WWW.DISUS.RU

БЕСПЛАТНАЯ НАУЧНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

 

Pages:     || 2 |
-- [ Страница 1 ] --

На правах рукописи

Скляр Лидия Федоровна

СИСТЕМА ЦИТОКИНОВ И ПОКАЗАТЕЛИ ОКСИДАТИВНОГО СТРЕССА ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ГЕПАТИТЕ «С» С УЧЕТОМ ИММУНОКОРРИГИРУЮЩЕЙ ТЕРАПИИ

14. 00. 36 – Аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени
доктора медицинских наук

Владивосток
2006

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Владивостокский государственный медицинский университет Федерального Агентства по здравоохранению и социальному развитию Российской Федерации».

Научные консультанты:

доктор медицинских наук, профессор Маркелова Елена Владимировна

доктор медицинских наук, профессор Каминский Юрий Валентинович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Долгих Татьяна Ивановна

доктор медицинских наук, профессор Томилка Геннадий Степанович

доктор медицинских наук, профессор Просекова Елена Викторовна

Ведущая организация:

ГУ Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова РАМН.

Защита состоится _________________ 2006 г. в ____ часов на заседании диссертационного совета Д 208.007.02 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Владивостокский государственный медицинский университет Федерального Агентства по здравоохранению и социальному развитию Российской Федерации» по адресу: 690950 г. Владивосток, ГСП, проспект Острякова 2 (главный корпус).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Владивостокский государственный медицинский университет Федерального Агентства по здравоохранению и социальному развитию Российской Федерации» по тому же адресу (корпус 3).

Автореферат разослан ___________________ 2006 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат медицинских наук, доцент / Диго Р.Н. /

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы: Проблема вирусного гепатита С является одной из самых актуальных в современной медицине в связи с его широкой распространенностью, латентностью течения и выраженностью неблагоприятных исходов – цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы. По последним данным в мире насчитывается около 300 млн. инфицированных вирусом гепатита С (HCV), и по частоте ВГС стоит на первом месте среди всех инфекций, передающихся через кровь (Рахманова А.Г. с соавт., 2002; Лобзин Ю.В. с соавт., 2003; Карпов С.Ю., Крель П.Е., 2005; Strader D.V. et al., 2004). Предполагается, что к 2015-2020 гг. увеличится частота выявления хронического гепатита С на стадии цирроза печени, возрастет количество HCV-ассоциированной гепатокарциномы (Онищенко Г.Г., 2002; Wong J.B. et al., 2000; Sangiovanni A. et al., 2004). Проблема усугубляется тем, что в течение длительного времени у большинства инфицированных отсутствуют какие-либо симптомы заболевания (Cоринсон С.Н., 1997; Шерлок Ш., Дули Дж., 1999; Апросина З.Г. с соавт., 2002; Pawlotsky J.M., McHutchison J.G., 2004). Однако более чем у 50% инфицированных HCV людей в конечном итоге развивается хронический вирусный гепатит С (ХВГС) (Игнатова Т.М., 2002; Lauer G.M., Wei Y.H., 2000). В настоящее время считается установленным, что высокая частота (от 50 до 85%) формирования хронических форм HCV-инфекции обусловлена «ускользанием» вируса от иммунного надзора (Майер К.П., 1999; Ивашкин В.Т. с соавт., 2002; Rothman A.L. et al., 2005). Существенное значение в поддержании патологического процесса у больных HCV инфекцией придается недостаточности CD4+ Т-хелперов и дисбалансу цитокинов (Волчкова Е.В. с соавт., 2000; Никитин И.Г., 2000; Семененко Т.А., 2000, 2005; Ferrari C. et al., 1999; Freeman A.J. et al., 2001). Данные о состоянии клеточного и гуморального иммунитета при HCV-инфекции противоречивы, продукция цитокинов клетками иммунной системы при ХВГС, в том числе на фоне этиотропного лечения, изучена недостаточно. Между тем, этот вопрос имеет большое теоретическое и практическое значение, так как цитокины являются ключевыми медиаторами воспалительного процесса и формирования специфического иммунитета. Изучение цитокинового статуса во взаимосвязи с показателями тканевого повреждения у больных ХВГС и его изменений на фоне этиотропной терапии позволит глубже понять патогенез ХВГС, что, несомненно, позволит совершенствовать существующие схемы терапии. Отсутствие единого мнения о характере, направлениях, степени выраженности изменений цитокинового профиля диктует необходимость дальнейших исследований в этом направлении.

Цель исследования: Совершенствование диагностики и терапии хронического вирусного гепатита С на основе определения взаимосвязей цитокинового статуса, клинико-биохимических и морфологических маркеров иммунопатогенеза HCV-инфекции.

Задачи исследования:

  1. Оценить цитокиновый статус (ИЛ-1, 2, 4, 8, 10, ИЛ-12р40, ИЛ-12р70, ФНО-, ИФН-, ГМ-КСФ) на системном (в сыворотке крови) и локальном (в супернатантах гепатобиоптатов) уровнях и особенности его изменений при различных клинико-морфологических вариантах ХВГС с учетом биохимических показателей и генотипа возбудителя.
  2. Охарактеризовать морфологические изменения в печени у больных ХВГС с учетом клинико-биохимических, иммунологических и вирусологических показателей.
  3. Провести анализ частоты выявления РНК HCV в различных биологических субстратах (в сыворотке крови, клеточных элементах крови и ткани печени) в зависимости от маркеров гепатоцеллюлярного повреждения и генотипа возбудителя.
  4. Определить степень информативности биохимических маркеров оксидативного стресса на системном и локальном уровнях у больных ХВГС в зависимости от клинико-морфологических, биохимических, вирусологических и иммунных показателей.
  5. Изучить показатели кислородзависимого метаболизма нейтрофилов у больных с ХВГС с учетом клинико-морфологических вариантов заболевания, иммунологических и биохимических показателей.
  6. Изучить некоторые показатели апоптоза гепатоцитов и его взаимосвязь с системой цитокинов и выраженностью гепатоцеллюлярного повреждения.
  7. Провести мониторинг системного и локального уровней цитокинов, показателей оксидативного стресса при стандартной комбинированной противовирусной терапии ХВГС и разработать алгоритм оценки ее эффективности.
  8. Определить обоснованность применения рекомбинантного ИЛ-2 с иммунокорригирующей целью на основании выявленных изменений цитокинового статуса и показателей оксидативного стресса при проведении противовирусной терапии больных ХВГС.

