, IL8, IL10 у детей с гнойно-воспалительными заболеваниями челюстно-лицевой области // Стоматология детского возраста и профилактика. – 2011. – т. Х 2(37). – С. 47-50.

3. Чуйкин С.В., Викторов С.В., Хуснутдинова Э.К. Анализ полиморфных локусов цитокинов у детей с гнойно-воспалительными заболеваниями челюстно-лицевой области // Медицинская генетика, 2011. - №11. – С. 34-39.

В периодической печати, материалах конференций и иных изданиях:

4. Чуйкин С.В., Шайхутдинова Д.И., Чуйкин О.С., Викторов С.В., Викторова Т.В. Генетические маркеры в профилактики врожденных расщелин губы и неба в регионе с развитой нефтехимической промышленностью // Материалы XII Международной конференции и III Международной онкологической конференции. – Израиль, Эйлат, 2008. – т.3. – C.78-79.

5. Чуйкин С.В., Викторов С.В., Баймухаметов А.Р., Хасанов Т.А. Эффективность применения иммуномодулятора «Ликопид» в комплексном лечении лимфаденита челюстно-лицевой области у детей // Материалы IX научно-практической конференции «Современные стоматологические технологии». - Барнаул, 2010. – С. 306-307.

6. Чуйкин С.В., Викторов С.В., Хуснутдинова Э.К. Генетические маркеры острых воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области у детей // Материалы ХIV Международной научной конференции «Здоровье семьи XXI». – Италия, Римини, 2010. – С. 98-99.

7. Чуйкин С.В., Викторов С.В. Анализ полиморфных вариантов генов TNFA и LTA у детей с гнойно-воспалительными заболеваниями челюстно-лицевой области // Материалы Республиканской конференции стоматологов «Профилактика основных стоматологических заболеваний». – Уфа, 2011. – С. 258-262.

8. Чуйкин С.В., Викторов С.В. Особенности распределения полиморфных вариантов генов цитокинов IL1RN и IL8 у пациентов с гнойно-воспалительными заболеваниями челюстно-лицевой области // Материалы Республиканской конференции стоматологов «Профилактика основных стоматологических заболеваний». – Уфа, 2011. – С. 314-317.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ЧЛО НХП МФЗ ПДРФ п.н. ПЦР IL LTA OR TNF VNTR IR1RN IL8 IL10

– челюстно-лицевая область – нефтехимическая промышленность – многофакторные заболевания – полиморфизм длины рестрикционных фрагментов – пар нуклеотидов – полимеразная цепная реакция – interleukin – лимфотоксин – отношение шансов – фактор некроза опухоли – варьирующее число тандемных повторов – рецепторный антогонист интерлейкина 1 – интерлейкин 8 – интерлейкин 10

Викторов Сергей Витальевич

Прогнозирование тяжести клинического течения острых гнойно-воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области у детей с применением генетических маркеров

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Подписано в печать 21.05.12 г. Формат 60х84 1/16.

Бумага офсетная. Печать ризографическая. Тираж 100 экз. Заказ 684.

Гарнитура «TimesNewRoman». Отпечатано в типографии

«ПЕЧАТНЫЙ ДОМЪ» ИП ВЕРКО.

Объем 1 п.л. Уфа, Карла Маркса 12 корп. 4,

т/ф: 27-27-600, 27-29-123