Факторы антирадикальной и антибактериальной защиты ротовой жидкости и крови при использовании гигиенических средств и местных анестетиков в стоматологии

На правах рукописи

Сторожук Илья Александрович

ФАКТОРЫ АНТИРАДИКАЛЬНОЙ И АНТИБАКТЕРИАЛЬНОЙ

ЗАЩИТЫ РОТОВОЙ ЖИДКОСТИ И КРОВИ
ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ ГИГИЕНИЧЕСКИХ СРЕДСТВ
И МЕСТНЫХ АНЕСТЕТИКОВ В СТОМАТОЛОГИИ

03.00.04 – биохимия

14.00.21 – стоматология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Краснодар – 2009

Работа выполнена в государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Кубанский государственный медицинский университет Федеральное агентство по здравоохранению и социальному развитию» (ГОУ ВПО КГМУ Росздрава)

Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор

Быков Илья Михайлович

доктор медицинских наук, профессор

Скорикова Людмила Анатольевна

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Ефременко Виталий Иванович

доктор медицинских наук, профессор Рисованный Сергей Исаакович

Ведущая организация: государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования

«Российский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию», г. Москва.

Защита состоится «_____» июня 2009 г, в 10 часов на заседании

диссертационного совета Д 208.038.02 при ГОУ ВПО КГМУ Росздрава (350063, г. Краснодар, ул. Седина, 4, [861]262-73-75).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО КГМУ

Росздрава.

Автореферат разослан «_____» мая 2009 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета

Д 208.038.02 профессор

Л.А.Скорикова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Ведущим компонентом местного иммунитета является гигиена полости рта. Регулярный уход за полостью рта (ПР) способствует удалению мягких зубных отложений и физиологическому процессу созреванию эмали. Активные компоненты, содержащиеся в средствах гигиены, обогащают ткани зуба и пародонта солями кальция, фосфатов, витаминами, микроэлементами, повышая их устойчивость к воздействию вредными факторами. Регулярный массаж десен во время чистки зубов зубной щеткой улучшает кровообращение в тканях пародонта, что способствует активации обменных процессов в десне. Недостаточный уход за полостью рта часто приводит к воспалительным заболеваниям.

Гингивит, пародонтит и стоматит относятся к числу наиболее распространенных заболеваний органов ПР (А.С.Серегин,.2000). По данным ВОЗ, около 80% людей в той или иной степени страдают заболеваниями пародонта (А.И. Грудянов, В.В. Овчинникова, 2006). Высокая распространенность стоматологических заболеваний подобного рода отмечается и среди населения г. Москвы, где они составляют более 90% (Е.В. Федорова, Н.Д. Хазиахметова, 2004).

Воспалительные процессы слизистой полости рта у детей часто развиваются на фоне аномалий зубочелюстной системы. По мнению Е.И. Вороновой (2005), наиболее распространенными являются аномалии смыкания зубов (около 62%), нарушение зубных рядов (28%) и аномалии расположения отдельных зубов (10%). С.В.Черненко (2005) считает, что аномалии и деформации зубочелюстной системы имеют более 70% детей и более 50% взрослых.

В развитии воспалительных процессов слизистой ПР и в пародонте ведущую роль отводят микроорганизмам (В.С Иванов и соавт., 1998; H. Liakont et al., 1987; P. Sweeney et al., 1990). Продукты жизнедеятельности микроорганизмов – токсины и ферменты, оказывают прямое повреждающее действие на ткани, а также опосредованно инициируют эндогенные механизмы развития воспаления (И.В. Григорьев, А.П. Гриц, 2000).

Коррекция прикуса зубов начинается после окончания смены молочных зубов на постоянные, она достигается путем наложения специальной ортодонтической аппаратуры (ОА), которая находится в полости рта месяцы, а иногда и годы. ОА оказывает свое негативное действие на слизистую оболочку различных органов ротовой полости и на секреторную деятельность слюнных желез. ОА создают дополнительные замкнутые и полузамкнутые пространства в виде карманов, щелей и пазух, в которых задерживаются остатки пищи, которые становятся местом скопления и обитания сапрофитной и условно-патогенной микрофлоры (МФ).

Итак, воспалительные заболевания слизистой оболочки органов ПР час-то связаны с нарушением секреции слюнных желез, с аномалиями и деформацией зубных рядов и с ношением в ПР ортодонтической аппаратуры. При этом увеличивается численность МФ в ротовой жидкости (РЖ) и ухудшается гигиеническое состояние в ПР. В связи с этим, для профилактики и лечения воспалительных заболеваний слизистых оболочек и мягких тканей органов ПР используется множество гигиенических и медикаментозных средств.

Целью настоящей работы явилось изучение влияния гигиенических средств и местных анестетиков, используемых в стоматологической практике, на состояние ферментных и неферментных факторов, обеспечивающих антирадикальную и антибактериальную защиту ротовой жидкости и крови.

Задачи: 1. Изучить действие (in vitro) гигиенических средств ротовой полости на активность ферментов антирадикальной защиты ротовой жидкости и крови, и на активность пищеварительных ферментов.

2. Выявить изменение активности ферментов антирадикальной защиты ротовой жидкости, наступающие у пациентов при разовом действии гигиени- ческих средств полости рта.

3. Сравнить гигиеническое состояние ротовой полости при аномалиях зубного прикуса и качество ротовой жидкости у пациентов с наложенной ортодонтической аппаратурой (с брекет системами и ортодонтическими пластинками) и без таковой.

4. Исследовать действие (in vitro) местных анестетиков, применяемых в стоматологии, на активность ферментов антирадикальной защиты (АРЗ) крови и ферментов антибактериальной защиты (АБЗ) и пищеварения в ротовой жидкости.

Научная новизна

Установлено, что под действием некоторых гигиенических средств ротовой полости наступает ингибирование активности амилазы, лизоцима, церулоплазмина, глютатионредуктазы, супероксиддисмутазы, каталазы и снижение способности РЖ гасить люминол-хемилюминисценцию, индуцированную раствором Н2О2.

