Функциональное состояние нейтрофильны х лейкоцит ов периферической крови и асцитической жидкости при раке яичников
На правах рукописи
Абакумова Татьяна Владимировна
функциональное состояние Нейтрофильных лейкоцитов периферической крови и асцитической жидкости
при раке яичников
03.00.13 – физиология
16.00.02 – патология, онкология и морфология животных
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
кандидата биологических наук
Ульяновск-2009
Работа выполнена на кафедре физиологии и патофизиологии в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Ульяновский государственный университет
Научные руководители:
| доктор биологических наук, профессор Генинг Татьяна Петровна | |
| кандидат медицинских наук Антонеева Инна Ивановна | |
| Официальные оппоненты: | доктор биологических наук, професcор Напалкова Светлана Михайловна |
| доктор биологических наук, професcор Любин Николай Александрович | |
| Ведущая организация: | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Самарский государственный университет |
Защита диссертации состоится «20» ноября 2009г. в 14:30 часов на заседании диссертационного совета Д 212.278.07 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Ульяновский государственный университет по адресу: ул. Набережная реки Свияги,106, корпус 1, аудитория 703.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ульяновского государственного университета, а с авторефератом – на сайте ВУЗа http://www.uni.ulsu.ru
Отзывы на автореферат направлять по адресу: 432000, г. Ульяновск, ул.Л.Толстого,42, Ульяновский государственный университет, управление научных исследований
Автореферат разослан «19» октября 2009 г.
| Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук, доцент |  | С. В. Пантелеев |
Общая характеристика работы
Актуальность работы. Результаты экспериментальных и клинических исследований свидетельствуют о связи нейтрофилов с патогенезом злокачественного роста [Долгушин И.И., Бухарин О.В., 2001]. Наблюдаемые в процессе опухолевого роста изменения со стороны гранулоцитарного звена лейкоцитов периферической крови можно с равной степенью вероятности рассматривать как результат системного действия опухоли на организм, так и в качестве компонента самого процесса необластомогенеза. Наблюдаемые сдвиги могут быть также интерпретированы и как результат мобилизации механизмов противоопухолевой резистентности [Шаталин Ю.В., 2008].
По современным данным нейтрофильные лейкоциты, подвергаясь каскадным влияниям различных цитокинов, способны изменять свой количественный и субпопуляционный состав, перестраивать свою функциональную активность, секретировать многочисленные ферменты, медиаторы (в том числе и цитокины), активные формы кислорода, чтобы в конечном итоге реализовать свой физиологический потенциал – фагоцитоз и киллинг, уничтожая вирусы, бактерии, аллергены, неопластические клетки [Антонеева И.И., 2007; Нестерова И.В., Колесникова Н.В., 1999; Romani L. et al., 1997; Segal A.W., 2005]. Нейтрофилы, мигрируя в очаг развития опухоли, оказывают цитолитическое и цитотоксическое действие [Блиндарь В.Н., Зубрихина Г.Н., 2002; Swann J.B., 2007].
По данным литературы [Поцелуева М.М. с соавт., 2005], при прогрессировании неоплазмы наблюдается одновременное увеличение количества активированных нейтрофильных лейкоцитов в периферической крови. При этом роль микрофагов в прогрессировании неоплазмы остается неизвестной, так как выбрасываемые нейтрофильными гранулоцитами во внеклеточную среду – плазму крови и асцит [Baskic D., 2003, Kondera-Anasz Z. et al 2004], активные формы кислорода и лизосомальные ферменты оказывают повреждающее действие не только на опухолевые клетки, но и участвуют в мутагенезе, повреждая белки, нуклеиновые кислоты нормальных клеток организма, способствуя при этом пролиферации опухолевых клеток [Шаталин Ю.В., 2008; De Larco J.E. et al., 2004; Sapone А. et al., 2003; Zhang Q. et al., 1998]. В связи с вышеизложенным представляется актуальным исследование функционального состояния нейтрофилов асцитической жидкости (в зоне контакта эффекторных клеток и опухолевых клеток), а также периферической крови на поздних стадиях прогрессирования рака яичников.
Цель исследования. Оценить функциональное состояние нейтрофильных лейкоцитов периферической крови и асцитической жидкости при раке яичников.
Основные задачи исследования:
- Изучить динамику показателей кислородзависимого и анаэробного метаболизма нейтрофилов асцитической жидкости и периферической крови крыс в процессе роста асцитной опухоли яичников.
- Оценить фагоцитарную активность, кислородзависимый и анаэробный метаболизм нейтрофильных гранулоцитов асцитической жидкости и периферической крови женщин на поздних стадиях развития рака яичников.
- Оценить рецепторный статус нейтрофильный гранулоцитов асцитической жидкости и периферической крови при раке яичников.
- Определить уровень провоспалительных цитокинов асцитической жидкости и периферической крови женщин при раке яичников.
Научная новизна.
Впервые получены данные об изменении функционального состояния нейтрофилов асцитической жидкости и периферической крови женщин при раке яичников, а также о количестве и состоянии микрофагов асцитической жидкости и периферической крови крыс на разных стадиях опухолевого роста. Изучен рецепторный статус микрофагов асцитической жидкости при раке яичников. Также, впервые, оценен уровень цитокинов (IL-1, TNF-, IFN-) в асцитической жидкости и периферической крови женщин на поздних стадиях развития рака яичников и женщин-доноров. Установлены корреляционные связи уровня кислородзависимого и анаэробного метаболизма, а также фагоцитарной активности со стадией опухолевого процесса на модели прогрессирования асцитной опухоли яичников у крыс.
Научно-практическая значимость. Данные, полученные в результате оценки функционального состояния нейтрофильных лейкоцитов, их рецепторного статуса и уровня цитокинов в периферической крови и асцитической жидкости на поздних этапах прогрессирования неоплазмы, могут быть использованы в патофизиологии, теоретической и практической онкогинекологии при разработке схем диагностики и терапии прогрессирующего рака яичников.
Положения, выносимые на защиту:
- Функциональное состояние нейтрофилов периферической крови крыс зависит от стадии роста экспериментальной опухоли. При её прогрессировании в нейтрофилах снижается фагоцитарная активность нейтрофилов. При этом в асцитической жидкости снижается доля активных нейтрофилов, но усиливается в последних миелопероксидазный кислородзависимый метаболизм и уровень кислой фосфатазы.
- На поздних стадиях развития рака яичников у женщин в периферической крови увеличивается абсолютное количество нейтрофилов, способных продуцировать активные формы кислорода, но с низкой активностью ферментов микробицидных систем. В асцитической жидкости при переходе от III к IV клинической стадии снижается количество микрофагов, но увеличивается их АФК-генерирующая способность.
- Прогрессирование рака яичников сопровождается снижением в периферической крови количества CD15+, CD11a+ нейтрофилов при раке яичников, способных к адгезии, а также CD95+ нейтрофилов, готовых к апоптозу. В асцитической жидкости увеличивается количество нейтрофилов, экспрессирующих CD11a, и снижается CD11b+ нейтрофилов.