Научная новизна исследований:



Впервые проведена комплексная оценка цитокинового статуса, показателей оксидативного стресса на системном и локальном уровнях у больных ХВГС с учетом особенностей клинико-морфологических, биохимических и вирусологических параметров.

Впервые разработаны иммунологические критерии оценки гепатоцеллюлярного повреждения и предложен неинвазивный метод мониторинга фиброза печени при ХВГС.

Впервые использована оценка взаимоотношений цитокинового профиля, показателей, характеризующих перекисные процессы в организме и морфологических изменений в печени с уровнем локального 1-КГП при ХВГС.

Установлена слабая активация фагоцитов с истощением резервных возможностей кислородозависимых механизмов их бактерицидности, сопряженных с гиперпродукцией ИЛ-8, ИЛ-10 и ГМ-КСФ при ХВГС.

Впервые оценены взаимоотношения между состоянием апоптоза и цитокиновой архитектоникой непосредственно в печени при хронической HCV-инфекции. Показано, что снижение CD95+ клеток в гомогенизатах печени у пациентов с выраженным фиброзом является следствием частичного замещения печеночной ткани на соединительную.

Впервые выявлены корреляционные связи между показателями продуктов ПОЛ в сыворотке крови, параметрами цитокинового профиля ткани печени и локальным уровнем метаболитов NO. В группе больных с умеренным и выраженным фиброзом установлена взаимосвязь локальной концентрации ИЛ-4 и метаболитов NO.

Расширены представления о механизмах терапевтического эффекта -интерферонов в сочетании с рибавирином, который ассоциировался с повышением уровня ИЛ-2, снижением уровней провоспалительных цитокинов ФНО-, ИЛ-1, субъединиц ИЛ-12 - 12р40 и 12р70, снижением содержания противовоспалительного цитокина ИЛ-10 и метаболитов оксида азота в сыворотке крови у пациентов с отсутствием Т-клеточной анергии.

Предложен алгоритм оценки эффективности комбинированной противовирусной терапии. С целью ее оптимизации у пациентов с отсутствием раннего вирусологического ответа обоснованы показания к использованию рекомбинантного ИЛ-2.

Практическая ценность работы:

Подтверждена иммуноопосредованность клинико-биохимической манифестации, некрозо-воспалительной активности и выраженности фиброза при ХВГС на основе анализа роли системных и локальных цитокинов в иммунопатогенезе ХВГС.

Установлена сопряженность уровня локальных цитокинов (ИЛ-10, ИЛ-12р70, ФНО-, ИЛ-1) с маркерами оксидативного стресса и их роль в прогрессировании хронической HCV-инфекции.

Выяснено, что снижение апоптотической активности клеток печени играет роль в прогрессировании некрозовоспалительных повреждений печени и может свидетельствовать об усилении дисфункции иммунной системы по мере прогрессирования болезни. Разработан неинвазивный метод диагностики фиброза печени при хронической HCV-инфекции.

Предложены новые предикторы и критерии клинической эффективности этиопатогенетической терапии ХВГС, которые могут быть использованы при динамичном наблюдении за больными в процессе лечения.

С учетом проведенных исследований разработана и предложена эффективная схема оптимизации этиопатогенетического лечения с использованием рекомбинантного ИЛ-2 у пациентов с выявленной Т-клеточной анергией.

Рекомендации по обследованию и лечению внедрены в органы практического здравоохранения Приморского края и городов России (Петрозаводска, Астрахани, Санкт-Петербурга, Хабаровска).

Апробация материалов работы: Результаты исследований были представлены и доложены на различных научных форумах международного, российского, регионального уровней.

Международных: международной научно-практической конференции «Цитокины, воспаление, иммунитет» (Санкт-Петербург, 2002), Всемирном конгрессе по клинической и иммунной патологии (Сингапур, 2002), XVII Всемирном конгрессе по астме и аллергологии (Санкт-Петербург, 2003), VII Российско-Японском международном симпозиуме Медицинского обмена (Ниигата, 2004), II Всемирном конгрессе по иммунопатологии и аллергии (Москва, 2004), Всемирном конгрессе по аллергологии и иммунологии (Москва, 2005), Китайско-Российской международной конференции по фармакологии (Харбин, 2005).

Российских: IV и VI Российских научно-практических конференциях «Гепатит В, С и Д - проблемы диагностики, лечения и профилактики» (Москва, 2001, 2005), IV Российской конференции «Гомеостаз и инфекционный процесс» (Сочи, 2003), IV Российском съезде врачей-инфекционистов (Санкт-Петербург, 2003), XI Российском Национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2004), 9-й и 10-й Российских конференциях с международным участием «Гепатология сегодня» (Москва, 2004, 2005), IX Всероссийском форуме с международным участием имени академика В.И. Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2005).

Региональных: научно-практических конференциях «Актуальные проблемы инфекционной патологии на Дальнем Востоке России» (Хабаровск, 2002, 2005), II научно-практической конференции Дальнего Востока «Генодиагностика в практической медицине Дальнего Востока (Владивосток, 2002), III и IV научно-практических конференциях «Инфекционная патология в Приморском крае» (Владивосток, 2003, 2004), II Дальневосточном конгрессе «Человек и лекарство» с международным участием (Владивосток, 2005), заседаниях краевого общества инфекционистов (Владивосток, 2000-2005 гг).

Публикации: Результаты исследований изложены в 70 публикациях, в том числе в 22 журнальных статьях; 2 патентах изобретений («Способ лечения хронического вирусного гепатита С» № 2265447 от 10 декабря 2005 г., «Способ коррекции цитолитического синдрома при хронических гепатитах» № 2004115181, приоритет от 19.05.04); методических рекомендациях «Иммунотерапия ронколейкином хронического вирусного гепатита С», 2003; учебном пособии для последипломной подготовки врачей, утвержденном УМО по медицинскому и фармацевтическому образованию вузов России «Клинико-морфологические и иммунологические аспекты парентеральных гепатитов», 2005; монографии «Хроническая HCV-инфекция (современные иммуноморфологические аспекты)», 2006. За 1 автором опубликовано 13 работ.

Объем и структура диссертации: Диссертация изложена на 300 страницах машинописного текста, состоит из 7 глав, содержит введение, обзор литературы, описание материалов, методов исследования, обсуждение, выводы, практические рекомендации для внедрения в медицинскую науку и практику, список использованной терапии, содержащий 531 источик (из них 291 отечественных и 240 зарубежных авторов). Диссертация сопровождена 6 клиническими примерами, иллюстрирована 35 таблицами, 26 рисунками, 9 фотографиями.

