Сравнительное ф армакогности ческое изучение грушанки круглолистной, зимолюбки зонтичной и т о локнянки обыкновенной
На правах рукописи
МАЗЕПИНА ЛАРИСА СЕРГЕЕВНА
СРАВНИТЕЛЬНОЕ ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ изучение
грушанки круглолистной, зимолюбки зонтичной и
толокнянки обыкновенной
14.04.02 – фармацевтическая химия, фармакогнозия
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени
кандидата фармацевтических наук
Москва – 2010
Работа выполнена в ГОУ ВПО «Ярославская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ»
Научный руководитель:
доктор фармацевтических наук,
профессор Фурса Николай Сергеевич
Официальные оппоненты:
доктор биологических наук,
профессор Яковлев Геннадий Павлович
доктор фармацевтических наук,
профессор Сорокина Алла Анатольевна
Ведущая организация:
ГОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»
Защита состоится «_____» __________________2011 г. в ____ часов на заседании Диссертационного совета Д.208.040.09 при ГОУ ВПО «Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова Министерства здравоохранения и социального развития РФ» по адресу: 119019, г. Москва, Никитский бульвар, 13.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Первого МГМУ им. И.М. Сеченова по адресу: 117998, г. Москва, Нахимовский проспект, д.49
Автореферат разослан «_____»_________________2011 г.
| Ученый секретарь Диссертационного Совета Д.208.040.09, | ||
| доктор фармацевтических наук, профессор |  | Наталья Петровна Садчикова |
о б щ а я х а р а к т е р и с т и к а р а б о т ы
Актуальность темы. В условиях современной жизни не избежать развития различных заболеваний, в том числе урологических, доля которых составляет 10 – 12 % в общей структуре заболеваемости населения России (Урология, 2009). Неосложненные инфекции мочевыводящих путей – одни из самых частых заболеваний женщин репродуктивного возраста. По статистике в нашей стране регистрируется 26 – 36 млн. случаев острого цистита в год. Такая высокая заболеваемость свидетельствует об актуальности и необходимости поиска безопасных, эффективных, не оказывающих побочных эффектов лекарств, к которым, прежде всего, относятся фитотерапевтические средства.
В этом аспекте заслуживает внимания изучение отдельных представителей семейства вересковые (Ericaceae Juss.), в частности грушанки круглолистной (Руrola rotundifolia L.) и зимолюбки зонтичной (Chimaphila umbellata (L.) W. Barton), сходных с таким классическим лекарственным растением, издавна применяемым для лечения урологических заболеваний, как толокнянка обыкновенная (Arctostaphylos uva-ursi (L.) Spreng.), относящаяся к тому же семейству. В сравнении с ней они обладают определенными преимуществами. Так, установлено, что грушанка обладает более выраженным противовоспалительным действием и проявляет терапевтическую эффективность при экспериментальном гломерулонефрите (Т.Н. Пензина, 1999). Для зимолюбки характерна противогрибковая активность (J.J. Galvan et al., 2007). В то же время в сравнении с толокнянкой в химическом отношении грушанка и зимолюбка исследованы недостаточно.
Цель и задачи исследования. Целью исследования явилось сравнительное фармакогностическое изучение грушанки круглолистной, зимолюбки зонтичной и толокнянки обыкновенной для обоснования возможности использования дополнительных источников растительного сырья в медицинской практике.
Для реализации поставленной цели следовало решить следующие задачи:
- изучить данные литературы по современному состоянию морфолого-анатомических, фитохимических и фармакологических исследований объектов диссертационной работы;
- предпринять сравнительное изучение химического состава листьев исследуемых растений, в частности различных элементов, аминокислот, веществ вторичного метаболизма, главным образом фенольных соединений (простых фенолов, флавоноидов, гидроксикоричных кислот, дубильных веществ);
- подобрать и адаптировать методики количественного определения отдельных групп фенольных соединений в сырье каждого изучаемого растения после предварительного выявления оптимальных условий их проведения;
- определить содержание отдельных групп фенольных соединений в образцах сырья, заготовленных в различных регионах РФ и реализуемых в аптеках;
- проанализировать сезонную динамику накопления действующих веществ в листьях грушанки круглолистной и зимолюбки зонтичной для выявления оптимальных сроков их заготовки;
- провести сравнительный хромато-масс-спектрометрический и морфолого-анатомический анализ листьев изучаемых растений;
- определить числовые показатели листьев грушанки круглолистной, зимолюбки зонтичной и разработать проекты фармакопейных статей предприятия (ФСП) «Листья зимолюбки зонтичной», «Листья грушанки круглолистной» и проект изменения к фармакопейной статье (ФС) ГФ XI «Листья толокнянки».
Научная новизна работы. С использованием современных физико-химических методов анализа (хромато-масс-спектрометрия, ВЭЖХ, масс-спектрометрия с индуктивно связанной плазмой, спектрофотометрия и др.) предпринято сравнительное фитохимическое изучение листьев грушанки круглолистной, зимолюбки зонтичной и толокнянки обыкновенной.
Методом масс-спектрометрии определено содержание 5 макро-, 53 микро- и ультрамикроэлемента в листьях изучаемых растений.
При анализе аминокислотного состава листьев грушанки, зимолюбки и толокнянки выявлены 8 незаменимых и 11 заменимых аминокислот.
Подобраны и адаптированы методики количественного определения арбутина, флавоноидов и гидроксикоричных кислот в листьях каждого исследуемого растения.
Проведен сравнительный хромато-масс-спектрометрический и морфолого-анатомический анализ листьев грушанки круглолистной, зимолюбки зонтичной и толокнянки обыкновенной.
Результаты исследований нашли отражение в проектах ФСП «Листья зимолюбки зонтичной» и «Листья грушанки круглолистной», а также в проекте изменения к ФС ГФ XI «Листья толокнянки» в разделе «Количественное определение».
Практическая значимость работы. Предложены методики стандартизации листьев изучаемых растений по отдельным показателям, позволяющие объективно оценивать их доброкачественность.
На основании проведенных исследований составлены и внедрены:
- спектрофотометрические методики количественного определения отдельных групп фармакологически активных веществ (суммы флавоноидов, суммы гидроксикоричных кислот, арбутина) в листьях грушанки круглолистной (акт о внедрении от 21.10.2009 г. в учебный процесс кафедры фармакогнозии с курсом ботаники ГОУ ВПО «Рязанский государственный медицинский университет им. академика И.П. Павлова Минздравсоцразвития РФ»);
- спектрофотометрическая методика количественного определения арбутина в листьях грушанки круглолистной (акт о внедрении от 17.06.2009 г. в учебный процесс кафедры управления и экономики фармации с курсами фармакогнозии и ботаники, фармацевтической технологии, фармацевтической и токсикологической химии ГОУ ВПО «Тверская государственная медицинская академия Минздравсоцразвития РФ»).
Особенности исследований отражены в проектах ФСП «Листья зимолюбки зонтичной» и «Листья грушанки круглолистной» и в проекте изменения к ФС ГФ XI «Листья толокнянки».
Положения, выносимые на защиту:
- результаты определения элементного и аминокислотного состава сырья грушанки круглолистной, зимолюбки зонтичной и толокнянки обыкновенной;
- данные сравнительного фитохимического изучения сырья исследуемых растений,
- особенности сравнительного хромато-масс-спектрометрического и морфолого-анатомического анализа листьев объектов исследования,
- итоги разработки проектов нормативной документации (НД).
Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обобщены на конгрессе «Традиционная медицина-2007» (Москва, 2007); научно-практических конференциях: «Фармация и здоровье» (ПГФА, Пермь, 2005), «Актуальные вопросы современной фармации и фармацевтического образования» (Уфа, 2006), «Лекарства – человеку. Современные проблемы создания, исследования и апробации лекарственных средств» (НФаУ, Харьков, 2006), «Современные вопросы теории и практики лекарствоведения» (ЯГМА, Ярославль, 2007), «Кластерные подходы в современной фармации и фармацевтическом образовании» (БГУ, Белгород, 2008), «Актуальные вопросы судебно-химических, химико-токсикологических исследований и фармацевтического анализа» (ПГФА, Пермь, 2009); Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Актуальные вопросы медицинской науки» (ЯГМА, Ярославль, 2009); на ежегодных научных конференциях студентов и молодых ученых ЯГМА (Ярославль, 2006-2010); на межкафедральной научной конференции кафедр фармакогнозии и ботаники, фармацевтической и токсикологической химии, фармацевтической технологии, управления и экономики фармации, фармакологии ЯГМА (Ярославль, 2010 г.).
Апробация работы проведена на межкафедральной научной конференции фармацевтического факультета Первого Московского государственного медицинского университета имени И.М.Сеченова (12 октября 2010 г.).
Публикации материалов исследования. По теме диссертации опубликована 30 работ, из них 7 в журналах, в том числе 2 статьи в журнале, входящем в «Перечень ведущих рецензируемых научных журналов, рекомендованных ВАК», и 3 статьи в зарубежных журналах.
связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГОУ ВПО ЯГМА Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию (номер государственной регистрации 01.20.0600898). Тема утверждена на заседании Учёного совета ЯГМА (протокол № 2 от 19.10.2005).
Объем и структура диссертации. Работа изложена на 155 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы (1-я глава), описания материалов и методов (2-я глава), экспериментальной части (4 главы), общих выводов, списка литературы и приложения. Она иллюстрирована 27 рисунками и 44 таблицами. Список литературы включает 262 источника, из них 56 на иностранных языках.
о с н о в н о е с о д е р ж а н и е р а б о т ы
объекты и методы исследования
Объектами исследования для сравнительного фармакогностического анализа служили листья грушанки круглолистной, зимолюбки зонтичной и толокнянки обыкновенной, заготовленные в местах естественного произрастания в различных регионах европейской и азиатской частей РФ, а также образцы, реализуемые в аптеках. В процессе изучения использовали как классические, так и современные методы исследований, в частности хроматографию на бумаге (БХ), спектрофотометрию (СФ-56), хромато-масс-спектрометрию (газовый хроматограф 6850 с масс-селективным детектором 5973 Agilent Technologies), ВЭЖХ с фотометричекой детекцией (аминокислотный анализатор Hitachi 835), ВЭЖХ с УФ-детекцией (хроматограф фирмы «Gilson», модель 305), масс-спектрометрию с индуктивно связанной плазмой (масс-спектрометр ELAN-DRC-e). Морфолого-анатомический анализ проводили в соответствии с требованиями ГФ XI с использованием цифровой камеры для микроскопа Webbers MYscope 310 M. Определение числовых показателей осуществляли, руководствуясь методиками, описанными в ГФ XI издания (ГФ XI, вып.1, 1987, вып. 2, 1989), а разработку проектов нормативной документации – в соответствии с ОСТ 91500.05.001-00 «Отраслевой стандарт. Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения» (2000).
Изучение элементного и аминокислотного состава
Содержание макро-, микро- и ультрамикроэлементов в листьях грушанки круглолистной, зимолюбки зонтичной и толокнянки обыкновенной определяли с помощью масс-спектрометрии с индуктивно связанной плазмой на приборе ELAN-DRC-e с использованием метода добавок для контроля точности определений. Всего в листьях анализируемых видов определено содержание 5 макро-, 53 микро- и ультрамикроэлемента (табл. 1). Ряды убывания содержания химических элементов свидетельствуют об индивидуальных особенностях их накопления в каждом из анализируемых растений. Обнаружено, что листья грушанки, зимолюбки и толокнянки являются марганофиллами. Образцы оказались экологически безопасными по содержанию свинца, кадмия, ртути и мышьяка.
Аминокислотный состав листьев изучаемых растений определяли на аминокислотном анализаторе «Hitachi» модели 835 на колонке 0,2615 см в стандартных условиях после гидролиза (табл. 2). Хроматограммы аминокислотного состава исследуемых листьев приведены на рисунках 1 – 3. Всего нами определено содержание 19 аминокислот, из которых 8 являлись незаменимыми (Val, Ile, Leu, Met, Lys, OH-Lys, Thr, Phe) и 11 заменимыми (Ala, Gly, Ser, Tyr, Cys, Asp, Glu, Arg, His, Pro и OH-Pro). Наибольшее суммарное содержание аминокислот отмечено в листьях грушанки.
Вещества вторичного обмена
Качественное обнаружение веществ вторичного метаболизма, из которых одними из наиболее важных являются фенольные соединения, первоначально мы проводили с использованием одно- и двумерной восходящей хроматографии на бумаге Filtrak FN-4 и FN-6. При двумерном хроматографировании в листьях грушанки нами обнаружено 12 флавоноидных соединений, в листьях зимолюбки и толокнянки – по 15. При хроматографическом изучении нами отмечено по 5 гидроксикоричных кислот в извлечении из листьев каждого растения.
Уточнение данных анализа фенольных соединений методом БХ осуществляли с помощью ВЭЖХ. Исследование проводили на приборе фирмы «Gilson», модель 305 (Франция), инжектор ручной, модель Rheodyne 7125 (USA) с
Таблица 1 – Элементный состав листьев толокнянки обыкновенной, зимолюбки зонтичной и грушанки круглолистной
| Элемент | Содержание, мкг/г | Элемент | Содержание, мкг/г | ||||
| Грушанка | Зимолюбка | Толокнянка | Грушанка | Зимолюбка | Толокнянка | ||
| Макроэлементы | Марганец (Mn) | 87,6000 | 240,0000 | 29,0000 | |||
| Кальций (Са) | 16475,0000 | 12486,0000 | 10859,0000 | Медь (Cu) | 7,5400 | 8,6600 | 1,7248 |
| Кремний (Si) | 1535,0000 | 1220,0000 | 671,0000 | Молибден (Mo) | 0,0674 | 0,2159 | 0,0250 |
| Магний (Mg) | 2516,0000 | 2585,0000 | 1390,0000 | Мышьяк (As) | 0,2130 | 0,2223 | 0,1203 |
| Натрий (Na) | 49,0000 | 84,0000 | 13,0000 | Неодим (Nd) | 0,1020 | 0,0887 | 0,0527 |
