Влияние операционной травмына функции брюшины в динамике послеоперационного адгезиогенеза. (экспериментальное исследование)

На правах рукописи

Засыпкина Ольга Александровна

ВЛИЯНИЕ ОПЕРАЦИОННОЙ ТРАВМЫНА ФУНКЦИИ БРЮШИНЫ В ДИНАМИКЕ ПОСЛЕОПЕРАЦИОННОГО АДГЕЗИОГЕНЕЗА.

(ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)

14.00.27 - хирургия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук.

Волгоград - 2009

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет Роздрава» и лаборатории моделирования патологии отдела экспериментальной и клинической хирургии Волгоградского научного центра РАМН и АВО.

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор

Воробьев Александр Александрович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор

Быков Александр Викторович

доктор медицинских наук, профессор

Калсанов Александр Владимирович

Ведущая организация:

ГОУ ВПО «Государственная медицинская академия им. И.И. Мечникова Росздрава»

Защита состоится "___ " декабря 2009г. в 11 ч. на заседании дис­сертационного Совета Д 208.008.03 по присуждению ученой степени кандидата и доктора медицинских наук при ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет Росздрава» по адре­су: 400131, г. Волгоград, пл. Павших борцов, 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет Росздрава» (400131, г. Волгоград, пл. Павших борцов, 1).

Автореферат разослан " __ "_______2009г.

Ученый секретарь

диссертационного Совета,

доктор медицинских наук,

профессор Вейсгейм Л.Д.

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ

Работа выполнялась согласно плану научных исследований ВолГМУ, ВНЦ РАМН и АВО при поддержке Фонда содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере по федеральной программе У.М.Н.И.К..

Спаечная болезнь органов брюшной полости является актуальной проблемой. По данным различных авторов у 93-94% больных, перенесших полостные операции образуются внутрибрюшные сращения

С профилактической целью предложено большое количество средств и методов, направленных на уже исследованные звенья патогенеза спайкообразования, однако до настоящего времени ни один из них не обладает абсолютной антиадгезивной активностью.

Процесс спайкообразования реализуется не только за счет патофизиологических процессов, протекающих на уровне париетального и висцерального листков брюшины, но и динамических процессов протекающих в перитонеальной жидкости, заполняющей пространство брюшной полости. Перитонеальная жидкость является важной функционально и динамически активной средой организма, с протекающими процессами клеточных и белковых коопераций. При наличии литературных данных о реакции листков брюшины, нами не встречены данные о влиянии операционной травмы на резорбционную функцию брюшины, отсутствуют данные о динамике цито-биохимических изменений перитонеальной жидкости в процессе спайкообразования, перитонеальная жидкость до настоящего времени не исследовалась как субстрат адгезиогенеза.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Получить новые данные о влиянии операционной травмы различного объема на резорбционную функцию брюшины, клеточный и белковый состав перитонеальной жидкости в динамике послеоперационного адгезиогенеза.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ.

1. Разработать экспериментальную модель для изучения резорбционной функции брюшины в динамике образования послеоперационных спаек и устройство для ее осуществления.
2. Разработать и внедрить в диагностическую практику автоматизированную систему цитологической оценки крови и перитонеальной жидкости.
3. Определить состояние резорбционной функции брюшины в динамике послеоперационного адгезиогенеза при операционной травме различного объема.
4. Дать характеристику белкового и цитологического состава перитонеальной жидкости в динамике послеоперационного адгезиогенеза при операционной травме различного объема.
5. Определить взаимосвязь выявленных показателей с уровнями послеоперационного спаечного процесса при операционной травме различного объема.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА ИССЛЕДОВАНИЯ

Впервые разработана экспериментальная модель для изучения резорбционной функции брюшины в динамике образования послеоперационных спаек и устройство для ее осуществления, разработано устройство для забора перитонеальной жидкости, позволяющее осуществить пункцию передней брюшной стенки и аспирацию жидкости без риска повреждения внутренних органов, разработана автоматизированная система цитологического анализа крови и перитонеальной жидкости, дана характеристика резорбционной функции брюшины в динамике операционной травмы различного объема. Используя разработанную методику, дана характеристика цитологической картины и белкового спектра перитонеальной жидкости в динамике операционной травмы различного объема, установлена связь между выявленными показателями и уровнем спаечного процесса.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ

Разработанная экспериментальная модель изучения резорбционной функции брюшины при травме различного объема и устройство для ее осуществления позволяет количественно оценить параметры всасывания по времени вхождения животного в наркоз, получить репрезентативные данные по состоянию резорбционной функции брюшины, изменения ее цитологического состава и определения взаимосвязи этих параметров с уровнем послеоперационного спайкообразования, обеспечить безопасную пункцию передней брюшной стенки и забор перитонеальной жидкости у ненаркотизированного животного. Разработанная «Система автоматизированного цитологического анализа» показала свое преимущество перед стандартной методикой цитологического анализа и может быть рекомендована к использованию в лабораторной практике. Получены новые данные о влиянии операционной травмы различного объема на резорбционную функцию брюшины, клеточный и белковый состав перитонеальной жидкости в динамике послеоперационного адгезиогенеза.