Основные положения, выносимые на защиту:

  1. При ХВГС в период вирусной реактивации как на системном, так и на локальном уровнях происходит изменение баланса цитокинов Th1/Th2 в пользу повышения уровня продукции Th2-типа, что влияет на клинические, биохимические и морфологические проявления заболевания.
  2. Тесная взаимосвязь между уровнями локальных цитокинов ИЛ-4, ИЛ-10, ФНО-, ИЛ-12р70 и гистологическими параметрами портального воспаления у больных ХВГС свидетельствует об его иммуноопосредованных механизмах.
  3. Частота обнаружения РНК HCV в различных биосубстратах сопряжена с прогрессированием фиброза печени. 1b генотип HCV вызывает наиболее выраженные морфологические воспалительные изменения и иммунные дисфункции в печени.
  4. Взаимосвязь интенсивности процессов ПОЛ, нарушений нитроксидергических процессов и цитокинового профиля печени с биохимической, гистологической активностью и стадией хронизации процесса позволяет предложить неинвазивные методы мониторинга гепатоцеллюлярного повреждения.
  5. Эффективность противовирусной терапии зависит от выраженности Т-клеточной анергии. Положительный ее эффект у больных ХВГС ассоциировался с повышением уровня ИЛ-2, снижением уровней провоспалительных цитокинов ФНО-, ИЛ-1, субъединиц ИЛ-12 – 12р40 и 12р70, противовоспалительного медиатора ИЛ-10 и уровня метаболитов оксида азота у «реактивных» больных с отсутствием Т-клеточной анергии.
  6. Для повышения эффективности интерферонотерапии у «анергичных» больных необходимо стимулировать Th1 звено иммунитета. Активация Th1, снижение уровней ИЛ-1, ИЛ-12р70, ФНО- и метаболитов оксида азота в сыворотке крови при терапии рекомбинантным ИЛ-2 в сочетании с комбинированной противовирусной терапией у «анергичных» пациентов обусловливают ее эффективность.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Контингент, материалы и методы исследования: Исходя из цели и задач, было проведено динамическое наблюдение и обследование 320 больных ХВГС (194 мужчины и 126 женщин в возрасте от 17 до 57 лет с преобладанием лиц молодого и среднего возраста – 83,1%), находившихся на лечении и диспансерном наблюдении в инфекционном отделении Краевой клинической больницы №2 и медицинском центре ООО «Асклепий», в период 1998-2005 гг.

Пациенты обследованы по единому плану согласно «Стандартам диагностики и лечения болезней органов пищеварения», утвержденных Приказом МЗ РФ № 125 от 17.04.98 г. Диагноз ХВГС устанавливался на основании клинико-эпидемиологических и биохимических данных и подтверждался определением маркеров инфицирования HCV (а/тHCV-сум., а/тHCV-IgG, а/тHCV-IgM, а/тHCV-Ns(3-5) методом иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием тест-наборов «Вектор», Новосибирск (Россия), виремии с помощью «nested»-варианта полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием синтетических праймеров из 5-нетранслируемого региона HCV (стандартные тест-наборы «Полигеп-С», НПО «ЛИТЕХ», Россия), генетического типирования с помощью праймеров, специфичных к региону core, а также данными УЗИ печени и морфологического исследования биоптатов печени. У всех обследованных больных отсутствовали в крови маркеры гепатитов А, В и Д. Были также исключены и другие диффузные заболевания печени.

Выявлялся ХВГС чаще случайно при обследовании в соматических отделениях или амбулаторно по поводу другой патологии, перед проведением плановых или экстренных оперативных вмешательств, при скрининговом обследовании беременных, перед призывом в армию и т.д. И только 60 пациентов (18,8%) обратились в медицинские учреждения с различными жалобами, представленными, в большинстве случаев, дискомфортом со стороны гепатобиллиарной системы и желудочно-кишечного тракта. Наши данные согласуются с мнением С.Н. Соринсона с соавторами (1997), К.В. Жданова с соавторами (2004) о наличии «латентной фазы» без клинической манифестации и «фазы реактивации» в течении ХВГС. Длительность заболевания ХВГС можно было установить лишь условно, опираясь на возможные факторы риска заражения и составляла от 1 года до 9 лет, в среднем 5,7±1,5 лет.

Присутствие РНК установлено нами в 80% образцов пункционной биопсии печени. При исследовании лейкоцитов периферической крови и сыворотки крови пациентов РНК вируса выявили в 60% и в 56,7% исследуемых образцов соответственно. При этом одновременно во всех трех биологических субстратах РНК HCV определялась у 30% пациентов, у 20% РНК обнаружена только в гомогенизатах печени и клетках крови, но не выявлена в сыворотке крови. Между обнаружением РНК в крови и печеночной ткани не наблюдалось взаимосвязи. Наши данные согласуются с результатам исследований Е.И. Лакиной с соавторами (2000), Н.В. Бушуевой с соавторами (2003), когда при естественном течении хронической HCV-инфекции РНК HCV выявляется в ткани печени у 89-95% больных, мононуклеарных клетках – у 84-85%, в сыворотке крови – у 79-88% больных. Анализируя представленные данные, можно заключить, что инфицирование HCV представляет распространенный системный персистирующий процесс с поражением не только органа-мишени (печени), но и других систем, обусловливающий внепеченочные проявления заболевания.





В наших исследованиях превалирует генотип 1b, на долю которого приходится более 40% случаев. В убывающем порядке встречаются 3а (37,5±4,4%), микст-субтипы, которые зафиксированы в 8,8% (1а+3а – (21,4±8,2%), 1b+3а – (50±3,9%), 1b+2a – (28,6±7,2%)), 1а (7,5±1,7%) и 2а (3,1±1,3%) (рис. 1).

В клинической картине доминировали проявления астеновегетативного синдрома в виде слабости и утомляемости (58,8%), выявленных в большинстве случаев при активном расспросе. Наиболее часто данный синдром регистрировался при 2а и 1b генотипах (в 70% и 65,9% случаев соответственно). Жалобы на тяжесть в правом подреберье, снижение аппетита наиболее часто отмечались у пациентов с 1b генотипом ХВГС (55,8% и 42,3% соответственно). Желтушный синдром (субиктеричность кожи и склер) у обследуемых больных с ХВГС наблюдался редко (20%), причем чаще при 1а генотипе (33,3%).