- Терминальные стадии рака яичников характеризуются разнонаправленным изменением уровня провоспалительных цитокинов (IL-1, TNF-) в периферической крови и асцитической жидкости в клинике.
Апробация работы. Материалы диссертации доложены на VI съезде физиологов Казахстана с международным участием (Караганда, 2007), VIII Международном конгрессе «Здоровье и образование в XXI веке; концепции болезней цивилизации» (Москва, 2007), III Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Фундаментальные аспекты компенсаторно-приспособительных процессов» (Новосибирск, 2007), Всероссийской конференции с международным участием «Медико-физиологические проблемы экологии человека» (Ульяновск, 2007), Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы физиологии, физического воспитания и спорта» (Ульяновск, 2008), II Международной научной конференции молодых ученых-медиков и I Международной дистанционной научной конференции «Инновации в медицине» (Курск, 2008), Международной научно-практической конференции «Современные проблемы экологической физиологии» (Алматы, 2008), IX Международном конгрессе молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» (Томск, 2008), II Съезде физиологов СНГ (Кишинев, 2008), VI Сибирском физиологическом съезде (Барнаул, 2008), I Всероссийской молодежной научной конференции «Молодежь и наука на Севере» (Сыктывкар, 2008), VIII Молодежной научной конференции «Физиология человека и животных: от эксперимента к клинической практике» (Сыктывкар, 2009), III Всероссийской конференции с международным участием «Медико-физиологические проблемы экологии человека» (Ульяновск, 2009).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 22 научные работы, из них 6 – в изданиях, рекомендованных ВАК.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 117 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов и списка литературы. Работа содержит 41 рисунок и 8 таблиц. Список литературы включает 242 источника, из которых 136 иностранных авторов.
Материал и методы исследования
Объектом исследования явились нейтрофилы (Нф) периферической крови и асцитической жидкости женщин в возрасте 31-79 лет при раке яичников III-IV клинической стадии по FIGO. Контрольную группу составляли практически здоровые женщины (30-60 лет). Группу активного контроля для определения цитокинов в асцитической жидкости составили пациенты с нераковым асцитом.
Экспериментальная модель асцитной опухоли яичников (АОЯ) (банк штаммов РОНЦ им Н.Н.Блохина (г.Москва), была воспроизведена на беспородных половозрелых самках крыс в возрасте 3 мес. массой 150 гр, путем перевивки асцита со средой 199 (1:1). Периферическая кровь и асцитическая жидкости отбирались под эфирным наркозом на 5-е (логарифмическая стадия) и 14-е сутки (терминальная стадия) после перевивки АОЯ.
Из периферической крови с гепарином (20ЕД/мл) [Кондратьева И.А., Самуилова В.Д., 2001] и осадка асцитической жидкости были изготовлены на предварительно обезжиренных стеклах мазки по стандартной методике [Бакшеев Н.С., 1977].
Цитохимические методы исследования. Проводили цитохимическое определение активности миелопероксидазы (МПО) с бензидином [Долгушин И.И., Бухарин О.В., 2001]. Определяли долю активных нейтрофилов (ДАН), продуцирующие активные формы кислорода в спонтанном варианте НСТ-теста [Карпищенко А.И., 1999; Земсков В.М., 1988]. Активность катионных белков (КБ) Нф проводили по методу М.Г.Шубича (1974) с бромфеноловым синим [Шубич М.Г., 1974].
Для цитохимического выявления кислой фосфатазы (КФ) применяли метод азосочетания по методу Burstone и Li с соавт. (1970) [Карпищенко А.И., 1999; Шубич М.Г., Нестерова И.В., 1980]. Для цитохимического определения активности ЩФ использовали метод азосочетания по Rutenburg с соавт. (1965) [Шубич М.Г., Нагоев Б.С., 1980]. В каждом мазке подсчитывали 100 или 50 Нф, среди которых определяли процент клеток, содержащих отложения соответствующего фермента и подсчитывали средний цитохимический коэффициент (СЦК) [Рудик Д.В., Тихомирова Е.И., 2006].
Для определения фагоцитарной активности применяли стандартную методику с использованием дрожжей [Хейхоу Ф.Г.Дж., Квалигино Д., 1983]. Вычисляли следующие показатели фагоцитоза: фагоцитарное число (ФЧ) по Райту – среднее число захваченных одним фагоцитом частиц, и фагоцитарный индекс (ФИ) по Гамбургеру – процент фагоцитов, принимающих участие в фагоцитозе к общему числу фагоцитов [Медведев А.Н., Чаленко В.В., 1991].
Иммунологические методы. Иммунофлуоресцентный метод основан на использовании моноклональных антител (МКА), конъюгированных с флуоресцеинизотиоционатом (ФИТЦ). На клеточной поверхности Нф имеются специфические антигенные детерминанты (дифференцировочные и активационные антигены), позволяющие выявить субпопуляцию этих клеток периферической крови и асцитической жидкости женщин с использованием МКА производства ООО «Сорбент» (г.Москва): СD11a, CD11b, CD15, CD95, меченых ФИТЦ. Регистрацию результатов производили визуально под флуоресцентным микроскопом (х700) с иммерсией.
Определение содержания цитокинов (IL-1,TNF-, IFN-) в сыворотке и асцитической жидкости проводили с помощью иммуноферментного анализа (ИФА) с коммерческими тест-системами на основе МКА к исследуемым цитокинам (ООО «Цитокин», г.Санкт-Петербург). Эти тест-системы основаны на «сэндвич»-методе твердофазного ИФА с применением в качестве индикаторного фермента (метки на антителах) пероксидазы хрена [Hro T., Lenhoff G., 1990].
Статистическая обработка. Для выявления различий между данными, полученными в экспериментальных и контрольных группах, а также результатов в зависимости от стадии развития опухоли применяли U-критерий Манна-Уитни. Статистически достоверными считались данные при р0,05. Для выявления взаимосвязи между компонентами бактерицидных систем нейтрофилов был проведен корреляционный анализ полученных данных. Коэффициент корреляции Спирмена (r) рассчитывали с помощью компьютерной программы математического анализа “Stata v.6.0”.
Результаты исследования и их обсуждение
Оценка функционального состояния нейтрофилов периферической крови и асцитической жидкости у крыс с перевиваемой асцитной опухолью яичников.
По мнению ряда авторов [Шаталин Ю.В., 2008; Enblad G. et al., 2007], развитие опухоли сопровождается увеличением нейтрофилов в периферической крови и увеличением миграции лейкоцитов в зону роста опухоли.