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Материалы диссертации используются в учебном процессе на кафедре оперативной хирургии и топографической анатомии, патологической физиологии, патологической анатомии, Волгоградского государственного медицинского университета и лабораториях моделирования патологии, морфологии и иммуногистохимии Волгоградского научного центра РАМН и Администрации Волгоградской области.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Материалы диссертации докладывались на международной дистанционной конференции «Новые технологии в хирургии и клинической анатомии». Пермь, 2006; 65-й юбилейной открытой научно-практической конференции молодых ученых и студентов с международным участием «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины». Волгоград, 2007; 15-й Всероссийской конференции с международным участием «Актуальные вопросы прикладной анатомии и хирургии». Пермь, 2007; научно-практической конференции «Современное здоровье, сберегающие технологии в обеспечении здоровья Волгоградской области». Волгоград, 2008; 66-й открытой научно-практической конференции молодых ученых с международным участием «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины», 23-25 апреля 2008г., Волгоград; международной дистанционной научно-практической конференции «Внедрение инновационных технологий в хирургическую практику (фундаментальные и прикладные аспекты)», Пермь, 2008, Всероссийской конференции «Клиническая анатомия и экспериментальная хирургия в XXI веке», 14-16 октября 2009г., Оренбург.

ПУБЛИКАЦИИ

По теме диссертации опубликовано 15 печатных работ, в том числе 2 работы в рецензируемом научном издании, рекомендованном ВАК Министерством образования и науки РФ. Получено 2 патента и 2 приоритета по заявке на изобретение и полезную модель.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ.

Диссертация изложена на 145 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, 3 глав собственных исследований, выводов и указателя литературы. Работа содержит 28 таблиц, 53 рисунка. Библиографический указатель включает 221 источников, в том числе 114 работ отечественных и 107 иностранных авторов.

ПОЛОЖЕНИЯ ДИССЕРТАЦИИ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Предложенные экспериментальная модель определения резорбционной функции брюшины в динамике образования послеоперационных спаек и устройство для ее осуществления обеспечивают получение новых достоверных данных по функции брюшины и изменению состава перитонеальной жидкости в процессе адгезиогенеза.
2. Система автоматизированного цитологического анализа эффективна при исследовании клеточного состава крови и перитонеальной жидкости и может быть использована в практической медицине.
3. После нанесения операционной травмы нарушается резорбционная функция брюшины, при этом данное нарушение обладает закономерностью, характеризующейся обратимым угнетением резорбции, зависящем от объема операционной травмы.
4. В ответ на операционную травму различного объема в перитонеальной жидкости происходят обратимые белковые и цитологические изменения, имеющие свои закономерные особенности.
5. Усиление спаечного процесса в брюшной полости при травме различного объема коррелирует с динамическими изменениями резорбционной функции брюшины и составом перитонеальной жидкости.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Для реализации поставленных задач проведено экспериментальное исследование на 479 половозрелых самках крыс линии Вистар, весом 200-300 гр., достигших половозрелого возраста 3 мес.

450 животных были использованы для исследования состава перитонеальной жидкости и резорбционной функции брюшины в динамике адгезиогенеза. При этом они были разделены на 3 равные по количеству группы, по объему операционной травмы. В 1 группе (150 животных) - выполнялась минимальная стандартная операционная травма, включающая нанесение идентичных дефектов париетальной и висцеральной брюшины размером 0,5 на 0,5 см в области правого бокового канала, на куполе слепой кишки. Во 2 группе (150 животных) животным наносилась минимальная стандартная операционная травма, дополненная ампутацией матки с сохранением яичников. В 3 группе (150 животных) - минимальная стандартная операционная травма сопровождалась ампутацией матки с яичниками.

29 животных были использованы для поиска новой экспериментальной модели оценки резорбционной функции брюшины в условиях операционной травмы, включающего апробацию, обоснование и сравнение эффективности предложенных нами инсулиновой и этаминаловой вариантах моделей.

Исследование белкового спектра перитонеальной жидкости проводилось с использованием диагностического набора для электрофоретического разделения белков на агарозе Cormay gel protein 100, электрофоретической камеры Helena biosciences helios Europe по стандартной методике.

Цитологическое исследование перитонеальной жидкости включало: приготовление мазка, его окраска методом Романовского-Гимзе, получение цифровых фотоснимков с использованием светового микроскопа Аksiostar и цифровой камерой Оlimpus, анализ цифрового изображения с использованием разработанного нами способа.

Расчет уровня спаечного процесса осуществлялся в абсолютных числах с использованием ранее разработанной математической формулы. Полученные результаты обрабатывали статистически с вычислением средней арифметической.

ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

При проведении серии предварительных экспериментов, целью которых явилось определение наиболее адекватной модели исследования резорбционной способности брюшины, было установлено, что инсулиновая модель информативна для изучения динамики всасывания инсулина при его внутрибрюшинном введении для коррекции инсулинозависимого сахарного диабета на фоне операционной травмы, однако исследуемая модель показала свою несостоятельность при изучении резорбционной способности брюшины и сочтена нами как неприемлемой для научных исследований.

В ходе проведенной работы разработана этаминаловая модель исследования резорбционной способности брюшины. Модель позволяет количественно оценить параметры всасывания, а именно время, вхождения животного в наркоз. Получаемые на основании исследования репрезентативные данные приемлемы для дальнейших статистических обработок и построения графических кривых, что имеет решающее значение в условиях научного эксперимента. Разработанное нами устройство показало свою эффективность, так как позволяет выполнить забор перитонеальной жидкости у ненаркотизированного животного. Применение устройства обеспечивает безопасную пункцию передней брюшной стенки.

Кроме того, нами адаптирована система автоматизированного цитологического анализа крови, применительно к исследованию цитолгогического состава перитонеальной жидкости (Свидетельство о государственной регистрации для программы ЭВМ №2008612911 от 16 июня 2008 года) «Система автоматизированного цитологического анализа» позволившая обеспечить автоматизацию процесса исследования, стандартизировать условия проведения исследования, устранить влияние человеческого фактора, получить графическое изображение цифровых результатов, провести архивирование данных, анализ и сопоставление результатов исследования в динамике, обеспечить морфотипирование объектов визуализации, их структурных составляющих, провести расчет основных морфометрических параметров клетки и группы клеточных популяций.

При проведении сери экспериментов, было установлено, что под действием операционной травмы резорбционная функция брюшины изменяется в виде замедления всасывания, и при этом выявляется зависимость резорбционной функции от объема операционной травмы, что проявляется увеличением времени вхождения животного в стадию хирургического сна, соответственно увеличению объема оперативного вмешательства.

Так, нанесение минимальной стандартной операционной травмы в 1 сутки послеоперационного периода характеризовалось увеличением времени вхождения животного в наркоз до 9,8±0,5 мин. При этом период восстановления исходной функциональности в группе с нанесением стандартной операционной травмы отмечалось на 5 на послеоперационные сутки.

Во второй опытной группе были получены следующие значения: В 1 сутки после выполнения ампутации матки с сохранением придатков происходило максимальное изменение резорбционной функции, что характеризовалось увеличением времени вхождения животного в наркоз до 10,1±0,6 мин. Дооперационный уровень резорбционной функции устанавливался на 6 послеоперационные сутки.

В 1 сутки после нанесения выполнения минимальной операционной травмы, дополненной ампутацией матки с придатками приводит происходило максимальное изменение резорбционной функции, характеризующееся большим увеличением времени вхождения животного в наркоз составившим 11,3±1 мин. Восстановление исходной функциональности отмечалось на 7 послеоперационные сутки.

Таким образом, после нанесения операционной травмы отмечается закономерное угнетение резорбционной функции брюшины имеющее обратимый характер и зависимость от объема операционной травмы. При этом максимальные функциональные нарушения характерны для 1 суток послеоперационного периода.

Динамика изменения времени вхождения животных в наркоз в экспериментальных группах, представлена на Рис.1

Рис. 1. Сравнительный анализ динамики изменение резорбционной функции брюшины. ФР- физиологическая резорбция

Перитонеальная жидкость является неотъемлемой частью гомеостаза, количество и качество которой находится в прямой зависимости от функционального состояния брюшины. Динамика цитологической картины перитонеальной жидкости является зеркалом протекающих процессов воспаления, регенерации, отражает механизмы клеточной кооперации в процессе послеоперационного адгезиогенеза.

При цитологическом исследовании перитонеальной жидкости в приготовленных мазках всех экспериментальных групп обнаруживались следующее клеточные элементы: эритроциты, лимфоциты, лейкоциты, эозинофилы, сегментоядерные лейкоциты, моноциты, мезотелий, реже встречались макрофаги и фибробластоподобные клетки.

Цитологическая картина перитонеальной жидкости имела четкую взаимосвязь с операционной травмой и функциональными нарушениями брюшины.

При этом эритроциты в перитонеальной жидкости в большей степени обнаруживались в первые дни после нанесения операционной травмы различной интенсивности, что естественно связано с выполненным оперативным вмешательством. В дальнейшем их число снижалось и к 10-13 суткам перитонеальный мазок содержал единично встречающиеся эритроцитарные клетки (1,9±0,9). (Рис. 2)

Рис. 2. Динамика количественного изменения эритроцитов перитонеальной жидкости после нанесения операционной травмы различной интенсивности.