Гепатомегалия одинаково часто отмечалась среди больных ХВГС, вызванных 1b, 3а и микст генотипами. Однако, при 2а генотипе, увеличение печени наблюдалось почти в два раза чаще. Внепеченочные проявления HCV- инфекции зафиксированы почти в одной трети случаев наблюдений (29,1%) и, в основном, были представлены гастро-, эндокрино-, артро- и ангио-патиями. Их преимущественную связь с каким-либо генотипом установить не удалось. Уровень сывороточных аминотрансфераз у больных ХВГС генотипа 1а в 91,7% случаев не превышал нормы. В то же время у пациентов с генотипом 1b увеличение уровня АлАТ до 3 норм наблюдалось у половины больных, что составило 51,4%. Все случаи высокой активности ХВГС (с уровнем АлАТ более 5 норм) составили пациенты с генотипом 1b, 3а и микст-субтипами. При УЗИ органов брюшной полости, как правило, выявляли разной степени выраженности диффузные изменения печени (96%).

Анализ морфологических данных проведен у 100 больных на биопсийном материале печени. В соответствии с общепринятыми критериями оценки повреждения печени по R.G. Knodell с соавторами (1981) и V. Desmet с соавторами (1994), с использованием системы METAVIR (1996), минимальная степень активности патологического процесса была установлена в 22,9% случаев, слабая – в 55,7%. В 14,3% случаев изменения в печени соответствовали умеренной степени активности и только в 7,1% активность была выраженной (рис. 2). Установлено, что у пациентов с умеренной активностью процесса, в большинстве (78%) случаев, определялся генотип 1b, в то время как при минимальной активности обнаруживался генотип 3а (70%).

Среди пациентов без клинических проявлений болезни и с нормальными показателями АлАТ доля лиц с минимальной активностью процесса составила 50%, среди пациентов с признаками слабой активности таких было почти столько же – 43,8%, с умеренной активностью – 6,2% и с высокой активностью пациентов не выявлено.

Наряду с этим по мере возрастания активности процесса, в особенности умеренной и выраженной, увеличивалась доля лиц, у которых клинически выраженные признаки болезни сочетались с повышенными показателями АлАТ. При этом наблюдалось уменьшение количества пациентов с минимальной и слабовыраженной активностью воспалительного процесса в печени. В целом преобладала группа больных, у которых при отсутствии клинических проявлений заболевания был выявлен цитолиз различной выраженности, а степень активности патологического процесса характеризовалась в основном как слабовыраженная (70%). У большинства обследованных больных (60%) была диагностирована стадия слабовыраженного фиброза (FI). Полученные нами данные совпали с исследованиями M. Persico с соавторами (2000) и Т.М. Игнатовой (2002) и подтверждают отсутствие убедительной зависимости выраженности клинической симптоматики от степени патоморфологических изменений в печени у пациентов с ХВГС. Однако была определена зависимость выраженности цитолиза от активности патологического процесса в печени. Сравнительный анализ групп наблюдений с нормальной и повышенной активностью АлАТ выявил достоверные различия по основным морфологическим параметрам, характеризующим активность воспаления в печени, в том числе и по ИГА R.G. Knodell (1,9±0,2 балла и 3,5±0,3 балла, р<0,001) и всем его составляющим. Морфологическая составляющая ИГА у пациентов с нормальным уровнем АлАТ сыворотки крови представлена в основном (75,8%) не некротическим компонентом, а клеточной инфильтрацией, активацией купферовских клеток, пролиферацией эпителия желчных канальцев. В первую очередь, повышенная активность АлАТ сопровождалась внутридольковым компонентом воспаления, что подтверждено достоверной взаимосвязью с выраженностью внутридольковых некрозов (R=0,51; p<0,001) и воспалительной инфильтрации долек (R=0,37, p<0,05). Несколько в меньшей степени цитолитический синдром зависел от портального компонента воспаления за счет перипортальных некрозов (R=0,48; p<0,001) и воспалительной инфильтрации в портальных трактах (R=0,25, p<0,05). Полученная зависимость цитолиза гепатоцитов от выраженности морфологических изменений не соответствует результатам некоторых исследований (Kronenberger B. et al., 2000, Seeff L.B., 2002, Castera L. et al., 2003).

В качестве биологических материалов для исследований нами использовалась венозная кровь и биоптаты печени, полученные методом чрескожной пункционной биопсии печени иглой Менгини.

Контрольную группу составили 50 человек доноров Краевой станции переливания крови. Средний возраст группы доноров и их соотношение по половому признаку были сопоставимы с обследуемыми больными. Контролем для изучения параметров исследований в гепатобиоптатах послужили биопсии печени, проведенные в плановом порядке при лапаротомии и/или лапароскопии у пациентов с ЖКБ, калькулезным холециститом, неосложненной формой (без приступов печеночной колики в анамнезе и случайно выявленные при УЗИ) и соответственно без признаков воспаления желчного пузыря и желчевыводящих протоков, а также без маркеров вирусного или иного характера повреждения печени (n=10). Учитывая небольшие пределы разбросов показателей, мы сочли возможным ограничиться этим количеством исследований. Необходимо принять во внимание также сложность и специфику забора материала.

Все использованные нами методические приемы и объем проведенных исследований представлены в таблице 1.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Исследованиями последних лет показано, что нарушение баланса продукции цитокинов Th1/Th2 клетками играет важную роль в иммунопатогенезе HCV-инфекции, способствуя нарушению лизиса зараженных гепатоцитов и элиминации вирусных частиц с развитием хронического воспаления (Семененко Т.А., 2000, Ивашкин В.Т. с соавт.,