Показано, что после использования отдельных ополаскивателей ротовой полости наступает кратковременное торможение секреции факторов, обеспечивающих бактерицидность и антирадикальную защиту слюны.

Установлено, что у большинства пациентов – носителей ортодонтической аппаратуры неудовлетворительное гигиеническое состояние ротовой полости, которое сопровождается выраженными изменениями активности ферментов АРЗ, АБЗ и пищеварения ротовой жидкости.

Исследованиями выявлено, что некоторые из местных анестетиков, применяемых для кратковременного обезболивания в стоматологической практике, обладают ингибирующим действием на активность ферментов АРЗ и пищеварения ротовой жидкости, а также на ферменты АРЗ крови.

Практическая ценность работы

Для стоматологической практики разработаны новые клинико-диагнос-тические критерии оценки состояния бактерицидности и антирадикальной за-щиты ротовой жидкости, отражающих функциональное состояние слюнных желез и слизистой оболочки органов полости рта, у детей с наложенной ортодонтической аппаратурой, корректирующей зубной прикус.

Разработаны методические указания по применению стоматологических противовоспалительных средств с целью профилактики воспалительных процессов слизистой полости рта у детей с наложенными ортодонтическими устройствами.

Разработаны методические указания по выбору и применению гигиенических средств ротовой полости для пациентов с учетом полного исключения для применения зубных паст и ополаскивателей, содержащих хлоргексидин.

Внедрение

Результаты исследования внедрены в практику работы Краснодарской городской детской стоматологической поликлиники, кафедры пропедевтики и профилактики стоматологических заболеваний Кубанского государственного медицинского университета, а также в практику МУЗ «Родильный дом»
(г. Краснодар).

Основные положения, выносимые на защиту

1. Под влиянием некоторых ополаскивателей полости рта, зубных паст- сенсодина и пародонтакса происходит снижение активности отдельных ферментов и неферментных факторов, обеспечивающих бактерицидность и антирадикальную защиту ротовой жидкости, собранной на механическое раздражение слизистых оболочек ротовой полости.

2. Ферменты АРЗ крови, так же как и ферменты АРЗ ротовой жидкости

(в опытах in vitro) имеют отрицательную динамику при действии ополаскивателей ротовой полости и изучаемых зубных паст.

3. В одноразовых исследованиях на пациентах выявлено, что практически все исследуемые ополаскиватели ротовой полости ингибируют активность ферментов АРЗ и АБЗ в ротовой жидкости, которая восстанавливается не ранее чем через 30 минут после их применения.

4. У детей с аномалиями зубов и с установленной ортодонтической аппаратурой с целью её коррекции наблюдается неудовлетворительное гигиеническое состояние ротовой полости, сопровождающееся снижением активности ферментов и неферментных факторов АРЗ и АБЗ ротовой жидкости.

5. Некоторые ополаскиватели ПР и зубные пасты вызывают снижение активности ферментов органов пищеварения (лизоцима, амилазы и пепсина).

6. Карпулированные местные анестетики, применяемые в стоматологии, чаще всего изготовлены на основе лидокаина, артикаина или мепивакаина, также обладают способностью ингибировать ферменты АРЗ, АБЗ и пищеварения.

Апробация работы

Основные положения работы представлялись и обсуждались на 62-ой и 63-ей студенческих научно-практических конференциях КГМА (г. Краснодар, 2001, 2002 г), на ХШ, Х1V, XVI международных конференциях дискуссионного научного клуба «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии, экологии» (Украина, Крым, Ялта-Гурзуф, 2005, 2006, 2008 г.) и на V Всероссийской научной конференции «Стоматология детского возраста» (Ростов н/Д, 2005 г.). По результатам диссертационных исследований опубликовано 15 научных работ.

Структура и объем работы

Диссертация изложена на 141 странице компьютерного текста (разме- ром 14 пунктов, в программе Microsoft Word), иллюстрирована 27 рисунками, содержит 9 таблиц. Диссертация состоит из введения, пяти глав, обсуждения полученных результатов и выводов. Список литературы включает 251 источник, из них 167– на русском языке и 84 – на иностранных языках.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Контингент обследуемых пациентов

Для достижения цели и решения задач, поставленных в настоящей диссертации, исследования проведены на 197 пациентах в возрасте 7-20 лет.

С целью определения гигиенического состояния полости рта обследовано 109 пациентов (первая группа), из них с патологией прикуса – 98 человек, и 11 человек здоровых (контроль), у которых определены индексы гигиены полости рта по Green- Vermillion и Федорову-Володкиной, а также с помощью пробы Шиллера-Писарева установлен индекс ПМА (папиллярно-маргинально-альвеолярный индекс).

Вторую группу пациентов составили 39 добровольцев (студентов), из которых сформировано 6 подгрупп, у которых натощак собирали нестимулированную ротовую жидкость. У каждой подгруппы испытуемых собирали по три порции (5-6 мл) ротовой жидкости: 1-я – до ополаскивания полости рта испытуемым средством; 2-я – сразу после ополаскивания; 3-я – через 30 минут после ополаскивания. В качестве противовоспалительных средств были взяты: Корсодил (Израиль), Бальзам «Весна плюс» (Россия), Полиминерол (Болгария), Глистер (США), ASMB (Англия) и 0,01% раствор марганцовокислого калия. Полученную ротовую жидкость в течение 25-30 мин центрифугировали, в ней определяли активность каталазы, глютатионредуктазы, церулоплазмина и содержание нитратов (268 анализов).

Третья группа состояла из 49 детей в возрасте от 7 до 16 лет. Из них 15 были здоровые дети без каких-либо ортодонтических аппаратов в ПР, пришедших к стоматологу для профилактического медицинского осмотра (контроль); 17 - носили ортодонтические пластинки, а 17 - брекет системы, корректирующие прикус зубов. У всех пациентов утром натощак собирали стимулированную ротовую жидкость в ответ на механическое раздражение для биохимических исследований (245 анализов).

В работе также поставлены эксперименты (in vitro) по выявлению действия гигиенических средств и местных анестетиков на активность ферментов АРЗ и АБЗ органов пищеварения и крови. В них были использованы патентованные ферменты и субстраты, ротовая жидкость и донорская кровь. Всего поставлено 850 опытов.

