МАТЕРИАЛЫ VIII МЕЖДУНАРОДНОЙ НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКОЙ КОНФЕРЕНЦИИ «ДОСТИЖЕНИЯ ФУНДАМЕНТАЛЬНЫХ НАУК В РЕШЕНИИ АКТУАЛЬНЫХ
ПРОБЛЕМ МЕДИЦИНЫ»

ТЕЗИСЫ ЛЕКЦИИ

УДК 616-006.04:616-08-039.32

© Дж.А. Радосевич, 2011

Дж.А. Радосевич 1,2

РОЛЬ ОКИСИ АЗОТА В ОПУХОЛЯХ ЧЕЛОВЕКА – МЕНЯЕМ СПОСОБ,
КОТОРЫМ МЫ ЛЕЧИМ БОЛЬНЫХ

1CMBOD, Стоматологический колледж, университет Иллинойса, г. Чикаго, США

2Медицинский колледж министерства по делам ветеранов Джесси Брауна, г. Чикаго, Илл., США

J.A. Radosevich

THE ROLE OF NITRIC OXIDE IN HUMAN TUMORS – CHANGING THE WAY WE TREAT PATIENTS

Nitric Oxide is a free radical that is produced by every normal cell in the body at very low levels. Depending on the cell and tissue type, the physiological role that Nitric Oxide plays can be very diverse. It is now universally accepted that human solid tumors arising throughout the body can also produce Nitric Oxide, and that there is a spectrum of expression within tumors arising within a given tissue, as well as over the course of disease progression. Nitric Oxide produced by tumors is significantly greater in magnitude than that produced by normal cells. In order to study the mechanisms by which this over expression of Nitric Oxide influenced the biology of these tumors cells, we set out to produce a model system which replicates what is seen in the clinical setting. In order to do this, we began by exposing comparatively low Nitric Oxide producing cell lines (parent) to long-term and increasing doses of Nitric Oxide. This resulted in cell lines that were adapted to comparatively high levels of Nitric Oxide (High Nitric Oxide or HNO cells), which remained morphologically identical to the parent cell line. The HNO cells in general all grow faster, clone better, have faster migration rates, are more resistant to chemotherapy drugs/X-rays/UV/heat/pH/Calcium levels etc. In addition, these HNO cells have tumor stem cell “like” properties including: ALDH expression, CD antigen expression, and Hoechst 33342 dye uptake negative. They are also programmed to be apoptosis resistant and along with HIF-1 up-regulation, they are also programmed to be more resistant to anaerobic conditions. Understanding the biological roles of Nitric Oxide in human tumors provides us with insights as to how we have to change the way we treat cancer patients.

Окись азота это свободный радикал, продуцируемый каждой нормальной клеткой организма в очень небольших количествах. В зависимости от типа клетки и ткани физиологическая роль, которую играет окись азота, может быть очень разной. Сейчас является общеизвестным, что солидные опухоли человека, возникающие повсюду в организме, могут также продуцировать окись азота, и что существует целый спектр экспрессии внутри опухолей, возникающих внутри конкретной ткани, так же, как и в процессе прогрессирования опухоли. Окись азота продуцируется опухолями в значительно большем количестве, чем нормальными клетками. Чтобы изучить механизмы, посредством которых эта избыточная экспрессия окиси азота влияет на биологию опухолевых клеток, мы разработали модельную систему, воспроизводящую то, что наблюдается в клинических условиях. Для этого мы начали подвергать линии клеток, продуцирующих относительно небольшие количества окиси азота (родительские), длительному воздействию окиси азота в возрастающих дозах. Это привело к получению клеточных линий, адаптированных к сравнительно высоким уровням окиси азота (High Nitric Oxide или HNO клеток), остававшихся при этом морфологически идентичными родительской клеточной линии. Клетки HNO вообще все растут быстрее, клонируются лучше, имеют более высокие скорости миграции, более резистентны к химиотерапевтическим препаратам, рентгеновскому облучению, ультрафиолету, прогреванию, уровням рН, кальция и т.д. Кроме того, эти клетки HNO обладают свойствами, «похожими» на свойства опухолевых стволовых клеток, а именно: экспрессией ALDH, экспрессией антигена CD и отсутствием поглощения краски Hoechst 33342. Они также программируются на резистентость к апоптозу и, вместе с повышенной регуляцией HIF-1, программируются на то, чтобы быть более резистентными к анаэробным условиям. Понимание биологических ролей окиси азота в опухолях человека позволяет нам предположить, как можно изменить способы лечения раковых больных.

Радосевич Джон Джеймс, доктор медицины, доктор философии, профессор кафедры стоматологии и диагностических наук университета Иллинойса Чикаго, США. Center for Molecular Biology of Oral Diseases; 801 S. Paulina; Chicago, Illinois, 60612, USA, e-mail: [email protected]

Автор выражает благодарность за помощь в работе своим коллегам: Abdullah Onul1,2,3, Eftychia Gouvas1,2,3, Kim Elseth1,2,3, Benjamin J. Vesper1,2,3, William Paradise1,2,3, G. Kenneth Haines III4, Humberto De Vitto5, Franklin D. Rumjanek5, and Gabor Tarjan6

1CMBOD, College of Dentistry, University of Illinois at Chicago, Chicago, IL, USA; 2Department of Oral Medicine and Diagnostic Sciences, College of Dentistry, University of Illinois at Chicago, Chicago, IL, USA; 3Jesse Brown VAMC, Chicago, IL, USA; 4Department of Pathology, Yale University School of Medicine, New Haven, CT, USA; 5Univeridade Federal do Rio de Janeiro, Instituto de Bioquimica Medica, Rio de Janeiro, Brazil; 6Department of Pathology, John H. Stroger, Jr. Hospital of Cook County, Chicago, IL, USA

ИННОВАЦИОННЫЕ ТЕХНОЛОГИИ В ДИАГНОСТИКЕ И ЛЕЧЕНИИ

УДК: 616.5-001-056.3-053.3:612.015.3

© Д.А. Безрукова, А.А. Джумагазиев, Н.А. Степина, 2011

Д.А. Безрукова1, А.А. Джумагазиев1, Н.А. Степина2

ОКИСЛИТЕЛЬНАЯ МОДИФИКАЦИЯ БЕЛКОВ СЛЮНЫ И СЫВОРОТКИ КРОВИ ДЕТЕЙ
С АТОПИЧЕСКИМ ДЕРМАТИТОМ

1ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России
2МУЗ «ГКБ № 4 им. В.И. Ленина» Детская поликлиника № 1, г. Астрахань

Нестабильность клеточных мембран является одним из важнейших звеньев в патогенезе многих хронических заболеваний, в том числе и атопического дерматита. Изучение окислительной модификации белков и их использование с прогностической целью является важным аспектом в решении данной проблемы.

Ключевые слова: аллергические болезни, атопический дерматит, прогнозирование, профилактика, дети.

D.A. Bezrukova, A.A. Djumagaziev, N.A. Stepina

OXIDATIVE MODIFICATION OF SALIVA AND BLOOD PROTEINS IN CHILDREN SUFFERING FROM ATOPIC DERMATITIS

The instability of cellular membranes is one of the most important section in pathogenesis of many chronic diseases, including athopic dermatitis. The study of oxidative modification of saliva and blood proteins in children suffering from atopic dermatitis and their use for prognosis is an important aspect in the decision of this problem.

Key words: allergic diseases, atopic dermatitis, prognosis, preventive maintenance, children.

По данным эпидемиологических исследований, выполненных в РФ, аллергическими болезнями (АБ) страдает до 25% детского населения [1]. Наиболее заметен рост заболеваемости среди детей первого года жизни, в группе которых атопия регистрируется в каждом третьем случае [7]. Начинаясь в раннем возрасте, атопический дерматит (АтД) у детей быстро принимает хроническое течение. По степени негативного влияния на качество жизни АтД сравним с такими серьезными состояниями, как псориаз, сахарный диабет, а материальный ущерб от этого заболевания является значительным, поскольку лечение АтД – серьезная финансовая проблема для семьи и здравоохранения в целом [6]. Актуальность проблемы также обусловлена патоморфозом течения АтД у современных детей. АтД является первой клинической манифестацией «аллергического марша» и существенным фактором риска формирования аллергического ринита и бронхиальной астмы у детей. Примерно у 40-50% детей с АтД к 3-4 годам развивается бронхиальная астма [2, 3]. При окислении белки могут образовывать альдегидные и кетонные группировки аминокислотных остатков [5]. В результате происходит либо образование продуктов с высокой функциональной активностью, либо инактивация активных центров ферментов, либо модификация белковых молекул, что может вносить определенный вклад в патогенез атопической патологии [3].

Цель исследования: определить содержание продуктов окислительной модификации белков (2,4-дифенилгидразонов) в сыворотке крови и в слюне у детей с АтД.

Материалы и методы. Изучены процессы перекисного окисления белков (ПОБ) в слюне среди детей первого года жизни: на доклиническом этапе у детей с риском АтД (n=78), при проявлениях АтД (n=53) и у детей с установленным диагнозом АтД (n=36). Забор смешанной слюны проводился не ранее чем через два часа после приема пищи, при условии отсутствия заболеваний со стороны респираторного тракта. Полученные данные сравнивались с аналогичными показателями условно здоровых детей (n=51).