| Фосфор (P) | 1642,0000 | 1656,0000 | 1347,0000 | Никель (Ni) | 0,1100 | 1,4500 | 4,3800 |
| Микро- и ультрамикроэлементы | Ниобий (Nb) | 0,0301 | 0,0228 | 0,0073 | |||
| Барий (Ba) | 80,0000 | 83,1000 | 85,0000 | Олово (Sn) | 0,0764 | 0,1541 | 0,0131 |
| Бор (B) | 35,7000 | 15,0000 | 17,0000 | Празеодим (Pr) | 0,0269 | 0,0252 | 0,0162 |
| Бром (Br) | 4,6452 | 4,0678 | 4,7000 | Ртуть (Hg) | 0,0068 | 0,0522 | 0,0034 |
| Ванадий (V) | 0,5100 | 0,6400 | 0,4800 | Рубидий (Rb) | 8,8228 | 19,9000 | 2,8000 |
| Висмут (Bi) | 0,0106 | 0,0304 | 0,0016 | Самарий (Sm) | 0,0185 | 0,0245 | 0,0164 |
| Вольфрам (W) | 0,0379 | 0,0848 | 0,0013 | Свинец (Pb) | 1,5615 | 2,5969 | 0,2472 |
| Гадолиний (Gd) | 0,0268 | 0,0194 | 0,0150 | Селен (Se) | 0,4580 | 0,6042 | 0,5712 |
| Галлий (Ga) | 0,1092 | 0,1305 | 0,0593 | Серебро (Ag) | 0,0447 | 0,1186 | 0,0020 |
| Гафний (Hf) | 0,0078 | 0,0097 | 0,0026 | Стронций (Sr) | 32,6000 | 31,5000 | 52,0000 |
| Германий (Ge) | 0,0052 | 0,0097 | 0,0061 | Сурьма (Sb) | 0,0144 | 0,0327 | 0,0281 |
| Гольмий (Ho) | 0,0026 | 0,0023 | 0,0017 | Талий (Tl) | 0,0476 | 0,0350 | 0,0027 |
| Диспрозий (Dy) | 0,0173 | 0,0127 | 0,0083 | Тантал (Ta) | 0,0014 | 0,0020 | 0,0004 |
| Европий (En) | 0,0253 | 0,0505 | 0,0064 | Теллур (Te) | 0,0053 | 0,0098 | 0,0013 |
| Эрбий (Er) | 0,0058 | 0,0048 | 0,0034 | Тербий (Tb) | 0,0034 | 0,0027 | 0,0017 |
| Железо (Fe) | 447,1000 | 350,0000 | 235,0000 | Титан (Ti) | 8,3600 | 8,9000 | 3,0400 |
| Итербий (Yb) | 0,0057 | 0,0045 | 0,0012 | Торий (Th) | 0,0663 | 0,0596 | 0,0152 |
| Итрий (Y) | 0,0744 | 0,0760 | 0,0582 | Тулий (Tu, Tm) | 0,0014 | 0,0011 | 0,0007 |
| Йод (I) | 0,0653 | 0,1491 | 0,0403 | Уран (U) | 0,0086 | 0,0096 | 0,0025 |
| Кадмий (Cd) | 0,3428 | 0,1770 | 0,0060 | Хром (Cr) | 8,6600 | 9,7700 | 9,4000 |
| Кобальт (Co) | 2,8500 | 2,1800 | 1,8973 | Цезий (Cs) | 0,0779 | 0,1090 | 0,0081 |
| Лантан (Lo) | 0,1154 | 0,1228 | 0,1076 | Церий (Ce) | 0,2406 | 0,2429 | 0,1637 |
| Литий (Li) | 0,0202 | 0,2150 | 0,0050 | Цинк (Zn) | 27,7000 | 33,0090 | 30,9000 |
| Лютеций (Lu) | 0,0009 | 0,0008 | 0,0002 | Цирконий (Zr) | 0,4394 | 0,4297 | 0,1106 |
Таблица 2 – Аминокислотный состав листьев грушанки круглолистной, зимолюбки зонтичной и толокнянки обыкновенной
| Аминокислота | Содержание, мг в 100 мг | Аминокислота | Содержание, мг в 100 мг | |||||
| Грушанка | Зимолюбка | Толокнянка | Грушанка | Зимолюбка | Толокнянка | |||
| Моноаминомонокарбоновые кислоты | Диаминомонокарбоновые кислоты | |||||||
| Аланин | 0,58 | 0,49 | 0,30 | Аргинин | 0,65 | 0,42 | 0,28 | |
| Валин* | 0,49 | 0,39 | 0,25 | Лизин* | 0,51 | 0,46 | 0,24 | |
| Глицин | 0,79 | 0,45 | 0,27 | Оксилизин* | 0,07 | 0,04 | 0,01 | |
| Изолейцин* | 0,41 | 0,30 | 0,19 | Гетероциклические | ||||
| Лейцин* | 0,85 | 0,63 | 0,42 | Пролин | 0,52 | 0,35 | 0,17 | |
| Метионин* | 0,12 | 0,11 | 0,06 | Оксипролин | 0,01 | 0,01 | следы | |
| Серин | 0,49 | 0,41 | 0,24 | Гистидин | 0,22 | 0,13 | 0,09 | |
| Тирозин | 0,47 | 0,27 | 0,19 | Сумма незаменимых аминокислот* | 3,41 | 2,64 | 1,63 | |
| Треонин* | 0,41 | 0,33 | 0,20 | |||||
| Фенилаланин* | 0,55 | 0,38 | 0,26 | |||||
| Цистеин | 0,02 | 0,03 | 0,03 | Сумма заменимых аминокислот | 5,61 | 4,23 | 2,48 | |
| Моноаминодикарбоновые кислоты | ||||||||
| Аспарагиновая | 0,80 | 0,70 | 0,38 | Общая сумма | 9,02 | 6,87 | 4,11 | |
| Глютаминовая | 1,04 | 0,98 | 0,53 | |||||
Примечание. Звездочкой обозначены незаменимые аминокислоты.
последующей компьютерной обработкой результатов исследования с помощью программы Мультихром для Windows (рис. 4 и табл. 3). Так, в листьях грушанки идентифицировали 14 веществ фенольной природы, в листьях зимолюбки – 9. В листьях обоих растений доминировал арбутин. В листьях грушанки выявлены такие флавоноиды, как гиперозид, рутин, кверцетин, лютеолин, дигидрокверцетин, лютеолин-7-гликозид, в листьях зимолюбки – гиперозид и эпикатехин. Среди фенольных и гидроксикоричных кислот грушанки идентифицированы галловая, хлорогеновая, цикориевая, феруловая, неохлорогеновая, коричная, зимолюбки – галловая, цикориевая, кофейная, неохлорогеновая. Кроме того, в зимолюбке обнаружены кумарины (кумарин и о-метоксикумарин).
Количественное определение фенольных соединений. Для анализа арбутина применяли хроматоспектрофотометрическую методику с использованием при расчетах концентраций удельного показателя поглощения (
) арбутина- стандарта (Sigma, США), имеющего максимум поглощения при длине волны 285нм, равный 72,23, и коэффициента неполного элюирования, равного 1,14025. Максимумы поглощения в УФ-области очищенных спиртовых извлечений из
Рис. 1. Хроматограмма аминокислот листьев
грушанки круглолистной
Рис. 2. Хроматограмма аминокислот листьев
зимолюбки зонтичной
Рис. 3. Хроматограмма аминокислот листьев
толокнянки обыкновенной
Рис. 4. Хроматограмма метанольного извлечения листьев грушанки
круглолистной, полученная при ВЭЖХ-анализе
Условные обозначения идентифицированных соединений: 1 – арбутин, 2 – галловая кислота, 3 – хлорогеновая кислота, 4 – цикориевая кислота, 5 – феруловая кислота, 6 - неохлорогеновая кислота, 7 – лютеолин-7-гликозид, 8 – гиперозид, 9 – рутин, 10 - дигидрокверцетин, 11 – коричная кислота, 12 – кемпферол, 13 – лютеолин, 14 – кверцетин.
Таблица 3 – Идентифицированные фенольные соединения листьев грушанки
| № п/п | Вещество | Время удерживания, мин. | Содержание, % |
| 1 | Арбутин | 3,539 | 20,34 |
| 2 | Галловая кислота | 4,455 | 2,85 |
| 3 | Хлорогеновая кислота | 5,624 | 1,08 |
| 4 | Цикориевая кислота | 6,364 | 1,77 |
| 5 | Феруловая кислота | 7,950 | 1,37 |
| 6 | Неохлорогеновая кислота | 10,050 | 1,39 |
| 7 | Лютеолин-7-гликозид | 14,290 | 1,29 |
| 8 | Гиперозид | 16,600 | 3,40 |
| 9 | Рутин | 19,840 | 2,07 |
| 10 | Дигидрокверцетин | 28,890 | 5,52 |
| 11 | Коричная кислота | 47,800 | 2,83 |
| 12 | Кемпферол | 54,300 | 2,66 |
| 13 | Лютеолин | 73,240 | 0,17 |
| 14 | Кверцетин | 77,900 | 0,03 |
листьев анализируемых растений и раствора стандартного образца арбутина (=285 нм) полностью совпадали (рис. 5).
Для количественного анализа суммы флавоноидов нами выбрана дифференциальная спектрофотометрия. Их содержание рассчитывали с использованием удельного показателя поглощения (
) комплекса гиперозида-стандарта (ГНЦЛС, г. Харьков, Украина) с алюминия хлоридом, равного 291,09.