Методы исследования

Для определения активности амилазы использован экспресс-метод, предложенный П.Г Сторожуком и Т.И. Анашкиной (1969). В основу метода положено определение скорости (в секундах) гидролиза крахмала до эритродекстринов (появления карминово-красного цвета, выявляемого с помощью раствора Люголя), образующихся под действием амилазы.

Активность лизоцима определяли по способу П.Г.Сторожука, И.А. Сторожука (2006), в котором используются патентованные препараты лиофилизированной культуры Micrococcus Lysodеikticus (США) и кристалического Lyzozyme (ФРГ). Об активности фермента судят по количеству разрушенных клеток ML, который служит субстратом, а лизоцим необходим для построения калибровочного графика.

Для определения активности пепсина использован экспресс-метод Н.П. Пятницкого (1955), в котором субстратом служит молочно-ацетатная смесь (МАС), составленная из равных объемов свежего обезжиренного молока и ацетатного буфера с рН 5,0.

Активность супероксиддисмутазы определяли методом N. Nishkimi et

al. (1972) в модификации П.Г.Сторожука, А.П.Сторожука 1998), основанного на способности СОД конкурировать с нитросиним тетразолием (НСТ) за супероксидные анионы, образующиеся в результате аэробного взаимодействия

восстановленного НАД и фенозинметасульфата (ФМС). СОД тормозит восста-

новление НСТ.

Каталазу определяли методом, в описании М.А.Королюк и соавт. (1988), в модификации П.Г.Сторожука и С.П.Корочанской (2001). Метод основан на способности перекиси водорода образовывать с солями молибдена стойкий окрашенный комплекс.

Глютатионредуктазу определяли методом Л.Б. Юсуповой (1989). Метод основан на способности фермента восстанавливать глютатион за счет водорода, который переносится от НАДФН. По убыли НАДФН в системе и судят об активности фермента.

Церулоплазмин (ЦП) определяли методом Равина (В.С. Камышников 2000), адаптированным нами для РЖ. Принцип метода базируется на спо-собности ЦП окислять р-фенилендиамин. По оптической плотности образую-щихся окрашенных продуктов судят об уровне ЦП.

Хемилюминисценцию (л-ХЛ) определяли на люминотесторе ЛТ-01 (производства Ростовского НИИ экспериментальной биологии) по методике, описанной П.Г.Сторожуком и соавт. (2000). Он позволяет определять способность РЖ гасить ХЛ люминола в 0,05 М Трис-НС1 буфере с рН 7,8, индуцированную 0,35 М раствором Н2О2.

Нитриты + нитраты в ротовой жидкости определяли методом, описанным П.П. Голиковым и соавт.(1999), адаптированным нами для сыворотки крови и ротовой жидкости, в котором используется реактива Грисса.

Собственный цифровой материал обработан по общепринятой методике вариационной статистики для медицинских исследований (Л.С. Каминский, 1964).

Результаты исследований и их обсуждение

В первом разделе работы изучалось (in vitro) действия гигиенических средств ротовой полости (ГСРП) на активность ферментов органов пищеварения (лизоцима и амилазы слюны, и пепсина желудочного сока). Гигиенические средства выбраны наиболее часто используемые с профилактической и лечебной целью. С каждым ферментом и в каждой серии с ГСРП поставлено по 6-8 опытов, которые обработаны статистически и сведены в таблицу 1.

Таблица 1

Изменение активности лизоцима, амилазы и пепсина под действием

гигиенических средств ротовой полости

Гигиеническое средство		Лизоцим (ед/мл) М±m | %	Амилаза (ед/мл) М±m | %	Пепсин (ед/мл) М±m | %
0. Контроль		14,3 – 0,87 100	207 – 5,43 100	7,20 – 0,30 100
1.Бальзам Весна+		10,76 - 0,86 75,1*	171 - 7,51 82,7*	7,28 - 0,31 101,1
2. Корсодил		12,40 - 0,78 86,5	178 - 6,06 86,0*	8,34 - 0,33 115,8*
3. Галидор		9,83 – 1,06 68,6*	173 – 11,1 83,6*	7,76 – 0,26 107,8*
4. Корега табс		8,86 – 0,88 60,5*	100% ингибирована	1,35 – 0,03 18,7*
5. АSMO		9,30 – 0,97 64,9*	183 – 9,65 88,1	7,00 – 0,22 97,2
6. ASMB		11,35 –1,04 79,2*	166 – 7,53 80,6*	6,37 – 0,29 88,5
7. Полиминерол		11,40 –0,67 79,5*	211 – 6,53 102	7,39 – 0,30 102
	8. Пародонтакс	11,10 –0,65 77,4*	196 – 12,5 95,1	7,78 – 0,29 108
	9. Сенсодин	11,2 – 1,22 78,1*	177 – 3,98 85,7*	100% ннгибирован

Примечание:* - отмечено р < 0,05.

На таблице видно, что большинство ГСРП обладают способностью ингибировать активность лизоцима. Больше всего это свойство выражено у Корсодила, Галидора и Корега табс, в присутствии которых она снижается на 35-40%. Также действуют, но менее эффективно: Бальзам «Весна плюс», ASMB, Полиминерол, Пародонтакс и Сенсодин. Только Корсодил вызывает статистически недостоверное её снижение (– 13,5%).

К этим препаратам не менее чувствительной оказалась и амилаза. Так, её активность снижается на 14-19,5% под действием Бальзама «Весна плюс», Корсодила, Галидора, Сенсодина и ASMB, а Корега табс вызывает 100% её ингибирование. Активность пепсина существенно снижается только под действием Корега табс ( – 81,3%) и полностью ингибируется Сенсодином.

Выявленное ингибирующее действие ГСРП на активность лизоцима иллюстрируется на рис.1.

Рис.1. Изменение активности лизоцима ротовой жидкости при действии

ополаскивателей полости рта и зубных паст.