Оценку интенсивности окислительной модификации белков проводили по методу R.L. Levine (1990) в модификации Е.Е. Дубининой (1995). Принцип последнего основан на реакции взаимодействия окисленных аминокислотных остатков белков с 2,4-динитрофенилгидразином (ДНФГ) с образованием производных 2,4-динитрофенилгидразона [5]. Используемые в настоящем исследовании длины волн (356, 370, 430 нм) позволили оценить уровень окислительной деструкции белков в слюне и крови.

Результаты. При обследовании детей грудного возраста с диагнозом АтД, независимо от стадии болезни, установлено, что интенсивность процессов ПОБ в сыворотке крови и слюне у них выше по сравнению с условно здоровыми детьми. Об этом свидетельствуют средние значения оптической плотности образовавшихся динитрофенилгидразонов, характеризующих интенсивность процессов ПОБ (табл. 1).

При получении достоверных различий в показателях ПОБ как в слюне, так и в сыворотке крови между группой детей с клиническими проявлениями АтД и группой условно здоровых детей, возникла необходимость сопоставить данные показатели. По результатам проведенного корреляционного анализа, можно отметить, что наиболее высокая корреляция (прямая, сильная) показателей ПОБ слюны и сыворотки крови отмечена в группе детей с установленным АтД при 356 нм–r=+0,98 (р<0,01), в группе условно здоровых данный показатель несколько ниже, но связь между признаками остается прямой и сильной – r=+0,83 (р<0,01). Наименее выражена корреляция ПОБ слюны и сыворотки крови в группе больных АтД и условно здоровых детей при 430 нм, однако они остаются прямыми средней силы – r=+0,58 (р<0,02), и r=+0,35 (р<0,05) соответственно.

Таким образом, манифестация АтД сопровождается достоверным повышением всех видов карбонильных производных, как в сыворотке крови, так и в смешанной слюне. После полученной достоверной разницы в результатах уровня ПОБ в слюне детей первого года жизни с клиническими проявлениями АтД и у здоровых детей, были проанализированы показатели ПОБ в слюне у детей в доклинический период АтД. Установлено, что среди детей с реализацией риска АтД на первом году жизни, показатели ПОБ в среднем были достоверно выше в доклиническом периоде и составляли 0,088±0,010 (при 356 нм), 0,091±0,020 (при 370 нм), 0,390±0,009 (при 430 нм) и были сопоставимы с показателями ПОБ детей с клиническими проявлениями АтД (0,093±0,010; 0,096±0,010; 0,046±0,007; р>0,05), что позволило расценивать данные процессы как напряженность резервно-адаптационных возможностей организма, готовых к срыву в виде проявлений АтД.

Учитывая низкие концентрации белкового компонента в слюне, все полученные результаты выражались в цифрах, значительно меньше единицы (табл. 1).

Таблица 1

Показатели ПОБ в слюне и сыворотке крови в единицах оптической плотности у грудных детей (М±m)

Группа	Показатели ПОБ
	356 нм		370 нм		430 нм
	в слюне	в крови	в слюне	в крови	в слюне	в крови
Здоровые	0,043±0,006	3,830±0,100	0,041±0,006	3,290±0,100	0,027±0,008	2,080±0,100
Общая гр. с АтД	0,093±0,010 (p<0,005)*	4,330±0,070 (p<0,001)*	0,096±0,010 (p<0,05)*	2,940±0,090 (p<0,02)*	0,046±0,007 (p<0,05)*	2,340±0,060 (p<0,05)*

Таким образом, исследование уровня показателей интенсивности перекисного окисления белков в слюне можно рассматривать в качестве неинвазивного метода динамического контроля за состоянием здоровья детей первого года жизни. Ограничением данного метода является возрастной аспект, так как слюнные железы новорожденного недостаточно дифференцированы и полноценно начинают функционировать только с 3–4 месяцев жизни; в первые месяцы жизни слюна выделяется в небольшом количестве.

Интерпретируя вышеуказанное в числовые выражения, можно отметить, что процессы ПОБ в смешанной слюне и сыворотке крови у детей первого года жизни можно использовать в качестве дополнительных прогностических коэффициентов (ПК) развития АтД. ПК может иметь положительный (+) и отрицательный (-) знак. При работе с прогностическими таблицами необходимо суммировать ПК, соответствующих признакам, выявленным у конкретного ребенка. При достижении суммы уровня +13,0 баллов и более прогнозировалась высокая (95% и более) вероятность развития АтД на первом году жизни. Полученные результаты при общей сумме от (+10) до (+13) баллов также должны быть учтены при проведении профилактических мероприятий, поскольку данные свидетельствуют с 90-95% вероятностью о реализации риска прогнозируемого АтД на первом году жизни ребенка [4].

Как показывает исследование, данные ПК имеют высокую и средней силы значимость. Значения ПК снижаются с уменьшением длины волны, так как с увеличением оптической плотности показатели ПОБ становятся более чувствительны к другим изменениям в состоянии ребенка, становятся более вариабельны, менее специфичными (табл. 2).

Таблица 2

Прогностическая информативность окислительной модификации белков (ОМБ) слюны и сыворотки крови для развития АтД у детей первого года жизни

Прогностический признак	Диапазон признака	ПК
ОМБ сыворотки крови выше 4,33 (ед. опт. плотности) при длине волны 356 нм	Да/Нет	7,46 / -1,02
ОМБ сыворотки крови выше 2,94 (ед. опт. плотности) при длине волны 370 нм	Да/Нет	5,32 / -0,78
ОМБ сыворотки крови выше 2,34 (ед. опт. плотности) при длине волны 430 нм	Да/Нет	3,89 / -0,69
ОМБ слюны выше 0,096 (ед. опт. плотности) при длине волны 356 нм	Да/Нет	6,94 / -0,87
ОМБ слюны выше 0,093 (ед. опт. плотности) при длине волны 370 нм	Да/Нет	4,13 / -0,71
ОМБ слюны выше 0,046 (ед. опт. плотности) при длине волны 430 нм	Да/Нет	2,87 / -0,46

Наибольшую прогностическую значимость имеют показатели ПОБ в сыворотке крови при 356 нм (ПК=+7,46), и в слюне при 356 нм (ПК=+6,94).

Выводы. Окислительная деструкция белков является доклиническим индикатором повреждения ткани при формировании атопического дерматита у детей грудного возраста. Исследование перекисного окисления белков в слюне у детей первого года жизни может рассматриваться как неинвазивный метод динамического контроля за состоянием здоровья данной категории детей, а также использовать в качестве дополнительных критериев при составлении прогноза атопического дерматита.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Балаболкин И.И. Современный взгляд на проблему лечения аллергических болезней у детей // Российский педиатрический журнал. – 2007. – № 1. – С. 4-8.
2. Гребенюк В.Н. Антигистаминные препараты в патогенетическом лечении аллергодерматозов у детей // Вестник дерматологии и венерологии. – 2005. – № 3. – С. 58-60.
3. Губский Ю.И., Беленичев И.Ф., Левицкий Е.Л. [и др.]. Токсикологические последствия окислительной модификации белков при различных патологических состояниях // Сучаснi проблеми токсикологii. – 2005. – № 3. – С. 33-36.
4. Гублер Е.В. Информатика в патологии, клинической медицине и педиатрии. Ленинград: Медицина, 1990 176 с.
5. Дубинина Е.Е., Шугалей И.В. Окислительная модификация белков // Усп. совр. Биол. – 1993. –
   Т. 113, № 1. – С. 71-79.
6. Намазова-Баранова Л.С. [и др.] Оценка влияния атопического дерматита на качество жизни семьи больного ребенка // Педиатрическая фармакология. – 2010. – Т. 7, № 4. – С. 62-67.
7. Ревякина В.А. Перспективы развития детской аллергологической службы в РФ // Аллерг. и иммунол. в педиатр. – 2003. – № 4. – С. 7-9.

Безрукова Дина Анваровна, кандидат медицинских наук, доцент кафедры поликлинической педиатрии с курсом семейной медицины ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, 121, тел. (8512) 52-41-43, e-mail: [email protected]

Джумагазиев Анвар Абдрашитович, доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой поликлинической педиатрии с курсом семейной медицины ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, 121, тел. (8512) 52-41-43, e-mail: [email protected]

Степина Наталья Анатольевна, заведующая детской поликлиникой № 1 МУЗ «ГКБ № 4 им. В.И. Ленина», Россия, 414011, г. Астрахань, ул. Украинская, 12, тел. (8512) 31-78-23, e-mail: [email protected]

УДК 616-092.19

© Т.Б. Воробьева, 2011

Т.Б. Воробьева

Иммунохимическая характеристика внутриутробной гипоксии плода
при переношенной беременности

ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России

Показано, что внутриутробная гипоксия плода сопровождается снижением уровня трофобластического бета-глобулина и термостабильной плацентарной щелочной фосфатазы в плаценте, более заметным при асфиксии плода, как при срочных, так и запоздалых родах, а также снижением альфа-фетопротеина в пуповинной сыворотке при угрожающей или наступившей асфиксии плода.

Ключевые слова: гипоксия плода, переношенная беременность, белки плаценты и плода.

T.B. Vorobyeva

IMMUNOCHEMICAL CHARACTERISTIC OF INTRAUTERINE FETAL HYPOXIA AT POSTTERM PREGNANCY

It is shown that the fetal hypoxia characterized by decreasing of trofoblastspesific beta-globulin and termostabile placental alkaline phosphatase in placental tissue, more noticed at fetal asphyxia as in delivery at term and in delayed labor, as well as by decreasing of alfa-fetoprotein in fetal blood at fetal asphyxia.