Максимальное количество лейкоцитов отмечено после выполнения оперативного вмешательства во всех экспериментальных группах, что свидетельствовало о закономерном ответе на операционную травму воспалительным процессом. Дальнейшая динамика изменений в перитонеальной жидкости в группе со стандартной операционной травмой характеризовалась снижением цитоза в течение 3-5 суток, во 2 группе к 9-м суткам и в 3 группе к 13-15 суткам с установлением средне нормального уровня содержания лейкоцитов перитонеальной жидкости (4,6±1,2 - 3,48±0,96). (Рис. 3)

Рис. 3. Динамика количественного изменения лейкоцитов перитонеальной жидкости после нанесения операционной травмы различной интенсивности.

В перитонеальной жидкости в 1группе отмечалось относительное увеличение количества клеток моноцитарно-макрофагального ряда только на 8-11 сутки после нанесения операционной травмы (3,6±0,97) с последующим восстановлением их контрольного количества. В мазках 2 и 3 опытных групп присутствие макрофагов отмечалось с 3 и 2 суток соответственно с максимальным значением на 11-13 сутки. Причем снижение уровня клеток данного ряда происходило медленнее, что говорит о возможности влияния длительной персистенции макрофагальных клеток на выраженность УСП, обеспечивая трансляцию другим клеточным системам (в частности фибробластам, фиброцитам, формирующим коллагеновый остов сращений) информацию о нарушении тканевого гомеостаза. (Рис. 4)

Рис. 4. Динамика количественного изменения клеток моноцитарно-макрофагального ряда перитонеальной жидкости после нанесения операционной травмы различной интенсивности.

Реакция лимфоцитов на операционную травму была наименее выраженной в 1 группе. Относительно небольшое повышение их числа обнаруживалось в первые 5-7 суток, в дальнейшем их уровень соответствовал средне-нормальному значению. Во 2 и 3 опытных группах повышение количества лимфоцитов отмечалось с 1-2 дня и сохранялось более длительно, что согласуется с возможностью участия в процессе адгезиогенеза иммунологической реакции. (Рис. 5)

Рис. 5. Динамика количественного изменения лимфоцитов перитонеальной жидкости после нанесения операционной травмы различной интенсивности.

Изменение количества мезотелиальных клеток в перитонеальной жидкости может быть интерпретировано как показатель репаративного процесса, запускаемого операционной травмой и протекающего на фоне посттравматического асептического воспаления. При этом увеличение количества мезотелиальных клеток обнаруживалось с 3 по 9 день после нанесения стандартной операционной травмы в 1 группе. В группах 1 и 2 этот показатель был выше. (Рис. 6)

Рис.6. Динамика количественного изменения мезотелиальных клеток перитонеальной жидкости после нанесения операционной травмы различной интенсивности.

Клеточный состав перитонеальной жидкости находится в прямой зависимости от объема операционной травмы, при этом стабильность клеточного состава перитонеальной жидкости сопровождается изменением их количества в динамике регенераторного ответа брюшины. Несмотря на то, что цитологическая картина перитонеальной жидкости приобретала исходные значения к 15-23 суткам после операции, УСП продолжал увеличиваться до 30 суток.

Белки являются непосредственным субстратом образования послеоперационных сращений. При исследовании белкового спектра перитонеальной жидкости во всех экспериментальных группах были определены следующие фракции: альбумины, альбумины, альфа 1-глобулины, альфа 2-глобулины, бета- глобулины, гамма – глобулины(+ фибриноген).

Белковая картина перитонеальной жидкости имела четкую взаимосвязь с объемом нанесенной операционной травмы и функциональными нарушениями брюшины.

В первые сутки после операции отмечалось снижение количества альбуминов, что связано с закономерными изменениями онкотического давления в перитонеальной жидкости и сосудистом русле после нанесения операционной травмы. Минимальный процент содержания альбуминов отмечался в 2 и 3 опытных группах. Дальнейшая динамика, во всех экспериментальных группах, характеризуется постепенным повышением уровня альбуминов с достижением дооперационных значений на 17-19 послеоперационные сутки. (Табл. 1)

Табл. 1

Динамика содержания альбуминов.

альбумины
	1 с	3 с	4 с	5 с	7 с	9 с	11 с	13 с	17 с	19 с
группа 1	28,32 ±3,23	32,33 ±2,43	30,12 ±6,01	25,41 ±2,88	32,9 ±3,23	33,44 ±9,66	30,69 ±3,94	27,41 ±2,03	34,21 ±0,02	38,51 ±0,91
группа 2	24,56 ±0,79	30,3 ±1,42	34,9 ±2,85	34,4 ±1,28	36,98 ±4,18	43,98 ±6,14	46,21 ±0,56	33,57 ±3,75	42,74 ±3,05	44,54 ±1,98
группа 3	25,41 ±1,48	32,26 ±0,96	31,46 ±0,61	37,22 ±1,50	34,39 ±2,10	34,86 ±1,89	34,13 ±6,85	29,66 ±1,39	45,77 ±3,43	40,95 ±2,655
норма	41,92 ±1,2	40,58 ±2,02	40,97 ±1,78	41,05 ±1,23	41,57 ±1,02	40,98 ±2,01	40,8 ±2,02	40,34 ±0,97	41,72 ±1,29	40,65 ±0,75