Полученные в эксперименте данные свидетельствуют о повышении абсолютного количества лейкоцитов и Нф в периферической крови, что согласуется с результатами В.С.Лавровой с соавт. (1992), а также снижении их в асцитической жидкости в ходе прогрессирования АОЯ крыс (табл.1). Увеличение Нф в крови может свидетельствовать об усилении иммунной реакции в процессе развития опухоли [Enblad G. et al., 2007]. Это может быть результатом увеличения уровня гематопоэтических факторов роста G-CSF или GM-CSF, которые также могут продуцироваться опухолевыми клетками [Чердынцева Н.В., 1989], нарастания времени транзита Нф в крови [Терещенко И.П., Кашулина А.П., 1993] и укорочения времени пребывания их в костном мозге [Лаврова В.С. с соавт., 1992]. Повышение продукции простагландина Е в процессе опухолевого роста также оказывает стимулирующее влияние на колониеобразующие единицы гранулоцитарно-макрофагального ростка [Терещенко И.П., Кашулина А.П., 1993]. Однако, в функциональном состоянии Нф наблюдаются разнонаправленные изменения.
Clark R.A. констатировал, что киллерный эффект Нф обусловлен секрецией МПО и Н2О2 [Мацнер Я., 1993]. Эти соединения в сочетании с внеклеточными галогенидами образуют реакционноспособные оксиданты, которые и повреждают клетки-мишени [Блиндарь В.Н., Зубрихина Г.Н., 2005]. Определение МПО позволяет судить о кислородзависимой бактерицидной активности Нф. Авторами отмечено увеличение уровня активности МПО в периферической крови животных-опухоленосителей [Лаврова В.С. с соавт., 1992]. Данные об активности данного фермента в Нф АЖ в доступной литературе не обнаружено. В результате наших исследованиях установлено, что уровень активности МПО Нф асцитической жидкости на терминальной стадии статистически значимо выше, чем на логарифмической стадии (табл.1). Возрастание активности МПО может отражать как противораковую активность Нф, так и их неспецифическую стимуляцию при воспалительной реакции, сопровождающей канцерогенез [Mosczynski Р., 1983]. Также обнаружена сильная корреляционная связь МПО микрофагов АЖ со стадией опухолевого роста (r=0,75).
Уровень активности МПО Нф периферической крови на ранней и поздней стадиях прогрессирования асцитной ОЯ у крыс статистически значимо не отличаются и статистически значимо ниже уровня фермента в Нф крови здоровых крыс. Существует мнение, что уменьшение уровня МПО в Нф периферической крови на поздних стадиях опухолевого роста может рассматриваться как следствие снижения способности к завершенному фагоцитозу [Герасимов И.Г., 2004].
Таблица 1
Показатели функциональной активности Нф периферической крови и АЖ крыс на разных стадиях прогрессирования АОЯ
| группа показатель | АЖ | Кровь | ||||||||
| Ранняя стадия АОЯ | Поздняя стадия АОЯ | Интактные животные | Ранняя стадия АОЯ | Поздняя стадия АОЯ | ||||||
| n | M±m | n | M±m | n | M±m | n | M±m | n | M±m | |
| Количество Lei х109/л | 12 | 14,3±2,05 | 11 | 8,4±0,41* | 7 | 9,5±2,28 | 7 | 8,9±1,67' | 8 | 22,4±2,41*' |
| Количество Нф х109/л | 11 | 5,0±0,10 | 11 | 1,6±0,04* | 7 | 1,5±0,07 | 7 | 3,9±0,11' | 8 | 7,3±0,03*' |
| Количество Нф, % | 11 | 35,0±4,54 | 12 | 19,2±7,94* | 10 | 16,1±2,82 | 12 | 44,1±6,08' | 8 | 32,7±0,92' |
| Активность МПО, СЦК | 15 | 1,3±0,08 | 23 | 2,2±0,09' | 11 | 2,0±0,15 | 16 | 1,5±0,12* | 34 | 1,7±0,08* |
| Уровень КБ, СЦК | 15 | 1,5±0,01 | 21 | 0,9±0,06' | 11 | 1,1±0,08 | 16 | 1,4±0,08* | 34 | 1,0±0,06' |
| Активность КФ, СЦК | 11 | 1,3±0,04 | 23 | 1,4±0,08 | 10 | 1,0±0,09 | 13 | 0,9±0,04' | 31 | 1,3±0,05* |
| Активность ЩФ, СЦК | 11 | 1,4±0,06 | 23 | 1,4±0,05 | 10 | 0,4±0,03 | 13 | 1,3±0,05* | 31 | 1,2±0,06* |
| ДАН, % | 13 | 66,5±6,51 | 13 | 40,7±2,57' | 9 | 7,3±1,59 | 18 | 49,0±4,53* | 29 | 49,2±4,08* |
| ФИ, % | 15 | 22,3±5,37 | 22 | 18,3±3,59 | 10 | 81,3±2,85 | 14 | 19,1±5,54* | 23 | 42,7±5,85'* |
| ФЧ, ус.ед. | 15 | 1,1±0,07 | 22 | 1,4±0,11' | 10 | 1,7±0,11 | 14 | 1,2±0,06* | 23 | 1,4±0,06'* |
Примечание: * - данные статистически значимо отличаются от аналогичных показателей на предыдущей стадии (р<0,05);
' – данные статистически значимо отличаются от соответствующих показателей у интактных животных (р<0,05).
Спонтанный вариант НСТ-теста характеризует степень «функционального раздражения» Нф in vivo, и основан на поглощении фагоцитами нитросинего тетразолия (НСТ) из среды с последующим его восстановлением внутри клетки до формазана. При контакте с чужеродной поверхностью in vitro Нф генерируют активные формы кислорода (АФК), и наиболее активные из них инактивируются [Герасимов И.Г., Игнатов Д.Ю., 2001]. По данным ряда авторов [Поцелуева М.М. с соавт., 1999; Шаталин Ю.В., 2008; di Carlo E. et al., 2001; Junankar S.R. et al., 2006], в процессе развития экспериментальных опухолей увеличивается общее количество Нф в циркулирующей крови и повышается удельная АФК-генерирующая их активность уже на ранних стадиях. А в АЖ на поздних стадиях наблюдалась гиперактивация Нф, которая приводит к скачкообразному многократному усилению продукции АФК [Шаталин Ю.В., 2008]. В то же время у мышей с имплантированными сингенными опухолями также отмечено нарушение показателей окислительного метаболизма, выражающееся в уменьшении числа активных Нф в спонтанном НСТ-тесте [Лаврова В.С. с соавт., 1992]. В ходе нашего исследования выявлено, что ДАН (%) асцитической жидкости, продуцирующих АФК, на ранней стадии прогрессирования АОЯ составляет 66,5±6,51% и статистически значимо снижается на поздней стадии до 40,7±2,57% (р<0,05). Корреляционная связь между МПО и ДАН в АЖ средняя отрицательная (r=0,37) А связь количества АФК-генерирующих Нф АЖ со стадией равна 0,53. ДАН, циркулирующих в крови у крыс на разных стадиях прогрессирования АОЯ статистически значимо выше, чем в крови интактных крыс (49,0±4,5 и 49,2±4,08 против 7,3±1,60 % соответственно, р1<0,001, р2<0,001). Однако, АФК в организме не только обеспечивают защиту от патогенов и трансформированных клеток, но и участвуют в мутагенезе, повреждая белки и нуклеиновые кислоты, и содействуют пролиферации опухолевых клеток.