При изучении влияния отдельных ГСРП на способность ротовой жидкости гасить л-ХЛ установлено, что в присутствии ASMB л-ХЛ остается такой же, как и при действии интактной РЖ (рис. 2), в присутствии Глистера и, особенно, Бальзама «Весна плюс» и Корсодила она повышается, и только Полиминерол её существенно ингибирует. Разница между контролем (интактной РЖ) и Полиминеролом составляет около 60%.

Рис.2. Изменение способности ротовой жидкости гасить люминол-ХЛ в

присутствии отдельных ополаскивателей полости рта.

В исследованиях ополаскивателей полости рта (Бальзама «Весна плюс», Полиминерола, Корсодила, Галидора, ASMB и Раствора KMnО4), проведенных на 39 студентах, установлено, что они все снижают активность каталазы на 25-46%, глютатионредуктазы – на 25-44%, содержание нитратов – на 28-59% (за исключением Бальзама «Весна плюс» и ASMB), а количество церулоплазмина при этом практически не изменяется. Через 30 мин после ополаскивания действие большинства ополаскивателей прекращается.

В этом же разделе изучалось (in vitro) действие ГСРП на активность ферментов антирадикальной защиты (АРЗ) донорской крови. Известно, что с секретом (слюной) главных слюнных желез (околоушных, подъязычных и подчелюстных) выделяются многие компоненты, синтезируемые в самих слюнных железах, а вместе с ними некоторые компоненты, содержащиеся в плазме крови. Для исследования были взята супероксиддисмутаза (СОД), каталаза (КА) и глютатионредуктаза (ГлР), так как на долю этих ферментов приходится основная нагрузка по утилизации активных форм кислорода (АФК). Эти же ферменты ограничивают процессы чрезмерного размножения микрофлоры полости рта.

Результаты исследований представлены в табл.2.

На этой таблице видно, что супероксиддисмутаза очень чувствительна ко всем исследуемым ГСРП. Активность СОД больше всего снижается под действием Корсодила, Глистера и Полиминерола (на 59, 62 и 65%, соответст- венно), несколько меньше она снижается под действием Бальзама «Весна плюс», Корега табс, ASMO, ASMB и Пародонтакса (на 30–45%) и меньше всего – под действием Сенсодина (– 19%).

Таблица 2

Влияние гигиенических средств ротовой полости на активность супер-оксиддисмутазы (СОД), каталазы (КА) и глютатионредуктазы (ГлР)

крови (эритроцитов), средние из 6 – 7 опытов (in vitro).

Гигиенические средства ротовой полости	СОД ед/мл. М ± m | %	КА ед/мл. М ± m | %	ГлР ед/мл.. М± m | %
Контроль	69,2 ± 11,2 100	222 ± 4,6 100	678 ± 122 100
1.Бальзам «Весна+»	34,5 ± 5,5 54,6*	229 ± 4,6 103,2	514 ± 90,1 75,8*
2.Корсодил	25,8 ± 3,6 40,8*	256 ± 12,0 115	385 ± 80,5 56,8*
3.Глистер	24,0 ± 3,7 37,9*	244 ± 12,2 110	623 ± 111 92,0
4.Корега табс	44,3 ± 6,2 70,1*	192 ± 7,4 86,4	207 ± 37,6 30,5*
5.ASMO	33,1 ± 5,4 52,3*	176 ± 6,5 79,3*	527 ± 101 77,7*
6.ASMB	39,0 ± 5,8 61,7*	182 ± 10,1 82*	496 ± 97 73,0*
7.Полиминерол	22,0 ± 4,3 34,8*	163 ± 15,7 73,4*	603 ± 127 88,9
8.Пародонтакс	35,2 ± 5,1 55,7*	194 ± 14,3 87,3	817 ± 117 120,5*
9.Сенсодин	51,1 ± 8,1 80,8*	210 ± 6,0 94,6	985 ± 90,2 145,3*

Игибирующее действие ГСРП на активность СОД представлено на рис.3.

Рис.3. Действие гигиенических средств ротовой полости на активность

супероксиддисмутазы крови (эритроцитов).

Большинство ГСРП на активность каталазы существенного влияния не оказывают, лишь ASMO, ASMB и Полиминерол её ингибируют на 18 – 26%. Это, по-видимому, связано с тем, что ASMO и ASMB являются таблетированными формами ГСРП, содержащими бикарбонат натрия, при разложении которого выделяется СО2, ингибирующий активность фермента. Что же касается Полиминерола, то этот ополаскиватель ПР получают из рапы (озерного концентрированного солевого раствора), вероятно, в котором имеются и химические элементы, обладающие ингибирующим действием на каталазу.

Глютатионредуктаза оказалась, так же как и СОД, чувствительным ферментом по отношению к изучаемым ГСРП. Бальзам «Весна плюс», Корсодил, ASMO, ASMB и Корега табс снижают активность фермента на 24-70%. В то время, как Пародонтакс и Сенсодин повышают её активность на 20,5 и 45%, соответственно.

Итак, из данных, приведенных в таблицах, на рисунках и в исследованиях при ополаскивании ротовой полости, видно, что большинство исследуемых ГСРП обладает свойством игибировать активность СОД, КА и ГлР. В связи с этим возникает вопрос: как следует рассматривать выявленное свойство некоторых ГСРП ингибировать ферменты АРЗ крови? Можно ответить однозначно – отрицательно.

Во втором разделе работы определяли гигиеническое состояние ротовой полости при неправильном прикусе и изменение показателей системы АРЗ и АБЗ ротовой жидкости при ношении ортодонтической аппаратуры. Обследованию на гигиеническую оценку ротовой полости подвергнуто 109 пациентов. Они имели следующую патологию прикуса: глубокий прикус - 24 человека, открытый – 17, дистальный – 17, мезиальный – 21 и сочетанные нарушения прикуса - 19 детей. В качестве контроля обследовано 11 здоровых детей.

У всех пациентов определены индексы гигиены полости рта по Green- Vermillion (1960) и Федорову-Володкиной (1972), а также проведена оценка изменений слизистой оболочки десневого края и альвеолярного отростка с учетом индекса ПМА (Parma, 1960) – степени кровоточивости десен. Данные о состоянии индексов гигиены полости рта у пациентов обработаны статистически и представлены в табл.3.