Рис. 5. УФ-спектры поглощения спиртовых извлечений из листьев
грушанки, зимолюбки, толокнянки и спиртового раствора арбутина-стандарта
Сумму гидроксикоричных кислот определяли прямой спектрофотометрией спиртового извлечения. Расчет концентраций проводили с использованием удельного показателя поглощения хлорогеновой кислоты ("Fluka", Германия).
Количественное определение дубильных веществ проводили по методике ГФ XI, т.е. перманганатометрическим титрованием.
В процессе адаптации методик нами определены оптимальные условия количественного определения арбутина, суммы флавоноидов и гидроксикоричных кислот в листьях каждого растения (тип экстрагента, степень измельчения сырья, продолжительность и количество экстракций, соотношение сырья и экстрагента). Кроме того, нами проведена метрологическая характеристика методик и определены их относительные ошибки, которые представлены в таблицах 4 – 7.
По адаптированным методикам количественного определения арбутина, флавоноидов, гидроксикоричных кислот и дубильных веществ нами проанализированы 19 образцов грушанки, 16 – зимолюбки и 17 – толокнянки. Полученные результаты отражены в таблицах 8 – 10.
При обобщении полученных данных выявлено, что среднее содержание арбутина в сырье грушанки составило 6,98%, зимолюбки – 11,46%, толокнянки – 10,57%. При этом содержание арбутина колебалось от 2,755% до 12,691% в грушанке, от 6,741% до 16,916% в зимолюбке и от 3,148% до 20,499% в толокнянке.
Таблица 4 – Метрологические характеристики методики количественного определения арбутина
| Исследуемое растение | n | f | X | S2 | S | Sx | P,% | t (p,f) | X | ,% |
| Грушанка | 10 | 9 | 7,521 | 0,0039 | 0,0624 | 0,0197 | 95 | 2,26 | 0,045 | 0,60 |
| Зимолюбка | 10 | 9 | 10,511 | 0,0091 | 0,0953 | 0,0301 | 95 | 2,26 | 0,068 | 0,65 |
| Толокнянка | 10 | 9 | 11,283 | 0,0239 | 0,1546 | 0,0489 | 95 | 2,26 | 0,110 | 0,97 |
Таблица 5 – Метрологические характеристики методики количественного определения суммы флавоноидов
| Исследуемое растение | n | f | X | S2 | S | Sx | P,% | t (p,f) | X | ,% |
| Грушанка | 10 | 9 | 1,231 | 0,0009 | 0,03 | 0,0095 | 95 | 2,26 | 0,021 | 1,71 |
| Зимолюбка | 10 | 9 | 1,029 | 0,00049 | 0,0221 | 0,007 | 95 | 2,26 | 0,016 | 1,55 |
| Толокнянка | 10 | 9 | 1,827 | 0,0015 | 0,0387 | 0,0122 | 95 | 2,26 | 0,028 | 1,53 |
Таблица 6 – Метрологические характеристики методики количественного определения гидроксикоричных кислот
| Исследуемое растение | n | f | X | S2 | S | Sx | P,% | t (p,f) | X | ,% |
| Грушанка | 10 | 9 | 1,985 | 0,0019 | 0,0436 | 0,0138 | 95 | 2,26 | 0,031 | 1,56 |
| Зимолюбка | 10 | 9 | 2,029 | 0,0017 | 0,0412 | 0,013 | 95 | 2,26 | 0,029 | 1,27 |
| Толокнянка | 10 | 9 | 3,511 | 0,0059 | 0,0768 | 0,243 | 95 | 2,26 | 0,055 | 1,57 |
Таблица 7 – Метрологические характеристики количественного определения дубильных веществ
| Исследуемое растение | n | f | X | S2 | S | Sx | P,% | t (p,f) | X | ,% |
| Грушанка | 10 | 9 | 15,451 | 0,119 | 0,345 | 0,109 | 95 | 2,26 | 0,247 | 1,60 |
| Зимолюбка | 10 | 9 | 15,091 | 0,121 | 0,348 | 0,110 | 95 | 2,26 | 0,249 | 1,65 |
| Толокнянка | 10 | 9 | 32,103 | 0,953 | 0,972 | 0,307 | 95 | 2,26 | 0,695 | 2,16 |
Среднее содержание суммы флавоноидов равнялось 1,48%, 1,08% и 1,46% в сырье грушанки, зимолюбки и толокнянки соответственно. Значения содержания флавоноидов находились в пределах от 0,605% до 2,290 % в грушанке, от 0,536 % до 1,144 % в зимолюбке, от 0,728% до 1,851% в толокнянке.
Среднее содержание суммы гидроксикоричных кислот составило в листьях грушанки – 2,01 %, зимолюбки – 2,46 %, толокнянки – 2,85 %. При этом, их со- держание находилось в пределах от 1,524 % до 2,557 % в грушанке, от 1,925 % до 3,616 % в зимолюбке и от 1,186 % до 4,074 % в толокнянке.
Средние значения содержания дубильных веществ составили 13,47%, 22,16% и 24,42 % для грушанки, зимолюбки и толокнянки соответственно. Их содержание колебалось от 7,130 % до 24,878% в листьях грушанки, от 14,062% до 30,964 % в листьях зимолюбки и от 18,415 % до 33,547 % в листьях толокнянки.
Динамика накопления фенольных соединений в течение вегетационного периода. Для выявления оптимальных сроков заготовки сырья грушанки и
Таблица 8 – Результаты количественного определения содержания фенольных соединений в образцах грушанки круглолистной
| № образца | Содержание, % | |||
| Арбутин | Флавоноиды | Гидроксикоричные кислоты | Дубильные вещества | |
| 1 | 7,563±0,076 | 1,067±0,017 | 2,087±0,031 | 14,029±0,435 |
| 2 | 3,292±0,020 | 1,100±0,019 | 1,695±0,026 | 8,390±0,134 |
| 3 | 10,205±0,102 | 1,239±0,020 | 1,907±0,029 | 16,233±0,503 |
| 4 | 5,367±0,054 | 1,692±0,027 | 1,909±0,029 | 18,712±0,580 |
| 5 | 12,195±0,122 | 2,104±0,034 | 1,874±0,028 | 15,451±0,479 |
| 6 | 5,202±0,052 | 1,689±0,027 | 2,464±0,037 | 17,477±0,542 |
| 7 | 6,788±0,068 | 0,833±0,013 | 1,702±0,026 | 24,878±0,771 |
| 8 | 2,755±0,017 | 0,900±0,015 | 2,039±0,032 | 10,439±0,167 |
| 9 | 7,656±0,046 | 0,822±0,014 | 2,048±0,032 | 7,130±0,114 |
| 10 | 3,789±0,038 | 1,088±0,017 | 2,281±0,034 | 13,451±0,417 |
| 11 | 3,874±0,039 | 0,513±0,008 | 1,524±0,023 | 12,183±0,378 |
| 12 | 4,260±0,043 | 1,123±0,018 | 2,059±0,031 | 15,243±0,473 |
| 13 | 12,691±0,076 | 0,859±0,015 | 2,304±0,036 | 10,420±0,167 |
| 14 | 11,959±0,072 | 0,950±0,016 | 1,821±0,028 | 9,572±0,153 |
| 15 | 4,731±0,028 | 1,390±0,024 | 2,378±0,037 | 10,024±0,160 |
| 16 | 6,004±0,036 | 2,290±0,039 | 2,132±0,033 | 14,910±0,239 |
| 17 | 8,051±0,081 | 0,791±0,013 | 1,725±0,026 | 14,872±0,461 |
| 18 | 9,494±0,095 | 0,605±0,010 | 2,557±0,038 | 14,869±0,461 |
| 19 | 6,780±0,041 | 0,964±0,016 | 1,665±0,026 | 7,567±0,121 |
Примечание. Условные обозначения мест сбора образцов листьев: 1 – Белгородская обл., Белгородский р-н, окр. с. Сосновка, авг. 2005 г.; 2 – сев.-вост. побережье оз. Байкал, июль 2006 г.; 3 - Белгородская обл., окр. с. Сосновка, авг. 2006 г.; 4 - Ярославская обл., Ярославский р-н, окр. пос. Шевелюха, авг. 2006 г.; 5 - Ярославская обл., Ярославский р-н, окр. пос. Прусово, авг. 2006 г.; 6 – окр. г. Ярославля, авг. 2006 г.; 7 – окр. г. Ярославля, сент. 2006 г.; 8 - Ярославская обл., Пошехонский р-н, окр. с. Окулово, июль 2007 г.; 9 – окр. г. Томска, июль 2007 г.; 10 - Ярославская обл., Ярославский р-н, окр. пос. Лесные поляны, июль 2007 г.; 11 – окр. г. Ярославля, июль 2007 г.; 12 - Ярославская обл., окр. пос. Лесные поляны, авг. 2007 г.; 13 - Белгородская обл., окр. с. Сосновка, май 2008 г.; 14 - Ярославская обл., Ярославский р-н, окр. пос. Лесные поляны, май 2008 г.; 15 - Ярославская обл., окр. с. Тощиха, июль 2008 г; 16 – окр. г. Ярославля, авг. 2008 г.; образцы аптечного сырья: 17 - ИП Чугунов, сент. 2007 г.; 18 - ИП Чугунов, июль 2007 г.; 19 - ИП Чугунов, авг. 2008 г.