С первых суток после операции отмечалось повышение содержания фракций глобулинов. Динамика содержания альфа -1- и альфа – 2 -глобулинов имеет следующие особенности: максимальные значения на 3-7 сутки в группе с нанесением стандартной операционной травмы, и на 4-5 сутки в 2 и 3 опытных группах. Дооперационного уровня данные фракции достигали к 17-19 суткам. (Табл. 2,3)

Табл. 2.

Динамика содержания 1- глобулинов

1- глобулины
	1 с	3 с	4 с	5 с	7 с	9 с	11 с	13 с	17 с	19 с
группа 1	11,42 ±0,55	12,93 ±0,55	18,67 ±2,66	11,25 ±1,24	13,27 ±2,69	9,35 ±1,35	12,36 ±2,0	9,7 ±0,98	10,67 ±0,55	10,59 ±3,09
группа 2	12,3 ±0,79	13,37 ±1,42	14,15 ±2,85	16,52 ±1,28	11,98 ±4,18	9,51 ±2,98	8,9 ±2,14	8,93 ±0,56	8,63 ±3,75	9,08 ±1,76
группа 3	10,4 ±2,41	14,09 ±2,62	14,37 ±0,73	15,56 ±1,20	13,64 ±0,91	9,13 ±3,53	8,62 ±2,14	11,07 ±0,61	8,34 ±1,77	8,09 ±0,98
норма	9,37 ±1,76	10,6 ±0,43	10,35 ±3,02	10,11 ±1,07	9,89 ±2,54	9,66 ±2,01	10,33 ±0,67	9,06 ±1,76	9,67 ±2,03	9,76 ±1,87

Табл. 3

Динамика содержания 2- глобулинов

2 глобулины
	1 с	3 с	4 с	5 с	7 с	9 с	11 с	13 с	17 с	19 с
группа 1	7,99 ±1,89	9,97 ±1,05	7,43 ±1,62	8,0 ±2,10	8,59 ±1,10	5,26 ±2,46	6,4 ±0,39	7,67 ±1,78	5,34 ±1,11	3,25 ±1,63
группа 2	5,72 ±1,87	6,61 ±1,35	6,16 ±0,91	6,03 ±2,44	5,75 ±1,30	5,3 ±1,41	6, 6 ±2,01	6,05 ±1,05	3,95 ±0,79	4,48 ±1,22
группа 3	7,21 ±1,05	6,03 ±0,38	5,78 ±0,06	5,06 ±1,78	5,67 ±0,98	5,33 ±0,91	6,13 ±0,78	5,65 ±0,83	4,84 ±4,57	5,72 ±1,32
норма	4,13 ±1,89	3,8 ±0,98	4,02 ±2,09	4,05 ±3,90	3,05 ±2,09	4,89 ±3,78	3,98 ±0,49	4,72 ±2,08	4,05 ±1,93	4,98 ±1,67

Присутствие фракций бета-1- и бета- 2 глобулинов с первых суток выше нормы. Бета-1-глобулины во всех опытных группах имеют схожую динамику: максимального уровня достигают к 9-10 суткам, уровня дооперационного 17-19 суткам (Табл.4). Бета- 2 глобулины с первых суток имеют тенденцию к повышению. Дооперационный уровень отмечался на 17-19 сутки. (Табл.5)

Табл.4

Динамика содержания 1- глобулинов

1- глобулины
	1 с	3 с	4 с	5 с	7 с	9 с	11 с	13 с	17 с	19 с
группа 1	11,08 ±3,62	6,95 ±1,37	8,24 ±2,86	6, 3 ±1,09	8,78 ±0,86	13,19 ±1,38	7,82 ±0,10	5,67 ±0,25	4,4 ±1,39	6,46 ±1,76
группа 2	11,24 ±3,17	11,5 ±4,08	6,07 ±2,03	7,93 ±1,51	7,71 ±1,52	14,57 ±2,09	5,17 ±1,59	6,36 ±1,68	6,57 ±1,96	6,39 ±0,72
группа 3	11,45 ±3,23	10,47 ±0,57	7,12 ±1,0	8,67 ±1,75	9,14 ±4,31	16,6 ±13,46	5,56 ±0,55	4,35 ±0,44	5,82 ±1,18	5,01 ±1,20
норма	6,96 ±1,34	7,67 ±0,78	6,56 ±1,43	5,98 ±0,67	7,03 ±0,03	6,09 ±1,09	5,87 ±1,23	5,49 ±1,09	7,05 ±1,89	5,99 ±2,01