Таблица 3

Гигиеническая оценка состояния мягких тканей полости рта у детей с различной патологией прикуса

Вид прикуса	Колво пациентов	Индекс Федорова- Володкиной M ± m	Индекс Green- Vermillion M ± m	Индекс ПМА M ± m	Гигиен состоя. полости рта
1.Здоровые	11	1,83 ± 0,42	2,21 ± 0,19	0	Хор.
2. Открытый	17	2,44 ± 0,17	2,71 ± 0,14	2,48 ± 0.61	Неуд.
3. Глубокий	24	3,17 ± 1,04	3,56 ± 0,71	3,97 ± 0,74	Неуд.
4. Мезиальный	21	1,91 ± 0,11	2,12 ± 0,13	1,74 ± 0,31	Удовл.
5. Дистальный	17	1,74 ± 0,11	1,92 ± 0,24	1,38 ± 0,44	Удовл.
6. Сочетанные аномалии	19	2,14 ± 0,24	2,51 ± 0,44	2,87 ± 0,91	Неуд.

На этой таблице видно, что при мезиальном и дистальном прикусах мягкие и твердые ткани ПР находятся в удовлетворительном состоянии. При открытом, глубоком и при сочетании аномальных прикусов они – в неудовлетворительном состоянии. При глубоком прикусе в патологический процесс вовлечены ткани пародонта, десневого края, альвеолярной десны и слизистые оболочки ПР. Отсюда следует, что все пациенты, с выявленной патологией прикуса должны, наряду с коррекцией прикуса, получать терапию, направленную на улучшение гигиенического состояния полости рта.

В работе (на 49 пациентах) было установлено, что ортодонтическая аппаратура, применяемая для коррекции прикуса зубов у детей (брекет системы и ортодонтические пластинки), негативно сказывается на анатомо-морфоло- гической структуре и физиологических свойствах органов ПР. Во-первых, сами конструкции и средства их крепления постоянно мацерируют слизистую оболочку и прилегающие к ним участки языка, верхних и нижних губ. Во-вторых, при помощи этих устройств создаются пазухи, карманы и щели, в которых скапливаются пищевые массы, служащие хорошей питательной средой для микрофлоры. Продукты её жизнедеятельности являются мощным раздражителем для слизистой ПР, среди которых имеются и активные формы кислорода. В ответ на действие этих факторов железистый аппарат слизистой ПР и слюнные железы усиливают биосинтез протекторных средств, таких как глюкозпротеогликаны, оксид азота, церулоплазмин и др.

При исследовании адаптационных свойств ротовой жидкости (по способности гасить л-ХЛ и содержанию церулоплазмина) у детей с наличием в ПР ортодонтических конструкций, корректирующих прикус зубов, установлено несущественное отклонения от нормы л-ХЛ (рис.4).

Рис.4. Изменение л-ХЛ в ротовой жидкости у детей в зависимости от ношения и вида ортодонтической аппаратуры.

Так, у детей, не имеющих в полости рта ОА(контроль), величина максимальной вспышки в среднем равна 1,0 ед., или 10%, а 90% л-ХЛ – погашено факторами антирадикальной защиты РЖ.

В ротовой жидкости детей, которые носят ортодонтические пластинки, уровень максимальной вспышки л-ХЛ в среднем равен 1,3 ед,, что соответствует 13% не погашенной Н2О2 и 87% – погашенной, а у детей с брекет системами в ПР уровень негашенной Н2О2 повышен до 15%, а гашенной – снижен до 85%.

При исследовании в ротовой жидкости нитратов установлено, что во всех трех группах есть пациенты с высоким (от 232 до 514мкМ/Л) в среднем 334 мкМ/Л (контроль-100%) и низким содержанием (от 23 до 96 мкМ/Л) в среднем 45,7 мкМ/Л (контроль-100%). Статистической обработкой данных установлено, что отклонения от нормы имеются только у детей с высоким содержанием нитратов в РЖ. Так, при ношении ортодонтических пластинок содержание нитратов в РЖ ниже на 12,3%, а при ношении брекет систем – на 46,7%. У детей с низким их содержанием в РЖ различий между группами не выявлено.

Из этих данных видно, что у детей, которым поставлена ОА, корректирующая прикус зубов, будь то ортодонтические пластинки или брекет системы, снижается способность РЖ гасить л-ХЛ, хотя и незначительно, и в большей степени угнетается выделение нитратов. Если первый показатель свидетельствует о снижении антирадикальной защиты ротовой жидкости, то второй – скорее говорит о нарушениях адаптации кровообращения в слюнных железах и в слизистой оболочке полости рта.

В настоящем разделе работы также изучалось свойство бактерицидности и антирадикальной резистентности ротовой жидкости у детей с наличием в полости рта ОА при помощи непрямых (биохимических) методов исследования. Они проведены у 15 здоровых детей без ОА (контроль), у 17- носящих ортодонтические пластинки, и у 17 детей с наложенными брекет системами.

Известно, что в обеспечении бактерицидности ротовой жидкости веду-щая роль принадлежит лизоциму. Однако это свойство дополняется рядом других факторов, например, ферментами каталазой, пероксидазой, церулоплазмином и рядом дегидрогеназ, участвующих в утилизации О2- и образовании Н2О2.

Рис.5. Активность каталазы, глютатионредуктазы и церулоплазмина ротовой

жидкости у детей в зависимости от наличия и устройства аппаратов,

корректирующих прикус зубов. В столбцах: активность ферментов (в %):

1 – каталаза, 2 – глютатинредуктаза, 3 – церулоплазмин. В рядах: 1 – без орто-

донтической аппаратуры (контроль), 2 – с наличие ортодонтических пластинок,

3 – с наличием брекет систем.