зимолюбки в центральном регионе России нами изучена сезонная динамика накопления их основных фармакологически активных веществ, какими представляются фенольные соединения. Для количественного определения арбутина, флавоноидов, гидроксикоричных кислот использовали адаптированные нами методики, для анализа дубильных веществ – фармакопейную. На основании полученных данных видно, что максимальное содержание в листьях грушанки и зимолюбки арбутина и дубильных веществ наблюдалось в сентябре, а флавоноидов и гидроксикоричных кислот – в августе. Отмечено также высокое содержание арбутина
Таблица 9 – Результаты количественного определения содержания фенольных соединений в образцах зимолюбки зонтичной
| № образца | Содержание, % | |||
| Арбутин | Флавоноиды | Гидроксикоричные кислоты | Дубильные вещества | |
| 1 | 6,771±0,044 | 0,855±0,012 | 1,925±0,029 | 20,140±0,624 |
| 2 | 10,326±0,103 | 1,009±0,014 | 2,567±0,039 | 28,243±0,876 |
| 3 | 8,391±0,839 | 0,536±0,008 | 2,501±0,038 | 16,674±0,517 |
| 4 | 16,916±0,169 | 1,029±0,014 | 2,898±0,043 | 14,062±0,436 |
| 5 | 14,173±0,092 | 0,951±0,015 | 2,118±0,027 | 21,441±0,354 |
| 6 | 8,012±0,052 | 1,104±0,017 | 2,412±0,031 | 14,851±0,245 |
| 7 | 7,956±0,796 | 1,107±0,015 | 2,675±0,040 | 15,385±0,477 |
| 8 | 15,407±0,154 | 0,978±0,014 | 2,436±0,037 | 23,540±0,729 |
| 9 | 12,183±0,079 | 0,901±0,014 | 2,060±0,026 | 22,511±0,371 |
| 10 | 10,272±0,066 | 1,014±0,016 | 1,963±0,025 | 19,034±0,314 |
| 11 | 14,701±0,147 | 1,060±0,015 | 3,616±0,054 | 29,716±0,921 |
| 12 | 13,826±0,138 | 1,123±0,016 | 2,227±0,033 | 30,964±0,959 |
| 13 | 13,807±0,138 | 1,144±0,016 | 2,170±0,033 | 24,828±0,410 |
| 14 | 6,741±0,674 | 1,076±0,015 | 2,893±0,043 | 22,558±0,372 |
| 15 | 12,533±0,081 | 1,091±0,017 | 2,315±0,029 | 26,183±0,432 |
| 16 | 11,341±0,073 | 1,122±0,017 | 2,553±0,032 | 24,376±0,402 |
Примечание. Условные обозначения мест сбора образцов листьев: 1 - Белгородская область, Белгородский район, окр. с. Сосновка, август 2005 г.; 2 - Ярославская область, Ярославский район, окр. пос. Прусово, июнь 2006 г.; 3 - Белгородская область, Белгородский район, окр. с. Сосновка, август 2006 г.; 4 - Ярославская область, Ярославский район, окр. пос. Прусово, август 2006 г.; 5 - Алтайский край, окр. г. Белокудриха, сентябрь 2006 г.; 6 - Ярославская область, Ярославский район, окр. с. Тощиха, июнь 2007 г, ; 7 - Ярославская область, Ярославский район, окр. пос. Прусово, июнь 2007 г.; 8 - Белгородская область, Белгородский район, окр. с. Сосновка, август 2007 г.; 9 - Ярославская область, Ярославский район, окр. пос. Лесные поляны, август 2007 г; 10 - Ярославская область, Ярославский район, окр. пос. Лесные поляны, июнь 2008 г; образцы аптечного сырья: 11 – ЗАО «Эвалар», серия 19.02.04, партия 3; 12 – ИП Чугунов, июль 2007 г.; 13 – ЗАО «Эвалар», серия 03.03.05., партия 5; 14 - ЗАО «Эвалар», серия 03.04.06, партия 10; 15 – ИП Чугунов, сентябрь 2007 г.; 16 – ИП Чугунов, апрель 2008 г.
в мае, которое летом уменьшалось и вновь увеличивалось к осени.
Из полученных результатов следует, что необходимо проводить заготовку листьев грушанки круглолистной и зимолюбки зонтичной в августе – сентябре.
Хромато-масс-спектрометрический анализ. В метанольных извлечениях анализируемых листьев нами идентифицировано 44 вещества, из них 8 фенольных соединений (орцин, галловая кислота, гидрохинон, арбутин, гваякол-глюкопиранозид, 2-метилрезорцин, цианиданол, 4-гидроксибензойная кислота), 3 тритерпеноида (-амирин, -амирин, 3-оксо-урс-12-ен), 1 – стероид (ситостерол), 7 органических кислот (бензойная, треоновая, 3-гидроксипропановая, янтарная, яблочная, лимонная и терефталевая кислоты), 11 жирных кислот (пеларгоновая,
Таблица 10 – Результаты количественного определения содержания фенольных соединений в образцах сырья толокнянки
| № образца | Содержание, % | |||
| Арбутин | Флавоноиды | Гидроксикоричные кислоты | Дубильные вещества | |
| 1 | 9,634±0,093 | 1,212±0,018 | 2,793±0,044 | 31,512±0,680 |
| 2 | 15,383±0,149 | 1,843±0,028 | 3,715±0,058 | 18,415±0,398 |
| 3 | 11,494±0,111 | 1,851±0,028 | 3,603±0,056 | 33,547±0,725 |
| 4 | 10,224±0,099 | 1,715±0,026 | 3,914±0,061 | 27,416±0,592 |
| 5 | 12,104±0,117 | 1,503±0,023 | 4,074±0,064 | 32,744±0,707 |
| 6 | 12,082±0,117 | 1,233±0,019 | 2,688±0,042 | 31,220±0,674 |
| 7 | 10,257±0,099 | 1,833±0,028 | 3,151±0,049 | 29,711±0,642 |
| 8 | 6,540±0,063 | 0,975±0,015 | 1,186±0,019 | 18,600±0,402 |
| 9 | 3,148±0,031 | 0,785±0,012 | 2,832±0,044 | 24,681±0,533 |
| 10 | 8,241±0,080 | 0,728±0,011 | 2,392±0,038 | 23,108±0,499 |
| 11 | 9,512±0,092 | 1,206±0,018 | 2,915±0,046 | 23,182±0,501 |
| 12 | 10,634±0,103 | 1,315±0,020 | 2,854±0,045 | 21,415±0,463 |
| 13 | 13,491±0,131 | 1,460±0,022 | 2,435±0,038 | 19,468±0,421 |
| 14 | 12,144±0,118 | 1,515±0,023 | 2,911±0,046 | 20,378±0,441 |
| 15 | 20,499±0,199 | 1,273±0,019 | 1,981±0,031 | 19,348±0,418 |
| 16 | 3,998±0,039 | 1,081±0,017 | 2,446±0,038 | 20,192±0,436 |
| 17 | 10,214±0,099 | 1,324±0,021 | 2,629±0,041 | 20,235±0,437 |
Примечание. Условные обозначения мест сбора образцов листьев: 1 – Ярославская обл., окр. пос. Вакарево, авг. 2005 г.; 2 - Ярославская обл., окр. пос. Прусово, июнь 2006 г.; 3 – окр. г. Ярославля, авг. 2006 г.; 4 - Ярославская обл., окр. пос. Прусово, авг. 2006 г.; 5 - Ярославская обл., окр. пос. Вакарево, сент. 2006 г.; 6 – респ. Коми, июнь 2007 г.; 7 - Ярославская обл., окр. пос. Вакарево, авг. 2007 г.; 8 – Алтайский край, окр. г. Барнаул, авг. 2007 г.; 9 - Ярославская обл., окр. пос. Вакарево, июнь 2008 г.; 10 - Ярославская обл., окр. пос. Прусово, авг. 2008 г.; образцы аптечного сырья: 11 – ООО «ФАРОС», серия 12072003; 12 – ОАО «Красногорсклексредства», серия 10104; 13 – ЗАО «Здоровье», серия 041005; АО «Адонис», серия 50203; 15 - ОАО «Красногорсклексредства», серия 20407; 16 – ЗАО «Авентин-Экохелп», серия 010404; 17 – ЗАО «Иван-чай», серия 010805.