Key words: fetal hypoxia, postterm pregnancy, fetal and placental proteins

Внутриутробная гипоксия плода и асфиксия новорожденного являются серьезным осложнением беременности и занимают 21-45% в структуре всей перинатальной патологии [2]. Причиной гипоксии плода могут быть деструктивные процессы в плаценте. Старение плаценты сопровождается снижением скорости синтеза белков, необходимых для функционирования фетоплацентарного комплекса. Поэтому часто гипоксия плода развивается при переношенной беременности и приводит к антенатальной гибели плода, которая увеличена по сравнению со срочными родами в 3-5 раз [1, 2]. Важную роль в развитии и созревании плода играют эмбриоспецифические (альфа-фетопротеин) и плацентарные (термостабильная щелочная фосфатаза, трофобластический бета-глобулин) белки [3, 4, 5, 6].

Цель исследования: изучить характер изменений эмбриоспецифического и плацентарных белков в кровотоке матери и плода при запоздалых родах, осложнившихся гипоксией плода.

Материалы и методы. Исследовано 75 женщин с запоздалыми родами и 60 женщин со срочными родами. С целью уточнения срока беременности изучался анамнез рожениц (соматический и акушерский), проводилось клиническое обследование женщин. В сыворотках крови рожениц и плодов и в плаценте иммунохимическими методами исследовали концентрации 3-х белков. Для количественного определения трофобластического бета-глобулина (ТБГ) и термостабильной плацентарной щелочной фосфатазы (ТПЩФ) использовали оригинальные тест-системы, сформированные с антисыворотками, полученными иммунизацией кроликов, а для определения альфа-фетопротеина (АФП) – коммерческие моноспецифические тест-системы.

Результаты. Внутриутробная гипоксия плода – самое частое осложнение запоздалых родов – выявлена у 44 (58,7%) женщин с переношенной беременностью (I группа) и у 14 (23,3%) женщин, родивших в срок (II группа). Асфиксия наблюдалась в 11 случаев запоздалых родов (14,7%) и только в 5 – срочных родов (8,3%) (p<0,05).

Уровень АФП в пуповинной сыворотке снижался при угрожающей или наступившей асфиксии плода как в I, так и во II группе (табл.). В случае же хронической гипоксии плода уровень этого белка при срочных родах снижался меньше, а в условиях перенашивания даже повышался (p<0,05).

ТБГ в сыворотке матери при гипоксии несколько повышался как при срочных, так и в случае запоздалых родах, но колебания значений в индивидуальных образцах были весьма велики (p<0,05). Вероятно, это обусловлено нарушением маточно-плацентарного барьера и повышенным попаданием белка в материнское русло. Более показательно изменение ТБГ при наличии гипоксического синдрома в ткани плаценты. Содержание белка в этих пробах снижалось при хронической гипоксии плода и становилось еще меньше при асфиксии плода (p<0,05).

Таблица

Содержание белков фетоплацентарного комплекса в биопробах

Срок беременности (недели)	Характер осложнения	АФП в пуповинной сыворотке	ТБГ в сыворотке роженицы	ТПЩФ в сыворотке роженицы	ТБГ в плацентарной ткани	ТПЩФ в плацентарной ткани
40-42	Хр.гипоксия	38,8±7,2	195,0±39,6	10,0±1,9	60,0±2,0	1260,0±403,6*
	Асфиксия	32,0±13,2	176,0±39,2	10,0±0	40,0±0	592,0±201,8*
	Без гипоксии	43,2±4,3	185,0±13,0	10,0±0,6	66,8±6,0	1961,8±199,2
42-44	Хр. гипоксия	26,0±3,2	132,0±11,0	14,3±1,1	39,3±3,2	703,4±107,7
	Асфиксия	19,0±2,8	136,0±26,1	14,0±2,1	34,0±3,1	504,0±118,7
	Без гипоксии	23,0±2,5	119,5±15,0	12,3±1,2	41,6±3,5	644,4±83,1

Примечание: p>0,05; * - p<0,05

Концентрация ТПЩФ в сыворотке при родах в 40-42 недели не зависела от наличия гипоксии плода, а при родах в 42-44 недели несколько повышалась при наличии этого осложнения. В плацентарной ткани количество фермента падало на 30% при осложнении срочных родов гипоксией плода и достигало трети от исходного уровня при угрожающей или начавшейся асфиксии. В условиях переношенной беременности снижение уровня ТПЩФ нами было отмечено лишь при асфиксии плода. При хронической гипоксии плода этот показатель оказался чуть выше, чем в родах без гипоксии плода.

Выводы. При асфиксии как доношенного, так и, в меньшей степени, перезрелого плода уменьшается концентрация ТБГ и ТПЩФ в ткани плаценты, снижается АФП в пуповинной сыворотке.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Булиенко С.Д., Степанковская Г.К., Фогель П.И. Недонашивание и перенашивание беременности. – Киев: «Здоров’я», 1982. – 176 с.
2. Неонатология: национальное руководство / под ред. Н.Н. Володина. – М.: ГЭОТАР-Медиа, – 2007. – 773 с.
3. Никулина Д.М., Афанасьева А.В., Парфенова Л.Ф. Идентификация белков «зоны беременности» в биологических жидкостях матери и плода при нормально развивающейся беременности // Акушерство и гинекология. – 1976. – № 10. – С. 58-61.
4. Никулина Д.М., Мамиев О.Б., Воробьева Т.Б., Степанов Б.Г. Способ диагностики осложнений беременности и прогнозирования состояния плода и новорожденного: пат. 2120636 Рос. Федерации. № 95115489/14(026474); заявл. 04.09.1995; опубл. 20.10.1998. – 6 с.
5. Сухарев А.Е., Вайчулис Ю.В., Асфандияров Р.И. [и др.] Плацентарная щелочная фосфатаза и острофазовые белки в клинико-лабораторной оценке факторов повышенного тромбогеморрагического риска в акушерстве. – М. - Астрахань, 2006. – 282 с.
6. Татаринов Ю.С. Прошлое и будущее онкофетальных белков. Лекция к актовому дню института. – М., 1988. – 23 с.

Воробьева Татьяна Борисовна, кандидат медицинских наук, доцент кафедры биохимии с курсом клинической лабораторной диагностики ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, 121, тел. (8512) 52-41-43, e-mail: [email protected]

УДК 611.611-013:577.3:547.96

© О.Г. Ганина, Л.Г. Сентюрова, Л.С. Суркова 2011

О.Г. Ганина, Л.Г. Сентюрова, Л.С. Суркова

ХАРАКТЕРИСТИКА ОБЩЕГО БЕЛКА В ЭПИТЕЛИОЦИТАХ НЕФРОНА В ВОЗРАСТНОМ
АСПЕКТЕ У МЛЕКОПИТАЮЩИХ

ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России

При изучении содержания и распределения общего белка в эпителиоцитах нефрона выявлены морфофункциональные особенности его отделов в процессе постнатального онтогенеза.

Ключевые слова: нефрон, эпителиоцит, общий белок.

O.G. Ganina, L.G. Sentyurova, L.S. Surkova

CHARACTERISTIC OF TOTAL PROTEIN IN NEPHRON EPITHELIAL CELLS IN MAMMALS
DEPENDING ON AGE

In the study of the total protein levels and distribution in the epithelial cells of nephron some morphofunctional peculiarities of its parts during postnatal ontogenesis were determined.

Key words: nephron, epithelial cell, total protein.

По данным статистического анализа заболеваемости населения РФ заболевания почек прогрессируют как в целом по стране, так и конкретно в Астраханской области [1, 2]. Почки являются одним из основных органов – мишеней для изменяющихся факторов внешней среды и поддержания регуляции внутреннего гомеостаза организма. Поэтому интерес к ним исследователей не случаен [3].

Цель исследования: изучение белкового обмена в эпителиоцитах нефрона как показателя морфофункционального становления органа в постнатальном онтогенезе.

Материал и методы. Исследование было выполнено на 36 интактных белых беспородных крысах самцах. Пробы брали на 1-е сутки (n=9) массой 51±7 г, 7-е сутки (n=9) массой 112±8 г, 14-е сутки (n=9) массой 148 ±6 г, 28-е сутки (n=9) массой 215±8 г в 16:00 часов. Животные содержались в условиях вивария, согласно правилам лабораторной практики при проведении доклинических исследований в РФ. Кормление производилось в утренние и вечерние часы. Материал фиксировали в 10%-м растворе формалина, заливали в парафин. Срезы толщиной 3-5 мкм окрашивали гематоксилином и эозином, альциановым синим и прочным зеленым при pH 2,2. Гистологические препараты фотографировали при помощи сканирующего микроскопа – фотометр МФТХ-2М на базе электронного микроскопа IEM-100. Анализ содержания общего белка проводился с помощью программы «Морфолог». При морфологическом исследовании оценивали топографию и содержание белка в эпителиоцитах нефрона в 5-ти точках: эпителиоциты капсулы Шумлянского-Боумена нефрона, проксимального извитого канальца, толстого сегмента петли Генле, дистального извитого канальца и собирательных трубок. Для каждого участка нефрона было получено по 1000 срезов и с них было снято 100 измерений.