Табл. 5

Динамика содержания 2- глобулинов

2- глобулины
	1 с	3 с	4 с	5 с	7 с	9 с	11 с	13 с	17 с	19 с
группа 1	15,59 ±1,64	8,95 ±0,99	17,96 ±2,38	12,58 ±1,66	14,75 ±1,53	10,39 ±1,69	12,24 ±2,14	18,95 ±1,09	9,05 ±3,5	13,31 ±1,14
группа 2	16,67 ±3,05	16,94 ±1,68	15,57 ±2,79	15,52 ±1,57	15,91 ±1,41	11,23 ±0,98	12,61 ±1,23	19,08 ±0,22	15,67 ±0,23	16,93 ±3,69
группа 3	15,61 ±2,98	14,36 ±0,5	16,51 ±1,45	14,73 ±1,89	15,38 ±2,69	14,97 ±0,47	12,86 ±1,15	17,84 ±2,14	11,99 ±1,86	14,86 ±2,71
норма	15,21 ±0,98	14,99 ±1,09	14,85 ±0,69	13,99 ±1,01	14,06 ±0,89	15,71 ±1,02	15,34 ±1,98	13,68 ± 2,89	14,06 ±1,45	15,18 ±0,93

Повышение уровня альфа -1- и альфа – 2 –глобулинов, бета -1- и бета-2-глобулинов в первые послеоперационные сутки объясняется с одной стороны нарушением резорбционной функции поврежденной брюшины, а с другой участием этих белков в воспалительной реакции. Дальнейшее снижение уровня данных фракций связано с восстановлением проницаемости эндотелия и стиханием воспалительного ответа.

Уровень гамма –глобулинов и фибриногена при нанесении во всех опытных группах в первые сутки выше нормы. Уровень этой фракции в группе с нанесением стандартной операционной травмы к 7 суткам снижается, достигая второго максимума к 17-19 суткам. В 2 опытной группе к 5 суткам содержание этой фракции снижается, достигая второго максимума к 13-17 суткам. Реакция гамма –глобулинов и фибриногена на нанесение стандартной операционной травмы, дополненной ампутацией матки и придатков к 5 суткам снижается, достигая второго максимального значения к 11 суткам (Табл. 6).

Табл. 6

Динамика содержания - –глобулинов и фибриногена

+фибриноген
	1 с	3 с	4 с	5 с	7 с	9 с	11 с	13 с	17с	19 с
1 группа	25,49 ±5,58	25,66 ±1,08	25,27 ±5,37	27,51 ±4,00	22,18 ±0,57	22,37 ±5,73	30,45 ±0,51	28,6 ±0,67	30,83 ±1,95	22,69 ±2,05
2 группа	29,49 ±2,41	21,29 ±1,44	23,57 ±4,49	16,83 ±3,91	21,68 ±3,31	22,39 ±0,78	20,51 ±4,79	30,02 ±3,54	22,92 ±3,56	17,26 ±3,67
3 группа	29,94 ±1,76	22,78 ±1,63	24,76 1,54±	16,77 ±1,42	22,49 ±3,20	19,42 ±1,68	33,48 ±2,55	32,04 ±2,08	23,26 ±2,83	25,31 ±2,47
норма	21,28 ±0,98	20,97 ±1,03	21,05 ±1,06	21,11 ±1,67	20,78 ±1,98	21,67 ±0,54	20,69 ±1,56	20,87 ±1,86	21,43 ±1,83	21,36 ±1,58

Изменение содержания - –глобулинов и фибриногена в перитонеальной жидкости закономерно. В первые сутки, в условиях нарушенной проницаемости, происходит организация фибриногена, присутствующего в перитонеальной жидкости. По мере восстановления функции активного транспорта в процесс адгезиогенеза включаются внутрисосудистые макрофаги. Отсюда два пика максимального присутствия фибриногена. -глобулины ответственны за иммунологическую составляющую послеоперационного спайкообразования.

Таким образом, в ответ на операционную травму в перитонеальной жидкости происходят определенные обратимые изменения ее цитологического и белкового состава, зависящие от интенсивности нанесенной операционной травмы. При этом отмечена взаимосвязь восстановления резорбционной функции брюшины с формированием белкового субстрата сращений и их дальнейшей организации посредством воспалительных клеточных коопераций.

Расчет УСП мы производили в 3-х экспериментальных группах на 10-е, 20-е и 30-е сутки. При сравнении значений УСП в исследуемые промежутки времени в III экспериментальной группе (удаление матки с яичниками) данный показатель был наиболее высоким.

На 10-е сутки после операции УСП был наиболее высоким в 3 экспериментальной группе и составил 0,58±0,012 см3. (Рис.7)

Уровень резорбции к указанным суткам достигал дооперационного уровня. Отмечается повышение уровня фибриногена на 10 сутки в 3 опытной группе. В указанный срок отмечается повышение моноциторно-макрофагальных клеток.