Таблица 1

Направления, методы и объем исследований

Направление исследования Методы исследования Объем работ
1. Клинико-лабораторные исследования
  1. Анкетирование пациентов.
  2. Комплексное клиническое обследование больных и лиц контрольной группы в динамике.
  3. Расширенный мониторинг клинико-биохимических и инструментальных (УЗИ) показателей.
320 чел. 370 чел. 370 чел.
2. Маркерная диагностика ХГС
  1. Определение антител к HCV методом ИФА.
  2. Качественное определение РНК HCV в биологических средах пациентов (плазма, клеточная взвесь, гомогенизат биоптата печени) методом ПЦР с генотипированием (Simmonds P., 1995).
370 чел. 320 чел.
3. Морфологическая характеристика поражения печени.
  1. Параметры активности гепатита (по Knodell R.G., 1984) и фиброза (по Desmeth V., 1994).
125 чел.
4. Исследование маркеров апоптоза в гепатоцитах.
  1. Определение СD-95 антигенной детерминанты по А.А. Тотоляну с соавт. (1999) иммунолюминесцентным методом.
  2. Иммуногистохимические методы Fas-зависимого апоптоза с помощью аннексина V-Биотина TACS (комплект «Apoptosis Detection Kits, catalog Number: TA4619», USA).
80/80 чел/проб 80/80 чел/проб
6. Характеристика цитокинового статуса
  1. Определение содержания ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-8, ИЛ-10, ИЛ-12р40, ИЛ-12р70, ИНФ-, ФНО-, ГМ КСФ в сыворотке крови.
  2. Определение содержания ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-8, ИЛ-10, ИЛ-12р40, ИЛ-12р70, ИНФ-, ФНО-, ГМ КСФ в супернатанте гепатобиоптатов.
Определение уровня исследуемых цитокинов в биологических субстратах проводили с помощью специфических реактивов фирмы «R&D Diagnostics Inc.» (США) методом сендвич-варианта твердофазного иммуно-ферментного анализа.
195/2020 чел/проб 110/1100 чел/проб
7. Характеристика показателей окислительного метаболизма.
  1. Определение стабильных метаболитов оксида азота в сыворотке крови.
  2. Определение стабильных метаболитов оксида азота в супернатанте гепатобиоптатов.
  3. Определение 1-кислого гликопротеина, индекса окисленности, диеновых конъюгатов, триенкетонов сыворотки крови и оснований Шиффа.
  4. Определение 1-кислого гликопротеина в супернатанте гепатобиоптатов.
  5. Оценка кислородзависимых механизмов бактерицидности в НСТ-тесте по методу К.А. Лебедева с соавт. (1981).
195/260 чел/проб 110/110 чел/проб 170/850 чел/проб 80/80 чел/проб 60/180 чел/проб
8. Статистическая обработка материала.
  1. Математическая обработка проводилась методами описательной, параметрической и непараметрической статистики с использованием программы «Biostat», «Statistica 5"
Все показатели

2001, Астахин А.В., 2002, Ferrari C. et al., 1999, Freeman A.J. et al., 2001). В наших исследованиях установлено, что концентрации сывороточных ИЛ-2

и ИФН- достоверно снижались в период обострения ХВГС у всех обследованных пациентов (0,3±0,05 пг/мл и 4,1±1,7 пг/мл против 0,8±0,34 пг/мл и 14,31±1,7 пг/мл у здоровых соответственно, р<0,05 и р<0,01), что согласуется с мнением большинства ученых (Курамшин Д.Х. с соавт., 2001, Симбирцев А.С., 2004, Wedemeyer H. et al., 2003 и др.) (табл. 2).

Таблица 2

Концентрация сывороточных цитокинов у пациентов при ХВГС

Показатели Концентрация цитокинов (пг/мл)
Здоровые доноры (n=50) Больные ХВГС (n=120)
ИЛ-1 0,53±0,04 5,1±0,9 р<0,01
ИЛ-2 0,8±0,34 0,3±0,05 р<0,05
ИЛ-4 3,24±0,44 9,3±0,7 р<0,05
ИЛ-10 13,9±0,7 98,7±11,7 р<0,01
ИЛ-12р40 54,8±4,5 289,8±34,6 р<0,001
ИЛ-12р70 6,3±1,2 45,8±14,6 р<0,01
ИФН- 14,31±1,7 4,1±1,7 р<0,01
ФНО- 4,27±1,23 21,6±1,1 р<0,05

Примечание:

р – достоверность различий по сравнению с аналогичными параметрами у доноров.

Полученные результаты свидетельствуют о достоверном увеличении уровней ИЛ-1, ИЛ-4, ИЛ-10, ИЛ-12р40, ИЛ-12р70, ФНО- в сыворотке крови в период вирусной реактивации хронической HCV-инфекции по сравнению с группой здоровых доноров. Эти данные согласуются с результатами исследований, которые свидетельствуют об изменении баланса цитокинов Th1/Th2 в пользу повышения уровня продукции цитокинов Th2-типа при хронической HCV-инфекции в период вирусной реактивации (Никитин И.Г., 2000, Логинов А.С. с соавт., 2001, Шульпекова Ю.Б. с соавт., 2002, Freeman A.J. еt al., Gruener N.H. 2001).

Соотношение ИФН-/ИЛ-4, своеобразный коэффициент, характеризующий процессы иммунной регуляции, в группе больных составило 0,4±0,02 против 4,4±1,2 в контрольной группе, р<0,01. Выявленная в наших исследованиях динамика альтернативных цитокинов, в частности, повышение концентрации ИЛ-4 при стойко сниженных уровнях ИФН-, определяет преобладание Th2-типа иммунного ответа, что может косвенно свидетельствовать об иммунопатологических сдвигах, определяющих неадекватную дифференцировку Т-хелперов и развитие иммуносупрессии. Подобная супрессия ИФН- при высоком содержании провоспалительныцх цитокинов инициирует поликлональную реакцию Т-лимфоцитов, затем гиперпродукцию цитокинов и апоптоз (Ярилин А. А., 1997, Фрейдлин И. С., 2001). Достоверное повышение содержания ФНО- (21,6±1,1 пг/мл против 4,27±1,23 пг/мл у здоровых, р<0,05) и ИЛ-1 (5,1±0,9 пг/мл против 0,53±0,04 пг/мл у здоровых, р<0,01) в сыворотке крови у больных ХВГС свидетельствует о важной роли указанных цитокинов в реализации механизмов противовирусной защиты, что согласуется с данными литературы о том, что ФНО- и ИЛ-1 являются основными медиаторами воспалительных процессов и клеточных иммунных реакций (Гейвандова Н.И., 2001, Царегородцева Т.М. с соавт., 2001, Yoshioka K. et al., 1999). Однако следует учитывать, что их противовирусная активность в условиях персистенции ВГС, по-видимому, недостаточна.

При хронической HCV-инфекции повреждение гепатоцитов коррелирует с уровнем продукции ИЛ-12 (Мамаев С.Н., 2001, Приймяги Л. С., 2002, Dixon, F.J., 2001). При анализе содержания изомера р70 ИЛ-12 в сыворотке крови в фазу реактивации ХВГС нами обнаружено значительное повышение его уровня, что в 7 раз выше показателя у здоровых (45,8±14,6 пг/мл против 6,3±1,2 пг/мл, р<0,01). При этом зарегистрирована прямая сильная корреляционная связь между концентрациями ИЛ-12р70 и ИЛ-12р40 в сыворотке крови (r=0,88, р<0,001). Это свидетельствует о прямом влиянии уровня ИЛ-12р70 на продукцию ИЛ-12р40. Выявленная гиперпродукция ИЛ-12р40, по-видимому, является компенсаторной реакцией на повышение уровня ИЛ-12р70 в крови и может быть одним из механизмов снижения синтеза ИФН-. Известно, ИЛ-12р40 ингибирует опосредованные ИЛ-12 эффекты, главным образом, синтез ИФН- (Ветра Я.Я., 2000, Фрейдлин И.С., 2001). На основании полученных нами данных можно предположить, что чрезмерная индукция синтеза белка р40 контролирует продукцию биоактивного димера р70, тем самым блокируются рецепторы ИЛ-12 и ограничивается его биологическая активность. Вероятно, этим фактом можно объяснить низкий уровень сывороточного ИФН- в наших исследованиях при хронической HCV-инфекции.