Результаты. При анализе результатов исследования было установлено, что у млекопитающих в постнатальный период развития топография общего белка в эпителиоцитах всех отделов нефрона однотипна. Он распределен по всей клетке достаточно равномерно в виде диффузной окраски цитоплазмы. Визуально в постнатальном онтогенезе нами не было выявлено существенной динамики содержания общего белка. Однако при количественной оценке содержания общего белка цитофотометрическим способом была обнаружена выраженная динамика. Так, в процессе постнатального онтогенеза статистически достоверной динамики содержания и распределения белка в эпителиоцитах нефрона капсулы Шумлянского-Боумена нами не было выявлено: в 1-е сутки количество белка составляло 19±3 у.е., на 7-е сутки – 16±4 у.е., 14-е сутки – 17±3 у.е., 28-е сутки – 16±2 у.е. Иная динамика наблюдается в эпителиоцитах проксимального отдела нефрона: в 1-е сутки количество белка составляло 42±1 у.е., на 7-е сутки последовало увеличение до 80±2 у.е., что является статистически значимым, однако на 14-е сутки количество общего белка заметно снизилось 62±3 у.е. (p<0,05), а далее количество общего белка статистически достоверно не изменялось. В толстом сегменте петли Генле соответственно показания содержания общего белка были: 21±2 у.е., 35±4 у.е., 46±5 у.е., 39±4 у.е. Прослеживается статистически достоверная разница увеличения белка вплоть до 14 суток с последующим снижением (p<0,05).

В отличие от проксимального отдела в эпителиоцитах дистального отдела нефрона не наблюдалось существенных колебаний содержания и распределения общего белка (p>0,05),. В 1-е сутки количество белка составляло 25±3 у.е., на 7-е сутки – 25±2 у.е., 14-е сутки – 30±5 у.е., 28-е сутки – 21±2 у.е.

Аналогичная динамика наблюдалась и в эпителиоцитах собирательных трубок (p>0,05),: 1-е сутки количество белка составляло 13±4 у.е., на 7-е сутки – 14±2 у.е., 14-е сутки – 13±3 у.е., 28-е сутки – 15±4 у.е.

Выводы. Содержание общего (суммарного) белка может являться показателем функциональной активности структурного отдела нефрона. Содержание общего (суммарного) белка в проксимальном отделе нефрона подвержено возрастным колебаниям.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Мирошников В.М. Важнейшие проблемы урологии. М., 2004. 240 с.
2. Храйчик Д.Е., Седор Д.Е., Ганц М.Б. Секреты нефрологии. – СПб.: Невский Диалект, 2001. –
   303 с.
3. Чиж А.С. Нефрология в терапевтической практике. URL: http:/www/ uroweb.ru (дата обращения: 04.04.2011).

Ганина Ольга Григорьевна, старший преподаватель кафедры информатики, физики и математики ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, 121, тел. (8512) 52-53-25

Сентюрова Людмила Георгиевна, доктор медицинских наук, профессор, заведующая кафедрой медицинской биологии ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России, Россия, 414000,
г. Астрахань, ул. Бакинская, 121, тел. (8512) 52-53-25

Суркова Лариса Семеновна, кандидат медицинских наук, профессор АГМА, заведующая кафедрой информатики, физики и математики ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, 121, тел. (8512) 52-53-25

УДК 612.82:616-053.81

© Н.А. Горст, С.Н. Лычагина, В.Р. Горст, М.В. Полукова, А.М. Варганова, 2011

Н.А. Горст1, С.Н. Лычагина1, В.Р. Горст2, М.В. Полукова3, А.М. Варганова1

ИНДИВИДУАЛЬНО-ТИПОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ СЕНСОРНОГО

ВОСПРИЯТИЯ И ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ МЕЖПОЛУШАРНОЙ АСИММЕТРИИ

ГОЛОВНОГО МОЗГА АСТРАХАНСКИХ СТУДЕНТОВ

1ФГБОУ ВПО «Астраханский государственный университет»

2ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России

3НУЗ «Медико-санитарная часть», г. Астрахань

В работе изучены индивидуальные и типологические особенности сенсорного восприятия и функциональной межполушарной симметрии – асимметрии астраханских студентов. Выявлено 7 различных типов сенсорного восприятия и 3 варианта функциональной симметрии-асимметрии полушарий головного мозга. На основании полученных результатов разработана классификация микропрофилей высшей нервной деятельности.

Ключевые слова: головной мозг, сенсорное восприятие, ассиметрия.

N.A. Gorst, S.N. Lychagina, V.R. Gorst, M.V. Polukova, A.M. Varganova

INLIVIDUAL TYPOLOGICAL FEATURES OF SENSORY PERCEPTIONS AND FUNCTIONAL INTERHEMISPHERIC BRAIN ASYMMETRY OF ASTRAKHAN STUDENTS

We studied the individual and typological features of sensory and functional interhemispheric symmetry – asymmetry in Astrakhan students. Seven different types of sensory perception and 3 variants of functional symmetry-asymmetry of the cerebral hemispheres were identified. Based on these results, a microprofile higher nervous activity >

Key words: brain, sensory perception, asymmetry.

В настоящее время одной из важнейших проблем физиологии и медицины является выявление индивидуально-типологических различий высшей нервной деятельности человека [2, 3].

Цель исследования: выявление индивидуально-типологических различий сенсорного восприятия и функциональной межполушарной асимметрии у студентов в переходный период онтогенеза от юности к ранней взрослости.

Материалы и методы. Под наблюдением находились 137 студентов (102 девушки и 35 юношей) Астраханского государственного университета в возрасте от 17 до 23 лет. Ведущий канал восприятия оценивался методом «Мои физические чувства в процессе обучения и работы» [4]. Изучение функциональной симметрии-асимметрии полушарий осуществлялось путем определения стиля обучения и мышления (СОМ) [4]. Статистическая обработка материалов проводилась на ЭВМ по программе Excel. При анализе данных по функциональной межполушарной ассиметрии (ФМА) вычислялся коэффициент асимметрии [1].

Результаты. Было показало, что среди студентов правополушарное доминирование встречается в 21,9% (n=30), то есть у данных испытуемых преобладает правополушарная стратегия мышления. Левополушарное доминирование выявлено в 9,5% случаев (n=13), что свидетельствует о преобладании левополушарной стратегии мышления. Большинство испытуемых (68,6%; n=94) характеризуются по итогам метода СОМ преобладанием равнополушарной стратегии мышления. Средний коэффициент ассиметрии (КАс) был равен 5,6%. Равнополушарная стратегия мышления, основанная на межполушарном взаимодействии, с современных позиций может рассматриваться как наиболее эффективный способ познания действительности.

Исследования преобладающей сенсорной модальности позволили установить 7 типов сенсорного восприятия. Мономодальные типы (51,1%; n=70) с преобладанием одного канала сенсорного восприятия информации: визуального (27,0%; n=37), аудиального (17,5%; n=24) или кинестетического (6,6%; n=9). Бимодальные типы (34,3%; n=47) с преобладанием в равной мере двух сенсорных каналов: зрительного и слухового (18,9%; n=26); зрительного и кинестетического (8,8%; n=12); слухового и кинестетического (6,6%; n=9). Полимодальный сенсорный тип, при котором, в равной степени, используются все три (слуховой, зрительный и кинестетический) информационных канала (14,6%; n=20). При индивидуальном сопоставлении ведущей модальности сенсорного восприятия с характеристиками ФМАс у астраханских студентов было выявлено 19 различных микропрофилей высшей нервной деятельности: 1 – визуальный микропрофиль с преимущественно равнополушарной (РП) стратегией мышления (19,0%; n=26); 2 – аудиальный микропрофиль с преимущественно равнополушарной (РП) стратегией мышления (10,9%; n=15); 3 – кинестетический микропрофиль с преимущественно равнополушарной (РП) стратегией мышления (3,6%; n=5); 4 – визуальный микропрофиль с преимущественно правополушарной (ПП) стратегией мышления (3,6%; n=5); 5 – аудиальный микропрофиль с преимущественно правополушарной (ПП) стратегией мышления (5,1%; n=7); 6 – кинестетический микропрофиль с преимущественно правополушарной (ПП) стратегией мышления (2,9%; n=4); 7 – визуальный микропрофиль с преимущественно левополушарной (ЛП) стратегией мышления (4,4%; n=6); 8 – аудиальный микропрофиль с преимущественно левополушарной (ЛП) стратегией мышления (1,5%; n=2); 9 – бимодальный микропрофиль (визуал, аудиал) с преимущественно равнополушарной (РП) стратегией мышления (12,4%; n=17); 10 – бимодальный микропрофиль (визуал, кинестетик) с преимущественно равнополушарной (РП) стратегией мышления (6,6%; n=9); 11 – бимодальный микропрофиль (аудиал, кинестетик) с преимущественно равнополушарной (РП) стратегией мышления (4,4%; n=6); 12 – бимодальный микропрофиль (визуал, аудиал) с преимущественно с правополушарной (ПП) стратегией мышления (11,7%; n=16); 13 – бимодальный микропрофиль (визуал, кинестетик) с преимущественно правополушарной (ПП) стратегией мышления (4,4%; n=6); 14 – бимодальный микропрофиль (аудиал, кинестетик) с преимущественно правополушарной (ПП) стратегией мышления (1,5%; n=2); 15 – бимодальный микропрофиль (визуал, аудиал) с преимущественно левополушарной (ЛП) стратегией мышления (2,2%; n=3); 16 – бимодальный микропрофиль (визуал, кинестетик) с преимущественно левополушарной (ЛЛ) стратегией мышления (2,2%; n=3); 17 – полимодальный микропрофиль (визуал, аудиал, кинестетик) с преимущественно равнополушарной (РП) стратегией мышления (2,2%; n=3); 18 – полимодальный микропрофиль (визуал, аудиал, кинестетик) с преимущественно правополушарной (ПП) стратегией мышления (0,7%; n=1); 19 – полимодальный микропрофиль (визуал, аудиал, кинестетик) с преимущественно левополушарной (ЛП) стратегией мышления (0,7%; n=1).