каприновая, лауриновая, маргариновая, миристиновая, пальмитиновая, линолевая, арахиновая, докозановая, линоленовая и стеариновая кислоты), 10 – углеводов (арабинофураноза, арабинопираноза, арабиновая кислота, метиларабиноза, метилглюкофураноза, ксилофураноза, рибоза, глюкофураноза, ксилоза, сахароза), 1 – аминокислота (пролин), 4 – другие первичные метаболитв. Идентифицированные вещества приведены в таблице 11 в порядке увеличения их масс. Общими для всех трех анализируемых растений являлись 19 веществ, представленных 2 фенольными соединениями (галловая кислота, арбутин), 7 углеводами (арабинофураноза, арабинопираноза, арабиновая кислота, рибоза, глюкофураноза, ксилоза, сахароза), 4 органическими (янтарная, яблочная, лимонная и терефталевая) и 5 жирными кислотами (миристиновая, пальмитиновая, линолевая, линоленовая и стеариновая), 1 аминокислотой (пролин). Вместе с тем, в листьях грушанки и зимолюбки обнаружены 6 общих соединений (орцин, треоновая кислота, метиларабиноза, метилглюкофураноза, ксилофураноза, гваякол-глюкопиранозид), грушанки и толокнянки – 2 (арахиновая кислота и ситостерол), зимолюбки и толокнянки – 4 (бензойная кислота, 3-гидроксипропановая кислота, -амирин и -амирин). Только в грушанке выявлены 3 компонента (эйкозан, 2-метирезорцин, цианиданол), в зимолюбке – 3 (1-гидрокси-2-пропанон, глицерин и пеларгоновая кислота), в толокнянке – 7 (гидрохинон, капроновая, 4-идроксибензойная, лауриновая, маргариновая, докозановая кислоты, 3-оксо-урс-12-ен).
Морфолого-анатомический анализ. Определение
числовых показателей. Разработка проектов НД
Морфолого-анатомический анализ. При сравнительном микроскопическом анализе выявляются как определенные сходства, так и различия исследуемых растений. Общими анатомическими признаками для грушанки, зимолюбки и толокнянки являются тип устьичного аппарата (аномоцитный), расположение устьиц только на нижней стороне листа, наличие кутикулы. Однако, количество околоустьичных клеток у толокнянки (6 – 8) больше, чем у грушанки и зимолюбки (4 – 6) и клетки эпидермиса мельче. Отличительной особенностью листа зимолюбки являются наличие хорошо различимого губчатого мезофилла, имеющего характер аэренхимы. Включения оксалата кальция у зимолюбки встречаются часто в форме друз, у грушанки друзы редкие, как правило, одиночные, а у толокнянки оксалат кальция откладывается главным образом в виде кристаллов вдоль жилок. Отличительным признаком микроскопии листа толокнянки является наличие простых волосков, тогда как у грушанки и зимолюбки волоски нами не обнаружены. Результаты морфолого-анатомического анализа сырья грушанки и зимолюбки использованы при составлении проектов ФСП.
Определение числовых показателей. Руководствуясь методиками, приведенными в ГФ XI издания, нами определены такие числовые показатели для сырья грушанки круглолистной и зимолюбки зонтичной, как влажность, содержание золы общей и нерастворимой в 10% растворе кислоты хлористоводородной,
Таблица 11 – Результаты хромато-масс-спектрометрического анализа метанольных извлечений из листьев грушанки, зимолюбки и толокнянки
| № п/п | Вещество | Анализируемое растение | |||||
| Грушанка | Зимолюбка | Толокнянка | |||||
| Время удерживания, мин. | Содержание, % | Время удерживания, мин. | Содержание, % | Время удерживания, мин. | Содержание, % | ||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
| 1 | 1-Гидрокси-2-пропанон | - | - | 5,423 | 0,519 | - | - |
| 2 | Бензойная кислота | - | - | 5,635 | 0,071 | 5,624 | 0,113 |
| 3 | Глицерин | - | - | 5,836 | 1,734 | - | - |
| 4 | Янтарная кислота | 6,079 | 0,979 | 6,079 | 0,197 | 6,068 | 0,244 |
| 5 | 3-Гидроксипропановая кислота | - | - | 6,227 | 0,078 | 6,222 | 0,081 |
| 6 | Гидрохинон | - | - | - | - | 6,666 | 3,307 |
| 7 | Пеларгоновая кислота | - | - | 6,370 | 0,114 | - | - |
| 8 | Каприновая кислота | - | - | - | - | 6,957 | 0,087 |
| 9 | Орцин (5-метилрезорцин) | 7,026 | 11,799 | 7,026 | 5,981 | - | - |
| 10 | Яблочная кислота | 7,179 | 0,786 | 7,179 | 0,241 | 7,179 | 0,471 |
| 11 | Пролин | 7,396 | 0,326 | 7,396 | 0,136 | 7,396 | 0,133 |
| 12 | Треоновая кислота (2,3,4-тригидроксибутановая кислота) | 7,586 | 0,416 | 7,586 | 0,088 | - | - |
| 13 | 4-Гидроксибензойная кислота | - | - | - | - | 7,904 | 0,319 |
| 14 | Лауриновая кислота | - | - | - | - | 7,983 | 0,453 |
| 15 | Арабинофураноза | 8,131 | 0,932 | 8,131 | 0,271 | 8,136 | 0,362 |
| 16 | Арабинопираноза | 8,358 | 1,419 | 8,358 | 0,626 | 8,358 | 0,286 |
| 17 | Арабиновая кислота | 8,485 | 2,394 | 8,480 | 2,163 | 8,464 | 0,531 |
| 18 | Метиларабиноза | 8,655 | 0,433 | 8,655 | 0,357 | - | - |
| 19 | Терефталевая кислота | 8,676 | 1,394 | 8,676 | 0,341 | 8,676 | 1,183 |
| 20 | Метилглюкофураноза | 8,729 | 1,534 | 8,729 | 0,402 | - | - |
| 21 | Ксилофураноза | 8,781 | 0,652 | 8,781 | 0,370 | - | - |
| 22 | Миристиновая кислота | 8,866 | 0,689 | 8,866 | 0,252 | 8,866 | 0,631 |
| 23 | Рибоза | 8,924 | 0,863 | 8,924 | 0,393 | 8,924 | 0,261 |
| 24 | Глюкофураноза | 8,956 | 4,389 | 8,956 | 1,503 | 8,972 | 1,315 |
| 25 | Лимонная кислота | 9,067 | 2,140 | 9,067 | 0,587 | 9,067 | 0,480 |
| 26 | Ксилоза | 9,205 | 1,839 | 9,205 | 0,484 | 9,210 | 0,286 |
| 27 | Галловая кислота | 9,379 | 7,486 | 9,379 | 1,536 | 9,379 | 9,089 |
| 28 | Пальмитиновая кислота | 9,659 | 9,212 | 9,660 | 3,930 | 9,665 | 4,628 |
| 29 | Маргариновая кислота | - | - | - | - | 10,035 | 0,104 |
| 30 | Линолевая кислота | 10,299 | 4,432 | 10,299 | 3,685 | 10,299 | 3,876 |
| 31 | Линоленовая кислота | 10,331 | 4,267 | 10,331 | 18,601 | 10,331 | 3,852 |