Уровень КБ характеризует кислороднезависимую бактерицидную систему Нф, их способность к внутриклеточному и экстрацеллюлярному киллингу. КБ формируют водные каналы в мембранах, что приводит к лизису клетки. В ряде работ описано снижение содержание КБ Нф периферической крови с разными локализациями злокачественного процесса у людей и животных с опухолями [Лаврова В.С. с соавт., 1992]. По результатам наших исследований, уровень КБ Нф в АЖ и периферической крови на терминальной стадии статистически значимо ниже, чем на логарифмической. При этом, уровень КБ Нф в периферической крови крыс на ранней стадии опухолевого роста статистически значимо выше, чем в крови интактных животных (табл.1). Корреляционная связь со стадией АОЯ уровня КБ Нф АЖ была положительная средняя (r=0,68). Подобная динамика может быть связана с освобождением из Нф крови вследствие диффузии через целостную мембрану тех КБ, которые вышли в цитоплазму из гранул, либо с повышенной секреторной активностью НГ [Пауков В.С., Кауфман О.Я., 1983]. Причиной декатионизации Нф может быть и снижение синтеза КБ на стадии промиелоцита и миелоцита в результате действия на костный мозг факторов, выделяемых опухолью.
КФ – лизомальный фермент, катализирующий гидролиз сложных эфиров фосфорной кислоты и органических соединений. Уровень КФ в Нф периферической крови крыс на терминальной стадии развития ОЯ статистически значимо выше, чем на логарифмической. Активность фермента в Нф крови на ранней стадии не отличается от таковой в крови интактных животных, а на терминальной стадии статистически значимо выше, по сравнению с Нф периферической крови здоровых крыс. Выявление в зрелых Нф высокой активности КФ является косвенным показателем диссоциации в созревании ядра и цитоплазмы, а следовательно, и нарушение химической дифференцировки гранулоцитов у опухоленосителей, так как, в норме максимальная активность КФ отмечается в молодых клетках гранулоцитарного ряда [Соловьева Е.А., 1973]. Возрастание активности гидролитических ферментов может отражать противораковую активность Нф [Mosczynski Р., 1983]. При этом, наблюдается средней силы корреляционная связь уровня КФ Нф периферической крови (r=0,57) со стадией процесса.
ЩФ катализирует в щелочной среде освобождение фосфата из фосфомоноэфиров. Это мембранный гликопротеин, связанный с липидами. Было установлено, что фермент присутствует только в зрелых Нф человека и животных, его активность повышается при бактериальных инфекциях, воспалении, лейкемоидных реакциях и миелофиброзе, при хроническом миелолейкозе. В отличие от костно-мозговых предшественников – циркулирующие Нф и клетки краевого пула обладают высокой активностью ЩФ [Katoh M., 1992]. В Нф периферической крови крыс-опухоленосителей на ранней и поздних стадиях активность данного фермента статистически значимо выше такого в Нф крови интактных крыс (табл.1). Увеличение синтеза ЩФ в Нф периферической крови связано, по-видимому, с общебиологическим действием продуктов распада опухолевых клеток на организм.
В исследованиях Лавровой В.С. с соавт. (1992), показано нарушение фагоцитарной активности Нф по отношению к стафилококку как на этапе поглощения, так и на стадии переваривания у животных с перевиваемыми злокачественными опухолями и химически индуцированными новообразованиями. По нашим данным, поглотительная способность Нф периферической крови на терминальной стадии статистически значимо выше, чем на логарифмической стадии при прогрессировании ОЯ и статистически значимо ниже, чем Нф крови интактных крыс. ФЧ Нф асцитической жидкости и периферической крови на терминальной стадии статистически значимо выше, чем на логарифмической. ФЧ Нф в циркулирующей крови на разных стадиях прогрессирования ОЯ статистически значимо ниже, чем ФЧ Нф крови здоровых крыс (табл.1). Снижение способности Нф фагоцитировать дрожжевые клетки, может быть следствием перезагруженности микрофагов фагоцитированным материалом (очевидно, остатками разрушенных опухолевых клеток). С этим может быть связано истощение резервных возможностей Нф при раке [Бережная Н.М., 1988]. Выявленные нарушения фагоцитоза могут быть обусловлены дефектностью рецепторного аппарата клеток, а также нарушением механизмов переваривания вследствие недостаточности внутриклеточных ферментативных систем Нф [Блиндарь В.Н., 2000]. Сниженная фагоцитарная активность может быть связана с недостаточностью опсонизирующей активности сыворотки крови [Хаитов Р.М., Пинегин Б.В., 1995]. При прогрессировании экспериментальной опухоли наблюдается слабая (r=0,08) корреляционная связь ФИ Нф периферической крови со стадией, а ФЧ - средняя (r=0,32), а также связь средней силы (r=0,33) ФЧ Нф асцитической жидкости со стадией.
Функциональное состояние нейтрофилов периферической крови и асцитической жидкости при раке яичников.
Лейкоцитоз нейтрофильной природы отмечен на поздних стадиях у больных раком различной локализации [Лаврова В.С. с соавт., 1992; Антонеева И.И., 1997; Чердынцева Н.В. с соавт., 1989]. Проведенные нами исследования демонстрируют (табл.2) статистически значимое повышение абсолютного количества Нф в периферической крови на терминальных стадиях прогрессирования РЯ по сравнению с контрольной группой. В АЖ при переходе от III стадии РЯ к IV статистически значимо снижается абсолютное количество Нф.
Исследования не показали достоверных различий в количестве Нф, экспрессирующих рецептор СD11a (опосредующих хемотаксис и адгезию к клеткам-мишеням, эндотелию, эпителию) на Нф асцитической жидкости на III и IV стадии (табл.2). IV стадия развития РЯ характеризуется статистически значимым снижением CD11a+ Нф в периферической крови относительно таковых на предыдущей стадии и контрольной группы. Корреляционная зависимость количества CD11a+ нейтрофилов крови от стадии опухолевого процесса средняя (r=0,59), что, вероятно и является нарушения адгезивных способностей Нф и это является причиной снижения миграции их в АЖ.