Генотип HCV не влиял на уровни исследуемых цитокинов, кроме ИЛ-10, гиперпродукция которого наблюдалась при 1b генотипе, что по нашему мнению, косвенно указывает на возможную связь указанного генотипа с иммуносупрессией.

Отмечены достоверные отличия между уровнями ФНО- и ИЛ-1 в группах пациентов с разной активностью АлАТ (р<0,01), что указывает на зависимость биологических эффектов ФНО- и ИЛ-1 от их концентрации (рис. 3). Обнаружена прямая сильная корреляционная зависимость между уровнями изучаемых цитокинов в сыворотке крови и выраженностью цитолиза (r=0,87, p<0,001 и r=0,78, p<0,001 соответственно). Наши данные согласуются с мнениями А.С. Логинова и соавторами (2001), Ю.В. Лобзина с соавторами (2003) и других ученых о том, что значительное повышение уровней ФНО- и ИЛ-1, как правило, сопряжено с реакцией повреждения и воспаления.

При анализе содержания исследуемых изомеров ИЛ-12 – р40 и р70 в зависимости от уровня АлАТ выявлено, что максимальные их концентрации наблюдались при увеличении активности АлАТ в 3 и более раз. Установлена прямая средней силы корреляционная связь сывороточных уровней ИЛ-12р40 и ИЛ-12р70 с выраженностью цитолиза (r=0,65, p<0,01 и r=0,68, p<0,01), что согласуется с мнением большинства ученых о том, что при хронической HCV-инфекции повреждение гепатоцитов коррелирует с уровнем продукции ИЛ-12 (Лазебник Л.Б., 2004, Шапиро И.Я. с соавт., 2002, Jarmay K. еt al., 2002, Langrish C.L. et al., 2004).

В наших исследованиях значения уровня ИЛ-10 достоверно различались в группах с разной активностью АлАТ (р<0,05). При этом между показателями его уровней в сыворотке крови и цитолизом выявлена прямая сильная корреляционная связь (r=0,81, p<0,001).

Нами впервые изучен цитокиновый статус на локальном уровне, непосредственно в супернатантах гепатобиоптатов. Как выяснено в результате проведенных исследований, изменение содержания цитокинов Th1 и Th2 на локальном и системном уровнях носит однонаправленный характер (табл. 3).

Таблица 3.

Уровни цитокинов в cупернатантах ткани печени у больных ХВГС

Показатели (пг/мл) Контр. группа M±m Пределы колебаний признака Медиана
ИЛ-1 16,4±2,9 (13-18,4)- 67,2±5,9*** 19-76,8 68,5
ИЛ-2 29,0±2,8 (27,9-31)- 7,5±1,6*** 0,5-18,2 5,3
ИЛ-4 55,0±9,4 (51-60,6)- 491,0±86,5* 120,8-1301,0 454,9
ФНО- 4,9±1,4 (4,5-6,0)- 71,0±15,1** 16,4-134,0 67,4
ИФН- 64,4±2,9 (62,7-66)- 9,1±1,8*** 1,1-28,9 6,8
ИЛ-10 139,4±13,2 (102-173)- 226,2±10,0* 137-278 232
ИЛ-12р40 6,8±0,9 (4,4-9,7)- 160,4±24,5** 37,9-376 6,1
ИЛ-12р70 0,27±0,03 (0,2-0,3)- 24,2±5,6* 3,1-87,8 19,9

Примечание. Достоверность различий по сравнению с соответствующими показателями в контрольной группе: * - р<0,05, ** - p<0,01, *** - p<0,001.

- - пределы колебаний признака в контрольной группе.

При этом преобладала локальная концентрация таких цитокинов как ФНО-, ИЛ-12р40 и ИЛ-4 над сывороточными показателями более, чем в 15 раз по сравнению с уровнем изучаемых показателей в группах контроля. Увеличение концентрации цитокинов в органе-мишени объяснимо и связано с преимущественно локальной их продукцией и функцией медиаторов межклеточных коммуникаций. Однако не исключено и нарушение их инактивации поврежденной печенью (Ляшенко В.А., 2004, Bergsland E.K., 2001), что частично позволяет объяснить полученные данные. Результаты наших исследований подтверждают мнение некоторых ученых о том, что экспрессия генов цитокинов Т-хелперов 1-го типа и провоспалительных цитокинов при ХВГС в клетках печени более выражена по сравнению с клетками периферической крови (Fukuda R., 1995, Rosen H.R., 2003). Это не согласуется с данными G. Herbein с соавторами (2000), которыми при изучении продукции цитокинов Т-клетками из печеночного инфильтрата больных ХВГС было установлено, что большинство Т-клеток представлены Т-хелперами 1-го типа и продуцировали ИФН-, а не ИЛ-4. При этом у пациентов с активным гепатитом обнаружена более высокая продукция цитокинов Th 1-го типа (Marcellin P. еt al., 2002).

Концентрации таких, цитокинов, как ФНО-, ИЛ-1, ИЛ-12р40, ИЛ-12р70 и ИЛ-10 в супернатантах гепатобиоптатов зависели от уровня активности АлАТ в сыворотке крови и генотипа HCV (табл. 4). Повреждение печеночной ткани с развитием склеротических и некротических изменений, по мнению K. Yoshioka с соавторами (1999) и K. Kakumi с соавторами (2003), связано с воспалительными процессами в ткани органа и уровнем продукции провоспалительных цитокинов. М. Neuman с соавторами (2002) считают, что уровень ФНО- в сыворотке крови отражает степень воспалительной активности в ткани печени.

По мнению Е.А. Лукиной с соавт. (2000), Д.А. Гусева с соавт. (2001), А.В. Астахина с соавт. (2002) уровень ИЛ-1 отражает дисфункцию печени при ХВГС лучше, чем биохимические параметры ее воспаления. Выявлена высокая степень корреляции между содержанием сывороточного ИЛ-1 и уровнями АлАТ, общего белка, воспалительной инфильтрации ткани

Таблица 4.