Исследованиями кафедры биохимии КГМУ было установлено, что рост и размножение патогенных и условно-патогенных микроорганизмов подавляются активными формами кислорода (АФК) и ферментами антирадикальной защиты (ФАРЗ) эритроцитов. Мы полагаем, что поскольку в РЖ содержатся ФАРЗ, то они и придают ей антибактериальные свойства. Результаты исследования ФАРЗ (КА, ГлР и ЦП) у детей контрольной группы, и детей с ортодонтической аппаратурой в ротовой полости представлены на рис.5.

На рис.5. видно, что ортодонтические пластинки и брекет системы существенно снижают активность каталазы (–28 и –52%, соответственно) и глютатионредуктазы (–24 и –29%) в ротовой жидкости детей, которые их носят. Снижено и содержание в РЖ и церулоплазмина, но статистически достоверно оно только при ношении ОП (–31%).

Итак, на основании этого можно сделать заключение, что у детей, которым поставлена ортодонтическая аппаратура, корректирующая прикус зубов, в ротовой жидкости снижается активность КА и ГлР, а ЦП только при ношении ортодонтических пластинок.

Третий раздел. В настоящее время в условиях стоматологической поликлиники наиболее удобной формой расфасовки являются карпулированные анестетики (КАС) местного действия. Их недостатком является местное сосудорасширяющее действие. В связи с чем в состав препаратов дополнительно вводят вазоконстрикоры (ВК) – адреналин или норадреналин, которые уменьшают геморрагии при манипуляциях на мягких тканях и пролонгируют действие анестетика. А в некоторые из КАС, в качестве консерванта добавляют парабены и др. химические компоненты.

В этом разделе изучали (in vitro) влияние КАС (лидокаина, ксилостезина, скандонеста, септонеста, убистезина, ультракаина, цитокартина) на активность ферментов слюны, желудка и крови, и др. факторов АРЗ и АБЗ. В качестве объекта исследований были взяты амилаза, лизоцим и пепсин. Изменения их активности под действием выше перечисленных препаратов представлено в табл.4.

Таблица 4

Изменение активности ферментов пищеварительных органов под

действием местных анестетиков, применяемых в стоматологии

(в каждой серии n = 6)

Анестезиологи-ческие средства	Амилаза (ед/мл) M ± m | %	Лизоцим (ед/мл) M ± m | %	Пепсин (ед/мл) M ± m | %
1. Септонест	48,0 – 2,13 83,4*	10,04 – 0,31 85,4	5,61 – 0,31 68,1*
2. Убистезин	46,2 – 1,21 80,3*	11,69 – 0,49 100,0	5,00 – 0,10 60,7*
3. Ультракаин	48,1 – 2,14 83,6*	8,83 – 0,22 75,4*	4,60 – 0,23 55,9*
4. Ксилостезин	43,8 – 1,51 76,2*	13,00 – 0,58 110,6	5,20 – 0,12 63,2*
5. Цитокартин	48,4 – 2,07 84,0*	11,75 – 0,49 100,0	4,90 – 0,22 59,5*
6. Лидокаин	46,4 – 1,71 80,7*	9,81 – 0,20 83,4*	5,10 – 0,30 62,0*
7. Скандонест	50,2 – 1,67 87,4*	9,26 – 0,41 78,8*	6,30 – 0,54 76,5*
8. Контроль	57,5 – 2,15 100	11,75 – 0,60 100	8,23 – 0,72 100

На этой таблице видно, что амилаза и пепсин являются ферментами весьма чувствительными к действию всех семи местных анестетиков. Так, под их действием активность амилазы снижается в пределах 13-24%, а активность пепсина при этом снижается на 24-44%.

Что же касается лизоцима, то он более устойчив по отношению к большинству из исследуемых местных анестетиков. Его активность статистически достоверно снижалась только под действием лидокаина (на 16,6%), скандонеста (на 21,2%) и ультракаина (на 24,6%).

При исследовании действия КАС на изменение активности ЦП, содержащегося в слюне и на её способности гасить л-ХЛ, которые также оказались чувствительными к местным анестетикам (рис. 6 и 7).

Из данных, приведенных на рис.6 видно, что активность церулоплазмина РЖ под действием изучаемых местных анестетиков увеличивается на 22-73%, за исключением Септонеста.

Рис.6. Изменение активности церулоплазмина в присутствии

местных анестетиков.

В это же время РЖ обладает хорошо выраженной способностью гасить л-ХЛ, индуцированной раствором Н2О2. Так, в контрольных опытах (с интактной РЖ) количество погашенных АФК достигает 82,6% (рис.8), а в присутствии КАС это свойство снижается. Статистически достоверное снижение л-ХЛ наступило в присутствии Септонеста, Ксилостезина и Лидокаина. Тенденция к её снижению отмечена и при действии Убистезина, Ультракаина и Цитокартина.

Рис. 7. Способность факторов АРЗ ротовой жидкости гасить л-ХЛ в

присутствии местных анестетиков.

Для выяснения влияния КАС на ферменты АРЗ крови определялась динамика активности СОД, КА и ГлР в их присутствии, так как именно этим энзимам приходится основная роль в утилизации активных форм кислорода.

Таблица 5

Действие стоматологических местных анестетиков на активность

ферментов антирадикальной защиты крови

Анестезиологиче-ские средства	Супероксиддисмутаза (ед/мл). M ± m %	Каталаза (ед/мл) M ± m %	Глютатионре-дуктаза (ед./мл) M ± m %
1. Лидокаин	125,4 – 11,3 200,0*	185,3 – 15,4 99,0	218 – 22,0 114,2
2. Ксилостезин	74,3 – 11,4 118,5	183 – 14,4 97,9	237 – 21,2 123,9*
3. Скандонест	104,0 – 12,1 166,5*	198 – 16,3 105,9	208 –25,3 108,7
4. Септонест	64,0 – 7,74 102,1	189 – 18,1 101,0	218 – 26,1 114,1
5. Убистезин	60,3 – 7,63 96,2	174 – 19,1 93, 0	237 – 32,3 124,0*
6.Ультракаин	85,7 – 5,06 136,0*	218 – 17,4 116,5	268 – 26,2 140,2*
7. Цитокартин	79,7 – 7,3 127,0*	188 – 19,1 100	183 – 30,0 95,8
8. Контроль	62,7 – 5,9 100	187 – 20,8 100	191 – 22,0 100

На табл. 5 видно, что большинство КАС вызывают повышение активности СОД. Она увеличивается под действием цитокартина на 27%, ультракаина на 36%, скандонеста на 66,5%, а под действием лидокаина на 100%. При этом имеется тенденция к увеличению активности СОД и в присутствии ксилостезина.