Таблица 2
Количество Нф, экспрессирующих дифференцировочные антигены
| Параметр группа | абсолютное количество лейкоцитов (х109/л) | |||||
| контрольная группа | III стадия РЯ | IV стадия РЯ | ||||
| n | M±m | n | M±m | n | M±m | |
| АЖ | 7 | 13,7±4,18 | 7 | 5,8±0,50' | ||
| Периф.кровь | 10 | 6,4±0,68 | 10 | 11,1±3,60* | 7 | 9,7±1,33'* |
| относительное количество нейтрофилов (%) | ||||||
| АЖ | 7 | 39,3±10,02 | 7 | 12,7±8,80' | ||
| Периф.кровь | 10 | 55,9±4,40 | 10 | 68,0±8,31* | 7 | 64,3±6,20 |
| абсолютное количество нейтрофилов (х109/л) | ||||||
| АЖ | 7 | 5,3±0,84 | 7 | 1,0±0,05' | ||
| Периф.кровь | 10 | 3,6±0,03 | 10 | 7,5±0,30* | 7 | 6,2±0,09* |
| CD11a, % | ||||||
| АЖ | 7 | 67,3±6,76 | 6 | 71,3±3,78 | ||
| Периф.кровь | 20 | 61,5±2,36 | 9 | 66,8±4,08 | 7 | 44,3±6,95'* |
| CD 11b, % | ||||||
| АЖ | 7 | 71,4±6,36 | 6 | 60,3±4,80' | ||
| Периф.кровь | 17 | 65,2±3,5 | 9 | 60,7±5,05 | 7 | 57,1±5,05 |
| CD 15, % | ||||||
| АЖ | 7 | 57,1±6,79 | 6 | 71,0±6,25' | ||
| Периф.кровь | 17 | 58,8±4,60 | 9 | 33,2±5,02* | 7 | 40,0±7,17* |
| CD 95, % | ||||||
| АЖ | 6 | 49,6±4,73 | 6 | 57,3±2,75 | ||
| Периф.кровь | 7 | 58,0±5,98 | 6 | 39,3±9,91 | 6 | 34,2±7,62* |
Примечание: * - данные статистически значимо отличаются от данных в периферической крови контрольной группы (р0,05);
' - данные статистически значимо отличаются от аналогичных на предыдущей клинической стадии (р0,05).
CD11b – интегрин, который присутствует на поверхности Нф, и опосредует прилипание их к фибронектину и продуктам его расщепления, стимулированному эндотелию, а также опосредуют фагоцитоз частиц покрытых комплиментом. По данным Блиндарь В.Н. с соавт (2000), количество CD11b+Нф в периферической крови женщин при РЯ незначительно отклоняется от аналогичных показателей в контрольной группе. Была снижена экспрессия данного антигена у больных хроническим миелолейкозом [Блиндарь В.Н. с соавт, 2002]. По нашим данным количество CD11b+ Нф периферической крови больных РЯ и женщин-доноров сравнимо по величине. В АЖ на IV клинической стадии РЯ количество CD11b+Нф статистически значимо ниже по сравнению с их количеством на предыдущей стадии (табл.2). Количество таких нейтрофилов асцитической жидкости коррелирует со средней силой со стадией опухолевого роста (r=0,39). Нф, на мембране которых не выявляются рецепторы CD11b, не способны реагировать на сигналы, а, следовательно, не могут прикрепляться к фагоцитированному материалу – бактериям, опухолевым клеткам, иммунным комплексам [Блиндарь В.Н., 2002].
CD15 – сиалированный антиген Lex – поверхностный глипопротеид Нф, который служит лигандом для селектинов эндотелиальных клеток [Kerr M.A. et al., 1992], «распознают» нейраминидаза-чувствительные углеводы на поверхности других клеток и связываются с этими клетками углеводными лигандами [Hughes B.J. et al., 1992], осуществляя Са2+-зависимую межклеточную адгезию [Нестерова И.В. с соавт., 2007; Bevilacqua M.P. et al., 1993]. В ходе исследования выяснено, что количество CD15+ Нф, в периферической крови на III-ей (33,2±5,02 %) и IV-ой (40,0±7,17 %) клинических стадиях статистически значимо ниже такового в крови женщин контрольной группы (58,8±4,60 %). Экспрессия нейтрофилами асцитической жидкости CD15 рецепторов на IV стадии статистически значимо выше, чем на III стадии РЯ (71,0±6,25 против 57,1±6,79 %, р<0,05).
Экспрессия CD95 (Fas/Apo1) рецептора на мембране Нф отражает готовность к реализации апоптозной программы [Владимирская Е.Б., 1999]. Апоптоз является важным механизмом, который лимитирует агрессивный потенциал Нф в условиях естественной микросреды. Нф, вступившие на путь апоптоза, теряют способность к рецепторзависимой активности, стимул-индуцированной амебоидной активности, поглощению, хемотаксису, респираторному взрыву, секреторной дегрануляции [Dransfield I. et al., 1995]. Экспрессия антигена CD95 на Нф периферической крови женщин при прогрессировании РЯ статистически значимо снижается от 58,0±5,98 % – в крови контрольной группы, до 33,2±5,02 % – на III-ей и 40,0±7,17 % - на IV-ой клинических стадиях (р<0,05). В АЖ при прогрессировании РЯ количество Нф, готовых к апоптозу, статистически значимо не меняется (табл.2).
МПО в сочетании с пероксидом водорода особенно важно для разрушения липидных компонентов мембран, так как за счет окисления они обеспечивают повышение гидрофильности субстрата и доступность для протеазных систем. При оценке метаболизма нейтрофильных гранулоцитов (НГ) в исследованиях Бережной Н.М. с соавт. (1984), выявлено снижение активности МПО в Нф периферической крови больных раком легкого и прямой кишки. При прогрессировании РЯ в Нф периферической крови уровень МПО снижается, по сравнению с донорами [Антонеева И.И., 2007]. По данным наших исследований, в Нф периферической крови женщин при прогрессировании РЯ происходит снижение уровня МПО: 2,7±0,07 СЦК – у контрольной группы, 2,4±0,15 СЦК – на III стадии, 2,2±0,23 СЦК – на IV стадии (р<0,05) (рис.1). Уровень МПО в Нф АЖ на IV стадии статистически значимо не отличается от такового на III стадии (2,0±0,19 против 2,4±0,09 СЦК, р>0,05) (рис.2).
Рядом авторов отмечено увеличение количества активных клеток в спонтанной НСТ-реакции у больных с неоплазмами [Korenkiewicz A. et al., 2001]. По нашим данным, количество НСТ-положительных Нф в периферической крови больных женщин на III и IV стадиях статистически значимо выше, чем в крови женщин контрольной группы (58,6±8,48 и 48,2±4,73 % против 6,2±0,95 % соответственно, р1,2<0,05) (рис.1).
Рис.1. Ферментативная активность Нф периферической крови при прогрессировании РЯ
В АЖ ДАН на IV стадии статистически значимо повышается по сравнению с III стадией прогрессирования РЯ (56,3±9,33 против 44,0±6,12 %, р<0,05) (рис.2).