Установление модальности сенсорного восприятия информации и доминирующей стратегии мышления равнополушарной, правополушарной или левополушарной необходимы студентам и преподавателям для индивидуализации образовательного процесса и разработки новых педагогических технологий, а также врачам для диагностики психофизиологического состояния человека и оптимального взаимодействия с пациентами.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Брагина Н.Н., Доброхотова Т.А. Функциональные асимметрии человека. – М: Медицина, 1988. –
   240 с.
2. Горст Н.А., Горст В.Р., Мамонтова Е.В. Морфофункциональные и психофизиологические характеристики индивидуально-типологических различий. – Астрахань: Изд. дом «Астраханский университет», 2011. – 115 с.
3. Ильин Е.П. Дифференциальная психофизиология. – СПб.: Питер, 2001. – 464 с.
4. Сиротюк А.Л. Нейропсихологическое и психофизиологическое сопровождение обучения. –
   М: ТЦ Сфера, 2003. – 288 с.

Горст Нина Александровна, доктор биологических наук, профессор кафедры физиологии и морфологии человека и животных ФГБОУ ВПО «Астраханский государственный университет», Россия, 414056, г. Астрахань, ул. Татищева, 20 а, тел. (8512) 25-17-09, e-mail: [email protected]

Лычагина Светлана Николаевна, аспирант кафедры физиологии и морфологии человека и животных ФГБОУ ВПО «Астраханский государственный университет», Россия, 414056, г. Астрахань, ул. Татищева, 20 а, тел. (8512) 25-17-09, e-mail: [email protected]

Горст Виктор Рудольфович, доктор медицинских наук, доцент кафедры нормальной физиологии ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, 121, тел. (8512) 52-41-43, e-mail: [email protected]

Полукова Мария Викторовна, врач ЛФК НУЗ «Медико-санитарная часть», Россия, 414057, г. Астрахань, ул. Кубанская, 1, тел. (8512) 33-98-51

Варганова Анастасия Михайловна, магистрант кафедры физиологии и морфологии человека и животных ФГБОУ ВПО «Астраханский государственный университет», Россия, 414056, г. Астрахань, ул. Татищева, 20 а, тел. (8512) 25-17-09, e-mail: [email protected]

УДК 577.1+618.3

© В.О. Гунько, Т.Н. Погорелова, В.А. Линде, 2011

В.О. Гунько, Т.Н. Погорелова, В.А. Линде

БЕЛКИ-МАРКЕРЫ ОСЛОЖНЕННОЙ БЕРЕМЕННОСТИ

ФГУ «Ростовский НИИ акушерства и педиатрии» Минздравсоцразвития России,

г. Ростов-на-Дону

Установлены различия в белковом профиле плаценты при физиологической беременности и осложненной плацентарной недостаточностью, характеризующиеся значительным снижением экспрессии ряда белков, участвующих в регуляции энергетического обмена, процессах клеточной трансдукции и межклеточного транспорта. Модификация протеомного профиля плаценты является патогенетическим фактором развития осложненной беременности, а плацентарные белки с нарушенной экспрессией могут служить маркерами прогнозирования перинатальной патологии.

Ключевые слова: осложненная беременность, белки-маркеры, плацента.

V.O. Gunko, T. N. Pogorelova, V.A. Linde

PROTEINS-MARKERS OF COMPLICATED PREGNANCY

The differences were revealed in the protein placental profile during the physiological pregnancy and pregnancy complicated with the placental insufficiency characterized by a significant decrease of several protein expression taking part in the energy exchange regulation, cellular transduction and intercellular transportation. The modification of proteomic placental profile is the pathogenic factor of the complicated pregnancy development and placental proteins with the disturbed expression may serve as markers of the perinatal pathology prediction.

Key words: pregnancy, protein markers, placenta.

Снижение перинатальной заболеваемости и смертности в значительной степени связано с поиском прогностических маркеров осложненной беременности, состояния плода и новорожденного. Поскольку перинатальный период развития связан с глубокими биохимическими преобразованиями не только в организмах матери и плода, но и плаценте, осуществляющей тесную взаимосвязь между ними, изучение последней может дать чрезвычайно ценную информацию о механизмах развития акушерской патологии и патогенезе ряда заболеваний новорожденного [3, 5, 6]. Направленность метаболических процессов в плаценте во многом определяется состоянием ее белкового спектра. Нарушение состава и физико-химических свойств белков плаценты, возможно, является одной из основных причин развития плацентарной недостаточности (ПН), сопровождающей многие осложнения беременности и приводящей к патологии развития плода, а впоследствии и новорожденного [4]. Несмотря на несомненные успехи в решении вопросов профилактики репродуктивных потерь, многие аспекты этой проблемы требуют новых подходов с использованием технологий молекулярной биологии и медицины. В последнее десятилетие интенсивное развитие начали получать технологии протеомного анализа, позволяющие выявить дифференциально экспрессирующиеся белки-маркеры, ассоциированные с развитием определенной патологии [1, 2, 8].

Цель исследования: изучение протеомного спектра плацентарной ткани при физиологической беременности и осложненной плацентарной недостаточностью.

Материалы и методы. В проспективное исследование были включены 20 женщин в возрасте 23-33 лет, у 11 из которых беременность протекала без осложнений, а у 9 – осложнилась ПН, подтвержденной комплексным динамическим клинико-лабораторным обследованием. Материалом исследования служили плаценты, взятые сразу после родов при соблюдении холодового режима. Протеомный анализ плацентарной ткани проводили с помощью двумерного электрофореза в полиакриламидном геле с последующим окрашиванием белков ионами серебра [7]. При анализе фореграмм использовали программу PD Quest, с помощью которой определяли относительный объем белковых пятен, вычисляемый как отношение выраженной в пикселях интенсивности пятна к суммарной интенсивности в пикселях всех пятен на геле. Идентификацию белков после их трипсинолиза проводили методом времяпролетной масс-спектрометрии на масс-спектрометре Autoflex II («Брукер», Германия) с использованием программы Mascot MS Search (Matrix Science, США) и баз данных NCBI и Swiss-Prot. Достоверность различий в белковом спектре плаценты при физиологической беременности и ПН определяли с помощью 2-критерия и четырехпольных таблиц сопряженности, используемых при анализе качественных признаков (Statistica 6.0.). Результаты оценивали как статистически значимые при p<0,05.

Результаты. В результате проведенных исследований выявлено 32 белка отличия, относительный объем которых при физиологической беременности составляет 1,63-3,4, а при ПН – 0,04-0,06 (p<0,001). Из них наиболее важное значение в регуляторных процессах имеют: аннексин А2 и А4, 60 S кислый рибосомальный белок, прохибитин, ингибитор диссоциации Rab, эндоплазматический ретикулярный белок, альфа-субъединица протеасомы, нейтральная альфа-гликозидаза АВ, митохондриальные цитратсинтаза и КоА-изомераза. Отсутствие экспрессии или резкое ее снижение при ПН указанных белков, участвующих в регуляции энергетического обмена, процессах клеточной трансдукции и межклеточного транспорта может существенно изменить метаболическую полноценность плаценты и нарушить гомеостаз в системе мать-плацента-плод. Наряду с этими отклонениями при недостаточности плаценты в ней обнаруживаются белки, относительный объем которых при этом осложнении беременности составляет 2,2-3,63, а при физиологической беременности – 0,05-0,09 (p<0,001): эндоплазмин, виментин, митохондриальная -кетоглутаратдегидрогеназа. Появление этих белков отличия, очевидно, имеет компенсаторное значение и способствует донашиванию осложненной беременности. В то же время, выявленное подавление экспрессии белков отличия, являющихся маркерами ПН, свидетельствует о создании условий, приводящих к формированию данной акушерской патологии, и последующим осложнениям периода новорожденности, в частности развитию энцефалопатии у детей, рожденных женщинами с этим осложнением гестации.

Выводы.

1. Модификация протеомного спектра плаценты является важным патогенетическим фактором развития плацентарной недостаточности.

2. Белки, экспрессия которых отсутствует или появляется в плаценте при осложненной беременности в отличие от физиологической беременности, могут служить маркерами плацентарной недостаточности и прогнозирования перинатальной патологии.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Говорун В.М., Арчаков А.И. Протеомные технологии в современной биомедицинской науке // Биохимия. – 2002. – Т. 67, № 10. – P. 1341-1359.
2. Громов П.С., Целис Х.Э. От геномики к протеомике // Мол. биология. – 2000. – T. 34, № 4. – C. 597-611.
3. Погорелова Т.Н., Крукиер И.И., Друккер Н.А. Процессы внутри- и межклеточной регуляции в плаценте при физиологической и осложненной беременности // Изв. ВУЗов. Сев. Кав. регион. Ест. науки. – 2005. – C. 57-60.
4. Погорелова Т.Н., Орлов В.И., Друккер Н.А., Крукиер И.И. Молекулярные аспекты плацентарной недостаточности. – Ростов-на-Дону, 1997. – 176 с.
5. Радзинский В.Е., Смалько П.Я. Биохимия плацентарной недостаточности. – M.: Изд-во РУДН, 2001. – 273 с.
6. Chaddha V., Viero S., Huppertz B., Kingdom J. Developmental biology of the placenta and the origins of placental insufficiency // J. Semin. Fetal Neonatal. Med. – 2004. – Vol.9, № 5. – P. 357-369.
7. Grg A., Postel W., Gnther S. The current state of two-dimensional electrophoresis with immobilized pH gradients // Electrophoresis. – 1988. – Vol. 9, № 9. – P. 531-546.
8. May C., Brosseron F., Chartowski P. [et al.]. Instruments and methods in proteomics // Methods Mol. Biol. – 2011. – Vol. 696. – P. 3-26.