Активность и ГлР под влиянием ксилостезина и убистезина повышается на 24%, а ультракаина – на 40%. Наблюдается тенденция к её повышению (+14%) при действии лидокаина и септонеста. Остальные исследуемые КАС, не вызывают существенных изменений активности ни СОД ни ГлР.

Активность каталазы при этом практически не изменяется. Лишь под действием ультракаина она имеет тенденцию к увеличению (+16,5%, р< 0,2).

Подобное действие амидных КАС, по-видимому, можно объяснить сле-дующим образом: Во-первых, все ферменты являются белками с множеством полярных аминокислотных радикалов, за счет которых способны вступать во взаимодействие с различными полярными молекулами. КАС также положительно заряженные молекулы, способные образовывать прочные электростатические связи с карбоксильными группами аминокислотных радикалов фер-ментов. Такие связи вызывают изменения конформационной структуры фермента, делая его активный центр более или менее доступным для взаимодействия с молекулами субстрата. Во-вторых, у ферментов СОД, КА и ГлР в состав активных центров входят химические элементы, способные сами вступать во взаимодействие с КАС.

Итак, изучаемые КАС получены на основе базисных препаратов лидокаина, мипивакаина и артикаина, которые отличаются друг от друга: концентрацией действующего препарата, наличием вазоконстрикторов, парабенов и др. консервантов. Активность СОД повышается при действии лидокаина, скандонеста, ультракаина и цитокартина, возрастает активность и ГлР под действием ксилостезина, убистезина и ультракаина, а на активность КА испытуемые средства практически не действуют. Различная чувствительность СОД, КА и ГлР, к изучаемым КАС, по-видимому, связана с различной структурой их апоферментов и кофакторов, которые обуславливают степень сродства фермента и анестетического средства.

В ы в о д ы

1. Установлено, что у пациентов при одноразовом ополаскивании полости рта гигиеническими средствами: Корсодилом, Бальзамом «Весна плюс», Полиминеролом, Глистером, ASMB и 0,01% раствором KMnO4 в первые минуты после ополаскивания резко снижаются протективные свойства ротовой жидкости, о чем свидетельствует отрицательная динамика каталазы, глютатионредуктазы и церулоплазмина, не всегда они нормализуются спустя 30 минут.

2. Экспериментами in vitro установлено, что Галидор, АSMO и Корега табс обладают выраженным свойством ингибировать активность лизоцима, а у Бальзама «Весна плюс», Корсодила, ASMB, Полиминерола, Пародонтакса и Сенсодина оно проявляется слабее. При этом активность амилазы снижается под действием Бальзама «Весна плюс», Корсодила, Галидора, Сенсодина и ASMB, а Корега табс вызывает 100% её ингибирование. Активность пепсина существенно снижается под действием Корега табс и полностью ингибируется Сенсодином.

3. В экспериментах in vitro установлено, что многие гигиенические средства ротовой полости ингибируют ферменты антирадикальной защиты. Так, под действием Корсодила, Глистера, Полиминерола, Бальзама «Весна плюс», Корега табс, ASMO, ASMB и Пародонтакса существенно снижается активность супероксиддисмутазы, а активность глютатионредуктазы снижается в присутствии Бальзама «Весна плюс», Корсодила, ASMO, ASMB и Корега табс, в то время как Пародонтакс и Сенсодин её повышают. Большинство гигиенических средств ротовой полости на активность каталазы существенного влияния не оказывают, только ASMO, ASMB и Полиминерол её слабо ингибируют.

4. У детей со сформировавшейся аномалией прикуса часто отмечается неудовлетворительное гигиеническое состояние полости рта. Особенно оно выражено у детей с открытым, глубоким и сочетанными аномалиями прикуса, при которых в патологический процесс вовлекаются десневой край, альвеолярная десна и слизистые оболочки полости рта. У детей с мезиальным и дистальным прикусом гигиеническое состояние полости рта в удовлетворительном состоянии.

5. У пациентов с корректирующей прикус ортодонтической аппаратурой незначительно снижены способность ротовой жидкости гасить люминол-хемилюминисценцию и функция выделения нитратов. В то же время в ротовой жидкости существенно снижена активность каталазы и глютатионредуктазы, а церулоплазмин снижен при ношении только ортодонтических пластинок.

6. Местные анестетики, применяемые в поликлинических условиях, созданы в основном на базе лидокаина, артикаина и мепивакаина. Отличаются они друг от друга по количеству действующего препарата и наличию в них вазоконстрикторов. Подавляющее большинство местных анестетиков обладает выраженным ингибирующим действием на активность ферментов пищеварительных желез – амилазы и пепсина, а на лизоцим они практически не действуют.

7. Под действием местных анестетиков изменяется активность ферментов антирадикальной защиты крови. Так, активность супероксиддисмутазы при действии лидокаина, скандонеста, ультракаина и цитокартина повышается, возрастает активность и глютатионредуктазы под действием ксилостезина, убистезина и ультракаина, а на активность каталазы испытуемые средства не действуют. Различная чувствительность супероксиддисмутазы, каталазы и глютатионредуктазы к изучаемым местным анестетикам, по-видимому, связана с различной структурой их апофермента и кофактора, которые обуславливают степень сродства фермента и анестетического средства.

Практические рекомендации

Полученные результаты следует использовать в стоматологии как в поликлинических условиях, так и в специализированных стационарах лечебных учреждений, с целью диагностики тяжести воспалительного процесса, протекающего в полости рта, а также для назначения патогенетической терапии данной категории больных, с использованием гигиенических медикаментозных средств.

Наряду с этим, полученные новые научные разработки рекомендуется использовать в научных исследованиях по биохимии и стоматологии при изучении воспалительных процессов слизистых оболочек и мягких тканей органов полости рта, а также при обучении студентов и слушателей факультетов постдипломной подготовки медвузов.