Содержание цитокинов в супернатантах гепатобиоптатов в зависимости от уровня АлАТ в сыворотке крови

Показатели (пг/мл) Здоровые АлАТ=N АлАТ-до 3N АлАТ>3N
ФНО- 4,9±1,4 48,3±6,8* p1>0,05 p2<0,01 77,8±12,1** p3<0,05 101±12,4***
ИЛ-1 16,4±2,9 56,2±4,1* p1>0,05 p2<0,05 60,1±3,8* p3<0,05 77,1±6,2*
ИЛ-12р40 6,8±0,9 149±22,8*** p1>0,05 p2>0,05 165±38,1*** p3>0,05 202±57,9***
ИЛ-12р70 0,27±0,03 20,2±2,8** p1>0,05 p2<0,01 28,5±7,4** p3<0,05 33,9±4,5**
ИЛ-10 139,4±13,2 128,8±21,7 p1<0,05 p2<0,05 170±15,8* p3>0,05 166,8±15,1*
ИЛ-4 55,0±9,4 401±72,2*** p1>0,05 p2>0,05 487±34,8*** p3>0,05 457±76,6***
ИЛ-2 29,0±2,8 11,9±4,7* p1>0,05 p2>0,05 8,8±2,9* p3>0,05 6,9±2,7*
ИФН- 64,4±2,9 7,9±2,7** p1>0,05 p2>0,05 9,1±3,5** p3>0,05 10±3,7**

Примечание:

1) различия в сравнении с контрольной группой достоверны: *р<0,05; **p<0,01; ***p<0,001;

2) достоверность различий между группами больных при разных уровнях АлАТ: р1 – АлАТ=N и АлАТ – до 3N; р2 – АлАТ=N и АлАТ>3N; р3 – АлАТ – до 3N и АлАТ>3N.

печени (коэффициент ранговой корреляции Спирмена R=0,98, р=0,001; R=-0,89, р=0,001) (табл. 5), подтверждающая мнение S. Kanzler et al. (2001) и И.Г. Никитина с соавт (2003), что гиперпродукция сывороточного ИЛ-1 усиливает транскрипцию и синтез фактора роста гепатоцитов, приводящие к нарушению морфологических и функциональных свойств печени. Однако, мы не получили значимой корреляции между содержанием указанного цитокина как в сыворотке крови, так и в ткани печени (табл. 6), и выраженностью внепеченочных проявлений заболевания, что не позволяет подтвердить мнение Д.Х. Курамшина и соавт. (2002), В.Т. Ивашкина и соавт. (2003) о том, что ИЛ-

Таблица 5

Коэффициенты корреляции (R) между клинико-лабораторными, морфологическими параметрами и уровнем содержания цитокинов в сыворотке крови при ХВГС

Показатели ИЛ-1 ИЛ-2 ИЛ-4 ИЛ-10 ИЛ-12р40 ИЛ-12р70 ФНО- ИФН-
Длительность болезни 0,48 -0,91* 0,34 0,7* 0,33 0,2* 0,68* -0,91*
Температура 0,50 0,1 0,38 0,4 0,22 0,4 0.55* 0,6
Аппетит 0,37 0,62 0,4 0,9 0,89* 0,21 0,67 0,25
Слабость 0,74* -0,69* 0,21 0,4 0,92* 0,39 0,14 -0,9*
Тяжесть в правом подреберье 0,67* 0,39 0,98* 0,6 0,9 0,7 0,96* 0,21
Гепатомегалия 0,48 -0,42 0,84* 0,5 0,29 0,93* 0,99* -0,23*
Спленомегалия 0,78 -0,2 0,92* 0,4 0,3 0,3 0,98* -0,27*
Лимфаденопатия 0,48 0,4 0,89* 0,6 0,3 0,88* 0,9* 0,59
Энцефалопатия 0,55 -0,3 0,69 0,53 0,95* 0,9* 0,54 -0,41
ИГА 0,67 -0,64 0,58 0,93* 0,99* 0,87* 0,87* -0,67
ИФ 0,41 -0,6 0,62* 0,96* 0,56 0,9* 0,91* -0,49
Воспалительная инфильтрация 0,45 -0,54 0,39 0,85* 0,89* 0,89* 0,93* -0,48
Некроз 0,65 -0,5 0,6 0,9* 0,67 0,96* 0,91* -0,66
АЛТ 0,98* -0,4 0,19 0,98* 0,45* 0,93* 0,61* -0,55
Билирубин 0,16 0,6 0,7 0,6 0,49* 0,35 0,4 0,3
Общий белок -0,89* 0,4 0,66 0,3 0,29 0,36 0,5 0,4
Тромбоциты 0,59 0,3 0,46 0,54 0,58 0,4 -0,89* 0,46

* - достоверность уровней значимости р<0,05

Таблица 6.

Коэффициенты корреляции (R) между клинико-лабораторными, морфологическими параметрами и уровнем содержания цитокинов в супернатанте биоптатов печени при ХВГС

Показатели ИЛ-1 ИЛ-2 ИЛ-4 ИЛ-10 ИЛ-12р40 ИЛ-12р70 ФНО- ИФН-
Длительность болезни 0,38 -0,41 0,14 0,7 0,93* 0,2 0,68* -0,7*
Температура 0,49 0,1 0,28 0,4 0,22 0,4 0.
95*
0,31
Аппетит 0,98 0,49 0,05 0,9 0,89* 0,41 0,97* 0,49
Слабость 0,94* 0,37 0,31 0,4 0,92* 0,67* 0,84* -0,9*
Тяжесть в правом подреберье 0,97* 0,31 0,88* 0,6 0,9* 0,7* 0,93* 0,41
Гепатомегалия 0,98* -0,51 0,94* 0,5 0,29 0,3 0,98* -0,65
Спленомегалия 0,78* -0,6 0,83* 0,4 0,3 0,3 0,98* -0,5
Лимфаденопатия 0,48 -0,89* 0,87* 0,6 0,3 0,2 0,96* -0,31
Энцефалопатия 0,6* -0,7 0,54 0,7 0,4 0,31 0,21 -0,92*
ИГА 0,95* -0,7 0,47 0,88* 0,43 0,85* 0,88* -0,69
ИФ 0,67* -0,47 0,65* 0,97* 0,81* 0,87* 0,92* -0,34
Воспалительная инфильтрация 0,91* -0,52 0,96* 0,94* 0,88* 0,98* 0,89* -0,2
Некроз 0,45 -0,46 0,7* 0,9* 0,23 0,94* 0,9* -0,29
АЛТ 0,6* -0,39 0,5 0,99* 0,5 0,85* 0,61* -0,4
Билирубин 0,16 0,31 0,54 0,66* 0,5 0,56 0,5 -0,4
Общий белок 0,3 0,62* 0,38 0,32 0,46 0,3 0,2 0,1
Тромбоциты 0,59 0,5 0,5 0,3 0,47 0,6 0,59* 0,67

*- достоверность уровня значимости р<0,05

1 вызывает выраженные системные реакции организма, обусловливая внепеченочные стигмы HCV-инфекции.