Рис.7. УСП на 10-е сутки после операции.

На 20-е послеоперационные сутки УСП также имел самое высокое значение в группе с удаленной маткой с яичниками и составил 0,63 ±0,011 см3. (Рис. 8) Уровень резорбции соттветствовал дооперационного уровню. Белковая и цитологическая картинам перитонеальной жидкости к 20 суткам приходила к исходной норме.

Рис. 8. УСП на 20-е сутки после операции.

На 30-е сутки после выполнения оперативного вмешательства УСП был максимальным в 3 экспериментальной группе и составил 0,65±0,013 см3. (Рис.9) Показатели резорбции, клеточного и белкового состава перитонеальной жидкости соответствовали дооперационному уровню.

Рис.9. УСП на 30-е сутки после операции.

Таким образом: существует прямая зависимость между уровнем послеоперационного спаечного процесса и объемом операционной травмы. Наибольший УСП в 3 группе обусловлен большими нарушениями резорбционной способности брюшины и изменениями в цитологическом и белковом составе перитонеальной жидкости. Увеличение УСП в период после стабилизации исходной резорбционной функции брюшины опосредован дальнейшей организацией первично образованной спайки за счет активности клеточного звена – макрофагальных клеток, формирующих коллагеновый остов сращения.

ВЫВОДЫ

1. Разработанная экспериментальная модель определения резорбционной функции брюшины в динамике образования послеоперационных спаек и устройство для ее осуществления позволили:

• количественно оценить параметры всасывания по времени вхождения животного в наркоз,
• получить репрезентативные данные по состоянию резорбционной функции брюшины, изменения ее цитологического состава и определения взаимосвязи этих параметров с уровнем послеоперационного спайкообразования;

• обеспечить безопасную пункцию передней брюшной стенки и забор перитонеальной жидкости у не наркотизированного животного;
• получить перитонеальную жидкость в достаточном объеме, для цитологического и электрофоретического анализов.

2. Разработанный программный продукт «Система автоматизированного цитологического анализа» имеет ряд преимуществ перед ручной методикой обсчета за счет:

• автоматизации процесса исследования,

• стандартизации условия проведения исследования,
• устранения влияния человеческого фактора,
• возможности получения графического изображения цифровых результатов, архивирования данных, анализа и сопоставления результатов исследования в динамике,
• обеспечения морфотипирования объектов визуализации, их структурных составляющих, расчета основных морфометрических параметров клетки и группы клеточных популяций;

Разработанный программный продукт может быть рекомендован к использованию в клинических условиях.

3. После нанесения операционной травмы отмечается закономерное угнетение резорбционной функции брюшины имеющее обратимый характер и зависимость от объема операционной травмы. При этом максимальные функциональные нарушения характерны для 1 суток послеоперационного периода.
4. В ответ на операционную травму в перитонеальной жидкости происходят определенные обратимые изменения ее цитологического и белкового состава, зависящие от интенсивности нанесенной операционной травмы. При этом отмечена взаимосвязь восстановления резорбционной функции брюшины с формированием белкового субстрата сращений и их дальнейшей организации посредством воспалительных клеточных коопераций.
5. Существует прямая зависимость между уровнем послеоперационного спаечного процесса и объемом операционной травмы, обусловленная большими нарушениями резорбционной функции брюшины и изменениями в цитологическом и белковом составах перитонеальной жидкости.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Засыпкина О.А., Воробьев А.А., Поройский С.В., Дворецкая Ю.А. Экспериментальное обоснование новых способов профилактики послеоперационных спаек брюшной полости // Материалы международной дистанционной конференции. «Новые технологии в хирургии и клинической анатомии». Пермь, 2006 - с.178-184.
2. Определение возможности тепловизионной способов диагностики послеоперационных спаек брюшной полости в эксперименте // Материалы международной дистанционной конференции. «Новые технологии в хирургии и клинической анатомии». Пермь, 2006 - с.188 – 191 (соавт. Воробьев А.А., Поройский С.В., Дворецкая Ю.А.).
3. Тепловизионная диагностика послеоперационных внутрибрюшинных сращений и ее экспериментальное обоснование// Материалы 71-й международной итоговой студенческой научно-практической конференции, посвященной 130-летию со дня рождения профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого и 65-летию КрасГМА, Красноярск, 2007- С.237-239 (соавт.Мяконький Р.В., Дворецкая Ю.А., Буданова Л.С.)
4. Результаты применения новой системы автоматизированного цитологического анализа в исследовании влияния операционной травмы на клеточный состав перитонеальной жидкости// Сборник трудов Международной конференции «Всероссийский медицинский форум», Санкт-Петнрбург, 2007, С.-122-123 (совт. Поройский С.В., Воробьев А.А., Привалов О.О. )
5. Первый опыт клинического исследования возможностей тепловизионного метода в диагностике и дифференциальной диагностике послеоперационного спаечного процесса брюшной полости // Материалы 65-й юбилейной открытой научно-практической конференции молодых ученых и студентов с международным участием. «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины», Волгоград, 2007- С. 79-80 (соавт. Поройский С.В., Мяконький Р.В., Дворецкая Ю.А.).
6. Применение системы автоматизированного цитологического компьютерного анализа при исследовании клеточного состава перитонеальной жидкости в динамике операционной травмы // Бюллетень ВНЦ РАМН №4, Волгоград, 2008 - С.55-57 (соавт. Поройский С.В., Воробьев А.А., Привалов О.О., Поройская А.В.)
7. Влияние операционной травмы на резорбционную функцию брюшины // Материалы научно-практической конференции. «Современное здоровьесберегающие технологии в обеспечении здоровья Волгоградской области» Волгоград, 2008 - с.276- 278 (соавт. Воробьев А.А., Поройский С.В., Максимова И.А., Дворецкая Ю.А.).
8. Моделирование спаечного процесса // Материалы 66 открытой научно-практической конференции молодых ученых с международным участием «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины», 23-25 апреля 2008 г., Волгоград, с. 12-14. (соавт. Поройский С.В., Дворецкая Ю.А.).
9. Влияние операционной травмы на функциональное состояние брюшины // Материалы международной дистанционной научно-практической конференции «Внедрение инновационных технологий в хирургическую практику (фундаментальные и прикладные аспекты)», Пермь, 2008 - С. 69 -70. (соавт. Воробьев А.А., Поройский С.В., Дворецкая Ю.А., Максимова И.А.).
10. Тепловизионная диагностика послеоперационных внутрибрюшинных сращений и ее экспериментальное обоснование // Материалы 55-й региональной научной конференции профессорско-препода-вательского состава ВолГМУ. Сборник научных трудов «Современная иннова-ционная медицина – населению Волгоградской области», 2008