Гунько Виктория Олеговна, научный сотрудник отдела медико-биологических проблем ФГУ «Ростовский НИИ акушерства и педиатрии» Минздравсоцразвития России, Россия, 344012, г. Ростов-на-Дону, ул. Мечникова, 43, тел. (8632) 27-50-77, е-mail. [email protected]

Погорелова Татьяна Николаевна, доктор биологических наук, профессор, руководитель отдела медико-биологических проблем ФГУ «Ростовский НИИ акушерства и педиатрии» Минздравсоцразвития России, Россия, 344012,
г. Ростов-на-Дону, ул. Мечникова, 43, тел. (8632) 27-50-77.

Линде Виктор Анатольевич, доктор медицинских наук, профессор, директор ФГУ «Ростовский НИИ акушерства и педиатрии» Минздравсоцразвития России, Россия, 344012, г. Ростов-на-Дону, ул. Мечникова, 43, тел. (8632) 32-18-40.

удк 577.152.313: 57.083.3

© А.В. Коханов, О.В. Мусатов, А.А. Мяснянкин, Р.И. Асфандияров, И.С. Ямпольская, 2011

А.В. Коханов1, О.В. Мусатов1, А.А. Мяснянкин2, Р.И. Асфандияров1, И.С. Ямпольская1

разработка тест-системы для количественного определения

плацентарной щелочной фосфатазы

1ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России

2ГБУЗ АО «Александро-Мариинская областная клиническая больница», г. Астрахань

В сыворотках крови доноров, беременных различного срока гестации и больных с предполагаемым подъемом уровня плацентарной щелочной фосфатазы (ПЩФ) проведено сравнительное биохимическое исследование 4-х методов определения этого фермента. Даны характеристики для каждого из тестов индикации ПЩФ: специфичность, чувствительность, воспроизводимость. Наиболее эффективным признан иммуноферментный анализ ПЩФ.

Ключевые слова: плацентарная щелочная фосфатаза, иммуноферментный анализ.

A.V. Kokhanov, O.V. Musatov, A.A. Myasnyankin, R.I. Asfandiyarov, I.S. Yampolskaya

DEVELOPMENT OF TEST SYSTEM FOR QUANTITATIVE ESTIMATTION OF ALKALINE PHOSPHATASE PLACENTAL

In the blood sera of donors, pregnant women of different gestational ages and patients with an estimated rise of the level of placental alkaline phosphatase (PLAP), a comparative biochemical study of 4 methods of determination of this enzyme is conducted. The characteristics from each of the tests of indication of PLAP (specificity, sensitivity and reproducibility) is given. Enzyme-linked immunoassay of PLAP is recognized as the most effective.

Key words: placental alkaline phosphatase, enzyme immunoassay

Щелочные фосфатазы (ЩФ) являются Zn-содержащими гликопротеинами с серином в активном центре, гидролизующими различные фосфатные эфиры при щелочных значениях рН. Оптимум рН лежит в диапазоне рН 8,6—10,1, отсюда ЩФ получила название [1, 2]. Молекулярные массы ЩФ колеблются от 100 до 200 кД, как правило [3]. Повышенный интерес к ПЩФ возник после того, как Fishman W. в 1968 году [6] обнаружил в ткани аденокарциномы легкого, плевральном экссудате и сыворотке больного раком легкого термостабильную щелочную фосфатазу, иммунохимически идентичную плацентарной, которую он назвал по имени больного «изоэнзим Регана». Таким образом, обнаружение в кровотоке фермента плацентарной щелочной фосфатазы (ПЩФ) имеет важное диагностическое значение при различных физиологических и патологических состояниях организма [1, 3]. Однако, несмотря на установленную ценность данного маркера для диагностики [1, 3], до настоящего времени не налажено коммерческое производство теста на этот белок для нужд практического здравоохранения. Вместе с тем в клинической лабораторной практике давно и широко применяется определение общей ЩФ сыворотки, основанное на оценке его ферментативной активности. Так как нет взаимосвязи между активностью ЩФ и содержанием ПЩФ, неправильно ставить знак равенства между этими двумя анализами. В этой связи существует необходимость разработки тест-системы для индикации сывороточных уровней ПЩФ.

Цель исследования: сравнить эффективность и диагностическую ценность различных методов определения сывороточных уровней плацентарной изоформы щелочной фосфатазы.

Материалы и методы. Для количественного определения ПЩФ в 36 экстрактах тканей применяли методы: двойной радиальной иммунодиффузии (РИД) в агаре по О. Оухтерлони в модификации Н.И. Храмковой и Г.И. Абелева [5] (чувствительность этого классического метода 3-5 мкг/мл), встречного иммуноэлектрофореза по Кону (1970) (чувствительность метода 100-300 нг/мл), метод «ракетного» иммуноэлектрофореза [5] (чувствительность метода 1-3 мкг/мл). Активность ЩФ оценивали фотометрически с применением соответствующих субстратов и красителей после предварительного разделения изоформ различными методами электрофореза в агарозе или в полиакриламидном геле [2, 3].

ПЩФ определяли количественными методами иммуноэлектрофореза или иммунодиффузии после окрашивания преципитатов на щелочную фосфатазу, остальные фосфатазы в единицах Боданского методом электрофореза на агарозе и в ПААГ с применением соответствующих ингибиторов и денситометрии [2].

Для проведения иммуноферментного анализа ИФА [4] на ПЩФ, из полученной на первом этапе моноспецифической антисыворотки выделяли антитела класса IgG сочетанием методов негативной ионообменной хроматографии на ДЕАЕ-целлюлозе и осаждения сульфатом аммония 40% насыщения. Антитела к ПЩФ в концентрации 1 мкг/мл адсорбировались на стрипах или планшетах для иммуноферментного анализа. После инкубации стрипов с исследуемыми образцами сывороток и промывки планшетов, регистрацию результатов ИФА в стрипах или 96-луночных планшетах «Nunc» (Дания) проводили на фотометре с вертикальным ходом луча «Titertech Multiscan» фирмы «Flow Laboratories» (Англия) при длине волны 492 нм в случае использованием субстрата (паранитрофенилфосфата или БАПНА) и красителя из метода Боданского.

Результаты. Активность ЩФ выявлена в 100% во всех сыворотках беременных и доноров. После прогревания в сыворотках сохранялась только активность ПЩФ, ингибируемая фенилаланином. ПЩФ таким методом выявлялась в 68% сывороток беременных и в 3% сывороток доноров. В остальных методах определения щелочной фосфатазы использовался иммунохимический принцип, основанный на реакции антиген (ПЩФ) – антитело. Моноспецифические антисыворотки к ПЩФ получены нами самостоятельно путем гипериммунизации кроликов породы «шиншилла серая» очищенными и полуочищенными препаратами этого фермента. Моноспецифические антисыворотки на ПЩФ использованы для получения иммунодиффузионных и иммуноферментных наборов на ПЩФ.

Чувствительность иммунодиффузионного анализа (ИДА) ПЩФ не отличалась от первого метода, однако за счет иммунохимического принципа специфичность определения ПЩФ составила 100%. Следует обратить внимание, что по сравнению с классическим ИДА чувствительность метода для ТЩФ составила 0,1-0,5 мкг/мл. По сравнению с ИДА чувствительность ракетного иммуноэлектрофореза была в 2 раза, а встречного – в 5 раз выше (р<0,01). Оба метода выявляли ПЩФ во всех сыворотках беременных и у четверти доноров.

Методом иммуноферментного анализа (ИФА) на ПЩФ достигнуты наилучшие результаты: используя различные разведения чистого препарата ПЩФ, определена чувствительность метода ИФА, которая составила 50 нг/мл. Этот уровень чувствительности теста позволяет выявлять существенные различия в концентрациях ПЩФ в сыворотках беременных различного срока гестации и некоторых групп больных. В отличие от стандартного ИФА наша модификация проще, так как не требует этапа нанесения конъюгата белок-пероксидаза.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Асфандияров Р.И., Лазько А.Е., Коханов А.В. Изомеры щелочной фосфатазы и остеогенез // Морфология. – 2002. – Т. 121 – № 2-3. – С. 13.
2. Вилкинсон Д. Принципы и методы диагностической энзимологии. – М.: Медицина, 1981. – 624 с.
3. Голубев А.М. Изоферменты новообразований. – М.: Медицина, 1981. – 144 с.
4. Иммуноферментный анализ / под ред. Т. Нго, Г. Ленхоффа – М.: Мир, 1988. – 446 с.
5. Иммунохимический анализ / под ред. Л.А. Зильбера – М.: Медицина, 1968. – 238 с.
6. Fishman W.H. Immunologic and biochemical approaches alkaline phosphatase isoenzyme analysis: the Regan isoenzyme. // Ann. N.Y. Acad. Sci. – 1969. – Vol. 166. – P. 745-749.

Коханов Александр Владимирович, доктор медицинских наук, доцент кафедры биохимии с курсом клинической лабораторной диагностики ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, 121, тел. (8512) 52-51-64.