Уровень КБ в Нф асцитической жидкости статистически значимо не меняется при переходе от III (1,4±0,09 СЦК) к IV (1,7±0,14 СЦК) стадии РЯ (рис.2). В Нф периферической крови на поздних стадиях РЯ активность КБ статистически значимо снижается по сравнению с контрольной группой (1,3±0,12 СЦК – на III и 1,3±0,21 СЦК – на IV стадии против 1,8±0,06 СЦК, р1,2<0,05) (рис.1). Это согласуется с данными некоторых авторов [Антонеева И.И., 2007; Лаврова В.С. с соавт, 1992]. Механизм снижения КБ при опухолевом росте может быть двояким: в результате дегрануляции Нф под действием факторов, изменяющих проницаемость клеточных мембран; здесь определенную роль может играть циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК), концентрация которых в крови опухоленосителей, как правило, повышена. Взаимодействие ЦИК с рецепторами Нф приводит к дестабилизации мембран и выходу содержимого гранул. Причиной декатионизации Нф может быть и снижение синтеза КБ на стадии промиелоцита и миелоцита в результате действия ряда факторов опухолевого процесса на костный мозг; не исключено, что механизмы, ответственные за нейтрофилию, обусловливают нарушения гранулогенеза Нф [Kokura S. et al., 1996].
Активность КФ в Нф периферической крови больных женщин на III стадии статистически значимо увеличивается по сравнению с Нф периферической крови контрольной группы (1,5±0,08 против 1,0±0,03 СЦК, р<0,05), что согласуется с данными, полученные при раке пищевода и желудка [Хаитов Р.М., Пинегин Б.В., 1995]. И корреляция между динамикой опухолевого процесса и варьированием уровня КФ средней силы (r=0,56). В исследованиях Бережной Н.М. с соавт. (1984), выявлено снижение активности КФ в Нф больных раком легкого и прямой кишки. Нами установлено, что на IV стадии РЯ содержание КФ в Нф периферической крови статистически значимо снижается до 1,2±0,14 СЦК (р<0,05). Увеличение активности КФ в Нф рассматривается как неспецифический признак воспаления. Уровень КФ Нф асцитической жидкости женщин на III и IV стадиях РЯ статистически значимо не отличаются (1,2±0,09 и 1,4±0,15 СЦК соответственно, р>0,5).
Рис.2. Ферментативная активность Нф АЖ при прогрессировании РЯ
По данным некоторых авторов, активность ЩФ в Нф периферической крови снижается при прогрессировании неоплазмы различной локализации [Бережная Н.М. с соавт. 1984; Лаврова В.С. с соавт, 1992]. По результатам нашего исследования уровень ЩФ в Нф периферической крови у пациенток с РЯ не отличается от такового в контроле (1,2±0,07; 1,3±0,08 и 1,3±0,08 СЦК соответственно, р>0,5). Содержание ЩФ в Нф АЖ на III и IV стадиях статистически значимо не отличаются (1,3±0,09 и 1,2±0,12 СЦК соответственно, р>0,5).
При исследовании фагоцитарной активности Нф по отношению к микробным тест-культурам, разными авторами выявлено достоверное уменьшение поглотительной способности Нф у больных раком желудочно-кишечного тракта и других локализаций. Снижение переваривающей способности более выражено на поздних стадиях опухолевого роста и происходит раньше, чем угнетение поглощения [Лаврова В.С. с соавт, 1992]. У больных РЯ выявлено замедление фагоцитарной активности Нф периферической крови [Блиндарь В.Н. с соавт, 2000]. Имеются данные о неизменном ФИ Нф периферической крови больных РЯ на всех клинических стадиях, при одновременно увеличении ФЧ, по сравнению с донорами [Антонеева И.И., 2007]. По нашим данным, ФИ Нф периферической крови статистически значимо снижается на III-IV клинической стадии (55,5±7,15 и 53,9±9,03 против 70,8±3,59% в контроле, р<0,05). При этом, ФЧ на поздних стадиях РЯ статистически значимо не меняется по сравнению ФЧ Нф периферической крови женщин контрольной группы (1,7±0,24 и 2,2±0,28 соответственно, против 2,0±0,12, р>0,05).
Таблица 3
Фагоцитарная активность Нф периферической крови и асцитической жидкости на III и IV стадиях РЯ
| Периферическая кровь | АЖ | |||||||||
| контр.группа | III стадия | IV стадия | III стадия | IV стадия | ||||||
| n | M±m | n | M±m | n | M±m | n | M±m | n | M±m | |
| ФИ, % | 17 | 70,8±3,59 | 10 | 55,5±7,15* | 7 | 53,9±9,03* | 8 | 77,1±3,39 | 7 | 72,8±4,47 |
| ФЧ, ус.ед. | 17 | 2,0±0,12 | 10 | 1,7±0,24 | 7 | 2,2±0,28 | 8 | 2,0±0,18 | 7 | 1,9±0,15 |
Примечание: * - данные статистически значимо отличаются от соответствующих данных в контрольной группе (р0,05).
ФИ и ФЧ Нф асцитической жидкости на IV клинической стадии статистически значимо не отличаются от таковых на III стадии РЯ (ФИ: 72,8±4,47 против 77,1±3,39 %, р>0,05; ФЧ: 1,9±0,15 против 2,0±0,18 ус.ед., р>0,05).
Изменение концентрации цитокинов в периферической крови и АЖ при РЯ.
Цитокины представляют собой группу полипептидных медиаторов, участвующих в формировании и регуляции защитных реакций организма и функций Нф. По отношению к функционированию системы Нф цитокины принято делить на провоспалительные, работающие в очаге острого воспаления (IL-1, TNF-, GM-CSF, G-CSF), и участвующие в регуляторной цепи взаимодействия при хроническом воспалении (IL-6, IFN-) [Потапнев М.П., 1995].
В ходе ИФА мы обнаружили, что при прогрессировании РЯ в периферической крови уровень IL-1 повышается (от 69,16±1,543 пг/мл в контрольной группе до 99,43±5,809 пг/мл на III стадии и 99,28±4,892 пг/мл – на IV стадии патологического процесса (рис.3), что согласуется с данными литературы при других локализациях опухоли [Бережная Н.М., Чехун В.Ф, 2000; Mantovani G., et al., 1997; Tartour E., et al., 1995]. В АЖ, напротив, наблюдается статистически значимое снижение уровня IL-1 при прогрессировании неоплазмы (от 89,16±7,870 пг/мл в контрольной группе до 28,41±1,021 и 10,75±0,611 пг/мл на III и IV стадиях соответственно, р1,2<0,05) (рис.3).
Примечание: * - данные статистически значимо отличаются от данных в периферической крови контрольной группы (р0,05);
' - данные статистически значимо отличаются от данных на предыдущей стадии (р0,05).
Рис.3. Уровень IL-1 в периферической крови и асцитической жидкости женщин при РЯ
Провоспалительный цитокин IL-1 включается в патогенез анорексии, кахексии, анемии, которые в комплексе составляют один из выраженных синдромов опухолевой прогрессии [Lotzova E., et al., 1984; Norman R.J., Brannstorm M., 1996]. В то же время существуют данные о позитивной роли IL-1 в опухолевом росте [Oka M., et al., 1996].