| 32 | Стеариновая кислота | 10,389 | 1,187 | 10,389 | 0,588 | 10,389 | 0,759 |
| 33 | Арахиновая кислота | 11,061 | 0,371 | - | - | 11,061 | 0,142 |
| 34 | Эйкозан | 11,251 | 4,626 | - | - | - | - |
| 35 | Арбутин | 11,479 | 5,547 | 11,415 | 10,401 | 11,637 | 10,743 |
| 36 | Гваякол-глюкопиранозид | 11,727 | 7,720 | 11,643 | 8,949 | - | - |
| 37 | Докозановая кислота | - | - | - | - | 11,754 | 0,265 |
| 38 | Сахароза | 11,986 | 13,659 | 11,986 | 18,593 | 11,986 | 0,862 |
| 39 | 2-Метилрезорцин | 12,055 | 3,016 | - | - | - | - |
| 40 | Цианиданол | 12,991 | 2,633 | - | - | - | - |
| 41 | Ситостерол | 17,048 | 2,861 | - | - | 17,069 | 0,873 |
| 42 | 3-Оксо-урс-12-ен | - | - | - | - | 17,645 | 2,486 |
| 43 | -Амирин | - | - | 17,825 | 18,312 | 17,836 | 38,450 |
| 44 | -Амирин | - | - | 17,989 | 1,803 | 17,941 | 13,327 |
содержание экстрактивных веществ, которые включены в проекты ФСП.
Разработка проектов НД. Результаты проведенных нами исследований использованы при разработке проектов ФСП «Листья зимолюбки зонтичной» и «Листья грушанки круглолистной». Кроме того, нами предложен проект изменения к ФС ГФ XI «Листья толокнянки» в разделе «Количественное определение». НД разрабатывали в соответствии с ОСТ 91500.05.001-00 «Отраслевой стандарт. Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения».
В ы в о д ы
- С помощью метода масс-спектрометрии с индуктивно связанной плазмой в листьях грушанки круглолистной, зимолюбки зонтичной и толокнянки обыкновенной определено содержание 5 макро- (Ca, Mg, Na, P, Si), 53 микро- и ультрамикроэлемента (Ag, As, B, Ba, Bi, Br, Ce, Cd, Co, Cs, Cr, Cu, Dy, Er, Eu, Fe, Ga, Gd, Ge, Hf, Hg, Ho, I, La, Li, Lu, Mn, Mo, Nb, Nd, Ni, Pb, Pr, Rb, Sb, Se, Sm, Sn, Sr, Ta, Tb, Te, Th, Ti, Tl, Tm, U, V, W, Y, Yb, Zn, Zr), среди которых больше всего содержалось Ca, Mg, Si, Fe, Mn, Ba, Sr, и выявлено, что проанализированные образцы является экологически безопасными.
- Проведен сравнительный анализ аминокислотного состава листьев изучаемых растений, в результате которого обнаружено 19 аминокислот, из которых 8 являлись незаменимыми (Val, Ile, Leu, Met, Lys, OH-Lys, Thr, Phe) и 11 заменимыми (Ala, Gly, Ser, Tyr, Cys, Asp, Glu, Arg, His, Pro и OH-Pro), и отмечено, что их больше всего содержалось в листьях грушанки.
- Экспериментально подобраны и адаптированы применительно к листьям каждого исследуемого растения спектрофотометрические методики количественного определения отдельных групп фенольных соединений (арбутина, суммы флавоноидов, суммы гидроксикоричных кислот) путем определения оптимальных условий их проведения. Проведена метрологическая характеристика методик.
- По адаптированным методикам проанализированы различные образцы листьев (более 15 для каждого исследуемого вида) и в них определено содержание арбутина, суммы флавоноидов и гидроксикоричных кислот, дубильных веществ, в результате чего обнаружено, что больше всего арбутина содержалось в листьях зимолюбки, а дубильных веществ – в толокнянке.
- При изучении динамики накопления фенольных соединений в течение вегетационного периода в листьях грушанки круглолистной и зимолюбки зонтичной выявлены оптимальные сроки их заготовки в Ярославской области, приходящиеся на конец лета – начало осени (август-сентябрь).
- При сравнительном хромато-масс-спектрометрическом анализе природных соединений листьев грушанки, зимолюбки и толокнянки идентифицированы 44 вещества, представленные фенольными соединениями, тритерпеноидами, органическими и жирными кислотами, углеводами и другими соединениями.
- При морфолого-анатомическом анализе исследуемых листьев отмечено, что по внешним признакам весьма сходны зимолюбка и толокнянка, в то время как по микродиагностическим признакам – грушанка и зимолюбка.
- Установлены отдельные числовые показатели для листьев грушанки круглолистной и зимолюбки зонтичной (влажность, содержание золы общей и нерастворимой в 10% растворе кислоты хлористоводородной, содержание экстрактивных веществ).
- На основе проведенных исследований разработаны проекты фармакопейных статей предприятия «Листья зимолюбки зонтичной» и «Листья грушанки круглолистной», а также предложен проект изменения к ФС ГФ XI «Листья толокнянки» в разделе «Количественное определение».
Список работ, опубликованных по теме диссертации
- Белоногова В.Д., Марсов Н.Г., Мазепина Л.С. [и др.] Сравнительный анализ элементного состава листьев толокнянки европейского и азиатского происхождения // Фармация и здоровье: материалы международной научно-практической конференции. – Пермь, 2005. – С. 126.
- Мазепина Л.С., Лукина А.Ю., Коротаева М.С. [и др.] Фитохимическое изучение некоторых видов семейства вересковых, произрастающих в европейской и азиатской частях России // Фармация и здоровье: материалы международной научно-практической конференции. – Пермь, 2005. – С. 136 – 137.
- Жаворонкова М.Е., Лукина А.Ю., Мазепина Л.С. [и др.] Химический и фармакологический скрининг некоторых видов семейства вересковых // Лекарства – человеку. Современные проблемы создания, исследования и апробации лекарственных средств: мат-лы науч.-практ. конф. с междун. участием – Харьков, 2006. – С. 40 – 41.
- Мазепина Л.С., Коротаева М.С., Горохова Т.А. Рентгенофлуоресцентный анализ элементного состава листьев грушанки, зимолюбки и толокнянки // Сборник научных работ студентов и молодых ученых ЯГМА. – Ярославль, 2006. – С. 114 – 115.
- Мазепина Л.С., Коротаева М.С., Джурко Ю.А. Фитохимическое изучение листьев грушанки круглолистной // Актуальные проблемы фармации: межрегиональный сборник научных трудов – Рязань, 2006. – С. 157 – 159.