Биологические эффекты системной активности ФНО- и ИЛ-4 очень разнообразны и перекликаются с ведущими клинико-патогенетическими синдромами при ХВГС (Жданов К.В. с соавт., 2002, Сенников С.И. с соавт., 2004, Herbein G., OBrien W.A. et al., 2000, Neuman M.G. et al., 2001). Установлена достоверная связь уровней ИЛ-4, ИЛ-12р70 и ФНО- в сыворотке крови и супернатанте печени с клиническими показателями, отражающими активность системного воспалительного процесса при ХВГС, что можно объяснить в рамках концепции активации клеток макрофагальной системы, сопровождающейся реактивным увеличением размеров печени, селезенки, лимфоузлов (за счет нарастания пула тканевых макрофагов) и повышенной секрецией провоспалительных цитокинов. Известно, что гиперпродукция ФНО- в сочетании с гиперсинтезом факторов роста (ГМ-КСФ и ТФР-) способствует развитию отека тканей, что возможно объясняет формирование гепатомегалии у больных с заболеваниями печени (Царегородцева Т.М., 2003, Fabris C. et al., 1999, Casaril M. et al., 2000).

Нами зафиксирована зависимость между проявлениями энцефалопатии и уровнями ИЛ-12р40 и ИЛ-12р70 в сыворотке крови. Это подтверждает данные литературы о том, что гиперпродукция ИЛ-12р70 при инфекционном процессе может привести к избыточной активации иммунной системы с развитием иммунопатологических реакций (Фрейдлин И.С., 1999, Носик Н.Н., 2000). В пользу последнего утверждения свидетельствуют данные, полученные при изучении корреляции между показателями содержания их локальных уровней и выраженностью активности патологического процесса (ИГА), фиброза в печени.

Такие проявления заболевания, как вялость, слабость, изменение аппетита, тяжесть в правом подреберье частично находятся под контролем цитокинов (ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-12р40, ИЛ-12р70, ИФН- и ФНО-), что подтверждалось коэффициентом корреляции существенной значимости между их локальным уровнем и степенью выраженности клинических проявлений. В то же время, подобной корреляции с сывороточными показателями не обнаружено.

Количество провоспалительных цитокинов (ИЛ-1, ФНО-), изомеров ИЛ-12 - р40 и р70, а также противовоспалительных цитокинов (ИЛ-4 и ИЛ-10) значительно повышалось как в сыворотке крови, так и в супернатанте гепатобиоптатов по мере прогрессирования фиброза. Это свидетельствует о том, что при ХВГС чрезмерное повышение как системного, так и локального уровней ФНО-, ИЛ-4, ИЛ-10 на фоне функционального дефицита Тh1-лимфоцитов, активации гуморального звена иммунитета усугубляет прогрессирующий характер воспаления. Аналогичные предположения высказаны и другими учеными (Апросина З. Г. с соавт., 2002, Радченко В.Г. с соавт., 2004, Карпов С.Ю., 2005, Наследникова И.О. с соавт., Liu D. X., 2001, Ward S. et al., 2002). При изучении корреляционных взаимосвязей между исследуемыми цитокинами в различных биологических субстратах (сыворотке крови и супернатантах биоптатов печени) и выраженностью фиброза печени в баллах выявлена высокая степень корреляции между параметрами ИЛ-4, ИЛ-10, ИЛ-12р70 и ФНО-, что дает возможность использования их в качестве достоверных маркеров выраженности гепатоцеллюлярного повреждения (табл. 7). Наиболее значимыми для оценки выраженности фиброза явилось повышение уровней сывороточных цитокинов: ИЛ-4 (>5,6 пг/мл), ИЛ-10 (>35 пг/мл), ФНО- (>14 пг/мл) и ИЛ-12р70 (>8,5 пг/мл). Следовательно, определенные интервалы параметров иммунитета могут служить критериями неблагоприятного течения болезни в отношении фиброзообразования. Результаты проведенного анализа корреляционных взаимосвязей между локальным уровнем цитокинов в органе-мишене - печени и некоторыми гистологическими параметрами внутридолькового и портального воспаления у больных ХВГС свидетельствуют о значимой корреляции между показателями, характеризующими активность патологического процесса в портальных

Таблица 7.

Коэффициенты корреляции (R) и уровни их значимости (р) между выраженностью фиброза (F) и показателями содержания сывороточных и локальных цитокинов при ХВГС

ЦИТОКИНЫ Сыворотка Супернатант печени
F1(1-4) F2(5-8) F3(9-12) F1(1-4) F2(5-8) F3(9-12)
R p R p R p R p R p R p
ИЛ-1 0,1 0,8 0,09 0,7 0,65 0,01 0,14 0,7 0,33 0,2 0,68 0,001
ИЛ-2 -0,26 0,4 -0,33 0,2 -0,49 0,1 -0,28 0,4 -0,22 0,4 -0.95 0,001
ИЛ-4 0,97 0,001 0,87 0,001 0,98 0,001 0,95 0,01 0,89 0,001 0,97 0,001
ИЛ-10 0,96 0,001 0,93 0,001 0,94 0,001 0,91 0,01 0,92 0,001 0,94 0,01
ИЛ-12р40 0,1 0,8 0,99 0,001 0,97 0,001 0,18 0,6 0,9 0,7 0,93 0,001
ИЛ-12р70 0,94 0,01 0,93 0.001 0,98 0,001 0,94 0,01 0,99 0,01 0,98 0,001
ФНО- 0,87 0,001 0,9 0,001 0,98 0,01 0,93 0,01 0,9 0,01 0,98 0,001
ИФН- -0,76 0,001 -0,67 0,01 -0,48 0,1 -0,17 0,6 -0,3 0,2 -0,96 0,001


Pages:     || 2 |
 





<
 
2013 www.disus.ru - «Бесплатная научная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.