В АЖ крыс при экспериментальном воспроизведении АОЯ на терминальной стадии количество IL-1 также статистически значимо снижается (7,49±0,118 против 16,20±7,039 пг/мл, р<0,05) (рис.4).
По данным авторов [Сорокин А.М., 1988], уровень сывороточного IFN- возрастает при наличии опухоли. Самый низкий уровень у здоровых женщин, самый высокий – у больных со злокачественными опухолями яичников.
Примечание: ' - данные статистически значимо отличаются от данных на предыдущей стадии (р0,05).
Рис.4. Уровень цитокинов в асцитической жидкости крыс при прогрессировании АОЯ
Примечание: * - данные статистически значимо отличаются от данных в периферической крови контрольной группы (р0,05);
' - данные статистически значимо отличаются от данных на предыдущей стадии (р0,05).
Рис.5. Уровень IFN- в периферической крови и асцитической жидкости женщин при РЯ
По данным авторов [Сорокин А.М., 1988], уровень сывороточного IFN- возрастает при наличии опухоли. Самый низкий уровень у здоровых женщин, самый высокий – у больных со злокачественными опухолями яичников. В ходе нашего исследования мы обнаружили, что на поздних стадиях прогрессирования РЯ статистически значимо снижается концентрация IFN- и в периферической крови (50,77±2,360 и 31,79±1,126 пг/мл – на III и IV стадиях соответственно против 129,59±32,665 пг/мл в контроле, р1,2<0,05) и в асцитической жидкости (200,91±8,157 и 122,10±6,131 пг/мл против 381,35±12,839 пг/мл в контроле, р1,2<0,05) (рис.5).
Содержание IFN- в АЖ крыс на терминальной стадии роста АОЯ статистически значимо ниже такового в АЖ на логарифмической стадии (111,65±2,700 против 327,672±8,556 пг/мл, р<0,05) (рис.4).
Примечание: * - данные статистически значимо отличаются от данных в периферической крови контрольной группы (р0,05);
' - данные статистически значимо отличаются от данных на предыдущей стадии (р0,05).
Рис.6. Уровень TNF- в периферической крови и асцитической жидкости женщин при РЯ
По результатам нашего исследования уровень TNF- в периферической крови на терминальных стадия прогрессирования РЯ снижается до 0 пг/мл по сравнению с таковым в крови контрольной группы (0,90±0,042 пг/мл). В асцитической жидкости при РЯ наблюдается статистически значимое снижение на III (6,07±0,142 против 67,33±4,748 пг/мл, р<0,05) и статистически значимое увеличение на IV клинической стадии уровня TNF- (78,42±5,741 против 6,07±0,142 пг/мл, р<0,05) (рис.6). Прирост концентрации, в частности TNF-, может обеспечиваться, по мнению ряда авторов [Антонов В.Г., Козлов В.К., 2004] двумя аддитивными механизмами: селекцией клеток, резистентных к цитотоксическому действию TNF- и тем, что экспрессируемые опухолевыми клетками антигены также индуцируют повышенную продукцию TNF-.
В АЖ крыс при прогрессировании АОЯ концентрация TNF- на логарифмической стадии составляет 16,20±0,703 пг/мл и статистически значимо снижается на терминальной стадии до 22,84±4,678 пг/мл (рис.4).
Таким образом, экспериментальный канцерогенез позволил оценить функциональное состояние нейтрофилов в периферической крови и асцитической жидкости при прогрессировании асцитной опухоли яичников крыс. При прогрессировании рака яичников нейтрофильные гранулоциты становятся некомпетентными по отношению к опухолевым клеткам, а продуцируемые ими супероксидные радикалы разрушают не только неопластические клетки, а их самих. Поэтому представляется перспективным развитие представлений о роли нейтрофилов в защите организма от раковой агрессии [Wakimoto H., 2003]. С осторожностью надо относиться к предложению стимуляции нейтрофилов при противораковой терапии [Drge W., 2002]. Эффективность противоопухолевого действия нейтрофильных гранулоцитов будет определяться этиологией и стадией опухолевого процесса [de Visser K.E. et al., 2006].
Выводы
1. В процессе роста асцитной опухоли яичников в нейтрофилах периферической крови крыс при снижении фагоцитарной активности увеличивается доля активных нейтрофилов и возрастает уровень кислой фосфатазы.
2. В асцитической жидкости на поздних стадиях опухолевого роста снижается АФК-генерирующая способность нейтрофилов, количество катионных белков и увеличивается уровень миелопероксидазы.
3. На поздних стадиях рака яичников в периферической крови женщин на фоне снижения фагоцитарной активности и увеличения доли активных нейтрофилов наблюдается дефицит миелопероксидазы и катионных белков микрофагов при одновременном повышении уровня щелочной фосфатазы. В асцитической жидкости возрастает количество нейтрофилов, продуцирующих активные формы кислорода.
4. У женщин при раке яичников имеет место снижение уровня экспрессии дифференцировочных маркеров CD11а, CD15 и CD95 на нейтрофилах периферической крови и уменьшение CD11b+ нейтрофилов в асцитической жидкости.
5. Развитие асцитной опухоли яичников в организме животного сопровождается снижением уровня провоспалительных цитокинов в асцитической жидкости. При прогрессировании рака яичников в периферической крови женщин увеличивается уровень IL-1, а в асцитической жидкости - TNF-.
Список опубликованных работ по теме диссертации
1. Абакумова, Т.В. Экспрессия рецепторов CD11, CD15 нейтрофилов периферической крови и асцитической жидкости больных раком яичников /И.И.Антонеева, Т.В.Абакумова //Российский иммунологический журнал. – 2008. – Т.2 (11), №2-3. – С.303.
2. Абакумова, Т.В. Закономерности количественных изменений NK-клеток, нейтрофильных лейкоцитов и их рецепторного статуса на поздних клинических стадиях рака яичников /И.И.Антонеева, Т.В.Абакумова, Н.П. Чеснокова //Аллергология и иммунология. – 2008. – Т.9, №3. – С.324-325.
3. Абакумова, Т.В. О патогенетической взаимосвязи процессов липопероксидации ферментативного звена антиоксидантной системы неоплазмы и функционального состояния нейтрофилов асцитической жидкости при прогрессировании рака яичников у крыс /И.И.Антонеева, Т.В.Абакумова, Д.Р.Арсланова, Н.П. Чеснокова /Вестник новых медицинских технологий. – 2008. - №4. – С.16-17.
4. Абакумова, Т.В. Функциональное состояние нейтрофилов и антиоксидантный статус у крыс с асцитной опухолью яичников /Т.П.Генинг, Д.Р.Арсланова, Т.В.Абакумова //Вестник новых медицинских технологий. – 2008. - №1. – С.32-33.