Мусатов Олег Валентинович, кандидат медицинских наук, докторант кафедры оперативной хирургии ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская 121, тел. (8512) 52-51-64

Мяснянкин Александр Алексеевич, врач-нейрохирург, нейрохирургическое отделение ГБУЗ АО «Александро-Мариинская областная клиническая больница», Россия, 414056, г. Астрахань, ул. Татищева 2, тел. (8512) 25-32-61, e-mail: [email protected]

Асфандияров Растям Измайлович, доктор медицинских наук, проф. кафедры анатомии человека ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, 121., тел. (8512) 52-41-43, e-mail: [email protected]

Ямпольская Ирина Сергеевна, заочный аспирант кафедры биохимии ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, 121., тел. (8512) 52-41-43, e-mail: [email protected]

удк 612.398.145.3-611.013.85: 612.753

© А.А. Ларионов, А.В. Коханов, О.В. Мусатов, Д.Б. Суринков, А.А. Мяснянкин, И.С. Ямпольская, 2011

А.А. Ларионов1, А.В. Коханов1, О.В. Мусатов1, Д.Б. Суринков2, А.А. Мяснянкин2,

И.С. Ямпольская1

Выявление белка с регенеративной и остеоиндуктивной активностью
в плаценте

1ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России

2ГБУЗ АО «Александро-Мариинская областная клиническая больница», г. Астрахань

По технологии выделения морфогенетических белков (КМБ) из костной ткани произведена обработка ткани плаценты. Выделены компоненты с остеоиндуктивной и регенераторной активностью. Изучаются их физико-химические и морфогенетические свойства на различных экспериментальных моделях. В плацентарной ткани установлено высокое содержание факторов роста, идентичных КМБ. В этой связи нами предлагается способ получения этих морфогенетических белков из более доступного сырья плаценты.

Ключевые слова: плацента, костный морфогенетический белок, выделение, свойства.

A.A. Larionov, A.V. Kokhanov, O.V. Musatov, D.B. Surinkov, A.A. Myasnyankin, I.S. Yampolskaya

DETECTION OF PROTEIN WITH REGENERATIVE AND OSTEOINDUCTIVE ACTIVITY

IN PLACENTAL TISSUE

According to the technology selection of morphogenetic proteins in bone tissue produced by processing of the placenta. Components with osteoinductive and regenerative activity was isolated. Their physical, chemical and morphogenetic properties in various experimental models is studied. In the placental tissue is found high levels of growth factors that are identical to BMP. In this regard, we propose a method for obtaining these morphogenetic proteins in more affordable raw materials the placenta.

Key words: placenta, bone morphogenetic protein, isolation, properties.

В настоящее время отмечается постоянно возрастающий спрос на остеоиндуктивные имплантаты и раневые покрытия, стимулирующие регенерацию поврежденных тканей: в России по данным центра Флебологии трофическими язвами разной степени выраженности, страдают более 4-х миллионов человек; ежегодно регистрируется около 20 миллионов травм [1]. Потенциальная потребность в композитных материалах только для травматологии составляет 220-500 тыс. единиц продукции в год. В последние годы за рубежом разработаны и получены так называемые костные морфогенетические белки (КМБ), часть из которых отличается мощными остеогенными свойствами и может быть использована в качестве заменителя аутокости [1].

В 1965 г. M.R. Urist [7] впервые сообщил о присутствии в деминерализованной костной ткани остеогенных белков, способных индуцировать остеогенез при эктопической пересадке. В дальнейших своих работах [8] он показал, что остеогенная активность кости передается через протеиноподобный компонент матрикса, названный костным морфогенетическим белком (КМБ). В 1979 г. M.R. Urist с соавторами [8] сообщили о выделении остеоиндуктивного, гидрофобного, низкомолекулярного белка из нерастворимого желатина костного матрикса. H. Nakamura с соавторами [6] применили метод диссоциативного экстрагирования КМБ из бычьего, свиного и человеческого костных матриксов, а также из остеосарком [5].

В НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН разработаны технологии синтеза рекомбинантных КМБ в бактериальных суперпродуцентах и планируется к 2013 г. создание нового производства рекомбинантного человеческого костного морфогенетического белка-2 (рчКМБ-2), а также имплантируемых материалов на его основе [2].

Имеются литературные данные о присутствии факторов роста, идентичных КМБ в других тканях организма [4]. В этой связи нами исследована возможность получения этих морфогенетических белков из более доступного сырья – плаценты.

Цель исследования: разработка нового метода получения препарата костного морфогенетического белка из плаценты человека.

Методика. Материалом для получения КМБ служили ткани плаценты общей массой 2,8 кг (6 плацент) и фрагменты трубчатых костей общей массой 2,1 кг.

Технология выделения и очистки КМБ из плаценты предполагала те же этапы, которые используются при выделении КМБ из костного материала. Параллельно по той же технологии получали КМБ из коровьих трубчатых костей и гомогенатов тканей печени людей, погибших от несчастных случаев. Концентрацию белка в растворе определяли спектрофотометрически по методу Варбурга. Остеоиндуктивную активность препаратов белка оценивали морфологическими методами по характеру эктопического остеосинтеза в местах имплантации коллагеновой губки, пропитанной препаратами морфогенетических белков. Репаративную регенерацию в эксперименте на 5 кроликах оценивали по уровню альфа-фетопротеина (АФП) на моделях гепаторафии и гепатопластики, как описано нами ранее [3].

Костную муку и отмытые от крови ткани плаценты и печени гомогенизировали, обезжиривали смесью спирта и хлороформа и высушивали под тепловентилятором до полного удаления воды и органических растворителей. Дальнейшая схема получения КМБ из костной муки, порошка плацентарной и печеночной ткани включала следующие этапы: кислотная экстракция, лиофильная сушка, депротеинизация, диссоциация КМБ мочевиной в кислой среде и доочистка конечного продукта комбинацией хроматографических методов.

Результаты. Установлено, что до этапа хроматографической очистки содержание белка в препарате КМБ из 2 кг костной муки составило 3,4±0,20 мг, что достоверно ниже (р<0,001), чем в препаратах плаценты 96±14,5 мг или печени 114±9,6 мг.

Методами гель-фильтрации на биогелях с различным диаметром пор конечные продукты были распределены на пять фракций с диапазонами молекулярной массы до 1000 Да, 1-5, 5-20, 20-50 и свыше 50 КДа. В связи с отсутствием международного стандарта остеоиндуктивной активности КМБ, за 1 единицу активности нами принята активность белка с молекулярной массой 5-20 КДа, соответствующая литературным данным о массах данных пептидов [1, 4]. Остеоиндуктивная активность препаратов по всем пяти хроматографическим фракциям соответственно составила: для кости (0, 5%, 100%, 20% и 0), для печени (0, 0, 20%, 0 и 0) и для плаценты (0, 0, 75%, 20% и 0). Полученные нами данные подтвердили, что максимальной остеоиндуктивной активностью обладала третья хроматографическая фракция (5-20 КДа) конечного продукта.

Стимулирующим влиянием на процессы репаративной регенерации в эксперименте обладали в различной степени все изученные фракции плаценты и печени: больше всего – третья (5-20 КДа) и пятая (термо- и кислотостабильные белки с массой более 50 КДа) фракции плаценты (различия статистически достоверны при р<0,001 как со фракциями препаратов КМБ из кости и печени, так и фракциями плаценты 1, 2 и 4). Уровни АФП в крови оперированных кроликов на 3 сутки после введения каждой из 5 хроматографических фракций соответственно составили: для кости (0 мкг/мл; 0 мкг/мл; 1,0±0,89 мкг/мл; 0 мкг/мл; 0 мкг/мл), для печени (0 мкг/мл; 2,0±1,02 мкг/мл; 6,0±0,89 мкг/мл; 3,0±1,02 мкг/мл; 5,0±1,41 мкг/мл) и для плаценты (0 мкг/мл; 7,0±1,02 мкг/мл; 16,0±2,19 мкг/мл; 7,0±3,03 мкг/мл; 11,0±0,45 мкг/мл).

Известно, что кроме участия в формировании опорно-двигательной системы, КМБ из семейства цитокинов играют роль в управлении дифференцировкой и пролиферацией эпителиальных стволовых клеток — как во взрослом организме, так и в эмбриогенезе. Поэтому, получение КМБ из плаценты и описание его свойств позволяет по-новому взглянуть на основополагающие механизмы регенерации кости как в теоретическом, так и в прикладном плане. Весьма успешные препараты, такие как рекомбинантный костный морфогенетический белок, приносят прибыль в миллиард долларов ежегодно (например, INFUSE ®, Medtronic), поэтому разработка способа получения аналога КМБ из плаценты и внедрение его в клиническую практику может стать эффективным элементом регенеративной медицины.