- Мазепина Л.С., Круглов Д.С., Коротаева М.С., Фурса Н.С. Масс-спектрометрическое определение макро-, микро-, и ультрамикроэлементов в листьях грушанки круглолистной // Актуальные вопросы современной фармации и фармацевтического образования: сб. науч. трудов юбилейной конф., посв. 25-летию фармацевтического факультета Башкирского государственного медицинского университета. – Уфа, 2006. – С. 147 – 148.
- Горохова Т.А., Коротаева М.С., Марсов Н.Г., Мазепина Л.С. [и др.] Изучение элементного состава сырья отдельных лекарственных растений, произрастающих в естественных условиях Ярославской области и выращиваемых в питомнике // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. трудов. – Пятигорск, 2007. – Вып. 62. – С. 38 – 39.
- Мазепина Л.С., Джурко Ю.А., Коротаева М.С. [и др.] Фитохимическое изучение листьев зимолюбки зонтичной, перспективного растения традиционной медицины // Традиционная медицина-2007: сборник научных трудов конгресса, посвященного 30-летию со дня открытия Центрального НИИ рефлексотерапии.– М., 2007. – С. 70 – 71.
- Мазепина Л.С., Коротаева М.С. Определение макро-, микро- и ультрамикроэлементов в листьях грушанки и зимолюбки масс-спектрометрией с индуктивно связанной плазмой // Сборник научных работ студентов и молодых ученых ЯГМА. – Ярославль, 2007. – С. 113 – 114.
- Мазепина Л.С., Коротаева М.С., Фурса Н.С. Количественное определение арбутина в листьях зимолюбки зонтичной // Вестник Пермской государственной фармацевтической академии. – 2007. - №2. – С. 260 – 263.
- Мазепина Л.С., Коротаева М.С., Фурса Н.С. Хроматоспектрофотометрическое определение арбутина в листьях грушанки круглолистной // Современные вопросы теории и практики лекарствоведения: сб. мат-лов науч.-практ. конф. с междун. участием, посв. 25-летию фармацевтического факультета ЯГМА. – Ярославль, 2007. – С. 208 – 211.
- Фурса М.С., Мазепiна Л.С., Круглов Д.С. Масс-спектрометричне визначення макро-, мікро- та ультрамікроелементів у траві зимолюбки зонтичної // Фармацевтичний журнал (Украина). – 2007. - №6. – С. 95 – 97.
- Фурса Н.С., Шкроботько П.Ю., Парфенов А.А., Мазепина Л.С. [и др.] Некоторые итоги определения экологической чистоты ряда видов лекарственного растительного сырья // Влияние природных и антропогенных факторов на социоэкосистемы: межрегион. сб. науч. тр. – Рязань, 2007. – Вып. IV. – С. 248 – 254.
- Мазепина Л.С. Определение суммы флавоноидов в листьях зимолюбки зонтичной // Актуальные проблемы образования и общества: мат-лы научно-практ. конф. с междун. участием. – Ярославль, 2008. – Т. 1. – С. 173 – 174.
- Мазепина Л.С. Подбор оптимальных условий количественного определения суммы флавоноидов в листьях грушанки круглолистной // Сборник научных работ студентов и молодых учёных ЯГМА. – Ярославль, 2008. – С. 145 – 146.
- Мазепина Л.С., Коротаева М.С., Фурса Н.С. Спектрофотометрическое определение арбутина в листьях толокнянки обыкновенной с использованием колоночной хроматографии // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сборник научых трудов. – Пятигорск, 2008. – Вып. 63. – С. 61 – 63.
- Мазепина Л.С., Фурса Н.С., Круглов Д.С. Элементный состав листьев толокнянки обыкновенной // Фармация. – 2008. - №2. – С. 17 – 18.
- Фурса Н.С., Жаворонкова М.Е, Мазепина Л.С. [и др.] Масс-спектрометрическое определение макро-, микро- и ультрамикроэлементов в листьях 3 видов вересковых и 2 видов грушанковых // Вестник фармации (Беларусь). – 2008. - №2 (40). – С. 66 – 70.
- Фурса Н.С., Мазепина Л.С., Таланов А.А. Количественное определение отдельных групп фенольных соединений в листьях грушанки круглолистной // Кластерные подходы в современной фармации и фармацевтическом образовании: мат-лы междун. науч.-практ. конференции. – Белгород, 2008. – С. 280 – 283.
- Васильева И.В., Мазепина Л.С. Сезонная динамика накопления фенольных соединений в сырье грушанки круглолистной // Актуальные вопросы медицинской науки: сб. науч. работ студентов и молодых учёных всероссийской конф. с междун. участием. – Ярославль, 2009. – С. 279 – 280.
- Мазепина Л.С., Бузук Г.Н., Белоногова В.Д., Фурса Н.С. Количественное определение суммы флавоноидов в листьях толокнянки // Вестник фармации (Беларусь). – 2009. - №2 (44). – С. 26 – 30.
- Мазепина Л.С., Ошмарина В.И., Коротаева М.С. [и др.] Содержание фенольных соединений в листьях зимолюбки зонтичной // Изыскание и создание природных лекарственных средств: межвуз. сб. науч. трудов с междун. участием, посв. 25-летию кафедры фармакогнозии и ботаники ЯГМА. – Ярославль, 2009. – С. 197 – 2009.
- Мазепина Л.С., Таланов А.А., Месхи Н.Н. [и др.] Количественное определение некоторых групп фенольных соединений в листьях толокнянки обыкновенной // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. трудов. – Пятигорск, 2009. – Вып. 64. – С. 79 – 81.
- Мазепина Л.С., Червякова А.В., Шитов Л.Н. [и др.] Хромато-масс-спектрометрический анализ листьев толокнянки // Актуальные вопросы медицинской науки: сб. науч. работ студентов и молодых учёных всеросс. конф. с междун. уч-ем. – Ярославль, 2009. – С. 283.
- Талашова С.В., Круглов Д.С., Ошмарина В.И., Мазепина Л.С. [и др.] Масс-спектрометрический анализ элементного состава лекарственного растительного сырья различных морфологических групп // Изыскание и создание природных лекарственных средств: межвуз. сб. науч. трудов с междун. участием, посв. 25-летию кафедры фармакогнозии и ботаники ЯГМА. – Ярославль, 2009. – С. 271 – 274.
- Талашова С.В., Шкроботько П.Ю., Соленникова С.Н., Мазепина Л.С. [и др.] Изучение аминокислотного состава различных морфологических групп растительного сырья // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. – Пятигорск, 2009. – Вып. 64. – С. 112 – 113.
- Фурса Н.С., Мазепина Л.С., Таланов А.А. [и др.] Определение арбутина в листьях грушанки круглолистной, зимолюбки зонтичной и толокнянки обыкновенной // Актуальные вопросы судебно-химических, химико-токсикологических исследований и фармацевтического анализа: мат-лы Российской науч.-практ. конф. с междун. уч-ем. – Пермь, 2009. – С. 168 – 171.
- Мазепина Л.С., Джурко Ю.А., Фурса Н.С. Анализ листьев грушанки круглолистной, зимолюбки зонтичной и толокнянки обыкновенной методом хромато-масс-спектрометрии // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сборник научых трудов. – Пятигорск, 2010. – Вып. 65. – С. 85 – 87.
- Мазепина Л.С., Иванов А.П., Фурса Н.С. Обоснование применения грушанки – традиционного урологического средства // Вестник Пермской государственной фармацевтической академии. – 2010. - №7. – С. 224 – 226.
- Фурса Н.С., Белоусов М.В., Шкроботько П.Ю., Мазепина Л.С. [и др.] Анализ аминокислотного состава отдельных видов семейств бурачниковых, валериановых, вересковых, гвоздичных, грушанковых и яснотковых // Фармация. - 2010. - №4. – С. 22 – 24.