С. 190 – 191 (соавт. Воробьев А.А., Поройский С.В., Дворецкая Ю.А.).

11. Применение новой системы автоматизированного цитологического анализа при исследовании клеточного состава перитонеальной жидкости // Материалы 55-й региональной научной конференции профессорско-препода-вательского состава ВолГМУ. Сборник научных трудов «Современная иннова-ционная медицина – населению Волгоградской области», 2008, С. 188 – 190 (соавт. Воробьев А.А., Поройский С.В., Дворецкая Ю.А.).
12. Исследование резорбционной функции брюшины при экспериментальном моделировании спайкообразования // Материалы 9 международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в 21 веке», Москва, 2008 – с. 23-35 (соавт. Воробьев А.А., Поройский С.В., Дворецкая Ю.А., Максимова И.А.).
13. Функциональная дисрегуляция брюшины при операционной травме различного объема// Успехи современного естествознания,№ 3, Материалы VIII научная международная конференция «Гомеостаз и эндоэкология», 20-27 февраля 2009г. Шарм Эль Шейх (Египет), 2009- С.40.(соавт. Воробьев А.А., Поройский С.В., Дворецкая Ю.А., Максимова И.А.).
14. Цитоморфологические взаимоотношения в процессе послеоперационного адгезиогенеза брюшной полости // Вестник ВолГМУ №4, Волгоград, 2008 - С. 4 -10 (соавт. Поройский С.В., Барканов В.Б., Дворецкая Ю.А., Максимова И.А.).
15. Влияние объема операционной травмы на резорбционную функцию брюшины // Морфологические ведомости №3, Оренбург, 2009 - С.176-177(соавт. Поройский С.В., Максимова И.А., Ю.А. Дворецкая)

ПАТЕНТЫ НА ИЗОБРЕТЕНИЯ И ПОЛЕЗНЫЕ МОДЕЛИ.

1. Экспериментальная модель послеоперационного спаечного процесса на фоне недостаточности половых гормонов (заявка на изобретение №2007130296(033007), положительное решение о выдаче патента на изобретение от 17.04.09) Соавторы: Воробьев А.А., Тюренков И.Н., Поройский С.В., Воронков А.В., Засыпкина О.А..

2. Система автоматизированного цитологического анализа Свидетельство о государственной регистрации для программы ЭВМ №2008612911 от 16.06.2008 года. Соавторы: Воробьев А.А., Поройский С.В., Привалов О.О.

3. Способ экспериментальной оценки резорбционной функции брюшины (приоритет по заявке на изобретение №2007130297(033008) от 07.08.07) Соавторы Воробьев А.А., Поройский С.В., Максимова И.А.

4. Устройство для пункции брюшной полости при заборе перитонеальной жидкости у экспериментального животного (Приоритет №2009129288 от 29.07.09г.) Соавторы Воробьев А.А., Поройский С.В., Дворецкая Ю.А.