Таким образом, из ткани плаценты по технологии получения КМБ из костной муки, выделены факторы роста, обладающие остеоиндуктивной активностью и идентичные КМБ. Кроме того, в плацентарной ткани обнаруживается достоверно высокое по сравнению с другими органами содержание компонентов с регенераторной активностью, относящихся как к классу пептидов, так и белков.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Булатов А.А., Савельев В.И., Калинин А.В. Применение костных морфогенетических белков в эксперименте и клинике // Травматология и ортопедия России. – 2005. – № 1 (34). – С. 46-54.
2. Гинцбург А.Л., Зайцев В.В., Миронов С.П. [и др.] Экспериментальная оценка остеоиндуктивности рекомбинантного костного морфогенетического белка (rhBMP-2) отечественного производства, фиксированного на биокомпозиционном материале или костном матриксе // Вестник травматологии и ортопедии им. Н.Н. Приорова. – 2010. – № 4. – С. 38-44.
3. Мусатов О.В., Коханов А.В., Луцева О.А., Медведев Р.А. Альфа-фетопротеин как маркер репаративной регенерации // Астраханский медицинский журнал. – 2008. – № 3 (прил.). – С. 34-35.
4. Aldinger G., Herr G., Kusswetter W. [et al.]. Bone morphogenetic protein: a review // Int.Orthop. – 1991. – Vol. 15, № 3. – P. 169-177.
5. Bauer F.C.N., Urist M.R. Human osteosarcoma derived soluble bone morphogenetic protein // Clin. Orthop. – 1981. – № 154. – P. 219-295.
6. Nakamura H., Higuchi Y., Nakagawa M. [et al.]. Solubilized bone morphogenetic protein (BMP) from mouse osteosarcoma and rat demineralized bone matrix // Clin. Orthop. – 1980. – № 148. – P. 281-290.
7. Urist M.R. Bone: formation by autoinduction // Science. – 1965. – Vol. 150. – P. 893-899.
8. Urist M.R., Mikulski A. , Lietz A. Solubilized and insolubilized bone morphogenetic protein // Proc. Natl. Acad. Sci. USA – 1979. – Vol. 76. – P. 1828-1832.

Ларионов Александр Афанасьевич, доктор медицинских наук, профессор кафедры травматологии, ортопедии и военно-полевой хирургии ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская 121, тел. (8512) 33-07-90, e-mail: [email protected]

Коханов Александр Владимирович, доктор медицинских наук, доцент кафедры биохимии с курсом клинической лабораторной диагностики ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская 121, тел. (8512) 52-51-64, e-mail: [email protected]

Мусатов Олег Валентинович, кандидат медицинских наук, докторант кафедры оперативной хирургии и топографической анатомии ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская 121, тел. (8512) 33-07-90

Суринков Дмитрий Борисович, врач-травматолог, ортопедическое отделение ГБУЗ АО «Александро-Мариинская областная клиническая больница», Россия, 414056, г. Астрахань, ул. Татищева 2, тел. (8512) 25-32-61

Мяснянкин Александр Алексеевич, врач-нейрохирург, нейрохирургическое отделение ГБУЗ АО «Александро-Мариинская областная клиническая больница», Россия, 414056, г. Астрахань, ул. Татищева, 2, тел. (8512) 25-32-61

Ямпольская Ирина Сергеевна, врач акушер-гинеколог, заочный аспирант кафедры биохимии с курсом клинической лабораторной диагностики ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России, Россия, 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская 121.

УДК 611.225: 617.5-089.844

© Е.Д. Луцай, 2011

Е.Д. Луцай

ВНУТРИОРГАННАЯ МИКРОТОПОГРАФИЯ ГОРТАНИ ЧЕЛОВЕКА – ОСНОВА
МИКРОХИРУРГИИ ОРГАНА

ГБОУ ВПО «Оренбургская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России

На 15 препаратах гортани, полученных от лиц зрелого возраста методами макромикроскопического препарирования, гистотопографии были изучены особенности микротопографии внутриорганных структур гортани человека на четырех уровнях: вход в гортань, преддверие гортани, голосовая щель и подголосовая полость. Описаны качественные и количественные топографо-анатомические взаимоотношения структур на этих уровнях.

Ключевые слова:гортань, микротопография.

E.D. Lutsai

INTRAORGANIC MICROTOPOGRAPHY OF HUMAN LARYNX THE BASIS OF ITS MICROSURGERY

Peculiarities of microtopography of human larynx intraorganic structures on four levels: entrance to larynx, its vestibule, fissure of glottis and infraglottic cavity were studied on 15 preparations of larynx, got from the adult people with the help of histotopographical methods and methods of macromicroscopical preparation. Qualitative and quantitative topographical interrelations of structures on these levels were described.

Key words: larynx, microtopography.

Злокачественные новообразования гортани человека составляют от 1 до 7% от всей онкопатологии, и частота их возникновения неукоснительно растет. Из их числа 60-80% опухолей локализуется в преддверии гортани. Прогноз и успешность лечения заболеваний гортани зависят не только от своевременности постановки диагноза, но и от выбора адекватного способа хирургического вмешательства. Эндоларингеальные микрохирургические операции впервые были начаты в1964 году [3]. На сегодняшний день бурное развитие методов эндоскопии и операционной микроскопии в оториноларингологии делает востребованными фундаментальные исследования по макромикроскопическому строению и внутриорганной микротопографии гортани в различных ее отделах [2, 5]. В литературе имеются сведения о взаимосвязи между распространением патологических процессов и особенностью соединительно-тканного каркаса гортани, ходом и локализацией крупных сосудов и нервов, особенностью слизистой оболочки органа [1, 4].

Цель исследования: выявить особенности макромикроскопического строения и внутриорганной микротопографии гортани у лиц зрелого возраста в четырех стандартных отделах: вход в гортань, преддверие гортани, голосовая щель, подголосовая полость.

Материалы и методы. Исследование было выполнено на 15 органокомплексах гортани с окружающими тканями, полученными от лиц мужского и женского пола без патологии. В исследовании были использованы методы: морфометрии, макромикроскопического препарирования, декальцинации, модифицированный метод распилов по Н.И. Пирогову, гистотопографический.

Результаты. На уровне входа в гортань спереди видно скопление волокон щитовидно-надгортанной связки и мышечные пучки одноименной мышцы. Волокна этой мышцы имеют четкое продольное направление. Пространство между волокнами заполнено жировой тканью с различной степенью выраженности. Сбоку видны образования неправильной формы – мешочки гортани. В верхней стенки встречается скопление лимфоидной ткани, которые в литературе описываются как «гортанные миндалины Френкеля» [2]. Артериальные сосуды в этой зоне являются производными верхней гортанной артерии. На язычной поверхности надгортанника сосудистая сеть довольно бедная. Незначительное количество сосудов наблюдается на поверхности надгортанника, обращенной в полость органа. Скопление сосудов происходит у верхушек черпаловидных хрящей, в черпаловидно-надгортанной складке. На уровне преддверия гортани переднюю стенку образуют пластинки щитовидного хряща (ЩХ), сзади – части черпаловидных хрящей (ЧХ) и структуры межчерпаловидной складки. У лиц зрелого возраста происходит изменение в структуре гиалиновых хрящей. Эти изменения заключаются в замещении хрящевой ткани на костную. Выявлены три основные зоны в ЩХ: угол, середина пластинки, дорзальная часть пластинки. В ЧХ эти изменения менее интенсивны и в основном локализуются внутри голосового отростка ЧХ. К задней стенке гортани очень тесно прилежит слизистая гортанной части глотки. Симметрично определяются полости желудочков гортани, все слои ее стенки.

На уровне голосовой щели в толще вестибулярных складок располагается скопление продольно ориентированных волокон рыхлой соединительной ткани. В голосовых складках четко прослеживается послойное расположение соединительной ткани, образующей голосовые связки, далее – волокна одноименной мышцы. Спереди, в месте их прикрепления к углу ЩХ, видна деформация его внутреннего контура. Глубина проникновения может быть различной. Ориентация волокон чаще продольная, но встречаются поперечные и косые пучки. В голосовой щели четко определяются две части: межперепончатая и межхрящевая. Протяженность первого отдела больше. Крупные артерии располагаются вдоль внутренней поверхности щитовидного хряща, ближе кзади. На уровне подголосовой полости спереди стенку образует перстне-щитовидная связка и дуга перстневидного хряща (ПХ), сзади – пластинка ПХ. Внутри которого также происходят процессы окостенения. Замечено, что в нижних рогах ЩХ, участвующих в образовании перстне-щитовидного сустава, очаги окостенения отсутствуют. На этом уровне описаны топографо-анатомические взаимоотношения с долями щитовидной железы, передней стенкой пищевода и другими образованиями шеи.

Выводы. Таким образом, макромикроскопический подход к изучению внутриорганной микротопографии гортани в четырех стандартных отделах позволил дать качественную и количественную характеристику пространственных взаимоотношений между основными внутриорганными структурами. Полученные данные могут служить обоснованием микрохирургических вмешательств на органе, объяснить распространение и локализацию внутриорганных патологических процессов.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Дайхес Н.А. Клиническая патология гортани – М.: ООО «МИА», 2009. – 160 с.
2. Каган И.И. Микрохирургическая анатомия как анатомическая основа микрохирургии // Морф. – 1999. – № 5. – С. 7-11.
3. Погосов В.С. Микроскопия и микрохирургия гортани и глотки. – Кишинев: Штиинца, 1989. – 228 с.
4. Kantor E., Berci G., Hagiike M. Operating videoscope for microlaryngeal surgery // Surgical Endoscopy. – 2006. – Vol. 20, № 2, – P. 484-487.
5. Sellars L. Anatomical investigation of the larynx // J. laryngol. and otol. – 1981. – Vol. 95, № 5. –
   P.487-491.

Луцай Елена Дмитриевна, кандидат медицинских наук, доцент кафедры анатомии человека ГБОУ ВПО «Оренбургская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России, Россия, 460000, г. Оренбург, ул. Советская, 6; тел.: (3532) 77-61-03; e-mail: [email protected]

УДК 616.36-004:616.149-008.341.1:616.2

© Н.И. Любарт, Т.Р. Касьянова, О.А. Волошина, Н.Б. Артемьева, 2011

Н.И. Любарт1, Т.Р. Касьянова2, О.А. Волошина2, Н.Б. Артемьева1

определение некоторых показателей печеночно-портального

кровотока у больных циррозом печени с изменениями функции

внешнего дыхания