Работы, опубликованные по теме диссертации

1. Сторожук И.А. Действие анестезиологических средств на способность сывороточных белков устранять свободнорадикальные формы кислорода //Материалы 62-й науч.-практ. конф. молодых ученых и студентов/ Кубанская гос.мед.академия.- Краснодар, 2001.- С.113-114.

2. Сторожук И.А. Влияние средств местной анестезии на активность эритроцитарных дегидрогеназ //Материалы 63-й науч.-практ. конф. молодых ученых и студентов/ Кубанская гос.мед.академия. - Краснодар, 2002.- С.102-103.

3. Сторожук И.А., Костина Я.Н. Действие анестезиологических средств на л-ХЛ сыворотки крови и на активность ферментов антиокислительной системы эритроцитов //Там же.- С.103.

4.Сторожук П.Г., Сторожук И.А., Чекалина Е.Н., Артамонов М.В. Действие стоматологических противовоспалительных ирригационных средств на факторы антирадикальной и антибактериальной защиты ротовой жидкости// Матер. ХШ Международ. конф. и дискусс. научного клуба «Новые информац. технологии в медицине, биологии, фармакологии, экологии».- Украина, Крым, Ялта-Гурзуф, 2005.- С.306-307.

5. Сторожук П.Г., Артамонов В.А., Артамонов М.В., Сторожук И.А. Непрямые (биохимические) методы оценки антибактериальных свойств слюны у детей при ношении средств корректирующих прикус зубов// Вестник интенсивной терапии.- 2005.- №5.- С.235-237.

6. Сторожук П.Г., Артамонов В.А., Артамонов М.В., Сторожук И.А. Хемилюминисценция и нитраты ротовой жидкости при использовании конструкций, корректирующих прикус зубов// Там же.- С 237-239.

7. Сторожук П.Г., Артамонов В.А., Сторожук И.А., Артамонов М.В. Простой способ определения антиоксидантных свойств стоматологических противовоспалительных средств// Успехи современного естествознания.-2005.-
№ 10., прилож. №1.- С.153-155.

8. Артамонов В.А., Артамонов М.В., Сторожук И.А. Стоматологический статус у детей с патологией прикуса// Матер. V Всероссийской. конфер. «Сто-матология детского возраста».- Ростов-на-Дону, 2005.- С.43-44.

9. Артамонов В.А., Артамонов М.В., Сторожук И.А. Секреция слюнных желез на механическое раздражение слизистой органов ротовой полости у детей, пользующихся ортодонтической аппаратурой// Там же. С.53-54.

10. Сторожук П.Г., Артамонов В.А., Сторожук И.А., Артамонов М.В. Действие патентованных стоматологических противовоспалительных средств на неспецифические защитные факторы слюны// Вестник интенсивной терапии.- 2006.- № 5.- С. 346-347.

11. Сторожук И.А., Артамонов В.А., Сторожук П.Г., Артамонов М.В. Действие стоматологических анестезиологических средств на активность церулоплазмина слюны и её способность гасить люминол-хемилюминисценцию// Матер. Х1V Междунар конфер. и дискуссионного научного клуба «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии».-Украина, Крым, Ялта- Гурзуф.-2006.- С.321-323.

*12. Сторожук И.А., Артамонов В.А., Сторожук П.Г., Артамонов М.В. Действие гигиенических средств на активность ферментов органов пищеварения// Кубанский научный медицинский вестник.- 2006.- № 5-6.- С.108-111.

13. Сторожук И.А., Быков И.М., Сторожук П.Г. К механизму действия местных анестетиков на активность ферментов антирадикальной защиты крови// Вестник интенсивной терапии.- 2007.- № 5.-С.207-209.

*14. Сторожук П.Г., Быков И.М., Сторожук И.А. Карпулированные средства местной анестезии в стоматологии и их действие на активность ферментов органов пищеварения// Кубанский научный медицинский вестник. -2007.- № 1-2 (94-95).- С.173-175.

15. Сторожук П.Г., Пехова В.А., Сторожук И.А. Основные механизмы действия хлорорганических пестицидов, зубных паст и ополаскивателей, содержащих хлоргексидин, на антибактериальные ферменты ротовой полости// Матер. ХV1 Междунар. конфер. и дискуссионного научного клуба. «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии».-Украина, Крым, Ялта-Гурзуф, 2008.- С.194-196.

Примечание: * - работа опубликована в журнале, включенном ВАК в Перечень ведущих рецензируемых научных журналов и изданий.

Список сокращений

АБЗ – антибактериальная защита

АРЗ – антирадикальная защита

АФК – активные формы кислорода

ASMB – антисептик нежный голубой

ASMO – антисептик нежный оранжевый

ВК – вазоконстриктор

ГлР – глютатионредуктаза

ГСРП – гигиеническое средство ротовой полости

КА – каталаза

КАС – карпулированные анестетики

л-ХЛ – люминол-Хемилюминисценция

МФ – микрофлора

ОПР – ополаскиватель полости рта

ПР – полость рта

РЖ – ротовая жидкость

СОД – супероксиддисмутаза

ЦП – церулоплазмин

Сторожук Илья Александрович

ФАКТОРЫ АНТИРАДИКАЛЬНОЙ И АНТИБАКТЕРИАЛЬНОЙ

ЗАЩИТЫ РОТОВОЙ ЖИДКОСТИ И КРОВИ
ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ ГИГИЕНИЧЕСКИХ СРЕДСТВ
И МЕСТНЫХ АНЕСТЕТИКОВ В СТОМАТОЛОГИИ

Автореферат

Подписано в печать 18.05.2009.
Формат 60841/16. Усл. печ. л. 1,16.

Бумага Maestro. Печать трафаретная.

Тираж 100 экз. Заказ № 9152.

Тираж изготовлен с оригинал-макета заказчика

в типографии ООО «Просвещение-Юг»

350059, г. Краснодар, ул. Селезнева, 2. Тел./факс: 239-68-31