5. Абакумова, Т.В. Система ПОЛ-АО и функциональное состояние полиморфноядерных лейкоцитов асцитической жидкости при прогрессировании неоплазмы (в эксперименте) /И.И.Антонеева, Т.В.Абакумова, Д.Р.Арсланова //Вестник Тверского государственного университета. – 2009. – вып.12, №6. – С.7-10.
6. Абакумова, Т.В. Функциональное состояние и рецепторный статус нейтрофилов периферической крови и их взаимосвязи с процессами липопероксидации на поздних стадиях рака яичников /Т.В.Абакумова, И.И.Антонеева, Н.П. Чеснокова //Вестник Тверского Государственного Университета. – 2009. – вып.11, №2. – С.6-14.
7. Абакумова, Т.В. Анаэробный и кислородзависимый метаболизм нейтрофильных гранулоцитов периферической крови и асцитической жидкости у крыс с асцитной опухолью яичников на разных стадиях /Т.В.Абакумова, И.И.Антонеева //Материалы Международного конгресса молодых ученых «Науки о человеке», Томск, 2008. – С.81-82.
8. Абакумова, Т.В. Кислородзависимый метаболизм нейтрофильных гранулоцитов асцитической жидкости и периферической крови женщин при раке яичников /Т.В.Абакумова, И.И.Антонеева //Материалы Международной научно-практической конференции «Современные проблемы экологической физиологии», Алматы, 2008. – С.3.
9. Абакумова, Т.В. Кислородзависимый и анаэробный метаболизм нейтрофильных гранулоцитов асцитической жидкости и периферической крови крыс с перевитой опухолью яичника /Т.В.Абакумова, И.И.Антонеева //Материалы Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы физиологии, физического воспитания и спорта», Ульяновск, 2008. - С.3-6.
10. Абакумова, Т.В. Количество NK, нейтрофильных лейкоцитов и субпопуляционный состав микрофагов периферической крови женщин в репродуктивном периоде и в постменопаузе /И.И.Антонеева, Т.В.Абакумова, Н.П. Чеснокова //Научные труды II съезда физиологов СНГ, Кишинев, Молдова, 2008. – С.158.
11. Абакумова, Т.В. Метаболическая активность нейтрофилов асцитической жидкости и периферической крови женщин при раке яичников //Сборник материалов II Международной научной конференции молодых ученых-медиков, Курск, 2008. – С.155-156.
12. Абакумова, Т.В. Метаболическая и фагоцитарная активность нейтрофилов асцитической жидкости и периферической крови женщин при раке яичников /Т.В.Абакумова, И.И.Антонеева //Сибирский консилиум. – 2007. - №7(62). - С.20.
13. Абакумова, Т.В. Паранеопластические изменения в системе крови в процессе прогрессирования асцитной опухоли яичников у крыс /Т.В.Абакумова, И.И.Антонеева, Д.Р.Арсланова //Материалы VIII Молодежной научной конференции Института физиологии Коми НЦ УрО РАН «Физиология человека и животных:от эксперимента к клинической практике», Сыктывкар, 2009. – С.17-20.
14. Абакумова, Т.В. Состояние нейтрофильных гранулоцитов и антиоксидантной системы у крыс с асцитной опухолью яичников /Д.Р.Арсланова, Т.В.Абакумова //Материалы I Всероссийской молодежной научной конференции: «Молодежь и наука на севере», Сыктывкар, 2008. – С.192-194.
15. Абакумова, Т.В. Фагоцитарная активность нейтрофилов асцитической жидкости и периферической крови больных раком яичников /Т.В.Абакумова, И.И.Антонеева //Сборник материалов VIII Международного конгресса «Здоровье и образование в 21 веке; концепции болезней цивилизации», Москва, 2007. – С.87-88.
16. Абакумова, Т.В. Ферментативная активность нейтрофильных гранулоцитов асцитической жидкости и периферической крови женщин при раке яичников /Т.В.Абакумова, И.И.Антонеева //Материалы VI Сибирского физиологического съезда, Барнаул, 2008. - Т.1. – С.95.
17. Абакумова, Т.В. Функциональное состояние нейтрофилов асцитической жидкости и периферической крови женщин с раком яичников /Т.В.Абакумова, Т.П.Генинг //Материалы Всероссийской конференции с международным участием «Медико-физиологические проблемы экологии человека», Ульяновск, 2007. - С.3-4.
18. Абакумова, Т.В. Функциональное состояние и экспрессия рецепторов CD11, CD15 нейтрофилов асцитической жидкости и периферической крови больных раком яичников /Т.В.Абакумова, И.И.Антонеева //Материалы 43-й межрегиональной научно-практической конференции врачей, Ульяновск, 2008. – С.345.
19. Абакумова, Т.В. Функциональное состояние нейтрофилов периферической крови и асцитической жидкости у больных раком яичников /И.И.Антонеева, Т.В.Абакумова //Сборник материалов VI съезда физиологов Казахстана с международным участием, Караганда, 2007. – С.62.
20. Абакумова, Т.В. Бактерицидные системы нейтрофильных лейкоцитов асцитической жидкости и периферической крови при прогрессировании опухоли яичников крыс /И.И.Антонеева, Т.В.Абакумова, Т.П.Генинг //Сборник материалов III Всероссийской конференции с международным участием «Медико-физиологические проблемы экологии человека – Ульяновск, 2009. – С.16-17.
21. Абакумова, Т.В. Патогенетическая взаимосвязь активации процессов липопероксидации с измененпием рецепторного статуса и функционального состояния нейтрофилов периферической крови на поздних стадиях рака яичников /И.И.Антонеева, Т.В.Абакумова, Н.П.Чеснокова //Ученые записки УлГУ. Сер. Клиническая медицина. – 2008. – вып.14. – С.5-11.
22. Абакумова, Т.В.Роль провоспалительных цитокинов в развитии локальных эффектов при прогрессировании рака яичников /И.И.Антонеева, Т.В.Абакумова //Материалы 44 Межрегиональной научно-практической медицинской конференции, Ульяновск, 2009. – С.394-396.
Список сокращений
АЖ – асцитическая жидкость
АОЯ – асцитная опухоль яичников
АФК – активные формы кислорода
ДАН – доля активных нейтрофилов
ИЛ, IL – интерлейкин
ИФА – иммуноферментный анализ
ИФН, IFN – интерферон
КБ – катионные белки
КФ – кислая фосфатаза
МПО – миелопероксидаза
НСТ – нитросиний тетразолий
Нф – нейтрофилы
НГ – нейтрофильные гранулоциты
РЯ – рак яичника
СЦК – средний цитохимический коэффициент
ФИ – фагоцитарный индекс
ФНО, TNF – фактор некроза опухоли
ФЧ – фагоцитарное число
ЩФ – щелочная фосфатаза
CD – кластер дифференцировки
